HU210715A9 - Improved treatment of autoimmune diseases by aerosol administration of auto antigens - Google Patents
Improved treatment of autoimmune diseases by aerosol administration of auto antigens Download PDFInfo
- Publication number
- HU210715A9 HU210715A9 HU95P/P00074P HU9500074P HU210715A9 HU 210715 A9 HU210715 A9 HU 210715A9 HU 9500074 P HU9500074 P HU 9500074P HU 210715 A9 HU210715 A9 HU 210715A9
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- disease
- autoantigen
- mbp
- aerosol
- autoimmune
- Prior art date
Links
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 title claims abstract description 87
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 title claims abstract description 63
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims description 32
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims description 16
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims description 16
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims description 16
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 52
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 49
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 48
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 41
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 38
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 15
- KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[5-amino-2-[[2-[[1-[2-[[6-amino-2-[(2,5-diamino-5-oxopentanoyl)amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)p Chemical compound C1CCN(C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CCC(N)=O)C1C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- 102000047918 Myelin Basic Human genes 0.000 claims description 37
- 101710107068 Myelin basic protein Proteins 0.000 claims description 37
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 23
- 230000001629 suppression Effects 0.000 claims description 19
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 16
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 16
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 16
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 claims description 15
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 claims description 15
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 claims description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 13
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 claims description 12
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 12
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 9
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 8
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 4
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 claims description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 3
- 101710093543 Probable non-specific lipid-transfer protein Proteins 0.000 claims 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 claims 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 claims 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 80
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 52
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 34
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 25
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 24
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 23
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 22
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 21
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 21
- 230000004044 response Effects 0.000 description 19
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 16
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 12
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 9
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 9
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 9
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 8
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 208000009386 Experimental Arthritis Diseases 0.000 description 7
- 238000012387 aerosolization Methods 0.000 description 7
- 238000011694 lewis rat Methods 0.000 description 7
- 101001018362 Bos taurus Myelin basic protein Proteins 0.000 description 6
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 6
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 6
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 6
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 6
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 108010050122 alpha 1-Antitrypsin Proteins 0.000 description 5
- 102000015395 alpha 1-Antitrypsin Human genes 0.000 description 5
- 229940024142 alpha 1-antitrypsin Drugs 0.000 description 5
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 4
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 4
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 4
- 101710137302 Surface antigen S Proteins 0.000 description 4
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 4
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 4
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 3
- 101001018322 Sus scrofa Myelin basic protein Proteins 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 206010062269 Adrenalitis Diseases 0.000 description 2
- 208000032116 Autoimmune Experimental Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 2
- 108010009685 Cholinergic Receptors Proteins 0.000 description 2
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 208000016192 Demyelinating disease Diseases 0.000 description 2
- 206010019755 Hepatitis chronic active Diseases 0.000 description 2
- 102100039869 Histone H2B type F-S Human genes 0.000 description 2
- 101001035372 Homo sapiens Histone H2B type F-S Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 2
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 2
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 102000009843 Thyroglobulin Human genes 0.000 description 2
- 108010034949 Thyroglobulin Proteins 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000034337 acetylcholine receptors Human genes 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 229940071648 metered dose inhaler Drugs 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229960002175 thyroglobulin Drugs 0.000 description 2
- JXYWFNAQESKDNC-BTJKTKAUSA-N (z)-4-hydroxy-4-oxobut-2-enoate;2-[(4-methoxyphenyl)methyl-pyridin-2-ylamino]ethyl-dimethylazanium Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O.C1=CC(OC)=CC=C1CN(CCN(C)C)C1=CC=CC=N1 JXYWFNAQESKDNC-BTJKTKAUSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000557626 Corvus corax Species 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- 208000006313 Delayed Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010012305 Demyelination Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 208000035186 Hemolytic Autoimmune Anemia Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 108010028275 Leukocyte Elastase Proteins 0.000 description 1
- 102000016799 Leukocyte elastase Human genes 0.000 description 1
- FQISKWAFAHGMGT-SGJOWKDISA-M Methylprednisolone sodium succinate Chemical compound [Na+].C([C@@]12C)=CC(=O)C=C1[C@@H](C)C[C@@H]1[C@@H]2[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@](O)(C(=O)COC(=O)CCC([O-])=O)CC[C@H]21 FQISKWAFAHGMGT-SGJOWKDISA-M 0.000 description 1
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 1
- 206010064550 Myocarditis post infection Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000721454 Pemphigus Species 0.000 description 1
- 101001018324 Rattus norvegicus Myelin basic protein Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- -1 Steroid compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 201000007023 Thrombotic Thrombocytopenic Purpura Diseases 0.000 description 1
- LEBBDRXHHNYZIA-LDUWYPJVSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl] n-[(z)-1,3-dihydroxyoctadec-4-en-2-yl]carbamate Chemical compound CCCCCCCCCCCCC\C=C/C(O)C(CO)NC(=O)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LEBBDRXHHNYZIA-LDUWYPJVSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002821 alveolar epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 201000000448 autoimmune hemolytic anemia Diseases 0.000 description 1
- 230000001357 autoimmunogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002170 azathioprine Drugs 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000007248 cellular mechanism Effects 0.000 description 1
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940112141 dry powder inhaler Drugs 0.000 description 1
- 210000000624 ear auricle Anatomy 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000017555 immunoglobulin mediated immune response Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 description 1
- 229940073062 imuran Drugs 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 229940040511 liver extract Drugs 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 230000007257 malfunction Effects 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 229960004584 methylprednisolone Drugs 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003595 mist Substances 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000002663 nebulization Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000001769 paralizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 208000005987 polymyositis Diseases 0.000 description 1
- 230000002516 postimmunization Effects 0.000 description 1
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 1
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 1
- 201000007529 rheumatic myocarditis Diseases 0.000 description 1
- IKGXIBQEEMLURG-NVPNHPEKSA-N rutin Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 IKGXIBQEEMLURG-NVPNHPEKSA-N 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000273 spinal nerve root Anatomy 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 108700022380 synthetic erythropoiesis Proteins 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
- A61K9/0073—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy
- A61K9/0078—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy for inhalation via a nebulizer such as a jet nebulizer, ultrasonic nebulizer, e.g. in the form of aqueous drug solutions or dispersions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/39—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0008—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4713—Autoimmune diseases, e.g. Insulin-dependent diabetes mellitus, multiple sclerosis, rheumathoid arthritis, systemic lupus erythematosus; Autoantigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
- A61K2039/541—Mucosal route
- A61K2039/543—Mucosal route intranasal
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Rehabilitation Therapy (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Otolaryngology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
Az autoimmun betegségek mindkét kategóriájának kezelése jelenleg abból áll, hogy olyan gyógyszereket adnak be a betegeknek, amelyek a specifikusan elnyomják az immunválaszt. Ilyen gyógyszer például a metotrexát, ciklofoszfamid, Imuran (azathioprin) és a ciklosporin A. Szteroid vegyületeket is használnak számos esetben, például prednizont, metil-prednizolont. Ezeknek a vegyületeknek korlátozott a hatékonyságuk, mind a sejtek, mind az antitest által közvetített autoimmun megbetegedésekben. Az ilyen gyógyszerek alkalmazhatósága korlátozott a toxikus mellékhatásaik miatt, valamint azért is, mert „globális” immunszuppressziót okoznak azokban a betegekben, akiket hosszú ideig kezelnek a vegyülettel, azaz a patogén mikroorganizmusok elleni normális védekező immunválaszt elfojtják, ezzel megnövelik az ezekkel a mikroorganizmusokkal való fertó'zó'dés veszélyét. További hátrány, hogy megnő a rosszindulatú daganat kifejlődésének veszélye azokban a betegekben, akik hosszú ideig állnak globális immunszuppresszió alatt.
Más kezeléseket is javasoltak az autoimmun megbetegedések kezelésére. Az 1987. június 24-én benyújtott 65 794 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben (visszavonva), valamint az ezzel összefüggésben levő, 1988. június 24-én benyújtott nemzetközi szabadalmi bejelentésben (PCT/USBB/02 139) leírják, hogy a myelin bázikus fehérje (MBP), illetve ennek betegség-indukáló fragmentjeinek vagy analógjainak viszonylag nagy mennyiségben, orális vagy enterális úton való beadása hatékonyan elnyomja az akut monofázisos kísérleti allergiás enkafalomielitiszt (EAE), egy indukált Tsejtek által közvetített autoimmun betegséget, amely a myelin bázikus fehérjéje ellen irányul. Az EAE egy ismert, és széles körben alkalmazott állati modellje a szklerózis multiplexnek (MS). Az előzőkben említett bejelentésekben azt is leírják, hogy a Mycobacterium tuberculosis szájon át, vagy enterálisan való adagolása egy hatásos kezelés az adjuváns artritisz elnyomására, és extrapolálják az említett eredményeket más autoimmun betegségek kezelésére is.
Az 1989. július 14-én benyújtott 379 778 sorszámú, függő amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben (a nemzetközi közzétételi száma: WO 91/01 333) leírják az S-antigén orális vagy enterális adagolását az autoimmun uveoretinitisz kezelésében.
Különböző' módszereket alkalmaztak az EAE antigén-specifikus szuppressziójának indukálására, például az inkomplett Freund-féle adjuvánsban emulgeált MBP-vel való immunizálást [Lando, Z. és munkatársai, J. P. Immunoi. 126 1526 (1981)], vagy a limfoid sejtekhez kapcsolt MBP intravénás injektálását [Sriram és munkatársai, Cell. Immunoi 75, 378 (1983)].
Traugott és munkatársai [J. Neurol. Sci., 55, 65-73 (1982)], valamint Raine és munkatársai [Láb. Investigation, 48, 275-284 (1983)] azt közük, hogy egy krónikus visszaeső EAE-ben szenvedő tengerimalac törzsnek csak MBP-vel, vagy inkomplett Freund-féle adjuvánsban (IFA) szuszpendált MBP-vel való parenteráüs kezelése, illetve egy galaktocerebroziddal, egy hapténnel vagy lipiddel kombinált MBP-vel való kezelése elnyomta az EAE klinikai szimptómáit.
Egy angolnyelvű kivonat szerint Belik és munkatársai [Vopr. Mev. Khin., 24, 372-377 (1978)] leírják az „alkaükus melin fehérje fragment (AMPF)” és a „szintetikus enkefalitogenikus peptid (SEP)” adagolását EAE-ben szenvedő tengerimalacoknak. Az állatokat szarvasmarha AMFF-fel vagy szintetikus SEP-pel érzékenyítették, de felgyógyultak az AMPF adagolást követően.
Braley-Mullen és munkatársai, [Cell. Immun., 51, 408 (1980)] leírják a kísérleti autoimmun tiroiditisz elnyomását tengerimalacokban, tiroglobulin antigén IFA-ban való adagolásával.
Nagler-Anderson és munkatársai [Proceedings of the National Academy of Sciences, USA, 83, 74437446 (1986)], leírják a kollagén szájon át való beadását, hogy egér modellen elnyomja a kollagénnel indukált artritiszt. A ΙΙ-es típusú kollagénnel indukált artritiszt egérben úgy nyomták el, hogy oldható, nem denaturált ΙΙ-es típusú kollagént adtak intragasztrikus úton az állatnak, mielőtt immunizálták volna egy adjuvánsban levő ΙΙ-es típusú kollagénnel. A Nagler-Anderson antigént nem adták aeroszol formájában.
Más kutatók vizsgálták az aeroszol formájú fehérje hatásait a genetikai betegségek kezelésére és az IgE válasz befolyásolására emlősökben.
Hubbard R. C. és munkatársai [Proceedings of the National Academy of Sciences, USA, 86, 680-684 (1989)] igazolták, hogy a fehérje beadható emlősöknek aeroszol formájában. Hubbard és munkatársai leírták egy viszonylag nagy fehérje, az alfa-l-antitripszin (AAt) adagolását a tüdő epiteliális felületén keresztül az alfa-l-antitripszin hiány, egy öröklődő genetikai betegség kezelése során. Az AAt-t, egy 45 000 Dalton molekulasúlyú egyláncú polipeptidet (amely a neutrofil elasztáz inhibitoraként működik) adták be birkáknak aeroszol formájában. Az aeroszolizált AAt teljesen működőképes és érintetlen maradt annak az emlősnek a szöveteiben, amelyiknek beadták, és keresztül diffundált az alveoláris epitéüumon, amit az AAt-nak a tüdőben, nyirokban és a vérben való előfordulásával lehetett igazolni.
Holt és P. G. és munkatársai [Immunoi, 42, 409417 (1981)] leírják a specifikus IgE válaszok gátlását egerekben, az inhalált antigénekre adott válaszként. Az egerek hetenkénti aeroszolizált ovalbuminnal való kezelése hét héten át okozta az IgE válaszok elnyomását, amikor ezeket az állatokat intraperitoneálisan oldható alum-kicsapott ovalbuminnal kezelték.
Sedgwick J. D. és munkatársai [Immunoi, 56, 635642 (1985)] közölték a specifikus IgE válasz leszabályozását egy inhalált antigén hatására. A patkányok ismételt kezelése egy ovalbumin aeroszollal hordozóspecifikus toleranciát indukált, ha ugyanazzal az antigénnel később ingerelték.
Holt E. G. és munkatársai [Immunoi, 60, 97-102 (1987)] írják le, hogy alacsony szintű ovalbumin ismételt inhalációja egerekkel vagy patkányokkal előnyösen indukálta az IgE antitest osztállyal szembeni tole2
HU 210 715 A9 ranciát, és feltételezték, hogy ez a folyamat egy fontos védekező mechanizmus, amely normális körülmények között megakadályozza, hogy egy emlős allergiásán érzékeny legyen levegőben terjedő antigénekre.
Sedgwick J. D. és munkatársai [Cell Immunok, 94.
182-194 (1985)] leírják, hogy ha erős IgE válasszal rendelkező patkányokat ismételten hetente egyszer egy antigén aeroszol hatásának tesznek ki, akkor ez progresszíven növekvő mennyiségű antigén-specifikus IgG-t eredményez a szérumban. Ha szplenocitákat adaptív transzfernek vetünk alá aeroszollal kezelt állatokból érintetlen patkányokba, akkor ez az IgE válaszok elnyomását okozza anélkül, hogy a specifikus IgG válaszokat érintené.
Ezekben a leírásokban nem javasolnak vagy írnak le technikákat az autoimmun betegségek kezelésére vagy megelőzésére. A jelen találmány egyik tárgya módszer autoimmun betegségekben szenvedő emlősök kezelésére.
A jelen találmány tárgyai továbbá gyógyászati készítmények autoimmun betegségekben szenvedő emlősök kezelésére.
A találmány tárgya továbbá készítmény emlősöknek való beadás céljából, hogy az ilyen emlősökben megelőzzük vagy kezeljük az autoimmun betegségeket.
A jelen találmánynak ezek és egyéb tárgyai a szakterületen jártas szakember számára érthetőek, a leírás, a rajzok és az igénypontok alapján.
Az ábrák rövid ismertetése: Az
1. ábra egy grafikon, amely az orálisan beadott
MBP különböző koncentrációinak betegségelnyomó hatását mutatja az EAE lefolyása és súlyossága függvényében; a
2. ábra egy grafikon, amely az aeroszol formában beadott MBP különböző koncentrációinak betegség-elnyomó hatását mutatja az EAE lefolyása és súlyossága függvényében;
3(A-D) ábra egy grafikon sorozat, amelyeken közvetlenül összehasonlítjuk a GP-MBP különböző dózisainak hatását, ha orálisan vagy aeroszol formában adjuk be, az EAE lefolyása és súlyossága függvényében; a
4. ábra egy grafikon, amely a GP-MB fragmentek hatásait mutatja az EAE lefolyása és súlyossága függvényében; az
5. ábra egy grafikon, amely az állatok kezelését mutatja az EAE indukciója után; a
6. ábra egy grafikon, amely a különböző aeroszol formában beadott fehérjék hatását mutatja az EAE-re; a
7. ábra egy grafikon, amely az aeroszol formába vitt kollagén hatásait mutatja a kollagénnel indukált artritisz lefolyása és súlyossága függvényében; a
8. ábra egy grafikon, amely az EAE elleni immunitás átvitelét mutatja a befogadó állatokba, a találmány szerinti módszerrel kezelt állatokból izolált lépsejteket használva erre a célra.
A találmány összefoglalása
Felismertük, hogy az emlősökben kifejlődő autoimmun megbetegedések megelőzésének vagy kezelésének egy javított és sokkal hatékonyabb módszere abban áll, hogy egy vagy több, a megelőzendő vagy kezelendő autoimmun betegségre specifikus autoantigén aeroszol formájával kezeljük őket.
A jelen találmány eljárást ad egy autoimmun betegség kezelésére vagy megelőzésére emlősökben, amely abban áll, hogy az emlősöknek egy aeroszol készítmény hatásos mennyiségét adjuk be, amelyben legalább egy olyan autoimmun szuppresszív anyag található, amelyet az adott autoimmun betegségre specifikus autoantigének, illetve az ilyen autoantigéneknek autoimmun szuppresszív fragmentuma vagy analógjai közül választunk.
A találmány további tárgyát emlősök autoimmun betegségeinek kezelésére alkalmas aeroszol dózisformák képesek. A kiszerelt dózisok legalább egy olyan autoimmun szuppresszív anyagot tartalmaznak, melyet az adott autoimmun betegségre specifikus autoantigének illetve az ilyen autoantigéneknek egy autoimmun szuppresszív fragmentje vagy analógjai közül választunk.
A találmány részletes leírása
Az összes idézett szabadalmi bejelentés, szabadalmi leírás és közlemény teljes terjedelmében, utalás formájában a leírás részét képezi.
Felismertük, hogy az autoantigének (vagy ezeknek autoimmun szuppresszív fragmentjeinek vagy analógjainak) adagolása aeroszol formában hatékony az emlősök autoimmun betegségeinek kezelésében. Egy különösen meglepő és váratlan fejlemény annak felfedezése, hogy az autoantigének adagolása aeroszol formában hatékonyabb az emlősök autoimmun betegségeinek megelőzésében és kezelésében, mint ugyanennek az autoantigénnek az adagolása szilárd formában, szájon át. Az a felfedezés is meglepő hogy, a szilárd adagolási formákhoz viszonyítva az aeroszol formák esetében az autoimmun betegségek hatékony elnyomása és megelőzése emlősökben az ilyen autoantigének kisebb mennyiségével érhető el. Az autoantigének aeroszol formában való adagolásáról kiderült, hogy hatékonyan elnyomja mind a sejtek által közvetített, mind az antitest által közvetített autoimmun választ.
A jelen találmány szerinti módszerrel kezelhető vagy megelőzhető autoimmun betegségekre példa lehet (de nem korlátozó jellegű) a szklerózis multiplex, reumatoid artritisz, miaszténia gravisz, autoimmun tiroiditisz, cukorbetegség (főleg a gyerekkori cukorbetegség), az autoimmun uveoretinitisz, szisztémás lupos erythematosus (SLE vagy Lupus), adrenalitisz és a krónikus aktív hepatitisz.
A továbbiakban az „aeroszol” szakkifejezés olyan finoman eloszlatott szilárd vagy folyékony részecskékre utal, amelyeket egy nyomás alatt álló rendszerrel, például egy porlasztó berendezéssel lehet előállítani. A folyadék vagy szilárd vivőanyag autoantigéneket és/vagy ezek autoimmun betegségeket elnyomó fragmentjeit valamint analógjait tartalmazza, a fenti meghatározás szerint.
HU 210 715 A9
Egy autoimmun betegség az emlős, beleértve az embert is, immunrendszerének hibás működése. Egy ilyen betegséggel sújtott emlősben az immunrendszer nem tudja megkülönböztetni, vagy nem különbözteti meg az exogén (idegen) anyagokat az emlős autológ szövetétől vagy anyagaitól. Ennek eredménye, hogy az immunrendszer az autológ szöveteket (saját antigéneket) és anyagokat úgy kezeli, mint ha idegenek lennének, és aktiválja a proliferatív immun védelmet, amely általában az exogén (idegen) szövetek vagy behatoló mikroorganizmusok elleni védelmet szolgálja. Lényegében a normál immunrendszer egyik ága megváltozik, és proliferatív válaszba kezd az autológ szövetek ellen. Amint az alábbiakban használjuk, az „emlős” szakkifejezés minden olyan életformára vonatkozik, amely immun-szabályozó rendszerrel rendelkezik, és ennélfogva érzékeny az autoimmun betegségekre.
A továbbiakban az „autoantigén” szakkifejezés bármely egy emlősben normál körülmények között megtalálható anyagra vonatkozik, amelyet (1) az emlős limfocitái vagy antitestjei nem az emlős részeként ismernek fel (2) az emlős immun-szabályozó rendszere úgy támad meg, mint ha az ilyen antigén egy idegen anyag lenne, és (3) úgy hat, hogy elfojtja az immunrendszernek azt a részét, amely felelős a specifikus autoimmun betegség kifejlődéséért. Az autoantigén szakkifejezés olyan antigén anyagokra is vonatkozik, amelyeket ha emlősöknek beadnak, akkor egy autoimmun betegség szimptómáinak megfelelő állapotokat indukálnak.
A továbbiakban az „autoimmun szupresszív fragmentek” szakkifejezés bármely olyan peptidre vagy polipeptidre vonatkozik, amely autoantigének részleges aminosav szekvenciáját vagy egyes egységeit tartalmazza, és megvan az a képessége, hogy elnyomjon vagy megelőzzön egy autoimmun választ aeroszol formában történő adagolásakor. Az ilyen antigének nem kell hogy a teljes autoantigén tulajdonságait hordozzák. Például, ha MBP-t adnak parenterálisan emlősöknek egy adjuváns jelenlétében, akkor az EAE-t indukál érzékeny emlősökben. Felismertük, hogy a MBP bizonyos nem betegségokozó fragmentjei (azaz a MBP-nek azok a fragmentjei, amelyek nem indukálnak EAE-t ha parenterálisan adják be egy adjuvánssal) mégis fejtenek ki autoimmun szuppresszív aktivitást, ha orálisan vagy enterálisan vagy aeroszol formában adják be az EAE-től szenvedő emlősöknek. Az ilyen fragmentekre példát említenek a 65 734 sorszámú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben, valamint az annak megfelelő PCT/U588/02 139 számú nemzetközi szabadalmi bejelentésben, és az alábbi 2. illetve 6. példában.
A továbbiakban az ilyen autoantigének vagy fragmentek „analógja” szakkifejezés olyan vegyületekre vonatkozik, amelyek szerkezetileg rokonok ezekkel az autoantigénekkel illetve ezek autoimmun-szuppresszív fragmentjeivel, és amelyek ugyanazzal a biológiai aktivitással rendelkeznek, azaz képesek eliminálni vagy elnyomni az autoimmun választ az aeroszol formában történő adagolást követően. Egy példa szerint, amely nem korlátozó jellegű, a szakkifejezés olyan peptidekre vonatkozik, amelyeknek aminosav szekvenciája az autoantigén, illetve annak betegségokozó fragmentje aminosav szekvenciájától egy vagy több aminosavcsoportban különbözik (miközben megtartja az autoantigén vagy fragmentje autoimmun-szuppresszív hatását), valamint olyan vegyületekre vagy készítményekre vonatkozik, amelyek utánozzák az autoantigén autoimmun-szuppresszív aktivitását, amennyiben elnyomják, vagy enyhítik a betegség tüneteit. Egy ilyen példa lehet egy szövet egy szervből, amely egy autoimmun betegségben az immunrendszer egyik ága támadásának a célpontja, azaz például a hasnyálmirigy a cukorbetegségben, illetve a központi idegrendszer fehér anyaga a szklerózis multiplexben. Egy másik példa az analógra az S79 peptid (1987. június 24-én bejelentett 65 734 sorszámú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés).
Ahogy azt a továbbiakban használjuk, az „autoimmunbetegséget elnyomó hatóanyag” szakkifejezés olyan vegyületre vagy készítményre vonatkozik, amelyet aeroszol formában lehet beadni egy emlősnek, hogy egy specifikus autoimmun megbetegedést elnyomjunk, megelőzzük, illetve késleltessük a klinikai megjelenését. A szakkifejezés olyan autoantigénekre is vonatkozik, amelyek egy specifikus autoimmun betegség ellen aktívak, illetve ezeknek az autóimmun-szuppresszív fragmentjeire vagy analógjaira is, a fenti definíció szerint.
A továbbiakban a „kezelés” szakkifejezés vagy megelőző adagolásra vonatkozik, amelynek célja egy autoimmun megbetegedés megelőzése egy arra érzékeny egyedben, vagy egy aktív autoimmun megbetegedés kezelése egy érintett egyedben.
Ez a jelen találmány szerinti autoimmun-szuppresszív anyagokkal indukált tolerancia dózisfüggő; az aeroszol anyag széles dózistartományában az találtuk, hogy a megbetegedés (EAE) megjelenésének elnyomása (vagy legyengítése) nő, ha az aeroszolizált autoimmun-szuppresszív anyagból növekvő dózist alkalmazunk, amint az a 2-9. példákból az alábbiakban látszani fog. A dózisfüggés az artritisz rendszerben is látható. Emellett egy irreleváns antigén (azaz olyan, amelynek nincs szerepe az autoimmun megbetegedésben, például hisztin fehérje, vagy az MBP bizonyos szintetikus fragmentjei) aeroszol formájában való adagolása nincs hatással az autoimmun megbetegedés klinikai manifesztációjára.
Az autoantigének adagolásának és az aeroszol útnak számos előnye van az autoimmun megbetegedések kezelésében a többi adagolási formával szemben. Az adagolás egyszerűsége az egyik fontos előny. Emellett, amint az a 2. példában látható lesz, az MBP aeroszol formában való adagolása sokkal alacsonyabb dózisban hatékony az EAE kezelésében, mint azok a dózisok, amelyek akkor kellenek, ha ugyanazt a hatóanyagot szájon át adjuk be szilárd dózisformában. Egy további előny, hogy az aeroszolos adagolási mód kevéssé teszi ki a jelen találmány szerinti autoimmunogén anyagokat
HU 210 715 A9 a lebontó emésztó'nedvek hatásának, amelyek az ilyen anyagok hatékonyságának csökkenését okozhatják.
Meg kell jegyeznünk, hogy a jelen találmány szerinti autoimmun-szuppresszív hatóanyag mennyisége, amit a kezelt állat az aeroszol adagolási úton megkap, lényegesen kisebb, mint a hatóanyag összes beadott mennyisége. Úgy véljük, hogy a porlasztóban jelenlevő' teljes dózisnak csak az 1/200 része kerül be a kezelt állat tüdó'felületére. A ketrecekbe porlasztott autoimmun-szuppresszív hatóanyag legnagyobb részét az állatok nem lélegzik be, hanem az a specifikusan a ketrecekre és az állatokra tapad. Tehát az aeroszol formában történő' adagolás sokkal hatékonyabb, mint az orális vagy enterális adagolás, mivel az utóbbi esetekben az összes autoimmun-szuppresszív anyag bejut a kezelt állatokba.
Különböző' modellrendszereket dolgoztak ki az autoimmun megbetegedések tanulmányozására. A kísérleti allergiás enkefalomielitisz (EAE) egy indukált, Tsejtek által közvetített autoimmun megbetegedés, amit egerekben és más emló'sállatokban tanulmányoztak, mint a szklerózis multiplex (MS) modelljét számos emló's fajban. A betegséget MBP és egy adjuváns (például Freund-féle komplett adjuváns) parenterális adagolásával indukálják. Ez a kezelés a demielinezó' betegségnek mind a monofázisos, mind a súlyos/remittáló formáját indukálja (a fajtól és az adagolás részleteitől függően). Az indukált megbetegedés az MB jellemzőivel rendelkezik. A Mycobacterium tuberculosis Freund-féle komplett adjuváns olajjal való parenterális adagolása az érzékeny emlősök hátoldali farok gyökébe a humán reumatoid artritisz jellemzőivel rendelkező megbetegedést indukál. Emellett, az S-antigén és egy adjuváns adagolása Lewis patkányoknak autoimmun uveoretinitiszt indukál. A diabétesz spontán kifejlődik a NŐD egerekben és a BB patkányokban. Ezeknek a különböző tagjait alkalmaztuk a jelen találmány szerinti javított kezelési mód hatékonyságának demonstrálására.
A jelen találmány alkalmazható számos különböző autoimmun megbetegedés kezelésében, mind az antitest-, mind a sejtek által közvetített megbetegedéseknél. Amint azt az alábbiakban, a 6. és 7. példákban bemutatjuk, az autoantigén (tengerimalac MBP) és ennek betegséget elnyomó fragmentjének aeroszol formában történő adagolása mind a sejtek (például a késleltetett típusú hiperszenzitivitási reakciók), mind az antitest által közvetített immunválaszok elnyomását okozza. Emellett, amint az a 3. példában bemutatott adatokból látható, ezt az elnyomást aktívan befolyásolják a lépsejtek, ebben a jelenségben aktív celluláris szuppresszió szerepét feltételezve. Ennélfogva, csakúgy mint az autoantigének orális adagolásával végrehajtott immunszuppresszió esetében [a 65 734 sorszámú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben és a függő PCT/U588/02 139 nemzetközi szabadalmi bejelentésben szerepel a leírása), az autoantigének aeroszol formában történő adagolásáról úgy véljük, hogy legalábbis részben úgy hat, hogy közvetíti a szuppresszor T-sejtek aktivitását. A sejtek által közvetített autoimmun példaként az alábbiakat említjük meg, a megbetegedésekre korlátozás szándéka nélkül: szklerózis multiplex, reumatoid artritisz, autoimmun uveoretinitisz, cukorbetegség és autoimmun tiroiditisz. Az antitestek által közvetített autoimmun betegségek közé tartozik például a miaszténia gravisz, szisztémás lupus erythematosus (SLE), pemphigus és a trombózisos trombocitopéniás purpuria. Ezeknek a betegség-modelleknek egy nem-korlátozó listáját, és az ezeknek a betegségeknek a kezelésében aeroszol formában adagolva hatásosnak bizonyult specifikus autoantigéneket az alábbi, 1. táblázatban adjuk meg.
1. táblázat
| Betegség modell | Specifikus anügén |
| Szklerózis multiplex | MBP |
| Reumatoid artritisz | Kollagén |
| Autoimmun tiroditisz | Tiroglobulin |
| Miaszténia gravisz | Acetilkolin receptor |
| Autoimmun uveoretinitisz | S-antigén |
| Szisztémás lupus erythematosus | DNS |
| Cukorbetegség | Szigetsejt kivonat |
| Krónikus aktív hepatitisz | Májkivonat |
| Adrenalitisz | Mellékvese mirigykivonat |
| Polimiozitisz | Izomkivonat |
| Autoimmun hemolitikus anémia | Hematopoietikus sejtek |
| Reumás szívizomgyulladás | Szívkivonat |
| Scleroderma | Bőrsejt kivonat |
Bármely autoimmun betegségnél szövetkivonatok, valamint az előzőekben leírt specifikus antigének használhatók.
Más autoimmun betegségeket és specifikus autoantigénjeiket és/vagy cél-szöveteiket Schwartz R. S. és munkatársai közlik [Fundamental Immunology, II. kiadás, Paul W. E., szerk., 819-859. old. Raven Press, NY (1989)].
A jelen találmányban alkalmazott autoantigéneket abból a szövetből lehet izolálni, amely az adott autoimmun megbetegedés célpontja. Például az MS kezelésében használt mielin bázikus fehérjét (MBP) Diebler és munkatársai módszerével izolálhatjuk emlősökből, lásd az alább következő 1. példát.
Ha egy reumatoid artritisz szimptómákat mutató betegséget kezelünk, akkor a kollagént Trentham és munkatársai módszerével izolálhatjuk és tisztíthatjuk [J. Exp. Med., 146, 857 (1977)].
Az autoimmun uveroretinitisz kezelésénél a tisztított S-antigént a 379 778 sorszámú, függő szabadalmi bejelentésben leírtak szerint állíthatjuk elő.
A miszténia gravisz kezeléséhez a tisztított acetilkolin receptort Mc Intosh és munkatársai módszerével állíthatjuk elő [J. Neuroimmunol., 25, 75 (1989)].
A jelen találmányban használt autoantigén fragmenteket és analógokat a szakterületen jól ismert szilárd fázisú szintézis-technikával lehet előállítani, ilyen
HU 210 715 A9 például a Merrifield, R. B. valamint a Mitchell, A. R. és munkatársai [Fed. Proc. Am. Soc. Ex. Biok, 21, 412 (1962) és J. Am. Chem. Soc. 85, 2149 (1963)] és a Tam, J. és munkatársai [J. Am. Chem. Soc., 98, 7357 (1976)] által ismertetett módszer. Analógokat úgy lehet előállítani, hogy azonosítunk egy ekvivalens aminosav szekvenciát és az előzőkben említett peptid-szintézis technikát alkalmazzuk.
Az analógokat a GP-MBP ismert aminosav szekvenciájának felhasználásával [Hashim, G. in Meylin: Chemistry and Biology, Alán R. Lisa, NY (1980)], Eyler és munkatársai által közölt technika [Advances in Experimental Medicine and Biology, 98, 259-281 (1978)] alkalmazásával állíthatjuk elő. Például, egy peptidet, amelynek az aminosav szekvenciája a GPMBP 72-85-ös aminosav szekvenciának felel meg [Hashim, G. in Meylin: Chemistry and Biology, Alán R.Lisa, NY (1980)], kémiai úton állíthatunk elő, az előzőkben ismertetett technikák alkalmazásával, és a terminális aszparagint glutaminra cseréljük le. A pepiidnek vizsgálhatjuk a betegséget elnyomó hatását aeroszol formában adagolva, a 2. példában ismertetett technikák alkalmazásával.
A betegséget elnyomó analógokat és fragmenteket a szakterületen jól ismert rekombináns DNS technikák alkalmazásával is megkaphatjuk.
A jelen találmány tárgyai továbbá aeroszol formájú gyógyászati készítmények és dózisformák az autoimmun betegségektől szenvedő emlősök kezelésében való alkalmazásra. Általában az ilyen dózisformák egy vagy több elnyomó hatóanyagot tartalmaznak, amelyeket az autoimmun betegség elleni antigénekbóT, és az ilyen autoantigének betegség-elnyomó fragmentjeiből és analógjaiból álló csoportból választhatunk, olyan mennyiségben, amely hatásos a specifikus autoimmun megbetegedés klinikai szimptómáinak kezelésében. Bármely statisztikailag jelentős enyhítése egy autoimmun betegség egy vagy több szimptómájának a jelen találmány szerinti módszerrel való kezelése következtében, a betegségnek a találmány oltalmi körébe tartozó kezelésének tekintendő.
Az nyilvánvaló, hogy az adott dózisformának egy adott aeroszol dózisában levő hatóanyagtartalom önmagában nem kell, hogy az adott autoimmun megbetegedés kezelésében hatásos mennyiség legyen, mivel a szükséges szintet több dózis beadásával is elérhetjük.
A jelen találmány szerinti gyógyászati készítmények tartalmazhatnak opcionális adalékanyagként gyógyászatilag elfogadható hordozókat, hígítóanyagokat, oldhatóságot vagy emulgeálhatóságot elősegítő anyagokat, és sókat, a szakterületen jól ismert típusú anyagokat. Az ilyen anyagokra példa lehet a normál sóoldat, azaz a fiziológiásán puffereit sóoldat és a víz.
A jelen találmány szerinti szuppresszív anyagok adagolásának módja az aeroszol vagy az inhalált forma. A jelen találmány szerinti szuppresszív hatóanyagokat beadhatjuk száraz por formában, illetve vizes oldatban. Az előnyös aeroszol gyógyászati készítmények tartalmazhatnak például egy fiziológiásán elfogadható puffereit sóoldatot, amely 0,15-300 mg-ot tartalmaz a jelen találmány szerinti immunszuppresszív anyagokból, amelyek specifikusak a kezelendő autoimmun megbetegedésre.
A száraz aeroszol, finoman eloszlatott szilárd autoantigén részecskék formájában, amelyek nincsenek feloldva vagy szuszpendálva valamilyen folyadékban, szintén hasznos a jelen találmány szerinti gyakorlatban. Az autoantigén lehet finom por formájú, és olyan finoman eloszlatott részecskéket tartalmaz, amelyek átlagos mérete 1 és 5 μιη között, előnyösen 2 és 3 μιη között van. A finoman elporított autoantigén részecskéket porítással és szitálással lehet előállítani, a szakterületen ismert módszerekkel. A részecskéket úgy lehet adagolni, hogy a finoman eloszlatott anyagból egy előre meghatározott mennyiséget inhaláltatunk be, ami lehet por formájú.
A jelen találmány szerinti gyógyászati készítményekben használható hordozókra és/vagy hígítóanyagokra specifikus, nem korlátozó példa lehet a víz és a fiziológiásán elfogadható puffereit sóoldatok, azaz például a foszfáttal puffereit sóoldatok (pH = 7,0-8,0).
Általában az autoantigént, fragmentjét vagy analógját egy emlősnek aeroszol formában adjuk be, olyan mennyiségben, ami megfelel 0,1 mg/testsúly-kilogramm és 15 mg/testsúlykilogramm közötti napi értéknek az adott emlősnél, és a beadás történhet egyetlen dózis formájában illetve többszörös dózis formájában. Az autoantigént, annak fragmentjét vagy analógját előnyösen olyan mennyiségben alkalmazzuk, ami megfelel az adott emlős esetében 1 és 10 mg/testsúly-kilogramm közötti napi értéknek. Az egy betegnek beadott mennyiség pontos értéke változik, és a páciens betegségének állapotától és súlyosságától, valamint a beteg fizikai állapotától függ.
A jelen találmány szerinti gyógyászati készítményeket beadhatjuk aeroszol permet formájában, olyan porlasztót használva például, amilyet az 1986. november 25-én kibocsátott 4 624 251 számú, az 1972. november 21-én kibocsátott 3 703 173 számú, az 1971. február 9-én kibocsátott 3 561 444 számú, és az 1971. január 13-án kibocsátott 4 635 627 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban közölnek.
Az aeroszol anyagot a kezelendő alany inhalálja. A jelenpéldákban (a pontosság érdekében) az aeroszollal kezelt állatokat zárt (légmentesen zárt) ketrecekben tartottuk, amelyekbe bejuttattuk az aeroszolt. Ezáltal az egységnyi területre jutó anyag mennyisége meghatározható, és az eredmények számszerúsíthetó'k az aeroszol anyag egység/kehec térfogategység formájában.
Az aeroszol bejuttatására más rendszerek, így például a nyomás alá helyezett mért dózisú inhalátor (MDI), és a száraz por inhalátor [Newman S. P. és munkatársai, in Aerosols and the Lung Clarké S. W. and Davia D. eds., 197-224, Butterworths, London, Anglia (1984)] is használhatók, ha a jelen találmányt alkalmazzuk.
Az itt ismertetett aeroszol bejuttató rendszerek számos kereskedelmi forrásból beszerelhetők, ilyen például a Fisons Corporation (Bedford, MA), a Schering Corporation (Kenilworth, NJ), és az American Pharmaseal Co. (Valencia, CA).
HU 210 715 A9
Az alábbiakban ismertetett példák azt illusztrálják, hogy az MBP és a ΙΙ-es típusú kollagén aeroszol formájában való beadása hatékony az EAE és a kollagénnel indukált artritisz klinikai tüneteinek elnyomásában, dózisfüggő módon, széles dózistartományban. Az MBP adagolása aeroszol (folyadék) formában hatékony volt az EAE elnyomásában, ha a betegség indukálása előtt vagy után adtuk be, és a kezelés eredménye a betegség tünetei megjelenésének késése és a betegség súlyosságának csökkenése volt a kezelt állatokban. Mind a specifikus antitest, mind a sejt által közvetített (például a késleltetett hiperszenzivitás) reakciókat el lehetett fojtani a specifikus autoantigének illetve azok betegség-elnyomó fragmentjeinek aeroszol formában való adagolásával. Ezekben a példákban az autoantigén aeroszol formában való beadásával indukált specifikus immunszuppressziót befolyásolni lehetett lépsejtekkel, míg a kezelt állatok csecsemőmirigyéből indukált sejtekkel nem. Ezek a lépsejtek képesek voltak arra, hogy az EAE elleni védelmet aktívan átvigyék az érintetlen befogadókra. Emellett még a szarvasmarha mielinről is kiderült, hogy hatékonyan elnyomja az EAE-t, csak úgy mint a tengerimalac MBP, bár az utóbbi sokkal hatékonyabb betegségelnyomó anyag olyan patkányokban, amelyeket GP-MBP-vel immunizáltunk az EAE indukálására. Végezetül, az aeroszollal kezelt állatok hisztológiai vizsgálata megmutatta, hogy hiányoztak azok a sejtek, amelyek aktívan beszűrődnek a jelen találmány szerint kezelt állatok agyába. Tehát, egy autoimmun betegségtől szenvedő állatnak autóantigént aeroszol formájában beadva kimutatható, hogy a betegség klinikai tünetei megváltoznak, és megelőzzük azt, hogy a sejtek a kezelt állat agyába vándoroljanak. Ez utóbbiról az a vélemény, hogy ez a demielinizáció lehetséges mechanizmusa, ami a EAE szimptómáit okozza.
A találmány további részleteit az alábbiakban a példákban adjuk meg.
1. példa
A találmány szerinti módszer alkalmazása során használt autoantigéneket az alábbiakban ismertetett módszerekkel és technikákkal kaptuk.
A GP-MBP-t Diebler G. E. és munkatársai módszerével tisztítottuk [Prep. Biochem., 2, 139 (1972)] tengerimalac agyszövetéből és a Pel Freeze-től kaptunk (Rogers, Arkansas). Röviden, a központi idegrendszerből származó szövetet izoláltuk és egy kloroform-metanol oldatban homogenizáltuk, acetonnal extraháltuk, szűrtük, majd ugyanebben az oldatban reszuszpendáltuk. Az oldatot acetonnal extraháltuk, szűrtük, vízben szuszpendáltuk, pH-ját 3,0-ra állítottuk és 1 óra hosszat inkubáltuk. Az oldatot ezután centrifugáltuk és 8 mólos karbamiddal extraháltuk, CM-5-öt adtunk hozzá, a pH-t 1-re állítottuk, az oldatot szűrtük és kétszer reszuszpendáltuk karbamidban. Az oldatot ismét szűrtük, kétszer szuszpendáltuk vízben, szűrtük, 0,121 normál sósavban reszuszpendáltuk; szűrtük, 10 térfogat desztillált vízzel szemben dializáltuk és felhasználás előtt liofileztük.
Az alábbi példákban alkalmazott ΙΙ-es típusú kollagént a Genzym-től vásároltuk (Boston, MA).
2. példa
Az alábbiakban ismertetett kísérletben 6-8 hetes Lewis patkányokat alkalmaztunk (Charles River, Wilmington, MA), amelyekben az EAE-t a 0-ik napon inkubáltuk oly módon, hogy a talpukba Freund-féle komplett adjuvánsban 10 mikrogramm tengerimalac mielin bázikus fehérjét (GP-MBP) injektáltunk, amelyet az előző példa szerint tisztítottunk, [J. Immunok, 140, 440 (1988)]. Apatkányokat az alábbiakban ismertetett módszerekkel kezeltük a GP-MBP különböző dózisaival, amelyeknek koncentrációja 0,005 milligramm és 5 milligramm között változott, a kezelés pedig orálisan illetve aeroszol permet formájában történt.
Az orális és az aeroszolizált GB-MBP-t ugyanabban a dózisban, ugyanazon a napon adtuk a patkányoknak, amelyekből ötös csoportokat képeztünk.
Az aeroszol GP-MBP-t foszfáttal puffereit sóoldatban (PBS, pH = 7,4) adtuk be, porlasztó alkalmazásával. Az aeroszolt a vizsgálati állatoknak az állatokat tartó ketrec oldalán vágott lyukon keresztül juttattuk be a vizsgálati állatokba. Az aeroszolizáláshoz egy porlasztót (American Pharmoseal Co., Valencia, CA, Catalog NO. 002 038) csatlakoztatunk egy nagynyomású vezetékhez, amely 7,4 liter oxigénnek megfelelő mennyiségét szállít (ezt az oxigénmennyiséget használják kórházakban porlasztásra). A porlasztóban keletkező csöppek átmérője körülbelül 0,3-0,5 mikrométer. 25 mg, Diebler és munkatársai módszerével [Prep. Biochem., 2, 139 (1972)] tisztított GP-MBP-t oldottunk 5 ml PBS-ben. Azután ezt aeroszolizáltuk 10-15 percig ketrecenként 5 patkánynak (a ketrec méretei: 35x30x18 cm, magasság, szélesség illetve mélység). Az aeroszolizálás során gyenge köd keletkezett a ketrecben, és a patkányok szabadon mozogtak. A kezelés menete a következő: Kezelést adunk (mind orális, mind aeroszol formában), a -10, -7, -5, -3, 0, +2 és +4 napon. Az EAE indukálását szolgáló 0 napi immunizáció eredménye egy akut peralitikus megbetegedés, amelynek a szimptómái az immunizálás utáni 12-14. napon jelentkeztek. A kiértékelő rendszer a következő: 0 = normál, 1 = a faroktónus elvesztése; 2 = a hátsó lábak gyengesége; 3 = a hátsó lábak bénulása; 4 = az első lábak gyengesége; 5 = halál. Az EAE súlyossága 2 és 5 között változott, a kísérlettől függően. Az állatokat klinikailag vak módszerrel értékeltük.
Az orális GP-MBP-t a függő PCT/US88/02 139 számú nemzetközi szabadalmi bejelentésben és a 65 734 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben leírtak alapján adtuk be.
Az eredmények az 1. és 2. ábrán láthatók.
Az 1. ábrán szereplő grafikon azt mutatja, hogy a kontroll állatoknál a szimptómák az EAE indukciója után körülbelül 12 nappal kezdtek el megnyilvánulni. A GP-MBP orális adagolása lényege csökkenést okoz a betegség tüneteiben, és késlelteti a tünetek megjelenését az összes vizsgált csoportnál, és a maximális késlel7
HU 210 715 A9 tető hatás akkor jelentkezik, ha állatonként 0,5-5 még GP-MBP-t adunk be.
A 2. ábrán az látható, hogy 0,005-5 mg GP-MBP aeroszol formában való adagolása jelentősen csökkentette az EAE megbetegedés súlyosságát az összes vizsgált állatban. 5 mg GP-MBP adagolása teljesen megvédte az összes állatot, a betegség szimptómáit elnyomva. Az aeroszol adagolás sokkal hatékonyabb mint az orális adagolás, azaz a GP-MBP aeroszol (permet) formában való adagolása alacsonyabb hatásos koncentrációban (dózisszinten) eredményezett enyhébb betegség-tüneteket, mint ha a GP-MBP-t szilárd formában adtuk be az orális úton.
Az egyes dózisok közvetlen összehasonlítása (azaz 0,0005,0,05 és 5 mg/állat), orálisan vagy aeroszol formában adagolva, látható a 3A-D. ábrákon. A kísérleteket pontosan az előzőekben leírtak szerint hajtottuk végre, kísérleti csoportonként 5 állatot alkalmazva. Az eredmények megerősítették, hogy az aeroszolizálás hatékonyabb, mint az orális adagolás, mivel kisebb mennyiségű aeroszolizált GP-MBP-re volt szükség az EAE betegség tüneteinek elnyomására. Ezek az adatok azt mutatják, hogy a hatóanyag adagolásának útja, a tüdőbe belégzés, okozza az 1-3. ábrákon látható hatásokat és nem az esetleg lenyelt anyagnak köszönhető, mivel sokkal nagyobb mennyiségű orálisan beadott GP-MBP-re van szükség ahhoz, hogy ugyanazt a hatást kapjuk, mint az aeroszol formában való adagolásnál.
A GP-MBP különböző fragmentjeinek megvizsgáltuk az EAE-re gyakorolt hatását. Az MBP fragmenteket szilárd fázisú peptid szintézissel állítottuk elő (Biosearch, San Raphael, CA). A 16-35-ös, az 51-70-es és a 121-138-as aminosav csoportoknak megfelelő GPMBP fragmenteket 5-5 állatnak adtuk be, 0,14 mg/állat mennyiségben, az előzőkben leírtak szerint.
Az említett beadott fragmentek közül egyik sem volt enkefalogenikus (azaz, egyik ffagment sem okozott EAE-t, ha egy adjuvánssal együtt parenterálisan adagoltuk). Az adatok a 4. ábrán láthatók.
A 4. ábrán az látható, hogy a GP-MBP 16-35-ös és 51-70-es aminosavainak megfelelő fragmentek hatékonyak voltak az EAE betegség tüneteinek elnyomásában. Egy fragment, amely megfelel a GP-MBP 121138-as aminosavainak, nem rendelkezik az EAE elleni védő hatással a kezelt állatokban, és a kontrollokhoz hasonlított.
Abból a célból, hogy igazoljuk azt, hogy a GPMBP aeroszolizálása hatékony volt az EAE kezelésében, ha az autoimmun megbetegedés indukálása után adtuk be, az állatokat 5 mg GP-MBP/állat mennyiséggel kezeltük, vagy az EAE indukciója előtt 3 nappal, vagy a betegség indukálása után +7, +9 és +11 nappal. Az eredmények az 5. ábrán láthatók.
Az 5. ábra adatai azt mutatják, hogy a GP-MBP aeroszol formában való beadása hatékony szuppresszor hatást fejt ki ha az EAE indukciója előtt 3 nappal, illetve az indukció után +7, +9 és +11 nappal adják be.
Abból a célból, hogy igazoljuk az autoimmun szuppresszív kezelés specifitását, a GP-MBP-t, egy GP-MBP fragmentet (megfelel a GP-MBP 21—40-cs aminosavának), vagy egy hiszton fehérjét (5 mg/állat, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) aeroszolizáltunk olyan patkányoknak, amelyekben korábban indukáltuk az EAE-t. Az eredmények a 6. ábrán láthatók.
A 6. ábra adatai azt mutatják, hogy ha 5 mg GPMBP-t adagoltunk aeroszol formában, akkor az teljesen megvédte a kezelt állatokat az EAE indukciójától. A hiszton fehérje 5 mg mennyiségben nem védett az EAE ellen. A hiszton kontrollként használtuk, mivel ez egy pozitívan töltött fehérje (csakúgy mint az MBP), molekulatömege hasonló az MBP-éhez (18 000 dalton, az MBP 16 000 daltonjához viszonyítva).
Ebben a kísérletben a GP-MBP fragment (21—40) sem adott védelmet. A 6. ábráról az olvasható le, hogy 1 mg orálisan adott GP-MBP megvédte az állatokat az EAE ellen, de nem védte meg őket, ha ugyanezt a mennyiséget aeroszol formában.
3. példa
Az alábbiakban ismertetett adatok egy sorozat in vitro kísérletet képviselnek, amely kísérletek azt illusztrálják, hogy az aeroszolizált GP-MBP-vel kezelt állatokból kinyert lépsejtek aktívan szuppresszálják in vitro a proliferatív válaszokat. Az állatok hat különböző alkalommal kaptak autoantigént aeroszol formájában, ugyanabban a tartományban mint a 2. példában, azzal a különbséggel, hogy nem kapták a -10 napos kezelést. A modulátor sejtek között voltak timociták vagy szplenociták a kezelt illetve nem kezelt állatokból. A válaszoló sejtek között volt az NLB, amely egy mielin bázikus fehérjére specifikus T sejtvonal, amely Lewis patkányokból származik, és az NLA, amely egy mikobakteriummal indukált sejtvonal, Lewis patkány eredetű, és az utóbbit használtuk negatív kontrollként. Az NLB és NLA sejtvonalak olyan Lewis patkányok térdhajlati nyirokmirigyéből származnak, amelyeket vagy GP-MBP-vel vagy Mycobacterium tuberculosis-sal immunizáltak Freund-féle komplett adjuváns alkalmazásával, a szakterületen jól ismert technikával [J. Immunok, 131,2810 (1988)]. Az izolált nyirokmirigy sejteket in vitro restimuláltuk felhasználás előtt, antigén plusz interleukin-2 (IL—2) alkalmazásával. A kísérleteket Lider és munkatársai módszerével végeztük [J. Immunok, 142, 748-752 (1988)]. Az in vitro használt MBP vagy Concanavalin A (Con A) mennyisége 10 pg/ml illetve 1,25 pg/ml. A Con A-t nem-specifikus kontrollként használtuk. Az eredményeket az alábbi, 2. és
3. táblázatban mutatjuk be.
2. táblázat
A vonalsejtek szuppressziója, modulátorként kezelt patkányokból származó timocitákat alkalmazva
| Reagálók | Kontroll patkányok (Delta CMPxlO3) | Aeroszollal kezelt patkányok (Delta CMPxlO3) | Szuppresszió százaléka |
| NLB+CONA | 24,648±0,9 | 29,950±6,6 | -17% |
| NLB+GB- MBP | 20,674±6,9 | 22,480±5,6 | -8% |
| NLA+CON A | 19,690±5,9 | 15,941±2,1 | 19% |
HU 210 715 A9
3. táblázat
A vonalsejtek szuppressziója, modulátorként aeroszollal kezelt patkányokból származó szplenocitákat alkalmazva
| Reagálók | Kontroll patkányok (Delta CMPxlO3) | Aeroszollal kezelt patkányok (Delta CMPxlO3) | Szupp- resszió száza- léka |
| NLB+CONA | 93,404±l,4 | 87,635±8,1 | 6% |
| NLB+GP-MBP | 63,023+12,9 | 35,523±8,9 | 44% |
| NLA+CONA | 19,892±4,6 | 30,553±3,6 | -53% |
A 2. és 3. táblázatban látható, hogy ha GP-MB-t adtunk az NLB vonalhoz aeroszollal kezelt (GPMB-vel patkányok lápéból izolált modulátor sejtek jelen-létében, akkor az immunválasz 44%-os szuppresz-sziója figyelhető meg (3. táblázat). Tehát MBP-re van szükség ahhoz, hogy az aeroszollal kezelt állatokban elnyomjuk az immunválaszt, és a szuppresszió immun-specifikus. Ha csak Con A-t adunk az NLB vagy NLA sejtekhez, akkor az nem indukál szuppressziót.
A 2. táblázatban található adatok azt mutatják, hogy a timociták nem vesznek részt ebben az immunszuppresszióban, mivel sem a kontroll (NLB+CON A), sem az MBP-vel kezelt vonalak nem mutatják valamiféle szuppresszió meglétét. Ennélfogva az autoimmun betegségek kezelésénél az autoantigének aeroszolizálásának egyik fajta hatásmechanizmusa az, hogy olyan sejteket generál, amelyek aktívan elnyomják a specifikus autoimmun választ a kezelt állatokban. Ez azzal is igazolható, hogy az aeroszollal kezelt állatokból származó lépsejtek a védelmet adoptíve átvitték, amint az a későbbiekben a 9. példában látható lesz.
