HU213471B - Process for producing 1alpha-hydroxy-vitamin d4 - Google Patents
Process for producing 1alpha-hydroxy-vitamin d4 Download PDFInfo
- Publication number
- HU213471B HU213471B HU9201691A HU169192A HU213471B HU 213471 B HU213471 B HU 213471B HU 9201691 A HU9201691 A HU 9201691A HU 169192 A HU169192 A HU 169192A HU 213471 B HU213471 B HU 213471B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- vitamin
- hydroxy
- resulting
- cyclo
- ergosterol
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/59—Compounds containing 9, 10- seco- cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems
- A61K31/592—9,10-Secoergostane derivatives, e.g. ergocalciferol, i.e. vitamin D2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/59—Compounds containing 9, 10- seco- cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C35/00—Compounds having at least one hydroxy or O-metal group bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring
- C07C35/21—Compounds having at least one hydroxy or O-metal group bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring polycyclic, at least one hydroxy group bound to a non-condensed ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C401/00—Irradiation products of cholesterol or its derivatives; Vitamin D derivatives, 9,10-seco cyclopenta[a]phenanthrene or analogues obtained by chemical preparation without irradiation
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Description
A találmány biológiailag aktív új D4-vitamin-származék előállítását szolgáló eljárásra vonatkozik.
A találmány tárgyát képező vegyületet tartalmazó gyógyszerkészítmény gyógyászatilag hatásos mennyiségű új la-hidroxi-D4 vitaminvegyületet tartalmaz, és e készítmény alkalmas abnormális kalcium metabolizmus kezelésére.
A D4-vitamin közismerten az állatok és emberek kalcium metabolizmus szabályozásának fontos eleme, amint azt a Harrison’s Principals of Internál Medicine: 11. rész, „Disorders of Boné and Mineral Metabolism, 335. fejezet”, E. Braunwald és mtsai (kiadók), McGrawHill, New York, 1987,, 1860-1865. oldalak).
A D-vitamin két legismertebb alakja a D3-vitamin és a D2-vitamin. A D3-vitamin az állatok és emberek körében képződik endogén módon, míg a D2-vitamin forrásául a növények szolgálnak. A D2-vitamin abban különbözik a D3-vitamintól, hogy a C22 és C23 között kettős kötést a C24-en egy metilcsoportot tartalmaz. A D2 -és D3-vitamin emberekben, illetőleg patkányokban egyenértékű biopotenciállal rendelkezik.
A D4-vitamin, más néven besugárzott 22,23-dihidroergoszterol vagy 22,23-dihidro-D4-vitamin vagy 22,23dihidro-ergokalciferol abban különbözik a D3-vitamintól, hogy egy C24 metilcsoportot tartalmaz. A D4-vitamint először 1936-ban ismertették. Az ismertetést a Grab, W., Z. Physiol, Chem., 243 : 63 (936); MaDonald, F. G„ J. Bioi. Chem., 114 : IVX (1936) és Windaus A. és Trautmann G., Z. Physiol. Chem., 247 : 185-188 (1937) irodalmi helyen találjuk. Az ismertetések bizonyos véleménykülönbséget tartalmaznak a biológiai potenciál tekintetében és arra utalnak, hogy D4-vitamin patkányokban mutatott aktivitása a D3 aktivitásának 1/3a, és csirkékben 1/10-e vagy 1/5-e.
A D4-vitamin biológiai aktivitásának határozottabb megfogalmazását találjuk DeLuca és mtsai, Arch. Biochem. Biophys., 124 : 122-128 (1968) irodalmi helyen. A szerzők megerősítik, hogy a D4 kevésbé aktív mint a D3. DeLuca és mtsai azt állítják, hogy a D4-vitamin patkányokban mutatott aktivitása a D3-vitamin aktivitásának 2/3-a, és csirkékben 1/5-e.
DeLuca és mtsai arra hivatkoznak, hogy a D4-vitamin szintézist nem nagyon alkalmazzák, mióta azt először Windhaus és Trautmann ismertették, és hozzáteszik, hogy ez valószíntű azért van így, mert a D4-vitamin csak akadémiai érdeklődésre tarthat számot.
Tudomásunk szerint még ma is az a helyzet, hogy a D4-vitamin „csak akadémiai érdeklődésre tarthat számot”, ugyanis DeLuca és mtsai vizsgálatai óta nincsenek újabb kutatási eredmények. A Merck Index is azt írja a D4-vitaminról, hogy „biológiai aktivitása kétséges” (Merck Inde, S. Budavári (kiadó), 11. kiadás, Merck & Co., Rahway, N.J., (1989), 1579 oldal #9930).
Mióta DeLuca és mtsai feltalálták a D3-vitamin aktív alakját, az 1,25-dihidroxi-D3-vitamint (3 697 559 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás), valamint szintetikus prekurzorát, az la-hidroxi-D3-vitamint (3 741 996 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás), az érdeklődés leginkább az ilyen aktív D3-vitamin metabolitok gyógyászati alkalmazására irányul.
Sajnálatos, hogy bár ezek a D3-vitamin metabolitok ígéretes gyógyszerhatóanyagok, rendkívüli toxicitásuk miatt eddig nem kerültek gyógyászati alkalmazásra. így például toxicitásuk megakadályozza az aktív D3-vitamin és analógjai csontritkulás elleni vagy csontritkulás helyreállító alkalmazását. Számos kísérlet jelzi, hogy a csontritkulás megelőzéséhez vagy helyreállításához annyi hatóanyagra lenne szükség, amennyi hiperkalcémiához vagy hiper kalciuriához vezet. Ismertetik, hogy a vizsgálatok szerint a csontritkulás megelőzéséhez hatásos 2 pg/nap mennyiségű D3-vitamin a betegek 67%-ánál okoz mérgezést.
Szükség van tehát egy olyan alacsony toxicitású D metabolitra, amely gyógyszerként alkalmazható.
A találmány szerinti új la-hidroxi-D4-vitamin a D4vitamin bioaktív alakja.
Kutatásaink során azt találtuk, hogy ez az aktív D4vitamin sokkal nagyobb biopotenciállal rendelkezik, mint azt a D4-vitamin biológiai vizsgálatai korábban jelezték. Azt is megfigyeltük, hogy ez az új bioaktív vegyület kevésbé toxikus, mint biopotenciáljuk alapján várható lenne.
A találmány szerinti nagy aktivitású és alacsony toxicitású vegyület kalcium-metabolizmus rendellenességek kezelésére alkalmas hatóanyag.
A találmány szerinti új vegyület előnyösen alkalmazható kalciummetabolizmus rendellenességek gyógyítására alkalmas gyógyszerkészítmény hatóanyagaként.
A találmány szerinti új vegyület tanulmányozásához előállítási eljárásukat is ki kellett fejleszteni. Kifejlesztettük az la-hidroxi-D4-vitamin szintetikus előállítását,
A találmány további előnyeit, specifikus alkalmazási területeit, kompozíciós változatait, valamint fizikai és kémiai tulajdonságait a továbbiakban és a mellékelt rajzokon részletesen ismertetjük.
A rajzok rövid ismertetése a következő:
Az 1. ábrán a D4-vitamin szintézis előállítási lépéseit mutatjuk be; és a 2. ábrán a D4-vitaminból kiinduló la-hidroxi-D4-vitamin előállítási lépéseit ismertetjük.
A találmány tárgya la-hidroxi-D4-vitamin (la-OH-D4) szintetikus előállítási eljárása, de újak a tozilezett és gyűrűs D4-vitamin-származékok is.
A leírásban alkalmazott „biológiai aktivitás” vagy „biológiai aktív” kifejezés a vegyületek biokémiai tulajdonságaira, mint pl. metabolizmusra kifejtett hatására, például szérum kalciumkoncentrációra kifejtett hatására vagy megfelelő receptorkötő hatására, például D-vitamin receptorkötő hatására vonatkozik.
