HU211603A9 - Nonapeptide bombesin antagonists - Google Patents
Nonapeptide bombesin antagonists Download PDFInfo
- Publication number
- HU211603A9 HU211603A9 HU95P/P00466P HU9500466P HU211603A9 HU 211603 A9 HU211603 A9 HU 211603A9 HU 9500466 P HU9500466 P HU 9500466P HU 211603 A9 HU211603 A9 HU 211603A9
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- trp
- leu
- ala
- val
- gly
- Prior art date
Links
- 239000002790 bombesin antagonist Substances 0.000 title abstract description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 162
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 82
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 46
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims abstract description 22
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 22
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims abstract description 21
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 11
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims abstract description 11
- 150000002431 hydrogen Chemical group 0.000 claims abstract description 9
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 claims abstract description 8
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 claims abstract description 7
- 125000006273 (C1-C3) alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 6
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims abstract description 5
- 125000006274 (C1-C3)alkoxy group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- -1 L or D-Tpi Chemical group 0.000 claims description 29
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 23
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 13
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 9
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 8
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical group OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 claims description 7
- 125000003884 phenylalkyl group Chemical group 0.000 claims description 7
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 7
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 6
- QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N D-tryptophane Chemical group C1=CC=C2C(C[C@@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N 0.000 claims description 5
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical compound C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 2
- AKCRVYNORCOYQT-YFKPBYRVSA-N N-methyl-L-valine Chemical compound CN[C@@H](C(C)C)C(O)=O AKCRVYNORCOYQT-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 claims description 2
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 claims 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 16
- 125000000008 (C1-C10) alkyl group Chemical group 0.000 abstract description 6
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 abstract description 4
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 abstract description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 abstract description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 abstract 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 139
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 139
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 90
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 74
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 51
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 102000004862 Gastrin releasing peptide Human genes 0.000 description 29
- 108090001053 Gastrin releasing peptide Proteins 0.000 description 29
- PUBCCFNQJQKCNC-XKNFJVFFSA-N gastrin-releasingpeptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)C(C)C)[C@@H](C)O)C(C)C)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CNC=N1 PUBCCFNQJQKCNC-XKNFJVFFSA-N 0.000 description 28
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 27
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 27
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 27
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 26
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 24
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 21
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 21
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 102100036519 Gastrin-releasing peptide Human genes 0.000 description 16
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 15
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 13
- DNDCVAGJPBKION-DOPDSADYSA-N bombesin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1NC2=CC=CC=C2C=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C(C)C)C1=CN=CN1 DNDCVAGJPBKION-DOPDSADYSA-N 0.000 description 13
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 108010051479 Bombesin Proteins 0.000 description 12
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(N)C1=CC=CC=C1 MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 11
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 11
- AYMLQYFMYHISQO-QMMMGPOBSA-N (2s)-3-(1h-imidazol-3-ium-5-yl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 AYMLQYFMYHISQO-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 10
- WXYGVKADAIJGHB-ZDUSSCGKSA-N (2s)-3-(1h-indol-2-yl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2NC(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CC2=C1 WXYGVKADAIJGHB-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 9
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 9
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 9
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 9
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 9
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 9
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 9
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 6
- IFIFCDMFVPNPSB-QEJDUTAOSA-N (2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]acetyl]amino]-N-[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[2-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-amino-4-methylsulfanyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]butanediamide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)C1=CC=C(O)C=C1 IFIFCDMFVPNPSB-QEJDUTAOSA-N 0.000 description 5
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 5
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 5
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 5
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 5
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 108010048151 gastrin releasing peptide (14-27) Proteins 0.000 description 5
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 5
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 5
- GKKCIDNWFBPDBW-UHFFFAOYSA-M potassium cyanate Chemical compound [K]OC#N GKKCIDNWFBPDBW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 5
- RWBLWXCGQLZKLK-USVTTYPOSA-N (2s)-2-[(2-aminoacetyl)amino]-n-[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[2-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-amino-4-methylsulfanyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-methyl-1-oxob Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CN)C(C)C)C1=CN=CN1 RWBLWXCGQLZKLK-USVTTYPOSA-N 0.000 description 4
- OLKKLLUQLHIGOI-UHFFFAOYSA-N C(Cl)Cl.C(C)(C)N=C=NC(C)C Chemical compound C(Cl)Cl.C(C)(C)N=C=NC(C)C OLKKLLUQLHIGOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 102400000921 Gastrin Human genes 0.000 description 4
- 108010052343 Gastrins Proteins 0.000 description 4
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 4
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101800001638 Neuromedin-C Proteins 0.000 description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 125000006297 carbonyl amino group Chemical group [H]N([*:2])C([*:1])=O 0.000 description 4
- AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N chembl413654 Chemical compound C([C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N 0.000 description 4
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 4
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- AQTUACKQXJNHFQ-LURJTMIESA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanedioic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O AQTUACKQXJNHFQ-LURJTMIESA-N 0.000 description 3
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940123804 Bombesin antagonist Drugs 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- ZFTFAPZRGNKQPU-UHFFFAOYSA-N dicarbonic acid Chemical compound OC(=O)OC(O)=O ZFTFAPZRGNKQPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KJOZJSGOIJQCGA-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;2,2,2-trifluoroacetic acid Chemical compound ClCCl.OC(=O)C(F)(F)F KJOZJSGOIJQCGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 3
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 3
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N tert-butoxycarbonyl anhydride Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)OC(=O)OC(C)(C)C DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QDZOEBFLNHCSSF-PFFBOGFISA-N (2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-1-[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-1-[(2R)-2-amino-5-carbamimidamidopentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]hexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-N-[(2R)-1-[[(2S)-1-[[(2R)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-amino-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]pentanediamide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N)C1=CC=CC=C1 QDZOEBFLNHCSSF-PFFBOGFISA-N 0.000 description 2
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 2
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N D-arginine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 2
- GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N DMF Natural products CC1=CC=C(C)O1 GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 2
- 206010065713 Gastric Fistula Diseases 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-asparagine Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000006809 Pancreatic Fistula Diseases 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 102400000096 Substance P Human genes 0.000 description 2
- 101800003906 Substance P Proteins 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 2
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 2
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 2
- 239000012259 ether extract Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 2
- KMAKOBLIOCQGJP-UHFFFAOYSA-N indole-3-carboxylic acid Chemical compound C1=CC=C2C(C(=O)O)=CNC2=C1 KMAKOBLIOCQGJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- NROKBHXJSPEDAR-UHFFFAOYSA-M potassium fluoride Chemical compound [F-].[K+] NROKBHXJSPEDAR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000011698 potassium fluoride Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000002287 radioligand Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZYJPUMXJBDHSIF-NSHDSACASA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZYJPUMXJBDHSIF-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- OHCNRADJYUSTIV-FPNHNIPFSA-N (2s)-n-[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[2-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-amino-4-methylsulfanyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl] Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C(C)C)C1=CC=CC=C1 OHCNRADJYUSTIV-FPNHNIPFSA-N 0.000 description 1
- XXFIWKDBCZWORZ-YQZUKWOLSA-N (2s)-n-[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[2-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-amino-4-methylsulfanyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl] Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)C1=CN=CN1 XXFIWKDBCZWORZ-YQZUKWOLSA-N 0.000 description 1
- FSNCEEGOMTYXKY-UHFFFAOYSA-N 1,2,3,4-tetrahydro-beta-carboline-3-carboxylic acid Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1CNC(C(=O)O)C2 FSNCEEGOMTYXKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(tritiooxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO[3H])O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C)=C1 IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 0.000 description 1
- DFPYXQYWILNVAU-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1.C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 DFPYXQYWILNVAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LYBURMLGGDRMDL-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]butanoic acid Chemical compound CCC(C(O)=O)N(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O LYBURMLGGDRMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GNPISAHACGIXLZ-UHFFFAOYSA-N 3-(4-methylphenoxy)propanoic acid Chemical compound CC1=CC=C(OCCC(O)=O)C=C1 GNPISAHACGIXLZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ALKYHXVLJMQRLQ-UHFFFAOYSA-N 3-Hydroxy-2-naphthoate Chemical compound C1=CC=C2C=C(O)C(C(=O)O)=CC2=C1 ALKYHXVLJMQRLQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010600 3H thymidine incorporation assay Methods 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010001478 Bacitracin Proteins 0.000 description 1
- 241000269339 Bombina bombina Species 0.000 description 1
- 101001011741 Bos taurus Insulin Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102100030152 Complement C1r subcomponent-like protein Human genes 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-SCSAIBSYSA-N D-Proline Chemical compound OC(=O)[C@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical group 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010016717 Fistula Diseases 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- 206010061968 Gastric neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000003741 Gastrointestinal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 229910004373 HOAc Inorganic materials 0.000 description 1
- 101100326463 Homo sapiens C1RL gene Proteins 0.000 description 1
- 101000766306 Homo sapiens Serotransferrin Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010060377 Hypergastrinaemia Diseases 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N Pyroglutamic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002253 Tannate Polymers 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 229940122618 Trypsin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 206010047642 Vitiligo Diseases 0.000 description 1
- 201000008629 Zollinger-Ellison syndrome Diseases 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N acide pyroglutamique Natural products OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004695 acinic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 230000001857 anti-mycotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002543 antimycotic Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 1
- 229960003071 bacitracin Drugs 0.000 description 1
- 229930184125 bacitracin Natural products 0.000 description 1
- CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N bacitracin A Chemical compound C1SC([C@@H](N)[C@@H](C)CC)=N[C@@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N[C@H](CCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2N=CNC=2)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCCCC1 CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- KZIBQYUFIVUOHY-UHFFFAOYSA-N bis(2-methylpropyl)alumane toluene Chemical compound Cc1ccccc1.[H][Al](CC(C)C)CC(C)C KZIBQYUFIVUOHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N bovine insulin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000021466 carotenoid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001747 carotenoids Chemical class 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- BJDCWCLMFKKGEE-CMDXXVQNSA-N chembl252518 Chemical compound C([C@@](OO1)(C)O2)C[C@H]3[C@H](C)CC[C@@H]4[C@@]31[C@@H]2O[C@H](O)[C@@H]4C BJDCWCLMFKKGEE-CMDXXVQNSA-N 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 208000016644 chronic atrophic gastritis Diseases 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- CCGSUNCLSOWKJO-UHFFFAOYSA-N cimetidine Chemical compound N#CNC(=N/C)\NCCSCC1=NC=N[C]1C CCGSUNCLSOWKJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001380 cimetidine Drugs 0.000 description 1
- 210000001953 common bile duct Anatomy 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MKRTXPORKIRPDG-UHFFFAOYSA-N diphenylphosphoryl azide Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(=O)(N=[N+]=[N-])C1=CC=CC=C1 MKRTXPORKIRPDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 210000004188 enterochromaffin-like cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000003890 fistula Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 1
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 201000000052 gastrinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 125000004356 hydroxy functional group Chemical group O* 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 201000002313 intestinal cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- YECIFGHRMFEPJK-UHFFFAOYSA-N lidocaine hydrochloride monohydrate Chemical compound O.[Cl-].CC[NH+](CC)CC(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C YECIFGHRMFEPJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 108010061043 litorin Proteins 0.000 description 1
- OHCNRADJYUSTIV-UHFFFAOYSA-N litorin Natural products C=1N=CNC=1CC(NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(C)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1NC(=O)CC1)C(C)C)C(=O)NC(C(=O)NC(CCSC)C(N)=O)CC1=CC=CC=C1 OHCNRADJYUSTIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- QSEVMIMUBKMNOU-VIFPVBQESA-N methyl (2s)-4-methyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoate Chemical compound COC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)OC(C)(C)C QSEVMIMUBKMNOU-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000000250 methylamino group Chemical group [H]N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylformamide;piperidine Chemical compound CN(C)C=O.C1CCNCC1 CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000277 pancreatic duct Anatomy 0.000 description 1
- 210000001819 pancreatic juice Anatomy 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229960003424 phenylacetic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000003279 phenylacetic acid Substances 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 235000015497 potassium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000028 potassium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011736 potassium bicarbonate Substances 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 235000003270 potassium fluoride Nutrition 0.000 description 1
- TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M potassium hydrogencarbonate Chemical compound [K+].OC([O-])=O TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N protirelin Chemical compound NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CN=CN1 XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- ZNJHFNUEQDVFCJ-UHFFFAOYSA-M sodium;2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid;hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+].OCCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 ZNJHFNUEQDVFCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- ADNPLDHMAVUMIW-CUZNLEPHSA-N substance P Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N)C1=CC=CC=C1 ADNPLDHMAVUMIW-CUZNLEPHSA-N 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 230000001839 systemic circulation Effects 0.000 description 1
- 150000003892 tartrate salts Chemical class 0.000 description 1
- RQSBRFZHUKLKNO-VIFPVBQESA-N tert-butyl n-[(2s)-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]carbamate Chemical compound CC(C)C[C@@H](C=O)NC(=O)OC(C)(C)C RQSBRFZHUKLKNO-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000012485 toluene extract Substances 0.000 description 1
- 238000005809 transesterification reaction Methods 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 1
- APJYDQYYACXCRM-UHFFFAOYSA-N tryptamine Chemical compound C1=CC=C2C(CCN)=CNC2=C1 APJYDQYYACXCRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- JPZXHKDZASGCLU-LBPRGKRZSA-N β-(2-naphthyl)-alanine Chemical compound C1=CC=CC2=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC=C21 JPZXHKDZASGCLU-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/02—Linear peptides containing at least one abnormal peptide link
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
- C07K7/086—Bombesin; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
Nonapeptidek mint bombezin antagonisták
A találmány kormányzati támogatással készült, amely támogatást az N. C. I. (NIH) kapott, száma CA 40 077. Az U. S. kormánynak bizonyos jogai vannak a bejelentést illetően.
A találmány területe
A találmány tárgyát olyan új peptidek képezik, amelyek emberben a rákos daganatok növekedését befolyásolják. Közelebbről, a találmány tárgyát [tiA’pszeudojnonapeptid bombezin antagonisták képezik, amely nonapeptidek az N- és/vagy C-terminálisukon D- vagy L-triptofánt vagy 2,3,4,9-tetrahidro-lH-pirido-[3,4b]indol-3-karbonsav (Tpi) triptofán analógot tartalmaznak, vagy amely nonapeptidek antagonista hatással bírnak bombezinnel vagy bombezinszerű peptidekkel vagy sójukkal szemben; a találmány tárgyát képezik továbbá az ezeket a hatóanyagokat tartalmazó gyógyászati kompozíciók, és ezen peptidek alkalmazása.
A találmány háttere
A találmány olyan polipeptid vegyületekre vonatkozik, amelyek antagonista hatással bírnak bombezinnel vagy bombezinszerű peptidekkel szemben, például gasztrint szabaddá tevő peptiddel (GRP). neuromedin C-vel és hasonló peptidekkel szemben, amelyeket a továbbiakban bombezin antagonista sajátságúakként említünk, és hasznosak például melegvérű állatok, például ember, rosszindulatú (malignans) megbetegedéseinek kezelésére. A találmány tárgyát képezik új polipeptidek. eljárás előállításukra, új gyógyászati készítmények. amelyek a fenti polipeptid vegyületeket tartalmazzák. valamint eljárás az ezeket tartalmazó gyógyszerek készítésére és alkalmazásukra bombezin-antagonista hatás kiváltására melegvérű állatokban, például emberben.
A bombezin egy letradekapeptid-amid. amelyet először Bombina-bombina béka bőréből izoláltak lAnastasi. Erspamer és Bueci. Experientia, 27. 166 (1971)]. Ismeretes, hogy a bombezin egér Swiss 3T3 fibroblaszt sejtekre hatásos mitogén szer (Rozengurt és Sinnett-Smith. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80, 2936 (1983)] és fokozza a tengerimalac pankreász-acinus amiláz kiválasztását [Jensen, Jones. Folkers és Gardner. Natúré. 309, 61 (1984)]. Az is ismert, hogy humán kis sejtes tüdőrák (SCLC) sejtek bombezinszerű peptideket termelnek és választanak ki [Moody. Pert. Gazdát, Carney és Minna, Science, 214. 1246 (1981)], és hogy bombezinszerű peptidek exogén úton adagolva fokozzák humán SCLC sejtek in vitro szaporodását ICarney. Cuttita, Moody és Minna. Cancer Research, 47, 821 (1987)], továbbá, hogy egy a bombezin és GRP C-terminális régiójára fajlagos monoklonális antitest GRP-nek a receptorához való kötődését blokkolni képes. és a humán SCLC sejteknek mind in vitro. mind in vivő szaporodását megakadályozza (Cuttita. Carney. Mulshine. Moody. Fedorko. Fischler és Minna, Natúré, 316. 823 (1985)]'
A bombezinszerű tulajdonságokkal bíró GRP, amelyet sertés bélből izoláltak, és 27 aminosavat tartalmaz [Mc Donald, Jornwall, Nilsson, Vagne, Ghatei, Bloom és Mutt, Biochem. Biophys. Rés. Commun. 90, 227 (1979)] széleskörűen elterjedt peptidamid, amelynek C-terminális aminosav-szekvenciája majdnem azonos a bombezinével. A neuromedin C egy dekapeptid-amid, amelynek szerkezete azonos a GRP C-terminális régiója utolsó 10 aminosavjával, és amelyet kutya vékonybélből izoláltak (Reeve, Walsh, Chew, Clark, Hawke és Shively, J. Bioi. Chem. 258, 5582 (1983)]. A GRP számos biológiai választ, köztük gasztrinnak a szisztémás keringésbe való szabaddá válását stimulálja. Növekedési faktorként is működik egér 3T3 fibroblasztokban, és kis-sejtes tüdőrák (SCLC) sejtekben. Ennek megfelelően kialakult az a nézet, hogy a GRP közvetlen patofiziológiás szerepet játszik autokrin szaporodási mechanizmus révén az SCLC kifejlődésében.
A bombezin. a neuromedin C és a GRP karboxilterminális nonapeptidje szerkezetét az alábbiakban mutatjuk be: bombezin pGlu-Gln-Arg-Leu-Gly-AsnGln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2 neuromedin C H-Gly-Asn-His-Trp-Ala-Val-GlyHis-Leu-Met-NHi a GRP C-terminális nonapeptidje -Asn-His-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NHi.
Más, kétéltűekből származó bombezinszerű peptidek iránti kutatás vezetett egy pápua, új-guineai béka bőrében egy nonapeptid. a litorin (pGlu-Gln-Trp-AlaVal-Gly-His-Leu-Mel-NH2) izolálására, amely nonapeptid a leghatásosabb bombezin (Yasukara és munkatársai, Chem. Pharm. Bull., 27, 492 (1979)]. A bombezin analógokkal folytatott vizsgálatok azt mutatták, hogy a bombezin 6-14 helyzetében lévő 9 aminosavmaradékból álló minimális szegmens a bombezin aktivitás teljes spektrumával bír.
A bombezin antagonistáknak különféle fajtái ismertek. A P anyag (Arg-Pro-Lys-Pro-GIn-Gln-Phe-PheGly-Leu-Met-NH2). amely gyenge aminosavszekvencia homológiái mulat a bombezinhez, nem gátolja a bombezin és a bombezinszerű peptidek kötődését, de a néhány L-aminosavjuk helyén D-aminosavval helyettesített P anyag analógok, például a (D-Arg1, D-Pro2. D-Trp7·9, Leu11) P anyag és a (D-Arg1, D-Phe5, DTrp79, Leu) P anyag [Moody és munkatársai, Fed. Proceedings, 46, 2201 (1987)] gátolják a bombezin kiválasztását pankreász acinus sejtekből, és gátolják bombezin növekedést elősegítő hatását Swiss 3T3 sejtekben. A bombezinből származó bombezin antagonisták két típusa, például a (D-Phe6, D-Phe12) bombezin. és a [Leu1’-psi-Leu14]bombezin [Coy és munkatársai, J. Bioi. Chem.. 263. 5056 (1988) és Peptides 10, 587 (1989)] in vitro és in vivő is hatásosnak bizonyultak bombezin válasz gátlásában.
A bombezin antagonisták egy további típusa amelyet Heimbrook és munkatársai [J. Bioi. Chem. 264, 11258 (1989)] ismertek fel, az N-acetil-GRP(20-26) és ennek olyan analógjai, amelyeknél a GRP(20-27) analógokból eltávolították a C-terminális metionin egységet. Legújabban Coy [J. Bioi. Chem. 264, 14691 (1989)] ismertette, hogy bizonyos, a liturin szekvenciáján alapuló rövid láncú bombezin antago2
HU 211 603 A9 nisták. így a (D-Phe6, Leu13-psi-Phe,4]bombezin-(614) és a [D-Phe6,Leu13-psi-Leul4)-bombezin-(6-14) sokkal nagyobb aktivitással bírnak, mint a [Leu13psi-Leul4)-bombezin, azaz az a peptid, amelyből származnak.
A WO-A 9 003 980 és EP-A-0 309 297 számú leírásokban egy lineáris peptidet ismertetnek, amely a természetben előforduló biológiailag aktív kétéltű bombezin vagy emlős - GRP analógja. Ezek a peptidek egy aktív hellyel és egy kötőhellyel bírnak, amely a peptideknek egy célsejt receptorán való kötődéséért felelős. A WO-A-9 003 980 számú szabadalmi leírásban ismertetett peptid vagy egy az aktív helyen belüli maradék kiiktatása és egy ezen az aktív helyen kívüli maradék módosítása vagy az aktív hely egy vagy két aminosav-maradékának egy szintetikus aminosavval való helyettesítése révén módosított. Továbbá, a peptid, az EP-A-0 309 297 leírásban ismertetetthez hasonlóan, az aktív hely egy aminosavja és egy szomszédos aminosav közti peptidkötés nempeptid kötéssel való helyettesítésével is módosítható. Egy ilyen analóg a receptorhoz való kötődésre képes, így az analóg a receptorhoz kötődve a természetben előforduló peptid kompetitív inhibitorként való működésre képes.
A találmány összefoglalása
A találmány tárgyát olyan új polipeptidek képezik, amelyek hatásos bombezin antagonisták, a találmány tárgyát képezi továbbá ezek előállítása, ezeket a polipeptideket tartalmazó gyógyászati készítmények, valamint ezek alkalmazása gyógyászatilag aktív anyagok előállítására.
Közelebbről, a találmány tárgyát az
X-A1 - A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-psi-A9-Q (I) általános képletű pszeudopeptidek képezik - a képletben Q jelentése -NH2 vagy -OQ1, ahol Q1 jelentése hidrogénatom, 1-10 szénatomos alkilcsoport, fenilcsoport vagy 7-10 szénatomos fenil-alkil-csoport;
X jelentése hidrogénatom vagy egy vegyértékkötés, amely az A1 helyettesítő alfa-amino-csoportját az
A2 oldallánc karboxi le soportjához köti - ha van ilyen - vagy egy R'CO- általános képletű csoport, ahol R1 jelentése (a) hidrogénatom, 1-10 szénatomos alkilcsoport, fenilcsoport vagy 7-10 szénatomos fenil-alkil-csoport, (b)
R2 \
N/
R3 ahol
R2 jelentése hidrogénalom, 1-10 szénatomos alkilcsoport, fenilcsoport vagy 7-10 szénatomos fenil-alkilcsopon; R3 jelentése hidrogénatom vagy 1-10 szénatomos alkilcsoport; és (c) RJ-O-, ahol R4 jelentése 1-10 szénatomos alkilcsoport, fenilcsoport vagy 7-10 szénatomos fenil-alkilcsoport,
A1 jelentése D-, L- vagy DL-pGlu, Nal, Phe, Thi, Tyr,
Tpi, Hca, Hpp, Mpp, Trp vagy Trp, amely a benzolgyűrűn az alábbi helyettesítők közül eggyel vagy többel helyettesített: halogénatom, nitro-, amino-, hidroxil-, 1-3 szénatomos alkil- és 1-3 szénatomos alkoxicsoport, ahol a halogénatom fluor-, klór-, vagy brómatom lehet;
A2 jelentése Asn, Dpa, Gin, His, MeHis, His(Bz),
His(Z) vagy egy Asp(Y), Glu[-] vagy Glu (Y) képletű csoport, ahol
Y jelentése -OR5 vagy -N-R6, ahol I
R7
R5 jelentése hidrogénatom, 1-3 szénatomos alkilcsoport vagy fenilcsoport;
R6 jelentése hidrogénatom vagy 1-3 szénatomos alkilcsoport;
R7 jelentése hidrogénatom, 1-3 szénatomos alkilcsoport vagy -NHCONH2 és [-] jelentése vegyértékkötés, amely az oldallánc karboxil-csoportját az A1 csoport alfa-amino-csoportjával köti össze, ha X jelentése vegyértékkötés,
A3 jelentése Nal, Pál, Tpi, Trp, MeTrp, Trp(For) vagy Trp, amely a benzolgyűrűn az alábbi helyettesítők közül eggyel vagy többel helyettesített: halogénatom, nitro-, amino-, hidroxil-, 1-3 szénatomos alkil- és 1-3 szénatomos alkoxicsoport; ahol a halogénatom fluor-, klór- vagy brómatom;
A4 jelentése Alá, MeAla vagy Gin;
A5 jelentése Val vagy MeVal;
A6 jelentése Gly, Phe vagy D-Ala;
A7 jelentése His, MeHis, His(Bz), His(Z), Lys(Z) vagy Pál;
A8 jelentése Phe vagy Leu redukált izoszterje;
A9 jelentése Leu, Phe, Tpi, Trp vagy Trp, amely a benzolgyűrűn az alábbi helyettesítő közül eggyel vagy többel helyettesített: halogénatom, nitro-, amino-, hidroxil-. 1-3 szénatomos alkil- vagy 1-3 szénatomos alkoxicsoport, ahol a halogénatom fluor-, klór- vagy brómatom; azzal a megkötéssel, hogy A1 vagy A9 jelentése D-, L- vagy DL-Tpi, és gyógyászati szempontból elfogadható savval alkotott sóik.
Előnyösek azok az (I) általános képletű polipeptidek, amelyek A1 helyettesítőként egy Mpp, D-Phe, L- vagy DTpi, D-Trp vagy Trp egységet tartalmaznak, amely a benzolgyűrűn az alábbi helyettesítők közül eggyel vagy többel helyettesített: halogénatom, nitro-, amino-, hidroxil-, 1-3 szénatomos alkil- és 1-3 szénatomos alkoxicsoport, ahol a halogénatom fluor-, klór- vagy brómatom; és amelyekben A9 jelentése D-, L- vagy DL-Tpi.
Az előnyös kiviteli formák leírása
A találmány leírásának célszerűsége érdekében az aminosavak. peptidek és származékaik leírásánál azokat a szokásos rövidítéseket használjuk, amelyek általánosan elfogadottak a peptidkémiában és a IUPACIUB Commission on Biochemical Nomenclature (Bio3
HU 211 603 A9 kémiai Nomenklatúra Bizottság) [European J. Biochem., 138, 9-37 (1984)] ajánlása szerint.
Az egyes aminosav maradékok rövidítései az aminosavak triviális nevén alapulnak, például az alábbi rövidítések az alábbi triviális nevekkel tartoznak össze: Trp triptofán, Gin - glutamin; His - hisztidin, Alá - alanin, Val - valin, Gly - glicin, Leu - leucin, Phe - fenilalanin. Ahol az aminosav maradék izomer formákban létezhet, az aminosav jelölésén az L-formát értjük, kivéve ha az aminosav jelölése előtt a D- vagy DL-jelölés szerepel.
A leírásban használt nem szokásos aminosav jelölések jelentése a következő:
Dpa jelentése 2,3-diammo-propionsav,
Nal jelentése 3-(2-naftil)-alanin
Thi jelentése 3-2’-tienil-alanin Tpi jelentése 2,3,4,9-tetrahidro-lH pirido[3,4-b]indol3-karbonsav.
A peptidszekvenciákat aszerint a konvenció szerint írjuk, ahol a bal oldalon az N-terminális aminosav, a jobb oldalon a C-terminális aminosav szerepel.
Hca jelentése hidrofahéjsav.
Hna jelentése 3-hidroxi-2-naftoesav,
Hpp jelentése 3-(4-hidroxi-fenil)-propionsav,
Mpp jelentése 3-(4-metoxi-fenil)-propionsav,
Paa jelentése fenilecetsav.
További alkalmazott rövidítések jelentése a következő:
AC acilAc acetilAcOH ecetsav
Boc terc-butoxi-karbonil(Boc)2O di(terc-butil)-dikarbonát
BHA benzhidril-amin
Bzl benzilBSA marha szérum albumin
DIC 1,3-diizopropil-karbodiimid
DMEM Dulbecco szerint módosított Eagle tápközeg Et etilEDTA elilén-diamin-tetraecetsav
FCBS magzati borjüszérum
FMOC 9-fluorenil-metil-oxi-karbonilFor formilHITESRPMI16 4D tápközeg 10“8 mól/1 hidrokortizonnal, 5 μΙ/ml marha inzulinnal, 10 pg/ml humán transzferrinnel, 10-8 mól/1 β-ösztradiollal és 3 x 10~8 mól/1 Na2SeO3-tal kiegészítve
HOBT 1-hidroxi-benzotriazol
HPLC nagynyomású folyadékkromatográfia
Me metil
MeCN acetonitril
MeOH metil-alkohol
TEA trietil-amin
PBS foszfáttal pufferolt NaCl oldat
PGlu piroglutaminsav psi a -CHi-NH- szerkezet pszeudo-peptidkötése. kivéve, ahol az alábbi maradékók szekunder N-terminálissal bírnak, ez utóbbi esetben jelentése -CH2N
TFA trifluor-ecetsav
Z benzil-oxi-karbonil.
Az alábbi polipeptideket szintetizáltuk, és néhány mintát közülük megvizsgáltunk. Megjegyezzük, hogy az alábbi néhány, különösen az 1-13. és 27-34. számú peptidek a találmány oltalmi körén kívül esnek.
A peptid száma Szerkezet
1. NHz-CO-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leupsi-Leu-NH2
2. D-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiLeu-NH2
4. 5F-D-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiLeu-NHj
5. D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiLeu-NH2
6. D-Tpi-Glu(OMe)-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leupsi-Leu-NH2
7. D-Tpi-His-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiLeu-NH2
8. D-Tpi-His(Bz)-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiLeu-NH2
9. NH2CO-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leupsi-Phe-NH2
10. D-Trp-GIn-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiPhe-NH2
11. D-Trp-Glu(MeNH )-Trp-Ala-Val-Gly-HisLeu-psi-Phe-NH2
12. D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiPhe-NH2
13. D-Tpi-Glu(OMe)-Trp-Ala-Val-Gly-HisLeu-psi-Phe-NH2
14. Hca-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-TpiNHi
15. D-pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-NHi
16. Phe-Glu-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-TrpNH2
17. D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-NH2
18. D-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-NHi
19. D-Trp-His(Bz)-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leupsi-Tpi-NH2
20. D-Trp-Glu(MeNH)-Trp-Ala-Val-Gly-HisLeu-psi-Tpi-NH2
21. D-Trp-Glu-(OMe)-Trp-Ala-Val-Gly-HisLeu-psi-Tpi-NH2
22. Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-TpiNH2
23. Ac-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-NH2
24. NH2CO-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leupsi-Tpi-NH2
25. Hna-Tpi-GIn-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-NHi
26. D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-NH2
27. Mpp-Gln-Trp-Ala-Gly-His-Leu-psi-TrpNH2
28. D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTrp-NH;
29. D-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTrp-NH2
HU 211 603 A9
30. D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTrp-NH2
31. Mpp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTrp(For)-NH2
32. D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTrp(For)-NH2
33. D-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTrp(For)-NH2
34. D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTrp(For)-NH2
35. Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-TpiOMe
36. D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-OMe
37. NH2CO-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leupsi-Tpi-OMe
38. D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-NHMe
39. D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-OH
40. D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-N2H2CONH2
Különösen előnyös találmány szerinti polipeptidek az előzőekben a 17., 18., 22-26. és 38. számmal jelölt peptidek.
A polipeptidek szintézise
A találmány szerinti polipeptideket bármely, a peptidkémiából a szakember számára ismert eljárással előállíthatjuk, Az ilyen eljárások összefoglalása az M. Bodanszky, Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Heidelberg, 1984 szakirodalmi helyen található.
A kizárólag szilárdfázisú szintézisre vonatkozó eljárások a J. M. Stewart és J. D. Young, Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chem. Co.. Rockford, IL, 1984 (2. kiadás) szakkönyvben és G. Bárány és munkatársai. Int. J. Peptide Protein Rés.. 30, 705-739 (1987) közleményében találhatók.
A találmány szerinti polipeptidek és közlitermékeikül szolgáló peptidek előállításának különösen előnyös módja a szilárdfázisú szintézis. A találmány szerinti polipeptidek szilárdfázisú szintézisénél alkalmazott hordozóanyag kereskedelmi forgalomban beszerezhető benzhidril-amin-gyanta (BHA gyanta) vagy divinilbenzollal kialakított 1% keresztkötéssel bíró klórmetilált polisztirol gyanta. Az α-amino-csoportok védelmére terc-butoxi-karbonil- (Boc-) -csoportot alkalmazunk, amelyet a szintézis minden lépésénél eltávolítunk. A védett aminosavat tartalmazó kiindulási anyagot KF alkalmazásával vagy BHA gyantához kötött vagy klór-metilált polisztirol gyantához kapcsolt Boc aminosavból állítjuk elő. A szintézist a polipeptid Cterminálisánál kezdjük, és manuális berendezés alkalmazásával végezzük az alfa-amínocsoport védőcsoportjának eltávolítását és a következő aminosav kapcsolását lépésenként ismételve.
A polipeptideket általában nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással (HPLC) fordított fázisú oszlopon tisztítjuk Rainin HPLC rendszer (Rainin Inc., Co., Wobum, MA) alkalmazásával, amely három Rainin Rabbit HP HPLC szivattyúból áll, amelyeket egy Apple Macintosh Plus komputer szabályoz, továbbá tartalmaz még a berendezés egy Rheodyne Injectort és egy Knauer Model 87 változtatható hullámhosszú UV monitort. A nyers peptideket (10-40 mg) szférikus C18 szilikagéllel (pórusméret 300 Á, részecskeméret 12 pm, Rainin Inc. Co.) töltött Dynamax Macro (21,2 x 250 mm) oszlopra visszük, eluensként az (A) és (B) oldószerrendszerből létrehozott lineáris gradienst alkalmazzuk 2,0 ml/perc áramlási sebességgel, ahol az (A) oldószer 0,1 % trifluor-ecetsav és a (B) oldószer 0,1 % trifluor-ecetsav 70%-os vizes acetonitrilben. Minden frakció tisztaságát és retenciós idejét analitikai HPLC alkalmazásával vizsgáljuk az alábbiakban leírt módon.
A nyers és tisztított peptidek minőségét és eluciós jellemzőit analitikai HPLC alkalmazásával határozzuk meg Hewlett-Packard Model 1090 folyadékkromatográfiás berendezésen, amely egy 220 és 280 nm-nél működő dióda elrendezésű detektorral és egy fordított fázisú 4,6 x 250 nm W-porex C,8 oszloppal (pórusméret: 300 Á, részecskeméret: 5 pm) bír. Az előzőekben leírt (A) és (B) oldószerrendszert alkalmazzuk 1,2 ml/perc áramlási sebességgel, és az elválasztásokat szobahőmérsékleten végezzük.
A legtöbb esetben a polipeptideket azonos oszlopon, a gradiens körülmények csekély módosítása mellett ismételt kromatografálással tovább tisztítjuk. A tisztított peptidek homogenitása analitikai HPLC szerint 97% fölötti.
Aminosav analízis
A találmány szerinti polipeptidek aminosav-analízisét Beckman 6300 típusú aminosav analizátoron végezzük olyan mintából, amelyet 110 ’C hőmérsékleten 20 órán át lezárt, vákuum alá helyezett csőben 0,2% 3-(2-amino-etil)-indolt tartalmazó 4 mól/1-es metánszulfonsavval hidrolizáltunk. Az aminosavak aránya a várt értéknek megfelelő. A Leu-psi-Leu és a Leu-psiPhe maradékok abszorpciós csúcsainak retenciós ideje 39,93, illetve 44,56 perc. 50 perces emésztést követően a vizsgálati eljárással Tpi-t nem találtunk.
Vizsgálati eljárások (A) Receptor-kötés vizsgálata l25I-GRP( 14-27) kötését és bombezin antagonistákkal való kiszorítását 24-lyukú szövettenyésztő lemezeken (GIBCO) Swiss 3T3 sejtek alkalmazásával végezzük. Az egér Swiss 3T3 fibroblaszt sejteket 10% magzati borjúszérumot (FCBS) és antimíkotikumot tartalmazó DMEM-ben hetenkénti passzálással tartjuk fenn. A tenyészeteket 5% szén-dioxidot tartalmazó levegőben 37 ’C hőmérsékleten inkubáljuk. A lyukakat 105 sejt/lyuk oltóanyaggal (életképesség >95%) oltjuk be, amelyeket összenövésig és nyugalmi állapotig szaporítunk. A kötési eljárást a beoltást követően 7 nap múlva végezzük. A sejteket 0,5 ml kötőpufferrel kétszer mossuk [Dulbecco-által módosított Eagle-féle tápközeg, amely 20 nmól/1 pH 7,4-es HEPES-NaOH-t. 0,2%- BSA-t és 100 mcg/ml bacitracint tartalmaz], A
HU 211 603 A9 sejteket ezután az antagonisták különböző koncentrációinak jelenlétében (6 x 10_ll-6 x 10-6 mól/1 0,4 ml össztérfogatban) vagy antagonista hiányában 0,2 nmól/l-es l25I-GRP-vel (14—27) inkubáljuk.
Zachary és Rozengurd (Prés. Natl. Acad. Sci. USA. 85, 3636-3670 (1985)] és Layton és munkatársai [Cancer. Rés. 43, 4783-4789 (1988)] a l25l-GRP kötésének maximális értékét 37 ”C hőmérsékleten 30 perc alatt érte el, ezt követően csökkent az érték; így a sejteket 37 C hőmérsékleten 30 percig inkubáljuk. Ezt követően a sejteket jéghideg (4 ’C hőmérsékletű) kötőpufferrel kétszer, majd jéghideg, foszfáttal pufferolt NaCl oldattal kétszer mossuk (a foszfáttal pufferolt NaCl oldat összetevői mmól/l-ben: NaCl 138, KC1 2,8, Na2HPO4 8, KH2PO4 1,45, CaCl2 0,91, MgCl2 0,49). A mosott tenyészeteket 0,5 ml 0,5 mól/1-es nátrium-hidroxiddal extraháljuk, majd számlálás céljára kis csőbe visszük át. A lyukakat 0,5 ml (steril) desztillált vízzel mossuk, és a mosófolyadékot megfelelő kis csövekbe visszük. A minták radioaktivitását automata gamma-számlálóval számláljuk (Micromedic System. Inc., Huntsville, Ala.).
A receptor kötés típusának, a disszociációs konstansnak (Kd). az asszociációs konstansnak (Ka), a receptorok maximális kötő kapacitásának (Bmax) és a gátlás-maximum félértékének (IC50) meghatározására Munson és Rodbard ligandum-PC komputerizált görbeillesztési programját [Anal. Biochem. 107, 220-239 (1987)] alkalmazzuk.
IC50 értéken az antagonistának azt a koncentrációját értjük, amely 0,2 nmól/1 GRP( 14-27) által stimulált szaporodás maximális gátlásának felét okozza. A diszszoctációs konstans és a 125I-GRP (14-27) maximális kötő kapacitása kísérleteinkben 1,32 nm, illetve 0,769 pm/mg protein, amely értékek hasonlóak a 125I-GRPés a 125I-TyrJ-bombezin esetén ismertetettekkel. A GRP receptoroknak a 3T3 sejteken való kötődési tulajdonságai ezekben a kísérletekben jó eredményekkel egyeznek azokkal, amelyeket bombezinnek pankreász acinus sejtekhez [Jensen és munkatársai, Proc. Natl. Acad Sci. USA 75, 6139-6143 (1978)] és hipofízis sejtekhez [Westendorf és Schonbrunn. J. Bioi. Chem. 258, 75277535 (1983)] való kötődésére kaptak.
A GRP( 14-27) a l25I-GRP( 14-27) kötődését IC50 = 2,32 nmól/1 értékkel gátolja, ami megegyezik a Layton és munkatársai [Cancer Rés. 48, 4783X789 (1988)] által kapót eredménnyel, amely 2,2 nmól/1. A találmány szerinti polipeptidek kötési adatait az I. táblázatban mutatjuk be.
Kötési adatok Swiss 3T3-ra
| Jelölés | Ka (nmól/1) 1 | Rj (nmóld) | IC30 (nmól/1) |
| 7. | N. K. | - | - |
| 5. | 0.129 | 8 | 9,2 |
| 12. | 0,014 | 71 | 81,65 |
| 26. | 0,045 | 22 | 25,3 |
| 17. | 0,955 | 1 | 1,2 |
| 2. | 0,095 | 10.6 | 12,19 |
| Jelölés | Ka (nmól/1) 1 | K4 (nmól/1) | IC50 (nmól/1) |
| 34. | 0,0006 | 1667 | 1917,05 |
| 11. | 0,217 | 5 | 5,75 |
| 27. | 0,013 | 74,5 | 85.66 |
| 29. | 0,0019 | 526,3 | 604,9 |
| 30. | 0,254 | 4 | 5,15 |
| 28. | 0,125 | 8 | 9,16 |
| 33. | 0,002 | 556 | 639,4 |
| 18. | 0,257 | 4 | 4,6 |
| 10. | 1 | 1 | 1,15 |
| 22. | 1,012 | 0,9 | 1,14 |
| 8. | 0,014 | 71 | 82,14 |
| GRP( 14-27) | 0.758±0,23 | l,32±0,43 | 1,52+0,7 |
Kötésmax = 7.12 x 10 12 azaz 0,354 x 10 12 mól/mg protein
N. K = nincs kiszorítás
Az IC50 a jelzetlen ligandumnak az a koncentrációja, amely a fajlagos radioligandum kötés felét helyettesíti. Számítása: Cheng és Prusoff [Biochem-Pharmacol. 22, 3099 (1973)] következő egyenlete szerint történik: IC50 = Kc(l+L/Kh), ahol Ke és Kh a jelzetlen (hideg), illetve a jelzett (meleg) ligandum disszociációs konstansai, és L az alkalmazott radioligandum koncentrációja.
(B) Amiiá- szabaddá válás
Izolált pankreász acinusokat nyerünk éjszakán át éheztetett. 150-180 g testtömegű hím Wistar patkányok pankreászából kollagenázos emésztéssel. Az állatokat a nyaki csigolya kimozdításával öljük le, és a pankreászukat eltávolítjuk, majd erősen tisztított kollagenázzal (CLSPA, 540 E/mg, Cooper Biomedical, Freehold, N. J. USA) Amsterdam, Solomon és Jamieson (1978) eljárásával emésztjük.
A diszpergált acinusokat 24,5 mmól/1 HEPES-t, 98 mmól/l nátrium-kloridot, 4,0 mmól/1 kálium-kloridot, 11,7 mmól/1 kálium-dihidrogén-foszfátot, 1,0 mmól/1 magnézium-kloridot, 0,3 mmól/1 kalcium-kloridot, 5,0 mmól/1 glükózt. 1 tömeg/térfogat% esszenciális és nemesszenciális aminosav-elegyet (Serva Feinbiochemica, Heidelberg, Németország). 2 mmól/1 glutaminl, 0,2% BSA-t és 0,01 tömeg/térfogat% tripszin inhibitort tartalmazó inkubációs tápközegben szuszpendáljuk. Az inkubációs oldatot oxigénnel telítjük, és 37 ’C hőmérsékletű rázófürdőben (60 oszcilláció/perc) tartjuk. Az acinus szuszpenziót különböző koncentrációjú GRP vagy GRP antagonista jelenlétében inkubáljuk.
Inkubálást követően a csöveket 1000 g mellett 5 percig centrifugáljuk, majd a felülúszót elkülönítjük az üledéktől. A felülúszó és a feloldott üledék amiláztartalmál külön vizsgáljuk a Bernfeld (1955) által leírt módon. Az amiláz kiválasztást az alapérték%-os növekedésében adjuk meg. Az inkubálást párhuzamos mintával végezzük. Alapértékkénl határoztuk meg azokat az értékeket, ahol az amiláz szabaddá válás stimulációja nem következett be a teljes kísérleti időszak alatt.
HU 211 603 A9
Fokozatosan növekvő koncentrációban az inkubációs tápközeghez adva a szubmaximális koncentrációjú GRP (10-9 mól/1) által stimulált amiláz felszabadulás koncentráció-függő gátlását okozta.
(C) 5H-timidin 3T3 sejtek által történő beépítésének gátlása
SCLC sejteket alkalmazunk 2-4 nappal a passzálást követően. Egysejt-szuszpenziókat készítünk a sejtek mosásával [a sejteket foszfáttal pufferolt sóoldattal kétszer mossuk, majd a sejteket 0,2 g/liter glükózt, 0,2 g/1 EDTAt és 14 mmól/1 lignokain-hidrogén-kloridot tartalmazó foszfáttal pufferolt sóoldatba pipettázzuk, és 37 °C hő10 mérsékleten tartjuk, amíg a szuszpenzió egyenletessé válik (2-4 perc)]. Ezután a sejteket FCSB nélküli HITESben háromszor mossuk, majd ismételten szuszpendáljuk. A tenyészeteket a 0. napon 1,34 x 1O~5 sejt koncentrációban lemezen szélesztjük, minden peptidet egyidőben adagolunk hozzá 1 ml RPMI-1640 tápközegben, amely kiegészítésül HITES-t és 0,125% albumint tartalmaz. 48 óra múlva minden lyukba 1 pc. tríciummal jelzett timidint adunk, és az inkubálást további 24 órán át folytatjuk. Ezután a sejteket mossuk, üveg-szQrőpapítra visszük, és jéghideg 5%-os triklór-ecetsavval mossuk. A szűrőpapírt szcintillációs folyadékot tartalmazó kis csőbe helyezzük, és 1 percig számláljuk.
//. Táblázat
Gasztrint szabaddá tevő peptid (GRP) 3T3 sejtek antagonista analógjainak vizsgálata 3H-timidin beépülésének gátlása
| Peptid analóg száma | ng/ml | GRP 3 ng/ml | DPM 1 S. E. | % gátlás GRP+ ellen |
| 207 00014200 | ||||
| 348 000+15 300 | ||||
| (··) | ||||
| 26. | 50 | + | 233 000+8800 | 82 |
| 500 | + | 205 000+12 500 | >100(-Γ) | |
| 100 | + | 222 00013900 | 89 | |
| 0 | ||||
| 17. | 50 | + | 277 00019800 | 50 |
| _ | 500 | + | 207 00013800 | 100 |
| 100 | + | 223 00011200 | 89 | |
| 0 | ||||
| 5. | 50 | + | 283 00015400 | 46 |
| 500 | + | 280 000121 900 | 48 | |
| 100 | + | 199 00017100 | >1001-4*) | |
| 0 | ||||
| 10. | 50 | + | 261 000119 500 | 62 |
| 500 | + | 242 OOO183OO | 75 | |
| 100 | + | 255 000+26 200 | 66 | |
| 0 | ||||
| 22. | 50 | + | 269 000114 000 | 56 |
| 500 | + | 280 000114 000 | 48 | |
| 100 | + | 198 000118 800 | >100(-4*) | |
| 0 | ** |
* P<0.01; (-] Gátlás az alap-stimulálailan szint alatt + 348 000- 207 000 = 141 000 tekinthető stimulálásnak.
(D) Különféle kissejtes tüdő karcinómák szaporodásának gátlása (S. C. L. C.)
A National Cancer Institute-tól (NCI) kapott H-69 és H-345 S. C. L. C. sejtekből készült törzstenyészeteket szuszpenziós kultúrában tartjuk fenn. A GRP-által 55 indukált DNS szintézis bombezin antagonisták által történt gátlását a (3H)-timidin beépülésének meghatározásával mérjük. A GRP által indukált DNS szintézis bombezin antagonisták által történő gátlása szignifikánsnak és koncentráció-függőnek bizonyult. 60 (E) Pankreász kiválasztásra gyakorolt in vivő hatás
Hat éber, 2-3 kg testtömegö, krónikus gyomor és pankreász fisztulával Konturek és munkatársai [J. Physiology, London, 257, 663-672 (1976)] által leírt módon ellátott macskán végezzük a kiválasztási vizsgálatokat. Röviden, a gyomorfisztulában alkalmazott kanül az Emas [Gastroenterology, 39, 886-782 (1960)] által leírt típusú. Ezt a kanült a nagyobbik görbület közelében lévő pilórusz mirigy területére helyezzük be.
HU 211 603 A9
A pankreászfisztulákat macskákra adaptált speciális Talakú, kétoldali és főtagokkal ellátott fémkanüllel készítettük. A közös epevezetéket közvetlenül a pankreászvezetékbe való becsatlakozása előtt kettéosztjuk, és a doudénum felső részébe ültetjük be, hogy elválasszuk egymástól az epeáramlást és a pankreász nedveket. Egy kis duodénum-tasakot készítünk, amely a pankreász-fővezeték bejáratát tartalmazza, és a pankreász kanül kétoldali tagját ebbe a tasakba vezetjük be. A kanül fő tagját a duodenoduodenosztomia mögött mintegy 3 cm-re a disztális duodéniimba helyezzük.
A kiválasztás vizsgálatát a sebészeti beavatkozás után mintegy 3 hónappal kezdjük meg. A vizsgálat előtt legalább 18 órán át megfosztjuk az állatokat a tápláléktól. Minden vizsgálatnál (kivéve amelyeknél tápláljuk az állatokat) a gyomorfisztulát nyitva hagyjuk, hogy a gyomornedveket a külvilágra vezessék.
A pankreász fisztulából folyamatosan gyűjtjük a szekrétumot. és 15 milliliteres mintákra osztjuk. Feljegyezzük a szekrétum térfogatát, protein és dikarbonát koncentrációját, és a hozamot a korábban lein módon határozzuk meg (Konlurek és munkatársai, 1976).
Minden állatnál több vizsgálatsorozatot végzünk, hogy a kiválasztási potenciákat összehasonlítsuk. A GRP-t intravénásán infúzió formában, mért dózisokban adjuk be (1250 pmól/kg-óra GRP) 1 napos vizsgálatban az 5. peptid infúzióban való adagolásával vagy anélkül. Az etetéssel járó vizsgálatokban a gyomorfisztulál zárva tartjuk, és minden macskának mintegy 50 g főtt. homogenizált darált marhahúst adunk, amelyet a macskák általában teljesen elfogyasztanak. Az étkezést követő teljes időszakon át intravénás NaCl-oldat infúziót tartunk fenn (mintegy 10 ml/óra). és amikor a pankreász kiválasztási válasz egy tartós platót ér el, az 5. peptidet beadjuk, és a kiválasztást további 2 órás időtartamon át vizsgáljuk. Külön vizsgálatokban éheztetett macskákon (peptid infúzió és húsetetés nélkül) meghatározzuk az alap pankreász kiválasztást (nyitott gyomorfisztulával) egy 2 órás időtartamon ál, azután az 5. peptidet (10 nmól/kg-óra) az infúzióhoz adjuk olyan dózisban, amely teljesen megszünteti a GRP által indukált pankreász kiválasztást. Eredményeinket az alábbiakban közöljük.
Az (5), (10) és (2) bombezin analóg peptideket GRP stimulálást követően szérum gasztrin gátlásra vizsgáljuk in vivő. A GRP (3 pg/100 g testtömeg) stimulálás után 8 perccel a szérum gasztrin szint 16,7 pg/ml értékről (kontroll) 105 pg/ml értékre nő. A GRP stimulálást megelőzően 10 perccel az (5), (10) és (2) peptid antagonistákkal (30 pg/100 g testtömeg) beinjektált patkányok esetén a gasztrin kiválasztás szintjében csökkenés mutatkozik (8 perc után, 36,8 pg/ml a (2) peptid; 24,2 pg/ml a (10) peptid és 39,2 pg/ml az (5) peptid esetén).
A találmány szerinti bombezin/GRP antagonisták hasznosak a hipergasztrinémiás állapotok kezelésében, például vészes vérszegénység, krónikus atrofiás gasztritisz. Zollinger-Ellison szindróma és vitiligo kezelésénél, amelyek a gyomor enterokromaffinszerű sejtjeinek diffúz hiperpláziájával és a multifókuszos kareinoid gyomortumorok kifejlődésének megnövekedett veszélyével kapcsolatosak. Továbbá, gyakran fejlődik ki enterokromaffinszerű sejt hiperplázia olyan állatoknál, amelyek hipergasztrinémiássá váltak.
Az ilyen kezelés előnyös a jelenleg létező gyógyszerekkel szemben, mivel a H2 antagonisták, mint a cimetidin, hipergasztrinémiát okoznak, és emberben kareinoid tumorok képződéséhez vezethetnek. Ezenkívül a H2-antagonisták alkalmazásával folytatott terápia megszüntetetése a fekély azonnali újramegjelenését okozza a meglévő hipergasztrinémia miatt.
Mivel a találmány szerinti vegyületek a bombezin/GRP receptorok antagonistái, használhatók tüdőrák, bélrák és gyomorrák kezelésére alkalmas gyógyászati készítmények előállítására is.
A fenti eredmények, valamint patkányokon kapott eredmények alapján a találmány szerinti peptidek gyógyászatilag elfogadható nem-toxikus sók, például savaddíciós sók formájában adagolhatók. Az ilyen sók példáiként említjük a hidrogén-klorid-, hidrogénbromid-, szulfát-, foszfát-, fumarát-, glükonát, tannát-, maleát-. acetát-, citrát-, benzoát-, szukcinát-, alginát-, pamoát-, malát-, aszkorbát- és tartarátsókat és hasonlókat.
Ezen peptidek poli(DL-laktid-kogIikolid)-ból létrehozott mikrokapszulái vagy mikrorészecskéi előnyös nyújtott felszabadulású rendszerek lehetnek. A peptidek használhatók a tüdőbe való bejuttatásukra alkalmas aeroszolok előállítására is.
A parenterális adagolásra alkalmas gyógyászati készítmények a peptidet szokásos, gyógyászati szempontból megfelelő hordozóanyaggal együtt tartalmazzák, a készítmény mintegy 1-1000 pg/tesltömeg kg dózist képvisel.
Egy jellemző dózisforma a fiziológiás NaCl-oldat, amely a peptidet olyan mennyiségben tartalmazza, amely mintegy 0.01-0,20 mg/testtömeg kg dózist képvisel.
Bár a találmányt előnyös megvalósítási módjaival írjuk le, megjegyezzük, hogy ennek változatai és módosításai átlagos szakember számára nyilvánvalóak, a találmány oltalmi körétől (amely itt és az igénypontokban szerepel) való eltérés nélkül megvalósíthatók. Az ezen a területen ismert olyan helyettesítések, amelyek a hatást nem befolyásolják érezhetően, megvalósíthatók a találmányon.
Általános műveletek az olyan polipeptidek szintézisében, amelyek Boc-aminosav-gyanta egységgel kezdődnek
1. művelet:
(1) mosás diklór-metánnal (3 x 1 perc);
(2) védőcsoporlok eltávolítása 50%-os diklór-metános trifluor-ecetsavval 2x5 percig, illetve 25 percig. Az olyan peptid-gyanlák esetén, amelyek D- vagy L-Trp-t vagy Tpi-t tartalmaznak, a védőcsoportok eltávolítását 5% merkaptoetanolt és 5% anizolt tartalmazó 50%-os diklór-metános trifluor-ecetsavval végezzük;
HU 211 603 A9 (3) mosás diklór-metánnal (6 x 1 perc);
(4) semlegesítés 10%-os diklór-metános trietil-aminnal (2x3 perc);
(5) mosás diklór-metánnal (6 x 1 perc);
(6) kapcsolás: i) 3 ekvivalens Boc-aminosav és 3,3 ekvivalens HOBt adagolása DMF-ban (3 perc), ii) 3 ekvivalens 20%-os diklór-metános diizopropilkarbodiimid hozzáadása és 60-90 perc rázás;
(7) mosás diklór-metánnal (2 x 1 perc), etanollal (2 x 1 perc) és diklór-metánnal (5 x 1 perc).
II. művelet:
A -CH2NH- redukált peptidkötés bevitelére az (I) művelet (6) lépését a következű módon módosítjuk:
(1) mosás dimetil-formamiddal (2 x 1 perc) (2) (3 ekvivalens) Boc-leucinaldehid adagolása 1%
AcOH-t tartalmazó DMF-ban;
(3) (3,5 ekvivalens) NaBHjCN adagolása DMF-ban, és perc rázás;
(4) mosás 50%-os metanollal (3 x 1 perc),
100%-os metanollal (3 x 1 perc) és diklór-metánnal (3 x 1 perc).
III. művelet:
Boc-Asn. Boc-Gln és Boc-Gly kapcsolására az (I) művelet (6) lépéséi az alábbiak szerint módosítjuk:
3,0 ekvivalens Boc-aminosav és 3,3 ekvivalens HOBt dimetil-formamidban készült elegyéhez 0 ’C hőmérsékleten 15 perc, majd szobahőmérsékleten 15 perc alatt hozzáadunk 3 ekvivalens 20%-os diklór-metános diizopropil-karbodiimidet, az oldhatatlan részeket kiszűrjük, a szűrletet a peptid-gyantához adjuk, és BocGln vagy Boc-Asn alkalmazásával 2-4 órán át vagy Boc-Gly esetén 1 órán át rázzuk.
IV. művelet:
Az alábbi eljárásokat Fmoc-aminosav bevitelére alkalmazzuk.
(1) A védőcsoportok eltávolítása és semlegesítés után diklór-metános mosás (3 x 1 perc) és dimetil-formamidos mosás (3 x 1 perc);
(2) kapcsolás
i) (3 ekvivalens) Fmoc-aminosav és 3,3 ekvivalens HOBt adagolása DMF-ban (3 perc);
ii) (3 ekvivalens) 20%-os diklór-metános diizopropil-karbodiimid adagolása és 60 perces rázás;
(3) mosás etanollal (3 x 1 perc) és DMF-dal (3 x 1 perc);
(4) az Fmoc védőcsoport eltávolítása 50%-os dimetilformamidos piperidinnel 30 percig;
(5) dimetil-formamidos mosás (6 x 1 perc);
(6) egy következő kapcsolás, amint az a (2) lépésben szerepel.
Miután a (1) általános képletű peptid kívánt köztitermékét előállítottuk, a peptid - gyantát folyékony hidrogén-fluoriddal kezeljük anizol jelenlétében, hogy a polipeptidet szabad formában nyerjük, ahol az (I) általános képletben X jelentése hidrogénatom, és Y jelentése amino- vagy hidroxilcsoport; vagy védett formában kapjuk, ahol az (I) általános képletben A2 jelentése Glu(OMe) vagy His(Bz).
Egy szabad vagy védett formájú polipeptid N,Cterminálisának vagy oldalláncának egy csoportján lévő funkciós csoportnak egy a polipeptid N- vagy C-terminálisán vagy oldalláncán lévő másik funkciós csoporttá való alakítását megfelelő reagensoldattal végezzük. Például egy az A2-helyzetben Glu-t tartalmazó védett polipeptidet metil-aminnal reagáltatunk DIC jelenlétében, hogy egy olyan polipeptidet nyerjünk, amely az A2-helyzetben Glu(MeNH)-t tartalmaz. Egy szabad Nterminálissal bíró polipeptidet KOCN-tal reagáltatva az X-helyzetben NH2CO-csoportot tartalmazó polipeptidet nyerünk.
Az alábbi példákban a következő számkódokat használjuk a köztitermékek azonosítására. Az a/b/gyanta kód az „a” példa „b” lépésében használt kezdeti gyantát jelenti. Az a/,b/c kód a „c” peptid prekurzora, amelyet az „a” példa „b” lépése szerint állítottunk elő. Ismét megállapítjuk, hogy a fenti elemzési eredmények alapján a (2), (3) és (6) példák szerinti polipeptidek az oltalmi körön kívüliek.
I. példa (1) A: Példa L- és D-Tpi-re
2,04 g. 10 mmól L-Trp-t 2,1 g citromsavat tartalmazó 25 ml forrásban lévő vízben oldunk. Az oldathoz 5 ml 40%-os formaldehidet adunk, azonnal csapadék kiválás indul meg. Az elegyet jégfurdöbe hütjük, a szilárd anyagot kigyűjtjük, hideg vízzel mossuk és szobahőmérsékleten levegőn szántjuk. így 99%-os hozammal 2,14 g szilárd terméket nyerünk, amelynek olvadáspontja mintegy 310 'C (bomlik), A D-izomert azonos módon állítjuk elő, ennek is mintegy 310 C az olvadáspontja (bomlik).
B: Példa L- és D-Boc-Tpi-re
10,8 g, 50 mmól D-Tpi-t 250 ml 0,2 n nátrium-hidroxid és 7,5 ml trietil-amin kevert szuszpenziójához 10 g di(terc-butil)-dikarbonátot adunk, és az elegyet 4 órán át keverjük, majd további 10 g dikarbonátot adunk hozzá, és újabb 3 óra keverés után ismét 10 g dikarbonátot adagolunk. Az elegyet egy éjszakán át keverjük, majd 2 x 100 ml éterrel extraháljuk, az éteres extraktumot elöntjük. A vizes fázishoz pH 3-5 eléréséig citromsavat adunk. A szilárd anyagot kigyűjtjük, vízzel mossuk, és éjszakán át levegőn szárítjuk.
A szilárd anyagot 100 ml tetrahidrofuránban szuszpendáljuk. A szilárd anyag szinte teljesen feloldódik. Az oldhatatlan anyagot szűréssel eltávolítjuk, majd a THF-t vákuumban eltávolítjuk. A visszamaradó anyagot éterrel eldörzsölve 58%-os hozammal 9,20 g anyagot nyerünk, amelynek olvadáspontja a kiindulási anyagéval azonos, de attól oldékonyságában és vékonyrétegkromatográfiás jellemzőiben (szilícium-dioxidon 85:15:0,5 CHCl3:MeOH:HOAc alkalmazásával) különbözik.
2,55 g L-Tpi alkalmazásával, a fentivel azonos módon eljárva. 59%-os hozammal 2,22 g Boc-Tpi-t nyerünk.
HU 211 603 A9 (2) Példa Hoa-Leu-CHO-ra g, 134 mmól Boc-leucin-metil-észter 250 ml száraz toluolban készült oldatát nitrogéngáz atmoszféra alatt szárazjég/aceton fürdőbe hűtjük, és 150 ml 25%-os toluolos di(izobutil)-alumínium-hidrid oldatot adunk hozzá 30 perc alatt. Az elegyet az adagolás befejezése után még 20 percig a szárazjég/aceton fürdőben keverjük, majd óvatosan hozzáadunk 15 ml metanolt. Az elegyet 1000 ml jéghideg vízbe öntjük, kirázzuk, majd szűrjük. A toluolt elkülönítjük, a vizes fázist 3 x 300 ml éterbe visszaextraháljuk. A toluolos és éteres extraktumokat egyesítjük, és nátrium-szulfáton szárítjuk. A kapott olajat 1500 ml 15%-os EtOAc/benzin elegyben gyorsan szilikagél oszlopra (3 x 50 cm) visszük. 27,6 g Boc-Leu-aldehidet nyerünk olaj formájában.
2. példa A peptid száma
NH2CO-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leupsi-Leu-NHj
2. D-Trp-GIn-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiLeu-NHi
3. D-Trp-Glu(MeNH)-Trp-Ala-Val-Gly-HisLeu-psi-Leu-NH2
4. 5F-D-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiLeu-ΝΗτ
5. D-Tpi-GIn-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiLeu-NH;
6. D-Tpi-Glu(OMe)-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leupsi-Leu-NHi
7. D-Tpi-His-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiLeu-NH:
8. D-Tpi-His(Bz)-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiLeu-NHi
A példákban szereplő polipeptidek azonos Trp-AlaVal-Gly-His-Leu-psi-Leu-NHi fragmentumot tartalmaznak. de két különböző N-terminális maradékot építünk rá a benzhidrilamin (BHA) gyantára a szilárdfázisú szintézis szokásos módszerével.
0,50 g BHA gyantát (0,9 mmól NH2/g) 10%-os diklór-metános TEA-val kezelünk (semlegesítés) kétszer 3 percig, majd diklór-metánnal hatszor mossuk. A gyantát 1,35 mmól Boc-Leu-val és 1,50 mmól l-hidroxi-benzotriazollal (HOBt) DMF-ban 3 percig keverjük. Ezután az elegyhez 1,3 mmól 20%-os diklór-metános 1,3-diizopropil-karbodiimidet (DIC) adunk. Az elegyet szobahőmérsékleten 60 percig rázzuk. A kapott BocLeu-BHA gyantát diklór-metánnal kétszer, metanollal kétszer, majd diklór-metánnal háromszor mossuk, ezután Kaiser tesztnek tesszük ki [Anal. Biochem. 34, 595 (1970)]. Abban az esetben, ha a kapcsolás nem tökéletes, a kapcsolási eljárást megismételjük.
A Boc-csoport eltávolítását (védőcsoport eltávolítása) a Boc-Leu-BHA gyantáról 50%-os DCM-os trifluor-eeetsav-oldattal 5 percig végezzük, majd az elegyet szűrjük. 25 percig újra kezeljük, majd DCM alkalmazásával hatszor mossuk.
A semlegesítési a BHA gyantára az előzőekben leírtak szerint végezzük.
A Boc-Leu-CHO kapcsolását az alábbi II művelet követésével végezzük:
(1) DMF-os mosás kétszer;
(2) 1% AcOH-t tartalmazó DMF-ban készült 1,5 mmól
Boc-Leu-CHO-t tartalmazó oldat adagolása;
(3) 2,0 mmól dimetil-formamidos NaBH3CN adagolása, és 60 perc rázás;
(4) mosás 50%-os vizes metanollal kétszer, 100%-os metanollal kétszer, majd diklór-metánnal háromszor. ABoc védőcsoportoknak a Boc-Leu-psi-Leu-BHAgyantáról való eltávolítása és semlegesítés után a BocHis(Z) kapcsolását az (I) műveletben leírt módon végezzük.
A Boc-Gly kapcsolását a (III) műveletben leírt módon hajtjuk végre.
1,5 mmól Boc-Gly és 1,65 mmól HOBt dimetil-formamidban készült oldatához 1,5 mmól 1,3-diizopropilkarbodiimidet adunk 20%-os diklór-metános oldat formájában 0 ’C hőmérsékleten, majd az elegyet hűtés mellett 15 percig, ezután szobahőmérsékleten 15 percig keverjük, a csapadékot kiszűrjük, és a gyantához adjuk, majd 60 percig rázzuk.
A következő aminosav egységeket, a Boc-Val-t, Boc-Ala-t és Boc-Trp-t egymást követően visszük fel az ÍI) műveletben megjelölt módon végrehajtott kapcsolással, így 0.90 g védett peptid-gyantát nyerünk, amelynek szerkezete Boc-Trp-Alá-Val-Gly-His(Z)Leu-psi-Leu-BHA-gyanta (2/1/gyanta).
A Boc-Trp beépítése után a Boc-védőcsoport eltávolítását 5% merkaptoetanolt és 5% anizolt tartalmazó 50%-os DCM-os trifluor-ecetsavval végezzük, így TFA-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)-Leu-psi-Leu-BHA-gya ntát nyerünk (2/2/gyanta).
0,91 g TFA-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)-Leu-psi-LeuBHA-gyantát (2/2/gyanta) 8 részre osztunk (egyenként mintegy 100 mg), amelyeket a tervezett védett polipeptid-gyanták szintézisének végrehajtására használunk az (I) műveletben leírt módon Boc-D-Trp, Boc-5F-D-Trp, Boc-D-Tpi és Boc-His(Z) kapcsolására és a (III) műveletben leírt módon Boc-GIn kapcsolására.
Boc-GIn és Boc-Ttp fenti heptapeptid-gyantához (2/2/gyanta) való egymást követő hozzáadásának a terméke:
2/2/01 Boc-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)-Leu-psiLeu-BHA-gyanta.
A Boc-GIn és Boc-D-Trp-nek a heptapeptid-gyantához (2/2/gyanta) való egymást követő kapcsolásának terméke:
2/2/02 Boc-D-Trp-GIn-Trp-Alá-Val-Gly-His(Z)-Leupsi-Leu-BHA-gyanta.
Boc-GIn és Boc-5F-D-Trp-nek a heptapeptid gyantához (2/2/gyanta) való hozzáadásának terméke:
2/2/04 Boc-5FD-Trp-Gln-Trp-Alá-Val-Gly-His(Z)Leu-psi-Leu-BHA-gyanta.
2/2/05 Boc-D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)-Leupsi-Leu-BHA-gyantát nyerünk Boc-GIn és Boc-D-Tpi egymást követő kapcsolásával.
2/2/06 Boc-D-Tpi-Glu(OMe)-Trp-Alá-Val-GlyHis(Z)-Leu-psi-Leu-BHA-gyantát nyerünk BocGlu(OMe) és Boc-D-Tpi egymást követő kapcsolásával.
HU 211 603 A9
2/2/07 Boc-D-Tpi-His(Z)-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)Leu-psi-Leu-BHA-gyantát nyerünk Boc-His(Z) és Boc-D-Tpi egymást követő kapcsolásával.
2/2/08 Boc-D-Tpi-His(BZ)-Trp-Val-Gly-His(Z)Leupsi-Leu-BHA-gyantát nyerünk Boc-His(Bz) és Boc-DTpi egymást követő kapcsolásával.
A Boc-csoportnak 5% merkaptoetanolt és 5% anizolt tartalmazó DCM-ban készült 50%-os trifluor-ecetsavval való eltávolítása után a Boc-védőcsoport nélküli polipeptid-gyantát DCM, metanol, majd ismét DCM mindegyikével háromszor-háromszor mossuk, majd 5 ml frissen desztillált hidrogén-fluoriddal és 0,25 ml anizollal reagáltatjuk 0 ”C hőmérsékleten 1 órán át. Ezután az elegyről az oldószert vákuumban lepároljuk, a visszamaradó anyagot éterrel vagy etil-acetáttal mossuk, majd 70-80%-os ecetsavval extraháljuk, és liofilizáljuk, így az alábbi nyersterméket kapjuk:
2/3/01 Trp-Gln-Trp- Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-LeuNHj
A peptid száma
2. D-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiLeu-NHi
4. 5F-D-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiLeu-NHi
5. D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiLeu-NHi
6. D-Tpi-Glu(OMe j-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leupsi-Leu-NHi
7. D-Tpi-His-Trp- Ala-Val-Gly-His-Leu-psiLeu-NHi
8. D-Tpi-His(Bz)-Trp-Aia-Val-Gly-His-Leu-psiLeu-NHi
0,5 ml dimetil-formamidban lévő 40 mg Trp-GlnTrp-Alá-Val-Gly-His-Leu-psi-Leu-NH2 (2/3/1) és 20 μΙ TEA és 20 mg KOCN 100 μΐ vízben készült oldatának elegyét 0 ’C hőmérsékleten keverjük, majd az elegyhez 100 μΐ AcOH-t csepegtetünk, és 0 ’C hőmérsékleten 1 órán át keverjük. A reakcióelegyet ezután tisztítjuk. így az alábbi peptidet nyerjük:
A peptid száma
1. NH2CO-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiLeu-NHj.
A (3) peptidet Fmoc-Glu(O But)-nak és Fmoc-D-Trpnek a (IV) művelet szerint végrehajtott Trp-Ala-ValHis(Z)-Leu-psi-Leu-BHA (2/2/gyanta) gyantához való egymást követő kapcsolásával készítjük, így Fmoc-DTrp-Glu(OBut)-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)-Leu-psi-LeuBHA-gyantát (2/4/3) kapunk. A peptid-gyantát 5% 2merkaptoetanolt tartalmazó DCM-ban készült 10%-os trifluor-ecetsav-oldattal 30 percig reagáltatjuk a Bút csoport eltávolítására a Glu karboxilcsoportjáról. Az elegyet DCM alkalmazásával hatszor mossuk, MeNH2-t buborékoltatunk át egy Fmoc-D-Trp-Glu-Trp-Ala-Val-GlyHis(Z)-Leu-psi-Leu-BHA-gyanta ágyon (2/5/gyanta) 5 ml DMF-ban 0 ’C hőmérsékleten 5 percig, majd 0,25 ml 20%-os, DCM-ban készült DIC-t adunk hozzá, és a reagáltatást 0 ’C hőmérsékleten 2 órán át folytatjuk. Ezután a gyantái DCM alkalmazásával mossuk, majd az Fmoc csoportot piperidinnel eltávolítjuk.
A D-Trp-Glu(MeNH)-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leupsi-Leu-NH2 (RC-3490) (3) peptidet nyerjük hidrogénfluoriddal végzett kezelést követően.
A tisztítást nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással végezzük az (A) 0,1% trifluor-ecetsav és a (B) 1%-os trifluor-ecetsav 70%-os acetonitrilben oldószerrendszer alkalmazásával.
A tisztított peptidek analitikai HPLC szerint 97% feletti tisztaságúak. Az ebben a példában szereplő polipeptidek retenciós idejét a következő táblázatban adjuk meg:
Analitikai HPLC vizsgálat adatai
| A pepiid száma | Gradiens % B/perc | Retenciós idő az oszlopon |
| 2. | 25-65% B/40 | 11,84 |
| 4. | 25-65% /40 | 14,85 |
| 5. | 25-65% /40 | 14,32 |
| 6. | 25-65% /40 | 19,21 |
| 7. | 30-70% /40 | 9,11 |
A példában szereplő polipeptidek aminosavanalízisének eredményei a vártnak megfelelőek. Például a D-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-Leu-NH2 szerkezetű (2) peptid aminosavaránya a következő:
I, 11:2,09:0,90:1,03:0,95:0,92 (Gln:Trp:Ala:Val:Gly:His). ALeu-psi-Leu maradék abszorpciós csúcsának retenciós ideje 39,95 perc. Az (5), (6), (7) és (8) peptidekben Tpi-t nem mutattunk ki.
3. példa A peptid száma
9. NH2CO-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leupsi-Phe-NH2
10. D-Trp-Gln-Trp-Alá-Val-Gly-His-Leu-psiPhe-NH2
II. D-Trp-Glu(MeNH)-Trp-Ala-Val-Gly-HisLeu-psi-Phe-NH2
12. D-Tpi-Glu-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiPhe-NH2
13. D-Tpi-Glu(OMe)-Trp-Ala-Val-Gly-HisLeu-psi-Phe-NH2
Az ebben a példában szereplő polipeptidek a TrpAla-VaI-Gly-His-Leu-psi-Phe-NH2 fragmentumot tartalmazzák. A Boc-'Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)-Leu-psiPhe-BHA-gyantát (3/1/gyanta) lépésről lépésre építjük fel 0,5 g BHA-gyantán (0,9 mmól NH^g) a (2) példában leírt szilárdfázisú szintézis szerint, azzal az eltéréssel, hogy az első kapcsolásnál Boc-Leu helyett BocPhe-t alkalmazunk.
A mintegy 150 mg Boc-Trp-Alá-Val-Gly-His(Z)Leu-psi-Phe-BHA-gyanta (3/1/gyanta) tartalmú részpeptid-gyanták mindegyikét összekapcsoljuk a másik két maradékkal Boc-Trp, Boc-D-Trp, Boc-D-Tpi és Boc-Glu(OMe) esetén az (I) műveletben, Boc-Gln esetén a (III) műveletben leírt módon, így a végső polipeptid-gyantát nyerjük.
A fenti heptapeptid-gyantához (3/1/gyanta) egymást követően Boc-Gln-t és Boc-Trp-t kapcsolva az alábbi terméket nyerjük:
HU 211 603 A9
3/2/09 Boc-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)Leu-psi-Phe-BHA-gyanta.
A heptapeptid-gyantához (3/1/gyanta) egymást követően Boc-Gln-t és Boc-D-Trp-t kapcsolva az alábbi terméket nyerjük:
3/2/10 B oc- D-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gl y-His(Z)Leu-psi-Phe-BHA-gyanta.
A heptapeptid-gyantához (3/1/gyanta) Boc-Gln-t és Boc-D-Tpi-t kapcsolva a következő terméket nyerjük: 3/2/12 Boc-D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)Leu-psi-Phe-BHA-gyanta.
3/2/13 Boc-D-Tpi-Gln(MeO)-Trp-Ala-Val-GlyHis(Z)-Leu-psi-Phe-BHA-gyantát nyerünk a heptapeptid-gyantához (3/1/gyanta) BocGlu(OMe)-t és Boc-D-Tpi-t kapcsolva.
A Boc-csoportnak 5% merkaptoetanolt és 5% anizolt tartalmazó 50%-os, DCM-os trifluor-ecetsavval történő eltávolítása után a polipeptid-gyantát DCM, metanol, majd ismét DCM mindegyikével háromszor mossuk, majd 5 ml frissen desztillált hidrogén-fluoriddal és 0.25 ml anizollal reagáltatjuk 0 °C hőmérsékleten 1 órán át. Ezután az elegyről az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a visszamaradó anyagot etilacetáttal mossuk, 70-80%-os ecetsavval extraháljuk, majd liofilizáljuk. Ily módon az alábbi polipeptideket nyerjük:
3/3/09 Trp-GIn-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiPhe-NHi A peptid száma
10. D-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiPhe-NHi
12. D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiPhe-NH,
13. D-Tpi-Glu(MeO)-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leupsi-Phe-NHi.
Az N-terminálison NH2CO-t tartalmazó peptidet az alábbi eljárással állítjuk elő:
mg nyers Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leupsi-Phe-NH2 polipeptid (3/3/9) és 20 μΐ TEA 0.5 ml DMF-ban készült elegye és 2 mg KOCN 100 μΐ vizes oldata elegyét 0 ’C hőmérsékleten keverjük, majd cseppenként 100 μΐ AcOH-t adunk hozzá, és az elegyet 0 °C hőmérsékleten 1 órán át keverjük. A kívánt (9) peptidet, az NH2CO-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-HisLeu-psi-Phe-NH2-t tartalmazó reakcióelegyet nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással tisztítjuk.
A (11) peptidet két Fmoc-aminosavnak a (IV) művelet szerinti szilárdfázisú szintézisben megjelölt módon való egymást követő kapcsolásával állítjuk elő.
150 mg TFA-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)Leu-psi-PheBHA-gyantát (3/1/gyanta) 10%-os TEA-val semlegesítünk, diklór-metánnal és DMF-dal mossuk, majd Fmoc-Glu(OBut)-val kapcsoljuk, így FmocGlu(OBut)-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)-Leu-psi-PheBHA-gyanlál (3/5/11) nyerünk. A véoőcsoportnak 50%-os piperidinnel történő eltávolítása, majd FmocD-Trp-val való kapcsolás után Fmoc-D-TrpGlu(OBut)-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)-Leu-psi-PheBHA-gyantát nyerünk. A But-csoporlol az Fmoc-val védett peptid-gyantáról 2% merkaptoetanolt tartalmazó
10%-os DCM-os trifluor-ecetsavval végzett 30 perces kezeléssel távolítjuk el. Ezután 200 mg F’moc-D-TrpGlu-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)Leu-psi-Phe-BHA-gyanta (3/6/11) 5 ml dimetil-formamidban készült ágyán át 0 ’C hőmérsékleten 5 percig MeNH2-t buborékoltatunk át, 0,2 ml 20%-os DCM-os DIC-t adunk hozzá, és az elegyet 0 °C hőmérsékleten 2 órán át keverjük. Ezután a gyantái DCM-nal mossuk, és az Fmoc-csoportot piperidinnel távolítjuk el. Hidrogén-fluoridos és anizolos kezelést követően a (11) peptidet, a D-TrpGlu(MeNH)-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-PheNH2-t nyerjük, amelyet nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással tisztítunk.
A példában szereplő peptidek retenciós ideje az alábbi:
Analitikai HPLC vizsgálat adatai
| A peptid száma | Gradiens %B/perc | Retenciós idő a D oszlopon |
| 9. | 25-65 | 16,38 |
| 10. | 25-65 | 14,62 |
| 12. | 25-65 | 14,72 |
| 13. | 25-65 | 19.20 |
Az aminosav-analízissel nyert aminosav-arány a vártnak megfelelő. Például a (10) peptid, a D-Trp-GlnTrp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-Phe-NH2 aminosav aránya 1,15:0,96:0,95:1,01:0,94:1,97 (Glu:Gly:Ala:Val:His:Trp), és egy 44,56 perc retenciós idejű csúcsot ad. A (13) peptid arányai a következők: 1.04:0,98:1,02:1.00:1,03:0,94 (Glu:Gly:Ala:Val:His:Trp), és egy 44,56 perc retenciós idejű Leu-psi-Phe abszorpciós csúcsot ad. A (13) pepiidben Tpi-t nem mutattunk kí.
4. példa A peptid száma
14. Hca-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-TpiNH2
15. D-pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-NH| !
16. -Phe-Glu-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-TpiNH2
17. D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-NH;
18. D-Trp-GIn-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-NH;
19. D-Trp-His(Bz)-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leupsi-Tpi-NH2
20. D-Trp-Glu(MeNH)-Trp-Ala-Val-Gly-HisLeu-psi-Tpi-NH2
21. D-Trp-Glu(OMe)-Trp-Ala-Val-Gly-HisLeu-psi-Tpi-NH2
22. Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-TpiNH;
23. Ae-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-NH2
HU 211 603 A9
24. NH2CO-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leupsi-Tpi-NH2
25. Hna-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-NH2
26. D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-NH,
Leu-psi-Tpi-BHA-gyantát készítünk Boc-Leu-psiTrp-BHA-gyantát formaldehiddel az alábbi eljárás szerint reagáltatva:
Boc-Leu-psi-Trp-BHA-gyantát nyerünk 1,0 g BHA-gyanta (0,9 mmól NH2/g) egymást követően Boc-Trp-val és Boc-Leu-CHO-val való kapcsolásával, amelyet az (I) és (II) műveletben leírt módon hajtunk végre. Ezután a fenti peptid-gyantához 1% ecetsavat tartalmazó 10 ml DMF-t adunk és 1 ml 10%-os formaldehiddel szobahőmérsékleten 60 percig reagáltatjuk, majd DMF, MeOH és DCM alkalmazásával mossuk.
A példában szereplő minden polipeptid közös fragmentuma a Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-Tpi-NH2. A Leu-psi-Tpi-BHA-gyantán a Boc-His(Z) (I) művelettel, a Boc-Gly (III) művelettel, a Boc-Val, Boc-Ala és Boc-Trp (I) művelettel való egymást követő kapcsolásával Boc-Trp-Alá-Val-Gly-His(Z)-Leu-psi-Tpi-BHAgyantát (4/1/gyanta) építünk fel lépésenként.
A fenti peptid-gyanta köztitermékből 150 mg-t két további kapcsolási műveletnek teszünk ki, amelyeket a Hca, D-pGlu, Boc-Glu(OMe), Boc-Glu(OBz), Boc-DPhe. Boc-D-Trp. Boc-His(Bz), Boc-Tpi, Boc-D-Tpi, Ac-Tpi és Hna-Tpi kapcsolására az (I) művelet szerint és a Boc-Gln kapcsolására a (III) művelet szerint hajtunk végre, így a végső peptid-gyantát nyerjük.
A fenti heptapeptid-gyantához (4/l/gyanta)egymást követően Boc-Gln-t és Hca-t kapcsolva az alábbi terméket nyerjük:
4/2/14 Hca-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)-Leupsi-Tpi-BHA-gyanta.
A heptapeptid-gyantához (4/1/gyanta) egymást követően Boc-Gln-t és D-pGlu-t kapcsolva az alábbi termékei kapjuk:
4/2/15 D-p-Glu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)Leu-psi-Tpi-BHA-gyanta.
A fenti peptid-gyanta köztitermékhez (4/1/gyanta) egymást követően Boc-Glu(OBz)t és Boc-Phe-t kapcsolva az alábbi terméket nyerjük:
4/2/16 B oc-Phe-Glu(OB z)-Trp-Alá-Val-GlyHis(Z)-Leu-psi-Tpi-BHA-gyanta.
A heptapeptid-gyantához (4/1/gyanta) Boc-Glnt és Boc-D-Phe-l kapcsolva 4/2/17 Boc-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-GlyHis(Z)-Leu-psi-Tpi-BHA-gyantát nyerünk.
4/2/18 Boc-D-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)Leu-psi-Tpi-BHA-gyantát nyerünk a heptapeptid-gyantához (4/1/gyanta) a Boc-Gln-t és Boc-D-Trp-t kapcsolva.
4/2/19 Boc-D-Trp-His(Bz)-Trp-Ala-Val-GlyHis(Z)-Leu-psi-Tpi-BHA-gyantát nyerünk a heptapeptid-gyantához (4/1/gyanta) Boc-His(Bz)-t és Boc-D-Trp-t kapcsolva.
4/2/21 Boc-D-Trp-Glu(OMe)-Trp-Ala-Val-GlyHis(Z)-Leu-psi-Tpi-BHA-gyantát nyerünk a heptapeptid-gyantához (4/1/gyanta)
Boc-Gln(MeO)-t és Boc-Tpi-t kapcsolva.
4/2/22 Boc-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)Leu-psi-Tpi-BHA-gyantát nyerünk a heptapeptid-gyantához (4/1/gyanta)
Boc-Gln-t és Boc-Tpi-t kapcsolva.
4/2/23 Ac-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)Leu-psi-Tpi-BHA-gyantát nyerünk a heptapeptid-gyantához (4/1/gyanta)
Boc-Gln-t és AcTpi-t kapcsolva.
4/2/25 Hna-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)Leu-psi-Tpi-BHA-gyantát nyerünk a heptapeptid-gyantához (4/1/gyanta) BocGln-t és Hna-Tpi-t kapcsolva.
4/2/26 Boc-D-Tpi-Gln-Trp-Alá-Val-Gly-His(Z)Leu-psi-Tpi-BHA-gyantát nyerünk a heptapeptid-gyantához (4/1/gyanta) BocGlu-t és Boc-D-Tpi-t kapcsolva.
A Boc-csoport eltávolítását és az előzőekben a (2) és (3) példában leírt módon hidrogén-fluoriddal és anizollal való reagáltatást követően a következő peptideket nyerjük:
A peptid száma
14. Hca-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-TpiNH2
15. D-pGlu-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-NH2
4/3/16 Phe-Glu-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-NH2
17. D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-NH2
18. D-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-NH2
19. D-Trp-His(Bz)-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leupsi-Tpi-NH2
21. D-Trp-Glu(OMe)-Trp-Ala-Val-Gly-HisLeu-psi-Tpi-NHj
22. Tpi-GIn-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-TpiNH2
23. Ac-Tpi-GIn-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-NH2
25. Hna-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-NH2
26. D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-NH2.
mg Phe-Glu-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-TpiNH2 (4/3/16), 5 mg difenil-foszforil-azid és 10 mg kálium-hidrogén-karbonát 0,5 ml dimetil-formamidban készült elegyét 0 °C hőmérsékleten 24 órán át keverjük. A reakcióelegyet ezután nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással tisztítjuk, 40-70% B tartalmú oldószerrendszer 60 percen át történő alkalmazásával, így a (16) peptidet, a
I I L Phe-Glu-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-Tpi-NH2-t nyerjük mintegy 4.5 mg mennyiségben. Ez, analitikai nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással történő vizsgálat szerint, oldószerrendszerként 25-65% B
HU 211 603 A9 tartalmú rendszert alkalmazva 40 percen át, 95%-nál nagyobb tisztaságúnak bizonyult.
mg nyers Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-NH2 polipeptidet (22), 20 μΙ TEA 0,5 ml dimetil-formamidban készült elegyét 0 °C hőmérsékleten 20 mg KOCN 100 pl vízben készült oldatával kevetjük. Pár perc múlva az elegyhez cseppenként hozzáadunk 100 μ] AcOH-t, és a reakcióelegyet 0 °C hőmérsékleten 1 órán át keverjük. A reakcióelegyet, amely a kívánt (oligo)peptidet, az NH2CO-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-NH2-t, a (24) peptidet tartalmazza, nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással tisztítjuk.
Fmoc-D-Trp-Gln(OBut)-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)Leu-psi-Tpi-BHA-gyantát (4/2/gyanta) készítünk Fmoc-Glu(OBut) és Fmoc-D-Trp Trp-Ala-Val-GlyHis(Z)-Leu-psi-Tpi-BHA-gyantához (4/1/gyanta) való egymást követő kapcsolásával, amelyet a (IV) műveletben megjelölt módon hajtunk végre. A But-csoponot 2% 2-merkaptoetanolt tartalmazó 10%-os DCM-os trifluor-ecetsavval 30 percig végzett reagáltatással eltávolítjuk, majd a peptid-gyantát MeNH2-val és DIC-val reagáltatjuk a (3) példában a peptid-gyantára (3/6/11) leírt módon. így Fmoc-D-Trp-Glu(MeNH)-Trp-AlaVal-Gly-His(Z)Leu-psi-Tpi-BHA-gyantát (4/3/gyanta) nyerünk. Az Fmoc csoport piperidinnel végzett eltávolítása után a peptid-gyantát 5 ml hidrogén-fluoriddal és 0,25 ml anizollal reagáltatjuk 0 °C hőmérsékleten 1 órán át. így a (20) peptidet, D-Trp-Glu(MeNH)-TrpAla-Val-Gly-His-Leu-psi-Tpi-NH2-t, nyerjük.
A példában szereplő peptidek retenciós idői a következők:
Analitikai HPLC vizsgálat adatai
| A pepiid száma | — Gradiens %B/pere | Retenciós idő a D oszlopon |
| 17. | 25-65/40 | 17,13 |
| _ 18. | 25-65/40 | 19,34 |
| 22. | 25-65/40 | 21.32 |
| 26. | 30-70/40 | 16,76 |
A példában szereplő peptidek aminosav-analízisével a várt összetételt igazoltuk. Például a D-Phe-GlnTrp-Ala-Gly-His-Leu-psi-Tpi-NHi (17) aminosav arányai: 1,04:0,99:0,96:1,00:0.94:0,99:1,06 (Glu:Gly:Ala:Val:Phe:His:Trp). Az aminosav-analízissel nem mutattunk ki Tpi-t a 17., 24. és 26. számú peptidekben.
5. példa A peptid száma
27. Mpp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-TrpNH2
28. D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psíTrp-NH2
29. D-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTrp-NH,
30. D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTrp-NH2
31. Mpp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTrp(For)-NH2
32. D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTrp(For)-NH2
33. D-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTrp(For)-NH2
34. D-Tpí-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTrp(For)-NH2
Az ebben a példában szereplő peptidek közös fragmentuma a Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-Trp-NH2 vagy Gln-Trp-Ala-Val-His(Z)-Leu-psi-Tip(For)-NH2. A Boc-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-Trp(For)-BHAgyantát (5/1/gyanta) 1,0 g BHA gyantán (0,9 mmól NH/g) szilárdfázisú szintézissel végzett lépésenként] kapcsolásokkal építjük fel, amelyeket a (2) példában leírt módon végzünk, azzal az eltéréssel, hogy az első kapcsolásnál Boc-Leu helyett Boc-Trp(For)-t kapcsolunk. A fenti peptid-gyanták 250 mg-os részleteit használjuk a következő négy védett peptid-gyanta szintéziséhez, utolsóként MPP, Boc-D-Phe, Boc-D-Trp, illetve Boc-D-Tpi egységeket kapcsolva hozzá az (I) műveletben leírt eljárás szerint. 5/2/27 Mpp-GIn-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)-Leupsi-Trp(For)-BHA-gyanta 5/2/28 Boc-D-Phe-GIn-Trp-Ala-Val-GlyHis(Z)-Leu-psi-Trp(For)-BHA-gyanta 5/2/29 Boc-D-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)Leu-psi-Trp(For)-BHA-gyanta 5/2/30 Boc-D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)Leu-psi -Trp(For)-BHA-gy anta.
A Boc-csoportnak 5% merkaptoetanolt és 5% anizolt tartalmazó 50%-os DCM-os trifluor-ecetsavval való eltávolítása után minden egyes peptid-gyanta mennyiségének felét 5 ml hidrogén-fluoriddal és 0,25 ml anizollal reagáltatjuk 0 ’C hőmérsékleten 1 órán át, így az alábbi peptideket nyerjük:
A peptid száma
31. Mpp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTrp(For)-NH2
32. D-Phe-GIn-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTrp(For)-NH2
33. D-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTrp(For)-NH2
34. D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTrp(For)-NH2.
A peptidek megmaradt mennyiségét 5% anizolt és 5% dimerkaptoetanolt tartalmazó hidrogén-fluoriddal reagáltatjuk 0 °C hőmérsékleten 1 órán át, így az alábbi peptideket nyerjük:
A peptid száma
27. Mpp-GIn-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-TrpNH,
28. D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTrp-NH,
29. D-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTrp-NHi
30. D-Tpi-Gln-Trp-Ata-Val-Gly-His-Leu-psiTrp-NH2
A peptideket nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással tisztítjuk, retenciós időik tisztítás után az alábbiak:
HU 211 603 A9
Analitikai HPLC vizsgálat adatai
| A peptid száma | Gradiens %B/perc | Retenciós idő a D oszlopon |
| 27. | 25-65 | 27,89 |
| 28. | 25-65 | 18,70 |
| 29. | 25-65 | 19,70 |
| 30. | 25-65 | 20,26 |
| 31. | 25-65 | 28,00 |
| 32. | 25-65 | 19,10 |
| 33. | 25-65 | 19,01 |
| 34. | 25-65 | 17,70 |
A peptidek aminosavanalízisének eredménye a vártnak megfelelő. Például a (28) számú peptid aminosav arányai a következők:
0.98:0,92:1.03:0,97:0,98:1,09 (Gly:Ala:Val:Phe:His:Trp). A (30) és (34) számtú peptidekben Tpi-t nem mutattunk ki.
6. példa A peptid száma
35. Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-TpiOMe
D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-OMe
37. NHiCO-Tpi-GIn-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leupsi-Tpi-OMe
38. D-Tpi-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-Tpi-N HMe
39. D-Tpi-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-TpiOH
40. D-Tpi-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-TpiN2H2CONH2
Kiindulási anyagul Boc-Trp-OCH2-gyantát használunk, amelyet a következő módon állítunk elő: 1,0 g ClCH2-gyanta (0,7 mmól Cl/g), Boc-Trp (2,0 Trp mmól) és 4 mmól kálium-fluorid 20 ml dimetil-formamidban készült elegyét 70-80 °C hőmérsékleten 4 órán át keverjük. Ezután a Boc-Trp-OCH2-gyantát MeOH, H2O, MeOH, DMF és DCM mindegyikével kétszer mossuk. Boc-Leu-psi-Trp-OCH2-gyantát nyerünk BocLeu-CHO-nak Trp-OCH2-gyantához való kapcsolásával, amelyet a (II) művelet szerint végzünk. Boc-Leupsi-Trp-OCH2-gyanta formaldehiddel a (4) példában leírt eljárás szerinti reagáltatásával Boc-Leu-psi-TpiOCH2-gyantát nyerünk. Boc-His(Z), Boc-Gly-Boc, Val-Boc-Ala-Boc-Trp és Boc-GIn az előzőekben leírt módon végrehajtott szilárdfázisú szintézis műveletekkel végzett egymást követő kapcsolásával 1,60 g BocGln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)-Leu-psi-Tpi-OCH2-gyan tát (6/1/gyanta) nyerünk. A fenti peptid-gyanta köztitermékek egy részét Boc-Tpi kapcsolásával Boc-TpiGln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)-Leu-psi-Tpi-OCH2-gyan ta (6/2/35) előállítására használjuk fel. A peptid-gyanta egy másik alikvot részéi Boc-D-Tpi-vel való kapcsolással Boc-D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)Leu-psiTpi-OCH2-gyanta (6/2/36) előállítására használjuk.
A Boc-csoportnak 5% merkaptoetanolt és 5% anizolt tartalmazó 50%-os DMEM-es trifluor-ecetsavval való eltávolítása után átészterezési eljárást végzünk a következő módon: 0,5 g Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-GlyHis(Z)-Leu-psi-Tpi-OCH2-gyanta (6/3/35), 15 ml metanol, 15 ml dimetil-formamid és 3 ml diizopropil-etilamin elegyét szobahőmérsékleten 3 napig keverjük. A gyantát dimetil-formamiddal háromszor és metanollal háromszor mossuk. A szűrletet és a mosófolyadékokat egyesítjük és vákuumban rotációs bepárlón bepárolva eltávolítjuk róla az oldószereket. Ezután a visszamaradó anyagot hidrogén-fluoriddal és anizollal kezeljük, így 123 mg nyers (35) számú peptidet, Tpi-Gln-TtpAla-Val-Gly-His-Leu-psi-Tpi-OCHj-t, nyerünk. A (36) számú peptidet, a D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)Leu-psi-Tpi-OCHj-t azonos módon nyerjük, de kiindulási anyagul 6/2/36-t alkalmazunk.
mg Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-TpiOCH3 (35) és 20 μΐ TEA 0,5 ml dimetil-formamidban készült elegyét 100 μΐ vízben lévő 50 mg KOCN-tal 0 ’C hőmérsékleten keveijük, majd pár perc múlva az elegyhez 50 μΐ AcOH-t adunk, és az elegyet 0 C hőmérsékleten 1 órán át reagáltatjuk. Az elegyet ezután tisztítjuk, így a (37) számú peptidet, az NH2CO-TpiGln-Trp-Ala-Val-His-Leu-psi-Tpi-OCH3-t, nyerjük.
D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)-Leu-psi-TpiOCH3 (36) és 2 ml 1:2 tömegarányú metil-amin/metanol oldat elegyét szobahőmérsékleten 16 órán át keverjük. Az elegyet ezután vákuumban rotációs bepárlón bepároljuk, a visszamaradó anyagot fagyasztvaszárítjuk, és hidrogén-fluoriddal és anizollal reagáltatjuk. A termék a D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leupsi-Tpi-NHCH, (38) peptid, amelyet HPLC eljárással tisztítunk.
AD-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(Z)-Leu-psi-TpiOCH2-gyanta (6/2/35) egy másik részét hidrogén-fluoriddal és anizollal reagáltatva a (39) peptidet, a D-TpiGln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-Tpi-OH-t nyeljük.
mg (39) peptid, 20 mg (Boc)2O és 20 μΐ TEA 0,5 ml dimetil-formamidban készült elegyét 0 ’C hőmérsékleten 4 órán át keverjük, majd liofdizáljuk. A viszszamaradó anyagot éterrel mossuk, és a mosott anyagot, 10 mg ΗΟΒι-t és 20 mg N2H3CONH2-t 100 μΐ 20%-os, DCM-os DCl-vel éjszakán át 0 ’C hőmérsékleten reagáltatjuk. majd a DMF-t lepároljuk róla, a maradékot éterrel mossuk, és a Boc-csoportot 5% merkaptoetanolt és anizolt tartalmazó 50%-os trifluor-ecetsavval eltávolítjuk. így a nyers (40) peptidet, a D-TpiGln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-Tpi-N2H2CONH2 terméket nyerjük.
Claims (7)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. X-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A1-A8-psi-A9-Q (I) általános képletű polipeptid, a képletben Q jelentése -NH2 vagy -OQ1, ahol Q1 jelentése hidrogénatom, 1-10 szénatomos alkilcsoport, fenilcsoport vagy 7-10 szénatomos fenil-alkil-csoport;X jelentése hidrogénatom vagy egy vegyértékkötés,HU 211 603 A9 amely az A1 helyettesítő alfa-amino-csoportját az A2 oldallánc karboxilcsoportjához köti - ha ez jelen van - vagy egy R'CO- általános képletű csoport, ahol R1 jelentése (a) hidrogénatom, 1-10 szénatomos alkilcsoport, fenilcsoport vagy 7-10 szénatomos fenil-alkil-csoport, (b)R2 \N/R3 aholR2 jelentése hidrogénatom, 1-10 szénatomos alkilcsoport, fenilcsoport vagy 7-10 szénatomos fenil-alkilcsoport,R3 jelentése hidrogénatom vagy 1-10 szénatomos alkilcsoport; és (c) R4-O-, ahol R4 jelentése 1-10 szénatomos alkilcsoport, fenilcsoport vagy 7-10 szénatomos fenil-alkilcsoport;A1 jelentése egy maradék, amely lehet Mpp, D-Phe, Lvagy D-Tpi, D-Trp vagy Trp, amely a benzolgyűrűn az alábbi helyettesítők közül eggyel vagy többel helyettesített: halogénatom, nitro-, amino-, hidroxil-. 1-3 szénatomos alkil- és 1-3 szénatomos alkoxicsoport, ahol a halogénatom fluor-, klórvagy brómatom lehet;A2 jelentése Asn, Dpa, Gin, His. MeHis, His(Bz), His(Z) vagy egy Asp(Y),Glu[-] vagy Glu(Y) képletű csoport, aholY jelentése -OR5 vagy -N-R6, ahol IR7R5 jelentése hidrogénalom, 1-3 szénatomos alkilcsoport vagy fenilcsoport;R6 jelentése hidrogénatom vagy 1-3 szénatomos alkilcsoport;R7 jelentése hidrogénatom, 1-3 szénatomos alkilcsoport vagy -NHCONH2 és [-] jelentése vegyértékkötés, amely az A2 csoport oldallánc-karboxilcsoportját, ha van, az A1 csoport alfa-amino-csoportjával köti össze, ha X jelentése vegyértékkötés,A3 jelentése Nal. Pál, Tpi, Trp, MeTrp, Trp(For) vagyTrp, amely a benzolgyürűn az alábbi helyettesítők közül eggyel vagy többel helyettesített: halogénatom, nitro-, amino-, hidroxil-, 1-3 szénatomos alkil- és 1-3 szénatomos alkoxicsoport; ahol a halogénatom fluor-, klór- vagy brómatom;A4 jelentése Alá, MeAla vagy Gin;A5 jelentése Val vagy MeVal;A6 jelentése Gly, Phe vagy D-Ala;A7 jelentése His, MeHis, His(Bz), His(Z), Lys(Z) vagyPál;A8 jelentése Leu vagy Phe redukált izoszterje;A9 jelentése D-. L- vagy DL-Tpi;és a fenti vegyületek gyógyászati célra alkalmas savakkal alkotott sói.
- 2. Az 1. igénypont szerinti polipeptid, amelynek képletea) D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiΤρί-ΝΗτ.b) D-Trp-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psiTpi-NHj,c) Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-TpiNH2.
- 3. Az 1. igénypont szerinti polipeptid, amelynek képlete NH2CO-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leupsi-Tpi-NHj vagy ACY-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-HisLeu-psi-Tpi-NHj. ahol ACY jelentése acetil-, hidroxicinnamoil- vagy 3-hidroxi-2-naftoil-csoport.
- 4. Az 1. igénypont szerinti polipeptid, amelynek képlete D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-Tpi-NHj.
- 5. Egy az 1 igénypont szerinti polipeptid gyógyászati szempontból elfogadható savaddíciós sója.
- 6. Gyógyászati készítmény, amely egy az 1. igénypont szerinti polipeptidet vagy terápiás szempontból elfogadható savaddíciós sóját vagy komplexét, és emellett egy gyógyászati szempontból megfelelő folyékony vagy szilárd hordozóanyagot tartalmaz.
- 7. Egy az 1. igénypont szerinti polipeptid vagy terápiás szempontból elfogadható savaddíciós sójának alkalmazása rák kezelésére alkalmas készítmény előállítására.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/619,747 US5244883A (en) | 1990-11-29 | 1990-11-29 | Nonapeptide bombesin antagonists |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU211603A9 true HU211603A9 (en) | 1995-12-28 |
Family
ID=24483142
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9301567A HU213114B (en) | 1990-11-29 | 1991-11-15 | Process for producing nonapeptide bombesin antagonists and pharmaceutical compositions containing them |
| HU95P/P00466P HU211603A9 (en) | 1990-11-29 | 1995-06-27 | Nonapeptide bombesin antagonists |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9301567A HU213114B (en) | 1990-11-29 | 1991-11-15 | Process for producing nonapeptide bombesin antagonists and pharmaceutical compositions containing them |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5244883A (hu) |
| EP (1) | EP0559756B1 (hu) |
| JP (1) | JPH06503090A (hu) |
| KR (1) | KR100225679B1 (hu) |
| AT (1) | ATE120760T1 (hu) |
| AU (1) | AU657723B2 (hu) |
| CA (1) | CA2097192C (hu) |
| CZ (1) | CZ281533B6 (hu) |
| DE (1) | DE69108738T2 (hu) |
| DK (1) | DK0559756T3 (hu) |
| ES (1) | ES2072137T3 (hu) |
| FI (1) | FI104253B (hu) |
| GR (1) | GR3015866T3 (hu) |
| HU (2) | HU213114B (hu) |
| IE (1) | IE62722B1 (hu) |
| LV (1) | LV5794B4 (hu) |
| MC (1) | MC2326A1 (hu) |
| NO (1) | NO311362B1 (hu) |
| NZ (1) | NZ240628A (hu) |
| PL (1) | PL169498B1 (hu) |
| PT (1) | PT99667B (hu) |
| RU (1) | RU2115659C1 (hu) |
| SK (1) | SK283541B6 (hu) |
| WO (1) | WO1992009626A1 (hu) |
| YU (1) | YU48751B (hu) |
| ZA (1) | ZA919387B (hu) |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5723578A (en) * | 1987-09-24 | 1998-03-03 | The Administrators Of Tulane Educational Fund | Peptide analogs of bombesin |
| US5877277A (en) * | 1987-09-24 | 1999-03-02 | Biomeasure, Inc. | Octapeptide bombesin analogs |
| CA2042027A1 (en) * | 1989-09-15 | 1991-03-16 | Arthur E. Bogden | Treatment of colon cancer |
| US5162336A (en) * | 1990-06-21 | 1992-11-10 | Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. | Tetrahydro-pyrido-indoles as cholecystokinin and gastrin antagonists |
| US5834433A (en) * | 1990-07-26 | 1998-11-10 | Merrell Pharmaceuticals Inc. | Compounds and pharmaceutical uses of peptides of bombesin and GRP |
| US5369094A (en) * | 1990-11-29 | 1994-11-29 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Polypeptide bombesin antagonists |
| JPH07505865A (ja) * | 1992-02-07 | 1995-06-29 | メレルダウファーマスーティカルズ インコーポレイテッド | ボンベシンのフェニルアラニン類似体類 |
| US5620955A (en) * | 1993-06-18 | 1997-04-15 | Peptide Technologies Corporation | Bombesin receptor antagonists and uses thereof |
| DE4320201A1 (de) * | 1993-06-18 | 1995-01-12 | Asta Medica Ag | Verwendung von Cetrorelix und weiteren Nona- und Dekapeptiden zur Herstellung eines Arzneimittels zur Bekämpfung von Aids und zur Wachstumsstimulation |
| US5997870A (en) * | 1994-06-03 | 1999-12-07 | Ludwig Institute For Cancer Research | Isolated peptides which bind to HLA-B44 Molecules |
| US5650395A (en) * | 1995-03-13 | 1997-07-22 | Hurel; Steven | Treatment of pulmonary hypertension |
| US5972895A (en) * | 1996-12-11 | 1999-10-26 | A. Glenn Braswell | Composition and method for increasing growth hormone levels |
| US6200546B1 (en) | 1997-04-22 | 2001-03-13 | The Curators Of The University Of Missouri | Gastrin receptor-avid peptide conjugates |
| WO2004062574A2 (en) * | 2003-01-13 | 2004-07-29 | Bracco Imaging S.P.A. | Improved linkers for radiopharmaceutical compounds |
| US20060239923A1 (en) * | 2003-01-13 | 2006-10-26 | Bracco Imaging S.P.A. | Gastrin releasing peptide compounds |
| US7922998B2 (en) * | 2003-01-13 | 2011-04-12 | Bracco Imaging S.P.A. | Gastrin releasing peptide compounds |
| US7226577B2 (en) * | 2003-01-13 | 2007-06-05 | Bracco Imaging, S. P. A. | Gastrin releasing peptide compounds |
| US8420050B2 (en) * | 2003-01-13 | 2013-04-16 | Bracco Imaging S.P.A. | Gastrin releasing peptide compounds |
| US7611692B2 (en) * | 2003-01-13 | 2009-11-03 | Bracco Imaging S.P.A. | Gastrin releasing peptide compounds |
| US7850947B2 (en) * | 2003-01-13 | 2010-12-14 | Bracco Imaging S.P.A. | Gastrin releasing peptide compounds |
| US7795385B2 (en) * | 2004-12-17 | 2010-09-14 | Bexar Global, Inc. | Use of bombesin/gastrin-releasing peptide antagonists for the treatment of inflammatory conditions, acute lung injury and bipolar disorder |
| EP1872795A4 (en) * | 2005-04-21 | 2009-07-22 | Astellas Pharma Inc | THERAPEUTIC AGENT AGAINST IRRITATION SYNDROME |
| EP2289564A3 (en) * | 2006-09-08 | 2012-11-14 | Piramal Imaging SA | Derivatives of aniline as precursors for F18-labeling |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4839465A (en) * | 1987-01-20 | 1989-06-13 | Sterling Drug Inc. | Di-(D-tryptophyl and/or tetrahydropyridoindolylcarbonyl)-containing peptide amides and process for preparation thereof |
| JP2795449B2 (ja) * | 1987-09-24 | 1998-09-10 | ジ・アドミニストレーターズ・オブ・ザ・ツーレイン・エデュケイショナル・ファンド | 治療用ペプチド |
| GB8808768D0 (en) * | 1988-04-14 | 1988-05-18 | Erba Carlo Spa | Peptide ligands for bombesin receptors |
| GR1000608B (el) * | 1988-07-21 | 1992-08-31 | Erba Carlo Spa | Μεθοδος για την παρασκευη ανταγωνιστων bombesin. |
| EP0438519B1 (en) * | 1988-10-14 | 1998-05-06 | The Administrators of The Tulane Educational Fund | Therapeutic peptides |
-
1990
- 1990-11-29 US US07/619,747 patent/US5244883A/en not_active Expired - Lifetime
-
1991
- 1991-11-15 AT AT92900740T patent/ATE120760T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-11-15 WO PCT/US1991/008534 patent/WO1992009626A1/en active IP Right Grant
- 1991-11-15 CA CA002097192A patent/CA2097192C/en not_active Expired - Fee Related
- 1991-11-15 HU HU9301567A patent/HU213114B/hu unknown
- 1991-11-15 CZ CS931006A patent/CZ281533B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1991-11-15 JP JP4501946A patent/JPH06503090A/ja active Granted
- 1991-11-15 PL PL91300477A patent/PL169498B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1991-11-15 DK DK92900740.9T patent/DK0559756T3/da active
- 1991-11-15 SK SK551-93A patent/SK283541B6/sk unknown
- 1991-11-15 RU RU93041053A patent/RU2115659C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1991-11-15 KR KR1019930701620A patent/KR100225679B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1991-11-15 MC MC912326D patent/MC2326A1/xx unknown
- 1991-11-15 ES ES92900740T patent/ES2072137T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-11-15 AU AU90645/91A patent/AU657723B2/en not_active Ceased
- 1991-11-15 EP EP92900740A patent/EP0559756B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-11-15 DE DE69108738T patent/DE69108738T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1991-11-18 NZ NZ24062891A patent/NZ240628A/en not_active IP Right Cessation
- 1991-11-22 YU YU183491A patent/YU48751B/sh unknown
- 1991-11-28 ZA ZA919387A patent/ZA919387B/xx unknown
- 1991-11-28 IE IE414091A patent/IE62722B1/en not_active IP Right Cessation
- 1991-11-29 PT PT99667A patent/PT99667B/pt not_active IP Right Cessation
-
1993
- 1993-05-28 NO NO19931977A patent/NO311362B1/no unknown
- 1993-05-28 FI FI932457A patent/FI104253B/fi not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-04-19 GR GR950400995T patent/GR3015866T3/el unknown
- 1995-06-27 HU HU95P/P00466P patent/HU211603A9/hu unknown
-
1996
- 1996-07-22 LV LV960305A patent/LV5794B4/xx unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0559756B1 (en) | Nonapeptide bombesin antagonists | |
| US5068222A (en) | Bombesin antagonists with deletion of net-residue at the c-terminus | |
| US20060281685A1 (en) | Methods of treatment using novel lhrh antagonists having improved solubility properties | |
| KR100306506B1 (ko) | 폴리펩티드봄베신길항제 | |
| AU616975B2 (en) | Polypeptide compounds | |
| WO1994021674A9 (en) | Polypeptide bombesin antagonists | |
| EP2198878A1 (en) | Polypeptide bombesin antagonists | |
| JP3040166B2 (ja) | ノナペプチドのボンベシン拮抗薬 | |
| HRP921277A2 (en) | Nonapeptide bombestin antagonists |