HU226330B1 - Anti-p53 single-chain antibody fragments and their uses to produce pharmaceutical compositions - Google Patents
Anti-p53 single-chain antibody fragments and their uses to produce pharmaceutical compositions Download PDFInfo
- Publication number
- HU226330B1 HU226330B1 HU9904199A HUP9904199A HU226330B1 HU 226330 B1 HU226330 B1 HU 226330B1 HU 9904199 A HU9904199 A HU 9904199A HU P9904199 A HUP9904199 A HU P9904199A HU 226330 B1 HU226330 B1 HU 226330B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- protein
- nucleic acid
- vector
- mutant
- use according
- Prior art date
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 7
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 title 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 title 1
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 claims description 118
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 53
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 48
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 48
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 44
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 29
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 27
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 20
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 claims description 13
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 10
- 230000002950 deficient Effects 0.000 claims description 10
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 10
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 9
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 6
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 4
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 68
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 61
- 238000000034 method Methods 0.000 description 49
- 230000006870 function Effects 0.000 description 40
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 38
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 19
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 18
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 16
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 15
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 15
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 12
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 11
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 11
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 11
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 10
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 10
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 9
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 230000003463 hyperproliferative effect Effects 0.000 description 9
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 8
- 108090000765 processed proteins & peptides Chemical group 0.000 description 8
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 8
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 7
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 7
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 7
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 7
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 7
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 6
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 5
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 5
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 5
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 5
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 5
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 4
- 108010035563 Chloramphenicol O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 108010040002 Tumor Suppressor Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000001742 Tumor Suppressor Proteins Human genes 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 4
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 3
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 3
- 102000012199 E3 ubiquitin-protein ligase Mdm2 Human genes 0.000 description 3
- SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N Gly-Ser-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 3
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 3
- ANHVRCNNGJMJNG-BZSNNMDCSA-N Tyr-Tyr-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O ANHVRCNNGJMJNG-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 229920006317 cationic polymer Polymers 0.000 description 3
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 108700004026 gag Genes Proteins 0.000 description 3
- 108010001064 glycyl-glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 3
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 101150024228 mdm2 gene Proteins 0.000 description 3
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 3
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- -1 neurofilaments Proteins 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 3
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- RTZCUEHYUQZIDE-WHFBIAKZSA-N Ala-Ser-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O RTZCUEHYUQZIDE-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- USNJAPJZSGTTPX-XVSYOHENSA-N Asp-Phe-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O USNJAPJZSGTTPX-XVSYOHENSA-N 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- ULZCYBYDTUMHNF-IUCAKERBSA-N Gly-Leu-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ULZCYBYDTUMHNF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- VBOBNHSVQKKTOT-YUMQZZPRSA-N Gly-Lys-Ala Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VBOBNHSVQKKTOT-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000341655 Human papillomavirus type 16 Species 0.000 description 2
- ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N N-L-tyrosyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 2
- 208000001894 Nasopharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- KIEPQOIQHFKQLK-PCBIJLKTSA-N Phe-Asn-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O KIEPQOIQHFKQLK-PCBIJLKTSA-N 0.000 description 2
- MPPHJZYXDVDGOF-BWBBJGPYSA-N Ser-Cys-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](N)CO MPPHJZYXDVDGOF-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 2
- WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N Ser-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- UQFYNFTYDHUIMI-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO UQFYNFTYDHUIMI-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- SFTZWNJFZYOLBD-ZDLURKLDSA-N Ser-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO SFTZWNJFZYOLBD-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 2
- XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- SRSPTFBENMJHMR-WHFBIAKZSA-N Ser-Ser-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SRSPTFBENMJHMR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- 241000713896 Spleen necrosis virus Species 0.000 description 2
- 241000256248 Spodoptera Species 0.000 description 2
- KIMOCKLJBXHFIN-YLVFBTJISA-N Trp-Ile-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O)=CNC2=C1 KIMOCKLJBXHFIN-YLVFBTJISA-N 0.000 description 2
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 2
- 108010081404 acein-2 Proteins 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 108010086434 alanyl-seryl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 108010050025 alpha-glutamyltryptophan Proteins 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 108700004025 env Genes Proteins 0.000 description 2
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 2
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 2
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 2
- 108700004029 pol Genes Proteins 0.000 description 2
- 230000023603 positive regulation of transcription initiation, DNA-dependent Effects 0.000 description 2
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 2
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 2
- 208000037803 restenosis Diseases 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 108091006106 transcriptional activators Proteins 0.000 description 2
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 2
- 108010038745 tryptophylglycine Proteins 0.000 description 2
- 238000010798 ubiquitination Methods 0.000 description 2
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- OPCHFPHZPIURNA-MFERNQICSA-N (2s)-2,5-bis(3-aminopropylamino)-n-[2-(dioctadecylamino)acetyl]pentanamide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN(CC(=O)NC(=O)[C@H](CCCNCCCN)NCCCN)CCCCCCCCCCCCCCCCCC OPCHFPHZPIURNA-MFERNQICSA-N 0.000 description 1
- LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[(z)-octadec-9-enoxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)C)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BTYTYHBSJKQBQA-GCJQMDKQSA-N Ala-Asp-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N)O BTYTYHBSJKQBQA-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 1
- KXEVYGKATAMXJJ-ACZMJKKPSA-N Ala-Glu-Asp Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O KXEVYGKATAMXJJ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- HXNNRBHASOSVPG-GUBZILKMSA-N Ala-Glu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HXNNRBHASOSVPG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- OBVSBEYOMDWLRJ-BFHQHQDPSA-N Ala-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N OBVSBEYOMDWLRJ-BFHQHQDPSA-N 0.000 description 1
- LBYMZCVBOKYZNS-CIUDSAMLSA-N Ala-Leu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O LBYMZCVBOKYZNS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- VQAVBBCZFQAAED-FXQIFTODSA-N Ala-Pro-Asn Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N VQAVBBCZFQAAED-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- BTRULDJUUVGRNE-DCAQKATOSA-N Ala-Pro-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O BTRULDJUUVGRNE-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- PRLPSDIHSRITSF-UNQGMJICSA-N Arg-Phe-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PRLPSDIHSRITSF-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- HGKHPCFTRQDHCU-IUCAKERBSA-N Arg-Pro-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O HGKHPCFTRQDHCU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 108010002913 Asialoglycoproteins Proteins 0.000 description 1
- JLNFZLNDHONLND-GARJFASQSA-N Asn-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N JLNFZLNDHONLND-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- OOXUBGLNDRGOKT-FXQIFTODSA-N Asn-Ser-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O OOXUBGLNDRGOKT-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- KQBVNNAPIURMPD-PEFMBERDSA-N Asp-Ile-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KQBVNNAPIURMPD-PEFMBERDSA-N 0.000 description 1
- AYFVRYXNDHBECD-YUMQZZPRSA-N Asp-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O AYFVRYXNDHBECD-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- GCACQYDBDHRVGE-LKXGYXEUSA-N Asp-Thr-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@H](O)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O GCACQYDBDHRVGE-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- RSMZEHCMIOKNMW-GSSVUCPTSA-N Asp-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RSMZEHCMIOKNMW-GSSVUCPTSA-N 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 101100381862 Bacillus subtilis (strain 168) bmr3 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000701157 Canine mastadenovirus A Species 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 101150044789 Cap gene Proteins 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 102100038909 Caveolin-2 Human genes 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- HRJLVSQKBLZHSR-ZLUOBGJFSA-N Cys-Asn-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HRJLVSQKBLZHSR-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- 108010079245 Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Proteins 0.000 description 1
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 description 1
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 1
- 230000033616 DNA repair Effects 0.000 description 1
- 241000450599 DNA viruses Species 0.000 description 1
- 102100036912 Desmin Human genes 0.000 description 1
- 108010044052 Desmin Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 101100290057 Drosophila virilis Mal-B1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150007452 EBNA-LP gene Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108700019449 Epstein-Barr virus EBNA-5 Proteins 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 230000010190 G1 phase Effects 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 102100039289 Glial fibrillary acidic protein Human genes 0.000 description 1
- 101710193519 Glial fibrillary acidic protein Proteins 0.000 description 1
- LKDIBBOKUAASNP-FXQIFTODSA-N Glu-Ala-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O LKDIBBOKUAASNP-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- SBCYJMOOHUDWDA-NUMRIWBASA-N Glu-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SBCYJMOOHUDWDA-NUMRIWBASA-N 0.000 description 1
- XTZDZAXYPDISRR-MNXVOIDGSA-N Glu-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N XTZDZAXYPDISRR-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- VSRCAOIHMGCIJK-SRVKXCTJSA-N Glu-Leu-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O VSRCAOIHMGCIJK-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- RFTVTKBHDXCEEX-WDSKDSINSA-N Glu-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O RFTVTKBHDXCEEX-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- LJPIRKICOISLKN-WHFBIAKZSA-N Gly-Ala-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LJPIRKICOISLKN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- PMNHJLASAAWELO-FOHZUACHSA-N Gly-Asp-Thr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PMNHJLASAAWELO-FOHZUACHSA-N 0.000 description 1
- ZQIMMEYPEXIYBB-IUCAKERBSA-N Gly-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CN ZQIMMEYPEXIYBB-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- MBOAPAXLTUSMQI-JHEQGTHGSA-N Gly-Glu-Thr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O MBOAPAXLTUSMQI-JHEQGTHGSA-N 0.000 description 1
- OHUKZZYSJBKFRR-WHFBIAKZSA-N Gly-Ser-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O OHUKZZYSJBKFRR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- WCORRBXVISTKQL-WHFBIAKZSA-N Gly-Ser-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WCORRBXVISTKQL-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- RHRLHXQWHCNJKR-PMVVWTBXSA-N Gly-Thr-His Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 RHRLHXQWHCNJKR-PMVVWTBXSA-N 0.000 description 1
- XHVONGZZVUUORG-WEDXCCLWSA-N Gly-Thr-Lys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN XHVONGZZVUUORG-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- TVTZEOHWHUVYCG-KYNKHSRBSA-N Gly-Thr-Thr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O TVTZEOHWHUVYCG-KYNKHSRBSA-N 0.000 description 1
- 241000696272 Gull adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- FBTYOQIYBULKEH-ZFWWWQNUSA-N His-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CNC=N1 FBTYOQIYBULKEH-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000740981 Homo sapiens Caveolin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001046426 Homo sapiens cGMP-dependent protein kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 1
- 208000022361 Human papillomavirus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 102100029098 Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 108010058683 Immobilized Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 1
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 1
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- QLROSWPKSBORFJ-BQBZGAKWSA-N L-Prolyl-L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 QLROSWPKSBORFJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 101710128836 Large T antigen Proteins 0.000 description 1
- 206010023825 Laryngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 1
- BQSLGJHIAGOZCD-CIUDSAMLSA-N Leu-Ala-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BQSLGJHIAGOZCD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- HXWALXSAVBLTPK-NUTKFTJISA-N Leu-Ala-Trp Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N HXWALXSAVBLTPK-NUTKFTJISA-N 0.000 description 1