A találmány tárgya tehát eljárás la-hidroxi-D4-vitamin előállítására, oly módon, hogy ai)
i) ergoszterolt 22,23-dihidro-ergoszterollá alakítunk, ii) a kapott 22,23-dihidro-ergoszterolt besugárzással D4-vitaminná alakítjuk át, és iii) a kapott D4-vitamint la-hidroxi-D4-vitaminná hidroxilezzük;
a2) D4-vitamint la-hidroxi-D4-vitaminná hidroxilezünk.
HU 213 471 Β
Az (I) általános képletű vegyület előállítási eljárásának reakcióvázlatát az 1. és 2. ábrán ismertetjük (b. eljárás).
Az 1. ábrán láthatjuk, hogy a szintézis kiindulási anyagaként ergoszterolt alkalmazunk. Az ergoszterol a Barton és mtsai, JCS Perkin I 1976, 821-826. irodalmi helyen ismertetett eljárás szerint hat lépéses oldallánc telítési eljáráson megy át, és ennek eredményeként a (VIII) képletű 22,23-dihidro-ergoszterin keletkezik. A
22.23- dihidroergoszterolt ezután a Windans és mtsai, Z. Physiol. chem., 1937, 147 : 185 irodalmi helyen ismertetett eljárással besugárzásnak vetjük alá, és így (IX) képletű 22,23-dihidro-ergokalciferol-D4-vitamint kapunk.
A 2. ábrán láthatjuk, hogy a D4-vitamint ezután a Paaren és mtsai, J. Org. Chem., 1980,45 : 3253 irodalmi helyen ismertetett eljárással az la-hidroxi-D4-vitaminná hidroxilezzük.
Részletesebben úgy járunk el, hogy az ergoszterolt 3 β-acetáttá acilezzük. Az ergoszterol-acetátot az 5,6-kettős kötésnél hidroxi-halogénezésnek vetjük alá, és így 6a-klór-5a-hidroxi-származékot kapunk. A klórhidrint redukáljuk, majd 5a-hidroxi-(azaz 5a-ol)-származékká újraacilezzük. Az 5a-olt ezután az oldallánc telítésére hidrogénezzük. A kapott 3 P-acetoxi-ergoszt-7-en-5a-olt
22.23- dehidro-ergoszterollá redukáljuk . A 22,23dehidro-ergoszterolt ezután besugárzással D4-vitaminná alakítjuk át. A D4-vitamin tozilezésével 3p-tozil-D4- vitamint kapunk. A tozilát szolvolízissel 6-metoxi-3,5ciklo-D4-vitaminszármazékká alakítható. D4-ciklovitaminból allillikus oxidálással la-hidroxi-ciklovitaminszármazékot állítunk elő. Az la-hidroxi-ciklovitaminszármazékot ezután szolvolizáljuk, majd az 5-metoxicsoport eltávolítására és az la-hidroxi-D4-vitamin (5,6cisz-) 5,6-transz-la-hidroxi-D4-vitamintól való elválasztására Diels-Alder-típusú reakciónak vetjük alá.
Az (I) képletű vegyület a tapasztalatok szerint értékes gyógyászati hatóanyagok, ami azt jelenti, hogy kalciummetabolizmus szabályozószerként, elsősorban szérumkoncentráció szabályozó szerként alkalmazható. Az (I) képletű hatóanyag növeli a D-vitaminhiányos patkányok szérum kalciumkoncentrációját. Az (I) általános képletű hatóanyag gyógyászati értékét növeli, hogy a tapasztalatok szerint ez az anyag nem mérgező.
Az (I) képletű hatóanyagok LD50 vizsgálattal mért a D4-vitaminéhoz hasonló, és a megfelelő D3-vitaminétól állatgyógyászati területeken alkalmazható, és különösen hatásos abnormális kalcium- és foszfor-metabolizmus esetén.
A kalciummetabolizmus szabályozására alkalmas eljárásban például májelégtelenség, veseelégtelenség vagy gyomor- és bélrendszer-elégtelenség által kiváltott abnormális kalciummetabolizmust kezelünk.
Az (I) képletű vegyület profilaktikus vagy terapeutikus D-vitamin hiánybetegségek és kapcsolódó betegségek kezelésére alkalmazható. Ilyen betegség pédául a vese eredetű oszteodisztrofia, szteatorrea, antikonvulzívum okozta oszteomalácia, hipofoszfatémiás D-vitamin rezisztens angolkór, oszteoporózis, beleértve a posztmenopauzális oszteoporozist, szteroid-kiváltott oszteoporozis, valamint egyéb csonttömegveszteség, pszeudo (D-vitamin függő) angolkór, táplálkozási és maiabszorpciós angolkór, hipoparatiroidizmushoz társuló szekunder oszteomalácia és oszteopénia, sebészeti beavatkozást követő hipoparatiroidizmus, idiopátiás hipotiroidizmus, pszeudoparatiroidizmus és alkoholizmus által kiváltott betegségtünetek.
Az (I) képletű vegyületek olyan gyógyszerkészítmény hatóanyagaként alkalmazható, amely az aktív D3 -vitamin ismert analógjaihoz hasonlítva kevesebb mellékhatást okoz és kevésbé mérgező.
A találmány szerinti gyógyászatilag aktív hatóanyag a betegek, például emlősök, közöttük emberek kezelésére szokásosan alkalmazott gyógyszerek ismert előállítási eljárásaival állítható elő.
A találmány szerinti (I) képletű hatóanyag hagyományos adalékanyagokkal, például enterális (szájon át), parenterális vagy helyi alkalmazásra megfelelő és a hatóanyaggal károsan nem reagáló hordozókkal társítva alkalmazható.
Gyógyászatilag megfelelő hordozók például a víz, sóoldatok, alkoholok, arabmézga, növényolajok (például kukoricaolaj, gyapotmagolaj, mogyoróolaj, olívaolaj, kókuszolaj), halmájolajok, olajos észterek, mint pl. Polisorbate 80, poli(etilén-glikol)-ok, zselatin, szénhidrátok (például laktóz, amilóz és keményítő), magnézium-sztearát, talkum, kovasav viszkózus paraffin, zsirsav-monogliceridek és digliceridek, pentaeritritol-zsírsav-észterek, hidroxi-metil-cellulóz és poli(vinil-pirrolidon).
A gyógyszerkészítményt alávethetjük sterilizáló eljárásnak is, és társíthatjuk segédanyagokkal, például csúsztatószerekkel, konzerválószerekkel, nedvesítőszerekkel, emulgeálószerekkel, ozmózis nyomás-befolyásoló sókkal, pufferekkel, színezékekkel, ízesítőszerekkel és/vagy egy vagy több egyéb hatóanyaggal, például D3-vagy Dj-vitaminnal és ezek la-hidroxilezett metabolitjaival, konjugált ösztrogénekkel vagy ekvivalens vegyületeikkel, antiösztrogénekkel, aklcitoninnal, bifoszfonátokkal, kalciumkiegészítő szerekkel, kobalominnal, pertussis toxinnal és borral.
Parenterális készítményként előállíthatunk injektálható steril oldatokat, előnyösen olajos vagy vizes oldatokat, szuszpenziókat, emulziókat vagy implantátumokat, köztük végbélkúpokat. Egység adagolásra megfelelőek az ampullák.
Enterális alkalmazásra előállíthatunk elsősorban tablettákat, drazsékat, folyadékokat, cseppeket, végbélkúpokat, cukorkákat, porokat vagy kapszulákat. Édes hordozóanyag-igény esetén szirup- vagy elixír-készítményt állítunk elő.
Előállíthatunk hosszú hatásidejü vagy közvetlen kibocsátású készítményeket is, például liposzom vagy egyéb olyan készítményeket, amelyekben a hatóanyagot fokozatosan lebomló bevonattal, például mikrokapszula vagy többrétegű bevonattal látjuk el.
A nem permetezhető félszilárd vagy szilárd helyi alkalmazásra szánt készítményt a helyi alkalmazásra megfelelő, előnyösen a víznél nagyobb dinamikus viszkozitású hordozó hozzáadásával állítjuk elő. Ilyen készítmé3
HU213 471 Β nyék az oldatok, szuszpenziók, emulziók, krémek, kenőcsök, porok, tapaszok, balzsamok, aeroszolok, bőrön át flastromok, amelyek szükség esetén sterilizálhatok vagy segédanyagokkal, például konzerválószerekkel, stabilizátorokkal, demulgeáló szerekkel vagy nedvesítő szerekkel társíthatok.
