HU205257B - Process for producing antitumoral pharmaceutical material and pharmaceutical compositions containing them as active components - Google Patents
Process for producing antitumoral pharmaceutical material and pharmaceutical compositions containing them as active components Download PDFInfo
- Publication number
- HU205257B HU205257B HU894099A HU409989A HU205257B HU 205257 B HU205257 B HU 205257B HU 894099 A HU894099 A HU 894099A HU 409989 A HU409989 A HU 409989A HU 205257 B HU205257 B HU 205257B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- cells
- ascites
- abdominal cavity
- days
- mouse
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Magnetic Resonance Imaging Apparatus (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás rákellenes hatással rendelkező, fiziológiásán aktív anyag előállítására, és eljárás hatóanyagként ezt az anyagot tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására.
Az 57 140 726 számon nyilvánosságra hozott japán szabadalmi leírásból ismert egy tisztítási eljárás rákellenes gyógyászati hatású anyag előállítására. Az ismert eljárást az alábbiakban foglaljuk össze.
A protein típusú, rákellenes gyógyászati hatású anyagot emlősökben (nőstény nyúl és hím ddr-egér) indukálják, egy vagy kettőnél több fajta, retikuloendoteliális aktiváló hatású anyag beadásával, majd Gramnegatív baktériumból származó endotoxin injektálásával. Az így nyert fiziológiásán aktív anyag'nyers oldatát (vagy olyan protein típusú, rákellenes hatású, fiziológiásán aktív anyag nyers oldatát, amelyet aktivált emlős makrofágokat tartalmazó szövettenyészethez Gram-negatív baktériumból származó endotoxin hozáadásával indukálnak) bázikus ioncserélő gyantán adszorbeálják, az eluált oldatot gélszűrésnek alávetve összegyűjtik a 30-70 kD molekulatömegű anyagot és kívánt esetben Sieber króm-kék-F3G-A-t alkalmazva affinitási kromatográfiás eljárással továbbtisztítva kinyerik a fent említett fiziológiásán aktív proteint tartalmazó frakciót, így rákellenes gyógyászati hatású tisztított proteint kapnak.
A rák kezelésére alkalmazott rákellenes szerek két csoportba sorolhatók. Az egyik csoportba az úgynevezett kemoterápiás szerek tartoznak, amelyek közvetlen érintkezés útján megsemmisítik a rákos szervezet rákos sejtjeit; a másik csoportba az úgynevezett immunitást alkalmazó terápiás szerek tartoznak, amelyek a rákos szervezetek rákos sejtek (vagy szövetek) szaporodása miatt legyengült védekező mechanizmusát helyreállítják és felerősítik.
A kemoterápiás szer káros mellékhatásokat okozhat, például a rákos sejtek ellen szánt citotoxikus hatásával a normál sejteket is károsítja, ezért dózisát lehetőleg alacsonyabb értékre szorítják, aminek következtében a rákos sejtek lokalizációjától függően hatástalan maradhat, vagy rezisztensekké válnak a rákos sejtek a szerrel szemben.
A fenti probléma megoldására megkísérelték a rákellenes szert lehetőleg magas koncentrációban a hatás helyére juttatni. Például monoklonális antitesttel kapcsolt rákellenes szerrel kísérleteztek, amely képes a rákos helyre juttatni a szert.
Másrészről a tumorellenes hatást immunológiai terápiás szerrel is ki lehet váltani, így citokinnel, például limfokinnel vagy monokinnel, amelyeket a rákos állapot miatt inaktivált vagy gátolt immunrendszer aktiválásával indukáltak.
Az immunológiai hatáson alapuló terápiás szer csak ritkán fejt ki káros hatást a normál sejtekre hosszabb időtartamú kezelés alatt, de mivel nem közvetlenül támadja a rákos sejteket (szöveteket), nem fejti ki azonnal rákellenes hatását.
Kiterjedt vizsgálatokat folytattunk az emlősökben rákos sejtek transzplantálását követően kialakult aszcitesz tumorban képződött fiziológiásán aktív anyag immunrendszert aktiváló hatásának tanulmányozására, és ennek eredményeként kidolgoztunk egy eljárást rákellenes gyógyászati hatású anyag előállítására rákos szervezetekben képződött aszciteszekből.
A találmány tárgya ennek megfelelően eljárás rákellenes gyógyászati hatású anyag előállítására.
A találmány szerinti eljárás kiindulási lépéseként MM46 sejteket egér hasüregébe transzplantálunk, majd az egér hasüregébe aklarbicin-hidrogén-kloridot adagolunk, ezután az állatba vénásan egészséges egérből extrahált lépsejteket injektálunk, 21-25 nap múlva összegyűjtjük a hasüregben lévő folyadékot, a felülúszót Cohn-féle frakcionálással frakcionáljuk, és a rákellenes gyógyászati hatású anyagot - amelynek móltömege 70 000-170 000D - Cohn-féle V frakcióként izoláljuk.
A találmány értelmében a rákellenes gyógyászati hatású anyagot immunológiai szabályozással (SATOféle terápiával) kezelt és fokozódó immunrendszeri választ adó rákos betegek hasüregéből .gyűjtött aszciteszfolyadék felülúszójából is előállíthatjuk oly módon, hogy az aszcítesz-folyadék felülúszóját centrifugáljuk és a sejtmaradékot eltávolítjuk, majd Cohn-féle frakcionálással izoláljuk a felülúszóból a Cohn-féle V frakciót.