- ZTUWCZQOKOJGEX-DCAQKATOSA-N Leu-Ala-Val Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O ZTUWCZQOKOJGEX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- USTCFDAQCLDPBD-XIRDDKMYSA-N Leu-Asn-Trp Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N USTCFDAQCLDPBD-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- QLQHWWCSCLZUMA-KKUMJFAQSA-N Leu-Asp-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 QLQHWWCSCLZUMA-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- HPBCTWSUJOGJSH-MNXVOIDGSA-N Leu-Glu-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O HPBCTWSUJOGJSH-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- CSFVADKICPDRRF-KKUMJFAQSA-N Leu-His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)CC1=CN=CN1 CSFVADKICPDRRF-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- NRFGTHFONZYFNY-MGHWNKPDSA-N Leu-Ile-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NRFGTHFONZYFNY-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 1
- FKQPWMZLIIATBA-AJNGGQMLSA-N Leu-Lys-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O FKQPWMZLIIATBA-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 1
- BRTVHXHCUSXYRI-CIUDSAMLSA-N Leu-Ser-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BRTVHXHCUSXYRI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N Leu-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- LJBVRCDPWOJOEK-PPCPHDFISA-N Leu-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O LJBVRCDPWOJOEK-PPCPHDFISA-N 0.000 description 1
- NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N Lys-Arg Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- NTBFKPBULZGXQL-KKUMJFAQSA-N Lys-Asp-Tyr Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NTBFKPBULZGXQL-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N Lys-Pro-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- YFQSSOAGMZGXFT-MEYUZBJRSA-N Lys-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O YFQSSOAGMZGXFT-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 1
- ABHVWYPPHDYFNY-WDSOQIARSA-N Met-His-Trp Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 ABHVWYPPHDYFNY-WDSOQIARSA-N 0.000 description 1
- 241000713862 Moloney murine sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061306 Nasopharyngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 108010077850 Nuclear Localization Signals Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- BSKMOCNNLNDIMU-CDMKHQONSA-N Phe-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O BSKMOCNNLNDIMU-CDMKHQONSA-N 0.000 description 1
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 1
- XQLBWXHVZVBNJM-FXQIFTODSA-N Pro-Ala-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 XQLBWXHVZVBNJM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- JARJPEMLQAWNBR-GUBZILKMSA-N Pro-Asp-Arg Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O JARJPEMLQAWNBR-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- KIPIKSXPPLABPN-CIUDSAMLSA-N Pro-Glu-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 KIPIKSXPPLABPN-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- FRKBNXCFJBPJOL-GUBZILKMSA-N Pro-Glu-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O FRKBNXCFJBPJOL-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- LXVLKXPFIDDHJG-CIUDSAMLSA-N Pro-Glu-Ser Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LXVLKXPFIDDHJG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101710156592 Putative TATA-binding protein pB263R Proteins 0.000 description 1
- 102000013009 Pyruvate Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020005115 Pyruvate Kinase Proteins 0.000 description 1
- 230000004570 RNA-binding Effects 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 101100379247 Salmo trutta apoa1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 101001000154 Schistosoma mansoni Phosphoglycerate kinase Proteins 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- UGJRQLURDVGULT-LKXGYXEUSA-N Ser-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O UGJRQLURDVGULT-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- BNFVPSRLHHPQKS-WHFBIAKZSA-N Ser-Asp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O BNFVPSRLHHPQKS-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- KMWFXJCGRXBQAC-CIUDSAMLSA-N Ser-Cys-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CO)N KMWFXJCGRXBQAC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N Ser-Gly-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- FUMGHWDRRFCKEP-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FUMGHWDRRFCKEP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- VZQRNAYURWAEFE-KKUMJFAQSA-N Ser-Leu-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 VZQRNAYURWAEFE-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- XUDRHBPSPAPDJP-SRVKXCTJSA-N Ser-Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CO XUDRHBPSPAPDJP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N Ser-Pro Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- FKYWFUYPVKLJLP-DCAQKATOSA-N Ser-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CO FKYWFUYPVKLJLP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- NMZXJDSKEGFDLJ-DCAQKATOSA-N Ser-Pro-Lys Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O NMZXJDSKEGFDLJ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N Ser-Pro-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- WLJPJRGQRNCIQS-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WLJPJRGQRNCIQS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- BMKNXTJLHFIAAH-CIUDSAMLSA-N Ser-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BMKNXTJLHFIAAH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- RXUOAOOZIWABBW-XGEHTFHBSA-N Ser-Thr-Arg Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N RXUOAOOZIWABBW-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101100289792 Squirrel monkey polyomavirus large T gene Proteins 0.000 description 1
- 101100344811 Starmerella bombicola mdr gene Proteins 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- DGDCHPCRMWEOJR-FQPOAREZSA-N Thr-Ala-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 DGDCHPCRMWEOJR-FQPOAREZSA-N 0.000 description 1
- URPSJRMWHQTARR-MBLNEYKQSA-N Thr-Ile-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O URPSJRMWHQTARR-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 1
- BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)O BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- BIBYEFRASCNLAA-CDMKHQONSA-N Thr-Phe-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CC1=CC=CC=C1 BIBYEFRASCNLAA-CDMKHQONSA-N 0.000 description 1
- DEGCBBCMYWNJNA-RHYQMDGZSA-N Thr-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O DEGCBBCMYWNJNA-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- XHWCDRUPDNSDAZ-XKBZYTNZSA-N Thr-Ser-Glu Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N)O XHWCDRUPDNSDAZ-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 1
- COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N Thr-Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N 0.000 description 1
- LECUEEHKUFYOOV-ZJDVBMNYSA-N Thr-Thr-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O LECUEEHKUFYOOV-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 1
- KZTLZZQTJMCGIP-ZJDVBMNYSA-N Thr-Val-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KZTLZZQTJMCGIP-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- UYKREHOKELZSPB-JTQLQIEISA-N Trp-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O)=CNC2=C1 UYKREHOKELZSPB-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- HLDFBNPSURDYEN-VHWLVUOQSA-N Trp-Ile-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N HLDFBNPSURDYEN-VHWLVUOQSA-N 0.000 description 1
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 description 1
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 description 1
- HPYDSVWYXXKHRD-VIFPVBQESA-N Tyr-Gly Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CC=C(O)C=C1 HPYDSVWYXXKHRD-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KIJLSRYAUGGZIN-CFMVVWHZSA-N Tyr-Ile-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O KIJLSRYAUGGZIN-CFMVVWHZSA-N 0.000 description 1
- ZYVAAYAOTVJBSS-GMVOTWDCSA-N Tyr-Trp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZYVAAYAOTVJBSS-GMVOTWDCSA-N 0.000 description 1
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 1
- SMKXLHVZIFKQRB-GUBZILKMSA-N Val-Ala-Met Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N SMKXLHVZIFKQRB-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- VMRFIKXKOFNMHW-GUBZILKMSA-N Val-Arg-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N VMRFIKXKOFNMHW-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- LNYOXPDEIZJDEI-NHCYSSNCSA-N Val-Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](C(C)C)N LNYOXPDEIZJDEI-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- DAVNYIUELQBTAP-XUXIUFHCSA-N Val-Leu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)N DAVNYIUELQBTAP-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- ZXYPHBKIZLAQTL-QXEWZRGKSA-N Val-Pro-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N ZXYPHBKIZLAQTL-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- DEGUERSKQBRZMZ-FXQIFTODSA-N Val-Ser-Ala Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DEGUERSKQBRZMZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- OWFGFHQMSBTKLX-UFYCRDLUSA-N Val-Tyr-Tyr Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)N OWFGFHQMSBTKLX-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 1
- 102000013127 Vimentin Human genes 0.000 description 1
- 108010065472 Vimentin Proteins 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 108010008685 alanyl-glutamyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010070783 alanyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 1
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 102100022422 cGMP-dependent protein kinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 238000005056 compaction Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000005045 desmin Anatomy 0.000 description 1
- 230000000368 destabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 101150098622 gag gene Proteins 0.000 description 1
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 210000005046 glial fibrillary acidic protein Anatomy 0.000 description 1
- 108010057083 glutamyl-aspartyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010084389 glycyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 210000003963 intermediate filament Anatomy 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 206010023841 laryngeal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- DVCSNHXRZUVYAM-BQBZGAKWSA-N leu-asp Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O DVCSNHXRZUVYAM-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 108010003700 lysyl aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010017391 lysylvaline Proteins 0.000 description 1
- 230000007257 malfunction Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000003739 neck Anatomy 0.000 description 1
- 208000025440 neoplasm of neck Diseases 0.000 description 1
- 210000005044 neurofilament Anatomy 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000000633 nuclear envelope Anatomy 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 1
- 108010070643 prolylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 101150066583 rep gene Proteins 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 108010048397 seryl-lysyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 108020003113 steroid hormone receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005969 steroid hormone receptors Human genes 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 108010080629 tryptophan-leucine Proteins 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 108010078580 tyrosylleucine Proteins 0.000 description 1
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010009962 valyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 108010021889 valylvaline Proteins 0.000 description 1
- 210000004509 vascular smooth muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005048 vimentin Anatomy 0.000 description 1
- 230000006648 viral gene expression Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4746—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used p53
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
A találmány tárgya mutáns p53 fehérjéhez specifikusan kötődő egyláncú antitestek alkalmazása mutáns p53 proteinnel rendelkező, p53 proteinnel nem rendelkező vagy lecsökkent transzkripciós faktor funkciójú p53 proteinnel rendelkező sejtekben a p53-függő transzaktiválási aktivitás visszaállítására szolgáló gyógyszerkészítmények előállítására. Részletesebben a találmány egyláncú antitestek alkalmazásán alapul, melyek képesek specifikusan a mutáns p53 proteinhez kötődni. A találmány tárgyát képezik olyan új molekulák is, melyek képesek specifikusan és hatékonyan kötődni a p53 proteinekhez, lehetővé téve tumoros sejtekben a p53-aktivitás visszaállítását, valamint az ezeket a molekulákat kódoló nukleinsavak és az ezeket tartalmazó vektorok. A találmány szerinti eljárás és molekulák in vitro vagy ex vivő alkalmazhatók a p53 és mutáns formái hatásmechanizmusának vizsgálatára vagy p53 proteinek tisztítására. In vivő alkalmazási lehetőséggel is rendelkeznek, többek között a p53-aktivitás visszaállításának terápiás megközelítésében patológiás körülmények között, többek között rákok esetében.
A vad p53 protein a sejtciklus szabályozásában és a sejtgenom integritásának fenntartásában vesz részt. A fehérje, melynek fő funkciója bizonyos gének transzkripciójának aktiválása, képes egy még nem teljesen jól ismert folyamat során a sejtciklus G1 fázisában lévő sejteket gátolni a genomreplikáció folyamán fellépő mutációk megjelenése során, és bizonyos számú DNS-javító folyamatot beindítani. Ezenkívül a javítási folyamat hibás működése esetén vagy a javításhoz túl sok mutációs esemény megjelenése esetén a fehérje képes az apoptózisnak nevezett programozott sejthalál jelenségét beindítani. Ezen a módon a p53 úgy hat, mint tumorszuppresszor, eltávolítva az abnormálisán differenciálódott vagy sérült genommal rendelkező sejteket.
A p53 e fő funkciója transzkripciós faktor funkciójától függ, másképpen szólva attól a kettős képességétől, hogy képes felismerni a genomiális DNS területén specifikus szekvenciákat, és képes az általános transzkripciós gépezetet megkötni.
A p53 fehérje 393 aminosavból áll, melyek 5 funkcionális domént határoznak meg:
- a transzkripciós aktivátor dómén, amely az 1-73. aminosavakból áll, és képes az általános transzkripciós gépezet bizonyos faktoraihoz, például a TBP fehérjéhez kötődni. Ez a dómén bizonyos poszttranszlációs módosítások székhelye is. Ezenkívül székhelye a p53 protein számos kölcsönhatásának számos más fehérjével, többek között az mdm2 sejtproteinnel, vagy az Epstein-Barr-vírus (EBV) EBNA5 fehérjéjével, melyek képesek gátolni a vad fehérje működését. Ezenfelül ebben a doménben találhatók a proteolitikus lebontásra képes úgynevezett PEST aminosavszekvenciák.
- a DNS-kötő dómén, amely a 73. és 315. aminosavak között helyezkedik el. A p53 e központi doménjének konformációja szabályozza a specifikus DNS-szekvenciák felismerését a p53-ban.
A dómén a székhelye két típusú megváltozásnak, amelyek a vad fehérje működését befolyásolják:
(i) a p53 működését gátló fehérjékkel történő kölcsönhatás, például az SV40 vírus „nagy T antigénje, vagy a HPV16 és HPV18 vírusok E6 vírusfehérjéi, melyek képesek az ubiquitinrendszeren keresztül lebomlását kiváltani. Ez utóbbi kölcsönhatás csak az E6ap sejtfehérje (az ubiquitinilációs kaszkád E3 enzimje) jelenlétében valósulhat meg, (ii) pontmutációk, melyek a p53 működésére vannak hatással, és melyeknek legnagyobb része ebben a régióban helyezkedik el,
- a nukleáris lokalizációs szignál, amely a 315-325. aminosavakból áll, és amely elengedhetetlen ahhoz, hogy a fehérje a megfelelő sejtalkotórészbe kerüljön, ahol majd működését kifejti,
- az oligomerizációs dómén, amely a 325-355. aminosavakból áll. Ez a 325-355. terület egy 6-redő(326-334.)-könyök(335-336.)-a-hélix(337—355.) típusú szerkezetet alkot. Az ezen a területen elhelyezkedő funkciók megváltozása alapvetően a vad fehérjének a különböző mutáns formákkal való kölcsönhatásának köszönhető, melyek különböző hatásokhoz vezethetnek a vad fehérje működésében,
- a regulációs dómén, amely a 365-393. aminosavakból áll, és amely számos poszttranszlációs modifikáció székhelye (glikozilálás, foszforilálás, RNS-kötés...), melyek a p53 fehérje működését pozitívan vagy negatívan szabályozzák. A dómén különösen fontos szerepet játszik a vad fehérje működésének szabályozásában.