A végbélen át alkalmazható gyógyszerkészítményt valamilyen kúpokhoz megfelelő alappal, például kakaóvajjal vagy trigliceridekkel társítva állítjuk elő. A hosszabb tárolásra szánt készítményhez előnyösen valamilyen antioxidánst, például aszkorbinsavat, butilezett hidroxi-anizolt vagy hidrokinont adunk.
Előnyös találmány szerinti készítmények a szájon át alkalmazható készítmények. A találmány szerinti készítményeket általában olyan egységadag alakban állítjuk elő, amelyek 0,5-25 pg hatóanyagot és egy gyógyászatilag elfogadható hordozót tartalmaznak. A találmány szerinti hatóanyagok napi adagja általában 0,01-0,5μ g/ testtömeg kg, előnyösen 0,04 - 0,3 pg/testtömeg kg.
A ténylegesen alkalmazott, előnyös hatóanyagmennyiség természetesen az alkalmazott hatóanyag-hatékonyság, a hatóanyag-készítmény, az alkalmazott kezelési eljárás, az adott állapot és a kezelendő mikroorganizmus függvénye. Például valamely beteg esetén a specifikus adag függ a beteg korától, testtömegétől, általános egészségi állapotától, nemétől, táplálkozásától, a kezelés szabályozásától és módjától, a kiválasztási sebességtől, az alkalmazott egyéb gyógyszerektől és a kezelendő betegség mértékétől. Egy adott gazdaszervezet kezelésére megállapított adag hagyományos szempontok figyelembevételével, például a szóban forgó hatóanyag ismert hatóanyagokkal való összehasonlításával történhet. Az összehasonlító eljárást valamilyen szokásos gyógyszervizsgálati előírás szerint végezzük.
A találmány szerinti hatóanyag további alkalmazási területét képező állatgyógyászati hatóanyagot állati gyógyszerkészítményekben, például háziállatok hipokalcémia elleni kezelése esetén tápkészítményekben alkalmazzuk.
A találmány szerinti hatóanyag által tápkészítményben való alkalmazásakor a készítményhez annyi hatóanyagot adunk, hogy az állat normális etetéssel 0,01-0,5 pg/kg/nap hatóanyagot kapjon.
A következő példákat a találmány részletesebb bemutatására ismertetjük.
A példákban a hőmérsékletet °C-ban, a tömeget tömegrészként és tömeg%-ban adjuk meg, kivéve, ha a leírásban más jelölést alkalmazunk.
A proton magmágneses rezonancia spektrumának (Ή-NMR) felvételére IBM Sy-200 (200 MHz) és Bruker Am-400 (400 MHz) 3000 Computert, CDClj oldatokat és belső standardként CHCl,-at alkalmazunk.
Az infravörös spektrumot Fourier transzformálással (FTIR) kálium-bromid (KBr) pellet- vagy folyadékmintákkal vesszük fel.
A tömegspektrum felvételét Finnigan MAT-90 tömegspektrométerrel, 20 eV/Cl alkalmazásával végezzük.
Az olvadáspont-meghatározást Hoover-Thomas (kapillár) UniMelt és Fischer-Johns olvadáspont-meghatározó készülékkel (csúszófedeles) végezzük.
1. példa la-Hidroxi-D4-vitamin szintézis (II) ergoszterolt (III) képletű ergoszterol-acetáttá alakítunk át úgy, hogy 600 ml vízmentes piridin és 68 ml (0,7 mól) ecetsavanhidrid elegyben feloldunk 100 g (0,25 mól) ergoszterolt. Az oldatot szobahőmérsékleten keverjük egy éjszakán át, majd 1,2 liter jég hozzáadásával kicsapatjuk. A csapadékot 5*400 ml vízzel, majd 400 ml acetonitrillel mossuk. A kapott terméket levegőn megszárítjuk, és így 79 g (71%) olyan fehér kristályos ergoszterol-acetátot kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
Olvadáspont: 169-171 °C;
‘H-NMR: (400 MHz, CDC13), őppm: 2,05 (3H, s, 3P-CH3CO), 4,65-4,75 (IH, m, 3a-H), 5,15-5,25 (2H, m, 22-H és 23-H), 5,4 (IH, d, 6-H), 5,6 (IH, d, 7-H).
FTIR (KBr): 1734 cm-' (C = O elnyúlt) 968 cm’1 (C-H elhajlott).
g (0,062 mól) (III) képletű ergoszterol-acetátot feloldunk 2,5 liter frissen desztillált oxigénmentesített toluolban. Ehhez az oldathoz 30 perc alatt nitrogén atmoszférában -78 °C-on 9 ml (0,111 mól), 240 ml vízmentes diklór-metánban oldott kromilkloridot adunk. A reakcióelegyet -78 °C-on keveijük további 50 percig, majd egy részletben 62 ml nátrium-bór-hidriddel telített etanol oldatot adunk hozzá. A reakcióelegyet -78 °C-on keveijük további 50 percig, majd 3 liter 3 N sósavat és 3 liter benzolt tartalmazó kétfázisú rendszerbe öntjük. A szerves réteget elválasztjuk, majd 1*2 liter vízzel és 2*1 liter NaCl-oldattal mossuk, és vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk. A száraz oldatot leszűrjük, és vákuumban koncentráljuk. A nyers kristályos terméket 280 ml acetonitrillel kezeljük, majd a kapott szuszpenziót leszüljük.
így iszapos anyagként 12,5 g (41%) olyan (IV) képletű fehér kristályos 3p-acetoxi-6a-klór-ergoszta-7,22-dion-5a-olt kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
Olvadáspont: 190-192 °C;
’H-NMR: (400 MHz, CDC13), őppm: 2,05 (3H, s, 3|3-OAc), 4,65-(lH, d, 6β-Η), 5,1 (IH, s, 7-H), 5,1-5,3 (2H, m, 22-H és 23-H):
FTIR (KBr): 1732 cm-’ (C=O elnyúlt) 968 cm’’ (C-H elhajlott), 3437 cm ’ (O-H elnyúlt).
21,4 g (IV) képletű (0,044 mól) 3p-acetoxi-6a-klór-ergoszta-7,22-dién-5a-olt feloldunk 400 ml vízmentes THF-ben, majd az oldatot 750 ml vízmentes THF-ben oldott 2,66 g (0,07 mól) lítium-alumínium-hidridhez adjuk keverés közben. Az elegyet visszafolyatás mellett melegítjük 3 órán át, majd 0 °C-ra hütjük. A felesleges hidridet telített nátrium-szulfát oldattal elbontjuk, majd az oldatot vízmentes nátrium-szulfáton szűrjük. A szűrletet bepároljuk, a szilárd anyagot 0 °C-on közvetlenül 110 ml ecetsavanhidriddel és 220 ml vízmentes piridinnel kezeljük. Az oldószert csökkentett nyomáson elpárologtatjuk. így 12,75 g (61%) olyan (V) képletű 3β-acetoxi-ergoszta-7,22-dién-5a-olt kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
Olvadáspont: 229-232 °C;
FTIR (KBr) 1736 cm-’ (C=O elnyúlt), 3460 cm’1 (O-H elnyúlt), 972 cm ’ (C-H elhajlott).
HU 213 471 Β
2,5 g (0,0055 mól) (V) képletű 3p-acetoxi-ergoszta-7,22-άίέη-5β-ο1ί és 280 ml etil-acetátban oldott, frissen készített 0,5 g platina-oxidot 1 bar hidrogénnyomáson 6 órán át rázunk.
A katalizátort leszűrjük, a szürletet bepároljuk, a kapott nyers acetátot diklór-metánban oldjuk, és szilikagélen kromatografáljuk. Diklór-metános eluálással 2,15 g (85%) olyan, lényegében tiszta, fehér, kristályos 3 0-acetoxi-ergoszt-7-én-5a-olt kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
Olvadáspont: 228-232 °C;
'H-NMR: (400 MHz, CDC13), őppm: 2,05 (3H, s, 3β-ΟΑε), 5,05-5,20 (2H, m, 3a-H és 7-H);
FTIR (KBr): 1736 cm’1 (C=O elnyúlt), 3462 cm”' (O-H elnyúlt). 12,0 g (0,0262 mól) 800 ml vízmentes piridinben oldott (VI) képletű 33-acetoxi-ergoszt-7-én-5a-olhoz 0 °C-on nitrogén atmoszférában 9,7 ml 170 ml vízmentes piridinben oldott, újradesztillált tionil-kloridot adunk. Az oldatot 25 óra múlva 1,5 liter jéghideg vízzel hígítjuk, majd először 2,5 liter, majd 1,5 liter éterrel extraháljuk.
Az egyesített extraktumokat 2* 1,0 liter nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, majd 2* 1,5 liter 1N sósavoldattal és ezt követően 1 liter vízzel mossuk.
Az éteres oldatot magnézium-szulfáton szárítjuk, szűrés után csökkentett nyomáson bepároljuk, és a maradékot 100 ml acetonitrilben szuszpendáljuk. A terméket leszűrjük, és acetonitrilben átkristályosítjuk. így 4,5 g (39%) olyan fehér kristályos (VII) képletű 22,23-dihidroergoszteril-acetátot kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
Olvadáspont: 144-147 °C;
'H-NMR: (400 MHz, CDC13), őppm; 2,05 (3H, s, 3β-ΟΑε), 4,65-4,75 (1H, m, 3a-H), 5,4 (1H, d, 6-H), 5,6 (1H, d, 7-H).
FTIR (KBr): 1734 cm’1 (C=O elnyúlt).
4,8 g (0,011 mól) (VII) képletű 22,23-dihidroergoszterilacetátot szobahőmérsékleten, keverés közben egy 1,1 liter vízmentes éterben 2,5 g (0,066 mól) lítium-alumínium-hidridet tartalmazó, frissen készített szuszpenziót adunk. Az elegyet szobahőmérsékleten keverjük 2 órán át. A felesleges lítium-alumínium-hidrid elbontására az oldathoz 5 N nátrium-hidroxid-oldatot és 500 ml vizet adunk. A vizes oldatot 4x250 ml éterrel extraháljuk. Az egyesített éteres extraktumokat 1 liter nátrium-klorid oldattal mossuk, majd nátrium-szulfáton szárítjuk. Az oldatot csökkentett nyomáson bepároljuk, és így 4,1 g (94%) olyan fehér kristályos (VIII) képletű
22,23-dihidroergoszterolt kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
Olvadáspont: 147-150 °C;
'H-NMR: (400 MHz, CDC13), őlppm: 3,6-3,7 (1H, m, 3a-H), 5,4 (1H, d, 6H), 5,6 (1H, d, 7-H);
FTIR (KBr): 3400 cm ' (O-H elnyúlt).
2,0 g (5,0 mmol) (VIII) képletű 22,23-dihidroergoszterolt 600 ml 4 : 1 térfogatarányú dietil-éter: benzol elegyben oldunk, és egy vízzel hűtött kvarcedényben argon atmoszférában, keverés közben, három órán át besugározzuk (Hannovia, bemerülő lámpa, 450 W). Az oldatot vákuumban bepároljuk, a kapott gumiszerü szilárd anyagot 100 ml etanolban oldjuk, és visszafolyatás mellett melegítjük argon atmoszférában, 8 órán át. Az oldatot ezután vákuumban koncentráljuk, a maradékot szilikagél oszlopon adszorbeáljuk, és 30 : 70 térfogatarányú etil-acetát: hexán eleggyel eluáljuk. így 1,2 g (60%) olyan (IX) képletű E>4-vitamint (22,23-dihidroergokalciferol) kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
'H-NMR: (400 MHz, CDC13), őppm: 0,55 (3H, s, 18-H3), 0,78 (6H, dd, 26-H3 és 27-H3), 0,87 (3H, d, 21-H3), 0,93 (3H, d, 28-H3), 3,94 (1H, m, 3-H), 4,82 (1H, m (éles), 19-H), 5,04 (1H, m (éles), 19-H), 6,04 (1H, d, 7-H), 6,24 (1H, d, 6-H).
ml vízmentes piridinben oldott 3,0 g (7,5 mmol) (IX) képletű D4-vitaminhoz 0 °C-on 3,6 g (19 mmol) frissen átkristályosított p-toluol-szulfonil-kloridot adunk.
A reakcióelegyet 5 °C-on keverjük 24 órán át, majd 100 ml jeges telített nátrium-hidrogén-karbonát oldatba öntve keverés közben kvencseljük. A vizes szuszpenziót 3x 100 ml diklór-metánnal extraháljuk. Az egyesített extraktumokat 3x200 ml 10%-os sósavoldattal, majd 3χ200 ml telített nátrium-hidrogén-karbonát oldattal és 2x200 ml telített nátrium-klorid oldattal mossuk, magnézium-szulfáton szárítjuk, és vákuumban koncentráljuk, így 3,5 g (84%) (X) képletű D4-vitamin-tozilát új intermediert kapunk, amelynek jellemzői a következők:
‘H-NMR: (400 MHz, CDC13), őppm; 0,54 (3H, s, 18—H3), 0,78 (6H, dd, 26-H3 és 27-H3), 0,87 (3H, d, 21-H3), 0,96 (3H, d, 28-H3), 2,45 (3H, s, CH3 (tozilát) 4,68 (3H, m, 3-H), 4,82 (1H, m (éles), 19-H), 5,04 (1H, m (éles), 19-H), 5,95 (1H, d, 7-H), 6,09 (1H, d, 6-H), 7,34 és 7,79 (4H, d, aromás).
200 ml metanolban szuszpendált 17,0 g (202 mmol) nátrium-hidrogén-karbonáthoz keverés közben hozzácsepegtetünk 3,5 g (6,3 mmol) 10 ml vízmentes diklóretilben oldott D4-vitamin-tozilátot. A reakcióelegyet egy éjszakán át argon atmoszférában melegítjük visszafolyatás közben, majd szobahőmérsékletűre hütjük, és vákuumban körülbelül 50 ml-re koncentráljuk. A reakciókonc entrátumot 600 ml éterrel hígítjuk, 3x300 ml vízzel mossuk, magnézium-szulfáton szárítjuk, és vákuumban koncentráljuk. A maradékot szilikagél oszlopra visszük, és 10 : 90 térfogatarányú etil-acetát : hexán eleggyel eluáljuk. így 1,5 g (58%) olyan (XI) képletű új 3,5-ciklo-D4-vitamin-származék intermediert kapunk sűrű olaj formájában, amelynek elemzési eredményei a következők:
'H-NMR: (400 MHz, CDC13), őppm: 0,56 (3H, s, 18-Hj), 0,78 (6H, dd, 26-H3 és 27-H3), 0,87 (3H, d, 21-H3), 0,94 (3H, d, 28-H3), 3,28 (3H, s, OCH3,4,2 (1H, d, 6-H), 4,91 (1H, m, (éles), 19-H), 4,98 (1H, m, 7-H), 5,08 (lH,d (éles), 19-H).
Egy háromnyakú lombikban 150 ml vízmentes diklór-metánban szuszpendált 0,22 g (2 mmol) szelén-oxidhoz keverés közben 2,6 ml (7,8 mmol) vízmentes toluolban oldott vízmentes tercier-butilhidroperoxidot (3 mólos oldat) adunk. Az elegyet argon atmoszférában keverjük három órán át. Az elegyhez 0,3 ml (3,7 mmol) piridint és 50 ml diklór-metánban oldva 1,5 g (3,6 mmol) (XI)
HU 213 471 Β képletű D4-ciklovitamint adunk. Az elegyet 30 percig keverjük és 200 ml 10%-os nátrium-hidroxid vizes oldatot adunk hozzá. A reakcióelegyet 500 ml éterrel hígítjuk, és a fázisokat elválasztjuk. A szerves fázist 3*200 ml 10%-os nátrium-hidroxid oldattal, 2*200 ml vízzel és 2*200 ml telített nátrium-klorid oldattal mossuk, magnézium-szulfáton szárítjuk, és vákuumban koncentráljuk.
A maradékot szilikagél oszlopon abszorbeáljuk, 30 : 70 térfogatarányú etil-acetát : hexán eleggyel eluáljuk, és így 0,45 g (29%) olyan (XII) képletű la-hidroxi-3,5-ciklo-D4-vitamin-származék új intermediert kapunk olaj formájában, amelynek elemzési eredményei a következők:
'H-NMR (400 MHz, CDC13), őppm: 0,54 (3H, s, I8-H13 0,78 (6H, dd, 26-H3 és 27-H3), 0,86 (3H, d, 21-H3), 0,95 (3H, d, 28-H3), 3,26 (3H, s, OCH3), 4,2 (1H, d, 6-H), 4,22 (1H, m, 1-H), 4,95 (1H, d, 7-H), 5,18 (lH,d, 19-H), 5,25 (1H, d, 1-H).
4,5 ml dimetil-szulfoxid és 3,6 ml jégecet elegyben oldott 0,45 g (1,05 mmol) (XII) képletű la-hidroxi-3,5ciklo-D4-vitamin-származékot 50 °C-on, argon atmoszférában melegítünk 1 órán át. A reakcióelegyet ezután 100 ml jeges telített nátrium-hidrogén-karbonát oldatba öntjük, és 3*200 ml éterrel extraháljuk. Az egyesített extraktumokat 3*200 ml telített nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, majd 3*200 ml vízzel és 3*20 ml nátrium-klorid oldattal mossuk, magnézium-szulfáton szárítjuk, és vákuumban koncentráljuk. így 0,4 g (92%) olyan elegyet kapunk, amely a tömegspektrometriás elemzés szerint 4 : 1 arányú 5,6-cisz- és 5,6-transz-lcc-hidroxi-D4-vitamint tartalmaz. A 0,4 g (0,97 mmol) 5,6- ciszés 5,6-transz-la-hidroxi-D4-vitamint 25 ml etil-acetátban oldjuk, és 0,08 g (0,8 mmol) frissen átkristályosított maleinsavanhidriddel kezeljük. A kapott elegyet vákuumban bepároljuk, és a nyers elegyet szilikagél oszlopon 1 : 1 térfogatarányú etil-acetát: hexán eleggyel eluáljuk. így 90 mg (23%) olyan (I) képletű új 5,6-ciszla-hidroxi-D4-vitamin formát kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
olvadáspont: 128-130 °C.
IRmax (tiszta): 3400 cm“' (OH elnyúlt);
'H-NMR (400 MHz, CDC13), őppm; 0,55 (3H, s,
18- H), 0,79 (6H, dd, 26-H és 27 H3), 0,87 (3H, d, 21-H), 0,94 (3H, d, 28-H3), 4,24 (1H, m, 3-H), 4,44 (1H, m, 1-H), 5,02 (1H, m (éles), 19-H), 5,34 (1H, m (éles),
19- H), 6,02 (1H, d, 7-H), 6,4 (1H, d, 6-H); tömegspektrum [Cl] m/e (relatív intenzitás): 415 (M+l), 41%), 397, (M+1-0H 100%), 379 (27%), 135 (22%).
2. példa la-Hidroxi-D4-vitamin biológiai hatásvizsgálata
Elválasztott hímpatkányokat (Holtzman törzs, Holtzman Company, Madisomn, Wisconsin) megfelelő mennyiségű kalciumot (0,47 tömeg%) és foszfort (0,3 tömeg%) tartalmazó D-vitamin hiányos táplálékkal etettünk. Ez a táplálék 3—4 héten belül olyan erős D-vitamin hiányos állapotot idézett elő, amelyet alacsony szérum kalciumtartalom és gyenge növekedés jellemzett. A táplálék hatására szérum kalciumérték 4 hét után 7 mg/dl alá csökkent. A patkányokat ezután 4 csoportra osztottuk és egyik részüknek szájon át megfelelő hordozóban, például kókuszolajban, la-hidroxi-D4-vitamint, másik részüknek csak hordozót (kontroll) adtunk. Ezt a kezelést 14 napig folytattuk. A patkányokat az utolsó adagot követő 24 óra múlva leöltük, és a vér kalciumtartalmát standard laboratóriumi eljárással mértük. A kapott eredményeket az 1. táblázatban foglaljuk össze.
1. táblázat
Szérum kalciumkoncentráció-növekedés
| Vegyület | adag [pg/kg/nap] | patkány szám | szérum kalciumkoncentráció ± %-os eltérés |
| Kontroll | 10 | 6,l±0,48 | |
| la-0H-D4 | 0,042 | 8 | 7,l±0,80 |
| 1h-OH-D4 | 0,250 | 7 | ll,6±0,45 |
| la-OH-D4 | 1,500 | 9 | 12,7±0,37 |
Az 1. táblázat adataiból láthatjuk, hogy az la-hidroxiD4-vitamin hatásosan növeli a D-vitamin hiányos patkányok szérum kalciumkoncentrációját, azonban a válasz láthatóan dózisfüggő.
A válasz mértéke előnyösen hasonló a Wientroub és mtsai által a fentiekhez hasonló kísérleti körülmények között lefolytatott, D-vitamin hiányos patkányok 1,25-dihidroxi-D3-vitaminnal végzett kezelésénél kapottakkal.
Az ismertetést a Wientroub, S., Price, P. A., Reddi, A.H., The Dichotomy in the Effects of 1,24 dihydroxy vitamin D3 and 24,25 dihydroxy vitamin D3 on Boné Gamma-Carboxyglutamic Acid-Containing Protein in Serum and Boné in vitamin D-Defícient Rats, Calcif. Tissue Inter. (1987) 40 : 166-172 irodalmi helyen találjuk.)
3. példa
Toxicitás vizsgálat
Az la-0H-D4 akut orális toxicitását úgy mértük, hogy jól ismert eljárással meghatároztuk az átlagos halálos adag (LD50) mértékét.
A patkányokat 8-10 héten át standard laboratóriumi táplálékkal etettük. Mindkét nembeli állatnak egy orális adag la-OH-D4-t adtunk, az állatokat 14 napig figyeltük, és a pusztulási számot feljegyeztük. A kapott LD50 értékek:
hímeknél 1,0 mg/kg és nőstényeknél 3,0 mg/kg.
Az la-hidroxi-D2-vitamin ugyanilyen körülmények között végzett LD50 vizsgálatával 1,7 és 1,8 mg/kg eredményeket kaptunk. A korábbi vizsgálatok szerint az la-hidroxi-D2 toxicitása kisebb, mint az l-hidroxi-D3-vitaminé. (A mérés ismertetését megtaláljuk a Sjoden, G., Smith, C., Lindgren, U., and DeLuca, H.F., Proc. Soc. Experimental Bioi. Med., 178 : 432—436 (1985).
4. példa (oltalmi körön kívüli példa)
1,2 5-Hidroxi-D4-vitamin előállítás és izolálás
A találmány szerinti la-hidroxi-D4-vitamint a vegyü6
HU 213 471 Β let néhány termékké, köztük az l,25-dihidroxi-D4-vitamin metabolittá alakító tenyésztett humán májsejtekkel inkubáljuk.
Az 1,25-metabolitot nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással izoláljuk és tisztítjuk, és gázkromatográfiás tömegspektrométeres eljárással azonosítjuk. A vonatkozó kísérletek azt igazolják, hogy az 1,25-dihidroxi-D4-vitamin a humán D-vitamin receptor fehérével jó kötöaffinitást mutat, ami biológiai aktivitását igazolja.
Az alkalmazott eljárás a Strugnell és mtsai., Biochem. Pharm. Vol. 40 : 333-341 (1990).
5. példa (oltalmi körön kívüli példa)
1,24-Dihidroxi-D4-vitamin előállítás és izolálás
Az 1,24-dihidroxi-D4-vitamin előállítást és izolálást a fenti 4. példa szerinti eljárással végezzük. A találmány szerinti 1 a-hidroxi-D4-vitamint néhány termékké, köztük az 1,24-dihidroxi D4-vitamin metabolittá alakító tenyésztett humán májsejtekkel inkubáljuk. Az 1,24metabolitot nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással izoláljuk és tisztítjuk, és gázkromatográfiás tömegspektrométeres elemzéssel azonosítjuk.