A rákellenes hatást az élettartam szignifikáns meghosszabbodásával mérve azt tapasztaljuk, hogy egy rákos szervezetet először rákellenes szerrel, majd a találmány szerinti eljárással előállított, gyógyászatilag hatásos anyagot tartalmazó frakció hatásos mennyiségével kezelve az élettartam meghosszabbodik a találmány szerinti eljárással előállított anyaggal nem kezelt rákos szervezethez képest. A fenti kísérleti eredmény bizonyítja, hogy a fenti frakcióban jelentős rákellenes hatással rendelkező anyag van jelen.
A találmány szerinti eljárással tehát előállítható egy igen jelentős rákellenes hatású hatóanyag.
A találmányt közelebbről az alábbiakban ismertetjük, a korlátozás szándéka nélkül.
Az ábrákat az alábbiakban ismertetjük röviden. Az 1A-3D ábrákon a találmány szerinti eljárással előállított, gyógyászatilag hatékony anyaggal kapott túlélési görbék és a kontrollcsoportok túlélési görbéi láthatók, amelyek a találmány szerinti eljárással előállított anyag rákellenes hatását bizonyítják.
1. példa
1. Rákos sejteket tartalmazó aszcitesz előállítása
MM46 egér aszcitesz emlőráksejteket szaporítás céljából C3H/He egerek (8 hetes hímek) hasüregébe transzplantálunk, lxl05-106 sejt/egér koncentrációban. 10 nappal később az egerek hasüregében felszaporodott aszciteszt összegyűjtjük, 800 fordulat/perccel 10 percen keresztül centrifugálva izoláljuk az MM46 sejteket. Az MM46 sejtekből álló üledéket fiziológiás sóoldatban szuszpendáljuk, és 800 fordulat/perccel 10 percen keresztül centrifugáljuk, a fenti műveleteket 2-3-szor megismételjük a vörös vérsejtek eltávolítása céljából. A sejtüledéket ezután 2xl05 sejt/ml sejtsűrűséggel fiziológiás sóoldatban újraszuszpendáljuk.
HU 205 257 Β
A fenti műveleteket steril körülmények között, jeges vizes hűtés alkalmazása mellett hajtjuk végre.
2. Lépsejtek előállítása
A BALB/c egér lépsejteket a szokásos módon állítjuk elő, mégpedig úgy, hogy 8 hetes, normál hím 5 BALB/c egerekből izolált lépet steril körülmények között azonnal felaprítjuk és Hank-féle oldatba merítjük, majd rozsdamentes, 200 mesh lyukméretű szitán 60 mm-es Petri-csészébe szűrjük, és az így kapott szabad sejteket tartalmazó oldatot Hank-féle oldattal cent- 10 rifugálás közben mossuk.
Ezután 0,83%-os ammónium-klorid és 0,17 mól/l-es Tris-HCl 9: 1 térfogatarányú elegyét (pH 7,65) szűréssel sterilezzük. A lépsejtiiledékhez 10-szeres térfogatban adjuk a fenti pufferoldatot. Gyors keverés után 15 az elegyet 1000 fordulat/perc sebességgel centrifugáljuk alacsony hőmérsékleten, majd a vörösvérsejt-pigment maradékát fiziológiás sóoldattal háromszor mosva eltávolítjuk, és az így kapott lépsejtkészítményt fiziológiás sóoldattal 4 qC-on 16 órán keresztül készült 20 szuszpenzió formájában használjuk.
3. Győgyászatilag hatásos anyag előállítása
Az 1. pont szerint kapott MM46 sejteket 2xl04 sejt/egér koncentrációban 8 hetes C3H/He egerek hasüregébe transzplantáljuk, és 3 nap múlva rákellenes 25 hatású anyagként 3 mg/kg dózisban aklacinont (aklarbicin-hidrogén-kloridot, gyártja a Yamanouchi Pharmaceutical Co., a leírásban a továbbiakban ACR-nek nevezzük) adunk a hasüregbe. A transzplantáíást követő 4. és 6. napon a fenti 2. pontban ismertetett módon 30 BALB/c egérből nyert lépsejteket adunk lxlO6 sejt/egér dózisban a fent említett C3H/He egerek farokvénájába. A transzplantáíást követő 21-25. napon a C3H/He egerek hasüregében felgyűlt aszciteszt összegyűjtjük (a vért tartalmazó aszciteszeket nem használjuk az ezután következő kísérletekben).
A következő lépésben a fenti aszciteszben lévő sejtmaradékokat, így az MM46 sejteket és az egérvérsejteket 10 000 fordulat/perc sebességgel végzett centrifugálással eltávolítjuk, a felülúszót fagyasztva szárítjuk és sűrítjük, majd Cohn-féle frakcionálással (szerves oldószerrel végzett frakcionálással) előállítjuk az V frakciót [J. Am. Chem. Soc. 72,465-74 (1950)].
Tumorellenes hatás vizsgálata
A fent ismertetett eljárással előállított Cohn-féle V frakció (továbbiakban aszcitesz-származék) tumorellenes hatását az alábbiak szerint vizsgáljuk.
Vizsgálati módszerek
Háromféle aszcitesz-származékot állítunk elő a fent ismertetett eljárással, és kétféle aszcitesz-származékot készítünk kontrollként (1. táblázat).
Az 1. táblázatban 1. mintának jelzett aszcitesz-származék kontroll, amelyet úgy állítunk elő, hogy az MM46 sejtekkel transzplantált, de ACR-rel és lépsejtekkel nem kezelt C3H/He egerek hasüregéből a transzplantáíást követő 21. napon kinyert aszciteszt a fenti 3. pontban ismertetett eljárással kezeljük.
