HUT56397A - Process for producing macrolide compositions - Google Patents
Process for producing macrolide compositions Download PDFInfo
- Publication number
- HUT56397A HUT56397A HU891212A HU121289A HUT56397A HU T56397 A HUT56397 A HU T56397A HU 891212 A HU891212 A HU 891212A HU 121289 A HU121289 A HU 121289A HU T56397 A HUT56397 A HU T56397A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- hydrogen
- formula
- streptomyces
- compound
- isopropyl
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
- C07D493/22—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains four or more hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/181—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system, e.g. Salinomycin, Septamycin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
Description
A találmány tárgya eljárás makrolid vegyületek előállítására.
A 2 166 436. számú nagy-britanniai szabadalmi leírásban és a 170006. számú európai szabadalmi leírásban olyan vegyületek csoportját írják le, melyeket S541 antibiotikumoknak nevezünk, és amelyeket az S541 antibiotikumokat termelő törzsek fermentálásával állíthatunk elő. Az S541 antibiotikumokat termelő törzsek a Sterptomyces thermoarchaensis és Streptomyces cyaneogriseus noncyanogenus fajhoz tartoznak. Az S541 antibiotikumok antibiotikus, különösen anti-endoparazita, anti-ektoparazita, gombaellenes, inszekticid, nematocid és akaricid hatással rendelkeznek, és különös jelentőségük van a mezőgazdaságban, a kertészetben és az állat- és embergyógyászatban. Azt találtuk, hogy az S541 antibiotikumokat és származékaikat új eljárással állíthatjuk elő.
így a találmány szerint (I) általános képletű vegyületeket állíthatunk elő, ahol
R1 jelentése metil-, etil- vagy izopropil-csoport,
5
R jelentése hidrogénatom vagy 0R , ahol
OR^ jelentése hidroxilcsoport vagy legfeljebb szénatomos szubsztituált hidroxilcsoport és r3 jelentése hidrogénatom vagy
3
R és R a szénatommal együtt, melyhez kapcsolódik, ^C = 0, / C = CH2 vagy/C = N0R6 csoportot képez, ahol r6 jelentése hidrogénatom, 1-8 szénatomos alkil- vagy 3-8 szénatomos alkenilcsoport és a C=NOR^ csoport E konfigurációjú;
R jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport.
Az eljárásra jellemző, hogy egy (II) általános
3 képletű vegyületet, ahol R , R és R jelentése a fenti, megfelelő közegben mikroorganizmus vagy abból származó enzim jelenlétében, vagy egy olyan mikroorganizmusból származó készítmény jelenlétében inkubálunk, amely a konverzió elvégzésére képes enzimet tartalmaz.
A találmány szerinti eljárásban használható megfelelő mikroorganizmusok és extraktumai előzetes kiértékelési teszttel azonosíthatók. Ennek a tesztnek a során kimutatjuk a mikroorganizmus vagy extraktumának azt a képességét, hogy át tudják-e alakítani a (II) általános képletű vegyületeket (I) általános képletű vegyületekké. Az (I) általános képletű vegyületek képződését kromatográfiás analízissel, például nagynyomású folyadékkromatografálással igazolhatjuk.
Azt találtuk, hogy a találmány szerinti eljárás során különösen alkalmazhatók a Streptomyces genushoz tartozó mikroorganizmsuok és ezek extraktumai.
A Streptomyces mikroorganizmusok közé tartoznak a következő törzsek, amelyeket előnyösen használhatunk a találmány szerinti eljárás során: Streptomyces thermoarchaensis, Streptomyces cyaneogriseus noncyanogenus, * J· ;”· ·’*· ···;
• * : ··· ·· .
- 4 Streptomyces avermitilis és Streptomyces hygroscopicus subsp. aureolacrimosus. Különösen megemlíthetők az alkalmas törzsek közül a Streptomyces thermoarchaensis NCIB 12212 és 12213, melyeket 1986. március 6-án deponáltunk a National Collections of Industrial and Maríné Bacteria, Torry Research Station, Aberdeen, United Kingdom törzsgyűjteményben, és alkalmasak továbbá ezen törzsek mutánsai a Streptomyces avermitilis ATCC 21272 és 31780, és a Streptomyces hygroscopicus subsp. aureolacrimosus FERM P 1438.
A fenti törzsek mutánsai spontán képződhetnek, vagy különböző módszerekkel állíthatók elő többek között a 2 166 436. számú nagy-britanniai szabadalmi leírásban és a 170 006. számú európai szabadalmi leíársban említett módszerek szerint.
A találmány szerinti eljárásban alkalmazható megfelelő enzimeket sokféle forrásból származtathatjuk. A fent említett Streptomyces mikroorganizmusok azonban különösen előnyös enzimforrást jelentenek, amelyek a (II) általános képletű vegyületeket (I) általános képletű vegyületekké tudják alakítani.
A találmány szerinti eljárás egyik előnyös megvalósítása szerint a (II) általános képletű vegyületeket megfelelő 5-OR^ (I) általános képletű vegyületekké alakíthatjuk oly módon, hogyha a (II) általános képletű vegyületet megfelelő oldószerbe visszük, és az oldatot a fenti mikroorganizmust tartalmazó fermentáló közegbe visszük asszimilálható szén, nitrogén és ásványi sók jelenlété ben.
• · 6
- 5 Asszimilálható szén, nitrogén és ásványi források egyszerű vagy komplex tápanyagokból nyerhetők. A szénforrások közé tartoznak általában a glükóz, maltóz, keményítő, glicerin, melasz, dextrin, laktóz, szacharóz, fruktóz, karbonsavak, aminosavak, gliceridek, alkoholok, alkánok és növényi olajok. A szénforrások általában a fermentáló közeg 0,5 - 10 tömegVát teszik ki.
A nitrogénforrások általában magukban foglalják a szójabab lisztet, a kukoricalekvárt, a desztillálható oldóanyagokat, élesztő extraktumokat, gyapotmag lisztet, peptonokat, őrölt diólisztet, maláta extraktumot, melaszt, kazeint, aminosav elegyeket, ammóniát (gáz vagy oldat) ammóniumsókat vagy nitrátokat. Használhatunk karbamidot és más amidokat is.
A nitrogénforrás általában a fermentáló közeg
0,1 - 10 tömegVát teszi ki.
A táptalajba ásványi sókat is adagolhatunk, ezek az általában használt sók nátriumot, káliumot, ammóniumot, vasat, magnéziumot, cinket, nikkelt, kobaltot, mangánt, vanádiumot, krómiumot, kalciumot, rezet, molibdént, bőrt, foszfátot, szulfátot, kloridot és karbonát ionokat adnak.
A túlzott habzás ellensúlyozására időszakonként kívánt esetben habzásgátlót is adagolhatunk.
A tenyésztés kezdetekor vagy még gyakrabban a mikroorganizmus tenyésztése közben például 2-4 nappal a tenyésztés kezdete után adagoljuk a (II) általános képletű vegyületet oldószerben, például vízzel elegyedő ···· ····
- 6 szerves oldószerben, például alkoholban, például metanolban vagy propán-2-olban , dióiban, például propán-1,2-olban vagy bután-1,3-ol-bán, ketonban, például acetonban, nitrilben, például acetonitrilben, éterben, például tetrahidrofuránban vagy dioxánban, szubsztituált amidban, például dimetil-formamidban, vagy dialkil-szulfoxidban, például dimetil-szulfoxidban.
A mikroorganizmus tenyésztését 20 - 50, előnyösen 25 - 40 °C hőmérsékleten végezzük, és kívánt esetben levegőztetés és keverés közben hajtjuk végre, például rázzuk vagy keverjük. A táptalajt kezdetben beolthatjuk kis mennyiségű mikroorganizmus spóra szuszpenzióval, de hogy elkerüljük a növekedés eltolódását, a mikroorganizmus vegetatív inokulumát állíthatjuk elő oly módon, hogy egy kis mennyiségű táptalajt beoltunk az organizmus spóra formájával, és a kapott vegetatív inokulumot átvisszük a fermentációs táptalajba, vagy még előnyösebben egy vagy több tenyészeti stádiumba, ahol további tenyésztés történik, mielőtt a végső fermentáló közegbe vinnénk át. A fermentációt általában 5,5 - 8,5 előnyösen 5,5 - 7.5 pH tartományban végezzük.
Amikor a (II) általános képletű vegyületet a tenyészethez adagoltuk, rendszerint mérsékelt keverés közben, a tenyésztést tovább folytatjuk úgy, hogy a kívánt termék felhalmozódjék. A termék jelenlétét a fermentlében úgy határozhatjuk meg, hogy a fermentlé extraktumait nagynyomású folyadékkromatográfiásán követjük nyomon, valamint ·· ····
- 7 ··· ultraibolya spektroszkópiásan analizáljuk 238 nm-nél.
A fermentléből ismert módon izolálhatjuk és szeparálhatjuk a terméket illetve termékeket, ezeknek a technikáknak a leírása megtalálható a 2 166 436. és 2 176 182. számú nagy-britanniai szabadalmi leírásokban.
A találmány szerinti eljárás egy másik módja szerint a (II) általános képletü vegyületet úgy alakíthatjuk (I) általános képletü 5-OR^ vegyületté, hogy a (II) általános képletü vegyületet megfelelő oldószerben, például vízzel elegyedő szerves oldószerben (lásd fent), a találmány szerinti enzimkészítménnyel egyesítjük és inkubáljuk, kívánt esetben pufferoldatban, például 0 - 60, előnyösen 20 - 40 °C hőmérsékleten, például 28 °C hőmérsékleten. A reakciót általában 3,5 - 8,5, például
5,5 - 7,5 pH mellett végezzük. Kívánt esetben a reakciót kofaktor, például NADH vagy NADPH jelenlétében hajthatjuk végre. Amikor a reakció befejeződik, vagyis amikor már nem alakul át további (II) általános képletü vegyület (I) általános képletü vegyületté (a reakcióelegy nagynyomású folyadékkromatográfiásán, vagy ultraibolya spektroszkópiásan 238 nm-nél történő analizálásával állapítjuk meg), akkor a terméket ismert izolálási és szeparálási módon kinyerjük (lásd 2 155 436 és 2 176 182. számú nagy-britanniai szabadalmi leírásokat).
A találmány szerinti eljárásban használt enzimet például úgy állíthatjuk elő, hogy az enzimet egy táptalajban termelő mikroorganizmust tenyésztünk. Ilyen táptalajok
- 8 <· ···· ··_ ·· ···· - · · · · ··· ·· , ·· ·· ·· és fermentációs feltételek az enzim előállítására szerepelnek a fenti ismertetésben az (I) általános képletű vegyület (II) általános képletű vegyületből történő előállításánál mikroorganizmus jelenlétében. Az az idő, amely alatt az enzim aktivitása eléri a maximumot, természetesen a használt mikroorganizmustól függ. Az optimális tenyésztési idő meghatározása az egyes törzsek esetében egymástól függetlenül történik.
Mikroorganizmusoknál, ahol az enzim extracelluláris, a folyékony táptalajt vagy szűrletet az egész sejtek eltávolítása után enzim forrásként használhatjuk. Amikor az enzim sejthez kötött, akkor felszabadítható ismert módszerrel további felhasználáshoz. Ezek az ismert módszerek lehetnek ultrahangos módszer, őrlés, üveggyöngyökkel, homogenizálás, kezelés litikus enzimekkel vagy detergensekkel, a sejtek megfelelő pufferben történő szuszpendálása után.
A kapott készítményt a sejt törmelék eltávolítása nélkül vagy azzal enzim forrásként használhatjuk. Előnyös azonban az enzim további tisztítása ismert módon szakaszos vagy ősziopkromatografálással ioncserélő cellulózokkal vagy affinitás adszorbensekkel vagy más adszorbensekkel, például hidroxil-apatittal végezhetjük a kromatografálást. Ezen kívül az enzimet bepárolhatjuk vagy tovább tisztíthatjuk molekulaszita technológiával, például ultraszűréssel vagy kisózással. Általában a tisztítási eljárás alatt kívánatos a pH-t 3—11 között tartani.
·· ····
- 9 Az enzimet rögzített formában alkalmazhatjuk például úgy, hogy oldhatatlanná tesszük vagy egy megfelelő mátrixba megkötjük vagy mátrixon megkötjük. így az enzim extraktumot megköthetjük vagy egy máskülönben inért szervetlen vagy szerves polimerhez kapcsolhatjuk egy szálba foglalhatjuk vagy arra felvihetjük, vagy egy membránba vagy polimerbe, például poliakrilamid gélbe helyezhetjük ioncserélő gyantára abszorbeálhatjuk, egy reagenssel, például glutár-aldehiddel térhálósíthatjuk, vagy egy borítékba zárhatjuk, például egy gyöngybe.
A rögzített enzimeket előnyösen alkalmazhatjuk mind szakaszos eljárások során, melyek után az enzimet ismét fel lehet használni, mind pedig folyamatos eljárásokban, ahol az anyagok a rögzített enzimet tartalmazó oszlopon haladnak keresztül.
Ha az (I) általános képletű vegyületekben R^ van jelen, akkor ennek jelentése lehet acilcsoport, például R^CO- vagy R^OCO- vagy R^OCS- általános képletű csoport, ahol
R? alifás, aralifás vagy aromás csoportot, például alkil-, alkenil-, alkinil-, cikloalkil-, aralkilvagy arilcsoportot jelent, továggá lehet formilcsoport,
7 vagy R , melynek definíciója R -tel azonos, vagy
R^SO?-, ahol
R jelentése 1-4 szénatomos alkil- vagy 6-10 szénatomos arilcsoport, szililcsoport, ciklusos vagy a'ciklusos acetálcsoport,
- 10 • ·
··« • ·
• ··« • · ··
-C0(CH2)nC02Rθ általános képletű csoport, ahol jelentése hidrogénatom vagy a fent definiált R7 és n értéke 0, 1 vagy 2,
12 vagy R , R NCO- általános képletű csoport, ahol 1112
R és R egymástól függetlenül hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos alkilcsoport lehet.
z p
Ahol R vagy R alkilcsoport, akkor lehetnek
1-8 szénatomos alkilcsoportok, például metil-, etil-, η-propőil-, izopropil-, η-butil-, izobutil-, terc-butil-, vagy n-heptil-csoport, melyek szubsztituálva is lehetnek. Ha R7 jelentése szubsztitált alkilcsoport, akkor ez a szubsztituens lehet egy vagy több, például 2 vagy 3 halogénatom, például klór- vagy brőmatom, vagy karboxi,
1-4 szénatomos'alkoxi-, például metoxi-, etoxi-csoport, p fenoxi- vagy szililoxi-csoport. Ha R jelentése szubsztituált alkilcsoport, akkor ez szubsztituálva lhet cikloalkil-, például ciklopropil-csoporttal.
8
Ha R és R alkenil- vagy alkinilcsoport, akkor előnyösen 2-8 szénatomot tartalmazhatnak, és ha R7
Q és R cikloalkilcsoport, akkor lehetnek 3-12 szénatomosak, például 3-7 szénatomos cikloalkilcsoport, például ciklopentil-csoport.
8
R és R aralkilcsoport jelentése esetén előnyösen 1-6 szénatomot tartalmaznak az arilcsoportban és az ári 1csoportok karbociklusosak vagy heterociklusosak « « : · * · · . ···: • · J ··:.··
...... ·· ..··..·
- 11 lehetnek, és előnyösen 4-15 szénatomot, például fenilcsoportot tartalmaznak. Az ilyen csoportok például fenil(1-6 szénatomos alkil)-csoportok lehetnek, például benzilcsoport.
8
Ha R és R jelentése arilcsoport, ezek lehetnek karbociklusosak vagy heterociklusosak, és előnyösen
4- 15 szénatomot tartalmaznak, például fenilcsoport.
9
Ha R R SC^-t jelent, akkor lehet például metilszulfonil- vagy para-toluol-szulfonil-csoport.
R^ jelentésében a ciklusos acetálcsoport lehet
5- 7 gyűrűtagú, például tetrahidropiranil-csoport.
' Ha R^ szililcsoportot jelent vagy R? szililoxiszubsztituenst tartalmaz, akkor a szililcsoport három csoportot hordozhat, melyek azonosak vagy különbözőek lehetnek, például alkil-, alkenil-, alkoxi-, cikloalkil-, aralkil-, aril-, és ariloxi-csoport. Ezeket a fenti módon definiálhatjuk, és különösen ide tartoznak a metil-, a terc-butil- és a fenilcsoport. Különösen alkalmas szililcsoportként a trimetil-szilil- és terc-butil-dimetil-szilil-csoport.
R^ jelenthet -C0(CH2)nC02R10 csoportot, például -C0C02R10 vagy -COCH2CH2CO2R10, ahol
R·'·^ jelentése hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos alkilcsoport, például metil- vagy etilcsoport.
Ha R5 jelentése RnR12N0C-, ··
- 12 ··« ·· ···«
12
R és R egymástól függetlenül lehet hidrogénatom, metil- vagy etilcsoport.
Ha r6 1 - 8 szénatomos alkilcsoport, akkor például metil-, etil-, η-propil-, izopropil-, η-butil-, izobutil vagy terc-butil-csoportot jelenthet, előnyösen metilcsoport.
Ha 3 - 8 szénatomos alkenilcsoport, akkor lehet például allilcsoport.
Előnyös (I) általános képletű vegyületek, ahol r! jelentése izopropil-csoport.
Fontosak azok az (I) általános képletű vegyületek, ahol
R jelentése hidroxi- vagy etoxicsoport, és
R^ jelentése hidrogénatom;
vagy
3
R és R hidrogénatomot jelent;
vagy
3
R és R a szénatommal együtt, melyhez kapcsolódik,
C = 0, C^H? vagy C = NOCH^ csoportot képeznek .
Különösen fontosak azok az (I) általános képletű vegyületek, ahol
R1 jelentése izopropil,
3
R és R a szénatommal együtt, melyhez kapcsolódik,
C = NOCH-j csoportot képez és
- 13 • · · « ♦ · · ··♦· ♦· ·· ···· ♦·· ·· · • » ·· ··
| R4 | jelentése | hidrogénatom; |
| R1 | jelentése | izopropil, |
| 2 3 R , RJ és | 4 R jlentése hidrogénatom; | |
| és | ||
| R1 | jelentése | izopropil, |
| R2 | jelentése | hidroxilcsoport |
| és | ||
| R3 és R4 | jelentése | hidrogénatom. |
Azokat a (II) általános képletű vegyületeket, ahol r! metil-, etil- vagy izopropilcsoportot jelent, 2 3 és R hidroxilcsoportot, R hidrogénatomot, a 2 187 742A. számú nagy-britanniai szabadalmi leírásban írják le. A többi (II) általános képletű vegyület leírása megtalálható a 0 238 258-A1. számú európai szabadalmi bejelentésben.
Az alábbi példák a találmány további részleteit világítják meg. A példákban valamennyi hőmérséklet °C-ban van megjelölve, és L literre vonatkozik. A következő példákban a nagynyomású folyadékkromatográfiát Spherisorb S50DS-2 (150 mm x 2,1 mm) oszlopon hajtottuk végre, eluálószerként acetonitril és víz 3:1 arányú elegyét használtuk, 0,5 ml/perc sebességgel. Az oszlopról lefolyó folyadékot egy Finnigan mozgó övvel kapcsoltuk össze egy Finnigan MAT4500 tömegspektrométerrel, E.I. körülmények között a tömegspektrum meghatározására. Az alábbi intermediereket az ismert A faktorra hivatkozással neveztük el. Az A faktor, melynek leírása a 2 166 436. számú nagy-britanniai ··«· ·· ·· ···· ·· ·« • · · ··· ··' · ·.· ·..· szabadalmi leírásban található, olyan (I) általános képletű
| vegyület, | ahol |
| R1 | jelentése |
| R2 | jelentése |
| és R3 és R4 | jelentése |
izopropil-csoport, hidroxil-csoport hidrogénatom.
1. Intermedier
5-Keto faktor A előállítása a 2 187 742A. számú nagy-britanniai szabadalmi leírás 2. példájában található .
2. Intermedier
5,12-diketo faktor A előállítása a 238 258.
számú európai szabadalmi bejelentés 2. példájában található.
3. Intermedier
5-Keto faktor A 23-etil-éter előállítása a
238 258. számú európai szabadalmi bejelentés 7. példájában található.
4. Intermedier
5-Keto faktor A 23-hemioxalát
330 mg 5-keto faktor A-t,200 mg finom eloszlású kalcium-karbonátot és 0,07 ml oxalil-kloriHnt vízmentes
·*·. .··. ···: ··· ·· ,· • · · · · ·· ·· ·· ml diklór-metánban keverünk 10 percig. 4 ml 2 n sósavat adunk hozzá, majd 5 perccel később etil-acetát adagolása következik. Szerves fázist összegyűjtjük, szárítjuk, bepároljuk. A maradékot diizopropil-éterben feloldjuk. Ezt az oldatot felhígítjuk, és 40 - 60 °C hőmérsékleten forró petrol éterrel kicsapva a cím szerinti vegyületet kapjuk halvány pehelyszerű szilárd anyag formájában 262 mg mennyiségben.
/^7q4 +120° (c = 0,6, CHCip, AmaxH 240 nm (E' 425)’ \?max (CHBr-j) 3440 (OH), 1800 (C02H dimer), 1720 (észter), és 1676 cm-1 ( / , β-tel ítetlen keton),
Γ(CDC13) beleértve 6,52 (szűk m, 1H), 5,07 (q, 3Hz,
1H), 3,78 (s, 1H), 1,83 (s, 3H) és 0,71 (d,
Hz, 3H) .
5. Intermedier
5-Keto-23/É7-metoxi-imino faktor A
Előállítása megtalálható a 238 248. számú európai szabadalmi bejelentés 16. példájában.
1. Példa
a) 0,1 ml Streptomyces thermoarchaensis NCIB 12 213 spóraszuszpenzióját (előállítását lásd a Streptomyces thermoarchaensis NCIB 12015 a 2 187 742A. számú brit szabadalmi leírás 2. példájában) használtunk arra, hogy beolt-
sunk 2,5 ml A közeget tartalmazó lombikot.
A közeggL
D-glükóz2,5
Maláta dextrin (MD 30E (Roquette (UK)Ltd) 25,0
Arkaszója 50 (British Arkady Co. Ltd.) 12,5
Melasz1,5
K2HP040,125
Kalcium-karbonát1>25
MOPS (3-(N-morfolino)-propán-szulfonsav) 21,0
Desztillált vizet adunk még hozzá, hogy 1 liter legyen, a pH-t 5 n nátrium-hidroxiddal 6,5-re állítjuk, majd autoklávba helyezzük.
A tenyészetet 31 °C hőmérsékleten 4 napig inkubáljuk rotációs rázókészüléken, amely 250 percenkénti fordulatszámmal működik, ezalatt az 1 mg 1. intermedier 0,05 ml dimetil-szülfoxiddal készített elegye hozzáadása történik. A tenyészetet még 24 óra hosszat inkubáljuk 31 °C hőmérsékleten, majd centrifugáljuk 10 perc alatt körülbelül 10 000 percenkénti fordulatszámmal. A felülúszót eltávolítjuk, és 1,8 ml metanolt adunk a maradékhoz. A kapott szuszpenziót 1 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd centrifugáljuk. A felülúszót nagynyomású folyadékkromatográfiásán analizáljuk, amely a 2 166 436. számú nagy-britanniai szabadalmi leírásban leírt autentikus mintával összehasonlítva az (I) általános képletű teszt minta jelenlétét mutatja ki, ahol • ·
- 17 R1 jelentése izopropil,
R jelentése hidroxilcsoport, r3 jelentése hidrogénatom és
Λ
R jelentése hidrogénatom, /3,3 % a termékké átalakult kiindulási anyag százalékában kifejezve/.
b) Az a) kísérlet megismétlése következik Strepto myces avermitilis ATCC 31780-nal, és az 1. intermedierből egy extraktumot kapunk, amely nagynyomású folyadékkromatográfiás analízis nyomáson az (I) általános képlet jelenlétét mutatja ki, ahol
R1
R2 jelentése izopropilcsoport, jelentése hidroxilcsoport, jelentése hidrogénatom és jelentése hidrogénatom /8,6 % - lásd az a) részben7.
c) Az a) rész analógiájára egy 1. intermediert
Streptomyces thermoarchaensis NCIB 12212-vel inkubálunk, azzal a különbséggel, hogy a tenyészetet az A közeghez adagolt spóraszuszpenzióból állítjuk elő, melyet 3 nap inkubálás után használunk (0,1 ml-t vittünk át) arra, hogy beoltsunk egy friss azonos közeg adagot (2,5 ml).
mg 1. intermediert 0,05 ml dimetil-szulfoxidban adunk ehhez a későbbi tenyészethez 2 nappal később, és a tényé4 szetet további 2 napig inkubáljuk, mielőtt összegyűjtjük, extraháljuk, és az a) pontban leírt módon analizáljuk.
A tesztminta nagynyomású folyadékkromatográfiás analízise az (I) általános képletű vegyület jelenlétét mutatja ki, ahol
jelentése izopropil-csoport,
jelentése hidroxilcsoport,
jelentése hidrogénatom
jelentése hidrogénatom /5,1 % - lásd az a) részben7.
2. Példa
a) Az 1. példában leírt 0,4 ml Streptomyces thermo archaensis NCIB 12213 spóraszuszpenziójával beoltunk ml A táptalajt tartalmazó 250 ml-es rázólombikot. Ezt a tenyészetet 28 °C hőmérsékleten 2 napig rotációs rázó készüléken inkubáljuk, amely percenként 250-et fordul.
nap múlva 5 ml tenyészetet hozzáadunk egy 50 ml-es rázólombikhoz, és 20 mg/ml 2. intermediert 50 yul metanolban adunk hozzá. A tenyészetet még 2-3 napig azonos feltételek mellett inkubáljuk, majd egy egyenlő térfogatú meta nollal kezeljük. A kapott szuszpenziót 1 óra hosszat ráz zuk és centrifugáljuk. A felülúszót nagynyomású folyadék kromatográfiásán és tömegspektrométerrel analizáljuk.
perces retenciós idő mellett a tömegspektrum csúcsa azt mutatja, hogy olyan (I) általános képletű vegyüle-
tét kapunk, ahol
R·*· jelentése izopropilcsoport,
3
R és R a szénatommal együtt, melyhez kapcsolódik
C = 0, λ
R hidrogénatom és a 2 176 182. számú nagy-britanniai szabadalmi leírásban leírt hiteles mintával hasonlítottuk össze.
b) Az a) részben leírt kísérletet megismételjük
Streptomyces thermoarchaensis NCIB 12 213-mal, és 3-as intermedierrel, és egy extraktumot kapunk, amely nagy nyomású folyadékkromatográfiás és tömegspektrográfiás analízissel (acetonitril/víz 9:1 arányú elegye az eluálószer) az (I) általános képletű vegyület jelenlétére utal, ahol
R1
R2 jelentése izopropil-csoport, jelentése etoxi-csoport, jelentése hidrogénatom, jelentése hidrogénatom és a 2 176 182. számú nagy-britanniai szabadalmi leírásban leírt hiteles mintával vetjük össze.
c) Az a) részben leírt kísérletet ismételjük meg
Streptomyces thermoarchaensis NCIB 12 213-mal és 4. intermedierrel, és egy extraktumot kapunk, melyet nagynyomású folyadékkromatográfiásán analizálunk, és így olyan (I) általános képletű vegyület jelenlétét mutatjuk ki, ahol • · ·· ··
R1
R2
R3 és jelentése izopropil-csoport, jelentése -OCOCC^H, jelentése hidrogénatom jelentése hidrogénatom a 2 176 182. számú nagy-britanniai szabadalmi leírásban leírt hiteles mintával összevetve.
d) Az a) részben leírt kísérletet ismételjük meg
Streptomyces thermoarchaensis NCIB 12 213-mal és 5. intermedierrel. Extraktumot kapunk, melyet nagynyomású folyadékkromatográfiásán analizálva olyan (I) általános képletű vegyületet mutatunk ki, ahol r! jelentése izopropil-csoport,
3
R és R a szénatommal együtt, melyhez kapcsolódik,
ONOCH-j és
R^ hidrogénatom összevetve a 2 192 630A. számú nagy-britanniai szabadalmi leírásban leírt hiteles mintával.
Az analitikai nagynyomású folyadékkromatográfiás kísérletből izolált minta E.I. tömegspektroszkópiája 621, 527, 511, 496, 448, 434, 368, 264, 248 és 151-nél ad jellegzetes fragmenseket.
Claims (2)
1. Eljárás (I) általános képletű vegyületek előállításra, ahol
R1· jelentése metil-, etil- vagy izopropil-csoport,
2 5
R jelentése hidrogénatom vagy OR , ahol
OR3 jelentése hidroxilcsoport vagy legfeljebb
25 szénatomos szubsztituált hidroxilcsoport és
R3 jelentése hidrogénatom vagy
2 3
R és R a szénatommal együtt, melyhez kapcsolódik, z)C = 0, 'C = CH2 vagy C = NOr6 csoportot képez, ahol r6 jelentése hidrogénatom, 1-8 szénatomos alkil- vagy 3-8 szénatomos alkenilcsoport és a ^)C = N0R^ csoport E konfigurációjú;
R jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport, azzal jellemezve, hogy egy (II) általános képletű vegyületet, ahol
12 3
R , R , R jelentése a fenti, megfelelő táptalajban mikroorganizmus vagy a belőle levezetett enzim, vagy a konverzió elvégzésére képes enzimet tartalmazó mikroorganizmusból származó készítmény jelenlétében inkubálunk.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy mikroorganizmusként Streptomyces thermoarchaensis, Streptomyces cyaneogriseus noncyanogenus, • ·
- 22 Streptomyces avermitilis vagy Streptomyces hygroscopicus subsp. aureolacrimosus törzset alkalmazunk.
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy mikroorganizmusként Streptomyces thermoarchaensis NCIB 12212-t és 12213-t, ezen törzsek mutánsait és Streptomyces avermitilis ATCC 31272-t vagy 31780-t vagy Streptomyces hygroscopicus subsp. aureolacrimosus FERM P 1438-t használunk.
4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a (II) általános képletű vegyületet megfelelő oldószerben adagoljuk a fermentléhez, amely a mikroorganizmust és aszimmilálható szén, nitrogén és ásványi só forrásokat tartalmaz.
5. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 5,5 - 7,5 pH-η és 25 - 40 °C hőmérsékleten hajtjuk végre.
6. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve , hogy izopropil-csoportot tartalmazó (II) általános képletű vegyületet alakítunk (I) általános képletű vegyületté.
7. Az 1. igénypont szerinti eljárás
R helyén hidroxil- vagy etoxi-csoportot,
R^ helyén hidrogénatomot vagy
2 3
R es R helyén hidrogénatomot vagy • · *
···« • 4 ··
- 23 R2 és R3 helyén C = D, C = CH2 vagy C=NOCH5 csoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületek előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat reagáltatjuk.
2 3 4
R , R és R helyén hidrogénatomot;
vagy
képletű vegyületek előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat reagáltatjuk.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB888805978A GB8805978D0 (en) | 1988-03-14 | 1988-03-14 | Process |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT56397A true HUT56397A (en) | 1991-08-28 |
Family
ID=10633378
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU891212A HUT56397A (en) | 1988-03-14 | 1989-03-13 | Process for producing macrolide compositions |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0333404A3 (hu) |
| JP (1) | JPH01277496A (hu) |
| KR (1) | KR890014549A (hu) |
| AR (1) | AR240478A1 (hu) |
| AU (1) | AU620595B2 (hu) |
| DD (1) | DD283648A5 (hu) |
| DK (1) | DK120489A (hu) |
| GB (1) | GB8805978D0 (hu) |
| HU (1) | HUT56397A (hu) |
| NZ (1) | NZ228317A (hu) |
| PT (1) | PT89991B (hu) |
| ZA (1) | ZA891891B (hu) |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK165119C (da) * | 1984-06-05 | 1993-03-01 | American Cyanamid Co | Antibiotiske forbindelser betegnet ll-f28249alfa, beta, gamma, delta, epsilon, zeta, eta, theta, iota, kappa, my og ny og pharmaceutisk or pharmakologisk acceptable salte deraf samt fremgangsmaade til deres fremstilling |
| ES8704545A1 (es) * | 1984-09-14 | 1987-04-01 | Glaxo Group Ltd | Un procedimiento para preparar un nuevo antibiotico por fer-mentacion |
| US4666937A (en) * | 1985-03-04 | 1987-05-19 | Merck & Co., Inc. | Avermectin bioconversion products |
| US4668696A (en) * | 1985-07-29 | 1987-05-26 | Merck & Co., Inc. | Novel averonectin fermentation product of a microorganism with anthelmintic activity |
-
1988
- 1988-03-14 GB GB888805978A patent/GB8805978D0/en active Pending
-
1989
- 1989-03-13 HU HU891212A patent/HUT56397A/hu unknown
- 1989-03-13 EP EP19890302442 patent/EP0333404A3/en not_active Ceased
- 1989-03-13 KR KR1019890003043A patent/KR890014549A/ko not_active Application Discontinuation
- 1989-03-13 DD DD89326548A patent/DD283648A5/de not_active IP Right Cessation
- 1989-03-13 ZA ZA891891A patent/ZA891891B/xx unknown
- 1989-03-13 DK DK120489A patent/DK120489A/da not_active Application Discontinuation
- 1989-03-13 NZ NZ228317A patent/NZ228317A/en unknown
- 1989-03-13 AR AR313402A patent/AR240478A1/es active
- 1989-03-13 JP JP1058075A patent/JPH01277496A/ja active Pending
- 1989-03-13 PT PT89991A patent/PT89991B/pt not_active IP Right Cessation
- 1989-03-14 AU AU31316/89A patent/AU620595B2/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PT89991B (pt) | 1994-05-31 |
| AU3131689A (en) | 1989-09-14 |
| EP0333404A3 (en) | 1990-11-07 |
| ZA891891B (en) | 1990-02-28 |
| AR240478A1 (es) | 1990-04-30 |
| KR890014549A (ko) | 1989-10-24 |
| PT89991A (pt) | 1989-11-10 |
| DK120489D0 (da) | 1989-03-13 |
| GB8805978D0 (en) | 1988-04-13 |
| NZ228317A (en) | 1991-03-26 |
| DD283648A5 (de) | 1990-10-17 |
| AU620595B2 (en) | 1992-02-20 |
| JPH01277496A (ja) | 1989-11-07 |
| EP0333404A2 (en) | 1989-09-20 |
| DK120489A (da) | 1989-09-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Abbott et al. | Microbial transformation of A23187, a divalent cation ionophore antibiotic | |
| RU2188867C2 (ru) | Микробный способ получения хиральных производных бензилового спирта | |
| AU2016287537A1 (en) | Use of Microbacterium strains for the production of antibacterial agents | |
| JPH07289284A (ja) | 光学活性４−ヒドロキシ−２−ケトグルタル酸の製造法 | |
| JPH07106155B2 (ja) | 抗生化合物の製法 | |
| IE42605B1 (en) | Rifamycins | |
| JP3428027B2 (ja) | コルヒチノイド化合物を対応する３―グリコシル誘導体類にバイオトランスフォーメーションする方法 | |
| JPH0428710B2 (hu) | ||
| WO2006011156A1 (en) | Process for producing tacrolimus (fk - 506) using vegetable oil as sole source of carbon | |
| Kim et al. | STUDIES ON MIKAMYCIN B LACTONASE I. DEGRADATION OF MIKAMYCIN B BY STREPTOMYCES MITAKAENSIS | |
| HUT56397A (en) | Process for producing macrolide compositions | |
| KR920009519B1 (ko) | 마크로라이드 항생물질의 제조방법 | |
| WO1995034558A1 (en) | Chondramides, production methods, compositions comprising chondramides and cultures for chondramide production | |
| JPH0822237B2 (ja) | トレハロースの製造方法 | |
| WO2000020418A1 (fr) | Antibiotiques a base de xanthobaccines | |
| JPH0246294A (ja) | ストレプトミセス属微生物からのアングサイクリノンおよびその製造方法 | |
| KR20020063890A (ko) | 매크로사이클릭 락톤의 제조방법 | |
| HU213349B (en) | Method for the preparation of macrolide compounds by fermentation | |
| CA1169795A (en) | Microbial process for producing cholanic acid derivatives and microbes used therein | |
| RU2215038C2 (ru) | Штамм pimelobacter simplex, проявляющий стероид-1,2-дегидрогеназную активность | |
| WO1999024439A1 (fr) | Nouvelle substance ft-0554 et procede de fabrication | |
| JP3754785B2 (ja) | ３−ヒドロキシ含窒素六員環化合物の製造方法 | |
| RU2126837C1 (ru) | Штамм бактерий mycobacterium smegmatis, используемый для окисления стеринов растительного и животного происхождения до андрост-4-ен-3,17-диона | |
| CZ76393A3 (en) | Micro-biological process for preparing derivatives of malonyl-7-aminocephalosporanic acid | |
| JPH0434555B2 (hu) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| DFC9 | Refusal of application |