4. példa
Az adjuváns artritisz egy modellje a reumatoid artritisznek, amelyben az artritiszt úgy indukálják, hogy Freund-féle komplett adjuvánst injektálnak a patkány farka tövébe. Körülbelül 14 nappal az immunizálás után az ily módon kezelt állatoknak erősen megduzzadnak az ízületeik, ami jellemzője a reumatoid artritisznek az emberben.
A kollagén adagolásnak az adjuváns artritiszre gyakorolt hatását vizsgáltuk. A kísérleteket az alábbiak szerint végeztük.
A ΙΙ-es típusú kollagén aeroszolizálását a 2. példá-ban leírtak szerint végeztük, a GP-MBP-t 0,003, 0,03 és 0,3 mg/állat mennyiségben alkalmazva. Az artritiszt úgy indukáltuk, hogy a patkányoknak a farka tövébe Freund-féle komplett adjuvánst injektáltunk. Az egyes kísérleti csoportokban öt patkány volt, amint azt az előzőekben, a 2. példában ismertettük. Az állatokat a -5, -3, 0, +2 és +4 napon kezeltük, az artritisz indukálásához viszonyítva az aeroszollal kezelt patkányokban.
Az artritisz átlagos súlyosságát 0M- közötti skálán fejeztük ki, a patkányoknak mind a négy mancsára vonatkoztatva [J. Exp., Med., 146, 857 (1977)]; az alábbiak szerint : 0 = normál, 1 = csak vörösödés, 2 = vörösödés plusz gyenge duzzadás, 3 = erős duzzadás, 4 = az ízület deformálódása. Az artritisz átlagos értékét minden napon, minden egyes állatcsoportra kiszámítottuk. Az egyes mancsokra vonatkozó értékeket összeadtuk, és a csoportban szereplő mindegyik állatra meghatároztuk az értékeket. Az átlagos értéket úgy kaptuk meg, hogy a csoport öszszesített értékét a vizsgált állatok számával osztottuk.
Az átlagos artritisz érték számítására az alábbi példátmutatjuk be.
| Állat száma | Az egyes mancsok értéke | Az egyes állatokra vonatkozó összérték |
| 1 | 1, 1, 1, 1 | 4 |
| 2 | 2, 2, 2, 2 | 8 |
| 3 | 3,3,3,3 | 12 |
| 4 | 4, 4, 4, 4 | 16 |
A négy állatra vonatkozó átlagos artritisz érték ebben a csoportban a következő lenne:
4+8+12+16 =40 =
4
A fenti kísérlet eredményeit a 7. ábrán mutatjuk be, ahol is az x-tengelyen az immunizálás utáni napok száma látható, míg az y-tengelyen az átlagos artritisz érték.
Amint az a 7. ábrán látható, a kollagén aeroszol formában való adagolása 0,03 és 0,3 mg/patkány dózisban jelentősen csökkentette az átlagos artritisz értéket, míg 0,003 mg/patkány dózisban nem. Ennélfogva, ugyanúgy mint a MBP aeroszol formában való adagolásánál az EAE kezelésében, a kollagén adagolása az adjuváns artritisztől érintett állatokban dózis-függő hatékonyságot mutatott.
5. példa
Szarvasmarha mielint és szarvasmarha MBP-t vizsgáltunk, hogy képesek-e az EAE elnyomására, ha orálisan és aeroszol formában adagoljuk őket. A szarvasmarha mielint a Biopure cégtől (Boston, MA) vásároltuk, ami szacharóz gradiensen a szakterületen jól ismert módszerrel tisztított izolált mielinből áll. Az EAE indukcióját, valamint a szarvasmarha mielin és az MBP adagolását orális illetve aeroszol formában a fenti
2. példa szerint végeztük. Az eredmények a 4. táblázatban találhatók.
HU 210 715 A9
4. táblázat
| Csoport | Immunizálás utáni napok | ||||||||
| 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | |
| Kontroll | 0,91 | 1,7 | 2,3 | 2,4 | 1,9 | 1,5 | 0,9 | 0,7 | 0,2 |
| Szarvasmarha mielin 1000 mg | 0 | 0 | 0,3 | 0,4 | 0,3 | 0,2 | 0 | 0 | 0 |
| Szarvasmarha mielin 100 mg | 0,3 | 0,4 | 0,6 | 0,8 | 0,5 | 0,5 | 0,1 | 0 | 0 |
| Szarvasmarha mielin mBP 10 mg | 0,2 | 0,2 | 0,5 | 0,7 | 0,4 | 0,4 | 0,3 | 0 | 0 |
| Szarvasmarha mielin 10 mg (A) | 0 | 0 | 0 | 0,4 | 0,7 | 0,5 | 0,7 | 0,2 | 0 |
| Szarvasmarha mielin 1 mg | 0,8 | 0,7 | 0,8 | 1,3 | 1,1 | 0,7 | 0,4 | 0,2 | 0 |
| Szarvasmarha mielin 0,1 mg | 0,7 | 1,1 | 1,3 | 1,2 | 1,3 | 0,9 | 0,4 | 0,3 | 0,1 |
| Szarvasmarha-MBP 1 mg | 0,2 | 0,4 | 0,7 | 0,6 | 0,4 | 0,2 | 0 | 0 | 0 |
| GP-MBP 1 mg | 0 | 0 | 0 | 0,1 | 0,3 | 0,4 | 0,1 | 0 | 0 |
1 = átlagos paralitikus érték
A = aeroszol
A fenti, 4. táblázat alapján a szarvasmarha mielin hatásos az EAE kezelésében, ha orálisan vagy aeroszol formában adagoljuk. 10 mg szarvasmarha mielin aeroszol formában adagolva ugyanolyan hatásosan gátolja az autoimmun betegségek szimptómáit, mint ugyanebből az anyagból 1000 mg, orálisan, folyadék formában adagolva. Emellett a szarvasmarha MBP orális adagolása is hatékony a GP-MBP által indukált tünetek gátlásában.
6. példa
A késleltetett típusú hiperszenzitivitási válaszokat 40 (DTH) Lewis patkányokban mértük, amelekben EAE-t indukáltunk és vagy orálisan, vagy aeroszol formában adagolt GP-MBP-vel kezeltünk. A késleltetett típusú hiperszenzitivitás (DTH) egy klasszikus mértéke az in vivő sejtek által közvetített immunitásnak. 45
Patkányokat (5 patkány/csoport) 5 mg GP-MBPvel kezeltünk, amit vagy orálisan, vagy aeroszol formában adtunk be, és a DTH válaszokat a fentiek szerint mértük. A késleltetett típusú hiperszenzitivitást úgy indukáltuk, hogy 10 pg GP-MBH-t injektáltunk patká- 50 nyok fülcimpájába, majd az erre fellépő duzzadást mértük 48 órával később, a leírt módszerek szerint [J. Immunoi., 125, 263 (1980)].
Olyan patkányokban, amelyekben EAE-t indukáltunk a 2. példa szerint, a DTH válaszokat a fentiek 55 szerint mértük a különböző kezelések után. Patkányokat (ötös csoportok) kezeltünk 5 mg/állat mennyiségben a különböző MBP készítményekkel aeroszol formában, majd a DTH válaszokat mértük. Az eredmények az 5. táblázatban láthatók. 60
5. táblázat
| Kezelés | DTH válaszok (xlO 2 cm) | ||
| Kontroll | Kezelt | Szignifikan- cia1 | |
| GP-MBP | -3 | 2,87 | 0,45 |
| GP-MBP +7, +9,+11 | 2,87 | 1,45 | 0,004 |
| GP-mielin | 2,87 | 0,10 | 0,000 |
| GP-MBP fragment (16-35) | 2,87 | 2,12 | 0,036 |
| GP-MBP fragment (51-70) | 2,87 | 2,5 | 0,2511 |
| GP-MBP fragment (121-138) | 2,87 | 2,27 | 0,0962 |
| Szarvasmarha MBP | 2,87 | 0,82 | 0,000 |
| Patkány MBP | 2,87 | 2,70 | 0,5822 |
1 Student-féle t-teszttel meghatározva 2 Nem szignifikáns a Student-féle t-teszt szerint.
Az 5. táblázat alapján, a GP-MBP aeroszol formában való adagolása az EAE előtt 3 nappal (-3), illetve 7, 9 és 11 nappal az indukció után (+7, +9, +11), szignifikánsan csökkenti a DTH választ az aeroszollal kezelt patkányokban. Teljes tengerimalac mielint alkal10
HU 210 715 A9 mazva a -10, -7, -5, -3, 0, +2 és +4 napokon, szintén kapunk hatást a kezelt állatok DTH válaszának szuppressziójában.
A GP-MBP bizonyos fragmentjei (adagolás a fentiek szerint) szintén hatásosan nyomják el a DTH válaszokat az aeroszollal kezelt állatokban. Egy GP-MBH fragment, amely megfelel a GP-MBP 16-35-ös aminosavainak, elnyomja a DTH választ, ha aeroszol formában adagoljuk (5. táblázat); a GP-MBP 51-70-es aminosavainak megfelelő fragment hatástalan a DTH válaszok elnyomásában, és a GP-MBP 121-138-as aminosavainak megfelelő fragment a DTH válaszok alacsony szintű szuppreszszióját indukálja. Ez az adat azt mutatja, hogy a GP-MBP bizonyos fragmentjei hatékonyak a DTH válaszok elnyomásában.
Végezetül, az aeroszolizált szarvasmarha MBP hatékonyan elnyomta a DTH válaszokat olyan állatokban, amelyeket GP-MBP-vel immunizáltunk, míg az aeroszolizált MBP ebből a szempontból hatástalan volt. Ezek az adatok is azt mutatják, hogy egy fehérjének az aeroszolizációja önmagában nem elegendő a DTH immun-szuppressziójához, csak specifikus fehérjék adják ezt a hatást.
7. példa
A GP-MBP aeroszol formában való adagolásának hatásait vizsgáltuk az antitest termelésére olyan patkányokban, amelyekben EAE-t indukáltunk.
Az antitest választ aeroszolizált GP-MBP-vel, valamint különböző kontroll antigénekkel, beleértve a hisztont és a szarvasmarha szérum albumint (BSA), kezelt állatokban mértük. Ezekben a kísérletekben szérummintát vettünk, és az antitesttitert öt állatból álló csoportokban mértük, amelyeket az immunizálástól számított -10, -7, -5, -3, 0, +2, és +4 napokon Freundféle komplett adjuvánsban levő GP-MBP-vel kezeltünk, a kezelt állatokban három héttel az immunizálás után. Az antitest titereket ELISA-val mértük [Lider és munkatársai, J. Immunok, 142, 748-752 (1989)]. Az eredmények az alábbi, 6. táblázatban találhatók.
6. Táblázat
| Csoport | Szérum antitest szintek | |||
| 1/10 000 | 1/20000 | 1/40000 | 1/80000 | |
| Kontroll | 0,520 | 0,239 | 0,382 | 0,143 |
| GP-MBP 5 mg (A) | 0,276 | 0,121 | 0,089 | 0,074 |
| GP-MBP 1 mg (A) | 0,579 | 0,380 | 0,349 | 0,250 |
| GP-MBP 1 mg CO) | 0,437 | 0,275 | 0,203 | 0,157 |
| Hiszton 5 mg | 1,405 | 1,229 | 0,782 | 0,644 |
| BSA 5 mg | 0,405 | 0,489 | 0,382 | 0,315 |
| PBS | 0,913 | 0,953 | 0,769 | 0,624 |
| BP-MBP fragment (21—4-0, 0,174 mg/patkány) | 0,226 | 0,243 | 0,192 | 0,132 |
A fenti eredmények azt mutatják, hogy az 5 mg aeroszolizált GP-MBP-vel kezelt állatokban statisztikusan szignifikánsan csökkent az antitest szint a kontrolihoz viszonyítva. Sem a PBS, sem a szarvasmarha szérum albumin (BSA, Boehringer-Mannheim), sem a hiszton (Sigma Chemical Co., St Louis, MD) nem nyomta el az antitest választ. Emellett, egy, a GP-MBP 2IM0-es aminosavainak megfelelő GPMBP fragment is elnyomta a specifikus MBP antitest válaszokat statisztikusan szignifikáns mértékben, ha aeroszol formában adtuk be. A fentiekben bemutatott eredmények az MBP-re való antitest válasz csökkenését mutatják 5 mg aeroszolizált MBP-vel kezelt állatokban.
8. példa
EAE-t indukáltunk patkányokban, és az állatokat aeroszol formájú GP-MBP-vel kezeltük, a 2. példában szereplő leírás szerint (25 mg GP-MBP 5 ml PBS-ben, öt állatból álló csoportnak adva a -10, -7, -5, -3, 0, +2 és +4 napokon). A kontroll állatokat csak PBS-sel kezeltük. A patkányokat az immunizálás után 16 nappal levágtuk, agyukat formaldehidben fixáltuk, az egyes állatok agyából paraffinba ágyazott metszetet készítettünk, és a patkányok agyában levő parenchimális gyulladásos gócokat vak módszerrel megszámláltuk. A hisztológiai elemzést a patkányokon Higgins és munkatársai által [J.Immunol 140, 440 (1988)) leírtak alapján végeztük. Ennek a biológiai elemzésnek az eredményeit ismertetjük a következőkben.
Ezekben a vizsgálatokban hiányoztak az agy parenchimájába beszűrődő sejtek az MBP-vel kezelt állatokban. Az eredmények az alábbiak:
Kontrollok (n-6) Gócszám: 48, 25, 14, 11, 8, 4; Átlagos gócszám/állat: 18,3
Aeroszollal kezelt (n = 4) Gócszám: 2, 0, 0, 0; Átlagos gócszám/állat: 0,5
Ez azt igazolja, hogy az aeroszol kezelés nemcsak a klinikai betegséget és az immunológiai funkciókat érinti, de megelőzi azt is, hogy a sejtek az agyba vándoroljanak. A sejteknek az agyba való vándorlása az EAE betegség primer mechanizmusa.
9. példa
Ami az állatoknak a GP-MBP aeroszolizációja után az EAE-től való védelmét illeti, az egyik fontos kérdés a specifikus immunválasz működési mechanizmusa. Az alábbiakban ismertetett kísérletek azt mutatják, hogy az MBP aeroszol formában való adagolása aktív sejtes mechanizmusokat indít el. Ezekben a kísérletekben azokat a sejteket nyerjük ki az aeroszollal kezelt állatok lépéből, amelyek adaptíven átviszik az EAE elleni védelmet az érintetlen állatokba.
Lewis patkányokat kezeltünk a 2. példában leírtak szerint, csoportonként 5 állatot használva (5 mg GPMBP/patkány PBS-ben, hétszer beadva). Az utolsó kezelés után három nappal a lépsejteket eltávolítottuk a kezelt állatokból, egysejtű szuszpenziókat készítettünk, intraperitoneálisan injektáltuk 5 érintetlen állatnak (9xl08 sejt/egy-egy befogadó állat), amelyeket ezután
HU 210 715 A9
MBP-vel immunizáltunk Freund-féle komplett adjuvánsban. Az eredmények a 8. ábrán láthatók.
Amint az a 8. ábráról leolvasható, azokban a patkányokban a betegség súlyossága jelentősen lecsökkent, amelyek MBP-vel kezelt állatokból kaptak lépsejteket. Emellett a DTH válaszokat is mértük a befogadó állatokban, és a DTH válaszok jelentősen lecsökkentek az MBP-re az aeroszollal kezelt állatokban. (Az adatokat nem közöljük.)
Tehát az aeroszollal kezelt állatokból származó lépsejtek képesek az EAE elleni védelmet adoptíven átvinni az érintetlen befogadókba, és elfojtják a DTH válaszokat is ezekben az állatokban.
Claims (19)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás autoimmun betegség kezelésére vagy megelőzésére emlősben, amely abban áll, hogy a fenti emlősökben a légszőszerven keresztül egy, a fenti betegségre specifikus antigénen, a fenti antigén betegséget elfojtó fragmentjei és a fenti antigén analógjai közül választott hatóanyagnak a fenti autoimmun betegség megelőzése vagy kezelése szempontjából hatásos mennyiségét adagoljuk.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az említett autoantigén a mielin bázikus fehérjéje.
- 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az említett autoantigén a kollagén.
- 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy említett autoimmun betegség a szklerózis multiplex.
- 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az említett autoimmun betegség a reumatoid artritisz.
- 6. Gyógyászati készítmény autoimmun betegségben szenvedő emlős kezelésére, amely legalább egy, az autoantigének, az említett autoantigének betegséget visszaszorító fragmentjei és az autoantigén analógjai közül választott hatóanyagnak a fenti autoimmun betegség kezelése szempontjából hatásos mennyiségét és legalább egy gyógyászatilag elfogadható hordozót, hígítóanyagot, segédanyagot vagy vivőanyagot tartalmaz, jellemző rá, hogy a készítmény aeroszol formában van.
- 7. A 6. igénypont szerinti készítmény, amelyben az említett autoantigén mielin bázikus fehéije.
- 8. A 6. igénypont szerinti készítmény, amelyben az említett autoantigén a kollagén.
- 9. A 6. igénypont szerinti készítmény, amelyben az említett autoantigén a mielin bázikus fehérjének egy betegséget szuppresszáló fragmentje.
- 10. A 6-9. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, amely egy vagy több gyógyászatilag elfogadható hordozó- vagy hígítóanyagot, oldást elősegítő anyagot, emulgeálószert vagy sókat tartalmaz.
- 11. A 6-10. igénypontok bármelyike szerinti készítmény,amely sóoldatot tartalmaz.
- 12. A 6-11. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, amely speciálisan a szklerózis multiplex vagy reumatoid artritisz kezelésére készült.
- 13. Eljárás a szklerózis multiplex tüneteit mutató autoimmun megbetegedés kezelésére az említett tünetekkel sújtott emlősben, amely abban áll, hogy az említett emlősnek a légzőszerven keresztül az említett betegség elnyomására egy az említett betegségre specifikus autoantigének, az említett autoantigénnek egy betegséget szuppresszáló fragmentje, illetve az említett autoantigénnek az analógjai közül választott hatóanyagnak a betegség elnyomása szempontjából hatásos mennyiségét adagoljuk.
- 14. A 13. igénypont szerinti eljárás, amelyben az említett autoantigén a mielin bázikus fehérje.
- 15. Eljárás az artritisz tüneteit mutató autoimmun megbetegedés kezelésére, amely abban áll, hogy az említett betegségre specifikus autoantigén, az említett autoantigén betegséget szuppresszáló fragmentje, illetve az említett autoantigének analógjai közül választott hatóanyagnak a betegség elnyomása szempontjából hatásos mennyiségét adagoljuk.
- 16. A 15. igénypont szerinti eljárás, amelyben az említett autoantigén a kollagén.
- 17. Eljárás egy autoimmun betegségben szenvedő emlős kezelésére, amely abban áll, hogy az említett emlősnek a légzőszerven keresztül a fenti betegségre specifikus autoantigének, az említett autoantigének egy betegséget szuppresszáló fragmentje, illetve az említett autoantigének analógjai közül választott hatóanyagnak a fenti betegség elnyomása szempontjából hatásos mennyiségét aeroszolként, finom permet formájában adagoljuk.
- 18. Gyógyászati készítmény, amely egy vizes aeroszol autoimmun megbetegedés kezelése szempontjából hatásos mennyiségéből áll, amely aeroszol legalább egy az említett betegségre specifikus, autoantigént, az említett autoantigénnek egy betegséget elfojtó fragmentjét, vagy az említett autoantigénnek az analógját és legalább egy gyógyászatilag elfogadható hordozót, hígítóanyagot, segédanyagot vagy vivőanyagot tartalmaz.
- 19. Eljárás autoimmun betegség kezelésére vagy fellépésének megelőzésére emlősben, amely abban áll, hogy a fenti emlősnek a légzőszerven keresztül a fenti betegség kezelésére vagy fellépésének megelőzésére alkalmas szert aeroszol formájában adagolunk, a fenti eljárás lényegében olyan, ahogy leírtuk, egy vagy több példára és/vagy rajzra való hivatkozással (kivéve a csak összehasonlítás céljára szolgálókat).
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US45480689A | 1989-12-20 | 1989-12-20 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU210715A9 true HU210715A9 (en) | 1995-06-28 |
Family
ID=23806184
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU922072A HUT61487A (en) | 1989-12-20 | 1990-12-17 | Process for producing aerosol pharmaceutical composition comprising autoantigens |
| HU95P/P00074P HU210715A9 (en) | 1989-12-20 | 1995-02-15 | Improved treatment of autoimmune diseases by aerosol administration of auto antigens |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU922072A HUT61487A (en) | 1989-12-20 | 1990-12-17 | Process for producing aerosol pharmaceutical composition comprising autoantigens |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0506785B1 (hu) |
| JP (1) | JP2625253B2 (hu) |
| KR (1) | KR0185747B1 (hu) |
| AT (1) | ATE190496T1 (hu) |
| AU (1) | AU642693B2 (hu) |
| BR (1) | BR9007950A (hu) |
| CA (1) | CA2070281C (hu) |
| DE (1) | DE69033487T2 (hu) |
| DK (1) | DK0506785T3 (hu) |
| ES (1) | ES2144398T3 (hu) |
| GR (1) | GR3033634T3 (hu) |
| HU (2) | HUT61487A (hu) |
| IL (1) | IL96734A (hu) |
| WO (1) | WO1991008760A1 (hu) |
Families Citing this family (46)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5843445A (en) * | 1987-06-24 | 1998-12-01 | Autoimmune, Inc. | Method of treating rheumatoid arthritis with type II collagen |
| US5849298A (en) * | 1987-06-24 | 1998-12-15 | Autoimmune Inc. | Treatment of multiple sclerosis by oral administration of bovine myelin |
| US5869054A (en) * | 1987-06-24 | 1999-02-09 | Autoimmune Inc. | Treatment of multiple sclerosis by oral administration of autoantigens |
| US6645504B1 (en) | 1987-06-24 | 2003-11-11 | Autoimmune Inc. | Bystander suppression of type I diabetes by oral administration of glucagon |
| ATE158950T1 (de) * | 1989-07-14 | 1997-10-15 | Autoimmune Inc | Behandlung der autoimmunen uveoretinitis in menschen |
| IL99699A (en) * | 1990-10-10 | 2002-04-21 | Autoimmune Inc | Drug with the option of oral, intra-intestinal, or inhaled dosing for suppression of autoimmune response associated with type I diabetes |
| EP0553291B1 (en) * | 1990-10-15 | 2006-03-08 | Autoimmune, Inc. | Treatment of autoimmune diseases by oral administration of autoantigens |
| DE69332518T2 (de) * | 1992-02-28 | 2003-09-04 | Autoimmune Inc | Unterdrückung von autoimmunkrankheiten durch antigene in wartestellung |
| JP3845447B2 (ja) * | 1992-09-25 | 2006-11-15 | オートイミューン インク | タイプ▲ｉｉ▼コラーゲンによるリウマチ性関節炎治療方法 |
| CA2164326A1 (en) * | 1993-06-02 | 1994-12-08 | Wayne Robert Thomas | Cryptic peptides for use in inducing immunologic tolerance |
| HUT77047A (hu) * | 1994-10-25 | 1998-03-02 | Immulogic Pharmaceutical Corporation | Szklerózis multiplex kezelésére szolgáló készítmények és kezelések |
| US6488933B2 (en) | 1995-07-05 | 2002-12-03 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Preparations for the treatment of T cell mediated diseases |
| US5856446A (en) * | 1995-07-07 | 1999-01-05 | Autoimmune Inc. | Method of treating rheumatoid arthritis with low dose type II collagen |
| JP3935938B2 (ja) * | 1996-01-05 | 2007-06-27 | オートイミューン インク | ▲ｉｉ▼型コラーゲンの調製法 |
| AUPO269996A0 (en) * | 1996-10-01 | 1996-10-24 | Walter And Eliza Hall Institute Of Medical Research, The | A method of prophylaxis and treatment |
| CA2275889C (en) | 1996-12-30 | 2008-03-18 | Battelle Memorial Institute | Formulation and method for treating neoplasms by inhalation |
| US7097845B2 (en) | 1997-04-23 | 2006-08-29 | Jacob Sten Petersen | Combinations of antigen and mucosal binding component for inducing specific immunological tolerance |
| US7790856B2 (en) | 1998-04-07 | 2010-09-07 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
| US6743427B1 (en) | 1997-12-02 | 2004-06-01 | Neuralab Limited | Prevention and treatment of amyloidogenic disease |
| US6787523B1 (en) | 1997-12-02 | 2004-09-07 | Neuralab Limited | Prevention and treatment of amyloidogenic disease |
| US6750324B1 (en) | 1997-12-02 | 2004-06-15 | Neuralab Limited | Humanized and chimeric N-terminal amyloid beta-antibodies |
| US6761888B1 (en) | 2000-05-26 | 2004-07-13 | Neuralab Limited | Passive immunization treatment of Alzheimer's disease |
| US20080050367A1 (en) | 1998-04-07 | 2008-02-28 | Guriq Basi | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
| US6923964B1 (en) | 1997-12-02 | 2005-08-02 | Neuralab Limited | Active immunization of AScr for prion disorders |
| US6710226B1 (en) | 1997-12-02 | 2004-03-23 | Neuralab Limited | Transgenic mouse assay to determine the effect of Aβ antibodies and Aβ Fragments on alzheimer's disease characteristics |
| US6913745B1 (en) | 1997-12-02 | 2005-07-05 | Neuralab Limited | Passive immunization of Alzheimer's disease |
| TWI239847B (en) | 1997-12-02 | 2005-09-21 | Elan Pharm Inc | N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease |
| US20030147882A1 (en) | 1998-05-21 | 2003-08-07 | Alan Solomon | Methods for amyloid removal using anti-amyloid antibodies |
| US6787637B1 (en) | 1999-05-28 | 2004-09-07 | Neuralab Limited | N-Terminal amyloid-β antibodies |
| UA81216C2 (en) | 1999-06-01 | 2007-12-25 | Prevention and treatment of amyloid disease | |
| SE9902155L (sv) * | 1999-06-09 | 2000-12-10 | Bjoern Rydevik | Serum antibodies |
| EP1286686B1 (en) | 2000-05-24 | 2007-07-25 | THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA as represented by THE SECRETARY of the DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES | E-selectin for treating or preventing stroke |
| US7897575B2 (en) | 2000-05-24 | 2011-03-01 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Treatment and prevention of vascular dementia |
| US7700751B2 (en) | 2000-12-06 | 2010-04-20 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Humanized antibodies that recognize β-amyloid peptide |
| MY139983A (en) | 2002-03-12 | 2009-11-30 | Janssen Alzheimer Immunotherap | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
| DE10230381A1 (de) | 2002-07-05 | 2004-01-22 | Institut für Medizintechnologie Magdeburg GmbH, IMTM | Verwendung von Inhibitoren der Alanyl-Aminopeptidasen und diese umfassende pharmazeutischen Zubereitungen |
| WO2004024906A1 (en) | 2002-09-13 | 2004-03-25 | UNIVERSITé LAVAL | Nucleoside triphosphate diphosphohydrolase (ntpdase 8) and uses thereof |
| TWI374893B (en) | 2003-05-30 | 2012-10-21 | Janssen Alzheimer Immunotherap | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
| CA2590337C (en) | 2004-12-15 | 2017-07-11 | Neuralab Limited | Humanized amyloid beta antibodies for use in improving cognition |
| CN101365714A (zh) | 2005-07-01 | 2009-02-11 | 福赛特儿童口腔医院 | 结核抗原的检测分析及疫苗 |
| US8784810B2 (en) | 2006-04-18 | 2014-07-22 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Treatment of amyloidogenic diseases |
| US8003097B2 (en) | 2007-04-18 | 2011-08-23 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Treatment of cerebral amyloid angiopathy |
| PT2182983E (pt) | 2007-07-27 | 2014-09-01 | Janssen Alzheimer Immunotherap | Tratamento de doenças amiloidogénicas com anticorpos anti-abeta humanizados |
| JO3076B1 (ar) | 2007-10-17 | 2017-03-15 | Janssen Alzheimer Immunotherap | نظم العلاج المناعي المعتمد على حالة apoe |
| US9067981B1 (en) | 2008-10-30 | 2015-06-30 | Janssen Sciences Ireland Uc | Hybrid amyloid-beta antibodies |
| US20130236484A1 (en) | 2012-03-08 | 2013-09-12 | Detectogen Inc. | Leishmaniasis antigen detection assays and vaccines |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US379778A (en) * | 1888-03-20 | Machine for mitering printers rules | ||
| US65734A (en) * | 1867-06-11 | Joseph fantou | ||
| DE3856566T2 (de) * | 1987-06-24 | 2004-06-24 | Brigham And Women's Hospital, Boston | Behandlung von Autoimmun-Erkrankungen durch orale Verabreichung von Autoantigenen |
| KR900700617A (ko) * | 1988-04-08 | 1990-08-16 | 브루스 엠. 에이센 | 뼈 및 연골 유도 조성물 |
-
1990
- 1990-12-17 KR KR1019920701486A patent/KR0185747B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1990-12-17 HU HU922072A patent/HUT61487A/hu unknown
- 1990-12-17 EP EP91901622A patent/EP0506785B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-17 JP JP3501992A patent/JP2625253B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1990-12-17 ES ES91901622T patent/ES2144398T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-17 WO PCT/US1990/007455 patent/WO1991008760A1/en active IP Right Grant
- 1990-12-17 BR BR909007950A patent/BR9007950A/pt not_active Application Discontinuation
- 1990-12-17 DE DE69033487T patent/DE69033487T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-17 CA CA002070281A patent/CA2070281C/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-17 AU AU69791/91A patent/AU642693B2/en not_active Expired
- 1990-12-17 DK DK91901622T patent/DK0506785T3/da active
- 1990-12-17 AT AT91901622T patent/ATE190496T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-12-20 IL IL9673490A patent/IL96734A/en not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-02-15 HU HU95P/P00074P patent/HU210715A9/hu unknown
-
2000
- 2000-06-08 GR GR20000401321T patent/GR3033634T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK0506785T3 (da) | 2000-07-24 |
| IL96734A (en) | 1996-11-14 |
| CA2070281A1 (en) | 1991-06-21 |
| IL96734A0 (en) | 1991-09-16 |
| EP0506785A4 (en) | 1993-09-08 |
| HU9202072D0 (en) | 1992-09-28 |
| WO1991008760A1 (en) | 1991-06-27 |
| JP2625253B2 (ja) | 1997-07-02 |
| AU642693B2 (en) | 1993-10-28 |
| KR920703081A (ko) | 1992-12-17 |
| AU6979191A (en) | 1991-07-18 |
| HUT61487A (en) | 1993-01-28 |
| KR0185747B1 (ko) | 1999-05-01 |
| BR9007950A (pt) | 1992-10-27 |
| DE69033487T2 (de) | 2000-06-29 |
| GR3033634T3 (en) | 2000-10-31 |
| ES2144398T3 (es) | 2000-06-16 |
| JPH05504341A (ja) | 1993-07-08 |
| EP0506785A1 (en) | 1992-10-07 |
| CA2070281C (en) | 2005-08-23 |
| DE69033487D1 (de) | 2000-04-20 |
| EP0506785B1 (en) | 2000-03-15 |
| ATE190496T1 (de) | 2000-04-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU210715A9 (en) | Improved treatment of autoimmune diseases by aerosol administration of auto antigens | |
| US5571500A (en) | Treatment of autoimmune diseases through administration by inhalation of autoantigens | |
| US5571499A (en) | Treatment of autoimmune diseases by aerosol administration of autoantigens | |
| US5645820A (en) | Treatment of autoimmune diseases by aerosol administration of autoantigens | |
| US5641474A (en) | Prevention of autoimmune diseases by aerosol administration of autoantigens | |
| AU720695B2 (en) | Bystander suppression of autoimmune diseases | |
| US6645504B1 (en) | Bystander suppression of type I diabetes by oral administration of glucagon | |
| EP0553291B1 (en) | Treatment of autoimmune diseases by oral administration of autoantigens | |
| US5783188A (en) | Method of treating rheumatoid arthritis with type collagen peptide fragments containing repeating sequences | |
| CA2077340A1 (en) | Enhancement of the down-regulation of autoimmune diseases by oral administration of autoantigens | |
| US5935577A (en) | Treatment of autoimmune disease using tolerization in combination with methotrexate | |
| WO1994007520A9 (en) | Method of treating rheumatoid arthritis with type ii collagen | |
| WO1998032451A9 (en) | Treatment of autoimmune disease using tolerization in combination with methotrexate | |
| AU6648898A (en) | Treatment of autoimmune disease using tolerization in combination with methotrexate | |
| US20010007758A1 (en) | Treatment of multiple sclerosis using COP-1 and Th2-enhancing cytokines | |
| JPH09511990A (ja) | 経口寛容および／またはＴｈ２増強サイトカインを用いた自己免疫疾患の治療 | |
| JPH09511745A (ja) | 経口寛容および／またはタイプｉインターフェロンを用いた自己免疫疾患の治療 | |
| US20040115217A1 (en) | Bystander suppression of autoimmune diseases |