A p53 működése különböző módokon zavarható meg:
- bizonyos faktorok gátolják működését, például az SV40 vírus „nagy T” antigénje, az Epstein-Barrvírus EBNA5 fehérjéje, vagy az mdm2 sejtprotein,
- a fehérje destabilizálható proteolízisre való érzékenységének megnövelésével, többek között a HPV16 és HPV18 humán papillomavírusok E6 fehérjéjével történő kölcsönhatás révén, ami a p53 ubiquitinilációs ciklusba való belépésének kedvez. Ebben az esetben a két fehérje közötti kölcsönhatás csak egy sejtprotein, az E6ap előzetes kötődése esetén valósulhat meg, melynek kötőhelye még kevéssé ismert,
- a p53 gén pontmutációi,
- a p53 egyik vagy mindkét alléljának deléciója.
A modifikációk két utóbbi típusa a különböző típusú rákok körülbelül 50%-ában megtalálható. Ebben a tekintetben a p53 gén rákos sejtekben megtalálható mutációi a fehérjét kódoló gén nagyon nagy részét érintik, és eredményük a fehérje működésének különböző megváltoztatása. Mégis megjegyezhetjük, hogy ezek a mutációk többségükben a p53 központi részén helyezkednek el, melyről tudjuk, hogy a p53 fehérje azon területe, amely a specifikus genomiális szekvenciákkal való kapcsolódásért felelős. Ez megmagyarázza, hogy a p53 mutánsok többségének miért fő jellemzője, hogy
HU 226 330 Β1 nem képes a vad fehérjét felismerő DNS-szekvenciákon kötődni, és így nem képes transzkripciós faktor szerepét kifejteni. Másrészt bizonyos mutációk, úgy tűnik, új funkciókra tettek szert, például bizonyos gének aktiválása transzkripciós szinten.
A módosításokat jelenleg három csoportba soroljuk:
- az úgynevezett gyenge mutációk, melyek terméke működésképtelen fehérje, amely egyetlen alléi mutációja esetében nincs hatással a másik alléi által kódolt vad fehérje működésére. A csoport főbb képviselői a H273 és a W248 mutánsok, ez utóbbi a rákok kialakulására fokozott érzékenységet okozó Li-Fraumeni-szindróma családi formájára specifikus,
- a domináns-negatív mutációk, melyek terméke működésképtelen fehérje, amely egyetlen alléi mutációja esetében a vad fehérjével történő kölcsönhatás révén képes gátolni ez utóbbi működését, kevert, inaktív oligomerek kialakulása útján, melyek nem képesek a vad fehérjére specifikus DNS-szekvenciákon kötődni. A csoport fő képviselője a G281 mutáns,
- az onkogén-domináns mutációk, melyek terméke olyan fehérje, amely képes egyrészt gátolni a vad fehérje működését, mint az előző csoport mutánsai, másrészt a még kevéssé ismert tumorkiaiakulási folyamatoknak kedvez, így új funkciót kialakítva. A csoport fő képviselője a H175 mutáns.
Tumorellenes és apoptotikus tulajdonságait, valamint számos hiperproliferatív típusú betegségben való részvételét figyelembe véve a vad p53 gént gén- és sejtterápiás megközelítésekben már alkalmazták. Részletesen javasolták, hogy bizonyos hiperproliferatív betegségeket, többek között rákokat, a vad p53 gén in vivő beadásával kezeljenek, így helyreállítva a p53-funkciókat. A beadást előnyösen vírusvektorokkal valósíthatják meg, többek között adenovírusokkal [WO 94/24297] vagy retrovírusokkal [WO 94/06910], (gy kimutatták, hogy a vad p53 fehérjét kódoló nukleinsav beadása lehetővé tette a sejtnövekedés normális szabályozottságának részleges helyreállítását [Roth et al., Natúré Medicine 2, 985 (1996)]. Kifejlesztettek alternatív stratégiákat is, melyek p53 típusú tulajdonságokkal rendelkező kiméra molekulák alkalmazásán alapulnak [PCT/FR96/01111}.
A vad p53 fehérje funkcióinak helyreállítására egy másik megközelítés azon alapul, hogy az endogén mutáns fehérjéket visszaalakítják a vad fenotípusra, azaz amely rendelkezik a vad p53 tumorszuppresszor és apoptotikus tulajdonságaival. Ez a megközelítés abból ered, hogy kimutatták, hogy a p53 mutánsok funkcióvesztése a fehérje mutáció(k) által kiváltott konformációs változásának eredménye. Ebben a tekintetben a WO 94/12202 és WO 96/30212 számon közzétett szabadalmi bejelentésben kimutatták, hogy egy pAb421nek nevezett p53 elleni monoklonális antitest képes helyreállítani egy adott, a humán tumorokban gyakran előforduló mutánsosztály esetében in vitro a DNS-kötő funkciót. A vegyülettípus alkalmazása azonban jelentős hátrányokkal rendelkezik, amelyek többek között a magas szükséges antitestmennyiséggel (és így a kapcsolódó termelés/tisztítás problémáival) és gyenge intracelluláris behatolóképességükkel kapcsolatosak.
A jelen bejelentés egy hatékonyabb megközelítést ismertet egy p53 mutáns vad tulajdonságainak helyreállítására. A bejelentés részletesen a p53 fehérjére különösen specifikus ligandumok kialakítását írja le, melyek előnyös tulajdonságokkal rendelkeznek a vad p53 funkcióinak helyreállítása terén. Részletesebben a bejelentésben egyláncú antitestek (ScFv), többek között a 11D3 molekula kialakítását írjuk le, melyek a p53 fehérjére specifikusak. A bejelentésben kimutattuk többek között, hogy az ScFv-k képesek felismerni a p53-at, hatékonyan kifejezhetők egy tumoros sejtben, és képesek a p53 mutánsok egy osztályának transzaktivátor funkcióját részben újra aktiválni.
A technika állásának eljárásaihoz viszonyítva ez a molekula jelentős előnyökkel rendelkezik, többek között azzal, hogy in situ jelentős mennyiségben kifejezhető egy tumoros sejtben. A későbbiekben bemutatott eredmények annál váratlanabbak, mivel egy klasszikus antitest és az ScFv között gyakran figyelték meg az affinitás elvesztését. Ezenkívül a bejelentésben kimutattuk, hogy az ScFv-k a megfelelő intracelluláris sejtalkotórészekben fejezhetők ki, ami lehetővé teszi, hogy optimális biológiai aktivitást kapjunk.
A találmány egy eljárást ismertet mutáns p53 fehérjével rendelkező sejtekben a p53-függő transzaktiváló aktivitás helyreállítására, amely abból áll, hogy az említett sejtbe a mutáns p53 fehérjéhez specifikusan kötődni képes egyláncú antitestet vezetünk be. Előnyösen a találmány szerinti eljárás magában foglalja a sejtbe egy olyan nukleinsav bevezetését, amely az említett egyláncú antitestet kódoló szekvenciát tartalmaz egy, a sejtben működőképes promoter irányítása alatt. A találmány egy másik aspektusa egy mutáns p53 fehéréhez specifikusan kötődni képes egyláncú antitest alkalmazása az említett fehérje konformációjának megváltoztatására. A találmány tárgya egy, a p53 fehérje C-terminális területén a 320-393. maradékok között levő epitóphoz specifikusan kötődni képes egyláncú antitest alkalmazása olyan rákok kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására, amelyekben egy mutáns p53 fehérjének szerepe van. A találmány tárgya továbbá egy, a p53 fehérje C-terminális területén a 320-393. maradékok közötti epitóphoz specifikusan kötődni képes egyláncú antitestet kódoló nukleinsav alkalmazása olyan rákok kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására, amelyekben egy mutáns p53 fehérjének szerepe van.
A találmány szerinti alkalmazás tehát részben egy mutáns p53 fehérjéhez specifikusan kötődni képes egyláncú antitest kialakításán, vektorba építésén és sejtekbe történő bevezetésén alapul. Az egyláncú antitestek (ScFv) alapvetően egy VH régióból állnak, ami egy karon keresztül egy VL régióhoz kapcsolódik. Az ScFv és az ilyen módosított antitesteket kódoló nukleinsavszekvenciák kialakítását például az US 4 946 778 számú szabadalmi iratban, vagy a WO 94/02610, WO 94/29446 szá3
HU 226 330 Β1 mon közzétett szabadalmi bejelentésekben ismertetik, melyeket referenciaként építünk be a jelen bejelentésbe.
A bejelentésben részletesebben egy olyan hibridóma bank kialakítását ismertetjük, amely p53 elleni antitesteket termel, és a bankból kiindulva a megfelelő ScFv kialakítását. Leírjuk a megfelelő nukleinsavak klónozását is expressziós vektorokba, és átvitelüket sejtekbe. Bemutatjuk, hogy ez az átvitel lehetővé teszi, hogy in vivő hatékonyan állítsuk helyre a p53 mutánsok DNS-kötő, valamint transzaktivátor aktivitását.
Részletesebben a találmány olyan ScFv-ket használ fel, melyek képesek specifikusan kötődni egy, a p53 C-terminális területén lévő epitóphoz, amely az oligomerizációs domént és a regulációs domént hordozza. Ebben a tekintetben a bejelentés egy vizsgálatot is ismertet, amely lehetővé teszi, hogy ELISA technikával szelektáljuk azokat az ScFv-ket, melyek ezzel a tulajdonsággal rendelkeznek.
A találmány szerint alkalmazott ScFv-k képesek specifikusan kötődni egy, a p53 C-terminális területén a 320-393. maradékok között lévő epitóphoz. Ebben a tekintetben a bejelentésben példaképpen az 1. számú szekvenciával rendelkező ScFv421 és a 2. számú szekvenciával rendelkező 11D3 ScFv kialakítását és expresszióját írjuk le.
A találmány szerinti eljárás általában alkalmazható a DNS-kötő képességüket részben vagy teljesen elvesztett p53 mutáns fehérjék esetében, és lehetővé teszi, hogy ezt a képességet helyreállítsuk. Még részletesebben a találmány szerinti eljárás a p53 transzkripciós faktor funkcióját részben vagy teljesen elvesztett mutáns p53 fehérjék esetében alkalmazható, és lehetővé teszi ennek a funkciónak a helyreállítását. A helyreállítás lehet részleges vagy teljes. Előnyösen elegendő, ha a mutáns képes lesz tumorszuppresszor funkcióját kifejteni a sejtciklus gátlásával és/vagy az apoptózis kiváltásával. A találmány szerinti eljárás tehát lehetővé teszi, hogy legalább részlegesen helyreállítsunk ilyen aktivitással nem rendelkező endogén mutáns p53 fehérjével rendelkező sejtekben egy tumorszuppresszoraktivitást. Előnyösen olyan mutáns fehérjékről van szó, melyek tumoros sejtekben vannak jelen. Amint korábban jeleztük, a p53 fehérje különböző mutáns formáit mutatták ki tumoros sejtekben. Például a p53H273, p53W248 és a p53G281 fehérjéket említhetjük meg. A később bemutatott példák azt mutatják, hogy a találmány szerinti eljárás lehetővé teszi, hogy ezeknek a mutánsoknak a konformációját és biológiai tulajdonságait megváltoztassuk in vitro és in vivő. Részletesen a példák azt mutatják, hogy az ScFv421 és a 11D3 képesek a 273 és 248 mutánsok esetében a specifikus DNS-kötő képesség helyreállítására és a p53-függő transzaktiválás kiváltására.
A találmány szerinti eljárást alkalmazhatjuk in vitro, ex vivő vagy in vivő. In vitro vagy ex vivő a találmány szerinti eljárás és molekulák például lehetővé tehetik, hogy a p53 és mutáns formái hatásmechanizmusát tanulmányozzuk. Ezenkívül a találmány szerinti molekulákat alkalmazhatjuk a p53 fehérje detektálására vagy tisztítására, például egy hordozón való kapcsolással, egy p53 fehérjét tartalmazó oldattal való érintkeztetéssel, amit adott esetben a kialakult komplex láthatóvá tétele vagy eluálás követ. In vivő, többek között embernél, lehetővé tehetik, hogy olyan patológiás körülmények között, mint a hiperproliferatív rendellenességek, melyekben p53-aktivitás hiánya figyelhető meg, ezt a funkciót helyreállítsuk. Ebben a tekintetben más a korábbiakban említett megközelítéssel (egy vad p53 gén bevezetése) vagy kemoterápiával kombinációban [WO 96/22101] is alkalmazható. Szintén in vivő, a találmány szerinti eljárás és molekulák alkalmazhatók állatoknál például az ScFv-kifejeződés szintjének meghatározására és humán terápiás megközelítés lehetőségének felmérésére.
