HU211691A9 - Recombinant adenovirus vaccines - Google Patents
Recombinant adenovirus vaccines Download PDFInfo
- Publication number
- HU211691A9 HU211691A9 HU95P/P00643P HU9500643P HU211691A9 HU 211691 A9 HU211691 A9 HU 211691A9 HU 9500643 P HU9500643 P HU 9500643P HU 211691 A9 HU211691 A9 HU 211691A9
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- recombinant adenovirus
- type
- adenovirus
- gag
- human immunodeficiency
- Prior art date
Links
- 229940021704 adenovirus vaccine Drugs 0.000 title description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims abstract description 118
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 59
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 37
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 32
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 30
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 30
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 claims abstract description 20
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims abstract description 20
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 10
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 claims description 37
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 claims description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 23
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 16
- 108700004026 gag Genes Proteins 0.000 claims description 6
- 101150098622 gag gene Proteins 0.000 claims description 6
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 6
- 108700004025 env Genes Proteins 0.000 claims description 4
- 101150030339 env gene Proteins 0.000 claims description 4
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims description 4
- 101150059999 pro gene Proteins 0.000 claims description 4
- 241000701096 Human adenovirus 7 Species 0.000 claims description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 3
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 claims 8
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 claims 8
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 claims 8
- 239000006204 intramuscular dosage form Substances 0.000 claims 2
- 241001135572 Human adenovirus E4 Species 0.000 claims 1
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 claims 1
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 claims 1
- 239000006203 subcutaneous dosage form Substances 0.000 claims 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 57
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 36
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 31
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 30
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 28
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 28
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 20
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 20
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 17
- 241001135569 Human adenovirus 5 Species 0.000 description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 14
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 13
- 230000004044 response Effects 0.000 description 12
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 11
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 11
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 10
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 9
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 9
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 9
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 7
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- 108010078428 env Gene Products Proteins 0.000 description 6
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 6
- 101710177291 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 5
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 5
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 4
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 3
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 3
- 241000711920 Human orthopneumovirus Species 0.000 description 3
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 3
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 3
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 3
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 3
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 230000001589 lymphoproliferative effect Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 3
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010001258 Adenoviral infections Diseases 0.000 description 2
- 229920000623 Cellulose acetate phthalate Polymers 0.000 description 2
- 241001200329 Chanda Species 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 241000598171 Human adenovirus sp. Species 0.000 description 2
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 2
- 241000422980 Marietta Species 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 2
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000003263 anti-adenoviral effect Effects 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 229940081734 cellulose acetate phthalate Drugs 0.000 description 2
- 238000013480 data collection Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 2
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 2
- 229940126578 oral vaccine Drugs 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 229940124551 recombinant vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 208000004429 Bacillary Dysentery Diseases 0.000 description 1
- 201000001178 Bacterial Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 210000004366 CD4-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 206010018612 Gonorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 229940033330 HIV vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108010048209 Human Immunodeficiency Virus Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010065155 Human Immunodeficiency Virus env Gene Products Proteins 0.000 description 1
- 108010086541 Human Immunodeficiency Virus gag Gene Products Proteins 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001572 Mycoplasma Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 201000008235 Mycoplasma pneumoniae pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 238000011887 Necropsy Methods 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 108700005075 Regulator Genes Proteins 0.000 description 1
- 206010038687 Respiratory distress Diseases 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 206010040550 Shigella infections Diseases 0.000 description 1
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000002691 anti-thymic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 230000035584 blastogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000003756 cervix mucus Anatomy 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 1
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N glutaric acid Chemical compound OC(=O)CCCC(O)=O JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001786 gonorrhea Diseases 0.000 description 1
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 230000002516 postimmunization Effects 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 201000005113 shigellosis Diseases 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 238000011121 vaginal smear Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16211—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV gagpol
- C12N2740/16234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
Az orvosbiológiai kutatások egyik fő célja a vírusos megbetegedések elleni védelem biztosítása immunizáció útján. Egyik megközelítés szerint a fenti célra elölt vakcinákat alkalmaznak. Az elölt vakcinából azonban nagy anyagmennyiségek kellenek ahhoz, hogy elegendő antigén anyag maradjon vissza. Ezenkívül az elölt vakcinák gyakran nemkívánatos termékekkel szennyeződnek előállításuk során. A heterológ élő vakcinák genetikailag megfelelően átalakított adenovírus alkalmazásával, amely maga is egy vakcina - kiváló immunogénnek tűnnek [Chanok R., JAMA 195, 151 (1967)]. A találmány vektorként adenovírust alkalmazó vakcinákra vonatkozik.
A jelenleg forgalomban lévő adenovakcinák élő, fertőző adenovírust tartalmaznak, bélben oldódó bevonattal ellátott dózisformában. A vakcinálandó páciensnek történő beadagoláskor a vírus átjut a felső légúti rendszeren (ahol a betegséget kiváltó fertőzés valószínűleg létrejöhet), és a bélben válik szabaddá. A bélben a vírus a bélfalban reprodukálódik, ahol - noha nem képes adenovirális fertőzést kiváltani - adenovírus antitestek keletkezését indukálja, ily módon immunitást biztosít az adenovirális fertőzések ellen. Találmányunk értelmében az élő, fertőző adenovírust genetikailag úgy módosítjuk, hogy más, betegséget okozó organizmusok által termelt antigéneket kódoló géneket tartalmazzanak Felszabadulása után a vírus reprodukálódik, és egymástól függetlenül expresszálja mind az adenovirális antigént, mind a patogén antigént, ezáltal antitestképződést vagy sejt-mediálta immunitást indukál mind az adenovírus. mind az egyéb, betegséget okozó organizmus ellen. Élő vírus alatt - az elölt vírussal elentétben - olyan vírust értünk, amely önmagában, vagy egyéb genetikai anyaggal együtt képes azonos utódok létrehozására. Fertőző alatt azt értjük, hogy képes a virális genomot a sejtekbe bejuttatni.
Roy [EP 80 806 számon publikált szabadalmi leírás (1983)] javasolt egy eljárási mikrobák által okozott betegségek elleni immunitás biztosítására, egy idegen gént tartalmazó mikroba adagolásával, amely gén egy olyan másik mikroba antigénjét expresszálja, amellyel szemben az immunitás fennáll. Azt is leírta, hogy az előnyös orális készítmények bélben oldódó bevonattal vannak ellátva. Dulbecco olyan rekombináns adenovírus vakcinákat javasolt, amelyekben az adenovírus felületi proteinje úgy van módosítva, hogy szerkezetében tartalmazza egy idegen protein egy szegmensét, amely az állatnak való adagolás után a kívánt biológiai választ kiváltja [WO 83/02 393 számon publikált nemzetközi szabadalmi leírás (1983)]. Davis rekombináns adenovírusokból származó orális vakcinákat ismertetett [UK 2 166 349 B számú szabadalmi leírás].
Az 1-es típusú humán immunhiány vírust (HIV-1) etiológialag kapcsolatba hozzák a szerzett immunhiány szindrómával (AIDS) és hasonló betegségekkel [BarreSinoussi F, Science 220. 868 (1983); Gallo R.. Science 224. 500 (1984); Popovic M, Science 224, 497 (1984); Sarngadharan M., Science 224, 506 (1984)]. Az AIDS napjainkban világméretű járvány, amely ellen jelenleg nincs vakcina vagy gyógymód. A vakcina kifejlesztésére irányuló kutatások középpontjában a burok (env) glikoprotein áll, mint lehetséges antigén, amely védő immunitást biztosíthat. A tisztított gp 120 elleni anliszérumok in vitro képesek semlegesíteni a HIV-1et [Crowl R., Cell 41, 979 (1985); Putney S., Science 234, 1392 (1986); Ho D„ J. Virol. 61, 2024 (1987); Nara P., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84, 3797 (1987)]. A H1V-1 burok antigént különböző expressziós rendszerekben előállították, többek között Escherichia coliban [Crowl R., Cell 41, 979 (1985); Chang T„ Bio/Technology 3, 905 (1985); Dawson G., J. Infect. Dis. 157, 149 (1988)], valamint emlős sejtekben (Chakrabarti S„ Natúré 320, 535 (1986); Dewar R„ J. Virol. 63, 129 (1989); Rekosh D., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85. 334 (1988); Whealy M„ J. Virol. 62, 4185 (1988)], élesztő (Barr P„ Vaccine 5, 90 (1987);) és rovarsejtekben [Hu S., Natúré 328, 721 (1978); Rusche J„ Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84, 6294 (1987)].
A teljes HIV-1 env glikoproteint [Hu S.. J. Virol. 61. 3617 (1987)] vagy a tisztított rekombináns gp 120 env glikoproteint (Berman P„ Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85, 5200 (1988)] expresszáló élő rekombináns vakciniavírust mint lehetséges vakcinát csimpánzokban értékelték ki. A fenti vakcinákkal végzett aktív immunizálás jó sejt-mediálta immunválaszt és citotoxikus T-sejt aktivitást indukált az env antigénnel szemben [Zarling I, J. Immunoi. 139, 988 (1987)]. Minden kísérleti állat szerokonverziót mutatott ELISA és Western blotting vizsgálatban. Azonban az immunizált csimpánzokban nem fejlődött ki HIV-1-gyei szembeni semlegesítő antitest-titer, vagy a titer alacsony volt. Élő vírusokkal történő fertőzés ellen nem védték meg ezek a vakcinák a csimpánzokat. Típus-specifikus, HIV-1-et semlegesítő antitesteket találtak csimpánzokban a fertőzés korai szakaszában egy, a gp 120 C-terminális felében elhelyezkedő variábilis dómén (V3) ellen [Goudsmit J., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85. 4478 (1988)]. A rovarsejtekben termelt rekombináns gp 120 szintén indukált humorális immunválaszt kecskében [Rusche J., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84, 6294 (1987)]. Zagury [Natúré 332, 728 (1988)] kimutatta az anamnesztikus humorális és celluláris immunreakciót is emberben, egy gp 160-at expresszáló rekombináns vakciniavírus [Chakrabarti S., Natúré 320, 535 (1986): Hahn B.. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82. 4813 (1985)] alkalmazásával. Kimutatták mind a csoport-specifikus sejt-mediálta immunitást, mind a sejt-mediálta cilotoxicitást fertőzött T4 sejtek ellen. Ezek az eredmények azt jelzik, hogy HIV-1 elleni immunállapot alakítható ki emberben env-alapú rekombináns vakcina alkalmazásával. Újabban Desrosiers kimutatta, hogy a teljes inaktivált majom immunhiány vírussal (SIV) végzett vakcinálás képes védeni a majmokat az élő SIV fertőzéssel szemben [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86. 6353 (1989)]. A fenti eredmények alapján remélhető, hogy a humán AIDS vírus, a HÍV-1 elleni védelemre is lehet vakcinát találni.
Chanda ismertette a HIV-1 burok-glikoproteinek nagymértékű expresszióját rév gén jelenlétében, helper-independens 7-es típusú adenovírus rekombinán1 sok alkalmazásával [Virology 175, 535 (1990)]. Vernon ismertette egy rekombináns adenovírus vektor rendszerben felhalmozódott, HIV-1 gag-tartalmú részecskék ultraszerkezetét [J. Gén. Virology 72, 1243 (1991)]. Vemon ismertette az Ad7-rev-gag és Ad4-revgag HIV-1 rekombináns adenovírusok előállítását is.
A TALÁLMÁNY RÖVID ISMERTETÉSE
A találmány tárgya eljárás antitestek vagy sejt-mediálta immunitás kialakítására fertőző organizmussal szemben melegvérű emlősökben, amelynek értelmében a melegvérű emlősnek intranazálisan, intramuszkulárisan vagy szubkután módon olyan élő rekombináns adenovírust adagolunk, amelyben a virion szerkezeti protein a rekombináns adenovírus előállítására alkalmazott natív adenovíruséval azonos, és amely az antitesteknek megfelelő, vagy a sejt-mediálta immunitást indukáló antigént kódoló gént tartalmazza.
A találmány szerinti eljárás előnyösen humán immunhiány vírus (HIV-1), hepatitis B, hepatitis C, humán papillomavírus, légzési szinciciális vírus, rotavírus vagy parainfluenzavírus elleni antitestek kialakítására vonatkozik melegvérű emlősökben, amelynek értelmében a melegvérű emlősnek intranazálisan, intramuszkulárisan vagy szubkután módon olyan élő rekombináns adenovírust adagolunk, amelyben a virion szerkezeti protein a rekombináns adenovírus előállítására alkalmazott natív adenovíruséval azonos, és amely a humán immunhiány vírust (HIV-1), hepatitis B-t, hepatitis C-t, humán papillomavírust, légzési szinciciális vírust, rotavírust vagy parainfluenzavírust kódoló gént tartalmazza.
A találmány tárgyát képezi továbbá egy készítmény antitestek vagy sejt-mediálta immunitás kialakítására fertőző organizmussal szemben melegvérű emlősökben, a készítmény egy élő rekombináns adenovírust tartalmaz, amelyben a virion szerkezeti protein a rekombináns adenovírus előállítására alkalmazott natív adenovíruséval azonos, és amely az antitesteknek megfelelő, vagy a sejt-mediálta immunitást indukáló antigént kódoló gént tartalmazza, és a készítmény melegvérű emlősnek intranazálisan, intramuszkulárisan vagy szubkután módon adható dózisfozmában van.
Noha a leírásban specifikusan a 4-es, 5-ös és 7-es típusú adenovírust ismertetjük, a találmány értelmében bármilyen típusú élő, fertőző adenovírus alkalmazható. Ezenkívül, noha a leírásban specifikusan olyan adenovírusokat ismertetünk, amelyek egy korai 3-as régió (E3) deléciót tartalmaznak, vektorként gyengített, hőmérséklet-érzékeny léziót. vagy El deléciót tartalmazó adenovírusok is alkalmazhatók. Hasonlóképpen, annak ellenére, hogy specifikusan csak a HÍV, hepatitis B, hepatitis C, humán papillomavírus, légzési szinciciális vírus, rotavírus vagy parainfluenzavírus elleni antitesteket termelő vakcinákra utaltunk, a találmány bármely fertőző ágens elleni orális vakcinára vonatkozik, amely egy antigént tartalmaz, amely ellen a melegvérű állat antitesteket vagy sejt-mediálta immunitást produkál, és amely antigént egy legfeljebb mintegy 3000 bázispárból álló gén kódolja. így például a találmány tárgykörébe tartozik az influenza, hepatitis A, kolera, E. coli, pertussis, diftéria, tetanusz, shigellozis, gonorrhea, mikoplazma pneumonia,és hasonló betegségek elleni immunizálás is.
Egy előnyös kiviteli mód szerint a kezelési eljárás során a rekombináns adenovírust a HIV-1 fertőzésre fogékony emlősnek mind profilaktikusan, mind a Hívnek az állatban való kimutatását követően adagoljuk. Az anti-HIV válasz kiváltására az alábbi rekombináns adenovírusokat tartalmazó vakcinákat adagoljuk az állatoknak:.
| Vírus neve | Leíró név | ATCC név |
| Ad7-env | Ad7-tplenv- tplHrev | VR-2299 |
| Ad7-gag | Ad7-tplgag- tplHrev | VR-2393 |
| Ad7-gag-l | Ad7-rev-gag | VR-2392 |
| Ad4-env | Ad4-tplenv- tplHrev | VR-2293 |
| Ad4-gag | Ad4-tplgag- tplHrev | VR-2391 |
| Ad4-gag-l | Ad4-rev-gag | VR-2390 |
| Ad5-env | Ad5-tplenv- tplHrev | VR-2297 |
| Ad5-gag | Ad5-tplgag- tplHrev | VR-2398 |
A fenti táblázatban Ad4. Ad5 és Ad7 az E3 régió deléciót tartalmazó 4-es. 5-ős illetve 7-es típusú humán adenovírust jelenti. Az env a HÍV burok (envelope) glikoproteinre (gp 160) utal. A gag a HÍV gag/pro génre utal. Rév a HÍV regulátor génre utal. Hrev a rév gén egy változatára utal, amelyben a nukleotid-szekvenciát a humán génekben gyakran alkalmazott kodonok segítségével megváltoztattuk anélkül, hogy az aminosav-szekvencia megváltozott volna. Tpl a DNSszálon 5' irányban található (upstream), három részből álló adenovírus szignálszekvenciát jelenti, amely a rekombináns gének előtt elhelyezkedő első és második szignálból és egy közbeékelődő szekvenciából áll.
Alább részletesen ismertetjük, hogy Ad-HIV rekombináns vírusok intranazális adagolása naiv csimpánzokban HÍV rekombináns antigének ellen mind elsődleges, mind emlékeztető szinten, mind humorális, mind sejt-mediálta immunválaszt eredményezett. A csimpánzoknak adagolt rekombináns adenovírusokról kimutattuk, hogy antitestet termelnek a HÍV env és gag proteinjei ellen. HIV-specifikus IgG antitesteket mutattunk ki a nazális, nyál és vaginális szekrétumokban a rekombináns adenovírusok beadását követően, és Hívre specifikus IgA antitesteket mutattunk ki a nazális és nyál szekrétumban. A rekombináns adenovírusok első sorozatában (Ad7) észleltük a leghosszabban tartó hatást, és ezek indukálták a legjobb anti-Ad antitest-választ. Az eredmények azt is mutatták, hogy az Ad-HIV vakcinák intranazális adagolása felülmúlta a bélben oldódó kapszula formában lévő rekombináns vírusok orális adagolását.
HU 211 691 A9
A HÍV antigének elleni optimális immunválaszhoz első immunizálás és egy heterotípusos rekombináns Ad-HIV-vel megerősítő immunizálás kellett, hogy erős anti-HIV kötő antitesteket kapjunk. Ad-HIV vírusok intranazális adagolása hatásosan immunizálta a csimpánzokat, amelyek a HÍV-1-re semlegesítő antitestek magas titereivel válaszoltak HIV-1 alegység proteinnel végzett megerősítő immunizálás után.
A TALÁLMÁNY RÉSZLETES ISMERTETÉSE
Rekombináns adenovírusok előállítása
A találmány szerinti rekombináns adenovírusok egyes képviselőinek előállítását az alábbi példákkal szemléltetjük. A rekombináns vírusokat A549 sejtekben tenyésztettük, majd A549 sejteken titráltuk.
1. példa
Ad7-gag-l előállítása
A HÍV burok-proteint kódoló gént tartalmazó rekombináns adenovírusok előállítása ismert [Chanda P., Virology /75, 535 (1990)]; hasonló eljárást alkalmaztak a gag és pro beépítésére [Vemon S„ J. Gén. Virology 72, 1243 (1991)]. Röviden, a HIV-1 LAV törzs [Wain-Hobson S., Cell 40, 9 (1985)] teljes gag és pro kódoló régióját [335-2165. bázispár (bp)] tartalmazó DNS-fragmenst szerkesztettünk - amelyben egyetlen Sáli hely van a gag gén AUG kodonja előtt és egy Xbal hely a 2165. bp-nál - a virális rev-érzékeny elem írre: 7178-7698. bp) inszertálására. A három HIV-1 szekvenciát tartalmazó, 2,37 kb hosszúságú Sáli fragmcnst a 7-es típusú adenovírus (Ad7) fő késői promoterét (MLP). az első és második szignál között egy közbeékelődő szekvenciái tartalmazó háromrészes szignál-szekvenciát (TPL) és egy hexon poliadenilezési helyet (poliA) tartalmazó expressziós egységben lévő Sáli helyre inszertáltuk Chanda [Virology /75, 535 (1990)] eljárása szerint. Az expressziós egységet egy. a HIV-1 rév gént [Feinberg M.. Cell 46, 807 (1986); Sodroski J.. Natúré 321, 412 (1986)] egy 79.5 és 88,4 térképezési egység (m.u.) közötti deléciós E3 régiójában tartalmazó Ad7 genom [Chanda P„ Virology /75, 535 (1990)] jobb végétől 159 bp-nyira inszertáltuk ISussenbach: The Adenoviruses, szerk. Ginsberg, Plenum Press. 34-124. oldal (1984)].
2. példa
Ad4-gag-J előállítása
Az 1. példában az Ad7-gag-l rekombináns adenovírus előállítására ismertetett eljárással egy hasonló, az analóg Ad4 szekvenciákat és a három HÍV kódoló régiót tartalmazó expressziós egységet inszertáltunk egy, a HIV-1 rév gént egy 76 és 86 m.u. közötti E3 delécióban tartalmazó Ad4 genom jobb végétől 139 bp-nyira lévő helyre.
3. példa
Ad5-em előállítása
Az Ad5-tplenv-tplHrev a HIV-1 (LAV törzs) gp 160 teljes kódoló szekvenciáját és a rév gén egy Hrev-nek nevezett módosított változatát tartalmazza. Mind az env, mind a rév gént megelőzi egy szintetikus Ad5 háromrészes szignálszekvencia (Ad5-tpl). Az Ad5-tpl-t kémiai úton szintetizáltuk és pTZ vektorba klónoztuk. Ezután a gp 160 DNS-szekvenciát az Ad5-tpl mőgé inszertálva előállítottuk az Ad5-tplenv/PTZ18R kiónt. A Hrev-et (=360 bp) szintén kémiai szintézissel állítottuk elő, ebben a nukleotidszekvenciát az aminosavszekvencia megváltoztatása nélkül módosítottuk, a kodon-használal segítségével. Erre a homológ rekombináció elkerülése miatt volt szükség, mivel az env és rév génben van néhány azonos szekvencia. Az Ad5-tplenvhez hasonló módon, a Hrev gént is inszertáltuk a tpi mögé a pTZ18R vektorba, így kaptuk az Ad5-tpl Hrev plazmidot. Az Ad5-tpl Hrev-et tartalmazó teljes szekvenciát kivágtuk, majd az Ad5-tplenv mögé inszertáltuk, így kaptuk az Ad5-tplenv-tpl Hrev plazmidot. Ezt a plazmidot azután az Ad5 Marietta törzs deléciós E3 régiójába (78,8-85,7 m.u. deléció) inszertáltuk a 78,8 m.u.-nél. Ezt a plazmidot BglI enzimmel linearizáltuk, majd a vad típusú tisztított Ad5 vírusból származó 0-87 m.u. SnaBl fragmenssel elegyítettük. Miután az A549 sejteket a DNS elegyekkel transzferáltunk, levettük a rekombináns vírus plakkokat, háromszor plakk-tisztítottuk. és genomiálís szerkezetüket a fertőzőit sejtekből extrahált DNS restrikciós endonukleázhely analízisével ellenőriztük Hirt [J. Mól. Bioi. 26, 365 (1967)] módszerével.
4. példa
Ad5-gag előállítása
Az Ad5-tplgag-tplHrev a teljes gag és pro régiót, valamint a módosított rév gént, a Hrev-et tartalmazza. A szintetikus Ad5 háromrészes szignálszekvencia egy másolatát a gag és Hrev gének elé inszertáltuk. A virális rev-érzékeny elem (rre; 7178-7698 bp) inszertálására egy, a teljes gag és pro régiót (a HIV-I LAV törzs 335-2165 bp-ja) tartalmazó DNS-fragmenst szerkesztettünk, amely egyetlen Sáli helyet tartalmaz a gag gén AUG kodonja előtt, és egy Xba helyet a 2165 bp-nál. Két további plazmidot. az Ad5-tplgag-ot és az Ad5tplHrev-et az Ad5-tplenv-tplHrev előállításával analóg módon szerkesztettük meg. Ezután az AD5-tpl Hrev fragmenst az Ad5-tplgag mögé inszertálva előállítottuk az Ad5-tpl gagtplHrev plazmidot. Ezután az Ad5-tpl gag-tplHrev fragmenst egy E3 deléciót (78,8-85,7 m.u. E3 deléció) tartalmazó Ad5 Marietta törzs egyetlen Xbal helyére inszertáltuk, a 78,8 térképezési helyzetben. Ezután az Ad5 szekvenciát tartalmazó, kész plazmid terméket linearizáltuk, majd transzfektálás céljából a 0-87 m.u. SnaB I virális fragmenssel elegyítettük. A rekombináns plakkokat levettük, háromszor plakktisztítottuk, és a fertőző sejtekből extrahált DNS Hirtféle analízisével ellenőriztük.
példa
Bélben oldódó bevonatos kapszula előállítása
A rekombináns adenovírusokat A549 sejtekben tenyésztettük, és 3 fagyasztás-felolvasztás ciklus után összegyűjtöttük a sejteket. A derített fertőző sejt lízátumokat liofilizáltuk és 60-100 mg-onként 2. számú
HU 211 691 A9 zselatin kapszulákba töltöttük, 1 ml-es fecskendőt alkalmazva száraz körülmények között. A kapszulákat 10% cellulóz-acetát-ftalátot tartalmazó aceton: 100%-os etanol = 1:1 eleggyel vontuk be oly módon, hogy kézileg mindkét végüket hatszor beme- 5 rítettük, és a bemerítések között levegőn szárítottuk.
A fenti körülmények között 69-77 mg cellulóz-acetát-ftalátból álló bevonat képződött. A minta kapszulák szimulált gyomomedvvel (0,32% pepszin, 0,2% NaCl, pH 1,2) szembeni ellenállását 37 'C-on 1-órán keresztül vizsgáltuk. VanKel Disintegration Testőr készüléket alkalmazva. A kapszulákat lyukak és repedések szempontjából megvizsgáltuk, majd 10 ml szimulált bélnedvet (1,0% pankreatin, 0,05 mol/1 egybázisú kálium-foszfát, pH 7,5) tartalmazó 15 ml-es kémcsövekbe helyeztük és 37 ‘C-on forgattuk. Az összes vizsgált kapszula 37 °C-on keverés közben 1 órán keresztül rezisztensnek mutatkozott a szimulált gyomornedvvel szemben, és 15 percen belül oldódni kezdett a szimulált bélnedvben. A vírus mennyiségét összefüggő egysejtrétegű A549 sejttenyészeten titrál10 tuk, plakk-vizsgálattal, és a virális DNS stabilitását Hírt analízissel ellenőriztük.
Adagolási rend kezeléskor A rekombináns adenovírusok HÍV elleni immunogenicitását csimpánzokon értékeltük ki, három adagolási rend alkalmazásával. Az első adagolási rend szerint a rekombináns adenovírust orálisan adagoltuk bélben oldódó bevonattal ellátott kapszulákban (5. példa) a 0., 7. és 26. héten, majd egy env+gag alegység proteinnel megerősítő immunizálási végeztünk, adjuvánsként alumot alkalmazva. A második adagolási rend szerint az első adagolási rend szerint kezelt csimpánzoknak a 46. és 58. héten újabb rekombináns adenovírus megerősítő immunizálást adtunk intranazálisan. A harmadik adagolási rend szerint naív csimpánzoknak intranazálisan adagoltuk a rekombináns adenovírust a 0., 24. és 52. héten, majd a 72. héten egy env alegységgel megerősítő immunizálást végeztünk.
Az 1. és 2. adagolási rendet az 1. táblázatban foglaltuk össze.
/. táblázat
| Immunizálás | Időpont | 1. és 2. csimpánz | 3. csimpánz |
| l. adagolási rend | |||
| Első immunizálás | 0. hél | 1,5-107 pfu Ad7-env 2,0-109 pfu Ad7-gag-1 | 1,5-107 pfu Ad7-env |
| 1. megerősítés* | 7. hét | l,110,opfu Ad4-env 1.010,0pfu Ad4-gag-l | 1.1 Ί010 pfu Ad4-env |
| 2. megerősítés | 26.hét | 7,9 -10l0pfu Ad5-env | 7,9-101° pfu Ad5-env |
| 3. megerősítés* | 34. hét | 200 pg env 0,2% alumban 500 pg env 0,2% alumban | 200 pg env 0,2% alumban |
| t 2. adagolási rend | |||
| 1. intranazális megerősítés | 46. hét | 1,0-108 pfu Ad7-env 1,0-10* pfu Ad7-gag | 1,0-108 pfu Ad7-env |
| 2. intranazális megerősítés _ | 58. hét _ | 1.0 108 pfu Ad4-env 1,0108 pfu Ad4-gag | 1,0-108 pfu Ad7-env |
mindegyik dózist bélben oldódó bevonatos zselatin kapszulában adtuk 3 egymást követő napon + intramuszkulárisan adagolva
A harmadik adagolási rendet a 2. táblázatban foglaltuk össze.
2. táblázat
| Immunizálás | Időpont | 4. és 5. csimpánz | 6. csimpánz |
| Első immunizálás’ | 0. hét | 1,0-107 pfu Ad7 -env l,0-107pfuAd7-gag | 1,5 107 pfu Ad7-env |
| 1. megerősítés | 24. hét | 1,0-107 pfu Ad4-env 1,0-107 pfu Ad4-gag | 1,5-107 pfu Ad4-env |
| 2. megerősítés’ | 52. hét | 1,0-107 pfu Ad5-env 1.0-107pfu Ad5-gag | 1,5-107 pfu Ad5-env |
| 3. megerősítés+ | 75. hét | 200 mg env |
intranazálisan adagolva + intramuszkulárisan adagolva
HU 211 691 A9
Immunogenicitás mérése: kezelés az 1. adagolási rend szerint Csimpánzok fertőzése
Három csimpánzon (2 hím és 1 nőstény) végeztük a kiértékelést az 1. adagolási rend szerinti kezelést alkalmazva, az állatokat a vizsgálatot megelőzően
4-es és 7-es típusú humán adenovírusokkal szembeni semlegesítő antitestek jelenlétére szűrtük, és negatívnak találtuk. A rekombináns adenovírusokat tartalmazó, bélben oldódó bevonattal ellátott kapszulákat altatás alatt, gyomorszonda segítségével adtuk be, három egymást követő napon. Két csimpánz (1. és 2. számú) mind env, mind gag rekombináns vírust kapott. míg a harmadik (3. számú) csak env rekombináns vírust kapott.
Az env vagy gag gén termékeket tartalmazó adenovírusból származó alegység készítményeket fertőzött A549 sejttenyészetből tisztítottuk [lásd Vernon S., J. Gén. Virol. 72, 1243(1991); Natuk R., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 7777 (1992)]. A rekombináns antigéneket alum adjuvánssal fozmáltuk és intramuszkulárisan adagoltuk, dózisonként 200 pg env, illetve 500 pg gag részecskét.
A kísérlet során meghatározott időpontokban teljes vér, szérum és széklet mintákat vettünk. A teljes vért feldolgozva kaptuk a fehérvérsejt populációkat a FACS. HÍV CTL vizsgálathoz (HIV-env, HIV-gag vagy a lac gén termékeket expresszáló rekombináns vakciniavírusokat alkalmazva), és a limfoproliferációs vizsgálatokhoz a tisztított HÍV rekombináns gp 160-at, gp 120-at és p24-et. A szérum és a széklet mintákat felhasználásukig -70 “C-on tároltuk.
Rekombináns adenovírusok kimutatása székiét mintában
A csimpánzok széklet mintáit felolvasztottuk, és antibiotikumot tartalmazó DMEM-mel 10 térfogat%os szuszpenziókat készítettünk belőlük. A derített széklet szuszpenziókat alkalmaztuk a 60 mm-es szövettenyésztő csészékben lévő. összefüggő egysejtrétegű A549 sejttenyészet fertőzésére. 1 órás adszorpciós periódus után a meg nem kötött anyagot lemostuk és az egysejtréteget 0,5%-os agar felülrétegező tápközeggel felülrétegeztük. A 7-10 nap alatt kialakult plakkokat semleges vörös festéssel tettük láthatóvá, megszámláltuk és az agaros felső réteget óvatosan eltávolítottuk, vigyázva arra. hogy az egysejtréteget ne zavarjuk fel. A sejtrétegei 20 x SSC-ben előáztatott nitrocellulóz szűrő membránokra (Millipore Type HA. 0,45 pm) vittük át. a membránt a sejtrétegre helyeztük, és 2-4 percen keresztül hagytuk érintkezni az egysejtréteggel. A szűrőket lehántottuk. levegőn szárítottuk és 2 órán keresztül vákuumban 80 °C-on melegítettük, A nitrocellulóz szűrőket szobahőmérsékleten kétszer mostuk 3 x SSC/0.1% SDS eleggyel, e's standard eljárásokat alkalmazva előhibridizáltuk és hibridizáltuk [Poncet D., J. Virol. Methods 26, 27 (1989)]. A hibridizációs pufferhez ,2P-jelzeti oligonukleotid-próbákal adtunk (1 106 cpm) és egy éjszakán keresztül 42 °C-on inkubáltuk. DNS-próbákat állítottunk elő, amelyekkel detektálni lehetett az Ad4 szálat, Ad5 szálat, Ad7 szálat, HIV-env és HIV-gag specifikus szekvenciákat is [Wain-Hobson, Cell 40, 9 (1985)]. A szűrőket mostuk, autoradiografáltuk és számláltuk a hibridizációs jeleket.
Adenovírus neutralizálási vizsgálat
Kétszeres sorozathígítást készítettünk (1:4 hígításból kiindulva) hővel inaktivált (56 C, 30 perc) kutya szérumból, 96-rezervoáros mikrotitráló lemezen (0,05 ml/rezervoár), és 0,5 ml, 30-100 TCIDso vírust tartalmazó tápközeggel kevertük 37 C-on 1 órán keresztül. Minden egyes rezervoárba bemértünk 0,05 ml, 2104 A549 sejtet tartalmazó tápközeget, és a lemezeket 37 “C-on 5% COi-tartalom mellett 7-10 napon keresztül inkubáltuk. Minden mintát két párhuzamossal vizsgáltunk. A vizsgált szérumban a végpont meghatározására minden egyes vizsgálatnál használtunk vírus és fertőzetlen sejt kontrollt. A titereket azon legalacsonyabb hígítások reciprokával fejeztük ki, amelyeknél 50%-os citopatikus hatást észleltünk.
Anti-HlV antitestek kimutatásit ELISA és Western blatt ing módszerrel
Az anti-HIV antitestek kimutatására a HIV-1 antigénre adott csimpánz antitest választ mértük különböző hígításokban, kereskedelmi forgalomban kaphatb ELISA és Western biot készletek segítségével, a gyártó (DuPont, Wilmington. DE) útmutatásának megfelelően.
Eredmények
Minden majomtól széklet mintát vettúnk a vírussal való fertőzést megelőzően, és utána, és -70 ’C-on tároltuk. Minden egyes mintából 10%-os szuszpenziót készítettünk, és ezt alkalmaztuk az összefüggő A549 egysejtréteg fertőzésére. 7-10 nap elteltével a vírus plakkokat semleges vörös festéssel láthatóvá tettük, és az egysejtrétegeket nitrocellulóz membránokra vittük ál. A vizsgált mintákat különféle jelzett oligonukleotid próbákkal hibridizálva mutattuk ki az Ad4, Ad5. Ad7. HIV-env vagy HIV-gag génre specifikus szekvenciákat. A fenti plakk-hibridizációs módszerrel azonosíthatók a specifikus rekombináns Ad-HIV vírusok. A rekombináns vírusok egyike sem ürült a széklettel a fertőzés után 7 napnál tovább. A csúcs-titereket mindig az 1-3 napos mintákban mértük, és igen valószínű, hogy ez a nem adszorbeált vírus inokulumot jelentette. Csimpánzokon Ad-HBsAg rekombinánsokkal végzett korábbi kísérletek azt mutatták, hogy az Ad-HBsAg rekombinánsok a fertőzés után 30-40 napon keresztül kimutathatók. Úgy tűnik, hogy ezek a rekombináns vírusok nem szaporodtak jól in vivő bélben oldódó bevonattal ellátott kapszulákban történő adagolás esetén.
A szerokonverziót az alkalmazott adenovírus vektorok szerotípusaira neutralizálási vizsgálattal határoztuk meg. A csimpánzokban használt mindhárom szerotípus ellen igen alacsony - közepes anti-adenovírus szérum-titereket mértünk.
A rekombináns HÍV gén tezznékekkel szembeni
HU 211 691 A9 szerokonverziót ELISA vagy Western blotting módszerrel határoztuk meg. Nem mutattunk ki ELISA választ egyik csimpánzban sem az Ad5-env rekombinánssal végzett második megerősítő immunizálást megelőzően. Az Ad5-env-vel végzett inokulálás után 2 héttel a három ál- 5 lat közül kettőben mértünk anti-env választ. A gag és/vagy env preparátumok intramuszkuláris injektálásával enyhe megerősítő hatást lehetett előidézni a három közül egy állatban. A Western biot analízis sokkal érzékenyebbnek tűnt, mint az ELISA, és további előnye, hogy segítségével ki lehetett mutatni, melyik env és/vagy gag gén termék az, amelyet immunogénként felismertek. Alacsony szérum-antitest titereket mértünk mind az Ad7 rekombinánssal végzett első immunizálás, mind az Ad4 rekombinánssal végzett első megerősítő immunizálás után. Az env gén termékek elleni szérum-titer jelentős növekedését észleltük az Ad5-env rekombinánssal végzett második megerősítő immunizálás után. Abban a két állatban, amely gag gén termékeket kapott, jelentős növekedést észleltünk az alegység preparátumok beinjektálása után. A HÍV antigénekkel szembeni viszonylag jó Western biot literek ellenére, a három közül csak egy állat válaszolt semlegesítő antitestekkel. Ez a válasz a 2. számú csimpánzban igen alacsony volt (titer: 10-20). A fenti eredményeket a 3. táblázatban táblázatban foglaltuk össze.
3. táblázat
Az /. adagolási rend alkalmazásával kapott eredmények
| Csimpánz száma | Rekombináns vírus | Rekombináns vírust tartalmazó széklet (nap) | Anti-adeno semlegesítő csúcs-titer | Western biot anti-HÍV csúcs-titerek | Anti-HIV semlegesítő csúcs-titer | |
| env | gag | |||||
| 1. | Ad7-env, Ad7gag-1 | 2,2 | 128 | - | 20 | <10 |
| Ad4-env, Ad4gag-1 | 2,2 | 8 | - | 20 | <10 | |
| Ad5-env | 7+ | 128 | 100 | - | <10 | |
| alegység; env:gag | 100 | 1000 | <10 | |||
| Ad7-env, Ad7gag-1 | 3,2 | 64 | - | 20 | <10 | |
| Ad4-env, Ad4gag-1 | 1,7 | 128 | 20 | 100 | <10 | |
| Ad5-env | 7+ | 64 | 10 000 | 20 | ||
| alegység: env:gag | 1000 | 10000 | 10 | |||
| 3. | Ad7-env | 2 | 6 | 20 | N/A* | <10 |
| Ad4-env | 1 | 128 | 20 | N/A | <10 | |
| _ | Ad5-env | 7+ | 512 | 1000 | N/A | <10 |
| alegység: env | 100 | N/A | <10 |
N/A: nem mutatható
A sejt-mediálta immunitást csimpánzokból nyert perifériás vér mononukleáris sejtpopulációban mértük. 45 A HlV-specifikus CTL aktivitást vagy a HIV-env gén termékeket, vagy a HIV-gag gén termékeket, vagy a (nem specifikus citotoxicitás kontrolljára) lac gén termékeket expresszáló vakciniavírus rekombinánsokkal fertőzőit szingenetikus célsejtek lízisének meghatáro- 50 zásával mértük. A HlV-specifikus CTL-szerű aktivitás meglétét mértük ezen a módon.
A limfoproliferatív vizsgálatokat azért végeztük, hogy meghatározzuk, vajon a tisztított rekombináns env (gp 160, gp 120) vagy gag (p24) készítmények képesek-e a blasztogenezist stimulálni. Nem mértünk proliferációt az első immunizálás után, és a három állat közül csak egy adott limfoproliferatív választ az Ad4 rekombináns vírusokkal végzett első megerősítési követően. Mindhárom állat proliferatív választ adott a második megerősítő (Ad5-env) és a harmadik megerősítő (alegység preparátumok) immunizálás után.
immunogenicitás mérése: 2. adagolási rend Csimpánzok immunizálása és adatgyűjtés Három csimpánzt (2 hím és 1 nőstény) - amelyeket előzőleg Ad-HIV rekombináns vírusokkal fertőztünk bélben oldódó bevonattal ellátott kapszulában beadva, és adenovírusból származó gag és/vagy env alegységekkel végeztük a megerősítést (1. adagolási rend) - a 55 46. héten Ad7-HIV vírusokkal, és 12 hét elteltével (az 58. héten) Ad4-HIV vírusokkal fertőztünk intranazálisan. A rekombináns adenovírusokat foszfát-só pufferrel hígított szövettenyészetben adagoltuk cseppenként az altatott csimpánzok orrlyukába. Két csimpánz (az 1 és 60 2. számú) mind env, mind gag rekombináns vírust, míg
HU 211 691 A9 a harmadik (3. számú) csak env rekombináns vírust kapott.
A kísérlet során meghatározott időközökben teljes vér, szérum és széklet mintákat vettünk, és az 1. adagolási rend esetén ismertetett módon feldolgoztuk azokat. Az adenovírus kimutatását a széklet mintákban vagy a nazális kenetben, az adenovírus neutralizálási vizsgálatot és az anti-HIV antitestek kimutatását szintén az 1. adagolási rend esetén ismertetett módon végeztük.
Eredmények
Az első intranazális emlékezetető inununizálásra az Ad7 rekombinánst egyetlen, 1 108 pfu/csimpánz dózisban adagoltuk. A vírus beadásának időpontjában a 3.. 1. és 2. csimpánz szérum anti-Ad7 semlegesítő titere <4, 8, illetve 64 volt a megelőző orális immunizálás után. A nazális keneteket és a széklet mintákat plakkhibridizációs módszerrel vizsgáltuk a rekombináns vírus jelenléte szempontjából. Az Ad7-env rekombinánst a nazális kenetben két állatban kimutattuk az immunizálás utáni 7. napig. Az Ad7-env és Ad7-gag rekombináns a széklel mintában a fertőzés utáni 5-12. napig volt jelen. Összefüggés volt az Ad7-tel szembeni szérum titer és a rekombináns vírusok nazális kenetben és széklet mintában való kimutathatósága között. Az a két állal, amelyben az anti-HIV válasz a határértéket elérte, nagymértékben fokozott immunitást mutatott az íntranazális megerősítő immunizálás után. A harmadik állatban az megerősítő immunizálása hatása kisebb volt A HÍV elleni semlegesítő antitestek alacsony titerekkel így már mind a három állatban kimutathatók voltak. Szekréciós antitesteket mutattunk ki azokban a nazális kenet mintákban, amelyek anti-gag és/vagy env-kötő antitesteket tartalmaztak. Ezekben az állatokban az Ad7 rekombináns vírusok intranazális adagolásának eredményeként nem észleltünk légzési megbetegedésre utaló jelet vagy tünetet.
Három hónappal később ezeket a csimpánzokat Ad4 rekombinánsokkal immunizáltuk egyetlen. 1 · 10x pfu/csimpánz/vírus dózisban Az intranazális fertőzés időpontjában ezen állatokban a megelőző orális immu40 nizálásból származó szérum anti-Ad4 semlegesítő titer 128 és 256 közötti volt. A fertőzés utáni 3. napon a három állat közül kettő (a 2. és 3. számú) kicsit köhögött. A harmadik állat (az 1. számú) az 5. napon bakteriális pneumoniában (Streptococcus pneumoniae-t izoláltunk) elpusztult. A másik két állat rekedt hangokat hallatott meghallgatáskor, és mindkét csimpánzból S. pneumoniae-t izoláltunk. Elkezdtük az antibiotikumos kezelést, és mindkét csimpánz meggyógyult.
A helyzetet utólag megvizsgálva számos észrevételt tehettünk. Az intranazális adagolás időpontjában az 1. számú csimpánznak már láza volt, és kóros teljes vérképet mutatott. Aránytalan volt a jelenlévő polimorfonukleáris sejtek száma, és az éretlen polimorfonukleáris sejtek menynyisége 5% volt, ez a két információ együtt arra utal. hogy a vírussal való fertőzés előtt már végbement egy erős bakteriális fertőzés. A boncoláskor a tüdőből, májból, lépből és szárúmból vett mintákat mind negatívnak találtuk a fertőző adenovírus jelenléte szempontjából, szövettenyészetben, 3 vak passzálás után érzékeny A549 egy sejtrétegen vizsgálva. Hasonló eredményt kaptunk plakk-hibridizációs módszerrel is. A paraffinba ágyazott tüdő és máj mintákat negatívnak találtuk adenovírus antigének jelenléte szempontjából, kereskedelmi forgalomban kapható, adenovírus antigének kimutatására alkalmas immunfluoreszcens készlet alkalmazásával. Zárványlesteket figyeltünk meg H&Efestett tüdő metszetekben. A szakértői vélemény nem volt egybehangzó arra vonatkozóan, hogy ezeket a zárványokat adenovírus okozta-e vagy sem. Néhány hét múlva egy másik csimpánz is ugyanilyen körülmények között pusztult egy ugyanabban a főemlős-centrumban. Noha valószínűleg a rekombináns adenovírusok beadásának csak kis szerepe volt - ha egyáltalán volt - az 1. számú csimpánz halálában, óvatosságból antibiotikumok profilaktikus adagolását javasoltuk a rekombináns adenovírusok intranazális beadása előtt és után.
Az I. adagolási rend alkalmazásával és a 2. adagolási rend szerint az Ad7 rekombinánsok adagolásával kapott eredményeket a 4. táblázatban foglaltuk össze.
4. táblázat
Az 1. és 2. adagolási rend alkalmazásával kapott eredmények
| Csimpánz száma | Rekombináns vírus | Rekombináns vírus! tartalmazó széklet (nap) | Anti-adeno semlegesítő csúcs-liter | Western biot anti-HIV csúcs-titerek | Anti-HIV semlegesítő csúcs-liter | |
| env | gag | |||||
| 1. | 1. adagolási rend Ad7-env, Ad7gag-1 | 2,2 | 128 | - | 20 | <10 |
| Ad4-env, Ad4gag-l | 2,2 | 8 | - | 20 | <10 | |
| Ad5-env | 7+ | 128 | 100 | - | <10 | |
| alegység; env:gag | 100 | 1000 | <10 | |||
| 2. adagolási rend Ad7-env, Ad7gag | 12 | 512 | 10000 | 10 000 | 10 |
HU 211 691 A9
| Csimpánz száma | Rekombináns vírus | Rekombináns vírust tartalmazó széklet (nap) | Anti-adeno semlegesítő csúcs-titer | Western biot anti-HIV csúcs-titerek | Anti-HIV semlegesítő csúcs-titer | |
| 2. | 1. adagolási rend Ad7-env, Ad7gag-1 | 3,2 | 64 | - | 20 | <10 |
| Ad4-env, Ad4gag-1 | 1,7 | 128 | 20 | 100 | <10 | |
| Ad5-env | 7+ | 64 | 10000 | - | 20 | |
| alegység: env:gag | 1000 | 10 000 | 10 | |||
| 2. adagolási rend Ad7-env, Ad7gag | 9 | 8192 | 1000 | 10000 | 20 | |
| 3. | Ad7-env | 2 | 6 | 20 | N/A* | <10 |
| Ad4-env | 1 | 128 | 20 | N/A | <10 | |
| Ad5-env | 7+ | 512 | 1000 | N/A | <10 | |
| alegység: env | 100 | N/A | <10 | |||
| 2. adagolási rend Ad7-env, Ad7gag | 7 | 256 | 10000 | N/A | 10 |
N/A: nem alkalmazható
Immunogenicitás meghatátrozása: 3. adagolási rend
Csimpánzok immunizálása és adatgyűjtés
Három csimpánzon (2 hím és 1 nőstény) végeztük a kiértékelést a 3. adagolási rend szerinti kezelést alkalmazva. az állatokat a vizsgálatot megelőzően 4-es, 5-ös és 7-es típusú humán adenovírusokkal szembeni semlegesítő antitestek jelenlétére szűrtük, és negatívnak találtuk. Két csimpánz (4. és 5. számú) mind env, mind gag rekombináns vírust, míg a harmadik (6. számú) csak env rekombináns vírust kapott. Az állatokat proftlaktikusan antibiotikummal kezeltük, és nem találtunk légzési rendellenességet.
A kísérlet során meghatározott időközökben teljes vér, szérum és széklet mintákat vettünk, és az 1. adagolási rend esetén ismertetett módon feldolgoztuk azokat. Az adenovírus kimutatását a széklet mintákban vagy a nazális kenetben, az adenovírus neutralizálási vizsgálatot és az anti-HIV antitestek kimutatását szintén az 1. adagolási rend esetén ismertetett módon végeztük.
Eredmények
Első immunizálás Ad7 rekombinánsokks!
A rekombináns vírusok a fertőzés után 22-34 napon keresztül ürültek a széklettel. Nem találtunk rekombináns vírust a fertőzés után 2 héttel vett nazális szekrétumokban Az alkalmazott adenovírus vektorok szeroptípusával szembeni szerokon verziót semlegesítési vizsgálattal határoztuk meg. Kiváló anti-adenovírus titereket mértünk mind a három csimpánzban a mindegyik állatban alkalmazott Ad7 szerotípussal szemben. A rekombináns HÍV gén termékek elleni szerokonverziót Western blottinggal határoztuk meg. Az Ad7 rekombinánsokkal végzett első immunizálás után 4 héttel a három csimpánz közül kettőben mértünk anti-env és anti-gag választ. A fertőzés után 20 héttel mind a há25 rom állatban mérhető volt a HIV-antigénekkel szembeni antitestek mennyisége. Az első immunizálás utáni első 4 hétben vett nazális kénetekben nem találtunk szekréciós antitesteket. Egyik csimpánzban sem alakult ki kimutatható mennyiségű anti-HIV semlegesítő antitest válasz.
Első megerősítő immunizálás Ad4 rekombinánsokkal
A rekombináns Ad4 vírusok a fertőzés után 14-28 napon keresztül ürültek a széklettel. A nazális kenelek vizsgálata azt mutatta, hogy a rekombináns Ad4 vírusok mind a három csimpánzban kimutathatók a fertőzés után legalább 7 napon keresztül. Az intranazális adagolást követően jelentős anti-Ad4 válaszok alakultak ki az Ad4 szerotípus ellen. Ezek nagyságrendje alig volt alacsonyabb, mint az Ad7 rekombináns vírusok ellen mérteké. Mind a három állatban kiváló válaszokat mértünk a megerősítő immunizálás után gag és/vagy env antigének ellen. A 4. és 5. számú csimpánz nazális kenetében alacsony titerű (1:2) anti-gag és/vagy antienv válaszokat mértünk. Mégsem tudtunk kimutatni anti-HIV semlegesítő antitestet egyik állatban sem.
Második megerősítő immunizálás Ad5 rekombinánsokkal
A rekombináns Ad5 vírusok a fertőzés után 8 napon keresztül ürültek a széklettel. Nem tudtunk kimutatni rekombináns vírust a fertőzés után 0, 1 vagy 2 héttel vett nazális kénetekben. Szekréciós IgG és IgA mindhárom állattól vett nazális kenetben mérhető volt. Szekréciós antitesteket mutattunk ki mind a három állattól vett nyál mintában, és az egy nőstény csimpánztól vett vaginális kénetekben. Mind a három csimpánzban kimutattunk anti-HIV típus-specifikus semlegesítő antitesteket.
HU 211 691 A9
A 3. adagolási rend esetén kapott eredményeket az 5. táblázatban foglaltuk össze.
Az Ad5-HIV rekombinánssal végzett intranazális megerősítő immunizálás után a csimpánzok szekrétumaiban kimutatott anti-HIV válaszokat a 6. táblázatban foglaltuk össze.
5. táblázat
A 3. adagolási rend alkalmazásával kapott eredmények
| Csimpánz száma | Rekombináns vírus | Rekombináns vírust tartalmazó széklet (nap) | Anti-adeno semlegesítő csúcs-titer | Western biot anti-HIV csúcs-titerek | Anti-HIV semlegesítő csúcs-titer | |
| env | gag | |||||
| 4. | Ad7-env, Ad7gag-1 | 22,22 | 1204 | 100 | 1000 | <10 |
| Ad4-env, Ad4gag-1 | 14,14 | 128 | 10 000 | 10 000 | <10 | |
| Ad5-env, Ad-5gag | 8,8 | 32 | 10000 | 10000 | 20 | |
| alegység: env:gag | N/A* | N/A | >10 000 | 10000 | 640 | |
| 5. | Ad7-env, Ad7gag-l | 34.27 | 1024 | 100 | 10 000 | <10 _ |
| Ad4-env, Ad4gag-1 | 14.14 | 512 | 10000 | 10 000 | 20 | |
| Ad5-env, Ad5gag | 8.8 | 32 | 10 000 | 10 000 | 20 | |
| alegység: env:gag | N/A | N/A | 1000 | 10 000 | 320 | |
| 6. | Ad7-env | 34 | 1024 | 100 | N/A | <10 |
| Ad4-env | 28 | 512 | 10000 | N/A | <10 | |
| Ad5-env | 8 | 32 | 10000 | N/A | 40 | |
| alegység: env | N/A | N/A | >10 000 | N/A | 320 |
N/A: nem alkalmazható
6. táblázat
Szekrétumokban detektált anti-HIV válaszok
| Csimpánz száma | Felismert antigén | Hetek száma a megerősítés után | Vizsgált s/ekrétum | |||||
| Nazális | Nyál | Vaginális | ||||||
| IgA | IgG | IgA | IgG | IgA | IgG | |||
| 4, | env | 0 | _* | 360 | - | - | - | |
| 1 | 180 | 360 | - | - | - | 90 | ||
| 2 | 180 | 2880 | 20 | 20 | 90 | |||
| 4 | 720 | 1440 | - | 20 | 360 | |||
| gag | 0 | - | 180 | - | - | - | ||
| 1 | 360 | 360 | - | 20 | - | 90 | ||
| 2 | 720 | 2880 | - | 20 | - | 90 | ||
| 4 | 720 | 720 | - | 20 | - | 90 | ||
| 5. | env | 0 | — - | - | - | - | N/A* | N/A |
| 1 | 90 | - | - | N/A | N/A | |||
| 2 | - | 2880 | - | - | N/A | N/A | ||
| 4 | - | 360 | - | - | N/A | N/A | ||
| gag | 0 | - | - | .........i. | N/A | N/A | ||
| 1 | - | 90 | - | N/A | N/A |
HU 211 691 A9
| Csimpánz száma | Felismert antigén | Hetek száma a megerősítés után | Vizsgált szekrétum | |||||
| 2 | 90 | 1440 | - | - | N/A | N/A | ||
| 4 | - | 360 | - | - | N/A | N/A | ||
| 6. | env | 0 | - | - | - | - | N/A | N/A |
| 1 | - | - | - | - | N/A | N/A | ||
| 2 | - | 1440 | 20 | 20 | N/A | N/A | ||
| 3 | - | 360 | - | - | N/A | N/A | ||
| 4 |
£90 nazális és vagináiis kenetben és <20 nyál mintában + nem alkalmazható
A találmány értelmében vakcinák előállítására alkalmazható élő rekombináns adenovírust úgy állíthatjuk elő, hogy egy, a melegvérű állatokban egy fertőző organizmus elleni antitestnek megfelelő, vagy egy, a melegvérű állatokban fertőző organizmusokkal szembeni sejtmediálta immunitást indukáló antigént kódoló gént egy adenovírusba inszertálunk. Az ínszercíót Chanda P. K. és munkatársai által ismertetett eljárással [Virology 175, 535-547 (1990), lásd különösen az 539. oldalt) hajthatjuk végre.
A találmány szerint alkalmazható élő rekombináns adenovírust plakk-tisztítással tisztíthatjuk. A vakcina előállítására szükséges vírus mennyiségét megfelelő gazdaszervezetben való replikálással növelhetjük. A replikációt sejttenyészetben hajthatjuk végre. A sejttenyészet sejtjei előnyösen marha vese (BK) vagy humán karcinoma sejtek, előnyösen humán méhnyak-karcinoma sejtek, például a HeLa sejtvonal, vagy humán tüdőkarcinoma sejtek, például az A549 sejtvonal. A vírust -70 C-on tápközegben, például 5% magzati borjú szérumot tartalmazó DMEM-ben tárolhatjuk.
Intranazális adagolás céljára a vakcina a vírus mellett egy stabilizátort, például SPGA-t (szacharóz, foszfát, glutarát és albumin) és kívánt esetben egy vagy több cukrot tartalmazhat.
A találmányt előnyösen a főemlősök rendjébe tartozó emlősök (beleértve az embert is) kezelésére alkalmazhatjuk.
Claims (44)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Melegvérű emlősökben valamely fertőző organizmussal szemben antitestek vagy sejt-mediálta immunitás kialakítására alkalmas vakcina, amely élő rekombináns adenovírust tartalmaz, amelyben a virion szerkezeti protein a rekombináns adenovírus előállítására alkalmazott natív adenovíruséval azonos, és amely a fenti antitesteknek megfelelő, vagy a fenti sejt-mediálta immunitást indukáló antigént kódoló gént tartalmazza, és a vakcina intranazális, intramuszkuláris vagy szubkután dózisfozmában van.
- 2. Az 1. igénypont szerinti vakcina, amelyben a fertőző organizmus az 1-es típusú humán immunhiány vírus.
- 3. Az 1. igénypont szerinti vakcina, amelyben a fertőző organizmus az 1-es típusú humán immunhiány vírus, és a gén az 1 -es típusú humán immunhiány vírus antigént kódolja.
- 4. A 3. igénypont szerinti vakcina, amelyben az élő rekombináns adenovírus a 4-es típusú adenovírus, 5-ős típusú adenovírus és 7-es típusú adenovírus közül legalább egy. amely adenovírusokból a korai 3-as régió egy génje törölve van.
- 5. A 4. igénypont szerinti vakcina, amelyben az 1-es típusú humán immunhiány vírust kódoló gén az env gén, a gag/pro gén, a rév gén és a módosított Hrev gén közül legalább egy.
- 6. Az 5. igénypont szerinti vakcina, amelyben a rekombináns adenovírus az Ad7-tplenv-tplHrev, az Ad7-tplgag-tplHrev, az Ad7-rev-gag, az Ad4-tplenvtplHrev, az Ad4-tplgag-tplHrev, az Ad4-rev-gag, az Ad5-tplenv-tplHrev és az Ad5-tplgag-tplHrev közül legalább egy.
- 7. A 3-6. igénypontok bármelyike szerinti vakcina, amellyel a kezelés egy vagy több 1-es típusú humán immunhiány alegység protein adagolását is magában foglalja.
- 8. A 7. igénypont szerinti vakcina, amelyben az alegység protein az env vagy a gag.
- 9. Melegvérű emlősökben intranazális adagolással 1-es típusú humán immunhiány vírussal szembeni antitestek vagy sejt-mediálta immunitás kialakítására alkalmas vakcina, amely egy vagy több dózis élő rekombináns adenovírust tartalmaz, amelyben a virion szerkezeti protein a rekombináns adenovírus előállítására alkalmazott natív adenovíruséval azonos, és amely a fenti antitesteknek megfelelő, vagy a fenti sejt-mediálta immunitást indukáló 1-es típusú humán immunhiány vírust kódoló gént tartalmazza, és a vakcina legalább egy 1-es típusú humán immunhiány alegység proteinnel társítva adagolandó az emlősnek.
- 10. Élő rekombináns adenovírus, amely az X-tplYtplHrev, ahol X jelentése Ad4, Ad5 vagy Ad7 és Y jelentése env vagy gag.
- 11. A 10. igénypont szerinti rekombináns adenovírus, amely az Ad4-tplenv-tplHrev.
- 12. A 10. igénypont szerinti rekombináns adenovírus, amely az Ad5-tplenv-tplHrev.IIHU 211 691 A9
- 13. A 10. igénypont szerinti rekombináns adenovírus, amely az Ad7-tplenv-tplHrev.
- 14. A 10. igénypont szerinti rekombináns adenovírus, amely az Ad4-tplgag-tplHrev.
- 15. A 10. igénypont szerinti rekombináns adenovírus, amely az Ad5-tplenv-tplHrev.
- 16. Új vakcina, amely lényegében a leírás szerinti.
- 17. Új adenovírus, amely lényegében a leírás szerinti
- 18. Eljárás antitestek vagy sejt-mediálta immunitás kialakítására valamely fertőző organizmussal szemben melegvérű emlősökben, amelyben a melegvérű emlősnek intranazálisan, intramuszkulárisan vagy szubkután módon élő rekombináns adenovírust adagolunk, amelyben a virion szerkezeti protein a rekombináns adenovírus előállítására alkalmazott natív adenovíruséval azonos, és amely az antitesteknek megfelelő, vagy a sejt-mediálta immunitást indukáló antigént kódoló gént tartalmazza.
- 19. A 18. igénypont szerinti eljárás, amelyben a fertőző organizmus az 1-es típusú humán immunhiány vírus.
- 20. A 16. igénypont szerinti eljárás, amelyben a fertőző organizmus az 1-es típusú humán immunhiány vírus, és a gén az 1-es típusú humán immunhiány vírus antigént kódolja.
- 21. A 20. igénypont szerinti eljárás, amelyben az élő rekombináns adenovírus a 4-es típusú adenovírus,5-ös típusú adenovírus és 7-es típusú adenovírus közül legalább egy, amely adenovírusokból a korai 3-as régió egy génje törölve van.
- 22. A 21. igénypont szerinti eljárás, amelyben az 1-es típusú humán immunhiány vírust kódoló gén az env gén, a gag/pro gén. a rév gén és a módosított Hrev gén közül legalább egy.
- 23. A 22. igénypont szerinti eljárás, amelyben a rekombináns adenovírus az Ad7-tplenv-tplHrev, az Ad7-tplgagtplHrev. az Ad7-rev-gag. az Ad4-tplenvtplHrev. az Ad4-tplgag-tplHrev, az Ad4-rev-gag. az Ad5-tplenv-tplHrev és az Ad5-lplgag-tplHrev közül legalább egy.
- 24. A 20. igénypont szerinti eljárás, amelyben egy vagy több 1-es típusú humán immunhiány alegység proteint is adagolunk.
- 25. A 24. igénypont szerinti eljárás, amelyben az alegység protein az env vagy a gag.
- 26. A 23. igénypont szerinti eljárás, amelyben egy vagy több 1-es típusú humán immunhiány alegység proteint is adagolunk.
- 27. A 26. igénypont szerinti eljárás, amelyben az alegység protein az env vagy a gag.
- 28. Eljárás antitestek vagy sejt-mediálta immunitás kialakítására 1-es típusú humán immunhiány vírussal szemben melegvérű emlősökben, amelyben a melegvérű emlősnek intranazálisan egy vagy több dózis élő rekombináns adenovírusl adagolunk, amelyben a virion szerkezeti protein a rekombináns adenovírus előállítására alkalmazott natív adenovíruséval azonos, és amely a fenti antitesteknek megfelelő, vagy a fenti sejt-mediálta immunitást indukáló 1-es típusú humán immunhiány vírust kódoló gént tartalmazza, és az emlősnek legalább egy 1-es típusú humán immunhiány alegység proteint is adagolunk.
- 29. A 18. igénypont szerinti eljárás, amelyet lényegében a leírtak szerint hajtunk végre.
- 30. Élő rekombináns adenovírus, antitestek vagy sejtmediálta immunitás kialakítására valamely fertőző organizmussal szemben melegvérű emlősökben, az élő rekombináns adenovírus intranazális, intramuszkuláris vagy szubkután adagolásával, amely élő rekombináns adenovírusban a virion szerkezeti protein a rekombináns adenovírus előállítására alkalmazott natív adenovíruséval azonos, és amely élő rekombináns adenovírus az antitesteknek megfelelő, vagy a sejt-mediálta immunitást indukáló antigént kódoló gént tartalmazza.
- 31. A 30. igénypont szerinti élő rekombináns adenovírus, ahol a fertőző organizmus az 1-es típusú humán immunhiány vírus.
- 32. A 30. igénypont szerinti élő rekombináns adenovírus, ahol a fertőző organizmus az 1-es típusú humán immunhiány vírus, és a gén az 1 -es típusú humán immunhiány vírus antigént kódolja.
- 33. A 32. igénypont szerinti élő rekombináns adenovírus, ahol az élő rekombináns adenovírus a 4-es típusú adenovírus, 5-ös típusú adenovírus és 7-es típusú adenovírus közül legalább egy, amely adenovírusokból a korai 3-as régió egy génje törölve van.
- 34. A 33. igénypont szerinti élő rekombináns adenovírus, ahol az 1-es típusú humán immunhiány vírust kódoló gén az env gén, a gag/pro gén, a rév gén és a módosított Hrev gén közül legalább egy.
- 35. A 34. igénypont szerinti élő rekombináns adenovírus, ahol a rekombináns adenovírus az Ad7-tplenvtplHrev, az Ad7-tplgag-tplHrev, az Ad7-rev-gag, az Ad4-tplenv-tplHrcv, az Ad4-tplgag-tplHrev, az Ad4rev-gag. az Ad5-tplenv-tplHrev és az Ad5-tplgagtpIHrev közül legalább egy.
- 36. A 32. igénypont szerinti élő rekombináns adenovírus egy eljárásban való alkalmazásra, amely eljárás az élő rekombináns adenovírus intranazális, intramuszkuláris vagy szubkután adagolásából, továbbá egy vagy több 1-es típusú humán immunhiány alegység protein adagolásából áll.
- 37. A 36. igénypont szerinti élő rekombináns adenovírus, ahol az alegység protein az env vagy a gag.
- 38. A 35. igénypont szerinti élő rekombináns adenovírus, amellyel egy vagy több 1-es típusú humán immunhiány alegység protein adagolása is társul.
- 39. A 38. igénypont szerinti élő rekombináns adenovírus, ahol az alegység protein az env vagy a gag.
- 40. A 38. igénypont szerinti élő rekombináns adenovírus, intranazális adagolásra.
- 41. A 30. igénypont szerinti élő rekombináns adenovírus, amely lényegében a leírás szerinti.
- 42. A 9. igénypont szerinti vakcina, amelyben az 1 -cs típusú humán immunhiány alegység protein intramuszkuláris dózisformában van, és az élő rekombináns adenovírus intranazális dózisformája után adagolandó.
- 43. A 28. igénypont szerinti eljárás, amelyben azHU 211 691 A9 élő rekombináns adenovírus egy vagy több dózisát intranazálisan adagoljuk.
- 44. A 43. igénypont szerinti eljárás, amelyben az élő rekombináns adenovírus az Ad7-tplenv-tplHrev, azAd7-tplgagtplHrev, az Ad7-rev-gag, az Ad4-tplenvtplHrev, az Ad4-tplgag-tplHrev, az Ad4-rev-gag, az Ad5-tplenv-tplHrev és az Ad5-tplgag-tplHrev közül legalább egy.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US92649192A | 1992-08-07 | 1992-08-07 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU211691A9 true HU211691A9 (en) | 1995-12-28 |
Family
ID=25453282
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9302285A HU214364B (hu) | 1992-08-07 | 1993-08-06 | Eljárás rekombináns adenovírus vakcinák előállítására |
| HU95P/P00643P HU211691A9 (en) | 1992-08-07 | 1995-06-30 | Recombinant adenovirus vaccines |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9302285A HU214364B (hu) | 1992-08-07 | 1993-08-06 | Eljárás rekombináns adenovírus vakcinák előállítására |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0586076B1 (hu) |
| JP (1) | JP4093597B2 (hu) |
| KR (1) | KR100347219B1 (hu) |
| AT (1) | ATE243755T1 (hu) |
| AU (2) | AU680826B2 (hu) |
| BR (1) | BR9303226A (hu) |
| CA (1) | CA2101463C (hu) |
| DE (1) | DE69333057T2 (hu) |
| DK (1) | DK0586076T3 (hu) |
| ES (1) | ES2201055T3 (hu) |
| FI (1) | FI114318B (hu) |
| HK (1) | HK1009978A1 (hu) |
| HU (2) | HU214364B (hu) |
| IL (1) | IL106508A (hu) |
| MX (1) | MX9304765A (hu) |
| NZ (1) | NZ248328A (hu) |
| PT (1) | PT586076E (hu) |
| ZA (1) | ZA935355B (hu) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SG43029A1 (en) * | 1993-08-11 | 1997-10-17 | American Home Prod | Recombinant adenovirus vaccines |
| IL113817A (en) * | 1994-06-30 | 2001-03-19 | Merck & Co Inc | Polynucleotide for vaccination against the umbilical cord virus |
| FR2727867B1 (fr) * | 1994-12-13 | 1997-01-31 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Transfert de genes dans les motoneurones medullaires au moyen de vecteurs adenoviraux |
| EP0800403A2 (en) * | 1994-12-30 | 1997-10-15 | Chiron Corporation | Non-traumatic administration of gene delivery vehicles |
| KR100464395B1 (ko) * | 1997-10-13 | 2005-02-28 | 삼성전자주식회사 | 반도체소자의비아홀형성방법 |
| CA2378539A1 (en) | 1999-07-06 | 2001-01-11 | Merck & Co., Inc. | Adenovirus carrying gag gene hiv vaccine |
| US6733993B2 (en) | 2000-09-15 | 2004-05-11 | Merck & Co., Inc. | Enhanced first generation adenovirus vaccines expressing codon optimized HIV1-gag, pol, nef and modifications |
| US8926987B2 (en) | 2004-11-18 | 2015-01-06 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Replication-competent adenoviral vectors |
| US9132031B2 (en) | 2006-09-26 | 2015-09-15 | Zeltiq Aesthetics, Inc. | Cooling device having a plurality of controllable cooling elements to provide a predetermined cooling profile |
| US20080287839A1 (en) | 2007-05-18 | 2008-11-20 | Juniper Medical, Inc. | Method of enhanced removal of heat from subcutaneous lipid-rich cells and treatment apparatus having an actuator |
| US8523927B2 (en) | 2007-07-13 | 2013-09-03 | Zeltiq Aesthetics, Inc. | System for treating lipid-rich regions |
| EP3488833A1 (en) | 2007-08-21 | 2019-05-29 | Zeltiq Aesthetics, Inc. | Monitoring the cooling of subcutaneous lipid-rich cells, such as the cooling of adipose tissue |
| US8603073B2 (en) | 2008-12-17 | 2013-12-10 | Zeltiq Aesthetics, Inc. | Systems and methods with interrupt/resume capabilities for treating subcutaneous lipid-rich cells |
| BRPI1014623B1 (pt) | 2009-04-30 | 2020-01-07 | Zeltiq Aesthetics, Inc. | Sistema para tratamento de celulas subcutâneas ricas em lipídeos em uma área alvo |
| US9314368B2 (en) | 2010-01-25 | 2016-04-19 | Zeltiq Aesthetics, Inc. | Home-use applicators for non-invasively removing heat from subcutaneous lipid-rich cells via phase change coolants, and associates devices, systems and methods |
| US8676338B2 (en) | 2010-07-20 | 2014-03-18 | Zeltiq Aesthetics, Inc. | Combined modality treatment systems, methods and apparatus for body contouring applications |
| US10722395B2 (en) | 2011-01-25 | 2020-07-28 | Zeltiq Aesthetics, Inc. | Devices, application systems and methods with localized heat flux zones for removing heat from subcutaneous lipid-rich cells |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4925784A (en) * | 1986-04-04 | 1990-05-15 | Hoffmann-La Roche Inc. | Expression and purification of an HTLV-III gag/env gene protein |
| US5585264A (en) * | 1988-07-15 | 1996-12-17 | University Of Saskatchewan | Nucleotide sequences encoding recombinant bovine herpesvirus type-1 GI, GIII and GIV polypeptides |
| GB8919102D0 (en) * | 1989-08-22 | 1989-10-04 | Oxford Virology Ltd | A recombinant adenovirus dna sequence,a recombinant adenovirus expressing the dna sequence and a rhabdovirus vaccine including the recombinant adenovirus |
| WO1992011028A1 (en) * | 1990-12-19 | 1992-07-09 | Epitope, Inc. | Hiv reverse transcriptase vaccine |
| GB9114437D0 (en) * | 1991-07-03 | 1991-08-21 | Health Lab Service Board | Recombinant adenoviruses and the use thereof for detecting the presence in eukaryotic cells of the expression products of specific genes |
-
1993
- 1993-07-23 PT PT93305833T patent/PT586076E/pt unknown
- 1993-07-23 EP EP93305833A patent/EP0586076B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-07-23 ZA ZA935355A patent/ZA935355B/xx unknown
- 1993-07-23 DK DK93305833T patent/DK0586076T3/da active
- 1993-07-23 ES ES93305833T patent/ES2201055T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-07-23 DE DE69333057T patent/DE69333057T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1993-07-23 AT AT93305833T patent/ATE243755T1/de not_active IP Right Cessation
- 1993-07-28 IL IL106508A patent/IL106508A/en not_active IP Right Cessation
- 1993-07-28 CA CA002101463A patent/CA2101463C/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-07-30 BR BR9303226A patent/BR9303226A/pt not_active Application Discontinuation
- 1993-08-04 NZ NZ248328A patent/NZ248328A/en not_active IP Right Cessation
- 1993-08-04 JP JP19341093A patent/JP4093597B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1993-08-05 MX MX9304765A patent/MX9304765A/es not_active IP Right Cessation
- 1993-08-06 KR KR1019930015236A patent/KR100347219B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1993-08-06 AU AU44465/93A patent/AU680826B2/en not_active Ceased
- 1993-08-06 FI FI933495A patent/FI114318B/fi active IP Right Grant
- 1993-08-06 HU HU9302285A patent/HU214364B/hu not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-06-30 HU HU95P/P00643P patent/HU211691A9/hu unknown
-
1997
- 1997-08-18 AU AU34227/97A patent/AU715190B2/en not_active Ceased
-
1998
- 1998-09-19 HK HK98110746A patent/HK1009978A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MX9304765A (es) | 1995-01-31 |
| FI933495A0 (fi) | 1993-08-06 |
| AU680826B2 (en) | 1997-08-14 |
| AU4446593A (en) | 1994-02-10 |
| ES2201055T3 (es) | 2004-03-16 |
| IL106508A (en) | 1998-02-22 |
| EP0586076B1 (en) | 2003-06-25 |
| PT586076E (pt) | 2003-11-28 |
| HK1009978A1 (en) | 1999-06-11 |
| DE69333057T2 (de) | 2004-07-08 |
| AU3422797A (en) | 1997-11-20 |
| EP0586076A3 (en) | 1994-04-20 |
| ZA935355B (en) | 1995-01-23 |
| ATE243755T1 (de) | 2003-07-15 |
| FI114318B (fi) | 2004-09-30 |
| KR100347219B1 (ko) | 2003-02-25 |
| JPH06165689A (ja) | 1994-06-14 |
| IL106508A0 (en) | 1993-11-15 |
| DK0586076T3 (da) | 2003-10-20 |
| NZ248328A (en) | 1997-05-26 |
| AU715190B2 (en) | 2000-01-20 |
| HUT67302A (en) | 1995-03-28 |
| JP4093597B2 (ja) | 2008-06-04 |
| KR940003566A (ko) | 1994-03-12 |
| EP0586076A2 (en) | 1994-03-09 |
| CA2101463C (en) | 2007-03-13 |
| CA2101463A1 (en) | 1994-02-08 |
| HU9302285D0 (en) | 1993-11-29 |
| BR9303226A (pt) | 1994-03-08 |
| DE69333057D1 (de) | 2003-07-31 |
| HU214364B (hu) | 1998-03-30 |
| FI933495A (fi) | 1994-02-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6511845B1 (en) | Methods for producing an immune response against HIV-1 | |
| US4920209A (en) | Oral vaccines | |
| NATUK et al. | Immunogenicity of recombinant human adenovirus-human immunodeficiency virus vaccines in chimpanzees | |
| US5614404A (en) | Self-assembled, defective, non-self-propagating lentivirus particles | |
| JP4805511B2 (ja) | Ｈｉｖに対する免疫応答における改善、または免疫応答に関する改善 | |
| HU211691A9 (en) | Recombinant adenovirus vaccines | |
| US5858726A (en) | Self-assembling replication defective hybrid virus particles | |
| GB2181435A (en) | Vaccines and immunoassays for acquired immune deficiency syndrome | |
| WO1996030523A2 (en) | Antigen presentation system based on retrovirus-like particles | |
| US6051410A (en) | Self-assembled, defective, nonself-propagating viral particles | |
| PL188641B1 (pl) | Szczepionka polienv przeciwko HIV, sposób wytwarzania szczepionki polienv,zastosowanie szczepionki polienv,zastosowanie przynajmniej jednego rekombinowanego białka env HIV lub przynajmniej jednego wektora DNA, który koduje ekspresję rekombinowanego białka env HIV, plazmid bifunkcjonalny. | |
| WO1991019803A1 (en) | Self assembled, defective, nonself-propagating viral particles | |
| JP3034025B2 (ja) | 自己アセンブルド欠損非自己増殖性ウイルス粒子 | |
| EP0638316B1 (en) | Recombinant adenovirus vaccines | |
| US7063849B1 (en) | Use of HIV-1 gp120 and gp160 proteins modified in the v3 loop for the preparation of vaccine compositions and formulations containing the same | |
| JP2006503800A (ja) | Ｈｉｖに対する強化された免疫応答を誘導する方法 | |
| AU5190900A (en) | Recombinant adenovirus vaccines | |
| Zubair et al. | Live Recombinant Vaccine Vectors for HPV Antigens Associated with Infection and Malignancy | |
| WO1997028265A9 (en) | Measles immunization by dna transcription unit inoculation | |
| FR2593519A1 (fr) | Vaccin contre le syndrome immunodeficitaire acquis et intermediaires pour la preparation de ce vaccin | |
| JP2000333678A (ja) | 弱毒生エイズワクチン用の組換えｖｚｖ／ｈｉｖとその作製方法 |