Itt említjük meg, hogy a csak MM46 sejtekkel transzplantált egerek hasüregében az aszcitesz-folyadék felgyűlik a hasüregben, és az állatok többsége n 18. vagy 19. napon, vagy közelítőleg ebben az Időpontban elpusztul, főleg a szérumaszcitesztől, így csak kevés olyan egér marad, amelyből ki lehet vonni az aszciteszt.
Az 1. táblázatban 2. mintának jelzett aszcitesz-származék szintén kontroll, amelyet úgy állítunk elő, hogy az MM46 sejtekkel transzplantált, és a transzplantálás utáni 3. napon 3 mg/kg dózisban ACP-rel kezelt C3H/He egerek hasüregéből a transzplantáíást követő
21. napon kinyert aszciteszt a 3. pontban ismertetett eljárással kezeljük.
1. táblázat:
Aszcitesz-származékok előállítása
| Mintaszámú | Aszcitesz kinyerésének napja | Aszcitesz kinyerése előtti kezelés | Aszcttes2gyűjtésre használt egerek száma | Hozam (mg) |
| ' 1. | 21. | csak MM46 sejtek | 4 | 879 |
| 2. | 21. | MM46 sejtek + ACR (3 nap múlva) | 9 | 1671 |
| 3. | 21. | MM46 sejtek + ACR (3 nap múlva) + lépsejtek (4 nap múlva) | 11 | 1796 |
| 4. | 21. | MM46 sejtek + ACR (3 nap múlva) + lépsejtek (6 nap múlva) | 8 | 1620 |
| 5. | 25. | MM46 sejtek + ACR (3 nap múlva) + lépsejtek (6 nap múlva) | 4 | 522 |
A 3., 4. és 5. minta a fenti példa szerint frakcionált aszcitesz-származék, az egyes mintákat úgy nyerjük, hogy az MM46 sejtek transzplantálása után eltérő időpontokban adjuk a lépsejteket (4. vagy 6. napon), vagy az aszciteszt eltérő időpontokban gyűjtjük össze (21. vagy 25. napon).
A 3., 4. és 5. aszciteszminták színe sárga, és az
MM46 sejtekben gazdag oldatban rendszerint megfigyelhető zavarosság kisebb mértékű, mint az 1. és 2. mintában (abban az esetben, ha az egérből gyűjtött aszcitesz kevés hemoglobint tartalmaz, azt nem használjuk fel a Cohn-féle frakcionálásra).
Következő lépésben a fenti 1. eljárás szerint előállított MM46 sejteket 2xl04 sejt/egér koncentrációban 8
HU 205 257 Β hetes hím C3H/He egerek hasüregébe transzplantáljuk (10 egér/csoport), majd a következő napon a hasüregekbe 10 mg/kg ACR-t adagolunk.
A következő napon az egereknek 12 mg/kg dózisban adjuk az 1-5. mintákat 10 egymást követő napon ke- 5 resztül, majd az állatokat 45 napon keresztül tartjuk megfigyelés alatt Az eredményeket a 2. táblázatban közöljük (1-e, 1-f, 1-i, 1-j, 1-k).
Kontrollként ugyanezt az eljárást ismételjük, de az egereknek vagy nem adunk ACR-t (1-b, 1-c), vagy 10 kereskedelmi forgalomban lévő albuminnal (12,5 mg/kg, Sigma Co. Ltd. gyártási szám: 45F-9339) kezeljük az egereket az egér aszcitesz-származék helyett, az ACR-kezelés után (1-h).
A kísérleti eredményből meghatározzuk az átlagos túlélési időket (továbbiakban M.S.T.) vagy az átlagos túlélési napok arányát (T/C %), és az átlagos túlélést napokban, valamint a középső egér (5. elpusztult egér) túlélési idejét napokban.
- 2. táblázat
Tumorellenes hatás MM46 ráksejtek ellen, egérben (1. vizsgálat)
| NapTcsopon | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 45 | Átlagos túlélés (nap)±S. D. | Túlélők száma | Középsí egér túlélése (nap) | M.S.T | T/C% | |
| l-a | MM46 | 1 | 2 | 4 | 3 | / | / | / | / | / | / | / | / | / | / | z | z | z | z | 20,9 ±0,7 | 0 | 21 | 21,6 | ||
| 1-b | + 3. minta | 1 | 3 | 2 | 3 | 1 | / | / | / | / | / | / | / | / | / | z | z | z | z | 20,9 + 1,4 | 0 | 21 | 21,8 | 101 | |
| 1-c | + 5. minta | 1 | 5 | 3 | 1 | / | / | / | / | / | z | / | / | / | z | z | z | z | 21,3 ± 1,0 | 0 | 21 | 21,9 | 101 | ||
| 1-d | +ACR | 1 | 3 | 3 | 2 | 1 | / | / | / | z | z | 1 | z | 26,8+1,3 | 0 | 27 | 27,5 | ||||||||
| 1-e | + ACR+1. minta | 1 | 1 | 2 | 1 | 2 | 1 | 1 | 28,0 ±1,8- | 1 | 28 | 29,3 | |||||||||||||
| 1-f | + ACR + 2. minta | 2 | 1 | 1 | 3 | 1 | 1 | 28,0 ±2,3 | 1 | 29 | 29,5 | 107 | |||||||||||||
| 1-g | +ACR | 1 | 1 | 1 | 5 | 1 | 1 | / | / | z | z | z | z | z | 24,5 ±2,8 | 0 | 25 | 25,5 | |||||||
| 1-h | +ACR + albumin | 1 | 1 | 2 | 2 | 2 | 1 | 26,7±3,0 | 1 | 27 | 27,8 | 109 | |||||||||||||
| 1-i | + ACR+3. minta | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | * | 4 | 30 | 31,5 | 124 | |||||||||||||
| i-j | + ACR + 4. minta | 1 | 2 | 1 | 1 | 1 | * | 4 | 28 | 32,5 | 127 | ||||||||||||||
| 1-k | +ACR+5. minta | 1 | 3 | 1 | 1 | * | 4 | 29 | 30,5 | 120 |
* nem lehetett kiszámolni, mert túl sok a túlélő állat S. D. standard deviáció
Kísérleti eredmények (2. táblázat)
A kontrollcsoportba (l-a) tartozó egereknél - amelyekbe csak MM46 sejteket transzplantáltunk - kb. a 10. naptól megfigyelhetjük az aszciteszfolyadék gyors felgyűlését a hasüregben, az állatok a 19. nap körűi kezdenek pusztulni a transzplantálástől számítva, és a
22. napig az összes állat elpusztul.