Előnyösen a mutáns p53 fehérjével rendelkező sejt egy tumoros emlőssejt. Ebben a tekintetben különösen a tüdőráksejteket (többek között a nem kissejtes tüdőráksejteket), a vastagbélráksejteket, a májráksejteket, az agytumorsejteket, a fej- és nyaki tumorsejteket említhetjük meg, és általánosabban bármely rák sejtjeit, amelyben a p53 fehérje mutáns formáját megfigyelték. Előnyösen humán tumoros sejtről van szó, amelyben p53H273, p53W248 és/vagy p53G281 mutánst figyeltek meg (tüdő, vastagbél, agy, fej és nyaki, máj). A találmány szerinti eljárás alkalmazhatósága egy adott sejt esetében könnyen meghatározható a következő eljárás szerint: a sejtet először jellemezni kell abból a szempontból, hogy van-e jelen mutáns p53 fehérje. A fehérjét ezután jellemezni kell, hogy meghatározzuk a mutáció természetét. Amennyiben egy ismert mutációról van szó, többek között a fentebb említettekről, a sejtet úgy tekinthetjük, mint amely kezelhető a találmány szerinti eljárással. Amennyiben egy nem említett mutációról van szó, különböző megközelítések lehetségesek. A mutáns fehérjét először izolálhatjuk (vagy mesterségesen szintetizálhatjuk), és vizsgálhatjuk a példákban leírt módon arra vonatkozóan, hogy miként viselkedik ScFv jelenlétében in vitro és in vivő. Ez lehetővé teszi, hogy azonosítsuk a fehérje hiányzó funkcióinak visszaállításához megfelelő ScFv-t. Egy másik megközelítés szerint közvetlenül az ScFv-ket vizsgáljuk egy sejttenyészeten, hogy meghatározzuk az ScFv-k biológiai hatékonyságát.
A találmány szerinti eljárás megvalósításához az ScFv-t előnyösen a sejtbe in vitro, ex vivő vagy in vivő egy vektor formájában vezetjük be, amely hordozza az említett ScFv-t kódoló nukleinsavat az említett sejtben működőképes promoter irányítása alatt.
A promotert előnyösen emlős-, még előnyösebben humán sejtekben működőképes promoterek közül választjuk. Még előnyösebben egy nukleinsav expresszióját egy hiperproliferatív (rákos, resztenózisos stb.) sejtben lehetővé tevő promoterről van szó. Ebben a tekintetben különböző promotereket alkalmazhatunk. Például szó lehet a p53 gén saját promoteréről. De szó lehet eltérő eredetű (más fehéijék expressziójáért felelős vagy szintetikus) területekről is. Bármely olyan promoterről vagy származék szekvenciáról szó lehet, amely egy gén transzkripcióját specifikus vagy nemspecifikus, indukálható vagy nem indukálható, erős
HU 226 330 Β1 vagy gyenge módon elősegíti vagy gátolja. Többek között eukarióta vagy virális gének promotereit említhetjük meg. Például a célsejt genomjából származó promoterszekvenciákról lehet szó. Az eukarióta promoterek közül különösen az általános promotereket (a HPRT, PGK, alfa-aktin, tubulin stb. gének promoterei), az intermedier filamentumok promotereit (a GFAP, dezmin, vimentin, neurofilamentumok, keratin stb. gének promoterei), terápiás gének promotereit (például az MDR, CFTR, Vili. faktor, ApoAI stb. gének promoterei), szövetspecifikus promotereket (a piruvát kináz, viliin, zsírsavkötő bélprotein, simaizomsejtek alfa-aktinja stb. gének promoterei) vagy egy ingerre válaszoló promotereket (szteroidhormonok receptorai, retinsavreceptor stb.) használhatjuk. Éppúgy szó lehet egy vírus genomjából származó promoterszekvenciákról, amilyenek például az adenovírusok E1A és MLP génjeinek promoterei, a CMV korai promotere vagy az RSV LTRének promotere stb. Azonkívül a promoterrégiókat aktivációs, regulációs vagy szövetspecifikus vagy nagymértékű expressziót lehetővé tevő szekvenciák hozzáadásával módosíthatjuk is.
Amint a korábbiakban jeleztük, a bejelentésben olyan különösen előnyös új molekulákat is ismertetünk, melyek a mutáns p53 fehérjéket kötő és helyreállító tulajdonságokkal rendelkeznek, a találmányban részletesebben adott ScFv-k (11D3, 421) kialakítását, hordozóhoz kapcsolását és sejtekbe történő átvitelét ismertetjük. Az ScFv-k nukleinsav- és peptidszekvenciáit az
1. és 2. számú szekvencián adtuk meg. A következő példák azt mutatják be, hogy a molekulák különösen előnyös módon képesek (i) a mutáns p53 fehérjékhez azok C-terminális részén kötődni, (ii) visszaállítani ezen molekulák DNS-kötő képességét, és (iii) visszaállítani ezen molekulák transzkripciós aktivátor képességét. A példákban bemutatjuk ezenkívül, hogy a molekulák helyesen fejeződnek ki tumoros sejtekben, ami előnyösen lehetővé teszi hiperproliferatív rendellenességek esetében alkalmazásukat. Másrészt a találmány szerinti ScFv-k tulajdonságai javíthatók is. Többek között ismert, hogy az ScFv-k affinitása befolyásolható a CDR régiókon keresztül (a szekvencián aláhúzva), és szokásos mutagenezis/szelekciós kísérletekkel javítható. így antitestek mutagenizálását ismertette Marks és munkatársai [Bio/Technology 10, 779-783 (1992)] és Winter G. és Milstein C. [Natúré 349, 293-299 (1991)]. Az ezeken a helyeken ismertetett eljárások alkalmazhatók a találmány szerinti módosított affinitással rendelkező ScFv-variánsok előállítására is. A szelekciót ezután a példákban ismertetett körülmények között végezhetjük.
A találmány tárgya tehát a 11D3 ScFv molekula, melynek peptidszekvenciáját a 2. számú szekvencián mutatjuk be, valamint ennek minden olyan variánsa, amely a CDR régiókban módosítással rendelkezik, de megőrzi p53 fehérje kötő képességét. A módosítás állhat delécióból, szubsztitúcióból, vagy egy vagy több maradéknak a CDR régiókba történő beépítéséből. Előnyösen a módosítást kevesebb mint 10 maradék hordozza.
A találmány tárgya bármely nukleinsav is, amely a
11D3 ScFv-t vagy annak egy, a korábbiakban definiált változatát kódolja.
A találmány szerinti nukleinsav lehet ribonukleinsav (RNS) vagy dezoxiribonukleinsav (DNS). Előnyösen egy komplementer DNS-ről (cDNS) van szó. Ez lehet humán, állati, vírus-, szintetikus vagy félig szintetikus eredetű. Különbözőképpen kaphatjuk meg, többek között kémiai szintézissel, a bejelentésben bemutatott szekvenciákat, és például egy nukleinsavszintetizátort felhasználva. Megkaphatjuk bankok specifikus szondákkal történő szűrésével is, többek között amilyeneket a bejelentésben írunk le. Kevert technikákkal is megkaphatjuk, amelyek a bankok szűrésével kapott szekvenciák kémiai módosításait (meghosszabbítás, deléció, szubsztitúció stb.) foglalják magukban. Általános módon a találmány szerinti nukleinsavakat bármely a szakember számára ismert eljárás szerint előállíthatjuk [lásd többek között az US 4 946 778 és a WO 94/02610 számú iratokban leírt eljárásokat, melyeket referenciaként építünk be a bejelentésbe]. Egy ScFv-t kódoló nukleinsav kialakításának klasszikus stratégiája a következő: A VH és VL régiókat kódoló cDNS-eket a választott anti-p53 antitestet termelő hibridómából kapjuk meg. Ehhez a hibridóma összRNS-ét kivonjuk, és reverz transzkripciónak vetjük alá primerként random hexamereket alkalmazva. Az ilyen primer alkalmazásával elkerülhetjük az immunglobulinokra specifikus primerek alkalmazását. A kapott cDNSklónok elegendő hosszúak a V régió klónozásához. Amennyiben ezek az összes jelen levő cDNS nagyon kicsi frakcióját alkotják, előzetes amplifikációs reakciót végezhetünk a klónozáshoz elegendő DNS termelésére. Ehhez a VH és VL régiókat kódoló cDNS-eket külön-külön amplifikáljuk. Az alkalmazott primerek mindkét lánc (H és L) esetében a variábilis régió ellentétes végeivel hibridizálódó oligonukleotidok. A nehéz lánc specifikus és a könnyű lánc specifikus primerekkel végzett amplifikáció termékeit ezután tisztítottuk. Tisztítás után az antitest VH és VL régióit kódoló cDNS-eket egyetlen lánccá egyesítettük egy nukleotidkar segítségével (L). A nukleotidkart úgy alkotjuk meg, hogy egyik vége a VH régiót kódoló cDNS 3'-végéhez kapcsolódik, másik vége a VL régiót kódoló cNDS 5’-végéhez. A kar szekvenciája a (G4S)3 peptidet kódolta. A körülbelül 700 bp egyesített szekvencia egy Ncol-Notl fragmentum formájában tartalmazza a VH-L-VL láncolatot, melynek szekvenciáit például az 1. és a 2. számú szekvencián mutatjuk be.
A találmány szerinti nukleinsav előnyösen egy cDNS vagy egy RNS.
A találmány szerinti nukleinsavat előnyösen a következők közül választjuk:
(a) a 2. számú szekvencia vagy annak része, vagy komplementer lánca, (b) bármely az (a) szekvenciákkal hibridizáló szekvencia, amely a p53 fehérjéhez, előnyösen annak C-terminális részéhez specifikusan kapcsolódni képes ScFv-t kódol, (c) az (a) vagy (b) szekvenciák genetikai kód degeneráltságából következő változatai.
HU 226 330 Β1
A találmány tárgya minden expressziós kazetta is, amely egy korábbiakban definiált nukleinsavat, egy expresszióját lehetővé tevő promotert és egy transzkripciós végjelet tartalmaz.
A találmány szerinti eljárásban a nukleinsavat előnyösen egy vektor segítségével adjuk be a sejtekbe, amely lehetővé teszi, hogy (i) a sejtbe való behatolást, (ii) a célzást, és/vagy (iii) az extra- és intracelluláris stabilitást javítsuk.
A találmány egy különösen előnyös megvalósítási módja szerint a nukleinsav egy vektorba van beépítve, amely lehet kémiai (liposzóma, nanopartikulum, peptidkomplex, kationos lipid vagy polimer stb.), virális (retrovírus, adenovírus, herpeszvírus, AAV, vakciniavírus stb.) vagy plazmideredetű.
A virális vektorok alkalmazása a vírusok természetes transzfekciós tulajdonságain alapul. Igy alkalmazhatjuk az adenovírusokat, a herpeszvírusokat, a retrovírusokat és az adenoasszociált vírusokat. Ezek a vektorok különösen hatékonynak bizonyultak transzfekciós téren. Részletesen az adenovírusok és a retrovírusok, mivel képesek tumoros sejteket fertőzni, a találmány keretein belül előnyös vektorok. Ebben a tekintetben a találmány egy előnyös megvalósítási módjában a nukleinsavat egy retrovírusvektor formájában vezetjük be, azaz egy hiányos rekombináns retrovírus formájában, melynek genomja tartalmaz egy korábbiakban definiált ScFv-t kódoló nukleinsavat. A találmány egy másik előnyös megvalósítási módjában a nukleinsavat egy adenovírusvektor formájában vezetjük be, azaz egy hiányos rekombináns adenovírus formájában, melynek genomja tartalmaz egy korábbiakban definiált ScFv-t kódoló nukleinsavat.
A találmány szerinti vektor lehet egy nem virális vektor is, amely képes nukleinsavak eukarióta sejtekbe történő átvitelét elősegíteni. A kémiai vagy biokémiai, természetes vagy szintetikus vektorok előnyös alternatívát képeznek a természetes vírusokkal szemben, különösen kényelmi és biztonsági okokból, valamint mivel nincs elméleti korlátja a transzfektálandó DNS méretének. A szintetikus vektoroknak két fő funkciójuk van, a transzfektálandó nukleinsav tömörítése, és sejten való kötődésének, valamint a plazmamembránon, és adott esetben a két magmembránon történő áthaladásának elősegítése. A nukleinsavak polianionos jellegének kiküszöbölésére a nem virális vektorok mind polikationos töltésűek. Egy különleges találmány szerinti eljárásban a vektor egy kémiai vagy biokémiai vektor.
A találmány tárgyát képezi minden készítmény, amely legalább egy, a korábbiakban definiált nukleinsavat tartalmaz.
A találmány tárgya minden olyan készítmény is, amely legalább egy, a korábbiakban definiált vektort tartalmaz.
A találmány tárgyát képezi minden olyan készítmény is, amely legalább egy, a korábbiakban definiált ScFv-t tartalmaz.
A találmány tárgyát képezik azok a készítmények is, melyek egy korábbiakban definiált nukleinsavat vagy vektort, és egy vad p53 fehérjét kódoló nukleinsavat vagy vektort tartalmaznak, egyidejű vagy időben eltolt kombinált alkalmazás céljából.
Antiproliferatív tulajdonságuk miatt a találmány szerinti gyógyszerkészítmények különösen megfelelőek hiperproliferatív rendellenességek, többek között rákok és resztenózis kezelésére. A találmány így egy különösen hatékony eljárást nyújt sejtek, többek között hiperproliferatív sejtek elpusztítására.
A találmányt in vitro vagy ex vivő alkalmazhatjuk. Ebben az esetben a találmány alapvetően abból áll, hogy a sejteket egy vagy több nukleinsav (vagy vektor, vagy kazetta, vagy közvetlenül az ScFv) jelenlétében inkubáljuk. Az alkalmazott dózis 0,01-1000 pg vektor lehet 106 sejtre, vagy 0,1-1000 MOI virális vektor esetében.
In vivő a találmány abból áll, hogy a szervezetbe a találmány szerinti vektor (vagy kazetta) hatékony mennyiségét adjuk be, előnyösen közvetlenül a kezelendő helyre (például tumorba). Ebben a tekintetben a találmány tárgya egy eljárás is hiperproliferatív sejtek elpusztítására, amely magában foglalja az említett sejtek vagy egy részük érintkeztetését egy korábbiakban definiált nukleinsawal. In vivő alkalmazás esetében a találmány szerint alkalmazott nukleinsavat vagy vektort helyi, orális, parenterális, intranazális, Intravénás, intramuszkuláris, szubkután, intraokuláris, transzdermikus stb. beadás céljából formulázhatjuk. Előnyösen a nukleinsavat vagy vektort injektálható formában alkalmazzuk. így bármely gyógyszerészetileg az injektálható formulázás, többek között a kezelendő helyre történő közvetlen injektálás céljából elfogadható hordozóval elegyíthetjük. Különösen steril, izotóniás sóoldatokról lehet szó, vagy szárított, például liofilizált készítményekről, melyek az adott esettől függően steril víz vagy fiziológiás szérum hozzáadásával injektálható oldatok előállítását teszik lehetővé. A nukleinsav közvetlenül a beteg tumorjába történő injektálása előnyös, mivel lehetővé teszi, hogy a terápiás hatást az érintett szövetekre koncentráljuk. Az alkalmazott nukleinsavdózisok különböző paraméterek, például a gén, a vektor, az alkalmazott beadási mód, az illető betegség vagy a kívánt kezelési időtartam függvényében választhatók meg. Előnyösen az in vivő beadott dózis 10® és 101° pfu közötti virális vektor, például adenovírus esetében. Másrészt ismételt beadás is elképzelhető.
Szintén in vivő, a találmány szerinti eljárás és molekulák alkalmazhatók állatmodelleken a p53 hatásmechanizmusának vizsgálatára is, és az ScFv-k hatékonyságának meghatározására.
A találmányt előnyösen in vivő alkalmazzuk hiperproliferatív (azaz abnormálisán osztódó) sejtek elpusztítására. így tumoros sejtek vagy az érfal simaizomsejtjeinek (resztenózis) elpusztítására alkalmazható. Különösen alkalmas olyan rákok kezelésére, melyekben a p53 egy mutáns formáját figyelték meg. Példaképpen említhetjük a vastagbél-adenokarcinómákat, a pajzsmirigyrákokat, a tüdőrákokat, a mieloid leukémiát, a vastag- és végbélrákot, az emlőrákot, a tüdőrákot, a gyomorrákot, a nyelőcsőrákokat, a B-limfomákat, a petefészekrákokat, a húgyhólyagrákokat, a hepatokarcinó6
HU 226 330 Β1 mákat, a csontrákokat, a bőr-, a hasnyálmirigyrákokat, vagy a vese- és prosztatarákokat, a nyelőcsőrákokat, a gégerákokat, a fej- és nyakrákokat, a HPV pozitív anogenitális rákokat, az EBV pozitív orr-garat rákokat, és azokat a rákokat, melyekben az mdm2 sejtfehérje túlzott mértékben fejeződik ki stb.
A találmányt részletesebben ismertetjük a következő példákban, amelyek azonban nem korlátozzák a találmány oltalmi körét, csupán illusztrációként szolgálnak.
Az ábrák ismertetése
1. ábra: Az antitestek szűrésének stratégiája,
2. ábra: Annak a kimutatása, hogy az antitestek képesek retardációt kiváltani p53 gélen.
3. ábra: Annak a kimutatása, hogy az antitestek képesek retardációt kiváltani p53H273 gélen.
4. ábra: Az ScFv-k vad p53-mal történő kapcsolódásának kimutatása ELISA-val. Tele körök: IgG 11D3 (kezdőérték 1 pg/ml); üres körök: IgG 421 (kezdőérték 1 pg/ml); négyzetek: biotinezett poliklonális szérum (kezdőérték 1 pg/ml); tele háromszögek: ScFv 11D3-myc (kezdőérték 1/2-nél); üres háromszögek: ScFv 421-myc (kezdőérték 1/2-nél); rombuszok: semleges ScFv (antiCD3, kezdőérték 1/2-nél).
5. ábra: ScFv-k által kiváltott gélretardáció kimutatása.
6. ábra: A p53 mutánsok DNS-kötő aktivitásának helyreállítása.
7. ábra: Az ScFv421 kifejezése H1299 sejtekben.
8. ábra: A H273 mutáns transzkripciós aktivitásának helyreállítása H358 sejtvonalban.
9. ábra: Az endogén H273 mutáns transzkripciós aktivitásának helyreállítása HT29 sejtvonalban.
Példák
1. példa
11D3 antitestek előállítása és szűrése
A példa specifikus p53 elleni monoklonális antitestek előállítását, kinyerését és szelekcióját ismerteti, melyek képesek a mutáns p53-formák DNS-kötő funkcióját aktiválni.
1.1. Egerek immunizálásakor alkalmazott fehérjék kinyerése és a hibridómák szűrése A vad p53 fehérjét és tumoros sejtekben gyakran előforduló, a vad p53 mutációinak megfelelő p53 H273, p53 W248, p53 G281 fehérjéket termeltünk rekombináns bakulovírussal fertőzött Spodoptera frugipedra Sf9 rovarsejtekben, és a fehérjéket tisztítottuk agarózgélre kapcsolt PAb421 poliklonális antitesttel, affinitáskromatográfiával [Leveillard et al., EMBO J. 15, 1615-1623 (1996)]. A vad p53 fehérje 1-320. és 73-321. fragmentumainak megfelelő fehérjéket szintén termeltettük rekombináns bakulovírussal fertőzött Spodoptera frugipedra Sf9 rovarsejtekben, az Invitrogen előírásait követve. A BlueBaclll transzfer plazmidba beépített komplementer DNS-eket a klasszikus rekombináns DNS technikákkal állítottuk elő, amelyeket például Sambrook és munkatársai írtak le [Sambrook, Fritsch & Maniatis: Molecular cloning, a laboratory manual, 2nd edition, Ed. Cold Spring Harbor Laboratory, (1989)].
1.2. A hibridómák előállítása és szűrése
Egereket immunizáltunk a három korábban leírt p53 mutáns fehérje ekvimoláris mennyiségét tartalmazó eleggyel, és a hibridómákat a Harlow és Lane által leírt eljárást követve kaptuk meg [Harlow & Lane: Antibodies, a laboratory manual, Ed. Cold Spring Harbor Laboratory, (1988)]. A korábban leírt p53 mutánsok elleni monoklonális antitesteket termelő hibridómák szelekcióját a hibridómák tápközegébe termelt antitestek megkötésével végeztük 96 lyukas PVC-tenyésztőlemezen, amelynek lyukaiba előzőleg a korábban leírt három p53 mutáns fehérje ekvimoláris mennyiségeit tartalmazó elegyből 1 mikrogrammot immobilizáltunk a Harlow és Lane által leírt eljárást követve [Harlow & Lane: Antibodies, a laboratory manual, Ed. Cold Spring Harbor Laboratory, (1988)]. Ez az első szűrés lehetővé tette 317 pozitív hibridóma kiválasztását. Kéthetes hibridómaamplifikálás után a felszaporított hibridómák felülúszóját először a korábban említett antitestmegkötési módszerrel (1. módszer) újra értékeltük, majd három azonos szűrési módszer alkalmazásával osztályoztuk a korábban említett elv alapján, azzal a kivétellel, hogy az immobilizált fehérjék különbözők voltak: a lyukakba vagy a tisztított p53 fehérjét immobilizáltuk (2. módszer), vagy a vad p53 1-320. fragmentumát termelő Sf9 sejtek fehérjekivonatát (3. módszer), vagy a vad p53 73-393. fragmentumát termelő Sf9 sejtek fehérjekivonatát (4. módszer). A fehérjekivonatokat Sf9 sejtek fagyasztás/olvasztási ciklusok útján foszfátpufferben végzett lízisével, majd a sejttörmelék centrifugálásával kaptuk. A 317 amplifikált hibridóma felülúszóiból 162 nem adott választ az újra elvégzett 1. módszer esetében. A 155 fennmaradó hibridóma mindegyike pozitív volt a 2. módszerrel, ezek közül 33 (A csoport) negatív volt a 3. és 4. módszer esetében, és 115 (B csoport) pozitív a 3. módszerben, de negatív a 4. módszerben, és végül 7 (C csoport) pozitív volt mindkét utóbbi módszer esetében. A B csoport felülúszói olyan felülúszónak felelnek meg, amely olyan antitesteket tartalmaz, melyek epitópja a p53 első 73 aminosavában helyezkedik el. Az e csoportba tartozó 77 felülúszó negatívnak bizonyult a
2. módszerben, amikor előzőleg a p53 első 40 aminosavát tartalmazó szekvenciának megfelelő peptiddel inkubáltuk (1 mg/ml). Az A csoport antitestjeit, a B csoportból a fentebb említett 77 eltávolítása után megmaradó 38 antitestet és a C csoport antitestjeit izotipizáltuk, ami lehetővé tette az IgM-ek eltávolítását. Az eredményeket röviden összefoglaljuk az 1. ábrán.
Ezután 42 antitestet teszteltünk arra vonatkozóan, hogy képesek-e egy p53/DNS komplexen szupershiftet kiváltani. A fehérje/Sepharose oszlopon történt tisztítás után az antitestek mennyiségét meghatároztuk. Gélretardációs kísérleteket végeztünk, 30 ng tisztított vad típusú p53 fehérjét inkubálva a p53 specifikus kötőhe7
HU 226 330 Β1 lyének megfelelő 32P-jelölt DNS-szondával. Ezután a különböző antitestekből 300 ng-ot adtunk hozzá. A komplexeket akrilamidgélen választottuk el.
A 2. ábrán bemutatott eredmények azt mutatják, hogy 27 antitest volt képes szupershiftet kiváltani. Ezek közül 19-et vizsgáltunk úgy, hogy a vad p53 fehérjét a His273 mutánssal helyettesítettük ugyanolyan gélretardációs kísérletekben. A 26. számú antitest erőteljesebb késést mutatott, mint a többi. Ezt az antitestet 11D3-nak neveztük, és a következő kísérletekben használtuk fel.
2. példa
A 421 és a D3M ScFv-k előállítása
Az ScFv-ket hibridómákból kaptuk, a molekuláris biológia klasszikus módszereit alkalmazva, PCR-en alapuló technikákkal, a VH és VL régiókra specifikus degenerált primerek segítségével. A 11D3 antitestből származó ScFv-ét D3M-mel jelöltük. Szekvenciáját a 2. számú szekvencián mutatjuk be. Az ScFv421 szekvenciáját az 1. számú szekvencián mutatjuk be.
3. példa
ScFv expressziós vektorok kialakítása
A példa a találmány szerinti nukleinsavak in vitro vagy in vivő átvitelére alkalmas vektorok kialakítását ismerteti.
3.1. Plazmidvektorok kialakítása
A plazmidvektorok kialakításához két vektortípust alkalmaztunk.
- A DNA Cloning, A practical approach, vol. 2., D, M. Glover (Ed), IRL Press, Oxford, Washington DC (1985) helyen leírt pSV2 vektor. Ez a vektor egy eukarióta expressziós vektor. Az ScFv-ket kódoló nukleinsavakat a vektorba egy HpalEcoRV fragmentum formájában építettük be. így az SV40 vírus enhancer promoterének irányítása alá kerültek. A 2. példában leírt mindegyik szerkezetet beépítettük ebbe a vektorba, hogy különböző in vitro és in vivő rendszerekben vizsgáljuk azokat.
- A pCDNA3 vektor (Invitrogen). Szintén egy eukarióta expressziós vektorról van szó. A találmány szerinti ScFv-ket kódoló nukleinsavak ebben a vektorban a CMV korai promoterének irányítása alá kerültek, A 2, példában leírt mindegyik szerkezetet beépítettük ebbe a vektorba, egy HindlllNotl fragmentum formájában.
3.2. Virális vektorok kialakítása
Egy különleges megvalósítási mód szerint a találmány tárgya a korábbiakban definiált nukleinsavak in vivő átvitelét és expresszióját lehetővé tevő virális vektorok kialakítása és alkalmazása.
Részletesebben az adenovírusokról szólva különböző szerotípusokat jellemeztek, melyek szerkezete és tulajdonságai kissé eltérnek. Ezek közül a találmány keretein belül a humán 2 vagy 5 típusú adenovírusokat (Ad2 vagy Ad5), vagy az állati eredetű adenovírusokat [lásd a WO 94/26914 számon közzétett bejelentést] alkalmazhatjuk. A találmány keretein belül alkalmazható állati eredetű adenovírusok közül a kutya-, szarvasmarha-, egér- (például Mav1) [Beard et al., Virology 75, 81 (1990)], juh-, sertés-, madár- vagy majom- (például SAV) eredetű adenovírusokat említhetjük meg. Az állati eredetű adenovírus előnyösen kutyaadenovírus, még előnyösebben a CAV2 adenovírus (például manhattan vagy A26/61 törzs, ATCC VR-800). A találmány keretein belül előnyösen humán vagy kutya- vagy kevert eredetű adenovírusokat alkalmazunk.
A találmány szerinti hiányos adenovírusok előnyösen az ITR-eket, egy részecskeképződést lehetővé tevő szekvenciát és egy találmány szerinti nukleinsavat tartalmaznak. Előnyösebben a találmány szerinti adenovírus genomjában legalább az E1 régió működésképtelen. Az érintett virális gént működésképtelenné tehetjük bármely szakember számára ismert technikával, például teljes szuppresszióval, szubsztitúcióval, részleges delécióval, vagy egy vagy több bázisnak az érintett génbe vagy génekbe történő beépítésével. Az ilyen módosításokat in vitro (az izolált DNS-en) vagy in situ kaphatjuk, például a géntechnológia módszereivel, vagy mutagén ágensekkel végzett kezeléssel. Más területeket is módosíthatunk, például az E3 [WO 95/02697], E2 [WO 94/28938], E4 [WO 94/28152, WO 94/12649, WO 95/02697, WO 96/22378] és L5 régiót [WO 95/02697], Egy előnyös megvalósítási mód szerint a találmány szerinti adenovírus egy deléciót tartalmaz az E1 és E4 régiókban. Egy másik megvalósítási mód szerint az E1 régióban tartalmaz egy deléciót, ahova az E4 régió és a találmány szerinti nukleinsavszekvenciák be vannak építve [WO 96/13596]. A találmány szerinti vírusokban az E1 régióban lévő deléció előnyösen az Ad5 adenovírus szekvenciáján a 455-3329. nukleotidokig terjed ki.
A találmány szerinti hiányos rekombináns adenovírusokat bármely a szakember számára ismert eljárással előállíthatjuk [Levrero et al., Gene 101, 195 (1991), EP 185 573, Graham, EMBO J. 3, 2917 (1984)]. Részletesen, egy adenovírus és egy többek között a kívánt DNS-szekvenciát hordozó plazmid közötti homológ rekombinációval állíthatók elő. A homológ rekombináció az említett adenovírusnak és plazmidnak egy megfelelő sejtvonalba történő kotranszfekciója után valósul meg. Az alkalmazott sejtvonal előnyösen (i) transzformálható kell legyen az említett elemekkel, és (ii) hordoznia kell a hiányos adenovírus genomjának hiányzó részét komplementálni képes szekvenciákat, előnyösen beépített formában, hogy a rekombináció veszélyét elkerüljük. A sejtvonalra példaképpen említhetjük a 293 humán embrionális vesesejtvonalat [Graham et al., J. Gén. Virol. 36, 59 (1977)], amely például az Ad5 adenovírus genomjának bal részét tartalmazza (12%) genomjába beépített módon, vagy az E1 és E4 funkciókat komplementéin! képes sejtvonalakat, melyeket például a WO 94/26914, WO 95/02697 és WO 96/22378 számon közzétett bejelentésekben írnak le.
Végül a felszaporított adenovírusokat a molekuláris biológia klasszikus módszerei szerint összegyűjtjük és tisztítjuk, amint azt a példákban bemutatjuk.
Ami az adenoasszociált vírusokat (AAV) illeti, viszonylag kis méretű DNS-vírusokról van szó, melyek a fertőzött sejt genomjába stabil és helyspecifikus módon
HU 226 330 Β1 beépülnek. Sejtek széles spektrumát képesek fertőzni anélkül, hogy a sejtek növekedésére, morfológiájára vagy differenciálódására hatással lennének. Másrészt úgy tűnik, nem vesznek részt emberi betegségek kialakításában. Az AAV-k genomját klónozták, szekvenálták és jellemezték. Körülbelül 4700 bázist tartalmaz, és mindkét végén egy körülbelül 145 bázisos inverz ismétlődő régió (ITR) található, amely a vírus replikációs origójaként szolgál. A genom fennmaradó része két alapvető területre osztható, amelyek a részecskeképződésért felelős funkciókat hordozzák: a genom bal része, amely a virális replikációban és a vírusgének expressziójában szerepet játszó rep gént tartalmazza, és a genom jobb része, amely a vírus-burokproteineket kódoló cap gént tartalmazza.
Az AAV-eredetű vektorok alkalmazását gének in vitro és in vivő átvitelére már leírták az irodalomban [lásd például WO 91/18088, WO 93/09239, US 4,797,368, US 5,139,941, EP 488 528]. Ezek az Íratok különböző AAV-eredetű konstrukciókat írnak le, melyekben a rep és/vagy cap gének deletáltak, és azokat egy kívánt gén helyettesíti, valamint a konstrukciók alkalmazását az említett kívánt gén in vitro (sejttenyészetben) vagy in vivő (közvetlenül egy szervezetben) átvitelére. A találmány szerinti hiányos rekombináns AAV-ket egy humán helpervírussal (például egy adenovírussal) fertőzött sejtvonalnak egy, a találmány szerinti kívánt nukleinsavszekvenciát az AAV két inverz ismétlődő területe (ITR) között tartalmazó plazmiddal, és egy, a részecskeképződésért felelős géneket (rep és cap gének) hordozó plazmiddal való kotranszfekciójával állíthatjuk elő. Egy alkalmas sejtvonal például a 293 sejtvonal. A termelt rekombináns AAV-ket azután a klasszikus eljárásokkal tisztítjuk.
Ami a herpesz- és retrovírusokat illeti, rekombináns vektor konstrukciókat nagy számban ismertet az irodalom [lásd például Breakfield et al., New Biologist 3, 203 (1991), EP 453 242, EP 178 220, Bernstein et al., Génét. Eng. 7, 235 (1985), McCormick, BioTechnology 3, 689 (1985) stb.]. Részletesen a retrovírusok integratív vírusok, melyek szelektíven az osztódó sejteket fertőzik. Ezek tehát a rákos alkalmazásokhoz megfelelő vektorok. A retrovírusok genomja alapvetően két LTR-t, egy részecskeképződésért felelős szekvenciát és három kódolóterületet (gag, pol, env) tartalmaz. A retrovíruseredetű rekombináns vektorokban a gag, pol és env géneket általában teljesen vagy részben deletálják, és egy kívánt heterológ nukleinsavszekvenciával helyettesítik. A vektorokat különböző típusú retrovírusokból kiindulva hozhatjuk létre, például a MoMuLV („murine moloney leukémia vírus, melyet MomLV-nek is neveznek), az MSV („murine moloney sarcoma vírus”), a HaSV („harvey sarcoma vírus”), az SNV („spleen necrosis vírus), az RSV („rous sarcoma vírus”) vagy a Friend-vírus.
A találmány szerinti rekombináns retrovírusok előállításához, melyek egy találmány szerinti nukleinsavszekvenciát tartalmaznak, általában egy olyan plazmidot szerkesztünk, amely többek között az LTR-eket, a részecskeképződésért felelős szekvenciát és az említett szekvenciát tartalmazza, majd ezt alkalmazzuk egy úgynevezett részecskeképző sejtvonal transzfektálására, amely képes transz-helyzetben szolgáltatni a plazmidból hiányzó retrovirális funkciókat. A részecskeképző sejtvonal tehát általában a gag, pol és env géneket képes kifejezni. Ilyen részecskeképző sejtvonalakat az irodalomban leírtak, például a PA317 sejtvonal [US 4,861,719], a PsiCRIP sejtvonal [WO 90/02806] és a GP+envAm-12 sejtvonal [WO 89/07150]. Másrészről a rekombináns retrovírusok tartalmazhatnak módosításokat az LTR-ek szintjén a transzkripciós aktivitás megszüntetésére, valamint tartalmazhatnak meghosszabbított részecskeképző szekvenciákat, amelyek a gag gén egy részét is tartalmazzák [Bender et al., J. Virol. 61, 1639 (1987)]. A termelt retrovírusokat azután a klasszikus technikákkal tisztítjuk.
A találmány megvalósításához különösen előnyös, ha hiányos rekombináns adenovírust vagy retrovírust alkalmazunk. Ezek a vektorok különösen előnyös tulajdonságokkal rendelkeznek gének tumoros sejtekbe történő átvitele szempontjából.
3.3. Kémiai hordozók
A kifejlesztett szintetikus hordozók közül a polilizin típusú kationos polimerek, (LKLK)n, (LKKL)n [WO 95/21931], poli(etilén-imin) [WO 96/02655] és a DEAE dextrán, vagy a kationos lipidek vagy lipofektánsok alkalmazását részesítjük előnyben a találmány keretein belül. Rendelkeznek azzal a képességgel, hogy elősegítik a DNS tömörítését és a sejtmembránhoz kötődését. Az utóbbiak közül a lipopoliaminokat (lipofektamin, transzfektam) [WO 96/17823] és a különböző kationos vagy semleges lipideket (DOTMA, DOGS, DOPE stb.), valamint a nukleáris eredetű peptideket [WO 96/25508] említhetjük meg. Azonkívül a közelmúltban kifejlesztették a célzott, receptor által közvetített transzfekció elméletét, amely szerint a DNS kationos polimereknek köszönhetően összetömörödik, miközben a kationos polimer és a megcélzott sejttípus felszínén jelen levő membránreceptor liganduma közötti kémiai kötésnek köszönhetően a membránhoz kötődik. Igy a transzferrin-, inzulinreceptor vagy a hepatociták aszialoglikoproteinjeinek receptorának megcélzását írták le. Egy ilyen kémiai hordozót alkalmazó találmány szerinti készítmény előállítását bármely a szakember számára ismert eljárással, általában egyszerűen a különböző összetevők érintkeztetésével végezhetjük.
4. példa
Az ScFv-k felismerik a p53-at
AZ ScFv-k kapcsolódását a p53-hoz ELISA teszttel igazoltuk.
Egy myc tagot fuzionáltattunk az ScFv-kkel, hogy detektálásukat lehetővé tegyük. Az ScFv421-et, HD3-at (D3M) és egy kontroll ScFv-t (anti-CD3) az azokat termelő baktériumok periplazmatikus teréből kivontunk.
Tisztított p53-mal bevont ELISA lemezeket inkubáltunk 11D3 IgG, 421 IgG, biotinezett poliklonális antip53 szérum, 11D3 ScFv, ScFv421 és anti-CD3 ScFv különböző hígításaival.
Ezután a két IgG-t egy második, alkalikus foszfatázzal kapcsolt anti-IgG antitesttel mutattuk ki. A biotine9
HU 226 330 Β1 zett szérumot 9E10 anti-myc antitesttel, majd alkalikus foszfatázzal kapcsolt anti-IgG antitesttel mutattuk ki. Az alkalikus foszfatáz aktivitást kolorimetriásan mértük, ezt a 4. ábrán mutatjuk be, ami azt jelzi, hogy a két tisztított IgG, a poliklonális szérum és a 421 és 11D3 ScFv-k felismerik a p53-at, míg az anti-CD3 ScFv inaktív.
5. példa
Az ScFv-k képesek szupershiftet kiváltani a vad p53-nál
Az ScFv-k azon tulajdonságát, hogy képesek aktiválni a vad p53 DNS-kötő funkcióját, gélretardációs vizsgálatokkal teszteltük.
Egy specifikus p53 kötőhellyel rendelkező kétszálú DNS-t 32P-tal jelöltünk, majd tisztított vad p53-mal, és különböző tisztított antitesttel vagy bakteriális periplazmába termelődött ScFv-vel inkubáltuk. A komplexeket akrilamidgél-elektroforézissel választottuk el.
A kapott eredményeket az 5. ábrán mutatjuk be.
A DNS/p53 komplex az „Alap” sávnál figyelhető meg. A HR231, pAb421 és 11D3 antitestek képesek késést kiváltani (szupershift), és megnövelni a DNS/p53 komplex mennyiségét.
A 421 és D3M ScFv-k szintén képesek szupershiftet kiváltani, míg egy anti-ras kontroll ScFv (Y28) csendes maradt. Az ScFv421 a D3M ScFv-vel ellentétben kiváltja a p53/DNS komplex mennyiségének növekedését is.
6. példa
Az ScFv-k képesek egy p53 mutáns DNS-kötő funkcióját helyreállítani
Ezzel analóg módon vizsgáltuk az ScFv-ket arra vonatkozóan is, hogy képesek-e helyreállítani az inaktív Trp248 mutáns DNS-kötő funkcióját. A kapott eredményeket a 6. ábrán mutatjuk be.
Ezek azt mutatják, hogy a két ScFv kiváltja a p53/DNS komplexnek megfelelő retardált sáv megjelenését.
7. példa
Az ScFv-k helyesen fejeződnek ki tumoros sejtekben
Az ScFv-k expresszióját egy expressziós vektor 5 (SV40 promoter) H1299 tumoros sejtekbe történő átmeneti transzfekciójával igazoltuk. Részletesebben a nukleinsavakat pSV2 típusú plazmidvektor formájában adtuk be (3. példa), egy kationos lipid, a lipofektamin jelenlétében.
A kapott eredményeket a 7. ábrán mutatjuk be. Összkivonattal végzett Western-blottal egy fő sávot figyeltünk meg, amely 30 kD körül futott, amely a várt méretnek felel meg, és alátámasztja, hogy a molekulák tumoros sejtekben jelentős mértékben kifejeződnek.
8. példa
Az ScFv-k képesek részlegesen helyreállítani a His273 mutánsok transzaktivátor funkcióját Az ScFv-k működőképességét tumoros sejtekben a p53 mutáns formáinak hiányos transzaktivátor funkcióján a következő módon mértük:
Átmeneti transzfekciót végeztünk H358 vagy H1299 sejtvonalakban (mindkettő p53 deletált), vagy a HT29 sejtvonalban (hordozza a His273 p53 mutánst).
A transzfekciók a vad típusú p53-at, vagy a H273 vagy His175 mutánst, a két ScFv-t kifejező vektorokat, és egy riporterplazmidot kifejező vektorokat vezettek be, amely utóbbi a CAT (kloramfenikol acetil-transzferáz) gént tartalmazta egy p53-függő promoter irányítása alatt. A 48 órával a transzfekció után mért CAT-aktivitás a p53 transzaktivátor funkcióját tükrözi.
A 8. ábra eredményei azt jelzik, hogy a H358 sejtvonalban a két ScFv képes szignifikánsan újra aktiválni a His273 mutáns transzkripciós aktivitását, és azonos 35 eredményeket figyeltünk meg a H1299 sejtvonalban is.
Ezenfelül a HT29 sejtvonalban a két ScFv képes volt megnövelni a His273 mutáns endogén transzkripciós aktivitását is (9. ábra).
SZEKVENCIAJEGYZÉK
1. számú szekvencia:
Az ScFv421 nukleotid- és peptidszekvenciája
| 1/1 | 31/11 | ||||||||||||||||
| CAG GTG | CAG | CTG | CAG | CAG | TCT | GGG | GCA | GAG | CTT GTG | AGG | TCA | GGG | GCC | TCA | GTC | AAG | TTG |
| gin val | gin | leu | gin | gin | ser | giy | ala | glu | leu val | arg | ser | giy | ala | ser | val | lys | leu |
| 61/21 | 91/31 | ||||||||||||||||
| TCC TGC | ACA | GCT | TCT | GGC | TTC | AAC | ATT | AAA | GAC TAC | TAT | ATG | CAC | TGG | GTG | AAG | CAG | AGG |
| ser cys | thr | ala | ser | gly | phe | asn | ile | lys | asp tyr | tyr | met | his | trp | val | lys | gin | arg |
| 121/41 | 151/51 | ||||||||||||||||
| CCT GAA | CAG | GGC | CTG | GAG | TGG | ATT | GGA | TGG | ATT GAT | CCT | GAG | AAT | GGT | GAT | ACT | GAA | TAT |
| pro glu | gin | giy | leu | glu | trp | ile | giy | trp | ile asp | pro | glu | asn | giy | asp | thr | glu | tyr |
| 181/61 | 211/71 | ||||||||||||||||
| GCC CCG | AAG | TTC | CAG | GGC | AAG | GCC | ACT | ATG | ACT GCA | GAC | ACA | TCC | TCC | AAT | ACA | GCC | TAC |
| ala pro | lys | phe | gin | giy | lys | ala | thr | met | thr ala | asp | thr | ser | ser | asn | thr | ala | tyr |
| 241/81 | 271/91 | ||||||||||||||||
| CTG CAG | CTC | AGC | AGC | CTG | GCA | TCT | GAG | GAC | ACT GCC | GTC | TAT | TAT | TGT | AAT | TTT | TAC | GGG |
| leu gin | leu | ser | ser | leu | ala | ser | glu | asp | thr ala | val | tyr | tyr | cys | asn | ~ihe tyr gly | ||
| 301/101 | 331/111 | ||||||||||||||||
| GAT GCT | TTG | GAC | TAT | TGG | GGC | CAA | GGG | ACC | ACG GTC | ACC | GTC | TCC | TCA | GGT | GGA | GGC | GGT |
| asp ala | leu | asp | tyr | trp | gly | gin | giy | thr | thr val | thr | val | ser | ser | gly | giy giy gly |
HU 226 330 Β1
361/121 391/131
| TCA | GGC | GGA GGT | GGC | TCT | GGC | GGT | GGC GGA TCG GAT | GTT | TTG ATG ACC | CAA | ACT | CCA | CTC | |||||
| ser gly 421/141 | gly | gly | gly | ser | gly | gly | giy | giy | ser asp 451/151 | val | leu | met | thr | gin | thr | pro | leu | |
| ACT | TTG | TCG | GTT | ACC | ATT | GGA | CAA | CCA | GCC | TCC ATC | TCT | TGC | AAG | TCA | AGT | CAG | AGC | CTC |
| thr leu 481/161 | ser | val | thr | ile | giy | gin | pro | ala | ser ile 511/171 | ser | cys | lys | ser | ser | gin | ser | leu | |
| TTG | GAT | AGT | GAT | GGA | AAG | ACA | TAT | TTG | AAT | TGG TTG | TTA | CAG | AGG | CCA | GGC | CAG | TCT | CCA |
| leu asp 541/181 | ser | asp | giy | lys | thr | tyr | leu | asn | trp leu 571/191 | leu | gin | arg | pro | giy | gin | ser | pro | |
| AAG | CGC | CTA | ATC | TAT | CTG | GTG | TCT | AAA | CTG | GAC TCT | GGA | GTC | CCT | GAC | AGG | TTC | ACT | GGC |
| lys arg 601/201 | leu | ile | tyr | leu | val | ser | lys | leu | asp ser 631/211 | gly | val | pro | asp | arg | phe | thr | gly | |
| AGT | GGA | TCA | GGG | ACA | GAT | TTC | ACA | CTG | AAA | ATC AAC | AGA | GTG | GAG | GCT | GAG | GAT | TTG | GGA |
| ser gly 661/221 | ser | giy | thr | asp | phe | thr | leu | lys | ile asn 691/231 | arg | val | glu | ala | glu | asp | leu | giy | |
| GTT | TAT | TAT | TGC | TGG | CAA | GGT | ACA | CAT | TCT | CCG CTC | ACG | TTC | GGT | GCT | GGC | ACC | AAG | CTG |
| val | tyr | tyr | cys | trp | gin | giy | thr | his | ser | pro leu | thr | phe | gly | ala | gly | thr | lys | leu |
721/241
GAA ATC AAA glu ile lys
2. számú szekvencia:
A D3M 11D3 ScFv nukleotid- és peptidszekvenciája
| 1/1 | 31/11 |
| CAG GTC | AAG CTG CAG GAG TCA GGG GCA GAA CTT GTG AGG TCA GGG GCC TCA GTC AAT TTG |
| gin val | lys leu gin glu ser gly ala glu leu val arg ser gly ala ser val asn leu |
| 61/21 | 91/31 |
| TCC TGC | ACA GCT TCT GGC TTC AAC ATT MA GAC TAC TAT ATG CAC TGG CTG AAA CAG AGG |
| ser cys | thr ala ser gly phe asn ile lys asp tvr tvr met his trp val lys gin arg |
| 121/41 | 151/51 |
| CCT GAA | GAG GGC CTG GAG TGG ATT GGA TAT ATT GAT CCT GAG AGT GGT GAA ACT GAA TAT |
| pro glu | glu gly leu glu trp ile gly tyr ile asp pro glu ser gly glu thr glu tvr |
| 181/61 | 211/71 |
| GCC CCG | AAC TTC CAG GGC AAG GCC ACT GTG ACT GCA GAC ACA TCC TCC AAC ACA GCC TAC |
| ala pro | asn phe gin gly lys ala thr val thr ala asp thr ser ser asn thr ala tyr |
| 241/81 | 271/91 |
| CTG CAC | CTG AGC AGC CTG ACA TCT GAG GAC ACA ACC GTC TAT TAC TCT AAT GCA CTC ATC |
| leu his | leu ser ser leu thr ser glu asp thr thr val tyr tyr cys asn ala val ile |
| 301/101 | 331/111 |
| TAC TAT | GAA TAC GAC GGC TAT GCT TTG GAC TAC TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC |
| tvr tvr | glu tvr asp glv tvr ala leu asp tvr trp gly gin glv thr thr val thr val |
| 361/121 | 391/131 |
| TCC TCA | GGT GGA GGC GGT TCA GGC GGA GGT GGC TCT GGC GGT GGC GGA TCG GAC ATT GAG |
| ser ser | gly gly gly gly ser gly gly gly gly ser gly gly gly gly ser asp ile glu |
| 421/141 | 451/151 |
| CTC ACC | CAG TCT CCA TCT TCC CTG GCT GTG TCA GCA GGA GAG AAG GTC GCT ATG AGC TGC |
| leu thr | gin ser pro ser ser leu ala val ser ala gly glu lys val ala met ser cys |
| 481/161 | 511/171 |
| AAA TCC | ACT CAG ACT CTG TTC AAC ACT AGA ACC CGA AAG AAT TAC TTG GCT TGG TAT CAG |
| lvs ser | ser gin ser leu phe asn ser arg thr arg lvs asn tvr leu ala trp tvr gin |
| 541/181 | 571/191 |
| CAG AAA | CCA GGG CAG TCT CCT AAA GTG CTG ATC TAC TGG GCA TCC ACT AGG GAA TCT GGA |
| gin lys | pro gly gin ser pro lys val leu ile tyr trp ala ser thr arg glu ser qly |
| 601/201 | 631/211 |
| CTC CCT | GAT CGC TTC ACA GGC ACT GGA TCT GGG ACA GAT TTC ACT CTC ACC ATC AGC ACT |
| val pro | asp arg phe thr gly ser gly ser gly thr asp phe thr leu thr ile ser ser |
| 661/221 | 691/231 |
| GTG CAG | GCT GAA GAC CTG GCA GTT TAT TAC TGC AAG CAA TCT TAT AAT CTA CCG ACG TTC |
| val gin | ala glu asp leu ala val tyr tyr cys lys gin ser tvr asn leu pro thr phe |
| 721/241 | |
| GGC GGG | GGC ACC AAG CTG GAA ATC AAA |
| giy giy | gly thr lys leu glu ile lys |
Claims (18)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Egy egyláncú antitest alkalmazása, amely képes specifikusan kötődni a p53 C-terminális területén a 320-393. maradékok között levő epitóphoz, olyan rákok kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására, amelyekben egy mutáns p53 fehérje részt vesz.
- 2. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy az egyláncú antitest az 1. számú szekvenciával rendelkező ScFv421 vagy a 2. számú szekvenciával rendelkező 11D3.
- 3. Egy nukleinsav alkalmazása, amely egy, a p53 C-terminális területén a 320-393. maradékok között jelen levő epitóphoz specifikusan kötődni képes egyláncú antitestet kódol, olyan rákok kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására, amelyekben egy mutáns p53 fehérje részt vesz.
- 4. A 3. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a nukleinsav az 1. számú szekvenciával rendelkező ScFv421 egyláncú antitestet vagy a 2. számú szekvenciával rendelkező 11D3 egyláncú antitestet kódolja.
- 5. A 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a nukleinsav egy vektor része.
- 6. Az 5. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a vektor egy virális vektor.
- 7. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a vektor egy hiányos rekombináns adenovírus.
- 8. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a vektor egy hiányos rekombináns retrovírus.
- 9. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a vektor egy hiányos rekombináns AAV.
- 10. A 6. igénypont szerinti alkalmazása, azzal jellemezve, hogy a vektor egy hiányos rekombináns HSV.
- 11. Az 1-10. igénypontok egyike szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a rák tüdőrák, vastagbélrák, fej- és nyakrák, májrák vagy agytumor.
- 12. Az 1-3. igénypontok egyike szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a mutáns p53 fehérje p53H273, p53W248 vagy p53G281 fehérje.
- 13. A 2. számú szekvenciában bemutatott 11D3 molekula.
- 14. Nukleinsav, amely egy 13. igénypont szerinti molekulát kódol.
- 15. A 14. igénypont szerinti nukleinsav, amely a 2. számú szekvenciával jellemzett.
- 16. Készítmény, amely egy 15. igénypont szerinti nukleinsavat tartalmaz.
- 17. Készítmény, amely egy 13. igénypont szerinti molekulát tartalmaz.
- 18. Gyógyszerkészítmény rák kezelésére, amely egy 14. igénypont szerinti nukleinsavat és egy gyógyszerészetileg elfogadható hordozót tartalmaz.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9613176A FR2755144B1 (fr) | 1996-10-29 | 1996-10-29 | Fragments d'anticorps a chaine unique anti-p53 et utilisation |
| PCT/FR1997/001921 WO1998018825A1 (fr) | 1996-10-29 | 1997-10-27 | Fragments d'anticorps a chaine unique anti-p53 et utilisations |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP9904199A1 HUP9904199A1 (hu) | 2000-04-28 |
| HUP9904199A3 HUP9904199A3 (en) | 2000-09-28 |
| HU226330B1 true HU226330B1 (en) | 2008-09-29 |
Family
ID=9497134
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9904199A HU226330B1 (en) | 1996-10-29 | 1997-10-27 | Anti-p53 single-chain antibody fragments and their uses to produce pharmaceutical compositions |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6852509B1 (hu) |
| EP (1) | EP0941252B1 (hu) |
| JP (1) | JP4371178B2 (hu) |
| KR (1) | KR100874789B1 (hu) |
| AT (1) | ATE380198T1 (hu) |
| AU (1) | AU745530B2 (hu) |
| BR (1) | BR9712575A (hu) |
| CA (1) | CA2268865C (hu) |
| CZ (1) | CZ300526B6 (hu) |
| DE (1) | DE69738352T2 (hu) |
| DK (1) | DK0941252T3 (hu) |
| ES (1) | ES2297853T3 (hu) |
| FR (1) | FR2755144B1 (hu) |
| HU (1) | HU226330B1 (hu) |
| IL (2) | IL129476A0 (hu) |
| NO (1) | NO326452B1 (hu) |
| PT (1) | PT941252E (hu) |
| SI (1) | SI0941252T1 (hu) |
| SK (1) | SK286978B6 (hu) |
| WO (1) | WO1998018825A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA979738B (hu) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL121041A0 (en) * | 1997-06-09 | 1997-11-20 | Yeda Res & Dev | Immunogenic compositions for induction of anti-tumor immunity |
| US7199809B1 (en) | 1998-10-19 | 2007-04-03 | Symyx Technologies, Inc. | Graphic design of combinatorial material libraries |
| AU769679B2 (en) * | 1999-03-19 | 2004-01-29 | St Vincent's Hospital Sydney Limited | Anti-p53 antibodies |
| AUPP932199A0 (en) * | 1999-03-19 | 1999-04-15 | St Vincent's Hospital Sydney Limited | Anti-p53 antibodies |
| DE19962583A1 (de) * | 1999-12-23 | 2001-06-28 | Mueller Hermelink Hans Konrad | Antikörper gegen Plasmazellen |
| US6630584B1 (en) * | 2000-03-16 | 2003-10-07 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Single chain antibody against mutant p53 |
| WO2005061007A1 (ja) * | 2003-12-24 | 2005-07-07 | St. Marianna University School Of Medicine | 癌の抑制方法 |
| JPWO2005061001A1 (ja) * | 2003-12-24 | 2007-07-12 | 株式会社ロコモジェン | 癌の抑制方法 |
| GB0420771D0 (en) * | 2004-09-17 | 2004-10-20 | Randox Lab Ltd | Antibody |
| DE602006007967D1 (de) * | 2005-03-25 | 2009-09-03 | Univ Ramot | Gegen das gemeinsame epitop von mutierten p53 gerichtete humane synthetische einzelkettenantikörper und anwendungen davon |
| WO2007028117A2 (en) * | 2005-09-02 | 2007-03-08 | New England Medical Center Hospitals, Inc. | P8 as a marker for heart failure |
| IL262726B2 (en) * | 2016-05-02 | 2024-07-01 | Prothena Biosciences Ltd | Antibodies that recognize tau |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9224784D0 (en) * | 1992-11-26 | 1993-01-13 | Univ Dundee | Cellular protein |
| FR2732348B1 (fr) * | 1995-03-31 | 1997-04-30 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Systeme d'expression conditionnel |
| FR2736915B1 (fr) | 1995-07-19 | 1997-08-22 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Variants de la proteine p53 et utilisations therapeutiques |
-
1996
- 1996-10-29 FR FR9613176A patent/FR2755144B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
1997
- 1997-10-27 EP EP97912262A patent/EP0941252B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1997-10-27 HU HU9904199A patent/HU226330B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1997-10-27 US US09/297,181 patent/US6852509B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-10-27 AT AT97912262T patent/ATE380198T1/de active
- 1997-10-27 PT PT97912262T patent/PT941252E/pt unknown
- 1997-10-27 SK SK558-99A patent/SK286978B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1997-10-27 SI SI9730778T patent/SI0941252T1/sl unknown
- 1997-10-27 BR BR9712575-0A patent/BR9712575A/pt not_active Application Discontinuation
- 1997-10-27 WO PCT/FR1997/001921 patent/WO1998018825A1/fr active IP Right Grant
- 1997-10-27 KR KR1019997003679A patent/KR100874789B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1997-10-27 CA CA2268865A patent/CA2268865C/fr not_active Expired - Fee Related
- 1997-10-27 ES ES97912262T patent/ES2297853T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-10-27 JP JP52011998A patent/JP4371178B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1997-10-27 IL IL12947697A patent/IL129476A0/xx unknown
- 1997-10-27 AU AU49520/97A patent/AU745530B2/en not_active Ceased
- 1997-10-27 DE DE69738352T patent/DE69738352T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-10-27 CZ CZ0145599A patent/CZ300526B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-10-27 DK DK97912262T patent/DK0941252T3/da active
- 1997-10-29 ZA ZA9709738A patent/ZA979738B/xx unknown
-
1999
- 1999-04-13 NO NO19991729A patent/NO326452B1/no not_active IP Right Cessation
- 1999-04-15 IL IL129476A patent/IL129476A/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP4371178B2 (ja) | 2009-11-25 |
| DE69738352D1 (de) | 2008-01-17 |
| EP0941252B1 (fr) | 2007-12-05 |
| DK0941252T3 (da) | 2008-03-31 |
| ZA979738B (en) | 1998-05-22 |
| IL129476A0 (en) | 2000-02-29 |
| PT941252E (pt) | 2008-03-07 |
| KR20000052845A (ko) | 2000-08-25 |
| JP2001502553A (ja) | 2001-02-27 |
| IL129476A (en) | 2010-05-17 |
| NO991729L (no) | 1999-04-13 |
| SI0941252T1 (sl) | 2008-04-30 |
| AU745530B2 (en) | 2002-03-21 |
| CA2268865C (fr) | 2011-01-04 |
| NO991729D0 (no) | 1999-04-13 |
| BR9712575A (pt) | 1999-10-19 |
| ATE380198T1 (de) | 2007-12-15 |
| HUP9904199A1 (hu) | 2000-04-28 |
| DE69738352T2 (de) | 2008-11-13 |
| FR2755144A1 (fr) | 1998-04-30 |
| CA2268865A1 (fr) | 1998-05-07 |
| US6852509B1 (en) | 2005-02-08 |
| KR100874789B1 (ko) | 2008-12-18 |
| AU4952097A (en) | 1998-05-22 |
| SK286978B6 (sk) | 2009-08-06 |
| WO1998018825A1 (fr) | 1998-05-07 |
| FR2755144B1 (fr) | 1998-11-27 |
| HUP9904199A3 (en) | 2000-09-28 |
| NO326452B1 (no) | 2008-12-08 |
| ES2297853T3 (es) | 2008-05-01 |
| SK55899A3 (en) | 2000-06-12 |
| CZ300526B6 (cs) | 2009-06-10 |
| EP0941252A1 (fr) | 1999-09-15 |
| CZ145599A3 (cs) | 1999-08-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6933373B2 (en) | P53 protein variants and therapeutic uses thereof | |
| US20030060432A1 (en) | Antagonists of the oncogenic activity of the protein mdm2, and use thereof in the treatment of cancers | |
| HU226330B1 (en) | Anti-p53 single-chain antibody fragments and their uses to produce pharmaceutical compositions | |
| CZ291533B6 (cs) | Deriváty proteinu p62, nukleové kyseliny kódující tyto deriváty a farmaceutické kompozice, které je obsahují | |
| MXPA97008877A (en) | P62, its variants, the nucleic acid sequences that code them, and its use in anti-cancer gene therapy | |
| JP2003052387A (ja) | 線維芽細胞増殖因子１３ |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FH91 | Appointment of a representative |
Free format text: FORMER REPRESENTATIVE(S): DR. LANG TIVADARNE, S.B.G. & K. SZABADALMI UEGYVIVOEI IRODA, HU Representative=s name: DANUBIA SZABADALMI ES JOGI IRODA KFT., HU |
|
| FH92 | Termination of representative |
Representative=s name: DR. LANG TIVADARNE, S.B.G. & K. SZABADALMI UEG, HU |
|
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |