RU2081912C1 - Штамм вируса краснухи "орлов-в" для получения вакцины - Google Patents
Штамм вируса краснухи "орлов-в" для получения вакцины Download PDFInfo
- Publication number
- RU2081912C1 RU2081912C1 RU95108342/13A RU95108342A RU2081912C1 RU 2081912 C1 RU2081912 C1 RU 2081912C1 RU 95108342/13 A RU95108342/13 A RU 95108342/13A RU 95108342 A RU95108342 A RU 95108342A RU 2081912 C1 RU2081912 C1 RU 2081912C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- properties
- tcd
- orlov
- human
- Prior art date
Links
Images
Abstract
Использование, медицинская биотехнология. Сущность изобретения: для повышения иммуногенности вакцины против краснухи в качестве продуцента предложен штамм "Орлов-В", ГВК N 2326. Культурально-морфологические признаки. Однородные сферические частицы с диаметром 50 - 70 нм. Плавучая плотность в градиенте сахарозы 1,18 - 1,20 г/см3. Размножается с развитием цитодеструктивного действия до титра 4 - 6 lg ТЦД50/0,5 мл в клеточных культурах животных и человека. Слабо размножается в первичных тканевых культурах куриных и перепелиных фибробластов. При роллерном или суспензионном способах культивирования на клетках ВНК-21 выход вирусной биомассы 7 - 8 lg ТЦД50/0,5 мл. Не размножается при температуре ниже 10oC и выше 40oC. Физиолого-биохимические признаки. Оптимум pH = 7,4. Инактивируется в течение 30 мин при 56oC. Чувствителен к эфиру и ацетону. Антигенные свойства. Гемагглютинирующая активность in vitro 2 - 8 ГАЕ. Агглютинирует эритроциты голубей, 1-дневных цыплят, человека с группой крови 0. Иммуногенные свойства. Специфические антитела при контроле на кроликах и морских свинках образуются в 100% случаев и характеризуются обратным титром антител в РТГА от 640 - 2560 до 1280 - 10240 соответственно. Наблюдаемость сероконверсии 80 - 100. Вирулентные свойства. Штамм не обладает вирулентными и контагионзными свойствами. Токсичность. Штамм не токсичен при введении морским свинкам и мышам в дозе 1000 ТЦД50/0,5 мл /1 прививочная доза человека/. 3 табл.
Description
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при получении вакцины против краснухи.
Известны вакцинные штаммы вируса краснухи HPV77, HPV77DE5, HPV77DK12, Cendehill, KPT, MEQ11, RA27/3 и BPD-2 (см. например: Best J.M. Epidemiol. Infect. 1991, 107, 17 30; Galazka A. Epidemiol. Infect. 1991, 107, 43 54; Herrmann K.L. Epidemiol. Infect. 1991, 107, 55 61).
Однако вакцины из штаммов HPV высоко реактогенны для людей, о чем сообщается в (Thomson C. R. Weiss J.J. Shillis J.L. et al. Am. J. Dis. Child. 1973, 125, 526 530). Вакцины из штамма RA27/3 вызывают 40% артралгий у взрослых (Best J.M. Banatlava J.E. Princiales and practice of clinical Virology, 1990, 337 374), а штамм Gendehill потенциально опасен в отношении контаминации онкогенными вирусами, так как получен с использованием клеточных культур приматов. Штамм MEQ11 обладает низкой иммуногенностью. Остальные штаммы недостаточно изучены в отношении целевого назначения.
Наиболее близким к заявляемому является вакцинный штамм вируса краснухи "Орлов" (Мешалова В. Н. Опыт получения и аттенуации краснушного штамма "Орлов", В кн. "Респираторные вирусные инфекции", Труды ЛНИИЭМ им. Пестера, Л. 1973, 137 143), выделенный из зева ребенка, больного манифестной формой краснухи, и аттенуированный путем пассирования в первичной культуре клеток почки кролика (ППК).
Однако данный штамм обладает низкой иммуногенностью.
Целью изобретений является повышение иммуногенности штамма.
Указанная цель достигается тем, что в качестве продуцента краснушной вакцины используют селекционированный штамм вируса краснухи "Орлов-В".
Штамм-продуцент краснушной вакцины "Орлов-В" (ГКВ N 2326 от 04.04.95) получен путем многократного пассирования в ППК прототипного штамма "Орлов", взятого спустя 16 лет хранения в Государственной коллекции музейных вирусов Института вирусологии им. Д.И. Ивановского, с последующим клонированием методом предельных разведений и селекцией по признаку утраты репродукционной активности при температуре 40o Указанный признак селекции использован для обеспечения ареактогенности штамма. В результате получен новый штамм с измененными культуральными свойствами: он не размножается при 40oC, тогда как прототипный штамм при этой температуре размножается до 1,3 1,5 lg ТЦД50/0,5 мл. Штамм прошел Государственные испытания на подлинность, специфическую активность и отсутствие контаминирующих агентов.
Штамм "Орлов-В" характеризуется следующими признаками.
Культурально-морфологические признаки. При электронном микроскопировании популяция представляет однородные сферические частицы с диаметром 50 70 нм. Плавучая плотность в градиенте сахарозы 1,18 1,20 г/см3. Размножается с развитием цитодеструктивного действия до инфекционного титра 4 6 lg ТЦД50/0,5 мл в клеточных культурах животных и человека: ППК, диплоидных клетках почки легкого и кожно-мышечного лоскута человека, перевиваемых культурах клеток гипернефромы, RK-1, RK-13, BHK-21, SIRK, HAK. Слабо размножается в первичных тканевых культурах куриных и перепелиных фибробластов. При роллерном или суспензионном способах культивирования на клетках BHK-21 выход вирусной биомассы достигает 7 8 lg ТЦД50/0,5 мл. Не размножается при температуре ниже 20oC и выше 40oC. Оптимальная температура культивирования в тканевых культурах +35oC.
Физиолого-биохимические признаки. Оптимальная pH 7,4±0,6. Инактивируется в течение 30 мин при 56oC. Чувствителен к действию эфира и ацетона.
Антигенные свойства. Гемагглютинирующая активность in vitro 2 8 ГАЕ. Агглютинирует эритроциты голубей, 1-дневных цыплят, человека с группой крови 0.
Иммуногенные свойства. Специфические антитела при контроле на кроликах и морских свинках образуются в 100% случаев и характеризуются обратным титром антител в РТГА от 640 2560 до 1280 10240 соответственно в зависимости от условий культивирования. Наблюдаемость сероконверсий 80 100%
Вирулентные свойства. Штамм не обладает вирулентными и контагиозными свойствами.
Вирулентные свойства. Штамм не обладает вирулентными и контагиозными свойствами.
Токсичность. Штамм не токсичен при введении морским свинкам и мышам в дозе 1000 ТЦД50/0,5 мл (1 прививочная доза человека).
Пример 1. В 1-литровый матрац с тканевой культурой ППК в ростовой среде 199 с добавлением 10 об. сыворотки эмбрионов коров (ЭС) вносят вирус краснухи шт. "Орлов-В" в заражающей дозе 0,1 ТЦД50/кл. и инкубируют в роллере при температуре 35oC и скорости 0,3 об/мин до образования монослоя клеток, что происходит не позже, чем на 3 сутки инкубирования. Затем ростовую среду удаляют, а монослой 6-кратно отмывают от сыворотки раствором Хенкса pH 7,4.
Далее в матрац с зараженным клеточным монослоем добавляют 150 мл поддерживающей среды 199 с 1 об. ЭС и производят культивирование вируса в роллере при 35oC и 0,3 об/мин в течение 18 суток. Через каждые 2 4 дня по мере нарастания цитопатогенных изменений клеточного монослоя, характерных для вируса краснухи (наблюдают под микроскопом), вируссодержащую жидкость сливают во флаконы и хранят под резиновой пробкой при (-20)oC для последующего использования, а в матрац добавляют 15 мл свежей поддерживающей среды 199 с вышеуказанным количеством ЭС и культивируют при тех же условиях. В данном примере осуществляют 4 полезных съема вируса (съемов вируса не менее 4 lg ТЦД50/0,5 мл).
Все операции выполняют в стерильных условиях.
Выход вируса на различных рабочих съемах указана табл. 1.
Собранный вируссодержащий материал 1 4 съемов объединяют, добавляют стабилизатор (желатину с сахарозой из расчета конечной концентрации 1 об.), разливают в 10-миллилитровые флаконы и хранят при (-20)oC.
В результате получают 12000 доз живой краснушной вакцины (в одной дозе 5 lg ТЦД50/0,5 мл).
После контроля на стерильность и отсутствие посторонних агентов вакцину испытывают на иммуногенность. Для этого серонегативным морским свинкам (10 особей) и кроликам (5 особей) однократно внутривенно вводят по 1 дозе вакцины. Результат учитывают через 28 дней в РТГА с референс-антигеном. В данном примере средний геометрический обратный титр антител в сыворотках крови морских свинок и кроликов составляет 3820 и 2200 соответственно. Сероконверсий 100%
Пример 2. Два 1-литровых матраца с клеточной культурой ППК заражают в дозе 0,01 ТЦД50/кл. вирусом краснухи шт. "Орлов-В" и "Орлов" соответственно. В данном примере низкая заражающая доза взята для обеспечения адекватности сравнения в связи с низкой активностью прототипа.
Пример 2. Два 1-литровых матраца с клеточной культурой ППК заражают в дозе 0,01 ТЦД50/кл. вирусом краснухи шт. "Орлов-В" и "Орлов" соответственно. В данном примере низкая заражающая доза взята для обеспечения адекватности сравнения в связи с низкой активностью прототипа.
Штаммы культивируют как в примере 1.
Результаты приведены в табл. 2.
Как видно из таблицы, новый штамм дает существенно больший (на 0,8 1,4 lg ТЦД50/0,5 мл) выход инфекционного вируса, чем прототипный.
Собранные поштаммно вируссодержащие материалы 2 4 съемов разводят средой 199 до концентрации 3,7 lg ТЦД50/0,5 мл, добавляют стабилизатор (желатину с сахарозой из расчета конечной концентрации 1 об.), разливают в ампулы и лиофильно высушивают.
В результате получают две серии живой краснушной вакцины из данных штаммов (в одной дозе 3,5 lg ТЦД50/0,5 мл).
Вакцины контролируют как в примере 1. При испытании на иммуногенность животным вводят по 2 дозы соответствующей вакцины. Результаты представлены в табл. 3. Как видно из таблицы, среднегеометрический обратный титр краснушных антител в сыворотке крови животных, привитых штаммом "Орлов-В", составляет 1360 3890, а при использовании прототипа 680 1120. Увеличено также количество сероконверсий на 20%
Как видно из приведенных примеров, использование предлагаемого штамма вместо прототипного позволяет повысить иммуногенность краснушной вакцины как в отношении титра иммунной сыворотки, так и процента сероконверсий. Кроме того, увеличен выход инфекционного вируса.
Как видно из приведенных примеров, использование предлагаемого штамма вместо прототипного позволяет повысить иммуногенность краснушной вакцины как в отношении титра иммунной сыворотки, так и процента сероконверсий. Кроме того, увеличен выход инфекционного вируса.
Claims (1)
- Штамм вируса краснухи ГКВ N 2326 для получения вакцины.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU95108342/13A RU2081912C1 (ru) | 1995-05-22 | 1995-05-22 | Штамм вируса краснухи "орлов-в" для получения вакцины |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU95108342/13A RU2081912C1 (ru) | 1995-05-22 | 1995-05-22 | Штамм вируса краснухи "орлов-в" для получения вакцины |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU95108342A RU95108342A (ru) | 1996-12-20 |
RU2081912C1 true RU2081912C1 (ru) | 1997-06-20 |
Family
ID=20168026
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU95108342/13A RU2081912C1 (ru) | 1995-05-22 | 1995-05-22 | Штамм вируса краснухи "орлов-в" для получения вакцины |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2081912C1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2492235C1 (ru) * | 2012-07-09 | 2013-09-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера" | Штамм вируса краснухи для получения медицинских иммунобиологических препаратов (мибп) |
RU2606848C2 (ru) * | 2015-05-21 | 2017-01-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера" (ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера) | Способ определения биологической активности вирусов кори, эпидемического паротита и краснухи при производстве ассоциированных препаратов (варианты) |
-
1995
- 1995-05-22 RU RU95108342/13A patent/RU2081912C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Best J.M. Epidemiol, Infect. 1991, v. 107, p. 17 - 30. Мешалова В.Н. Опыт получения и аттенуации краснушного штамма "Орлов"// Респираторные вирусные инфекции: Труды ЛНИИЭМ им. Пастера. - Л., 1973, с. 137 - 143. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2492235C1 (ru) * | 2012-07-09 | 2013-09-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера" | Штамм вируса краснухи для получения медицинских иммунобиологических препаратов (мибп) |
RU2606848C2 (ru) * | 2015-05-21 | 2017-01-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера" (ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера) | Способ определения биологической активности вирусов кори, эпидемического паротита и краснухи при производстве ассоциированных препаратов (варианты) |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU95108342A (ru) | 1996-12-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Jackwood et al. | Characteristics and serologic studies of two serotypes of infectious bursal disease virus in turkeys | |
JP4667507B2 (ja) | イヌインフルエンザを治療するワクチンおよび方法 | |
Wells et al. | Recovery from a viral respiratory infection. I. Influenza pneumonia in normal and T-deficient mice. | |
Hinze | New member of the herpesvirus group isolated from wild cottontail rabbits | |
JPH07501049A (ja) | ブタ生殖・呼吸系症候群ワクチン及び診断方法 | |
EP0027347B1 (en) | Feline infectious peritonitis virus, its preparation and vaccines containing it | |
Mushi et al. | Isolation and characterization of a herpesvirus from topi (Damaliscus korrigum, Ogilby) | |
Tenser et al. | Comparison of guinea pig cytomegalovirus and guinea pig herpes-like virus: pathogenesis and persistence in experimentally infected animals | |
JPH021807B2 (ru) | ||
RU2081912C1 (ru) | Штамм вируса краснухи "орлов-в" для получения вакцины | |
Kono et al. | An epidemic of Getah virus infection among racehorses: properties of the virus | |
RU2665849C1 (ru) | Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа О | |
Musser et al. | Measles virus growth in canine renal cell cultures | |
Dick et al. | CHARACTERISTICS OF PARA-INFLUENZA 1 (HA-2) VIRUS III: Antigenic Relationships, Growth, Interaction with Erythrocytes, and Physical Properties | |
Parker | Inactivation of African horse-sickness virus by betapropiolactone and by pH | |
Oxford et al. | Chick embryo lethal orphan (CELO) virus as a possible contaminant of egg-grown virus vaccines | |
Shishido et al. | GROWTH OF MEASLES VIRUS IN NERVOUS TISSUES 1. NEUROTROPIC PROPERTIES OF MEASLES VIRUS IN NEWBORN HAMSTERS | |
RU2184567C1 (ru) | Штамм feline calicivirus, используемый для контроля иммуногенной активности вакцин, изготовления специфических лечебно-профилактических и диагностических биопрепаратов | |
RU2801949C1 (ru) | Штамм "СК" вируса классической чумы свиней Pestivirus для изготовления биопрепаратов для специфической профилактики классической чумы свиней | |
RU2492235C1 (ru) | Штамм вируса краснухи для получения медицинских иммунобиологических препаратов (мибп) | |
RU2173344C2 (ru) | Вакцинный штамм вируса краснухи "орлов-д" и способ получения вакцины против краснухи | |
RU2129876C1 (ru) | Живая вакцина для профилактики кори | |
Diosi et al. | Recovery of a new herpesvirus from the ground squirrel (Citellus citellus) | |
Ueba et al. | Multinucleated Giant Cell Formation in BHK‐21‐528 Cell Monolayers Infected with Japanese Encephalitis Viruses 1 | |
RU2215031C1 (ru) | Штамм feline herpesvirus-1, используемый для контроля иммуногенной активности вакцин, изготовления специфических лечебно-профилактических и диагностических биопрепаратов |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20040523 |