Azokban a kontrollcsoportokban, amelyekben az egereknek az MM46 sejtek transzplantálását követően csak találmány szerinti eljárással előállított aszciteszszármazékokat (3. és 5. mintát) adagolunk 10 napon keresztül ACR nélkül (1-b vagy 1-c), nem tapasztalunk lényeges különbséget a kezeletlen kontrolihoz viszonyítva az átlagos túlélési időkben, az 21 nap körüli érték, és nem tapasztalunk szignifikáns tumorellenes hatást ezekben az esetekben, azaz nem mutatható ki élettartam-meghosszabbodás, ha az 1. példa szerint előállított aszcitesz-származékokkal egyedül kezeljük az MM56 sejteket hordozó egereket.
Azokhoz a kontrollcsoportokhoz tartozó egerek, amelyeket MM46 sejtekkel transzplantálunk, majd a következő napon ACR-rel kezelünk, de aszcitesz-származékot nem adunk (1-d és 1-g), néhány nappal tovább élnek, mint az 1-b és 1-c kontrollcsoportba tartozó egerek, amelyeket ACR nélkül, csak aszcitesz-származékokkal kezelünk, és az 1-d és 1-g kontrollcsoport összes állata elpusztul a 29. napig.
Az 1-e kontrollcsoportban, amelynek az MM46 sejtek transzplantálása és a következő napon ACR beadása után 10 napon keresztül folyamatosan adjuk az 1. minta szerinti aszcitesz-származékot; az 1-f kontrollcsoportban, amelynek a 2. minta szerinti aszciteszszármazékot adjuk 10 napon keresztül; és az 1-h kontrollcsoportban, amelynek a kereskedelmi forgalomban
HU 205 257 Β kapható humán szérumalbumint adjuk 10 egymást követő napon át; csoportonként egy túlélő egér lesz. Ezek szerint az eredmények szerint nincs élettartam-meghosszabbító hatás egyik esetben sem.
Az 1-i, 1-j és 1-k csoportba tartozó egerek esetén, 5 amelyeket ACR-rel és a 3., 4. és 5. minta szerinti aszcitesz-származékkal kezelünk, nagy túlélési arányt tapasztalunk, és a túlélő állatok még a 45. napon is életben vannak. Nem észlelünk jelentős különbséget az élettartam meghosszabbodásában a 3., 4. és 5. minta 10 alkalmazása esetén.
A fenti vizsgálatokból származó túlélési görbéket négy reprezentáns csoportra az 1A-1D ábrákkal szemléltetjük.
A következő kísérletsorozatokban vizsgált 3 ’, és 3 ’2 15 minta jelölésű aszcitesz-származékokat a 3. mintával azonos módon állítjuk elő, és a 2. és 3. vizsgálatot az 1. vizgálattal azonos módon hajtjuk végre. Az eredményeket a 3. táblázatban foglaljuk össze. Három kontrollcsoportot választunk, mégpedig egy olyan csoportot, amelynek a vizgált mintával azonos dózisban 10 napon keresztül fiziológiás sóoldatot adunk (0,1 ml/egér, minden alkalommal) az MM46 sejtek transzplantálását követően; vagy amelynek az MM46 sejtek transzplantálása után ACR-t adunk, és azt a csoportot, amelynek az aszcitesz-származék helyett 10 napon keresztül kereskedelmi forgalomban kapható humán szérumalbumint adunk.
3. táblázat
Tumorellenes hatás MM46 ráksejtek ellen, egérben (2. vizsgálat)
| Nap/csoport | 7 | 8 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 45 | Adagos túlélés (nap) ±S. D. | Túlélők szúrna (9 ΟΔΧ) | Közép- ső egér túlélé- se (nap) | M.S.T | T/C% | |
| 2-a | MM46 + sóoldat | 1 | 1 | 5 | 2 | 1 | / | / | / | / | / | / | / | / | / | / | 21,2 ±1,2 | 0 | 21 | 21,7 | |||||
| 2-b | + ACR | 2 | 3 | 3 | 1 | 23,1 ±1,3 | 1(0 | 0 | 1 | 0) | |||||||||||||||
| 2-c | + ACR + albumin | 1 | 1 | 2 | 1 | 2 | 1 | 25,5 ±2,2 | 2(0 | 0 | 2 | 0) | |||||||||||||
| 2-d | + ACR + albumin | 2 | 2 | 1 | 1 | 1 | 25,1 ±2,4 | 3(3 | 0,0 | 0) | 26 | ||||||||||||||
| 2-e | + ACR + 3*i minta | 1 | 1 | 2 | * | 6(2 | 3 | 0 | 1) | ||||||||||||||||
| 2-f | + ACR + 3’, minta | 1 | 1 | 1 | 2 | 2 | * | 3(1 | 0 | 0 | 2) | ||||||||||||||
| 2-g | + ACR + 3’2 minta | 1 | 2 | 1 | 1 | * | 5(2 | 1 | 1 | 1) | |||||||||||||||
| 2-h | + ACR + 3’2 minta | 1 | 2 | 2 | 2 | 1 | 1 | 1 | / | / | / | / | 26,7 ±1,8 | 0 | 26 | 27,3 | 118 |
(3. vizsgálat)
| Naptaoport | 7 | 8 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 45 | Átlagos túlélés (nap) ±S. D. | Túlélők száma (9 ΟΔΧ | Közép- ső egér túlélé- se (nap) | M.S.T | T/C% | |
| 3-a | MM46 + sóoldat | 3 | 1 | 5 | 1 | / | / | / | / | / | / | / | / | / | / | / | 21,4 ±1,0 | 0 | 22 | 22,3 |
HU 205 257 Β
| Napfcsopori | 7 | s | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 45 | Átlagos túlélés (nap) ±S.D. | Túlélők száma (0 ΟΔ.Χ | Közép- ső egér túlélé- se (nap) | M. S.T | T/C% | |
| 3-b | + ACR | 1 | 1 | 1 | 2 | 3 | 1 | 24,2 + 2,1 | 1(0 | 0 | 0 | 1) | |||||||||||||
| 3-c | + ACR + albumin | 1 | 2 | 3 | 1 | 1 | 1 | 25,1 + 1,7 | 1(1 | 0 | 0 | 0) | |||||||||||||
| 3-d | + ACR + albumin | 1 | 1 | 2 | 3 | 2 | 1 | / | / | f | / | / | 24,5 ± 2,2 | 0 | 25 | 25,5 | 101 | ||||||||
| 3-e | + ACR + 3’, minta | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | * | 4(3 | 0 | 1 | 0) | |||||||||||||
| 3-f | +ACR + 3’, minta | 2 | * | 8(2,2,2 ,2) | * | * | * | ||||||||||||||||||
| 3-g | + ACR + 3'2 minta | 2 | 1 | 2 | 1 | * | 4(2 | 1 | 0 | 1) | |||||||||||||||
| 3-h | l· ACR + 3’2 minta | 1 | 4 | 1 | 1 | +1 | 3(0 | 2 | 1 | 0) |
* nem lehet meghatározni, mert túl kevés a túlélő immunizált egér Ο 1 mm-es szubkután tumorok
X kísérletből kizárva (4 mm-es, vagy annál nagyobb szubkután tumorok) Δ nem tiszta (2-3 mm-es szubkután tumorok)
Kísérleti eredmények (3. táblázat)
Azokban a kontrollcsoportokban, amelyeknek az 35 MM46 sejtek transzplantálását követően ACR-t adunk (2-b és 3-b), az élettartam valamivel hosszabb, mint azokban a kontroliokban, amelyeknek csak fiziológiás sőoldatot adunk (2-a és 3-a), de végül csak 1-1 egér marad életben a 2-b és 3-b csoportban. A 2-a és 3-a 40 csoportban az injekcióstű szúrás! ingere sem vált ki élettartam-meghosszabbodást.
Azokban a kontrollcsoportokban, amelyeknek az MM46 sejtek transzplantálását követően ACR-t és kereskedelmi forgalomban kapható humán szérum- 45 albumint adunk (2-c és 3-c), az élettartam-hosszabbodás valamivel nagyobb, mint a 2-b és 3-b kontrollcsoportban, de a kísérlet végén csak 1, illetve 2 egér marad életben.
Azokban a csoportokban viszont, amelyeknek ACR- 50 t és találmány szerinti eljárással előállított aszciteszszármazékot (3\ vagy 3’2 mintát) adunk (2-d, 2-e, 3-d és 3-e), a pusztulás később következik be, mint a kontrollcsoportokban, és a túlélő állatok száma is nagyobb a transzplantálás utáni 45. napon, így igen jelentős 55 élettartam-meghosszabbodást állapíthatunk meg.
A 2. és 3. vizsgálatsorozatból származó túlélési görbéket néhány reprezentáns csoportra a 2. és 3. ábrákon szemléltetjük.
A fenti eredményekből nyilvánvaló, hogy az 1. pél- 60 da szerinti eljárással előállított aszcitesz-származékokban jelentős rákellenes hatással rendelkező anyag keletkezik.
' 2. példa
Rákos betegeken immunterápiát-úgynevezett Satoféle terápiát [Research Report, 1979: Research on Cancer Immun Surveillance Therapy, kiadó: Gan Men-eki Shinkoh Zaidan (Cancer Immunity Promotion Foundation), Japán] - alkalmazunk, és a javulás jeleit mutató betegek hasüregéből aszciteszt vonunk ki. Az aszciteszből a sejtmaradványokat az 1. példában említett centrifugálással eltávolítjuk és a felülúszót fagyasztva szárítjuk, majd Cohn-féle frakcionálással előállítjuk belőle a Cohn-féle V frakciót.
Az így kapott Cohn-féle V frakcióban lévő rákellenes gyógyászati hatású anyag (BRP) specifikus rákellenes hatását az alábbi I-IH. eseten szemléltetjük.
I. eset
Nem: nő
Kor. 44 év
Betegség: A. T. L. A.
Klinikai kórkép és kezelés:
(1) Láz és általános kimerültség panaszok alapján az orvos A. T.L. A.-tdiagnosztizált.
(2) Kórházba került és kivizsgálták.
