HU220113B - Sertések reproduktív és légzőszervi tünetegyüttese elleni vakcina, eljárás előállítására és alkalmazása - Google Patents
Sertések reproduktív és légzőszervi tünetegyüttese elleni vakcina, eljárás előállítására és alkalmazása Download PDFInfo
- Publication number
- HU220113B HU220113B HU9401056A HU9401056A HU220113B HU 220113 B HU220113 B HU 220113B HU 9401056 A HU9401056 A HU 9401056A HU 9401056 A HU9401056 A HU 9401056A HU 220113 B HU220113 B HU 220113B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- virus
- prrs
- antigen
- prrs virus
- vaccine
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 31
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 24
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 title description 4
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 title description 3
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 title description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 135
- 208000005342 Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Diseases 0.000 claims description 107
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 44
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 37
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 37
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 33
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 20
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 16
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 10
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 9
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 6
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 6
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 6
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 claims description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 5
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 claims description 4
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 239000002356 single layer Substances 0.000 claims description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 4
- ZAKOWWREFLAJOT-CEFNRUSXSA-N D-alpha-tocopherylacetate Chemical compound CC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C ZAKOWWREFLAJOT-CEFNRUSXSA-N 0.000 claims description 3
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 claims description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims description 3
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 3
- ZAKOWWREFLAJOT-UHFFFAOYSA-N d-alpha-Tocopheryl acetate Natural products CC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C ZAKOWWREFLAJOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 3
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 claims description 3
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 claims description 3
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 claims description 3
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 3
- 229940042585 tocopherol acetate Drugs 0.000 claims description 3
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical compound C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 2
- LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloroethyl)-n-nitrosomorpholine-4-carboxamide Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)N1CCOCC1 LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 11
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 2
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 claims 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- 229940124590 live attenuated vaccine Drugs 0.000 claims 1
- 229940023012 live-attenuated vaccine Drugs 0.000 claims 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 39
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 31
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 14
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 13
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 12
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 11
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 10
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 10
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 6
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000010530 Virus Neutralization Effects 0.000 description 3
- 210000001132 alveolar macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 244000309466 calf Species 0.000 description 3
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 3
- 101150072261 large T gene Proteins 0.000 description 3
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 3
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 3
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010000234 Abortion spontaneous Diseases 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 2
- 241000702619 Porcine parvovirus Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000012606 in vitro cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 208000015994 miscarriage Diseases 0.000 description 2
- -1 octyltrimethylammonium salt Chemical class 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 235000008476 powdered milk Nutrition 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 2
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 208000000995 spontaneous abortion Diseases 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 201000010740 swine influenza Diseases 0.000 description 2
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PSBDWGZCVUAZQS-UHFFFAOYSA-N (dimethylsulfonio)acetate Chemical compound C[S+](C)CC([O-])=O PSBDWGZCVUAZQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000606748 Actinobacillus pleuropneumoniae Species 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 241000588779 Bordetella bronchiseptica Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 1
- 102000007644 Colony-Stimulating Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000218218 Ficus <angiosperm> Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 241000606856 Pasteurella multocida Species 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000725681 Swine influenza virus Species 0.000 description 1
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 229910000316 alkaline earth metal phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 1
- 230000004596 appetite loss Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000035850 clinical syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000000151 deposition Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- WBZKQQHYRPRKNJ-UHFFFAOYSA-L disulfite Chemical compound [O-]S(=O)S([O-])(=O)=O WBZKQQHYRPRKNJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000001492 haemagglutinating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 208000019017 loss of appetite Diseases 0.000 description 1
- 235000021266 loss of appetite Nutrition 0.000 description 1
- 238000000464 low-speed centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001071 malnutrition Effects 0.000 description 1
- 235000000824 malnutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 230000002025 microglial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 208000015380 nutritional deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical class O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002741 palatine tonsil Anatomy 0.000 description 1
- 230000032696 parturition Effects 0.000 description 1
- 229940051027 pasteurella multocida Drugs 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 210000004206 promonocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 208000009305 pseudorabies Diseases 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M sodium deoxycholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229940117986 sulfobetaine Drugs 0.000 description 1
- 238000012956 testing procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/10011—Arteriviridae
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/10011—Arteriviridae
- C12N2770/10034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
A találmány sertések reproduktív és légzőszervi tünetegyüttese (PRRS) ellen védettséget létrehozó, a CNCM 1-1140 számon letétbe helyezett vírust tartalmazó vakcinával, egy új vírustípust tartalmazó biológiai készítménnyel, a találmány szerinti új vírustípushoz tartozó vírusokból származó vírusantigén előállítására szolgáló eljárással, PRRS-vírus elleni ellenanyagok kimutatására szolgáló eljárással, valamint PRRS-vírusantigén detektálására szolgáló eljárással foglalkozik.
1990. második fele óta több mint 5000 észak-európai sertéstelepet támadott meg egy új betegség. Ezt a betegséget ma sertések reproduktív légzőszervi tünetegyüttesének (PRRS) nevezik. Először 1990. decemberében azonosították Németországban, majd a helyzet 1991. elején egyre kritikusabbá vált. 1991. januáijában és februárjában a betegség átteijedt Hollandiára és Belgiumra. Spanyolországból is jelentették járványok kitörését.
Megegyeznek a vélemények arra nézve, hogy a betegség terjedése az Aujeszky-féle betegséggel összehasonlítható mértékű, vagy súlyosabb anyagi károkat okozhat.
A kocáknál jelentkező alapvető klinikai tünetek az étvágytalanság, valamint a vemhesség 110. napjáig bekövetkező késői vetélés. A malacoknál magas a halva született, gyenge malacok előfordulási gyakorisága, továbbá légzőszervi problémák figyelhetők meg. A hízóknál krónikus tüdőgyulladás és magas elhullási arány fordul elő.
A sertések reproduktív légzőszervi tünetegyüttese ellen védettséget létrehozó vakcina kifejlesztése, vagy sertésekből a fertőzés kimutatására alkalmas diagnosztikai eljárás kidolgozása szükségessé teszi a betegség kórokozójának azonosítását. Mostanáig azonban a kórokozónak csak néhány tulajdonságát írták le, például vírusos természetét, hemagglutináló tulajdonságát, ülepedési sűrűségét és in vitro szaporodási jellemzőit [Wensvoort G. és munkatársai, Vet. Quarterly, 13, 121-130, (1991)].
A találmány kiterjed a kórokozó elleni vakcina, valamint diagnosztikai vizsgálóeljárás előállításához szükséges, a PRRS új kórokozóját megfelelően és egyértelműen azonosító sajátságok ismertetésére.
Egy új, PRRS-vírusnak elnevezett vírustípust azonosítottunk, amely felelős az előbbi betegség kialakulásáért, az új vírust 1-1140 nyilvántartási szám alatt letétbe helyeztük a CNCM intézetében.
A találmány szerinti vírus klinikai PRRS-esetekből származó tüdőszövetből izolálható. Alveoláris makrofágok 24 órás egyrétegű tenyészetét foszfáttal pufferolt fiziológiás sóoldatban (PBS) 50%-os tüdőszövet-homogenizátummal inkubáltuk. A makrofág sejteket SPF malacok tüdő-mosófolyadékából nyertük PBS-sel. A makrofágokat mostuk és 10% borjúszérummal, valamint antibiotikumokkal kiegészített RPMI 1640 tápfolyadékban 24 órán át, 5% CO2-t tartalmazó termosztátban inkubáltuk. A makrofágokhoz hozzáadtuk a homogenizátum kis mennyiségét, 1 óráig 37 °C-on inkubáltuk, majd friss tápfolyadékot adagoltunk, és a fertőzött makrofágokat 37 °C-on, CO2-termosztátban tovább inkubáltuk. A teljes cytopatogén hatás (CPE) kifejlődése 23 napos inkubálás után válik nyilvánvalóvá.
A vírus izolálható egyéb forrásokból, például a fertőzött sertések szívéből, mandulájából, agyából és májából is.
A találmány szerinti PRRS-vírus izolálására használt, klinikai esetből származó kiválasztott szövethomogenizátumokban a sertésekben szokásosan előforduló egyéb vírusok jelenléte nem volt jellemzően kimutatható, különösen nem az álveszettségvírus (PRV), sertésparvovírus (PPV), paramyxovírus, sertés-koleravírus (HCV), valamint a fertőző gyomorbélhurut vírusának jelenléte.
A találmány szerinti PRRS-vírus egyéb tulajdonságait az alábbiakban vázoljuk.
A vírus letétbe helyezése
A fent ismertetettek szerint izolált, találmány szerinti PRRS-vírus nemzetközi leírásunk szerinti „10. számú izolátum”-nak felel meg és azt 1991. szeptember 6án, 1-1140 nyilvántartási számon letétbe helyeztük a Pasteur Intézet által fenntartott Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM) (Mikroorganizmusok Nemzetközi Gyűjteménye) intézetben Párizsban, Franciaországban.
Szaporodási jellemzők
A találmány szerinti vírus szaporodik makrofágokban, azonban nem szaporodik kimutatható mértékben folyamatosan szaporodó sejtvonalakban például a BHK21, Verő, SK-6 (sertésvese-), PK15 (sertésvese-), ST- (sertéshere-), L929, valamint BEL- (boíjúembriótüdő-) sejtvonalakban.
Ismert kórokozók jelenlétének kizárása szerológiai úton
Szokásos eljárásokkal kizártuk, hogy az alábbi kórokozók egyike lenne a PRRS okozója.
| Kórokozó | Vizsgálóeljárások | |||
| VN* | gl ELISAb | HIC | IFTd | |
| Alveszettség- vírus | - | - | N. V. | N. V. |
| Sertésparvo- vírus | - | N. V. | - | N. V. |
| Sertés-para- myxovírus | - | N. V. | - | N. V. |
| Sertéscirco- vírus | N. V. | N. V. | N. V. | - |
| Chlamydia | N. V. | N. V. | N. V. | - |
N. V.=nem vizsgáltuk a=a vírusneutralizációs (VN) vizsgálatot a Virologische Arbeitsmethoden szerint végeztük [2. kötet, 457-535, szerkesztő: A. Mayr és munkatársai, Fisher Verlag Jena, (1977)].
b=a gl ELISA vizsgálatot az Intertest Aujeszky gl ELISA-készlet utasításai szerint végeztük.
c=a haemagglutinációgátlási vizsgálatot (Hl) a következő kézikönyv alapján végeztük: Virology, A practical approach, szerkesztő: B.W.J. Mahy, IRL Press Oxford, 245 - 248, (1985).
d=az immunfluorcszcens vizsgálatot a következő kézikönyv szerint végeztük: Virologische Praxis, szerkesztő: G. Starke, Fischer Verlag Jena, 227-241,(1968).
HU 220 113 Β
A fertőző ágens szerológiai kimutathatóságának egybeesése a PRRS-megbetegedéssel
Egyszerű klinikai esetekből származó szerológiai mintákat egy immunfluoreszcens vizsgálatban (IFT) értékeltünk fertőzött makrofágok felhasználásával.
Vizsgáltunk továbbá a találmány szerinti vírussal kísérletesen fertőzött sertésektől származó szérummintákat.
Alveoláris makrofágokkal (rekeszenként 4xl04 sejt) beoltott mikrolemezeket fertőztünk a 10. számú izolátummal, és azokat 24 órán át inkubáltuk. Ebben az időben jelentkeznek a CPE első jelei. A sejteket hideg 96%-os etanollal, 30 percig fixáltuk. A fixált, fertőzött makrofágokon inkubáltuk a szérumminták sorozathígításait 1/10 szérumhígítástól indulva, 1 órán át, 37 “Γόη. A következő inkubálást FITC-vel konjugált, nyálban termelt antisertés-IgG-vel (Nordic, Breda) végeztük (1/40 hígítás, 30 perc, 37 °C). Egy invertált Leitzféle immunfluoreszcens mikroszkóppal meghatároztuk a fajlagos fluoreszcenciát. A fajlagos fluoreszcenciát sarló alakú perinukleáris fluoreszcencia jellemzi.
Az alábbi táblázat egy vizsgált szérumsorozat összehasonlítását mutatja.
| Szérum | IFT | |
| 1. | Kísérletes fertőzés előszérum | - |
| 2. | Kísérletes fertőzés egy hónappal a fertőzést követően | + |
| 3. | Mezei* szérum 1. | |
| 4. | Mezei szérum 2. | + |
| 5. | Mezei szérum 3. | |
| 6. | Mezei szérum 4. | + |
| 7. | Mezei szérum 5. | + |
* „Mezei”=egyszerű klinikai esetekből származó minták
PRRS-izolátumok közti keresztreakció
A PRRS-vírus nem mutat antigenitás tekintetében rokonságot ismert sertésvírusokkal, azonban kimutatható, hogy különböző PRRS-vírusizolátumok antigenitás tekintetében hasonlóak, mivel az IFT vizsgálatban immunológiai keresztreakciót adnak egymással.
Az alábbi táblázat azt mutatja, hogy a PRRS-pozitív szérum az IFT vizsgálatban reagál a különböző PRRS-izolátumokkal. A találmány szerint tehát bármelyik PRRS-vírusizolátum alkalmazható, mivel az IFT vizsgálat szerint közöttük erős antigénrokonság létezik.
| Izolátum | IFT pozitív szérum |
| Intervet 10 | + + + |
| Intervet 2 | + |
| Intervet 3 | + + |
| Intervet 4 | + + |
| Geld B. 2 | + + + |
| GeldB. 3 | + + |
Egyéb jellemzők
A PRRS-vírus egy burokkal rendelkező vírus (érzékeny kloroform és éter kezelésre), a felületen kis csomók találhatók, hasonlóságot mutat a laktát-dehidrogenáz-vírussal, valamint a lovak érgyulladását okozó vírussal. A vírusrészecske körülbelül 65 nanométer átmérőjű, és gradiens ultracentrifugálásnál 1,1 gramm/cm3 ülepedési sűrűséggel rendelkezik.
A vírussal fertőzött makrofág-sejttenyészetben legalább két, körülbelül 14 000, illetve 21 000 D molekulatömeggel rendelkező, a vírusra fajlagos protein mutatható ki.
A találmány tárgya továbbá sertésekben PRRS ellen védettséget létrehozó vakcina, amely a CNCM intézetnél letétbe helyezett és ott az 1-1140 nyilvántartási számon szereplő találmány szerinti vírusizolátummal jellemzett új vírusfajtából származó vírusantigént tartalmaz.
A fentiek alapján nyilvánvaló, hogy a találmány szerinti vakcina előállítható a CNCM intézetnél letétbe helyezett és ott az 1-1140 nyilvántartási számon szereplő 10. számú izolátumból, vagy bármely más rendelkezésre álló vagy izolálható PRRS-vírusizolátumból.
A találmány tárgyát előnyösen olyan vakcina képezi, amely vírusantigénként legalább részlegesen csökkent kórokozósajátságokkal rendelkező, de antigénaktivitását megtartó, azaz a sertés immunrendszerét stimulálni képes PRRS-virusból származó antigént tartalmaz. Ez elérhető a vírus legyengítésével vagy inaktiválásával, az utóbbi esetben a vírus elveszti szaporodási képességét is.
A találmány tárgyát pontosabban egy vagy több találmány szerinti vírusizolátumot inaktivált formában tartalmazó inaktivált vakcina képezi.
Előnyösen, a találmány szerinti inaktivált vakcinában az inaktiválás előtti vírustitemek megfelelő PRRS-vírus mennyisége nagyobb mint körülbelül 106 5 TCID50/ml (adagonként), és előnyösebben nagyobb mint körülbelül 107·5 TCID50/ml (adagonként) A. Mayr és munkatársai szerinti eljárás szerint mérve [A. Mayr és munkatársai (szerkesztő) Virologische Arbeitsmethoden 1. kötet. Fisher Verlag Jena, 36-39, (1974)].
Az inaktivált PRRS-vírust tartalmazó folyadékok bármely szokásos eljárással koncentrálhatok, például Amicon koncentrálóeszközzel, kicsapásos módszerekkel, mint például ammónium-kloriddal, vagy polietilénglikollal, koncentrálhatok Carbovaxszal, ultracentrifúgálással vagy adjuváns koncentrálóeljárásokkal, mint például alumínium-foszfáttal.
A PRRS-vírusok inaktiválásának célja, hogy a vírus szaporodását megakadályozzuk. Ez általában kémiai vagy fizikai eszközökkel érhető el. A kémiai inaktiválást, például a vírusok formaldehiddel, béta-propiolaktonnal, etilén-iminnel vagy ezek származékaival, egy szerves oldószerrel (például Tween®-nel, Triton X®szel, nátrium-dezoxikoláttal, szulfobetainnal vagy oktil-trimetil-ammónum-sóval) való kezelésével végezhetjük. Kívánt esetben az inaktiválóvegyületet utólag neutralizálhatjuk; formaldehiddel inaktivált anyag például metabiszulfittal neutralizálható. A fizikai inaktiválást előnyösen úgy végezhetjük, hogy a vírusokat nagy ener3
HU 220 113 Β giájú sugárzásnak, például UV fénynek, röntgensugárzásnak, vagy gamma-sugárzásnak tesszük ki. Kívánt esetben a kezelés után a pH-t körülbelül 7-es értékre állíthatjuk vissza.
Az inaktivált vakcinához rendszerint egy adjuvánst, és kívánt esetben egy vagy több emulgeálószert, például Tween®-t és Span®-t is adagolhatunk. Alkalmazható adjuvánsok például az E-vitamin-acetát olaj/víz emulziója, alumínium-hidroxid, -foszfát vagy -oxid (ásványi) olaj emulziói, például Bayol®, Marcol 52®, valamint szaponinok.
A találmány szerinti élő legyengített vírusvakcina előállítására számos, a gyakorlatban erre a célra alkalmazható eljárás ismeretes, például meghatározott PRRS-vírusizolátum embrionált tojásban vagy fogékony sertésszövetsejteket, vagy egyéb fogékony sejteket tartalmazó szövettenyészetben való szaporodáshoz való adaptálása vagy legyengítése embrionált tojásban, vagy az említett szövettenyészetekben való 10-200 passzálása, ami után a vírus felszaporítható, és a vírust tartalmazó embrionált tojások anyaga vagy a szövettenyésztő folyadék és/vagy a sejtek összegyűjthetők. Az összegyűjtés folyamán a kapott vírusmennyiség kívánság szerint olyan eljárásokkal növelhető, amelyek elősegítik a fertőző részecskék kiszabadulását a tenyésztésre használt közegből, mint például ultrahangkezeléssel.
Előnyös stabilizátort adni a vakcinához, főként, ha liofilezéssel száraz készítményt állítunk elő. Alkalmas stabilizátorok például az SPGA [Bovamik és munkatársai, J. Bacteriology 59, 509, (1950)], szénhidrátok, (mint a szorbit, mannit, trehalóz, keményítő, szaharóz, dextrán vagy glükóz), proteinek, (mint az albumin vagy kazein) vagy ezek degradációs termékei és pufiferek (mint az alkáliföldfém-foszfátok). Kívánság szerint egy vagy több, fent ismertetett adjuvánsaktivitással rendelkező összetevő is hozzáadható.
Elő vakcinák esetében az egy sertésre eső dózis 1010-107>° TCID5o attenuált vírus között alakulhat.
A találmány szerinti vakcinát beadhatjuk izomba vagy bőr alá injektálva, vagy ónba, légcsőbe, szájon át, bőrre, bőrön át vagy bőrbe való adagolással.
A találmány szerinti vakcina a kocák vakcinázási előzményétől függően a malacoknak 1, 5 vagy 10 hetes korban, a kocáknak a fedeztetést megelőzően és/vagy 4-6 héttel az ellést megelőzően (megerősítő vakcinázás) vagy a kanoknak minden fél évben (megerősítő oltások) adagolható.
A találmány szerinti vakcinák, előnyösen az inaktivált PRRS-vírust tartalmazó vakcinák, tartalmazhatják a PRRS-komponenst és egy vagy több, azzal rokonságot nem mutató sertéskórokozót, mint például az Actinobacillus pleuropneumoniae, az álveszettség vírusa, sertés-influenzavírus, sertésparvovírus, a fertőző gyomorbél hurut vírusa, rotavírus, E. coli, Erysipelotrix rhusiopathiae, Pasteurella multocida, Bordetella bronchiseptica.
A találmány szerinti vakcina bármely PRRS-vírusizolátumból előállítható ugyan, a vakcina előnyösen a
10. számú PRRS-izolátumból származik (CNCM nyilvántartási szám: 1-1140). A találmány szerinti vakcinába adagolható PRRS-vírusantigén előállítására szolgáló eljárás az alábbi lépéseket tartalmazza:
a) fogékony szövettenyészet sejtjeinek fertőzését PRRS-vírussal;
b) a sejtek tenyésztését, valamint
c) a tenyészetből a vírusantigén összegyűjtését.
Előnyösen, a PRRS-vírust magas titer, azaz legalább 106 0 TCID50/ml titer eléréséig szaporítjuk.
Közelebbről, a 10. számú vírusizolátumot (CNCM nyilvántartási szám: I-1140) használtuk magas titerű PRRS-vírusantigén előállítására.
A találmány szerinti vakcinába adagolható vírusantigént előállíthatjuk a PRRS-vírusizolátumok makrofágokban való (alveoláris, peritoneális, perifériás, csontvelő eredetű vagy bármely egyéb helyről származó) szaporításával. Alkalmazhatók egyéb, makrofágszerű tulajdonságokkal rendelkező sejtek is, például promonocyták, monocyták, agyi ér endothelium sejtek és mikroglia sejtek. A makrofágok, vagy makrofágszerű sejtek lehetnek spf eredetűek vagy nem spf eredetűek (például szokványos, kereskedelemben hozzáférhető sertésekből származóak). Az utóbbi esetben óvintézkedéseket kell tennünk a nemkívánatos kontamináció elkerülésére, például megfelelő antibiotikumok használatával a tenyészetben.
Más eljárás szerint nagyon jól alkalmazható vírusszaporítási eljáráshoz juthatunk el egy makrofág-sejtvonal létesítésével. Az alábbiakban számos olyan lehetőséget ismertetünk, amelyekkel ilyen kívánt makrofág-sejtvonalak nyerhetők.
Makrofágok L(929) sejtek, SK6, ST-, Verő vagy BHK-sejtek kondicionált tápfolyadékának alkalmazásával tehetők folyamatos szaporodásúvá. Ezekben a kondicionált tápfolyadékokban legalábbis a limfolkinek, mint például a makrofágkolónia-stimuláló faktor (CSF) jelenléte lényeges [Stanley E. R., Methods Enzymology, 116, 564-587, (1985)].
Bármilyen eredetű makrofágokat kezelhetünk olyan vegyülettel például a DNS-metabolizmusra ható alkiláló anyag példájaként béta-propiolaktonnal, amely folyamatos szaporodású sejtek keletkezését váltja ki [Logrippo G. A. és Hármán F. W., J. Immunoi., 75, 123-128,(1955)].
Sejtek folyamatos szaporodásúvá tételének határozottabb módja transzformálást létrehozó vírusok alkalmazása. Például, de nem kizárólag, retrovírusok (például leukémiavírus), SV40 és Papilloma vírusok esetében ismert, hogy más fajú makrofágokat, például egérés humán makrofágokat folyamatos szaporodásúvá tesznek [Robinson D. H. és munkatársai, Blood, 77, 294-305, (1991); Righi M. és munkatársai, Oncogene, 6, 103-111, (1991); Choi C. S. és munkatársai, Arch. Virol., 115, 227-237, (1990); Gendelman Η. E. és munkatársai, Láb. Invert., 51, 547-555, (1984); a rendelkezésre álló egér- és humán makrofág-sejtvonalakat ismertető ATCC katalógus)].
Sejtek folyamatos szaporodásúvá tételének pontosabb módja a fent említett vagy egyéb vírusok bármelyikéből származó, a folyamatos szaporodásért felelős gének alkalmazása, például alkalmazhatók a Vmyc vagy
HU 220 113 Β
Vmfs gének és/vagy az SV40 nagy T génje. A sejtek folyamatos szaporodásává tételére legelőnyösebb megoldás olyan retrovírusvektor előállítása lenne, amely lehetővé tenné a transzformálógén, mint például az SV40 nagy T génje beépülését a gazdasejt genomjába anélkül, hogy replikálódna és vírusok vagy vírusszerű részecskék szabadulnának ki. Sejtek folyamatos szaporodásává tételét elérhetjük egy szelektálható markert (például Neomycint®), valamint az SV40 nagy T génjét tartalmazó plazmid segítségével is.
Sejtek folyamatos szaporodásává tételére felhasználhatók érett makrofágok, azonban igen előnyösek az érett makrofágokká való differenciálódást megelőző lépésekből származó sejtalakok is, mivel ezek makrofág sajátságokkal rendelkező osztódó sejtek, és makrofágmarkerekkel, például CDI, CD11, valamint CD14 markerekkel rendelkeznek. Az érett formát megelőző alakok különböző elválasztóeljárásokkal, például sejtszétválasztó készülékkel (FACS; fluoreszcencia által aktiváltsejtválogatókészülékkel) és a CD markerek ellen termelt, fluorokrómmal jelölt fajlagos ellenanyagokkal egyéb limfocytaszennyeződéstől mentes tiszta formában szétválogathatok és kinyerhetők.
Nagy az igény PRRS-vírushordozók kiválasztására és azonosítására szolgáló érzékeny és fajlagos eljárásokra.
A találmány tárgyát képezi tehát egy PRRS-vírus elleni ellenanyagok kimutatására szolgáló gyors és érzékeny vizsgálóeljárás.
A találmány kiterjed továbbá a találmány szerinti vizsgálóeljárás kivitelezésére szolgáló diagnosztikai vizsgálókészletekre.
A találmány tárgyát képezi PRRS-vírus elleni ellenanyagok kimutatására szolgáló vizsgálóeljárás, amely tartalmazza:
a) a feltételezetten PRRS-vírus elleni ellenanyagokat tartalmazó minta inkubálását a találmány szerinti új vírustípusból, előnyösen a CNCM 1-1140 nyilvántartási számon szereplő vírusból származó PRRS-vírusantigént tartalmazó reagenssel az ellenanyag-antigén komplexek kialakulását elősegítő feltételek mellett; és
b) az ellenanyag-antigén komplexek kimutatását.
A PRRS-vírussal fertőzött sejtekből származó, az anti-PRRS-vírus ellenanyagokat tartalmazó szérummal immunológiai reakciót adó vírusantigének felhasználhatók PRRS-vírus elleni ellenanyagok biológiai mintákban való kimutatására szolgáló immunvizsgáló eljárásokban. A vírusantigén-reagens lehet többek között tisztított vagy részlegesen tisztított vírusrészecske, illetve víruspolipeptid, roncsolt vírus vagy fertőzött sejt, vagy annak sejtlizátuma.
Az immunvizsgáló eljárás többféleképpen megtervezhető. Az immunvizsgáló eljárás alapulhat például kompetíción vagy közvetlen reakción, vagy szendvics típusú vizsgálatokon. Az eljárásokban alkalmazható továbbá szilárd hordozó vagy immunprecipitáció. Az ellenanyag-antigén komplex kimutatása történhet jelölt ellenanyaggal; a jelölés lehet fluoreszcens, kemilumineszcens, radioaktív, festékmolekula vagy enzimatikus jelölés.
A PRRS-vírus elleni ellenanyagok kimutatására szolgáló találmány szerinti eljárások alapulhatnak az en zimjelöléses immunszorbens vizsgálaton (ELISA), immunfluoreszcens vizsgálaton (IFT) és Westem-lenyomattechnikán.
Az ELISA-eljárásban egy vizsgálati mintát PRRSvírusból származó vírusantigént tartalmazó reagenssel reagáltatunk. Előnyösen, az antigénreagens PRRSvírussal fertőzött makrofágok sejtlizátuma. Tipikusan, az antigénreagenst egy szilárd hordozóhoz, például mikrolemezhez vagy műanyag csészéhez kötjük. A le nem kötődött ellenanyagok eltávolítása céljából végzett mosást követően a szilárd hordozóhoz enzimmel jelölt antiimmunglobulint adunk, inkubáljuk, majd ismét mossuk. A jelölésre felhasználható enzimek ismertek a gyakorlatban, ez lehet például torma-peroxidáz. Ezután egy enzimszubsztrátot adunk az elegyhez, és PRRS-vírus elleni ellenanyagok jelenlétében kimutatható, mérhető színreakciót adó termék képződik.
A találmány szerint ezenkívül alkalmazható az IFTtechnika is. Például PRRS-vírussal fertőzött makrofágokat tenyésztünk mikrolemezeken, 24 órán át. Ezután a sejteket például acetonnal vagy etanollal, vagy formalinos kezeléssel kombinált fagyasztás-olvasztással fixáljuk. Ezután a fixált sejtekhez adjuk a vizsgálati mintát, és 1 órán át 37 °C-on inkubáljuk. Ezt követően a fixált sejtekhez egy fluoreszcens vegyülettel, például fluoreszceinnel konjugált antiimmunglobulint adunk. A reakcióelegyet ezután mikroszkóp alatt fluoreszcenciára nézve vizsgáljuk. A PRRS-vírussal fertőzött sertésből származó pozitív szérummal inkubált PRRS-vírussal fertőzött makrofágokban jellegzetes fluoreszcenciaminta mutatható ki.
A találmány szerinti előnyös diagnosztikai eljárás PRRS elleni ellenanyagok Westem-lenyomattechnikával való kimutatásán alapul.
Ennél a technikánál a PRRS-vírusantigéneket SDSpoliakrilamid géleken elektroforetikusan szétválasztjuk. A vírusantigén előnyösen PRRS-vírussal fertőzött makrofágok sejtlizátuma. A kapott proteincsíkokat elektroforetikusan előnyösen nitrocellulóz papírra visszük át. A gyakorlatban járatos személy számára ismert egyéb papírfajták, például diazopapír szintén megfelelnek [Tsang és munkatársai, Methods in Enzymology, 92, 29. fejezet, (1983)]. A szétválasztott vírusantigéneket tartalmazó nitrocellulóz csíkokat ezután a vizsgálati mintákkal és kívánt esetben pozitív, valamint negatív referenciamintákkal inkubáljuk. Kívánt esetben a vizsgálati mintával negatív referenciacsíkokat, például PRRS-vírussal nem fertőzött makrofágokból származó elektroforetikusan szétválasztott makrofáglizátumot tartalmazó csíkokat is inkubálunk. A pozitív referenciaminta tipikusan egy PRRS-vírus ellen ismerten ellenanyagokat tartalmazó minta, például klinikai PRRS-fertőzéses esetekből vagy PRRS-vírussal kísérletesen fertőzött állatokból származó szérum. A negatív referenciaminta PRRS-vírus ellen ellenanyagokat biztosan nem tartalmazó minta. Az ellenanyag-antigén komplexek kimutatása történhet ezután ELISA-technikával vagy szilárd fázisú csíkon végzett radioimmunvizsgálati technikával. Mindegyik inkubálást követően mosás iktatható be.
HU 220 113 Β
A csíkok inkubálását előnyösen tartályokban végezhetjük. Meglepő módon, a Westem-lenyomattechnika PRRS-szérummal reakciót adó egyéb anyagokból különkülön azonosítható két vagy három kisméretű, vírusra fajlagos protein jelenlétének következtében különösen alkalmas in vitro sejttenyészetből származó, PRRS-vírusra fajlagos polipeptidek kimutatására. Amint azt az 1. ábra mutatja, a fő immunreaktivitás, illetve fajlagosság a PRRS-vírus egy körülbelül 14 000 és egy 21 000 D molekulatömegű proteinjével szemben mutatható ki (makrofágokban szaporított, gliceringradiensen tisztított PRRSvírus Westem-lenyomatvizsgálata). A 21 000 D molekulatömegű csík diffúz, és ezért a 21 000 D-os megjelölés csak ennek a proteinnek a méretére való utalásként értendő.
A Westem-lenyomatvizsgálatban PRRS-vírus elleni ellenanyagok által felismert egyéb, a vírusra fajlagos proteinek körülbelül 46 000, 49 000, illetve 55 000 D molekulatömeggel rendelkeznek.
Tiszított 35S-Met/Cys-szel jelölt virionokat vizsgálva 14 kD, 33 kD és 46 kD molekulatömegű proteinek voltak feltűnőek. 35S-Met/Cys-szel jelölt fertőzött sejtek lizátumának radioimmun precipitációjakor két, körülbelül 24 kD, valamint 33 kD molekulatömegű vírusra fajlagos protein volt kimutatható. A fent említett vírusra fajlagos proteinek PRRS-fertőzés diagnózisára is felhasználhatók.
A találmány előnyös megvalósítási módjában a tisztított 14 000 és/vagy 21 000 D molekulatömegű PRRSvírusproteinek felhasználhatók ELISA- és Westem-lenyomatvizsgálatokban vírusantigén-reagensként, így érzékenyebb vizsgálóeljáráshoz jutunk.
A találmány tárgyát képezi továbbá egy PRRS-vírusok elleni ellenanyagok helyszíni vizsgálatát lehetővé tevő diagnosztikai vizsgálókészlet. A vizsgálókészlet tartalmaz legalább egy, SDS-PAGE gélről (elektromos úton) átvitt, szétválasztott virusantigéneket tartalmazó csíkot. A vizsgálókészlet tartalmazhat továbbá egy negatív kontrollként szolgáló referenciacsíkot, például in vitro sejttenyészetből, mint például PRRS-vírussal nem fertőzött makrofág-sejttenyészetből származó szétválasztott antigéneket tartalmazó csíkot.
A csíkokat előnyösen az elkövetkező inkubálásokat elsegítő egyedi tartályokban tároljuk.
Előnyös továbbá a vizsgálókészlethez mellékelni a pozitív és negatív referenciamintákat, hogy a vizsgálati mintával kapott eredmény összehasonlításával megkönnyítsük a vizsgálati eredmények értékelését.
Kívánt esetben a vizsgálókészlet előre előhívott pozitív és negatív referenciacsíkokat is tartalmaz. Az előre előhívott csíkokat a színreakció kialakulását követően szemmel összehasonlítást végezve a vizsgálati csíkokkal a vizsgálati eredmények értékelésére használjuk. Az előre előhívott csíkok megkönnyítik a vizsgálati eredmények leolvasását, és gyakorlatilag kiküszöbölik a gyakorlatban járatos személy jelenlétének szükségességét az eredmények értékelésénél.
A vizsgálókészlet szintén tartalmazhat enzimmel konjugált antiszérumreagenst, előnyösen torma-peroxidázzal konjugált immunglobulinokat, tartalmazhat szubsztrátot vagy színreakciót adó indikátort, mosópuffereket és a színreakció leállítására szolgáló oldatot.
A találmány szerinti előnyös szubsztrát, reakciót leállító anyag és mosópuffer a DAB, desztillált víz és PBS elegye, illetve PBS-Tween.
A találmány szerinti vizsgálókészlet legelőnyösebb megvalósítási módjában a vizsgálati csíkon a körülbelül 14 000 és 21 000 D molekulatömegű proteineknek megfelelő csíkok külön-külön azonosíthatók, vagyis ezek a csíkok a PRRS-szérummal reakciót adó egyéb vírus vagy nem vírus eredetű antigénektől elkülönülnek.
A PRRS-vírusantigén mennyiségének meghatározására a vizsgálati mintában reagensként ismert, PRRS-re fajlagos antiszérumot vagy ellenanyagokat használunk, előnyösen szilárd fázishoz kötötten. Ehhez adjuk az antigént tartalmazó vizsgálati mintát, majd az antigénellenanyag komplex kialakulását lehetővé tevő inkubálást követően a szilárd fázist mossuk, és egy második, jelölt ellenanyagot adunk az elegyhez az antigén-ellenanyag komplex kimutatására.
A találmány tárgyát képezik továbbá vizsgálati mintában PRRS-vírusantigén kimutatására szolgáló, a fent ismertetett eljárást alkalmazó vizsgálókészletek.
A találmány szerinti megoldást a következő példákkal szemléltetjük közelebbről, a korlátozás szándéka nélkül.
1. példa
PRRS-vírus izolálása és szaporítása
Elkülönítőben tartott SPF malacokat altattunk, és meleg foszfátpufferes fiziológiás sóoldattal (PBS) tüdőmosást végeztünk. Körülbelül 100 ml makrofágszuszpenziót gyűjtöttünk szilikonozott üvegpalackokban. A makrofágokat PBS-sel mostuk, és 10% borjúszérummal és antibiotikumokkal kiegészített RPM 1640 tápfolyadékban (Flow Labs), CO2-inkubátorban inkubáltuk 24 órán át. A sejteket 25 cm2 alapterületű Roux-palackokba (Falcon) oltottuk 3χ105 sejt/cm2 sűrűségben. A területi állategészségügyi intézet állatorvosa által diagnosztizált, PRRS klinikai tünetegyüttesben szenvedő (vetélés, táplálkozás hiánya) 266. számú kocát felboncoltuk.
A tüdőszövetből 50%-os homogenizátumot készítettünk PBS-ben Ultraturrax készülékkel. A szuszpenziót alacsony fordulatszámú centrifugálással tisztítottuk. A feltisztult felülúszóból 1 ml-t 24 órás, egyrétegű alveoláris makrofágtenyészetre oltottunk. 1 órás 37 °Con végzett inkubálást követően ismét tápfolyadékot adtunk a sejtekhez, majd a fertőzött makrofágokat 37°-on, CO2-t tartalmazó légtérben tovább inkubáltuk. A CPE jelei két nap elteltével váltak láthatóvá. A 3. napon a makrofágok teljesen lizálódtak, melyet tripánkék felvétellel igazoltunk.
Az élő sejtek nem veszik fel a tripánkéket, valamint a nem fertőzött kontrollmakrofágok sem. Ebből az első passzálásból nyert ülepített sejteket -70 °C-on tároltuk. Ezt az izolátumot tovább passzáltuk úgy, hogy az előre meghígított vírusszuszpenzió 1:10-1:100 hígításaiból 1 ml-t további makrofág-sejttenyészeteken in6
HU 220 113 Β kubáltunk. Teljes CPE 2-3 nap inkubalast követően figyelhető meg. Ezt a PRRS-izolátumot 10. számú izolátumnak neveztük. Ennek az izolátumnak a mintáját 1-1140 nyilvántartási szám alatt letétbe helyeztük a CNCM intézetnél.
A PRRS-vírusantigén előállításának fent ismertetett módja lehetővé teszi a vírus in vitro magas titerben való felszaporítását.
Az 1. táblázat a néhány passzálási szintet követően nyert vírusmennyiséget mutatja a 10. számú izolátum esetében.
1. táblázat
Szaporodási jellemzők makrofágokban
| Passzálási szint | Titer (TCID50/ml) |
| 3. | 106.0 |
| 4. | 106.0 |
| 5. | 107,0 |
| 6. | ΙΟ6’ |
| 7. | 107.4 |
| 8. | ΙΟ73 |
2. példa
Négyhetes malacok kísérletes fertőzése PRRS-vírussal
A 10. számú izolátumot (105·0 TCID50) két olyan négyhetes malac orrába oltottuk, amelyeket egy-egy kontaktkontrollal egy ketrecben helyeztünk el. Az állatoknál négy nap múlva klinikailag étvágytalanságot és enyhe átmeneti hőemelkedést figyeltünk meg. Hat nap elteltével elesettek és gyengék voltak. A fertőzést követően 8 nappal a két fertőzött állatot elaltattuk és tüdőmosást végeztünk. Az állatok egyikéből a kórokozót spf makrofágokon való együtttenyésztéssel újra izoláltuk.
Ezenkívül mind a fertőzött, mind a kontakt kontrolimalacokban szerokonverzió volt kimutatható.
A szerokonverziót az immunfluoreszcens vizsgálattal (IFA) mértük. Egyrétegű makrofágtenyészetet 24 órával a 10. számú izolátummal való fertőzést köve10 tőén 95%-os -70 °C-os etanollal 1 órán át fixáltunk, majd 1 óráig 37 °C-on a vizsgálati szérummal inkubáltunk. Ehhez FITC-vel konjugált nyálban termelt antisertés-IgG-t adtunk és 37 °C-on, 30 percig tovább inkubáltuk. A mintákat egy ultraviola fluoreszcens mikro15 szkóppal (Leitz) értékeltük. A vakcinázást követően 4 héttel a vakcinázott állatokban az ellenanyagtiter nagyobb volt mint 1280.
3. példa
Vemhes kocák vakcinázása
Öt, 10 héttel az ellés előtt álló kocát ketrecekben helyeztünk el. 3 kocát a nyakizomba adva víz/olaj emulzióban adjuvált (inkomplett Freund), inaktivált 10. számú izolátummal vakcináztunk (1 ml), majd 4 hét múlva emlékeztető oltást adtunk. A vemhesség 80. napján, körülbelül 3 héttel az ellés előtt a vakcinázott állatokat és a kontrollokat orron át fertőztük a 10. számú izolátummal (ΙΟ3-6 TCIDjo).
A kocákban követtük a szerológiai válasz kialakulá30 sát. A kocák ellés előtti vakcinálása védettséget hozott létre. A vakcinázott kocáknak lényegesen egészségesebb malacai lettek, mint a kontrolloknak (2. táblázat). A táblázat a fertőzés hatását mutatja a vakcinázott és kontrollkocák utódaira születésekor és az élve születet35 teknél a születés utáni első hét folyamán.
2. táblázat
| Kezelés megszületett malacok’ | Újszülött malacok | ||||
| mumi fikáit | elpusztult | elpusztult | gyenge | egészséges | |
| Vakcinázott | 1,7 | 2 | 1,7 | 0,7 | 6,7 |
| Kontrollok | 1 | 3 | 3 | 2 | 2 |
a: az egy kocára eső malacok átlagértéke
4. példa fVestern-lenyomat immunvizsgáló eljárás
Fertőzött és nem fertőzött makrofágtenyészetek felülúszóját 3000 g-n feltisztítottuk. A felülúszókat egy SW 28,1 rotorban centrifugáltuk (25,000 rpm, 3 óra). Az üledéket TEN-pufferben szuszpendáltuk, és gélelektroforézis vizsgálatnak vetettük alá.
Az anyagot redukáló feltételek mellett 10%-os nátrium-dodecil-szulfát (SDS)-poliakrilamid gélen elektroforézissel szétválasztottuk. A géleket renaturáló pufferben [4 mol/1 karbamid, 50 mmol/1 NaCl, 10 mmol/1 Tris-hidroklorid, 0,1 mmol/1 ditiotreitol (pH 7)] 30 percig ekvilibráltuk, majd további 30 percig SDS-t nem tartalmazó elektroforézis pufferben inkubáltuk. Az anyagot elektroforetikus úton nitrocellulóz szűrőre (Schleicher & Schuell, Dassel, Németország) vittük át egy „Mini Trans-Blot’’ elektroforetikus átvivőkészülékkel (Bio-Rad, München, Németország) (2 Amper, óra).
A proteinek nem fajlagos kötődését a szűrőhöz órán át, PBS-ben oldott szárított tejpor oldatában való inkubálással akadályoztuk meg. PBS-ben oldott szárított tejpor oldatában hígított PRRS-vírusra pozitív sertésantiszérumot egy éjszakán át hagytuk lekötődni, majd a fajlagos kötődést kecskében termelt, peroxidázzal konjugált antisertés-antiszérummal (Dianova) és szubsztrátként 2,2-kloronaftollal (Sigma) határoztuk meg.
Claims (14)
1. Sertések reproduktív és légzőszervi tünetegyüttese (PRRS) ellen védettséget létrehozó vakcina, azzal jellemezve, hogy a CNCM intézetnél 1-1140 nyilvántartási számon letétbe helyezett vírusból vagy ezzel immunológiailag rokon PRRS-vírusizolátumból származó vírusantigént tartalmaz, ahol a vírusantigén inaktivált PRRS-vírus, és a vakcinára jellemző továbbá, hogy tartalmaz/tartalmazza
- milliliterenként legalább 106>5 TCID50, előnyösen legalább IO6·5 TCID50 előinaktivált vírustitemek megfelelő mennyiségű inaktivált vírusantigént, vagy
- egy adjuvánst, amely a következők valamelyike lehet: E-vitamin-acetát „olaj a vízben” emulzió, alumínium-foszfát, alumínium-oxid, Freund-féle olajemulziótól eltérő olajemulzió, szaponinok, vagy
- a CNCM intézetnél I-1140 számon letétbe helyezett PRRS-vírust.
2. Sertések reproduktív és légzőszervi tünetegyüttese (PRRS) ellen védettséget létrehozó vakcina, azzal jellemezve, hogy a CNCM intézetnél I-1140 nyilvántartási számon letétbe helyezett vírusból vagy ezzel immunológiailag rokon PRRS-vírusizolátumból származó vírusantigént tartalmaz, ahol a vírusantigén élő PRRS-vírus, és a vakcinára jellemző továbbá, hogy tartalmaz/tartalmazza
- a PRRS-vírust liofilizált formában, vagy
- egy stabilizálószert, vagy
- a PRRS-vírust dózisonként 10*’θ-107-θ TCID50 mennyiségben, vagy
- egy adjuvánst, amely a következők valamelyike lehet: E-vitamin-acetát „olaj a vízben” emulzió, alumínium-foszfát, alumínium-oxid, olaj emulzió, szaponinok, vagy
- a CNCM intézetnél 1-1140 számon letétbe helyezett PRRS-vírust.
3. Sertések reproduktív és légzőszervi tünetegyüttese (PRRS) ellen védettséget létrehozó, egynél több antigénkomponenst tartalmazó vakcina, azzal jellemezve, hogy tartalmaz egy első komponenst, amely egy, a CNCM intézetnél 1-1140 számon letétbe helyezett PRRS-vírus vagy egy ezzel immunológiailag rokon PRRS-vírusizolátum, és egy másik antigénkomponenst, amely egy nem rokon sertéspatogénből származik.
4. A CNCM intézetnél 1-1140 számon letétbe helyezett PRRS-vírus vagy egy ezzel immunológiailag rokon vírusizolátum, azzal jellemezve, hogy sejttenyészetben legalább IO6-0 TICD50/ml titerig, előnyösen legalább 107’0 TICD50/ml titerig szaporítható.
5. Biológiai kompozíció, azzal jellemezve, hogy egy, a 4. igénypont szerinti PRRS-vírust tartalmaz.
6. Eljárás sertések reproduktív és légzőszervi tünetegyüttese (PRRS) ellen védettséget létrehozó, élő, attenuált vakcina előállítására, azzal jellemezve, hogy
- egy, a CNCM intézetnél 1-1140 számon letétbe helyezett PRRS-vírust vagy ezzel immunológiailag rokon vírusizolátumot egy fogékony szubsztráton 10-200-szor passzálunk,
- az attenuált vírust egy fogékony szubsztráton szaporítjuk, és
- a vírust összegyűjtjük, és vakcinává feldolgozzuk.
7. Eljárás sertések reproduktív és légzőszervi tünetegyüttese (PRRS) ellen védettséget létrehozó, inaktivált vakcina előállítására, azzal jellemezve, hogy egy, a CNCM intézetnél 1-1140 számon letétbe helyezett tenyésztett PRRS-vírust vagy ezzel immunológiailag rokon vírusizolátumot egy inaktiválószerrel inaktiválunk, ahol az inaktiválószer a következők valamelyike lehet: β-propiolakton, etilén-imin és származékai, szerves oldószer, röntgensugárzás, γ-sugárzás.
8. Eljárás egy, a CNCM intézetnél 1-1140 számon letétbe helyezett PRRS-vírusból vagy azzal immunológiailag rokon PRRS-vírusizolátumból származó vírusantigén előállítására, azzal jellemezve, hogy
- a vírussal fogékony sejteket oltunk be,
- a sejteket tenyésztjük, és
- a tenyészetből összegyűjtjük a vírusantigént, ahol az összegyűjtés előtti titer legalább 106>° TCID50/ml.
9. Eljárás a PRRS-vírus elleni antitestek detektálására, azzal jellemezve, hogy
- egy feltételezetten PRRS-vírus elleni antitestet tartalmazó mintát olyan PRRS-vírusantigén-reagenssel inkubálunk az antitest-antigén komplex kialakulását lehetővé tevő körülmények között, amely a CNCM intézetnél I- í 140 számon letétbe helyezett vírusból vagy azzal immunológiailag rokon vírusizolátumból származik,
- egy jelzett antitest felhasználásával detektáljuk az antitest-antigén komplexet, ahol a jelzés a következők valamelyike lehet: fluoreszcens, kemilumineszcens, radioaktív jelzés, színezékmolekula, enzim, feltételezve, hogy az enzimjelzés az immun-peroxidáz-egyréteg vizsgálatban (IPMA) alkalmazottól eltérő.
10. A 9. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy vírusantigénként víruspolipeptidet alkalmazunk.
11. A 9. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy vírusantigén-reagensként vírusrészecskét alkalmazunk.
12. A 9. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy enzimmel kapcsolt immunszorbens vizsgálati (ELISA-) technikával hajtjuk végre.
13. A 9. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy immunfluoreszcens tesztmódszerrel (IFT) hajtjuk végre.
14. Eljárás PRRS-vírusantigén detektálására vizsgálati mintában, azzal jellemezve, hogy
- egy vizsgálati mintát egy, a CNCM intézetnél 1-1140 számon letétbe helyezett PRRS-vírusra vagy egy ezzel immunológiailag rokon vírusizolátumra specifikus antitesttel inkubálunk az antitest-antigén komplex képződését lehetővé tevő körülmények között, ahol az antitestet szilárd hordozóra rögzített formában alkalmazzuk,
- a szilárd fázist mossuk,
- egy jelzett antitestet adagolunk, és
- detektáljuk az antigén-antitest komplexet.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP91202646 | 1991-10-14 | ||
| PCT/EP1992/002331 WO1993007898A1 (en) | 1991-10-14 | 1992-10-09 | Porcine reproductive respiratory syndrome vaccine and diagnostic |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9401056D0 HU9401056D0 (en) | 1994-07-28 |
| HUT69803A HUT69803A (en) | 1995-09-28 |
| HU220113B true HU220113B (hu) | 2001-11-28 |
Family
ID=8207942
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9401056A HU220113B (hu) | 1991-10-14 | 1992-10-09 | Sertések reproduktív és légzőszervi tünetegyüttese elleni vakcina, eljárás előállítására és alkalmazása |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6033844A (hu) |
| EP (1) | EP0610250B2 (hu) |
| JP (1) | JPH07501049A (hu) |
| AT (1) | ATE131067T1 (hu) |
| AU (1) | AU2684792A (hu) |
| CA (1) | CA2121241C (hu) |
| DE (1) | DE69206631T2 (hu) |
| DK (1) | DK0610250T4 (hu) |
| ES (1) | ES2083764T5 (hu) |
| GR (1) | GR3019112T3 (hu) |
| HU (1) | HU220113B (hu) |
| WO (1) | WO1993007898A1 (hu) |
Families Citing this family (47)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE69201441T3 (de) * | 1991-06-06 | 2008-12-04 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Erreger der mysteriösen schweinekrankheit,impfstoff-zusammensetzungen und diagnose kits. |
| US6380376B1 (en) | 1992-10-30 | 2002-04-30 | Iowa State University Research Foundation | Proteins encoded by polynucleic acids of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) |
| US5695766A (en) * | 1992-10-30 | 1997-12-09 | Iowa State University Research Foundation | Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome viruses which produce lesions in pigs and vaccines that protect pigs against said syndrome |
| US6592873B1 (en) | 1992-10-30 | 2003-07-15 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Polynucleic acids isolated from a porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) and proteins encoded by the polynucleic acids |
| US6251397B1 (en) | 1992-10-30 | 2001-06-26 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Proteins encoded by polynucleic acids isolated from a porcine reproductive and respiratory syndrome virus and immunogenic compositions containing the same |
| US6773908B1 (en) | 1992-10-30 | 2004-08-10 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Proteins encoded by polynucleic acids of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) |
| KR100374295B1 (ko) * | 1993-02-08 | 2003-12-24 | 바이엘 코포레이션 | 돼지생식및호흡증후군바이러스의생육방법과백신에서그의용도 |
| ES2074950B1 (es) * | 1993-09-17 | 1996-03-16 | Iberica Cyanamid | Vacuna para la prevencion de la enfermedad reproductiva y respiratoria de la cerda. |
| DE4407489A1 (de) * | 1994-03-07 | 1995-09-14 | Bayer Ag | Vakzine zur Prävention von Respirations- und Reproduktionserkrankungen des Schweines |
| PT676467E (pt) * | 1994-04-11 | 2002-02-28 | Akzo Nobel Nv | Estirpes europeias de vacina do virus do sindroma reprodutivo e respiratorio porcino (prrsv) |
| GB2289279B (en) * | 1994-05-13 | 1998-09-16 | Iberica Cyanamid | Diagnostic kits and vaccines containing recombinant PRRSV proteins |
| US5690940A (en) * | 1995-06-21 | 1997-11-25 | Regents Of The University Of Minnesota | Low pathogencity PRRS live virus vaccines and methods of preparation thereof |
| ES2102971B1 (es) * | 1996-01-25 | 1998-03-01 | Hipra Lab Sa | Nueva cepa atenuada del virus causante del sindrome respiratorio y reproductivo porcino (prrs), las vacunas y medios de diagnostico obtenibles con la misma y los procedimientos para su obtencion. |
| US5866401A (en) * | 1996-03-01 | 1999-02-02 | Schering Corporation | Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine |
| MY115070A (en) * | 1996-03-01 | 2003-03-31 | Schering Corp | Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine |
| DK0835930T3 (da) * | 1996-10-09 | 2001-06-18 | Akzo Nobel Nv | Europæiske vaccinestammer af porcint reproduktions- og respirationssyndrom-virus. (PRRSV) |
| EP0839912A1 (en) | 1996-10-30 | 1998-05-06 | Instituut Voor Dierhouderij En Diergezondheid (Id-Dlo) | Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof |
| CA2703181C (en) | 1997-05-06 | 2016-06-28 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Prrsv antigenic sites identifying peptide sequences of prrs virus for use in vaccines or diagnostic assays |
| UA78180C2 (uk) | 1997-10-03 | 2007-03-15 | Меріаль | Кільцевий вірус свині типу ii, вакцини та діагностичні реагенти |
| CA2366072C (en) | 1999-03-08 | 2007-07-10 | Id-Lelystad, Instituut Voor Dierhouderij En Diergezondheid B.V. | Prrsv vaccines |
| AU4482200A (en) | 1999-04-22 | 2000-11-10 | United States Department Of Agriculture | Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine, based on isolate ja-142 |
| US6740490B2 (en) | 2001-01-29 | 2004-05-25 | Kansas State University Research Foundation | Identification and applications of porcine reproductive and respiratory syndrome virus host susceptibility factor(s) for improved swine breeding |
| US6841364B2 (en) | 2002-01-22 | 2005-01-11 | Protatek International, Inc. | Infectious cDNA clones of porcine reproductive and respiratory syndrome virus and expression vectors thereof |
| CA2571452A1 (en) * | 2004-06-18 | 2006-01-26 | Regents Of The University Of Minnesota | Identifying virally infected and vaccinated organisms |
| US7632636B2 (en) | 2004-09-21 | 2009-12-15 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Porcine reproductive and respiratory syndrome isolates and methods of use |
| PL2460820T3 (pl) | 2004-12-30 | 2019-09-30 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Immunogenne kompozycje PCV2 stosowane w zapobieganiu infekcjom PCV2 |
| RU2007130801A (ru) | 2005-01-13 | 2009-02-20 | Берингер Ингельхайм Ветмедика Гмбх (De) | Улучшенные вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней (prrs) |
| UA95778C2 (ru) | 2005-06-24 | 2011-09-12 | Риджентс Оф Зе Юниверсити Оф Миннесота | Вирусы репродуктивно-респираторного синдрома свиней, их инфекционные клоны и мутанты и способы применения |
| RU2488407C2 (ru) | 2005-12-29 | 2013-07-27 | Берингер Ингельхайм Ветмедика, Инк. | Поливалентные иммуногенные композиции pcv2 и способы получения таких композиций |
| WO2008013918A2 (en) * | 2006-07-26 | 2008-01-31 | Myelin Repair Foundation, Inc. | Cell cycle regulation and differentiation |
| PL2106440T3 (pl) | 2007-01-12 | 2016-02-29 | Univ Illinois | Komórki niepochodzące od małp do hodowli wirusa zespołu rozrodczo-oddechowego świń (PRRS) |
| US7666585B2 (en) * | 2007-06-15 | 2010-02-23 | Protatek International, Inc. | Construction of chimera PRRSV, compositions and vaccine preparations |
| EP2257808B1 (en) * | 2008-02-29 | 2015-12-16 | Universiteit Gent | Method to determine the antigenicity of inactivated prrsv virus |
| TWI627281B (zh) | 2009-09-02 | 2018-06-21 | 百靈佳殷格翰家畜藥品公司 | 降低ｐｃｖ－２組合物殺病毒活性之方法及具有改良免疫原性之ｐｃｖ－２組合物 |
| PL2959916T3 (pl) | 2011-02-17 | 2019-05-31 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Nowy europejski szczep prrsv |
| JP2014506795A (ja) | 2011-02-17 | 2014-03-20 | ベーリンガー インゲルハイム フェトメディカ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | Ｐｒｒｓｖの工業規模の製造方法 |
| US9187731B2 (en) | 2011-07-29 | 2015-11-17 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | PRRS virus inducing type I interferon in susceptible cells |
| EP2737059A1 (en) | 2011-07-29 | 2014-06-04 | Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH | Novel prrs virus inducing type i interferon in susceptible cells |
| UA114503C2 (uk) | 2012-04-04 | 2017-06-26 | Зоетіс Сервісіз Ллс | Комбінована вакцина pcv та mycoplasma hyopneumoniae |
| US9120859B2 (en) | 2012-04-04 | 2015-09-01 | Zoetis Services Llc | Mycoplasma hyopneumoniae vaccine |
| UA114504C2 (uk) | 2012-04-04 | 2017-06-26 | Зоетіс Сервісіз Ллс | Комбінована вакцина pcv, mycoplasma hyopneumoniae та prrs |
| US9579373B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-02-28 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, compositions, vaccine and methods of use |
| CN105829528B (zh) | 2013-12-20 | 2019-10-22 | 勃林格殷格翰动物保健有限公司 | PRRS病毒变体、欧洲PRRS病毒cDNA克隆及其用途 |
| BR112017028224A2 (pt) | 2015-08-31 | 2018-09-11 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | composição, e, método para proteger um leitão contra uma doença associada a pestivírus. |
| WO2017106079A1 (en) | 2015-12-14 | 2017-06-22 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Hybrid core feline vaccines |
| WO2020206452A1 (en) | 2019-04-04 | 2020-10-08 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Porcine circovirus type 3 (pcv3) vaccines, and production and uses thereof |
| US20230241198A1 (en) | 2020-07-24 | 2023-08-03 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Combination porcine vaccine |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4452902A (en) * | 1981-11-19 | 1984-06-05 | Labsystems Oy | Method and equipment for the measurement of properties of a liquid |
| DE69201441T3 (de) * | 1991-06-06 | 2008-12-04 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Erreger der mysteriösen schweinekrankheit,impfstoff-zusammensetzungen und diagnose kits. |
| DK0601062T4 (da) * | 1991-08-26 | 2001-03-14 | Univ Minnesota | SIRS-vaccine og diagnosefremgangsmåde |
| CA2076744C (en) * | 1991-08-26 | 2000-06-27 | Danny W. Chladek | Viral agent associated with mystery swine disease |
| AU2696792A (en) * | 1991-09-16 | 1993-04-27 | David A Benfield | Vaccine for mystery swine disease and method for diagnosis thereof |
| PT676467E (pt) * | 1994-04-11 | 2002-02-28 | Akzo Nobel Nv | Estirpes europeias de vacina do virus do sindroma reprodutivo e respiratorio porcino (prrsv) |
-
1992
- 1992-10-09 AT AT92920950T patent/ATE131067T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-10-09 AU AU26847/92A patent/AU2684792A/en not_active Abandoned
- 1992-10-09 WO PCT/EP1992/002331 patent/WO1993007898A1/en active IP Right Grant
- 1992-10-09 EP EP19920920950 patent/EP0610250B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-09 DK DK92920950T patent/DK0610250T4/da active
- 1992-10-09 JP JP5507405A patent/JPH07501049A/ja active Pending
- 1992-10-09 ES ES92920950T patent/ES2083764T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-09 HU HU9401056A patent/HU220113B/hu unknown
- 1992-10-09 DE DE69206631T patent/DE69206631T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-09 CA CA 2121241 patent/CA2121241C/en not_active Expired - Fee Related
-
1996
- 1996-02-27 GR GR960400533T patent/GR3019112T3/el unknown
-
1997
- 1997-05-27 US US08/863,116 patent/US6033844A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK0610250T3 (da) | 1996-04-09 |
| DE69206631T2 (de) | 1996-05-15 |
| ES2083764T3 (es) | 1996-04-16 |
| DE69206631D1 (de) | 1996-01-18 |
| WO1993007898A1 (en) | 1993-04-29 |
| CA2121241C (en) | 2007-12-04 |
| EP0610250B2 (en) | 2008-10-29 |
| HUT69803A (en) | 1995-09-28 |
| US6033844A (en) | 2000-03-07 |
| GR3019112T3 (en) | 1996-05-31 |
| ATE131067T1 (de) | 1995-12-15 |
| ES2083764T5 (es) | 2009-04-01 |
| AU2684792A (en) | 1993-05-21 |
| CA2121241A1 (en) | 1993-04-29 |
| DK0610250T4 (da) | 2009-03-02 |
| EP0610250A1 (en) | 1994-08-17 |
| EP0610250B1 (en) | 1995-12-06 |
| JPH07501049A (ja) | 1995-02-02 |
| HU9401056D0 (en) | 1994-07-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU220113B (hu) | Sertések reproduktív és légzőszervi tünetegyüttese elleni vakcina, eljárás előállítására és alkalmazása | |
| Jackwood et al. | Characteristics and serologic studies of two serotypes of infectious bursal disease virus in turkeys | |
| US5698203A (en) | European vaccine strains of the Porcine Reproductive Respiratory Syndrome virus (PRRSV) | |
| White et al. | Hantaan virus, aetiological agent of Korean haemorrhagic fever, has Bunyaviridae-like morphology | |
| FI117513B (fi) | Menetelmä PRRS-viruksen viljelemiseksi ja sen käyttö rokotteissa | |
| KR100484041B1 (ko) | 돼지생식 및 호흡증후군 바이러스의 유럽백신 균주 | |
| US5597721A (en) | Preparation of antigens of and of vaccines for the virus of mystery disease, antigens and vaccines obtained for the prevention of this disease | |
| JPH06508131A (ja) | 豚の奇病の原因体であるレリスタドエイジェント、それを含むワクチン組成物、豚の奇病の診断キット及び診断方法 | |
| US4810494A (en) | Canine parvovirus vaccines | |
| US5419907A (en) | Pathogenic porcine respiratory coronavirus | |
| Thouless et al. | Isolation of two lapine rotaviruses: characterization of their subgroup, serotype and RNA electropherotypes | |
| JPH0380474B2 (hu) | ||
| Koch et al. | Antigenic differentiation of avian bronchitis virus variant strains employing monoclonal antibodies | |
| US5283172A (en) | Type-C rotavirus cultures and uses therefor | |
| US5750112A (en) | Canine coronavirus vaccine from feline enteric coronavirus | |
| US5610049A (en) | Human rotavirus HCR3A and method of growing said rotavirus | |
| Ahmed et al. | Detection of Marek's disease herpesvirus antigen by fluorescent and coating antibody | |
| Gavrilyuk et al. | Isolation of hemorrhagic nephroso-nephritis virus in cell cultures | |
| RU2081912C1 (ru) | Штамм вируса краснухи "орлов-в" для получения вакцины | |
| GEMMA et al. | Suppression of canine parvovirus growth in CRFK cells by canine distemper virus | |
| Calnek | Research Note: Precipitin in Chicken Sera Reactive against Tryptose Phosphate Broth | |
| EP0502107A1 (en) | TYPE B ROTAVIRUS CROPS AND APPLICATIONS THEREOF. | |
| Yamada et al. | A mutant of pseudorabies virus with deletion of glycoprotein gIII gene prepared from a Japanese isolate: It fails to agglutinate mouse erythrocytes | |
| El-Ghorr | Investigations into the biology of bovine coronavirus and the infections it causes | |
| WO2002008390A2 (en) | Bovine wasting syndrome vaccine |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| GB9A | Succession in title |
Owner name: INTERVET INTERNATIONAL B.V., NL Free format text: FORMER OWNER(S): AKZO N.V., NL |