HU203046B

HU203046B - Process for producing ophtalmological compositions containing cyclosporin

Info

Publication number: HU203046B
Application number: HU895444A
Authority: HU
Inventors: Ronald Edward Peeples
Original assignee: Sandoz Ag
Priority date: 1988-10-26
Filing date: 1989-10-25
Publication date: 1991-05-28
Also published as: IL92120A0; CH679210A5; AU4371589A; GB2224205A; NZ231131A; DK531289D0; KR900005973A; NO894266L; FI895064A0; CA2001502A1; NL8902657A; HU895444D0; IL92120A; BE1003578A4; MY106271A; IT1237824B; GB8924040D0; DE3935517A1; PT92120A; NO894266D0

Description

A találmány tárgya eljárás olyan új, szemészeti — azaz lokálisan a szembe adagolható — gyógyszerkészítmények előállítására, melyek aktív hatóanyagként ciklosporint tartalmaznak, és alkalmasak a szem és az azt környező területek betegségeinek és kóros állapotainak kezelésére.

A ciklosporinok a gyógyszerészeti szempontból hasznos peptidvegyületek egyik nagy és ismert csoportját alkotják, melyekpéldául immunszupresszív, gyulíaílásgátló és/vagy parazitaellenes hatásúak és/vagy befolyásolni képesek egyes tumorok daganatellenes, illetve citosztatikus szerekkel végzett kezeléssel szembeni rezisztenciáját. A ciklosporinok közé tartoznak például a természetben előforduló gombák anyagcseretermékei (metabolitjai), például a ciklosporin A, B, C, D és G, éppúgy, mint a szintetikus és félszintetikus ciklosporinok, például a dihidro- és az izociklosporinok (1. például a 4 108 985., a4210 581.ésa4 220 641. számú amerikai szabadalmi leírásokat), a [(D)-Ser]°-ciklosporin (1. a 4 384 996. számú amerikai szabadalmi leírást), az [0-acetil-(D)Ser]⁸-eiklosporin (1. a 4 764 503. számú amerikai szabadalmi leírást), a [f)-fluoro-(D)Ala]-ciklosporin (1. a 2 206 119A. számú brit szabadalmi leírást, a [Val]-[(D)-metiltÍo-Sar]²- és a [Dihidro-MeBmt]¹-[Val]²-[(D)metil-tio-Sar]³ciklosporin (1. a 4 703 033. számú amerikai szabadalmi leírást), és még igen sok egyéb vegyűlet.

A ciklosporinok közül napjainkig a ciklosporin A-t vizsgálták a legszélesebb körben. A szer SANDIMMUM vagy SANDIMMUNE márkanéven kapható a kereskedelmi forgalomban. Kimutatták, hogy a ciklosporin A szelektíven gátolni képes számos T-limfocita funkciót. Ide sorolhatjuk az érésgátlást és az aktivált T-limfocitáknak a sejtek által közvetített immunválaszok során történő megjelenésének gátlását. A szert jelenleg sikeresen és széles körben alkalmazzák a szervtranszplantátumok kilökődésének megakadályozására. A ciklosporin A-t szisztémásán is adagolják a szem gyulladásos és autoimmun betegségeinek, például az uveitisnek a kezelésére. A szisztémás kezelés mellékhatásai miatt azonban a ciklosporin A csak korlátozott mértékben volt alkalmazható az említett szembetegségek terápiája során.

A ciklosporin A-nak lokálisan a szembe történő hatékony alkalmazása során nagymértékben csökkenthetők vagy kiküszöbölhetők a szisztémás adagolás mellékhatásai azáltal, hogy a szer aktivitása a kezelendő területre összpontosul. Az ilyen típusú kezelést javasolja például a 4 649 047. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás. A ciklosporin A-nak a szem betegségei és kóros állapotai kezelésére történő felhasználhatóságát és hatékonyságát továbbra is korlátozta azonban az a tény, hogy nem állt rendelkezésre lokális kezelésre alkalmas és hatékony, megfelelő gyógyszerkészítmény. Olyan szerre van szükség, amely nem okoz a betegnek kellemetlen mellékhatásokat, és amelynek adagolásmódja előnyös, azaz nem igényel túlzottan gyakori adagolást, és ugyanakkor biztosítja a gyógyszer hatóanyagának megfelelő kibocsátását, mind a szem külső, mindpedig — különösképpen — a belső részei felé.

Hasonló megfontolások érvényesek a szakterüle2 ten ismert egyéb ciklosporinvegyületekre is, például azokra, melyeket immunszupresszív, illetve gyulladásgátló hatásuk miatt alkalmazunk, például a ciklosporin G-re, melyet [Nva]^z-ciklosporin néven is ismerünk, illetve említünk majd a továbbiakban.

A 4 649 047. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás a szem autoimmun betegségeinek kezelésére ciklosporin helyi alkalmazását javasolja. Az ismertetett kezelési módszer egyik változata szerint a ciklosporinnal végzett kezeléshez a hatóanyagot gyógyászatilag alkalmas hordozóval együtt alkalmazzák. A lehetséges hordozók számos képviselőjét sorolják fel, így növényi, ásványi és szintetikus olajokat, dimetil-szulfoxidot, alkoholokat, cellulóz-származékokat és hasonlókat. A lehetséges hordozók között nem tesznek sorrendi megkülönböztetést, és arra sincs utalás, hogy komplex rendszer, azaz a hordozók kombinációja előnyös lenne.

Találmányunk olyan szemészeti gyógyszerkészítmény előállítására vonatkozik, amely hatóanyagként ciklosporint és hordozóanyagként növényi olaj és vazelin elegyét tartalmazza.

Ilyen készítmény a technika állásából nem ismert, és az ismert készítményekhez képest meglepő előnyei vannak.

A találmány szerint előállított gyógyszerkészítmények lokálisan alkalmazhatók, azaz a szem felületére, illetve felületén, például a szaruhártyára vagy a szaruhártya hámrétegére, vagypedig a szem közvetlen közelében lévő területekre, például a felső vagy az alsó szemhéj belső felszínére.

A találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítmények lokális alkalmazása, amint azt már említettük, hatékonynak bizonyult a szem, illetve az azt körülvevő vagy azzal összeköttetésben álló szervek, illetve szövetek betegségeinek, kóros állapotainak a kezelése során, például a könnymirigy és a könnyelvezető csatornarendszerben elsősorban immunológiai jellegű, illetve gyulladásos betegségei vagy kóros állapotai esetében. Pontosabban, a találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítmények olyan betegségek vagy kóros állapotok kezelésében bizonyultak hasznosnak, melyek etiológiájának összetevőjeként vagy részeként szerepet játszik a nemkívánatos fokozott immunválasz, illetve valamilyen gyulladásos reakció vagy esemény, különös tekintettel a szem autoimmun megbetegedéseire. Azok a betegségek és kóros állapotok, amelyek a találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítmények segítségével kezelhetőek, a következők lehetnek többek között: uveitis anterior és posterior, krónikus keratitis (szaruhártya-gyulladás), kötőhártyagyulladás (különös tekintettel a tavaszi kötőhártyagyulladásra), tavaszi keratoconjunctivitis (szaruhártya- és kötőhártyagyulladás), keratoconjunctivitis sicca és keratoplasztika — azaz a szaruhártya-átültetéssel kapcsolatos gyógyszeralkalmazás —, valamint általában a szemsebészeti beavatkozások által kiváltott gyulladásos, illetve immunológiai jellegű kóros állapotok. A találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítmények a könnyelválasztás megindítása, illetve fenntartása érdekében is alkalmazhatók, például olyan esetekben, amikor a könnyelvá-2HU 203046Β lasztás — például valamilyen fent említett betegség vagy kóros állapot következtében — károsodott.

A találmány szerinti eljárással készült szemészeti gyógyszerkészítmények — meglepő módon — csak csekély mértékben vagy egyáltalán nem okoznak irritációt vagy kellemetlen mellékhatásokat a betegeknél, és biztosítják a terápiás hatást, amikor a szert előnyös adagolási sémák szerint adagoljuk a szem szaruhártyájára és belső részeire, éspedig az elülső szemcsamokba, a hátulsó szemcsarnokba, az üvegtestbe, a csarnokvízbe, az üvegtest víztartalmába, a szaruhártyára, a szivárványhártyára/sugártestre, a szemlencsébe, az érhártyára/ideghártyára (retinára), illetve az ínhhártyára vagy a szemet körülvevő szervekbe vagy szövetekbe, például a könnylevezető csatornarendszerbe vagy a könnymirigyekbe.

Részletesebben a találmányt az alábbiak szerint jellemezhetjük, első megközelítésben:

A) Szemészeti gyógyszerkészítmény előállítása, mely aktív hatóanyagként ciklosporint tartalmaz; ezen kívül pedig (1) valamilyen, szemészeti szempontból elfogadható növényi olajat és (2) szemészeti szempontból elfogadható vazelint tartalmaz, vivőanyagként.

A találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítmények lokális szemészeti alkalmazást biztosítanak, azaz a szem felületére, például a szaruhártyára vagy a szaruhártya hámrétegére, illetve a szem közvetlen környezetére történő adagolást.

A „szemészeti szempontból elfogadható” kifejezés a szernek a szembe történő, szükséges vagy megengedhető adagolását jelenti, például azt, hogy az adott szer — az alkalmazott dózisokban — biztonságosan alkalmazható lokálisan a szemben.

A találmány szerinti eljárással előállítható gyógyszerkészítményekben előnyösen alkalmazható ciklosporinoknak immunszupresszív vagy gyulladásgátló hatásuk van, példaként említhetjük elsősorban —a fentiekben már ismertetett—ciklosporin A-t. A találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítményekben alkalmazható, további előnyös cildosporinnak tekinthetjük a [Nva]²-ciklosporint. A találmány értelmében előállított gyógyszerkészítmények előnyösen alkalmazhatók meghatározott összetevőkből álló (1) álló- és kenőcsalapanyagot (2) tartalmazó kenőcsök formájában.

A ciklosporinok—például a ciklosporin A — előnyös mennyisége a találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítményekben körülbelül 0,01-2,5 tömeg% közötti értéknek felel meg. (Hacsak másképpen nem jelezzük, a találmány leírásában és a hozzá csatlakozó szabadiami igénypontokban szereplő, valamennyi százalékérték a gyógyszerkészítmény össztömegére vonatkoztatott tömeg% értéket jelent.) Előnyösen a ciklosporin mennyisége körülbelül 0,1 -2,5 %. Legelőnyösebben tehát a ciklosporin körülbelül 0,1,0,5,1,0 illetve 2,0 tömeg%-nyi mennyiségben fordul elő a találmány értelmében előállított gyógyzserkészítményben. Előnyösen az (1) komponens mennyisége körülbelül 25 és 65% között van, előnyösebben körülbelül 25 és 45% között, még előnyösebben körülbelül 35 és 45% között, legelőnyösebben pedig 40 és 45% közötti ér4 téknek felel meg.

A (2) összetevő — a vazelin — előnyösen legalább 25%-os, előnyösebben pedig legalább 50%-os mennyiségben található a találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítményben. Előnyösen a (2) komponens mennyisége körülbelül 25 és 65% között van, előnyösebben körülbelül 50 és 65% között, még előnyösebben körülbelül 50 és 60% között, legelőnyösebben pedig 50 és 55% közötti értéknek felel meg.

A találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítményekben az (1) és (2) összetevők aránya előnyösen körülbelül 1:2 és 2:1 közötti érték (az össztömegre vonatkoztatott tömegarányban kifejezve), például körülbelül 1:1.

Az (1) összetevő bármilyen megfelelő növényi olaj lehet, például olívaolaj, arachiszolaj, kukoricaolaj, ricinusolaj vagy szezámolaj, illetve ezek keveréke. Előnyösen azonban az (1) összetevő kukoricaolajat tartalmaz, például a Handbook of Pharmaceutical Excipients — a továbbiakban „HPE” (”A gyógyszerészeti kötőanyagok kézikönyve”) 91. oldalán leírtak szerint, az Amerikai Gyógyszerészeti Társaság (American Pharmaceutical Association) és a Brit Gyógyszerész Társaság (Pharmaceutical Society of Great Britain) közös közleménye ismeretetésében.

A (2) összetevő bármilyen, megfelelő vazelinkészítmény lehet, például a következők: a fehér vazelin néven ismert tennék (USP= United States Pharmacopoeia —Amerikai Gyógyszerkönyv), a fehér lágy paraffin (BP/EP- British/European Pharmacopoeias — Brit/Európai Gyógyszerkönyv), fehér vazelin vagy vazelin, illetve sárga vazelin (USP), sárga lágy paraffin (BP/EP), sárga petrolátum vagy sárga vazelin. A további meghatározásokat 1. a HPE 194-195. oldalán. Különösen előnyösen alkalmazható (2) összetevők a fehér vazelinkészítmények, pl. amelyek valamilyen színezéket tartalmaznak (Maximum, Lovibond Color — 2” Cell) - ca. 0,5-18Y, 0,5R.

A találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítmények előnyösen valamilyen emulgeálószert (3) is tartalmaznak. Megfelelő összetevőknek (3) tekinthetünk bármilyen, szemészeti szempontból elfogadható emulgeálószert, például a szakterületen általában használtakat. A találmány értelmében előállított gyógyszerkészítményekben előnyösen alkalmazható emulgeálószerek a nem-ionos emulgeálószerek, előnyösen a nem-ionos lanolinszármazékok vagy kivonatok, elsősorban a lanolinalkoholok (1. HPE 164.0), illetve a szterin alapú emulgeálószerek általában. A találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítményekben alkalmazható, előnyös emulgeálószerek példáiként említhetjük azokat a termékeket, amelyeket Amerchol márkanéven forgalmaznak a kereskedelemben, elsősorban az Amerchol 400, C, CAB, H9, L-99,4500 és RC jelű termékek, előnyösen az Amerchol CAB. (A felsorolt termékekkel kapcsolatos további információkat 1. Fiedler: „Lexikon dér Hilfstoffe”, 3rdEdition(1989),pp. 138-139).

Amennyiben a találmány értelmében előállított gyógyszerkészítmények (3) komponenseket is tartalmaznak, azok mennyisége körülbelül 0,5 és 10%

-3HU 203046Β közé esik, előnyösen körülbelül 0,5-5%, még előnyösebben körülbelül 1-2,5%, például 2%.

A találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítmények tartalmazhatnak továbbá bármilyen egyéb, szemészeti gyógyszerkészítményekben található összetevőket is, például tartósítószereket vagy mikrobaellenes szereket. Pontosabban, tartalmazhatnak megfelelő (4) tartósítószereket, például előnyösen klór-butanolt — például vízmentes klórbutanolt — (1. HPE 72-73. o.). Amennyiben a találmány értelmében előállított gyógyszerkészítmény ilyen (4) összetevőket is tartalmaz, azok mennyisége előnyösen körülbelül legfeljebb 5,0%, még előnyösebben legfeljebb körülbelül 2,0%—például körülbelül 0,01 és 2,0% vagy körül beül 5,0% közötti érték —, legelőnyösebben körülbelül 0,1-1,0%, például körülbelül 0,5%. A találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítmények tehát előnyösen például az alábbi Összetevőket tartalmazhatják, a feltüntetett, viszonylagos mennyiségekben:

Ciklosporin (pl, ciki ospor in Avagy

Nva-ciklosporin 0,01-10% (1) 25-65% (2) 25-65% (előnyösen 50-65%) (3) 0,5-10% (4) 0,1-5%

Ezen kívül bármilyen további komponens is alkalmazható, a 100%-os összmcnnyiség eléréséig, ezáltal az (1) és (2) aránya előnyösen körülbelül 1:2 és 2:1 közötti érték (az össztömegre vonatkoztatott tömegarányban kifejezve), és ezáltal az egyes komponensek előnyös tartományait egymástól függetlenül választhatjuk meg, az előzőekben ismertetett értékek közül. Az alábbi példa a találmány értelmében előállított gyógyszerkészítmények szemléltetésére szolgál.

1. példa Alkotórészek

Ciklosporin A	201%
(1) Kukoricaolaj	41,651%
(2) Fehér vazelin	53,91!
(3) nem-ionos lanolinszármazék
(például Amerchol CAB)	1,961%
(4) Klór-butanol (vízmentes)	0,491%
2. példa
Alkotórészek
[Nva]-ciklosporin	2,01%
kukoricaolaj	41,65t%
fehér vazelin	53,91%
Amerchol CAB	1,961%
klór-butanol	0,491%
3. példa
Alkotórészek
Ciklosporin A	0,11%
kukoricaolaj	42,451%
fehér vazelin	55,01%
Amerchol CAB	1,961%
klór-butanol	0,491%

4. példa

Az 1. példában megadott összetételben, de kukoricaolaj helyett 41,65 t% olívaolajat vagy arachiszolajat vagy ricinusolajat vagy szezámolajat alkalmazunk.

A példákban leírtakhoz hasonlóan — 0,1,0,5 és 11% ciklosporint (így ciklosporin A-t) tartalmazó - gyógyszerkészítmények állíthatók elő oly módon, hogy a kívánt aránynak megfelelő mértékben együttesen megemeljük az (1)-(4) összetevbők mindegyikének mennyiségét.

A találmány szerinti — kenőcs formájú — gyógyszerkészítményt ismert eljárások segítségével készíthetjük, például oly módon, hogy az (1) összetevőt hozzáadjuk a (2)-hez, majd körülbelül 35’-60 °C közötti hőmérsékletre melegítjük, átlátszó folyadék előállítása céljából, majd ezt követően az átlátszó folyadékban — állandó keverés közben — feloldjuk a (3) és (4) komponenst, a kenőcs vivőanyagának előállítása céljából. Ezután a ciklosporint old juk fel a folyékony vivőanyagban, majd ezt követően a kenőcs készen áll a végső feldolgozásra. Más esetben az is lehetséges, hogy a ciklosporint oldjuk fel az (1) összetevőben vagy annak egy részében, és az így nyert oldatot azután hozzáadjuk a többi komponenshez, a további feldolgozást megelőzően. A nagy mennyiségben történő előállítás céljából a Ciclosporint előnyösen az (1)-(4) összetevők keverékében oldjuk fel, magas hőmérsékleten, majd fordulatszámú keverőberendezés segítségével. Az íly módo nkeletkezett oldatot azután aszeptikus körülmények között szűrjük, majd steril körülmények között megfelelő tartályokba — például kenőcstubusokba—töltjük, melyek előnyösen legfeljebb körülbelül 5 g—például 3-5 g — kenőcsöt tartalmaznak tubusonként.

A találmány értelmében történő előállítás folyamán a gyógyszerkészítményeket előnyösen megszűrjük — például aszeptikus körülmények között —, a ciklosporin feloldódását követően, illetve a további feldolgozást megelőzően.

A találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítmények terápiás felhasználása céljából a készítményeket előnyösen megfelelő tartályokba töltjük, például olyanokba, melyeket a készítmények közvetlen, lokális szemészeti alkalmazása céljára módosítottak, terveztek megvagy szántak, például olyan — fent már említett — kenőcstubusokba, melyeket viszonylag kis átmérőjű, zárható kimeneti nyílással látunk el, és amelyek segítségével a tubus tartalma könnyen és gyorsan adagolható a szem felületére, illetve felületén, például körülbelül 0,050,2 ml-nyí — például körülbelül 0,05-0,1 ml-nyi — mennyiségben.

A találmány értelmében előállított gyógyszerkészítmények hasznosságát állatkísérleti modellek segítségével — például az alábbiakban ismertetendő vizsgálatokkal —, valamint klinikai eljárások segítségével bizonyíthatjuk.

Vizsgálati módszer

Az eljárás célja egyfelől annak megállapítása, hogyan jut be és tárolódik a radioaktivitás a nyúlszem különböző szöveteibe, másfelől pedig a triciummal jelzett ciklosporin A-t (Ci-3H”) tartalma-4HU 203046Β zó vegyületek egyetlen adagjának lokális alkalmazását követően mérhető szisztémás (vér-) koncentrációk meghatározása. E célokat oly módon valósíthatjuk meg, hogy megvizsgáljuk a CÍ-3H megoszlását a szem különböző szöveteiben, valamint a kapott 5

CÍ-3H vérszinteket (azaz, a szisztémás koncentrációkat).

A Ci-3H-t oly módon állítjuk elő, hogy standard eljárások segítségével triciummal jelöljük a ciklosporin A (-MeBmt-) aminosavgyökét, például úgy, 10 ahogy azt Voges és munkatársai ismertetik az „Izotóppal jelzett vegyületek szintézise és alkalmazása” (Synthesis and Applications of Isotopically Labeld Compounds”) című kötetben (Ed. R.R. Muccino, Elsevier Press Amsterdam, 371-376,1986)szerep- 15 lő, „Tritiated Compounds fór In-Vivo Investigation) című közleményükben. A vegyület tisztaságát és azonosságát NMR spektroszkópia, a TLC/radioaktív TLC arány és a fordított fázisú HPLC módszer segítségével állapítottuk meg. Nem jelzett ciklospo- 20 rin A felhasználásával elkészítettük a CÍ-3H 1:10 arányú hígítását, és ezt alkalmaztuk a vizsgálatok során.

Kísérleteinkhez fehér, New Zealand törzsből származó, 4-6 kilogramm testsúlyú nőstény nyula- 25 kát használtunk (Láb. Rab. Co.). Az állatokat standard nyúlketrecekben helyeztük el, ellenőrzött étrenden (Purina Chow) tartottuk őket, vizet azonban tetszés szerinti mennyiségben fogyaszthattak. A vizsgált készítmény alkalmazását követően körül- 30 belül egy órán keresztül a nyulakat normális, felegyenesedett helyzetkalodába zártuk. A vizsgált vegyületeket 20 μΙ-es, illetve 19,9 mg-os dózisokban adagoltuk, kalibrált pipetta segítségével.

A pipettákat gondosan megtöltöttük oly módon, 35 hogy légbuborékok ne kerüljenek bele, majd a vizsgált készítményt a nyulak min dkét szemének tölcsér alakú, alsó szemhéj alatti zsákszerű részébe vittük be, gondos körültekintéssel. Ezt követően a szemhéjakat egy másodpercig finoman összezárva tartót- 40 tűk, majd elengedtük. Megvizsgáltuk a nyulak szemét, nem észlelhetők-e rajtuk irritációs jelek, irritáció okozta könnyezés vagy homályosság. Ezt a vizsgálatot a Draize-teszt Calgon-féle módosítása szerint végeztük, preparáló lámpát használva a rés- 45 lámpa helyett (Draize, J. H„ „Az élelmiszerekben, gyógyszerekben és kozmetikumokban található kémiai anyagok biztonságosságának vizsgálata” — .Appraisal fór the Safety of Chemicals in Foods,

Drugs and Cosmetics” —, ,Az Egyesült Államok 50

Élelmiszer- és Gyógyszerellenőrző Hivatalában dolgozó egyesülete — Association of Food and Drug Officials of the United States —, texas State Department of Health, Austin, Texas, 1959. A módosítás a Calgon Consumer Products Research 55 Labs — „Calgon-féle kutatólaboratórium fogyasztási termékek vizsgálatára” — alapján történt (Toxicology, 1973).

A gyógyszeradagolást követően 0,3,1,2,4,6,12,

24,48 é 96 órával hármas csoportonként öltük le az 60 állatokat. Ezt közvetlenül megelőzően vérmintákat vettünk a nyulak szélső fülvénáiból. Az állatok leölése oly módon történt, hogy szélső füivénáikba T61 Euthanasia oldatot (Hoechst) fecskendeztünk.

Ezt követően mindkét szemet élettani sóoldattal 65 (0,9% NaCl) öblítettük át, majd anélkül távolítottuk el, hogy a környező vérereket átszakítottuk volna. A szemek felületét gondosan átöblítettük, majd szűrőpapír segítségével megszárítottuk, annak éredekében, hogy eltávolítsunk minden, esetleg a könnyben található gyógyszermaradványt. Ezután a csarnokvizet távolítottuk el egy 26-os méretű, 3/8 hüvelyk —körülbelül 1 cm—hosszúságú tű segítségével, melyhez egy 0,2 millüiteres (ml) pipetta csatlakozott, amit a szaruhártya szélére helyeztünk. A szaruhártyát a széli részen kimetszettük, ezt követően pedig a szivárványhártyát és a sugártestet együttesen távolítottuk el. Ezt követően kivettük a szemlencsét, ésmintát vettünk azüvegtestből is. Ennek megmaradó részét oly módon távolítottuk el a többi szövettől, hogy a szűrőpapír segítségével leitattuk. Ezután az inhártyáról lekapartuk az érhártyát és az ideghártyát, majd mintát vettünk azinhártyának a látóideg közvetlen közelében található részéből. A szennyeződés elkerülése érdekében minden egyes szövetrész eltávolításához tiszta műszereket használtunk. Ezt követően az egyes mintákat átöblítettük, majd szűrőpapírral leitattuk, és égetőtölcsérekbe mértük bele őket. Körülbelül 200 μΐ-nyi vérmintákat szintén égetőtölcsérekbe mértünk. A szövet- és vérmintákat levegő segítségével szárítottuk, majd Packard Tri-Carb^R Sample Oxidízer — mintaoxidáló készülékbe — (Model 306) helyeztük őket, Monophase^K-40 (Packard Instrument Co.) felhasználásával. Az égetést követően a minták radioaktivitását folyadékszcintillációs módszerrel mértük meg, éspedig Packard Tri-Carb^K Liquid Scintillation Spectrometer, Model 460 (folyadékszcintillációs spektrométer) segítségével határoztuk meg.

A specifikus aktivitás megállapítása érdekében a vizsgált vegyület 2,0 μΐ-nyi mintáját 100 ml t-butilmetü-éterben oldottuk fel, majd az éteres oldat 0,1 ml-ét vizsgáltuk meg az égetéses eljárás segítségével. A specifikus aktivitás felhasználásával a szövetek — percenkénti és grammonkénti bomlászszámmal (dpm/g) jellemezhető radioaktívitási koncentrációját a szövetek, illetve a vér grammonkénti ciklosporin-tartalmává számíthatjuk át, nanogrammban kifejezve.

Valamennyi minta radioaktivitásának meghatározásánál 7%-os statisztikai hibahatárral és 95%-os megbízhatósági szinttel dolgoztunk. Ez azt jelenti, hogy a 3-nál kisebb percenkénti nettó beütésszámok (cpm) nem különböznek szignifikánsan a nullától, és ez grammonként 34 pikogrammos (pg/g) meghatározási (érzékenységi) határértéknek felel meg.

A vizsgálatok egyik — a fent ismertetett vizsgálati eljárást alkalmazó — sorozatában az alábbi készítményeket hasonlítottuk össze:

”A vizsgált készítmény: Azl. példában ismertetett, találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítmény.

”B” vizsgált készítmény: Összehasonlításra használt gyógyszerkészítmény, mely az 1. példában leírtakkal azonos mennyiségben tartalmazta a ciklosporin A-t és a (2) és (4) komponenseket, az (1) összetevő — a kukorícaolaj — helyett azonban 41,65% ásványi olajat tartalmazott.

”C vizsgált készítmény: összehasonlításrahasz-5HU 203046Β nált gyógyszerkészítmény, mely 2% ciklosporin Atés 98% ricinusolajat tartalmazott.

(A „B” vizsgált készítmény pipettákba történő töltésének megkönnyítése érdekében a készítményt először 30 °C hőmérsékletre melegítettük, majd szobahőmérsékleten kihűlni hagytuk a felhasználást megelőzően.)

Eredmények

A mellékelt 1-7. ábrák grafikonok segítségével mutatják be a radioaktivitás koncentrációinak az idő függvényében történő változását, valamennyi, a szemből származó vizsgált szövet esetében. Az időt valamennyi grafikonon a vízszintes tengelyen, az abszcisszán tüntettük fel órákban, a 96 órás időpontig; a koncentrációt pedig a függőleges tengelyen, az ordinátán ábrázoltuk, a szövetek egy grammjára számolt ciklosporin A mennyiségét mg egyenértékben kifejezve. Valamennyi értéket 0,335 mg/szem ciklosporin A-ra standardizáltuk.

Az ,A” gyógyszerkészítménnyel nyert erdményeket a befeketített köröket összekötő grafikonnal ábrázoltuk.

A „B” gyótgyszerkészítménnyel nyert eredményeket a befeketített négyzeteket összekötő grafikonnal ábrázoltuk.

A „C” gyógyszerkészítménnyel nyert eredményeket a fordított, üres háromszögeket összekötő grafikonnal ábrázoltuk.

Az 1. ábra a csarnokvízre bonatkozó eredményeket mutatja be.

A 2. ábra a szaruhártyára vonatkozó eredményeket mutatja be.

A 3. ábra a szivárványhártya/sugártest együttesére vonatkozó eredményeket mutatja be.

A 4. ábra szemlencsére vonatkozó eredményeket mutatja be.

Az 5. ábra az üvegtestre vonatkozó eredményeket mutatja be.

A 6. ábra az érhártyára/ideghártyára (retinára) vonatkozó eredményeket mutatja be.

A 7. ábra az ínhártyára vonatkozó eredményeket mutatja be.

Az 1-7. ábrák azt mutatják, hogy a Ciclosporin mindhárom készítményből kezdetben igen gyorsan szívódik fel, és jut el a szem elülső és hátulsó szöveteibe. A szaruhártya esetében azonban (2. ábra) — mely a szem többi szövete számára tárolóhelyként szolgál — a maximális koncentrációkat körülbelül 3-szor olyan gyorsan lehetett elérni az ,A” készítménnyel — körülbelül 2 óra alatt —, mint a „B”-vel (kb. 6 óra alatt). Továbbá, a szaruhártyában elért koncentrációk is sokkal magasabbak voltak az ,A” készítmény esetében, mint a „B”-nél. A „C” gyógyszerkészítmény esetében körülbelül 12 órára van szükség ahhoz, hogy a szaruhártyában kialakuljon a maximális koncentráció.

Ezt követően meglepően nagymértékű kibocsátás történik a szem mélyebb szövetei felé, amint ezt a csarnokvízre vonatkozó eredmények (1. ábra) mu10 tátják, amikor a 96 órás periódus alatt az AUC értéke (area under curve — görbe alatti terület) az, A” gyógyszerkészítmény esetében körülbelül kétszeres volt annak, amit a „B” készítménnyel és több, mint háromszorosa annak, amit a „C” gyógyszerkészítménnyel elértünk., (Az aktuális AUC (96 órás) értékek a következők: (mg/Eq/g, 0,335 mg/szem értékre standardizálva:, A” készítmény—636; „B” készítmény — 334; „C” készítmény — 188.) Ugyanez a típusú előnyös tulajdonság figyelhető meg az ,A” gyógyszerkészítménynél a szivárványhártya/sugártest (3. ábra) és a szemlencse (4. ábra) esetében is.

Az ,A” gyógyszerkészítmény tehát jelentős mértékben és meglepő módon jobbnak bizonyult, mind a „B”, mindpediga „C” készítménynél, a szem elülső területeibe történő kibocsátás tekintetében, pontosabban a szaruhártyából a csamokvíz/szivárványhártya/sugártest irányában. A találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítmények tehát különösen előnyösen alkalmazhatók a szem betegségeinek és kóros állapotainak a kezelésére, például a szaruhártya-átültetéssel kapcsolatos alkalmazás esetében, vagy pedig az uveitis és a keratoconjunctivitis sicca kezelése során.

Ami a szem hátsó területeit illeti, míg az ,A” gyógyszerkészítmény előnye kevésbé kifejlesztett az üvegtest és az inhártya esetében (5. és 7. ábra), ugyanakkor lényegesen jobb az érhártya/ideghártya területein, a szemnek azon részein, melyek jellegzetesen érintettek — a szem hátsó területeit megtámadó — autoimmun betegségek esetében. Az „A” gyógyszerkészítmény tehát lényegesen magasabb maximális kibocsátással jellemezhető, és az érhártya/ideghártya felé történő teljes, elhúzódó kibocsátása is magasabb és jobb. íly módon tehát, a kapott AUC érték 896 órás) az érhártya/ideghártya esetében (mg Eq/g — 0,335 mg/szem értékre standardizálva) az , A” gyógyszerkészítmény esetében 527, a „B” és „C” készítmény esetében azonban csak 296, illetve 184.

Az, A” gyógyszerkészítmény tehát a továbbiak során is jelentősen és meglepően jobbnak bizonyult mind a „B”, mind pedig a „C” készítménynél, a szem hátsó területei —köztük az érhártya/ideghártya — irányában, és íly módon különösen jelentősnek bizonyult a szem azon betegségeinek és kóros állapotainak a kezelésében, melyek a szem ezen területeit érintik, például az uveitis posterior, valamint más, az immunrendszert érintő, illetve gyulladásos jellegű retinopátiák esetében.

Amint azt az 1-7. ábrák alapján láthatjuk, a „C” összehasonlító gyógyszerkészítmény minden tekintetben sokkal rosszabbnak bizonyult az ,A és a „B” készítményekhez képest.

Az alábbi táblázat a megállapított, ciklosporin A vérszintértékeket (szisztémás koncentrációkat) tartalmazza (ng egyenérték/g — 0,335 mg/szem értékre standardizálva).

-6HU 203046Β

idő (órák)	”A” készítmény	”B” készítmény	”C” készítmény
0,5	0,05 ± 0,04	0	0,12 ± 0,12
1	0,97 ± 1,09	1,36 ± 0,56	0,04 ± 0,04
2	1,56 ± 0,71	0,28 ± 0,61	0,44 ± 0,17
4	1,25 ± 0,88	0,87 ± 1,68	0,71 ±0,11
6	0,27 ± 0,23	0,07 ± 0,19	0,84 ± 0,48
12	0	1,30 ± 3,52	0,46 ± 0,27
24	0	0,57 ± 1,55	0,63 ± 0,50
48	0	0,12 ± 0,34	0,81 ± 0,84
96	0	0	0,18 ± 0,05
AUC
(0-96 óra)	5,96	30,68	54,49

Amint azt láthatjuk, a mért szisztémás értékek viszonylag alacsonyak mindhárom vizsgált gyógy- 20 szerkészítmény esetében, de különösen meglepő módon alacsonyak az, A készítménynél, a „B” és a „C” készítményekhez viszonyítva. Az ,A” gyógyszerkészítmény tehát éppoly jelentősen jobbnak bizonyult a szembe, illetve annak szöveteibe történő 25 kibocsátás tekintetében, mint a szisztémás keringésbe való bejutás elhárításában.

Az ,A gyógyszerkészítménnyel kezelt szem vizuális megfigyelése — a módosított Draize-teszt során — azt mutatta, hogy a készítmény nem váltott 30 ki irri tációt.

A találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítmény előnyös terápiás tulajdonságai klinikai vizsgálatok során is kimutathatók, például olyan esetekben, amikor a készítményt a szem be- 35 tegségeiben, illetve kóros állapotaiban szenvedő betegeknek adagoljuk, amint azt már az előzőekben említettük.

Az ilyenfajta vizsgálatok, illetve a gyakorlati terápiás alkalmazás során — például az uveitis anteri- 40 or vagy uveitis posterior, a tavaszi kötőhártyagyulladás, a tavaszi keratoconjunctivitis vagy a keratoconjunctivitis sicca kezelésében—a találmány szerinti eljárással előállított, tehát például az 1. példa szerinti gyógyszerkészítményt előnyösen a szem 45 felületén, illetve felületére alkalmazzuk, körülbelül 0,1-0,2 ml-es egyszeri adagokban, naponta 1-4 alkalommal adagolva, a kezelendő sajátos betegség vagy kóros állapot, annak klinikai képe és az elérni kívánt hatás függvényében. 50

Az állapot jelentős javulása — például a nem kezelt kontrollokhoz viszonyítva — figyelhető meg a terápia folytatása során, például amikor a kezelést 1-2 hetes perióduson keresztül vagy annál tovább folytatjuk. A találmány szerinti eljárással előállí- 55 tott gyógyszerkészítményeket a kezelt személyek jól tolerálják, és nem tapasztalható szignifikáns vagy kellemetlen irritáció.

A találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítmény, illetve annak további foganatosítá- 60 si eljárásai alapján az alábbiakat kell megemlítenünk:

B) A fenti (A) pontban ismertetett, szemészeti gyógyszerkészítmény, mely a készítmény szemészeti adagolására alkalmas tartályban helyezkedik 65 el — például oly módon, ahogy azt az előzőekben ismertettük —, a találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítménynek a szem felületére vagy felületén — például a szaruhártyára vagy a szaruhártya hámrétegére — történő, előnyös alkalmazásának biztosítása érdekében.

C) Eljárás a fenti (A) pontban ismertetett szemészeti gyógyszerkészítmény előállítására, melynek során—előnyösen például körülbelül 30 ’C és 60 ’C közötti hőmérsékletre történő melegítés segítségével — a ciklosporint jól elkeverjük az (1) összetevővel, a (2) összetevővel és — tetszés szerint — a (3) és a (4) komponensekkel is — ahogy azt az előzőekben már ismertettük —, és ezt követően az így nyert készítményt tetszés szerint valamilyen, megfelelő tartályba tölthetjük, például a (B) pontban leírtaknak megfelelően.

D) A szem, az azt körülvevő vagy a hozzá kapcsolódó szervek és szövetek betegségeinek, illetve kóros állapotainak kezelésére vonatkozó eljárás, melyet az ilyenfajta kezelésre szoruló egyéneknél alkalmazunk, elsősorban a szem, illetve az azt körülvevő vagy hozzá kapcsolódó szervek vagy szövetek immunrendszert érintő vagy gyulladásos jellegű betegségeinek vagy kóros állapotainak a kezelésére. Az eljárás során a fenti (A) pontban ismertetett gyógyszerkészítményt lokálisan a szemre — például a szem felületére vagy felületén —, például a szaruhártyára vagy a szaruhártya hámrétegére alkalmazzuk; valamint

E) A fenti (A) pontban ismertetett gyógyszerkészítmény, melyet a fenti (D) pontban leírt módszer szerint használhatunk fel, illetve a fenti (A) pontban ismertetett gyógyszerkészítmény előállítása során felhasználható ciklosporin; e készítményt a fenti (D) pontban ismertetett eljárás során alkalmazzuk.

A korábbiakban ismertettük a szem azon, meghatározott metszeteit, részeit, iUetve szöveteit, melyek esetében a (D) pontban leírt eljárás alkalmazható. Szintén az előzőekben ismertettük a szem azon, meghatározott betegségeit, iUetve kóros állapotait, melyekre a (D) eljárás alkalmazható.

Claims

1. Eljárás hatóanyagként egy ciklosporint és hor7

-7HU 203046Β dozóközeg komponensként olajat tartalmazó szemészeti gyógyszerészítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy a készítmény össztömegére vonatkoztatva 0,01-2,5 tömeg% ciklosporint és hordozóközegként 25-65 tömeg% szemészetileg elfogadható növényi olajat és 25-65 tömeg% szemészetileg elfogadható vazelin elegyét, valamint adott esetben 0,5-10 tömeg% szemészetileg elfogadható emulgeálószert és/vagy legfeljebb 5,0 tömeg% tartósítószert ismert módon összekeverünk.

2. az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve. hogy ciklosporinként ciklosporin A-t vagy [Nvaj-ciklosporint alkalmazunk.

3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 50-65 tömeg% szemészetileg elfogadható növényi olajat és 50-65 tömeg% szemészetileg elfogadható vazelint alkalmazunk.

5

4. Az 1 -3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a szemészetileg elfogadható növényi olajat és a vazelint 1:2-2:1 tömegarányban alkalmazzuk.

5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljá10 rás, azzal jellemezve, hogy szemészetileg elfogadható növényi olajként olívaolajat, arachiszolajat, ricinusolajat, szezámmagolajat vagy kukoricaolajat alkalmazunk.