A vonatkozó kísérletek azt igazolják, hogy a metabolitok a humán D-vitamin receptor fehérjével való kötőaffinitást mutatnak, ami biológiai aktivitásukat igazolja.
6. példa
Hiperkalcémia hatásvizsgálat
Nőstény patkányokat 0,8 tömeg% kalciumot és 0,6 tömeg% foszfort tartalmazó táplálékkal etettünk. A patkányokat négy csoportra osztottuk, és az egyik csoportnak 13 héten át hordozóval, mint például kókuszolajjal társított la-OH-D4-t a másik (kontroll) csoportnak önmagában hordozót adtunk, a kezelést szájon át végeztük. Az utolsó adag után 24 órával a patkányokat leöltük, és standard eljárással meghatároztuk szérum kalciumszintjüket.
Ez a kísérlet azt igazolta, hogy a szérum kalciumkoncentráció 2,5 pg/kg/nap la-0H-D4 koncentráció hatására nem vagy csak kismértékben emelkedik.
7. példa
További biológiai hatásvizsgálat
Hím patkányokat D-vitamin-hiányos és alacsony kalciumkoncentrációjú (0,02 tömeg%) táplálékkal etettünk. A patkányokat 4 hét múlva 4 csoportra osztottuk, és a csoportoknak intravénásán hordozóban, mint pl. etanolban lévő la-OH-D4-gyel vagy önmagában etanolt adtunk. Az alkalmazás után 60 óra múlva a patkányokat leöltük, és a Martin and DeLuca, Am. J. Physiol. 216: 1352-1359. irodalmi helyen ismertetett eljárással, a kifordított patkóbél segítségével mértük a bélrendszeri kalciumátvitelt.
Az eljárás azt igazolja, hogy a bélrendszeri kalciumátvitelt stimulálása mennyiségfüggő.
8. példa
Hatásvizsgálat
A kísérletben 55 és 75 év közötti posztmenopauzális, oszteoporotikus bejáró beteg klinikai vizsgálatát végeztük.
A kísérletben résztvevő 120 beteget három kezelt csoportra osztottuk, és a kísérletet 12-24 hónapig végeztük. A csoportok közül kettőnek állandó mennyiségű, azaz két különböző dózisban több, mint 3,0 pg/nap mennyiségű a-D4-vitamint és a többi tápanyaggal bevitt kalciumot (500 - 800 mg/nap) kapott, és nem alkalmaztunk kiegészítő kalciumot.
A betegcsoportok kezelés előtti és utáni vizsgálatát a következőknek megfelelően végeztük:
a) teljes testre vonatkozó, radiális, combcsonti és/vagy gerinccsonti ásványsűrüség-meghatározás, röntgensugár abszorpciometriás (DEXA) méréssel;
b) csípőforgó szövetvizsgálat; és
c) szérum oszteokalcin meghatározás.
A biztonsági méréseket vizelet hidroxi-prolin kiválasztás, szérum és vizelet kalciumszint, kreatinin kiválasztás, vérkarbamid nitrogéntartalom és egyéb szokásos meghatározásokkal végeztük.
A kísérlet azt igazolja, hogy az la-D4-vitaminnal kezelt betegek a placebóval kezelt betegekhez képest sokkal nagyobb teljes testre vonatkozó radiális, combcsonti és/vagy gerinccsonti ásványsürűséget mutatnak. Ezenkívül a kezelt betegeknél a szérum oszteokalcinszint emelkedés is sokkal nagyobb. A kezelt betegek csontszövettani vizsgálata azt mutatja, hogy az la-D4vitamin normál csontképződést stimulál.
A figyelt biztonsági paraméterek azt mutatják, hogy az la-D4-vitaminnal végzett kezelés csak elhanyagolható mértékű hiperkalcémiát vagy hiperkalciuriát vagy egyéb metabolikus zavart okoz.
9. példa
Hatásvizsgálat
A kísérletet 55 és 60 év között, egészséges posztmenopauzális nők klinikai vizsgálatával végeztük.
A kísérletben résztvevő 80 alanyt 2 kezelt csoportra osztottuk, és a kísérletet 12-24 hónapig végeztük. Az egyik csoportnak állandó mennyiségű (azaz 3,0 pg/nap mennyiség feletti) 1 a-D4-vitamint, a másik csoportnak placebót adtunk. A kísérletet a fenti 2. példa szerinti eljárással végeztük.
A kísérlet eredményei azt igazolják, hogy az la-D4vitaminnal kezelt páciensek az alapértékekhez képest kisebb mértékűt teljes testre vonatkozó, radiális, combcsonti és/vagy gerinccsont sűrűségveszteséget mutatnak. A placebóval kezelt pácienseknél pedig az alapértékekhez képest lényeges mértékű fenti paraméterromlást tapasztaltunk.
A megfigyelt biztonsági paraméterek azt mutatják, hogy az ilyen mértékű la-D4-vitamin adagolás hosszú ideig biztonságosan folytatható.
10. példa
Hatásvizsgálat
A kísérletet 30 vesebeteg rendszeres hemodializisen áteső férfi és/vagy nőbeteggel végeztük egy 12 hónapos, kétszeresen vak, placebokontrollált klinikai vizsgálatban.
HU 213 471 Β
A páciensek mindegyikét egy olyan 8 hetes kontrolivizsgálatnak vetettük alá, amelyben védő mennyiségű Dj-vitamin adagot (400 IU/nap) kaptak. A kontroll időszak után a pácienseket két véletlenszerű kezelt csoportra osztottuk. Az egyik csoportnak állandó mennyiségű (azaz több, mint 3,0 pg/nap) la-D4-vitamint és normál táplálékkal bevitt kalciumot kapott, és nem alkalmaztunk kiegészítő kalciumot.
A két betegcsoport kezelés előtti és utáni vizsgálatait a következők szerint végeztük:
a) bélrendszeri kalcium abszorpció közvetlen mérés;
b) teljes testre vonatkozó radiális, csípőcsonti és/vagy gerinccsonti ásvány sűrűség-meghatározás; és
c) szérum kalcium és oszteokalcin meghatározás.
A biztonsági méréseket a szérum kalciumszint rendszeres figyelésével végeztük.
Az egyszeres vagy kétszeres izotóp eljárással végzett klinikai elemzések eredményei azt mutatják, hogy az 1 a-D4-vitamin jelentősen növeli a szérum oszteokalcinszintet és a bélrendszeri kalcium abszorpciót. A hatóanyaggal kezelt páciensek az alapértékekhez viszonyítva normalizálódott szérum kalciumszintet, stabil teljes testre vonatkozó radiális, combcsonti és/vagy gerinccsonti ásványsürűséget mutatnak. A placebóval kezelt betegeknél azonban gyakori a hipokalcémia, lényegesen csökken a teljes testre vonatkozó radiális combcsonti és/vagy gerinccsonti ásványsűrűség. A kezelt csoportoknál fellépő hiperkalcémia elhanyagolható mértékű.
Természetesen a találmány különböző változatai is a találmány tárgyát képezik.
Claims (5)
1. Eljárás (I) képletű la-hidroxi-D4-vitamin előállítására, azzal jellemezve, hogy aj)
i) ergoszterolt 22,23-dihidro-ergoszterollá alakítunk, ii) a kapott 22,23-dihidro-ergoszterolt besugárzással D4-vitaminná alakítjuk át, és iii) a kapott D4-vitamint la-hidroxi-D4-vitaminná hidroxilezzük; vagy a2) D4-vitamint la-hidroxi-D4-vitaminná hidroxilezünk; vagy bi)
i) D4-vitamin tozilálásával (X) képletű D4-vitamin-tozilátot állítunk elő, ii) a kapott D4-vitamin-tozilátot (XI) képletű 3,5-ciklo-D4-vitamin-származékká szolvolizáljuk, iii) a kapott 3,5-ciklo-D4-vitamin-származékot lahidroxi-3,5-ciklo-D4-vitamin-származékká oxidáljuk, iv) a kapott la-hidroxi-3,5-ciklo-D4-vitamin-származékot szolvolizáljuk, majd a Diels-Adler reakcióval la-hidroxi-D4-vitaminná alakítjuk át.
b2) (XII) képletű la-hidroxi-3,5-ciklo-D4-vitaminszármazékot szolvolizálunk, majd Diels-Adler reakcióval la-hidroxi-D4-vitaminná alakítjuk át.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az a] szerinti eljárás i) lépésének, kivitelezése során
i) ergoszterol acilezésével ergoszteril-acetátot állítunk elő, ii) a kapott ergoszteril-acetát hidroxi-halogénezésével 3 P-acetoxi-6a-klór-ergoszta-7,22-dién-5a-olt állítunk elő, iii) a kapott 3P-acetoxi-6a-klór-ergoszta-7,22-dién-5a-ol redukálásával és újraacilezésével 3β- acetoxi-ergoszta-7,22-dién-5a-olt állítunk elő, iv) a kapott 3p-acetoxi-ergoszta-7,22-dién-5a-olt 3βacetoxi-ergoszta-7-én-5a-ollá hidrogénezzük,
v) a kapott 3P-acetoxi-ergoszta-7-én-5a-t 22,23- dihidroergoszteril-acetáttá redukáljuk, vi) a 22,23-dihidro-ergoszteril-acetátot 22,23-dihidro-ergoszterollá redukáljuk.
3. Az 1. igénypont szerinti bl) eljárás i) lépése, azzal jellemezve, hogy a tozilezést vízmentes piridinben végezzük.
4. Az 1. igénypont szerinti bl) eljárás iii) lépése, azzal jellemezve, hogy az oxidálást szelén-dioxiddal végezzük.
5. Az 1. igénypont szerinti bj eljárás iv) lépése vagy a b2) eljárás, azzal jellemezve, hogy a (XII) képletű la-hidroxi-3,5-ciklo-D4-vitamin-származékot dimetil-szulfoxid és valamilyen szerves sav elegyében 5,6-cisz-la-hidroxi- és 5,6-transz-la-hidroxi-D4-vitamin elegyévé szolvolizáljuk, majd az la-hidroxi-D4-vitamin kinyerése célj ából az 5,6-transz-1 a-hidroxi-D4-vitamin Diels-Adler adduktumát képezzük.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US58685490A | 1990-09-21 | 1990-09-21 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9201691D0 HU9201691D0 (en) | 1992-09-28 |
| HUT62559A HUT62559A (en) | 1993-05-28 |
| HU213471B true HU213471B (en) | 1997-06-30 |
Family
ID=24347363
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9201691A HU213471B (en) | 1990-09-21 | 1991-09-20 | Process for producing 1alpha-hydroxy-vitamin d4 |
| HU95P/P00745P HU211963A9 (en) | 1990-09-21 | 1995-07-03 | Novel 1alpha-hydroxy vitamin d4 and novel intermediates and analogues |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU95P/P00745P HU211963A9 (en) | 1990-09-21 | 1995-07-03 | Novel 1alpha-hydroxy vitamin d4 and novel intermediates and analogues |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5488120A (hu) |
| EP (1) | EP0503035B1 (hu) |
| KR (1) | KR100231809B1 (hu) |
| CN (3) | CN1032255C (hu) |
| AR (1) | AR247817A1 (hu) |
| AU (1) | AU650286B2 (hu) |
| BR (1) | BR9106062A (hu) |
| CA (1) | CA2069084C (hu) |
| DE (1) | DE69132862T2 (hu) |
| DK (1) | DK0503035T3 (hu) |
| ES (1) | ES2169023T3 (hu) |
| HU (2) | HU213471B (hu) |
| MX (1) | MX9101224A (hu) |
| NO (1) | NO921955L (hu) |
| NZ (1) | NZ239897A (hu) |
| PL (1) | PL170447B1 (hu) |
| WO (1) | WO1992005130A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA917553B (hu) |
Families Citing this family (32)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5602116A (en) * | 1988-08-02 | 1997-02-11 | Bone Care International, Inc. | Method for treating and preventing secondary hyperparathyroidism |
| US5756783A (en) * | 1990-09-21 | 1998-05-26 | Bone Care International, Inc. | 1α-Hydroxy-24-EPI-vitamin D4 |
| US5763428A (en) * | 1990-09-21 | 1998-06-09 | Bone Care International, Inc. | Methods of treating skin disorders with novel 1a-hydroxy vitamin D4 compounds and derivatives thereof |
| US5798345A (en) * | 1990-09-21 | 1998-08-25 | Bone Care International, Inc. | Method of inhibiting the hyperproliferation of malignant cells |
| US20040009958A1 (en) * | 1991-01-08 | 2004-01-15 | Bone Care International, Inc. | Methods for preparation and use of 1alpha,24(S)-dihydroxyvitamin D2 |
| US6538037B2 (en) | 1991-01-08 | 2003-03-25 | Bone Care International, Inc. | Methods for preparation and use of 1α,24(S)-dihydroxyvitamin D2 |
| JP2927368B2 (ja) * | 1992-01-29 | 1999-07-28 | ボーン ケア インターナショナル インコーポレイテッド | １α−ヒドロキシ−２４−ＥＰＩ−ビタミンＤ▲下４▼ |
| EP0562497A1 (en) * | 1992-03-27 | 1993-09-29 | Nisshin Flour Milling Co., Ltd. | 1 alpha-hydroxy vitamins D7 and D4' processes for the preparation thereof and pharmaceutical compositions |
| DE69331409T2 (de) * | 1992-06-22 | 2002-08-29 | Bone Care Internat Inc | Oral 1alpha-hydroxyprevitamin d |
| US5763429A (en) * | 1993-09-10 | 1998-06-09 | Bone Care International, Inc. | Method of treating prostatic diseases using active vitamin D analogues |
| US6242434B1 (en) * | 1997-08-08 | 2001-06-05 | Bone Care International, Inc. | 24-hydroxyvitamin D, analogs and uses thereof |
| US6376479B1 (en) | 1995-04-03 | 2002-04-23 | Bone Care International, Inc. | Method for treating and preventing hyperparathyroidism |
| US20020183288A1 (en) * | 1995-04-03 | 2002-12-05 | Bone Care International, Inc. | Method for treating and preventing hyperparathyroidism |
| US20040043971A1 (en) * | 1995-04-03 | 2004-03-04 | Bone Care International, Inc. | Method of treating and preventing hyperparathyroidism with active vitamin D analogs |
| US6566353B2 (en) | 1996-12-30 | 2003-05-20 | Bone Care International, Inc. | Method of treating malignancy associated hypercalcemia using active vitamin D analogues |
| US6503893B2 (en) | 1996-12-30 | 2003-01-07 | Bone Care International, Inc. | Method of treating hyperproliferative diseases using active vitamin D analogues |
| US20020128240A1 (en) * | 1996-12-30 | 2002-09-12 | Bone Care International, Inc. | Treatment of hyperproliferative diseases using active vitamin D analogues |
| US6573256B2 (en) | 1996-12-30 | 2003-06-03 | Bone Care International, Inc. | Method of inhibiting angiogenesis using active vitamin D analogues |
| KR20000071039A (ko) | 1997-02-13 | 2000-11-25 | 비숍 찰스 더블유. | 비타민 ｄ 화합물의 표적화된 치료학적 전달 |
| US6900191B1 (en) | 1997-02-25 | 2005-05-31 | Oncquest, Inc. | 1α-Hydroxyvitamin D5, its synthesis and use in cancer prevention |
| US6087350A (en) * | 1997-08-29 | 2000-07-11 | University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education | Use of pretreatment chemicals to enhance efficacy of cytotoxic agents |
| CA2326117A1 (en) * | 1998-03-27 | 1999-10-07 | Oregon Health Sciences University | Vitamin d and its analogs in the treatment of tumors and other hyperproliferative disorders |
| IL153378A0 (en) * | 2000-07-18 | 2003-07-06 | Bone Care Internat Inc | STABILIZED 1alpha-HYDROXY VITAMIN D |
| US20040258801A1 (en) * | 2001-09-27 | 2004-12-23 | Alvin Ling | Vitamin fortification of foodstuffs |
| US20040053895A1 (en) * | 2002-09-18 | 2004-03-18 | Bone Care International, Inc. | Multi-use vessels for vitamin D formulations |
| US7148211B2 (en) * | 2002-09-18 | 2006-12-12 | Genzyme Corporation | Formulation for lipophilic agents |
| WO2005102355A1 (en) * | 2004-04-23 | 2005-11-03 | Genzyme Corporation | METHODS OF TREATING VARIOUS VITAMIN D METABOLISM CONDITIONS WITH 1α-HYDROXYVITAMIN D2 |
| US20060003950A1 (en) * | 2004-06-30 | 2006-01-05 | Bone Care International, Inc. | Method of treating prostatic diseases using a combination of vitamin D analogues and other agents |
| US7094775B2 (en) * | 2004-06-30 | 2006-08-22 | Bone Care International, Llc | Method of treating breast cancer using a combination of vitamin D analogues and other agents |
| CN108218750B (zh) * | 2017-12-30 | 2019-09-10 | 南京海融制药有限公司 | 一种阿法骨化醇的异构体杂质的定向合成方法及其用途 |
| CN108663442B (zh) * | 2017-12-30 | 2021-03-30 | 南京海融制药有限公司 | 一种阿法骨化醇片剂有关物质的检查方法 |
| CN108047108B (zh) * | 2017-12-30 | 2019-09-20 | 南京海融制药有限公司 | 一种阿法骨化醇的有关杂质pzb及其制备方法和用途 |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2383446A (en) * | 1941-06-04 | 1945-08-28 | Du Pont | Antirachitic materials and processes for their production |
| DK138672B (da) * | 1976-09-28 | 1978-10-16 | Danske Sukkerfab | Krystallisationsapparat. |
| US4202829A (en) * | 1978-01-05 | 1980-05-13 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Process for preparing 1α-hydroxylated compounds |
| US4195027A (en) * | 1978-01-16 | 1980-03-25 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Process for preparing 1α-hydroxylated compounds |
| NL188286C (nl) * | 1978-01-16 | 1992-05-18 | Wisconsin Alumni Res Found | Werkwijze voor het bereiden van een 1alfa-hydroxyvitamine d verbinding. |
| US4260549A (en) * | 1979-05-21 | 1981-04-07 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Process for preparing 1α-hydroxylated compounds |
| US4362710A (en) * | 1980-07-04 | 1982-12-07 | Nissan Gosei Kogyo Co., Ltd. | Feeds for baby pigs, process for preparing the same and method of breeding baby pigs |
| US4661294A (en) * | 1985-03-18 | 1987-04-28 | The General Hospital Corporation | Biologically active 1-thio derivatives of vitamin D |
| AU603340B2 (en) * | 1985-08-02 | 1990-11-15 | Leo Pharmaceutical Products Ltd. A/S (Lovens Kemiske Fabrik Produktionsaktieselskab) | Novel vitamin d analogues |
| JP2550391B2 (ja) * | 1988-06-30 | 1996-11-06 | 日清製粉株式会社 | １β−ヒドロキシビタミンＤ▲下２▼およびＤ▲下３▼の製造方法 |
| CA1333616C (en) * | 1989-03-09 | 1994-12-20 | Hector F. Deluca | 19-nor-vitamin d compounds |
| JP2645130B2 (ja) * | 1989-03-31 | 1997-08-25 | 日清製粉株式会社 | ステロイド誘導体 |
-
1991
- 1991-09-20 PL PL91294706A patent/PL170447B1/pl unknown
- 1991-09-20 WO PCT/US1991/006865 patent/WO1992005130A1/en active IP Right Grant
- 1991-09-20 EP EP91917288A patent/EP0503035B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-09-20 KR KR1019920701187A patent/KR100231809B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1991-09-20 AU AU85422/91A patent/AU650286B2/en not_active Ceased
- 1991-09-20 HU HU9201691A patent/HU213471B/hu not_active IP Right Cessation
- 1991-09-20 DK DK91917288T patent/DK0503035T3/da active
- 1991-09-20 DE DE69132862T patent/DE69132862T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1991-09-20 BR BR919106062A patent/BR9106062A/pt not_active Application Discontinuation
- 1991-09-20 CA CA002069084A patent/CA2069084C/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-09-20 ES ES91917288T patent/ES2169023T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-09-21 CN CN91108032A patent/CN1032255C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1991-09-23 AR AR91320725A patent/AR247817A1/es active
- 1991-09-23 NZ NZ239897A patent/NZ239897A/en not_active IP Right Cessation
- 1991-09-23 MX MX9101224A patent/MX9101224A/es unknown
- 1991-09-23 ZA ZA917553A patent/ZA917553B/xx unknown
-
1992
- 1992-05-18 NO NO92921955A patent/NO921955L/no unknown
-
1994
- 1994-08-24 US US08/296,084 patent/US5488120A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-07-03 HU HU95P/P00745P patent/HU211963A9/hu unknown
- 1995-11-08 CN CN95119400A patent/CN1130507A/zh active Pending
- 1995-11-08 CN CN95119399A patent/CN1136433A/zh active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5488120A (en) | 1996-01-30 |
| HUT62559A (en) | 1993-05-28 |
| EP0503035A1 (en) | 1992-09-16 |
| ES2169023T3 (es) | 2002-07-01 |
| WO1992005130A1 (en) | 1992-04-02 |
| BR9106062A (pt) | 1993-03-09 |
| CN1136433A (zh) | 1996-11-27 |
| MX9101224A (es) | 1992-05-04 |
| NO921955L (no) | 1992-06-05 |
| PL294706A1 (en) | 1993-10-04 |
| CN1130507A (zh) | 1996-09-11 |
| PL170447B1 (en) | 1996-12-31 |
| ZA917553B (en) | 1992-07-29 |
| DE69132862D1 (de) | 2002-01-24 |
| CA2069084A1 (en) | 1992-03-22 |
| CA2069084C (en) | 2007-05-22 |
| CN1061220A (zh) | 1992-05-20 |
| KR920703487A (ko) | 1992-12-18 |
| AU650286B2 (en) | 1994-06-16 |
| AR247817A1 (es) | 1995-04-28 |
| CN1032255C (zh) | 1996-07-10 |
| HU9201691D0 (en) | 1992-09-28 |
| EP0503035B1 (en) | 2001-12-12 |
| NO921955D0 (no) | 1992-05-18 |
| EP0503035A4 (hu) | 1994-03-30 |
| DK0503035T3 (da) | 2002-04-15 |
| NZ239897A (en) | 1996-03-26 |
| KR100231809B1 (ko) | 1999-12-01 |
| HU211963A9 (en) | 1996-01-29 |
| AU8542291A (en) | 1992-04-15 |
| DE69132862T2 (de) | 2002-08-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU213471B (en) | Process for producing 1alpha-hydroxy-vitamin d4 | |
| US5763428A (en) | Methods of treating skin disorders with novel 1a-hydroxy vitamin D4 compounds and derivatives thereof | |
| US5972917A (en) | 1 α-hydroxy-25-ene-vitamin D, analogs and uses thereof | |
| US6242434B1 (en) | 24-hydroxyvitamin D, analogs and uses thereof | |
| US5798345A (en) | Method of inhibiting the hyperproliferation of malignant cells | |
| CA2451039A1 (en) | Methods for preparation and use of 1.alpha.,24(s)-dihydroxyvitamin d2 | |
| US6025346A (en) | 1α-hydroxy vitamin D4 and novel intermediates and analogues | |
| US5801164A (en) | Methods of treating osteoporosis prophylactically or therapeutically | |
| US6251883B1 (en) | Methods for preparation and use of 1α,24(S)-dihydroxy vitamin D2 | |
| Knutson et al. | 1 alpha-hydroxy vitamin D4 and novel intermediates and analogues | |
| MXPA97009684A (en) | Use of vitamin d4 derivatives for treatment of p disorders | |
| MXPA97009683A (en) | Use of vitamin d4 derivatives for treatment against the can |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| DGB9 | Succession in title of applicant |
Owner name: BONE CARE INTERNATIONAL, INC., US |
|
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |