HU211963A9 - Novel 1alpha-hydroxy vitamin d4 and novel intermediates and analogues - Google Patents

Novel 1alpha-hydroxy vitamin d4 and novel intermediates and analogues Download PDF

Info

Publication number
HU211963A9
HU211963A9 HU95P/P00745P HU9500745P HU211963A9 HU 211963 A9 HU211963 A9 HU 211963A9 HU 9500745 P HU9500745 P HU 9500745P HU 211963 A9 HU211963 A9 HU 211963A9
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
vitamin
hydroxy
hydrogen
compound
formula
Prior art date
Application number
HU95P/P00745P
Other languages
English (en)
Inventor
Joyce C Knutson
Charles W Bishop
Robert M Moriarty
Original Assignee
Lunar Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lunar Corp filed Critical Lunar Corp
Publication of HU211963A9 publication Critical patent/HU211963A9/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/59—Compounds containing 9, 10- seco- cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems
    • A61K31/592—9,10-Secoergostane derivatives, e.g. ergocalciferol, i.e. vitamin D2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/59—Compounds containing 9, 10- seco- cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C35/00—Compounds having at least one hydroxy or O-metal group bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring
    • C07C35/21—Compounds having at least one hydroxy or O-metal group bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring polycyclic, at least one hydroxy group bound to a non-condensed ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C401/00—Irradiation products of cholesterol or its derivatives; Vitamin D derivatives, 9,10-seco cyclopenta[a]phenanthrene or analogues obtained by chemical preparation without irradiation

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)

Description

A találmány biológiailag aktív D4-vitamin vegyületekre, elsősorban új la-hidroxi-D4-vitaminra és ennek előállításánál alkalmazható intermedierekre, valamint új l,25-dihidroxi-D4-vitaminra és új 1,24-dihidroxiD4-vitaminra vonatkozik.
A találmány tárgyát képezik az olyan gyógyszerkészítmények is, amelyek gyógyászatilag hatásos menynyiségű új la-hidroxi-D4 vitaminvegyületeket tartalmaznak, valamint az olyan eljárások, amelyekben abnormális kalcium metabolizmust a gyógyászatilag hatásos mennyiségű új vegyületekkel kezeljük.
A D4-vitamin közismerten az állatok és emberek kalcium metabolizmus szabályozásának fontos eleme, amint azt a Harrison’s Principals of Internál Medicine: 11. rész, „Disorders of Boné and Mineral Metabolism, 335 fejezet, E. Braunwald és mtsai (kiadók), Mc Graw-Hill, New York, 1987., 1860-1865. oldalak).
A D-vitamin két legismertebb alakja a u3-vitamin és a D2-vitamin. A D3-vitamin az állatok és emberek körében képződik endogén módon, míg a Dj-vitamin forrásául a növények szolgálnak. A D2-vitamin abban különbözik a D3-vitamintól, hogy a C22 és C23 között kettős kötést a C24-en egy metilcsoportot tartalmaz. A D2 és D3-vitamin emberekben, illetőleg patkányokban egyenértékű biopoteneiállal rendelkezik.
A D4-vitamin, más néven besugárzott 22,23-dihidro-ergoszterol vagy 22,23-dihidro-D4-vitamin vagy
22,23-dihidro-ergokalciferol abban különbözik a D3vitamimól. hogy egy C24 metilcsoportot tartalmaz. Á D4-vitamint először 1936-ban ismertették. Az ismertetést a Grab, W„ Z. Physiol. Chem.. 243:63 (936); Mc Donald. F. G., J. Bioi. Chem , U4:IVX (1936) és Windaus A. és Trautmann G.. Z. Physiol. Chem.. 247:185-188 (1937) irodalmi helyen találjuk.
Az ismertetések bizonyos véleménykülönbséget tartalmaznak a biológiai potenciál tekintetében és arra utalnak, hogy D4-vitamin patkányokban mutatott aktivitása a D3 aktivitásának 1/3-a, és csirkékben 1/10-e vagy 1/5-e.
AD4-vitamin biológiai aktivitásának határozottabb megfogalmazását találjuk DeLuca és mtsai, Arch. Biochem. Biopbys.. 124:122-128 (1968) irodalmi helyen. A szerző megerősítik, hogy a D4 kevésbé aktív mint a D3. DeLuca és mtsai azt állítják, hogy a D4-vi(amin patkányokban mutatott aktivitása a D3-vitamin aktivitásának 2/3-a, és csirkékben 1/5-e.
DeLuca és mtsai arra hivatkoznak, hogy a D4-vitamin szintézist nem nagyon alkalmazzák, mióta azt először Windhaus és Trautmann ismertették, és hozzáteszik, hogy ez valószínű azért van így, mert a D4-vitamin csak akadémiai érdeklődésre tarthat számol.
Tudomásunk szerint még ma is az a helyzet, hogy a D4-vitamin „csak akadémiai érdeklődésre tarthat számot, ugyanis DeLuca és mtsai vizsgálatai óta nincsenek újabb kutatási eredmények. A Merck Index is azt írja a D4-vitaminról, hogy „biológiai aktivitása kétséges” (Merck Inde, S. Budavári (kiadó), 11. kiadás, Merck & Co., Rahway, N, I, (1989), 1579 oldal #9930).
Mióta DeLuca és mtsai felfedezték a D3-vitamin aktív alakját, az l,25-díhidroxi-D3-vitamint (3 697 559 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás), valamint szintetikus prekurzorát, az la-hidroxiD3-vitamint (3 741 996 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás), az érdeklődés leginkább az ilyen aktív D3-vitamin metabolitok gyógyászati alkalmazására irányul. Sajnálatos, hogy bár ezek a D3-vitamin metabolitok ígéretes gyógyszerhatóanyagok, rendkívüli toxieitásuk miatt eddig nem kerültek gyógyászati alkalmazásra. így például toxieitásuk megakadályozza az aktív D3-vitamin és analógjai csontritkulás elleni vagy csontritkulás helyreállító alkalmazását. Számos kísérlet jelzi, hogy a csontritkulás megelőzéséhez vagy helyreállításához annyi hatóanyagra lenne szükség, amennyi hiperkalcémiához vagy hiper kalciuriához vezet. Ismertetik, hogy a vizsgálatok szerint a csontritkulás megelőzéséhez hatásos 2 pg/nap mennyiségű D3vitamin a betegek 67%-ánál okoz mérgezést.
Szükség van tehát egy olyan alacsony toxieitású D metabolitra, amely gyógyszerként alkalmazható.
A találmány szerinti új la-hidroxi-D4-vitamín, l,25-dihidroxi-D4-vitamin és ],24-dihidroxi-D4-vitamin a D4-vitamin bioaktív alakja.
Kutatásaink során azt találtuk, hogy ezek az aktív D4-vitaminok sokkal nagyobb biopotenciállal rendelkeznek, mint azt a D4-vitamin biológiai vizsgálatai korábban jelezték. Azt is megfigyeltük, hogy ezek az új bioaktív vegyületek kevésbé toxikusak, mint biopotenciáljuk alapján várható lenne.
A találmány szerinti nagy aktivitású és alacsony toxieitású vegyületek kalcium-metabolizmus rendellenességek kezelésére alkalmas hatóanyagok.
A találmány szerinti új vegyületek előnyösen alkalmazhatók kalciummetabolizmus rendellenességek gyógyítására alkalmas gyógyszerkészítmények hatóanyagaként.
A találmány szerinti új vegyületek tanulmányozásához előállítási eljárásukat is ki kellett fejleszteni. Kifejlesztettük az la-hidroxi-D4-vitamin szintetikus előállítását, és ennek során új intermediereket is előállítottunk. Az la-hidroxi-D4-vitamin metabolizmus biológiai termékeként l,25-dthidroxi-D4 vitamint és 1,24-dihidroxi-D4-vitamini izoláltunk.
A találmány további előnyeit, specifikus alkalmazási területeit, kompozíciós változatait valamint fizikai és kémiai tulajdonságait a továbbiakban és a mellékelt rajzokon részletesen ismertetjük.
A rajzok rövid ismertetése a következő: Az
1. ábrán a D4-vitamin szintézis előállítási lépéseit mutatjuk be; és a
2. ábrán a D4-vitaminból kiinduló la-hidroxi-D4-vitamin előállítási lépéseit ismertetjük.
A találmány tárgya la-hidroxi-D4-vitamin (la0H-D4) szintetikus előállítási eljárása, valamint tozilezett és gyűrűs D4-vítamínszármazékok.
A leírásban alkalmazott „biológiai aktivitás vagy „biológiai aktív” kifejezés a vegyületek biokémiai tulajdonságaira, mint pl. metabolizmusra kifejtett hatására. például szérum kalciumkoncentrációra kifejtett hatására vagy megfelelő receptorkötő hatására, például D-vitamin receptorkötő hatására vonatkozik.
HU 211 963 A9
A találmány olyan (I) általános képletű biológiailag aktív vegyületekre, valamint ezek sóira, hidrátjaira és szolvátjaira vonatkozik, amelyekben R[ jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport; és R2 jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport.
Előnyösek az olyan (I) általános képletű vegyületek, amelyekben Rj és R2 jelentése hidrogénatom; Rj jelentése hidroxilcsoport és R2 jelentése hidrogénatom; R, jelentése hidrogénatom és R2 jelentése hidroxilcsoport.
A találmány az (I) általános képletű vegyületek előállítási eljárására is vonatkozik. Az 1 a-hidroxi-D4-vitamin, azaz az olyan (I) általános képlet vegyületek, amelyekben R, és R2 jelentése hidrogénatom, előállítási eljárásának reakcióvázlatát az 1. és 2. ábrán ismertetjük.
Az 1. ábrán láthatjuk, hogy a szintézis kiindulási anyagaként ergoszterolt alkalmazunk. Az ergoszterol a Barton és mtsai, JCS Perkin I 1976, 821-826. irodalmi helyen ismertetett eljárás szerint hat lépéses oldallánc telítési eljáráson megy át, és ennek eredményeként a (VIII) képletű 22,23-dihidro-ergoszterol keletkezik. A
22.23- dihidroergoszterolt ezután a Windans és mtsai, Z, Physiol. chem., 1937. 147:185 irodalmi helyen ismertetett eljárással besugárzásnak vetjük alá, és így (IX) képletű 22.23-dihidro-ergokalciferol-D4-vitamint kapunk.
A 2. ábrán láthatjuk, hogy a D4-vitamint ezután a Paaren és mtsai, J. Org. Chem., 1980, 45:3253 irodalmi helyen ismertetett eljárással az la-hidroxi-D4-vitaminná hidroxilezzük.
Részletesebben úgy járunk el. hogy az ergoszterolt 3[i-acetáttá acilezzük. Az ergoszterol-acetátot az 5,6kettős kötésnél hidroxi-halogénezésnek vetjük alá, és így 6a-klór-5a-htdroxi-származékoi kapunk. A klórhidrint redukáljuk, majd 5ct-hidroxi-(azaz 5a-ol)-származékká újraacilezzük. Az 5a-olt ezután az oldallánc telítésére hidrogénezzük. A kapott 3P-acetoxiergoszt7-en-5a-olt 22.23-dehidro-ergoszterollá redukáljuk A
22.23- dehidro-ergoszterolt ezután besugárzással D4-vitaminná alakítjuk át. A D4-vitamin tozilezésével 3{3-tozil-Dj-vilamint kapunk. A tozilát szolvolízissel való helyettesítésével 6-metoxi-3.5-ciklo-D4-vitaminl állíthatunk elő. A D4-ciklovitaminból allillikus oxidálással la-hidroxi-ciklovitamin-származékot állítunk elő. Az lot-hidroxi-ciklovitamin-származékot ezután szolvolizáljuk, majd az 5-metoxicsoport eltávolítására és a 2 la-hidroxi-D4-vitamin (5,6-cisz-) 5,6-transz-la-hidroxi-D4- vitamintól való elválasztására Diels-Alder-típusú reakciónak vetjük alá:
Az la-hidroxi-D4-vitamin l,24-dihidroxi-D4-vitamin és l,25-dihidroxi-D4-vitamin metabolitokal úgy állítjuk elő, hogy az Ια-hidroxi-származékokat humán májsejtekkel inkubáljuk, a sejteket tenyésztjük, és az 1,24-dihidroxi- vagy l,25-dihidroxi-D4-vitamint kinyerjük. A metabolitok biológiai aktivitását D-vitamin receptor fehérjekötő vizsgálattal határozzuk meg.
Az (I) általános képletű vegyületek a tapasztalatok szerint értékes gyógyászati hatóanyagok, ami azt jelenti, hogy kalcium metabolizmus szabályozószerként, elsősorban szérum-koncentráció szabályozó szerként alkalmazhatók. Az (I) általános képletű hatóanyagok növelik a D-vitaminhiányos patkányok szérum kalciumkoncentrációját. Az (I) általános képletű hatóanyagok gyógyászati értékét növeli, hogy a tapasztalatok szerint ezek az anyagok nem mérgezőek.
Az (I) általános képletű hatóanyagok LD50 vizsgálattal mért a D4-vitaminéhoz hasonló, és a megfelelő Dj-vitaminétól kisebb.
A találmány szerinti vegyületek különböző klinikai és állatgyógyászati területeken alkalmazhatók, és különösen hatásosak abnormális kalcium és foszfor metabolizmus esetén.
A találmány további tárgyát képezi a kalciummetabolizmus szabályozására alkalmas eljárás is, amelyben például májelégtelenség, veseelégtelenség vagy gyomor- és bélrendszer-elégtelenség által kiváltott abnormális kalciummetabolizmust kezelünk.
Az (I) általános képletű vegyületek profilaktikus vagy terapeutikus D-vitamin hiánybetegségek és kapcsolódó betegségek kezelésére alkalmazhatók. Ilyen betegség például a vese eredetű oszteodisztrofia, szteatorrea, antikonvulzívum okozta oszteomalácia, hipofoszfatémiás D-vitamin rezisztens angolkór, oszteoporózis, beleértve a posztmenopauzális oszteoporozist, szteroid-kiváltott oszteoporozis, valamint egyéb csonttömeg veszteség, pszeudo (D-vitamin függő) angolkór, táplálkozási és maiabszorpciós angolkór, hipoparatiroidizmushoz társuló szekunder oszteomalácia és oszteopénia, sebészeti beavatkozást követő hipoparatiroidizmus, idiopátiás hipotiroidizmus, pszeudoparatiroidizmus és alkoholizmus által kiváltott betegségtünetek.
Elsősorban azok az (I) általános képletű vegyületek. amelyekben az R, és R2 jelentése hidroxilcsoport. mint pl. 1 a-24-hidroxi-D4-vitamin, a hiperproliferatív bőrbetegségek, mint pl. pszoriázis kezelésére is értékes hatóanyagok.
Az (I) általános képletű vegyületek olyan gyógyszerkészítmények hatóanyagaként alkalmazhatók, amelyek az aktív Dj-vitamm ismert analógjaihoz hasonlítva kevesebb mellékhatást okoznak és kevésbé mérgezőek. Ezek a készítmények is a találmány tárgyát képezik.
A találmány szerinti gyógyászatilag aktív hatóanyagok a betegek, például emlősök, közöttük emberek kezelésére szokásosan alkalmazott gyógyszerek ismert előállítási eljárásaival állíthatók elő.
A találmány szerinti (I) általános képlet hatóanyagok hagyományos adalékanyagokkal, például enterális (szájon át), parenterális vagy helyi alkalmazásra megfelelő és a hatóanyaggal károsan nem reagáló hordozókkal társítva alkalmazhatók.
Gyógyászatilag megfelelő hordozók például a víz, sóoldatok, alkoholok, arabmézga, növényolajok (például kukoricaolaj, gyapotmagolaj, mogyoróolaj, olívaolaj, kókuszolaj), halmájolajok, olajos észterek, mint pl. Polisorbate 80, poli(etilén-glikol)-ok, zselatin, szénhidrátok (például laktóz, amilóz és keményítő), magnézium-sztearát, talkum, kovasav viszkózus paraffin, zsírsavmonogliceridek és digliceridek, pentaeritritolzsírsav-észterek, hidroxi-metil-cellulóz és poli(vinilpirrolidon).
HU 211 963 A9
A gyógyszerkészítményeket alávethetjük sterilizáló eljárásnak is, és társíthatjuk segédanyagokkal, például csúsztatószerekkel, konzerválószerekkel nedvesítőszerekkel, emulgeálószerekkel, ozmózis nyomás befolyásoló sókkal, pufferekkel, színezékekkel, ízesítőszerekkel és/vagy egy vagy több egyéb hatóanyaggal, például D3- vagy D2-vitaminnal és ezek Ια-hidroxilezett metabolitjaival, konjugált esztrogénekkel vagy ekvivalens vegyületeikkel, antiesztrogénekkel, kalcitoninnal, bifoszfonátokkal, kalciumkiegészítő szerekkel, kobalominnal, pertussís toxinnal és bórral.
Parenterális készítményként előállíthatunk injektálható steril oldatokat, előnyösen olajos vagy vizes oldatokat, szuszpenziókat, emulziókat vagy implantátumokat, köztük végbél kúpokat. Egység adagolásra megfelelőek az ampullák.
Enterális alkalmazásra előállíthatunk elsősorban tablettákat, drazsékat, folyadékokat, cseppeket, végbélkúpokat, cukorkákat, porokat vagy kapszulákat. Édes hordozóanyag igény esetén szirup- vagy elixír-készítményl állítunk elő.
Előállíthatunk hosszú hatásidejű vagy közvetlen kibocsátású készítményeket is, például liposzom vagy egyéb olyan készítményeket, amelyekben a hatóanyagot fokozatosan lebomló bevonattal, például mikrokapszula vagy többrétegű bevonattal látjuk el.
A nem permetezhető félszilárd vagy szilárd helyi alkalmazásra szánt készítményeket a helyi alkalmazásra megfelelő, előnyösen a víznél nagyobb dinamikus viszkozitású hordozó hozzáadásával állítjuk elő. Ilyen készítmények az oldatok, szuszpenziók, emulziók, krémek, kenőcsök, porok, tapaszok, balzsamok, aeroszolok. bőrön át flastromok, amelyek szükség esetén sterilizálhatók vagy segédanyagokkal, például konzerválószerekkel. stabilizátorokkal, emulgeáló szerekkel vagy nedvesítő szerekkel társíthatók.
A végbélen át alkalmazható gyógyszerkészítményeket valamilyen kúpokhoz megfelelő alappal, például kakaóvajjal vagy trigliceridekkel társítva állítjuk elő. A hosszabb tárolásra szánt készítményekhez előnyösen valamilyen antioxidánst, például aszkorbinsavat, butilezett hidroxi-anizolt vagy hidrokinont adunk.
Előnyös találmány szerinii készítmények a szájon át alkalmazható készítmények. A találmány szerinti készítményeket általában olyan egységadag alakban állítjuk elő. amelyek 0,5-25 pg hatóanyagot és egy gyógyászatilag elfogadható hordozót tartalmaznak. A találmány szerinti hatóanyagok napi adagja általában 0,01-0,5 pg/testtömeg kg, előnyösen 0,04-0,3 pg/testtömeg kg.
A ténylegesen alkalmazott, előnyös hatóanyagmennyiség természetesen az alkalmazott hatóanyag hatékonyság. a hatóanyag készítmény, az alkalmazott kezelési eljárás, az adott állapot és a kezelendő mikroorganizmus függvénye. Például valamely beteg esetén a specifikus adag függ a beteg korától, testtömegétől, általános egészségi állapotától, nemétől, táplálkozásától, a kezelés szabályozásától és módjától, a kiválasztási sebességtől, az alkalmazott egyéb gyógyszerektől és a kezelendő betegség mértékétől. Egy adott gazdaszervezet kezelésére megállapított adag hagyományos szempontok figyelembevételével, például a szóbanforgó hatóanyag ismert hatóanyagokkal való összehasonlításával történhet. Az összehasonlító eljárást valamilyen szokásos gyógyszervizsgálati előírás szerint végezzük.
A találmány szerinti hatóanyagok további alkalmazási területét képező állatgyógyászati hatóanyagokat állati gyógyszerkészítményekben, például háziállatok hipokalcémia elleni kezelése esetén tápkészítményekben alkalmazzuk.
A találmány szerinti hatóanyagok által tápkészítményben való alkalmazásakor a készítményhez annyi hatóanyagot adunk, hogy az állat normális etetéssel 0,01-0,5 pg/kg/nap hatóanyagot kapjon.
A következő példákat a találmány részletesebb bemutatására ismertetjük.
A példákban a hőmérsékletet ’C-ban, a tömeget tömegrész-ként és tömeg%-ban adjuk meg, kivéve, ha a leírásban más jelölést alkalmazunk.
A proton magmágneses rezonancia spektrumának (Ή-NMR) felvételére IBM Sy-200 (200 MHz) és Bruker Am-400 (400 MHz) 3000 Computert. CDC13 oldatokat és belső standardként CHCl3-at alkalmazunk.
Az infravörös spektrumot Fourier transzformálással (FTIR) kálium-bromid (KBr) pellet vagy folyadék mintákkal vesszük fel.
A tömegspektrum felvételét Finnigan MAT-90 tömegspektrométerrel, 20eV/Cl alkalmazásával végezzük.
Az olvadáspont meghatározást Hoover-Thomas (kapillár) UniMelt és Fischer-Johns olvadáspont-meghatározó készülékkel (csúszófedeles) végezzük.
/. példa la-Hidmxi-D4-vitamin szintézis (II) ergoszterolt (III) képletű ergoszterol-acetáttá alakítunk át úgy, hogy 600 ml vízmentes piridin és 68 ml (0,7 mól) ecetsavanhidrid elegyben feloldunk 100 g (0,25 mól) ergoszterolt. Az oldatot szobahőmérsékleten keverjük egy éjszakán át, majd 1,2 liter jég hozzáadásával kicsapatjuk. A csapadékot 5x400 ml vízzel, majd 400 ml acetonitrillel mossuk. A kapott terméket levegőn megszárítjuk, és így 79 g (71%) olyan fehér kristályos ergoszterol-acetáíot kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
Olvadáspont: 169-171 ’C;
Ή-NMR: (400 MHz, CDC1,), δ ppm: 2,05 (3H, s.
3fi-CH3CO), 4,65-4,75 (1H, m. 3a-H), 5,15-5,25 (2H, m, 22-H és 23-H), 5,4 (1H, d, 6-H), 5,6 (1H, d, 7-H).
FTIR (KBr): 1734 cm’1 (C=O elnyúlt) 968 cnr1 (C-H elhajlott).
g (0,062 mól) (III) képletű ergoszterol-acetátot feloldunk 2,5 liter frissen desztillált oxigénmentesített toluolban. Ehhez az oldathoz 30 perc alatt nitrogén atmoszférában -78 'C-on 9 ml (0,111 mól), 240 ml vízmentes diklór-metánban oldott kromilkloridot adunk. A reakcióelegyet -78 ’C-on keverjük további 50 percig, majd egy részletben 62 ml nátrium-bór-hidriddel telített etanol oldatot adunk hozzá. A reakcióele4
HU 211 963 A9 gyet -78 ’C-on keverjük további 50 percig, majd 3 liter 3 N sósavat és 3 liter benzolt tartalmazó kétfázisú rendszerbe öntjük. A szerves réteget elválasztjuk, majd 1x2 liter vízzel és 2x1 liter NaCl-oldattal mossuk, és vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk. A száraz oldatot leszűrjük, és vákuumban koncentráljuk. A nyers kristályos terméket 280 ml acetonitrillel kezeljük, majd a kapott szuszpenziót leszűrjük.
így iszapos anyagként 12,5 g (41%) olyan (IV) képletű fehér kristályos 3p-acetoxi-6a-klór-ergoszta7,22-dién-5a-olt kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
Olvadáspont: 190-192 ’C;
’H-NMR: (400 MHz, CDC13), δ ppm:: 2,05 (3H, s,
3|J-OAc), 4,65 (1H, d. 6β-Η), 5,1 (1H, s, 7-H),
5,1-5,3 (2H, m, 22-H és 23-H):
FTIR (KBr): 1732 cm'1 (C=O elnyúlt) 968 cm1 (C-H elhajlott), 3437 cm-’ (O-H elnyúlt).
21,4 g (IV) képletű (0,044 mól) 3p-acetoxi-6aklór-ergoszta-7,22-dién-5oc-olt feloldunk 400 ml vízmentes THF-ben, majd az oldatot 750 ml vízmentes THF-ben oldott 2.66 g (0.07 mól) lítium-alumíniumhidridhez adjuk keverés közben. Az elegyet visszafolyatás mellett melegítjük 3 órán át, majd 0 °C-ra hűljük. A felesleges hidridet telített nátrium-szulfát oldattal elbontjuk, majd az oldatot vízmentes nátrium-szulfáton szűrjük. A szűrletet bepároljuk, a szilárd anyagot 0 ’C-on közvetlenül 110 ml ecetsav-anhidriddel és 220 ml vízmentes piridinnel kezeljük. Az oldószert csökkentett nyomáson elpárologtatjuk. így 12,75 g (61%) olyan (V) képletű 3f5-acetoxi-ergoszta-7,22-dién-5a-olt kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők;
Olvadáspont: 229-232 ’C:
FTIR (KBr) 1736 cm'1 (C=O elnyúlt), 3460 cm'1 (OH elnyúlt). 972 cm'1 (C-H elhajlott).
2,5 g (0,0055 mól) (V) képletű 33-acetoxi-ergoszta-7,22-dién-53-olt és 280 ml ctil-acetátban oldott, frissen készített 0,5 g platina-oxidot I bar hidrogénnyomáson 6 órán át rázunk.
A katalizátort leszűrjük, a szűrletet bepároljuk, a kapott nyers acélától diklór-metánban oldjuk, és szilikagélen kromatografáljuk. Diklőr-metános eluálással 2,15 g (85%) olyan, lényegében tiszta, fehér, kristályos 3p-acetoxi-ergoszt-7-én-5a-olt kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
Olvadáspont: 228-232 C;
'H-NMR: (400 MHz. CDC13), δ ppm: 2,05 (3H, s,
3β-0 Ac), 5,05-5,20 (2H, m, 3a-H és 7-H);
FTIR (KBr): 1736 cm'1 (C=O elnyúlt), 3462 cm'1 (OH elnyúlt). 12,0 g (0,0262 mól) 800 ml vízmentes piridinben oldott (VI) képletű 3P-acetoxi-ergoszt7-cn-5a-olhoz 0 ’C-on nitrogén atmoszférában 9,7 ml 170 ml vízmentes piridinben oldott, újradesztillált tionil-kloridot adunk. Az oldatot 25 óra múlva 1,5 liter jéghideg vízzel hígítjuk, majd először 2.5 liter, majd 1,5 liter éterrel extraháljuk.
Az egyesített extraktumokat 2x1,0 liter nátriumhidrogén-karbonát oldattal, majd 2x1,5 liter 1 N sósavoldattal és ezt követően 1 liter vízzel mossuk.
Az éteres oldatot magnézium-szulfáton szárítjuk, szűrés után csökkentett nyomáson bepároljuk, és a maradékot 100 ml acetonitrilben szuszpendáljuk. A terméket leszűrjük, és acetonitrilben átkristályosítjuk. így
4,5 g (39%) olyan fehér kristályos (VII) képletű 22,23dihidroergoszteril-acetátot kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
Olvadáspont: 144-147 ”C;
’H-NMR: (400 MHz, CDCI,), δ ppm: 2,05 (3H, s,
3P-OAc), 4,65—4,75 (1H. m, 3a-H), 5,4 (1H, d,
6-H), 5,6 (1H, d, 7-H).
FTIR (K Br). 1734 cm'1 (C=O) elnyúlt).
4,8 g (0,011 mól) (VII) képletű 22,23-dihidroergoszterilacetátot szobahőmérsékleten, keverés közben egy 1,1 liter vízmentes éterben 2,5 g (0,066 mól) lítium-alumínium-hidridet tartalmazó, frissen készített szuszpenziót adunk. Az elegyet szobahőmérsékleten keveijük 2 órán át. A felesleges lítium-alumínium-hidrid elbontására az oldathoz 5 N nátrium-hidroxid-oldatot és 500 ml vizet adunk. A vizes oldatot 4x250 ml étemel extraháljuk. Az egyesített éteres extraktumokat 1 liter nátrium-klorid oldattal mossuk, majd nátriumszulfáton szárítjuk. Az oldatot csökkentett nyomáson bepároljuk, és így 4,1 g (94%) olyan fehér kristályos (VIII) képletű 22,23-dihidroergoszterolt kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
Olvadáspont: 147-150 ’C;
’H-NMR: (400 MHz, CDClj), δ lppm: 3,6-3,7 (1H, m, 3oc-H), 5,4 (1H, d, 6H), 5,6 (1H, d, 7-H);
FTIR (KBr): 3400 cm'1 (O-H elnyúlt).
2.0 g (5,0 mmol) (Vili) képletű 22,23-dihidroergoszterolt 600 ml 4:1 térfogatarányú dietil-éter:benzol elegyben oldunk, és egy vízzel hűtött kvarcedényben argon atmoszférában, keverés közben, három órán át besugározzuk (Hannovia. bemerülő lámpa, 450 W). Az oldatot vákuumban bepároljuk, a kapott gumiszerű szilárd anyagot 100 ml etanolban oldjuk, és visszafolyatás mellett melegítjük argon atmoszférában, 8 órán át. Az oldatot ezután vákuumban koncentráljuk, a maradékot szilikagél oszlopon adszorbeáljuk, és 30:70 térfogatarányú etil-acetát:hexán eleggyel eluáljuk. így 1,2 g (60%) olyan (IX) képletű D4-vitamint (22.23-dihidroergokalciferol) kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
’H-NMR: (400 MHz, CDC13), δ ppm: 0,55 (3H, s,
18- H,), 0,78 (6H, dd, 26Π1, és 27-H,), 0,87 (3H, d, 21-H,), 0,93 (3H, d, 28-H,), 3,94 (1H, m, 3-H), 4,82 (1H, m (éles), 19-H), 5,04 (1H, m (éles),
19- H), 6,04 (1H, d, 7-H), 6,24 (1H, d, 6-H).
ml vízmentes piridinben oldott 3,0 g (7,5 mmol) (IX) képletű D4-vitaminhoz 0 ’C-on 3,6 g (19 mmol) frissen átkristályosított p-toluol-szulfonil-kloridot adunk.
A reakcióelegyet 5 ’C-on keverjük 24 órán át, majd 100 ml jeges telített nátrium-hidrogén-karbonát oldalba öntve keverés közben kvencseljük. A vizes szuszpenziót 3x100 ml diklór-metánnal extraháljuk. Az egyesített extraktumokat 3x200 ml 10%-os sósavoldattal, majd 3x200 ml telített nátrium-hidrogén-karbonát oldattal és 2x200 ml telített nátrium-klorid oldattal
HU 211 963 A9 mossuk, magnézium-szulfáton szárítjuk, és vákuumban koncentráljuk. így 3,5 g (84%) (X) képletű D4-vitamintozilát új intermediert kapunk, amelynek jellemzői a következők:
’H-NMR: (400 MHz, CDC13), δ ppm: 0,54 (3H, s,
18- H,). 0,78 (6H, dd, 26-H, és 27-H3), 0,87 (3H, d, 21-H,). 0,96 (3H, d, 28-H,), 2,45 (3H, s, CH, (tozilát) 4,68 (3H, m, 3-H), 4,82 (1H, m (éles),
19- H), 5,04 (1H, m (éles), 19-H), 5,95 (1H, d,
7-H), 6,09 (1H, d, 6-H), 7,34 és 7,79 (4H, d, aromás).
200 ml metanolban szuszpendált 17,0 g (202 mmol) nátrium-hidrogén-karbonáthoz keverés közben hozzácsepegtetünk 3,5 g (6,3 mmol) 10 ml vízmentes diklór-etilben oldott D4-vitamin-tozilátot. A reakcióelegyet egy éjszakán át argon atmoszférában melegítjük visszafolyatás közben, majd szobahőmérsékletűre hűtjük, és vákuumban körülbelül 50 ml-re koncentráljuk. A reakciókoncentrátumot 600 ml éterrel hígítjuk, 3x300 ml vízzel mossuk, magnézium-szulfáton szárítjuk, és vákuumban koncentráljuk. A maradékot szilikagél oszlopra visszük, és 10:90 térfogatarányú etil-acetát:hexán eleggyel eluáljuk. így 1,5 g (58%) olyan (XI) képletű új D4-3,5-ciklovitamin intermediert kapunk sűrű olaj formájában, amelynek elemzési eredményei a következők;
Ή-NMR: (400 MHz, CDClj), δ ppm: 0,56 (3H, s.
18-H,), 0.78 (6H, dd, 26-H, és 27-H,). 0,87 (3H, d. 21-H,), 0,94 (3H, d. 28-H3), 3.28 (3H, s, OCH„
4.2 (1H. d. 6-H), 4,91 (1H, m. (éles), 19-H), 4,98 (1H. m. 7-H), 5,08 (1H, d (éles), 19-H).
Egy háromnyakú lombikban 150 ml vízmentes diklór-metánban szuszpendált 0,22 g (2 mmol) szelénoxidhoz keverés közben 2,6 ml (7,8 mmol) vízmentes toluolban oldott vízmentes tercier-butilhidroperoxidot (3 mólos oldat) adunk. Az elegyet argon atmoszférában keverjük három órán át. Az elegyhez 0,3 ml (3,7 mmol) pindinl és 50 ml diklór-metánban oldva
1.5 g (3.6 mmol) (XI) képletű D4-ciklovitamint adunk. Az elegyet 30 percig keverjük és 200 ml 10%-os nátrium-hidroxid vizes oldatot adunk hozzá. A reakcióelegyet 500 ml éterrel hígítjuk, és a fázisokat elválasztjuk. A szerves fázist 3x200 ml 10%-os nátrium-hidroxid oldattal, 2x200 ml vízzel és 2x200 ml telített nátriumklorid oldattal mossuk, magnézium-szulfáton szárítjuk, és vákuumban koncentráljuk.
A maradékot szilikagél oszlopon abszorbeáljuk, 30:70 térfogatarányú etil-acetát:hexán eleggyel eluáljuk, és így 0,45 g (29%) olyan (XII) képletű loc-hidroxi-3,5ciklo-D4-vitamin új intermediert kapunk olaj formájában, amelynek elemzési eredményei a következők:
’H-NMR (400 MHz, CDClj), δ ppm. 0,54 (3H, s,
18-H,, 0,78 (6H, dd, 26-H, és 27-H,), 0,86 (3H, d,
21-H,). 0,95 (3H, d, 28-H,), 3,26 (3H, s, OCH,),
4.2 (ÍH, d, 6-H), 4,22 (1H, m, 1-H), 4,95 (1H, d,
7-H). 5,18 (lH,d, 19-H), 5,25 (1H, d, 19-H).
4,5 ml dimetil-szulfoxid és 3,6 ml jégecet elegyben oldott 0,45 g (1,05 mmol) (XII) képletű la-hidroxi3,5-ciklo-D4-vitamint 50 “C-on, argon atmoszférában melegítünk I órán át. A reakcióelegyet ezután 100 ml jeges telített nátrium-hidrogénkarbonát oldatba öntjük, és 3x200 ml éterrel extraháljuk. Az egyesített extraktumokat 3x200 ml telített nátrium-hidrogénkarbonát oldattal, majd 3x200 ml vízzel és 3x200 ml nátriumklorid oldattal mossuk, magnézium-szulfáton szárítjuk, és vákuumban koncentráljuk. így 0,4 g (92%) olyan elegyet kapunk, amely a tömegspektrometriás elemzés szerint 4:1 arányú 5,6-cisz- és 5,6-transz-la-hidroxiD4-viiamint tartalmaz. A 0,4 g (0,97 mmol) 5,6-cisz- és 5,6-transz-la-hidroxí-D4-vitamint 25 ml etilacetátban oldjuk, és 0,08 g (0,8 mmol) frissen átkristályosított maleinsavanhidriddel kezeljük. A kapott elegyet vákuumban bepároljuk, és a nyers elegyel szilikagél oszlopon 1:1 térfogatarányú etil-acetát:hexán eleggyel eluáljuk. így 90 mg (23%) olyan (XIII) képletű új 5,6-ciszla-hidroxi-D4- vitamin formát kapunk, amelynek elemzési eredményei a következők:
Olvadáspont: 128-130 °C.
IRmax (tiszta): 3400 cm'1 (OH elnyúlt);
’H-NMR (400 MHz, CDCI3), Ő ppm: 0,55 (3H, s.
18-H), 0.79 (6H. dd, 26-H és 27 H3), 0,87 (3H, d,
21-H), 0,94 (3H, d, 28-H,), 4,24 (1H, m, 3-H),
4,44 (1H, m, 1-H), 5,02 (1H, m (éles), 19-H), 5,34 (1H, m (éles), 19-H), 6,02 (1H, d, 7-H), 6,4 (1H, d,
6-H); tómegspektrum [Cl) m/e (relatív intenzitás):
415 (M+l), 41%), 397, (M+l-OH 100%), 379 (27%), 135 (22%).
2. példa la-Hidroxi-Di-vitamin biológiai hatásvizsgálata
Elválasztott hímpatkányokat (Holtzman törzs, Hollzman Company, Madisomn, Wisconsin) megfelelő mennyiségű kalciumot (0.47 tömeg%) és foszfort (0,3 tömeg%) tartalmazó D-vitaminhiányos táplálékkal etettünk. Ez a táplálék 3-4 héten belül olyan erős D vitaminhiányos állapotot idézett elő, amelyet alacsony szérum kalciumtartalom és gyenge növekedés jellemzett. A táplálék hatására szérum kalciumérték 4 hét után 7 mg/dl alá csökkent. A patkányokat ezután 4 csoportra osztottuk és egyik részüknek szájon át megfelelő hordozóban, például kókuszolajban, loc-hidroxiD4-vitamint, másik részüknek csak hordozót (kontroll) adtunk. Ezt a kezelést 14 napig folytattuk. A patkányokat az utolsó adagot követő 24 óra múlva leöltük, és a vér kalciumtartalmát standard laboratóriumi eljárással mértük. A kapott eredményeket az 1. táblázatban foglaljuk össze.
I. táblázat
Szérum kalciumkoncentráció növekedés
Vegyület adag [pg/kg-nap] patkányszám szérum kalcium-koncentráció ± %-os eltérés
Kontroll 10 6,1+0,48
la-OH-D4 0,042 8 7,1+0,80
la-OH-D4 0,250 7 11.6±0,45
1«-OH-D4 1,500 9 12,7+0,37
HU 211 963 A9
Az 1. táblázat adataiból láthatjuk, hogy az la-hidroxi-D4-vitamin hatásosan növeli a D-vitaminhiányos patkányok szérum kalciumkoncentrációját, azonban a válasz láthatóan dózisfüggő.
A válasz mértéke előnyösen hasonló a Wientroub és mtsai által a fentiekhez hasonló kísérleti körülmények között lefolytatott, vitaminhiányos patkányok 1,25-dihidroxi-D3-vitaminnal végzett kezelésénél kapottakkal.
Az ismertetést a Wientroub, S., Price, P. A., Reddi, A.
H. , The Dichotomy in the Effects of 1,24 dihydroxy vitamin D-, and 24.25 dihydroxy vitamin D3 on Boné Gamma-Carboxyglutamic Acid-Containing Protein in Serum and Boné in vitamin D-Deficient Rats, Calcif. Tissue Intéz (1987) 40:166-172 irodalmi helyen találjuk.)
3. példa
Toxicitás vizsgálat
Az la-0H-D4 akut orális toxicitását úgy mértük, hogy jól ismert eljárással meghatároztuk az átlagos halálos adag (LD50) mértékét.
A patkányokat 8-10 héten át standard laboratóriumi táplálékkal etettük. Mindkét nembeli állatnak egy orális adag la-OH-D4-t adtunk, az állatokat 14 napig figyeltük, és a pusztulási számot feljegyeztük. A kapott LD5o értékek: hímeknél 1,0 mg/kg és nőstényeknél 3,0 mg/kg.
Az la-hidroxi-Dj-vitamin ugyanilyen körülmények között végzett LD50 vizsgálatával 1,7 és
I, 8 mg/kg eredményeket kaptunk. A korábbi vizsgálatok szerint az la-hidroxi-D2 toxícitása kisebb, mint az 1-htdroxi-Dj-vitaminé. (A mérés ismertetését megtaláljuk a Sjoden, G.. Smith. C., Lindgren, U., and De Luca, H. F., Proc. Soc. Experimental Bioi. Med., 178:432— 436 (1985).
4. példa
1,25-Hidmxi-D4-vitainin előállítás és izolálás
A találmány szerinti la-hidroxi-D4-vitamint a vegyület néhány termékké, köztük az 1.25-dihidroxi-D4vitamin metabolittá alakító tenyésztett humán májsejtekkel inkubáljuk.
Az 1,25-metabolitot nagy nyomású folyadékkromatográfiás eljárással izoláljuk és tisztítjuk, és gázkromatográfiás tömcgspektrométeres eljárással azonosítjuk. A vonatkozó kísérletek azt igazolják, hogy az 1,25-dihidroxi-D4-vitamin a humán D-vitamin receptor fehérjével jó kötőaffinitást mutat, ami biológiai aktivitását igazolja.
Az alkalmazott eljárás a Strugnell és mtsai., Biochem. Pharm. Vol. 40:333-341 (1990).
5. példa
1,24-Dihidroxi-D^-vitamin előállítás és izolálás
Az l,24-dihidroxi-D4-vitamin előállítást és izolálást a fenti 4. példa szerinti eljárással végezzük. A találmány szerinti 1 ct-hidroxi-D4-vitamint néhány termékké. köztük az 1,24-dihidroxi-D4-vitamin metabolittá alakító tenyésztett humán májsejtekkel inkubáljuk. Az 1,24-metabolitot nagy nyomású folyadékkromatográfiás eljárással izoláljuk és tisztítjuk, és gázkromatográfiás tömegspektrométeres elemzéssel azonosítjuk.
A vonatkozó kísérletek azt igazolják, hogy a metabolitok a humán D-vitamin receptor feltétjével való kötőaffinitást mutatnak, ami biológiai aktivitásukat igazolja.
6. példa
Hiperkalcémia hatásvizsgálat
Nőstény patkányokat 0,8 tömeg% kalciumot és 0,6 tömeg% foszfort tartalmazó táplálékkal etettünk. A patkányokat négy csoportra osztottuk, és az egyik csoportnak 13 héten át hordozóval, mint például kókuszolajjal társított la-OH-D4-t a másik (kontroll) csoportnak önmagában hordozót adtunk. A kezelést szájon át végeztük. Az utolsó adag után 24 órával a patkányokat leöltük, és standard eljárással meghatároztuk szérum kalciumszintjüket.
Ez a kísérlet azt igazolta, hogy a szérum kalciumkoncentráció 2,5 gg/kg/nap la-0H-D4 koncentráció hatására nem vagy csak kismértékben emelkedik.
7. példa
További biológiai hatásvizsgálat
Hím patkányokat D-vitaminhiányos és alacsony kalciumkoncentráciőjú (0,02 tömeg%) táplálékkal etettünk. A patkányokat 4 hét múlva 4 csoportra osztottuk, és a csoportoknak intravénásán hordozóban, mint pl. etanolban lévő 1 a-OH-D4-gyel vagy önmagában etanolt adtunk. Az alkalmazás után 60 óra múlva a patkányokat leöltük, és a Martin and De Luca. Am. J. Physiol. 216:1352-1359. irodalmi helyen ismertetett eljárással, a kifordított patkóbél segítségével mértük a bélrendszeri kalciumátvitelt.
Az eljárás azt igazolja, hogy a bélrendszeri kalciumátvitelt stimulálása mennyiségfüggő.
8. példa
A kísérletben 55 és 75 év közötti posztmenopauzális, oszteoporotikus bejáró beteg klinikai vizsgálatát végeztük.
A kísérletben résztvevő 120 beteget három kezelt csoportra osztottuk, és a kísérletet 12-24 hónapig végeztük. A csoportok közül kettőnek állandó mennyiségű, azaz két különböző dózisban több, mint 3,0 gg/nap mennyiségű la-D4-vitamint és a többi csoportnak placebot adtunk. A betegek mindegyike normál tápanyaggal bevitt kalciumot (500-800 mg/nap) kapott, és nem alkalmaztunk kiegészítő kalciumot.
A betegcsoportok kezelés előtti és utáni vizsgálatát a következőnek megfelelően végeztük:
a) teljes testre vonatkozó, radiális, combcsonti és/vagy gerinccsonti ásványsűrűség-meghatározás, röntgensugár abszorpciometriás (DEXA) méréssel;
b) csípőforgó szövetvizsgálat; és
c) szérum oszteokalcin meghatározás.
A biztonsági méréseket vizelet hidroxi-prolin kiválasztás, szérum és vizelet kalciumszint, kreatinin kiválasztás, vér- karbamid nitrogéntartalom és egyéb szokásos meghatározásokkal végeztük.
A kísérlet azt igazolja, hogy az lot-D4-vitaminnal kezelt betegek a placebóval kezelt betegekhez képest
HU 211 963 A9 sokkal nagyobb teljes testre vonatkozó radiális, combcsonti és/vagy gerinccsonti ásványsűrűséget mutatnak. Ezenkívül a kezelt betegeknél a szérum oszteokalcinszint emelkedés is sokkal nagyobb, A kezelt betegek csontszövettani vizsgálata azt mutatja, hogy az la-D4vitamin normál csontképződést stimulál.
A figyelt biztonsági paraméterek azt mutatják, hogy az la-D4-vitaminnal végzett kezelés csak elhanyagolható mértékű hiperkalcémiát vagy hiperkalciuriát vagy egyéb metabolikus zavart okoz.
9. példa
A kísérletet 55 és 60 év között, egészséges posztmenopauzális nők klinikai vizsgálatával végeztük.
A kísérletben résztvevő 80 alanyt 2 kezelt csoportra osztottuk, és a kísérletet 12-24 hónapig végeztük. Az egyik csoportnak állandó mennyiségű (azaz 3,0 g/nap mennyiség feletti) la-D4-vitamint, a másik csoportnak placebót adtunk. A kísérletet a fenti 2. példa szerinti eljárással végeztük.
A kísérlet eredményei azt igazolják, hogy az laD4-vitaminnal kezelt páciensek az alapértékekhez képest kisebb mértékű teljes testre vonatkozó, radiális, combcsonti és/vagy gerinccsont sűrűségveszteséget mutatnak. A placebóval kezelt pácienseknél pedig az alapértékekhez képest lényeges mértékű fenti paratnéterromlást tapasztaltunk.
A megfigyelt biztonsági paraméterek azt mutatják, hogy az ilyen mérték 1a-D4-vitamin adagolás hossz ideig biztonságosan folytatható.
/ft példa
A kísérletet 30 vesebeteg rendszeres hemodializisen áteső férfi és/vagy nő beteggel végeztük egy 12 hónapos, kétszeresen vak, placebokontrollált klinikai vizsgálatban.
A páciensek mindegyikéi egy olyan 8 hetes kontrollvizsgálatnak vetettük alá, amelyben védő mennyiségű Dj-vitamin adagot (400 IU/nap) kaptak. A kontroll időszak után a pácienseket két véletlenszerű kezelt csoportra osztottuk. Az egyik csoportnak állandó mennyiségű (azaz több, mint 3,0 g/nap) 1«-D4-vitamint és normál táplálékkal bevitt kalciumot kapott, és nem alkalmaztunk kiegészítő kalciumot.
A két betegcsoport kezelés előtti és utáni vizsgálatait a következők szerint végeztük:
a) bélrendszeri kalcium abszorpció közvetlen mérés,
b) teljes testre vonatkozó radiális, csípőcsonti és/vagy gennccsonti ásványsűrűség-meghatározás; és
c) szérum kalcium és oszteokalcin meghatározás.
A biztonsági méréseket a szérum kalciumszint rendszeres figyelésével végeztük.
Az egyszeres vagy kétszeres izotóp eljárással végzett klinikai elemzések eredményei azt mutatják, hogy az la-D4-vitamin jelentősen növeli a szérum oszteokalcinszintet és a bélrendszeri kalcium abszorpciót. A hatóanyaggal kezelt páciensek az alapértékekhez viszonyítva normalizálódott szérum kalciumszintet, stabil teljes testre vonatkozó radiális, combcsonti és/vagy gerinccsonti ás vány sűrűséget mutatnak. A placebóval kezelt betegeknél azonban gyakori a hipokalcémia, lényegesen csökken a teljes testre vonatkozó radiális combcsonti és/vagy gerinccsonti ásvány sűrűség. A kezelt csoportoknál fellépő hiperkalcémia elhanyagolható mértékű.
Természetesen a találmány különböző változatai is a találmány) tárgyát képezik.

Claims (35)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. A biológilailag aktív (I) általános képletű vegyület, ahol a képletben
    R, jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport és R2 jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport -, valamint a vegyület sói, hidrátjai és szolvátjai.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti vegyület, ahol a vegyület az la-hidroxi-D4-vitamin.
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti vegyület, ahol a vegyület az 1,24-dihidroxi-D4-vitamin.
  4. 4. Az 1. igénypont szerinti a vegyület, ahol a vegyület az l,25-dihidroxi-D4-vitamin.
  5. 5. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyület, ahol R, jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport és R2 jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport, és a vegyület biológiai aktivitása az 1,25-D3vitamin biológiai aktivitását megközelíti, toxicitása pedig kisebb, mint az lot-hidroxi-Dvvitamin patkányokkal meghatározott komperatív LD50-értéke.
  6. 6. Az 5. igénypont szerinti vegyület, ahol a vegyület az loc-hidroxi-D4-vitamin.
  7. 7. Az 5. igénypont szerinti vegyület, ahol a vegyület az l,25-dihidroxi-D4-vitamin.
  8. 8. Az 5. igénypont szerinti vegyület, ahol a vegyület az l,24-dihidroxi-D4-vitamin.
  9. 9. A(X) képletű D4-vitamin-tozilát vegyület.
  10. 10. A (XI) képletű 3,5-ciklo-D4-vitamin vegyület.
  11. 11. A (XII) képletű la-hidroxi-3,5-ciklo-D4-vitamin.
  12. 12. Gyógyszerkészítmény, amely egy D-vitamin hiányos beteg szérum kalciumszint növelésére hatásos mennyiségű (I) általános képletű vegyületet - a képletben R, jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport és R2 jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport - egy gyógyászatiig elfogadható hordozóval együtt tartalmaz.
  13. 13. A 12. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, ahol a készítményt szájon át való kezelésre alkalmas kiszerelésű.
  14. 14. Eljárás D-vitaminhiány által előidézett betegségek kezelésére, azzal jellemezve, hogy a beteget gyógyászatiig hatásos mennyiségű (I) általános képletű vegyülettel kezeljük - a képletben R) jelentése hidrogénalom vagy hidroxilcsoport és R2 jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport.
  15. 15. Eljárás la-hidroxi-D4-vitamin előállítására, azzal jellemezve, hogy
    a) D4-vitamin tozilálásával D4-vitamin-tozilátot állítunk elő;
    b) a D4-vitamin-tozilátot 3,5-ciklo-D4-viiminná szolvolizáljuk;
    HU 211 963 A9
    c) a 3,5-ciklo-D4-vitamint la-hidroxi-3,5-ciklo-D4vitaminná oxidáljuk;
    d) az l-hidroxi-3,5-ciklo-D4-vitamint szolvolizáljuk, majd Diels-Adler reakcióval loc-hidroxi-D4-vitaminná alakítjuk át.
  16. 16. Eljárás emlősök hipokalcémia kezelésére, azzal jellemeze, hogy az emlősnek a szérum kalciumszint emeléséhez hatásos mennyiségben adagolunk egy (I) általános képletű vegyületet - a képletben amelyben R, jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport, és R2 jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport.
  17. 17. A 16. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy D-vitamin hiányos beteg kezelésére alkalmazzuk.
  18. 18. A 16. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kezelést a kezelt emlős tömegére számolva 0,04—1,5 g/kg/testtömeg mennyiség hatóanyaggal végezzük.
  19. 19. A 16. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve. hogy a kezelést D-vitamtnfüggő angolkór, hipoparatiroidizmus, posztoperatív vese eredetű oszteodisztrófia. máj cirrózis vagy steatorrea hipokalcémia esetén végezzük.
  20. 20. Eljárás D4-vitamin-tozilái előállítására, azzal jellemezve, hogy D4-vitamint vízmentes piridin jelenlétében toluol-szulfonil-kloriddal reagáltatunk.
  21. 21. Eljárás 3.5-ciklo-D4-vitamin előállítására, azzal jellemezve, hogy a D4-vitamin-tozilátot puffereit szolvolízisnek vetjük alá,
  22. 22. Eljárás la-hidroxi-3.5-ciklo-D4-vÍtamin előállítására. azzal jellemezve, hogy a 3,5-ciklo-D4-vitaminl szelén-dioxiddal végzett alkilikus reakcióval lcx-hidroxi-3,5-ciklo-D4-vitaminná oxidáljuk.
  23. 23. Eljárás la-hidroxi-D4-vitamin előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1 ot-hidroxi-3,5-ciklo-D4-vitamint dimetil-szulfoxid és valamilyen szerves sav elegyével szolvolizáljuk. majd a kapott 5.6-cisz-la-hidroxi- es 5.6-transz-la-hidroxi-D4-vitamint tartalmazó elegyet Diels-Alder reakciónak vetjük alá, és így az la-hidroxi-D4-vitamint eredményező 5.6-transz-lahidroxi-D4-vitaminadduktumot kapjuk.
  24. 24. Eljárás la-hidroxi-D4-vitamin előállítására, azzal jellemezve, hogy ergoszterolt 22,23-dihidroxi-ergoszterollá redukálunk, a 22.23-dihidroxi-ergoszteroll besugárzással D4-vitaminná alakítjuk át, és a D4-vitamint lct-hidroxi-D4-vitaminná hidroxilezzük.
  25. 25. Eljárás la-hidroxi-D4-vitamin előállítására, azzal jellemezve, hogy
    a) ergoszterol acilezésével ergoszteril-acetátot állítunk elő;
    b) az ergoszteril-acetát hidroxi-halogénezésével 3βacetoxi-6a-klór-ergoszta-7,2-dién-5a-oll állítunk elő;
    c) a 33-acetoxi-6a-klór-ergoszta-7,22-dién-5a-ol redukálásával és újraacilezésével 3P-acetoxi-ergoszta-7,22-dién-5-olt állítunk elő;
    d) a 33-acetoxi-ergoszta-7,22-dién-5a-olt 3p-acetoxiergoszta-7-én-5a-ollá hidrogénezzük;
    e) a 3P-acetoxi-ergoszta-7-én-5a-t 22,23-dihidro-ergoszteril-acetátlá redukáljuk;
    f) a 22,23-dihidro-ergoszteril-acetátot 22,23-dihidroergoszterollá redukáljuk;
    g) a 22,23-dihidro-ergoszterol besugárzásával D4-vitamint állítunk elő;
    h) a D4-vitaminból vízmentes piridinben végzett tozilezéssel D4-vitamin-tozilátot állítunk elő;
    i) a D4-vitamin tozilátot 3,5-cikIo-D4-vitaminná szolvolizáljuk·,
    j) a 3,5-ciklo-D4-vitaminból szelén-dioxiddal végzett allilikus oxidálással la-hidroxi-D4-vitamint állítunk elő;
    k) az lcchidroxi-3,5-ciklo-D4-vitamint dimetil-szulfoxid és valamilyen szerves sav elegyében szolvolizáljuk, a kapott 5,6-cisz-la-hidroxi- és 5,6-transzla-hidroxi-D4-vitamin elegyből lct-hidroxi-D4-vitamint eredményező 5,6-transz-la-hidroxi-D4-vitamin Diels-Adler adduktumot állítunk elő.
  26. 26. Gyógyszerkészítmény kalciummetabolizmus kontrollálására, amely egy gyógyászatilag elfogadható hordozót és legalább egy (I) általános képletű hatóanyagot tartalmaz - a képletben R, jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport és R2 jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport.
  27. 27. Profilaktikus vagy terápiás gyógyszerkészítmény D-vitamin hiányos betegségekre, amely tartalmaz egy gyógyászatilag elfogadható hordozót és egy (I) általános képletű hatóanyagot - a képletben R| jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport és R2 jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport.
  28. 28. Eljárás emlősökben kalciummetabolizmus szabályozására, azzal jellemezve, hogy az emlősnek egy (I) általános képletű hatóanyagot adagolunk - a képletben R, jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport és R2 jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport.
  29. 29. A 28. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az adagolást szájon át, intramuszkulárisan vagy intravénásán végezzük.
  30. 30. A 28. és 29 igénypontok szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kezelést a kezelt állatnak testtömegére számolva 0.04-1,5 g/kg mennyiségű hatóanyagot adagolunk.
  31. 31. Tápkészítmény emlősöknek, mely legalább egy (I) általános képletű hatóanyagot tartalmaz - a képletben R, jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport és R2 jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport -, és melynek szokásos fogyasztása az emlős testtömegére számolva 0,01-0,5 pg/kg/nap mennyiségű fenti vegyületet biztosít.
  32. 32. Gyógyszerkészítmény, amely D-vitamin hiányból származó abnormális kalciummetabolízmusban szenvedő emlősök kezelésére hatásos mennyiségű (I) általános képletű hatóanyagot - a képletben R] jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport és R2 jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport - egy gyógyászatilag elfogadható hordozóval együtt tartalmaz.
  33. 33. Eljárás D-vitaminhiány által előidézett hipokalcémia kezelésére, azzal jellemezve, hogy
    a) ergoszterolt 22,23-dihidro-ergoszterol előállítására alkalmas körülmények között, megfelelő mennyiségben 22,23-dihidro-ergoszterollá redukálunk;
    HU 21) 963 A9
    b) a 22,23-dihidro-ergoszterol besugárzásával D4-vitamint állítunk elő;
    c) a D4-vilamint megfelelő körülmények között és mennyiségben la-hidroxi-D4-vitaminná hidroxilezzük;
    d) a D4-vitamint tisztítjuk; és
    e) az emlőst a D-vitaminhiány által előidézett hipokalcémia kezelésére a szérum kalciumszint növeléséhez hatásos mennyiségű la-hidroxi-D4-vitamin és gyógyászatilag elfogadható hordozó kombinációval 10 kezeljük.
  34. 34. Gyógyszerkészítmény oszteoporőzis kezelésére, amely egy fiziológiailag elfogadható hordozót és hatásos mennyiségű (I) általános képletű hatóanyagot tartalmaz a képletben R, jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcso5 port és R2 jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport.
  35. 35. Eljárás oszteoporozis kezelésére, azzal jellemezve, hogy a betegségben szenvedő beteget oszteoporozis kezelésére hatásos mennyiség (I) általános képletű hatóanyaggal kezeljük - a képletben R, jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport és R2 jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport.
HU95P/P00745P 1990-09-21 1995-07-03 Novel 1alpha-hydroxy vitamin d4 and novel intermediates and analogues HU211963A9 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US58685490A 1990-09-21 1990-09-21

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HU211963A9 true HU211963A9 (en) 1996-01-29

Family

ID=24347363

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9201691A HU213471B (en) 1990-09-21 1991-09-20 Process for producing 1alpha-hydroxy-vitamin d4
HU95P/P00745P HU211963A9 (en) 1990-09-21 1995-07-03 Novel 1alpha-hydroxy vitamin d4 and novel intermediates and analogues

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9201691A HU213471B (en) 1990-09-21 1991-09-20 Process for producing 1alpha-hydroxy-vitamin d4

Country Status (18)

Country Link
US (1) US5488120A (hu)
EP (1) EP0503035B1 (hu)
KR (1) KR100231809B1 (hu)
CN (3) CN1032255C (hu)
AR (1) AR247817A1 (hu)
AU (1) AU650286B2 (hu)
BR (1) BR9106062A (hu)
CA (1) CA2069084C (hu)
DE (1) DE69132862T2 (hu)
DK (1) DK0503035T3 (hu)
ES (1) ES2169023T3 (hu)
HU (2) HU213471B (hu)
MX (1) MX9101224A (hu)
NO (1) NO921955L (hu)
NZ (1) NZ239897A (hu)
PL (1) PL170447B1 (hu)
WO (1) WO1992005130A1 (hu)
ZA (1) ZA917553B (hu)

Families Citing this family (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5602116A (en) * 1988-08-02 1997-02-11 Bone Care International, Inc. Method for treating and preventing secondary hyperparathyroidism
US5756783A (en) * 1990-09-21 1998-05-26 Bone Care International, Inc. 1α-Hydroxy-24-EPI-vitamin D4
US5763428A (en) * 1990-09-21 1998-06-09 Bone Care International, Inc. Methods of treating skin disorders with novel 1a-hydroxy vitamin D4 compounds and derivatives thereof
US5798345A (en) * 1990-09-21 1998-08-25 Bone Care International, Inc. Method of inhibiting the hyperproliferation of malignant cells
US20040009958A1 (en) * 1991-01-08 2004-01-15 Bone Care International, Inc. Methods for preparation and use of 1alpha,24(S)-dihydroxyvitamin D2
US6538037B2 (en) 1991-01-08 2003-03-25 Bone Care International, Inc. Methods for preparation and use of 1α,24(S)-dihydroxyvitamin D2
JP2927368B2 (ja) * 1992-01-29 1999-07-28 ボーン ケア インターナショナル インコーポレイテッド １α−ヒドロキシ−２４−ＥＰＩ−ビタミンＤ▲下４▼
EP0562497A1 (en) * 1992-03-27 1993-09-29 Nisshin Flour Milling Co., Ltd. 1 alpha-hydroxy vitamins D7 and D4' processes for the preparation thereof and pharmaceutical compositions
DE69331409T2 (de) * 1992-06-22 2002-08-29 Bone Care Internat Inc Oral 1alpha-hydroxyprevitamin d
US5763429A (en) * 1993-09-10 1998-06-09 Bone Care International, Inc. Method of treating prostatic diseases using active vitamin D analogues
US6242434B1 (en) * 1997-08-08 2001-06-05 Bone Care International, Inc. 24-hydroxyvitamin D, analogs and uses thereof
US6376479B1 (en) 1995-04-03 2002-04-23 Bone Care International, Inc. Method for treating and preventing hyperparathyroidism
US20020183288A1 (en) * 1995-04-03 2002-12-05 Bone Care International, Inc. Method for treating and preventing hyperparathyroidism
US20040043971A1 (en) * 1995-04-03 2004-03-04 Bone Care International, Inc. Method of treating and preventing hyperparathyroidism with active vitamin D analogs
US6566353B2 (en) 1996-12-30 2003-05-20 Bone Care International, Inc. Method of treating malignancy associated hypercalcemia using active vitamin D analogues
US6503893B2 (en) 1996-12-30 2003-01-07 Bone Care International, Inc. Method of treating hyperproliferative diseases using active vitamin D analogues
US20020128240A1 (en) * 1996-12-30 2002-09-12 Bone Care International, Inc. Treatment of hyperproliferative diseases using active vitamin D analogues
US6573256B2 (en) 1996-12-30 2003-06-03 Bone Care International, Inc. Method of inhibiting angiogenesis using active vitamin D analogues
KR20000071039A (ko) 1997-02-13 2000-11-25 비숍 찰스 더블유. 비타민 ｄ 화합물의 표적화된 치료학적 전달
US6900191B1 (en) 1997-02-25 2005-05-31 Oncquest, Inc. 1α-Hydroxyvitamin D5, its synthesis and use in cancer prevention
US6087350A (en) * 1997-08-29 2000-07-11 University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education Use of pretreatment chemicals to enhance efficacy of cytotoxic agents
CA2326117A1 (en) * 1998-03-27 1999-10-07 Oregon Health Sciences University Vitamin d and its analogs in the treatment of tumors and other hyperproliferative disorders
IL153378A0 (en) * 2000-07-18 2003-07-06 Bone Care Internat Inc STABILIZED 1alpha-HYDROXY VITAMIN D
US20040258801A1 (en) * 2001-09-27 2004-12-23 Alvin Ling Vitamin fortification of foodstuffs
US20040053895A1 (en) * 2002-09-18 2004-03-18 Bone Care International, Inc. Multi-use vessels for vitamin D formulations
US7148211B2 (en) * 2002-09-18 2006-12-12 Genzyme Corporation Formulation for lipophilic agents
WO2005102355A1 (en) * 2004-04-23 2005-11-03 Genzyme Corporation METHODS OF TREATING VARIOUS VITAMIN D METABOLISM CONDITIONS WITH 1α-HYDROXYVITAMIN D2
US20060003950A1 (en) * 2004-06-30 2006-01-05 Bone Care International, Inc. Method of treating prostatic diseases using a combination of vitamin D analogues and other agents
US7094775B2 (en) * 2004-06-30 2006-08-22 Bone Care International, Llc Method of treating breast cancer using a combination of vitamin D analogues and other agents
CN108218750B (zh) * 2017-12-30 2019-09-10 南京海融制药有限公司 一种阿法骨化醇的异构体杂质的定向合成方法及其用途
CN108663442B (zh) * 2017-12-30 2021-03-30 南京海融制药有限公司 一种阿法骨化醇片剂有关物质的检查方法
CN108047108B (zh) * 2017-12-30 2019-09-20 南京海融制药有限公司 一种阿法骨化醇的有关杂质pzb及其制备方法和用途

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2383446A (en) * 1941-06-04 1945-08-28 Du Pont Antirachitic materials and processes for their production
DK138672B (da) * 1976-09-28 1978-10-16 Danske Sukkerfab Krystallisationsapparat.
US4202829A (en) * 1978-01-05 1980-05-13 Wisconsin Alumni Research Foundation Process for preparing 1α-hydroxylated compounds
US4195027A (en) * 1978-01-16 1980-03-25 Wisconsin Alumni Research Foundation Process for preparing 1α-hydroxylated compounds
NL188286C (nl) * 1978-01-16 1992-05-18 Wisconsin Alumni Res Found Werkwijze voor het bereiden van een 1alfa-hydroxyvitamine d verbinding.
US4260549A (en) * 1979-05-21 1981-04-07 Wisconsin Alumni Research Foundation Process for preparing 1α-hydroxylated compounds
US4362710A (en) * 1980-07-04 1982-12-07 Nissan Gosei Kogyo Co., Ltd. Feeds for baby pigs, process for preparing the same and method of breeding baby pigs
US4661294A (en) * 1985-03-18 1987-04-28 The General Hospital Corporation Biologically active 1-thio derivatives of vitamin D
AU603340B2 (en) * 1985-08-02 1990-11-15 Leo Pharmaceutical Products Ltd. A/S (Lovens Kemiske Fabrik Produktionsaktieselskab) Novel vitamin d analogues
JP2550391B2 (ja) * 1988-06-30 1996-11-06 日清製粉株式会社 １β−ヒドロキシビタミンＤ▲下２▼およびＤ▲下３▼の製造方法
CA1333616C (en) * 1989-03-09 1994-12-20 Hector F. Deluca 19-nor-vitamin d compounds
JP2645130B2 (ja) * 1989-03-31 1997-08-25 日清製粉株式会社 ステロイド誘導体

Also Published As

Publication number Publication date
US5488120A (en) 1996-01-30
HUT62559A (en) 1993-05-28
EP0503035A1 (en) 1992-09-16
ES2169023T3 (es) 2002-07-01
WO1992005130A1 (en) 1992-04-02
BR9106062A (pt) 1993-03-09
CN1136433A (zh) 1996-11-27
MX9101224A (es) 1992-05-04
NO921955L (no) 1992-06-05
PL294706A1 (en) 1993-10-04
CN1130507A (zh) 1996-09-11
PL170447B1 (en) 1996-12-31
ZA917553B (en) 1992-07-29
DE69132862D1 (de) 2002-01-24
CA2069084A1 (en) 1992-03-22
CA2069084C (en) 2007-05-22
CN1061220A (zh) 1992-05-20
KR920703487A (ko) 1992-12-18
AU650286B2 (en) 1994-06-16
AR247817A1 (es) 1995-04-28
CN1032255C (zh) 1996-07-10
HU9201691D0 (en) 1992-09-28
HU213471B (en) 1997-06-30
EP0503035B1 (en) 2001-12-12
NO921955D0 (no) 1992-05-18
EP0503035A4 (hu) 1994-03-30
DK0503035T3 (da) 2002-04-15
NZ239897A (en) 1996-03-26
KR100231809B1 (ko) 1999-12-01
AU8542291A (en) 1992-04-15
DE69132862T2 (de) 2002-08-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU211963A9 (en) Novel 1alpha-hydroxy vitamin d4 and novel intermediates and analogues
US5763428A (en) Methods of treating skin disorders with novel 1a-hydroxy vitamin D4 compounds and derivatives thereof
US6242434B1 (en) 24-hydroxyvitamin D, analogs and uses thereof
US5798345A (en) Method of inhibiting the hyperproliferation of malignant cells
US6211168B1 (en) Methods for preparation and use of 1α,24 (S)-dihydroxy vitamin D2
US5789397A (en) Methods for preparation and use of 1A,24(S)-dihydroxy vitamin D2
US6538037B2 (en) Methods for preparation and use of 1α,24(S)-dihydroxyvitamin D2
CA2121689C (en) 1.alpha.,24(s)-dihydroxy vitamin d2, its formation and use
US6025346A (en) 1α-hydroxy vitamin D4 and novel intermediates and analogues
US5801164A (en) Methods of treating osteoporosis prophylactically or therapeutically
US20040009958A1 (en) Methods for preparation and use of 1alpha,24(S)-dihydroxyvitamin D2
US5354744A (en) Side chain unsaturated 1 alpha-hydroxyvitamin D analogs
US6251883B1 (en) Methods for preparation and use of 1α,24(S)-dihydroxy vitamin D2
Knutson et al. 1 alpha-hydroxy vitamin D4 and novel intermediates and analogues
MXPA97009684A (en) Use of vitamin d4 derivatives for treatment of p disorders
MXPA97009683A (en) Use of vitamin d4 derivatives for treatment against the can
AU6301699A (en) Methods for preparing and use of 1alpha,24(S)-dihydroxy

Legal Events

Date Code Title Description
HPC4 Succession in title of patentee

Owner name: BONE CARE INTERNATIONAL INC., US