HU 205 257 Β (3) A vizsgálat után a (i) 2. napon, (ii) 5. napon és (iii) 9. napon a következő injekciókat kapta: Aclarcinon 10 mg, Pepleo 10 mg, MMC 2 mg, Oncobin 1 mg, Predonin 20 mg.
(4) A 11. napon 1,25% 2. példa szerinti BRP-t tártál- 5 mazó 24 ml desztillált vizet kapott infúzió formájában.
(5) A beteg hemogramja és immunválasza normális lett, és a BRP-kezelés utáni 77. napon a kórházból teljesen gyógyultan bocsátották el. A vizsgálati adatok a 4. táblázatban találhatók.
4. táblázat
Kezelés és vizsgálati eredmények (I eset)
| Vizsgálat napján | 2. nap | 5 nap múlva | 9 nap múlva | 10 nap múl· va | 11 nap múl· va | 34 nap múl· va | 59 nap múlva | 73 nap múlva | 88 nap múlva | ||
| Vörösvérsejt | 500x10“ | 419 | 317 | 257 | 251 | 388 | |||||
| Fehérvérsejt | 50000 | 34100 | 21400 | 6 200 | 4100 | 4300 | |||||
| Vérlemezke | 24x104 | 12 | 17 | 33 | 23 | ||||||
| Hemoglobin | 100% | 85% | 62% | 49% | 49% | 77% | |||||
| Hematokrit | 45% | 37% | 24 ml, 1,25% | 28% | 23% | 22% | 36% | ||||
| Monocita | 1 | Aclarcinon | 0 mg | 1 | 3 | 1 | 6 | ||||
| Limfocita | 90 | Pepleo ' 10 mg | BRP-t tártál- mazó | 82 | 35 | 7 | 3 üveg friss vér | 22 | |||
| Neutrofil (pálcika) | 0 | MMC | 2 mg | 2,5 | 2,0 | 9,0 | 17 | ||||
| Neutrofil (Polimorf mag) | 8,0 | Oncobin | 1 mg | deszt. víz infúzió | 16,5 | 9,0 | 83 | 52 52 52 | |||
| Bazocita | 0,5 | Predonin | 20 mg | ||||||||
| CD8 | 0,9% | injekció | 1,2% | 1,8% | 17,3% | 42,3% | |||||
| CD4 | 99,1% | 94% | 96% | 72,6% | 43,2% | ||||||
| CD4/CD8 | 109 | 78 | 53 | 4,2 | 1,02 | ||||||
| TPA | 110 | 120 | 125 | 61 | 97 | ||||||
| CA19-9 | 13 | 120 | 164 | 44 | 26 |
II eset
Nem: nő
Kor: 38 év
Betegség: bal mellrák, áttétel a tüdőre 40
Kórelőzmény: a bal mell rákjának radikális operációval való eltávolítása után 11 évvel és 8 hónappal fokozatosan növekedő áttételek észlelhetők mind a két tüdőn. A következő évben mindkét tüdőben mellhártyaizzad- 45 mányt találtak. Később mindkét tüdő alsó részében is rákos árnyék és hydrothorax (mellvízkór) található.
Kezelés: 50 (1) Kórházba szállítás.
(2) 31 nap múlva 24 ml, 1,25% 2. példa szerinti BRP-t tartalmazó injekciókészítésre alkalmas desztillált vizet kapott a beteg intravénás injekció formájában.
(3) A BRP intravénás injektálása után kedvező váltó- 55 zások figyelhetők meg, mint a tüdőn lévő árnyék keskenyedése, 2 hét múlva a hemogram javul, normalizálódott CD4/CD8, tumorra utaló jelek csökkenése.
A vizsgálati adatokat az 5. táblázatban foglaljuk össze. 60
5. táblázat
Kezelés és vizsgálati eredmények (II eset)
| Vjzgálat 1. napján | 16 nap múlva | 31 nap múlva | 47 nap múlva | |
| Vörösvér- sejt | 367x104 | 378x104 | 24 ml, 1,25% BRP-t tartalmazó deszt. víz, iv. | 430x104 |
| Fehérvér- sejt | 117xl02 | 69xl02 | 69X-102 | |
| CD4/CD8 | 1,15 | 0,99 | 1,2 | |
| CEA | 2,0 | 1,9 ' | 0,9 | |
| IAP | 338 | 390 | 283 | |
| CA19-9 | 280 | 300 | 91 | |
| CA 125 | 410 | 310 | 290 |
III eset
Nem: nő
Kor: 47 év
Betegség: 1. torok felső szakaszán lévő rák áttétele a tüdőre
HU 205 257 B
2. jobb oldali rákos mellhártyagyulladás
3. áttétel a jobb combra és májra
Kórelőzmény és első kórházi vizsgálat eredménye:
A torok felső szakaszát műtötték, majd radioaktív terápiát alkalmaztak.
Két év és két hónap múlva a beteg köpetét vizsgálták, és a jobb tüdőn üreges árnyékot találtak. Ez azt jelenti, hogy a tüdőáttételt megerősítették.
Nyolc hónap múlva csont-szcintillációval áttételfészket találtak a jobb combcsontban, és a mellkasi 10 árnyék is nagyobbodott.
Egy hónappal később a beteg köhögésre, kopetre és a jobb mellkasból a jobb vállra terjedő fájdalomra panaszkodott. A mellkas röntgenfelvételén diffúz árnyék látszott a jobb mellkasban, míg a mellkas ront- 15 genfelvétele 2 cm átmérőjű csontszövetoldódás képe látszott.
Kezelés:
(1) Kórházba szállítás.
(2) Az első vizsgálat után 12 nappal 24 ml, 1,25% 2. példa szerinti BRP-t tartalmazó injekciókészítésre al5 kalmas desztillált vizet kapott a beteg intravénás injekció formájában.
(3) Az első vizsgálat után 62 nappal 24ml, 1,25% 2. példa szerinti BRP-t tartalmazó injekciókészítésre alkalmas desztillált vizet injektáltunk a betegnek, hasüregbe.
(4) Az első vizsgálat után 33 nappal a mellkasi szúró fájdalom fokozatosan enyhült, és a légzési nehézségek is csökkentek, és a 117. napon mindezek a panaszok megszűntek.
A vizsgálati adatokat a 6. táblázatban foglaljuk öszsze.
6. táblázat
Kezelés és vizsgálati eredmények (III. eset)
| Vizsgálat L napján | 12 nap múlva | 33 nap múlva | 62 nap múlva | 62 nap múlva | 105 nap múlva | |
| CD4/CD8 | 0,55 | 24 ml, 1,25% B RP-t tartalmazó deszt. víz, intravénásan | 0,66 | 24 ml, 1,25% BRP-t tartalmazó deszt. víz hasüregbe | 0,73 | 0,82 |
| CEA | 1,2 | 1,2 | 0,9 | 0,9 | ||
| a-FP | 3,0 | 2,7 | 2,6 | 2,6 | ||
| Mellkasi hydrothorax | III. osztály | II. osztály | I. osztály |
SZABADALMI IGÉNYPONTOK
Claims (3)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás rákellenes gyógyászati hatású anyag előállítására, azzal jellemezve, hogya) - egér hasüregébe MM46 sejteket transzplantá- 35 lünk;- a hasüregbe aklarbicin-hidrogén-kloridot adagolunk;- egészséges egérből nyert lépsejteket injektálunk intravénásán a rákos sejtekkel transzplan- 40 tált egérbe;- a transzplantálást követő 21-25. napon a hasüregből összegyűjtjük és aszcitesz-folyadékot és- az aszciteszfolyadék felülúszóját centrifugáljuk 45 és a sejtmaradékot eltávolítjuk, majd Cohn-féle frakcionálással izoláljuk a felülűszóból a Cohnféle V frakciót;vagyb) - SATO-féle immunszabályozási terápiával kezelt és fokozódó immunrendszeri választ adó rákos beteg hasüregéből aszcitesz-folyadékot gyűjtünk; és- az aszciteszfolyadék felülúszóját centrifugáljuk és a sejtmaradékot eltávolítjuk, majd Cohn-féle frakcionálással izoláljuk a felülűszóból a Cohnféle V frakciót.
- 2. Az 1. igénypont szerinti a) eljárás, azzal jellemezve, hogy egérként C3H/He egeret használunk.
- 3. Eljárás gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerinti a) vagy b) eljárással előállított rákellenes gyógyászati hatású anyagot a gyógyszerkészítésben szokásosan használt hordozó- és/vagy egyéb segédanyagokkal összekeverjük és gyógyászati készítménnyé alakítjuk.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63199688A JPH0688906B2 (ja) | 1988-08-10 | 1988-08-10 | 制癌作用を有する生物活性物質の製造方法およびそれにより得られる制癌作用を有する生物活性物質 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT53808A HUT53808A (en) | 1990-12-28 |
| HU205257B true HU205257B (en) | 1992-04-28 |
Family
ID=16411959
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU894099A HU205257B (en) | 1988-08-10 | 1989-08-10 | Process for producing antitumoral pharmaceutical material and pharmaceutical compositions containing them as active components |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0354492B1 (hu) |
| JP (1) | JPH0688906B2 (hu) |
| KR (1) | KR940003053B1 (hu) |
| AT (1) | ATE110733T1 (hu) |
| AU (1) | AU616548B2 (hu) |
| CA (1) | CA1326996C (hu) |
| DE (1) | DE68917830T2 (hu) |
| DK (1) | DK386689A (hu) |
| ES (1) | ES2059656T3 (hu) |
| FI (1) | FI100457B (hu) |
| HK (1) | HK1005190A1 (hu) |
| HU (1) | HU205257B (hu) |
| IL (1) | IL91251A (hu) |
| NO (1) | NO179327C (hu) |
| NZ (1) | NZ230250A (hu) |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4261976A (en) * | 1978-10-03 | 1981-04-14 | The Massachusetts General Hospital | Method and glycoprotein composition for inhibition of growth of transformed cells and tumors |
| JPS57140725A (en) * | 1981-12-28 | 1982-08-31 | Dainippon Pharmaceut Co Ltd | Physiologically active substance having carcinostatic action |
| JPS58141785A (ja) * | 1982-02-16 | 1983-08-23 | Nippon Shinyaku Co Ltd | 抗腫瘍物質の製法 |
| JPS5982315A (ja) * | 1982-11-02 | 1984-05-12 | Yamanouchi Pharmaceut Co Ltd | 腫瘍壊死因子の製造法 |
| JPS6067429A (ja) * | 1983-09-22 | 1985-04-17 | Sendai Biseibutsu Kenkyusho | 生理活性物質の製造法 |
| JPS6248631A (ja) * | 1985-08-26 | 1987-03-03 | Dai Ichi Seiyaku Co Ltd | 抗腫瘍血清因子 |
| JPS6256430A (ja) * | 1985-09-04 | 1987-03-12 | Takeda Chem Ind Ltd | 抗腫瘍性酸性糖蛋白 |
-
1988
- 1988-08-10 JP JP63199688A patent/JPH0688906B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-08-04 DE DE68917830T patent/DE68917830T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-08-04 ES ES89114467T patent/ES2059656T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-08-04 EP EP89114467A patent/EP0354492B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-08-04 AT AT89114467T patent/ATE110733T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-08-07 DK DK386689A patent/DK386689A/da not_active Application Discontinuation
- 1989-08-08 AU AU39365/89A patent/AU616548B2/en not_active Ceased
- 1989-08-08 IL IL9125189A patent/IL91251A/en not_active IP Right Cessation
- 1989-08-08 NO NO893194A patent/NO179327C/no unknown
- 1989-08-08 NZ NZ230250A patent/NZ230250A/en unknown
- 1989-08-09 KR KR1019890011305A patent/KR940003053B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1989-08-09 FI FI893765A patent/FI100457B/fi not_active IP Right Cessation
- 1989-08-09 CA CA000607897A patent/CA1326996C/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-08-10 HU HU894099A patent/HU205257B/hu not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-05-20 HK HK98104353A patent/HK1005190A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK386689A (da) | 1990-02-11 |
| HUT53808A (en) | 1990-12-28 |
| ES2059656T3 (es) | 1994-11-16 |
| KR940003053B1 (ko) | 1994-04-13 |
| FI893765A0 (fi) | 1989-08-09 |
| IL91251A0 (en) | 1990-03-19 |
| FI893765A (fi) | 1990-02-11 |
| EP0354492B1 (en) | 1994-08-31 |
| AU616548B2 (en) | 1991-10-31 |
| CA1326996C (en) | 1994-02-15 |
| NO179327B (no) | 1996-06-10 |
| KR900002790A (ko) | 1990-03-23 |
| IL91251A (en) | 1994-12-29 |
| AU3936589A (en) | 1990-02-15 |
| EP0354492A3 (en) | 1990-08-01 |
| HK1005190A1 (en) | 1998-12-24 |
| DK386689D0 (da) | 1989-08-07 |
| ATE110733T1 (de) | 1994-09-15 |
| JPH0688906B2 (ja) | 1994-11-09 |
| FI100457B (fi) | 1997-12-15 |
| NO893194D0 (no) | 1989-08-08 |
| JPH0248532A (ja) | 1990-02-19 |
| NO179327C (no) | 1996-09-18 |
| NO893194L (no) | 1990-02-12 |
| EP0354492A2 (en) | 1990-02-14 |
| DE68917830D1 (de) | 1994-10-06 |
| DE68917830T2 (de) | 1994-12-22 |
| NZ230250A (en) | 1992-09-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Marquet et al. | Interferon treatment of a transplantable rat colon adenocarcinoma: importance of tumor site | |
| CH664974A5 (fr) | Production du facteur de lyse des cellules-cibles. | |
| JPS58157723A (ja) | インタ−ロイキン２を含有してなる免疫療法剤 | |
| EP0231819B1 (en) | Pharmaceutical agent for the treatment of myelogenous leukemia | |
| SANDS et al. | Disseminated infection caused by Cunninghamella bertholletiae in a patient with beta-thalassemia: case report and review of the literature | |
| CA2049548C (en) | Lps-producing bacteria, lpss, and lps-containing medicines and veterinary medicines | |
| Ito et al. | Effect of human leukocyte interferon on the metastatic lung tumor of osteosarcoma. Case reports | |
| KR101609179B1 (ko) | 다발성 경화증의 예방 및 치료 효과가 강화된 말똥진흙버섯의 추출 분획물의 제조방법 | |
| AU758856B2 (en) | Compositions containing muscle-derived active agents | |
| KR940003053B1 (ko) | 제암 작용이 있는 생물 활성 물질의 제조방법 및 이에 의해 수득한 물질 | |
| CN110357881B (zh) | 苦木中β-卡波林型生物碱的提取工艺和应用 | |
| EP0086475A2 (en) | A method of manufacturing anti-tumor substances | |
| YAMAMURA et al. | SUCCESSFUL TREATMENT OF THE PATIENTS WITH MALIGNANT PLEURAL EFFUSION WITH BCG CELL-WALL SKELTEON | |
| JPS6011890B2 (ja) | ツモアネクロシスフアクタ−の製造方法 | |
| JPS6019720A (ja) | ヒト内来性癌制御因子およびその製造法 | |
| Hagenbeek et al. | BCG treatment of residual disease in acute leukemia: studies in a rat model for human acute myelocytic leukemia (BNML) | |
| Steele Jr et al. | In vivo effect and parallel in vitro lymphocyte-mediated tumor cytolysis after phase I xenogeneic immune RNA treatment of patients with widespread melanoma or metastatic renal cell carcinoma | |
| NO850152L (no) | Fremgangsmaate ved fremstilling av human, endogen cancerregulerende faktor. | |
| JPH0764744B2 (ja) | 標的細胞障害性因子とヒトインタ−フェロンとを有効成分として含有する悪性腫瘍治療剤 | |
| JPS6067429A (ja) | 生理活性物質の製造法 | |
| KR870001433B1 (ko) | 적상적혈구(的狀赤血球) 붕괴인자의 제조 방법 | |
| Fidler | Macrophage deficiency in tumor bearing animals: Control of experimental metastasis with macrophages activated in vitro | |
| JPS59501786A (ja) | 免疫刺戟体 | |
| KR0183443B1 (ko) | 연쇄상 구균으로부터 항종양 및 면역증가 활성성분의 제조방법 | |
| CN117482067A (zh) | 一种中性粒细胞膜包裹pim2激酶小分子抑制剂的纳米颗粒及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HPC4 | Succession in title of patentee |
Owner name: BIO DEFENCE INSTITUTE CO. LTD., YOKOHAMA-SHI, JP |
|
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |