HU200931B

HU200931B - Process for producing pharmaceutical nucleozides

Info

Publication number: HU200931B
Application number: HU885714A
Authority: HU
Inventors: Luise Burns Charlene; Mary Daluge Susan; Walter Koszalka George; Anthony Krenitsky Thomas; Tuttle Joel Van
Original assignee: Wellcome Found
Priority date: 1987-11-07
Filing date: 1988-11-04
Publication date: 1990-09-28
Also published as: AU2476388A; FI91763B; ZA888289B; CA1333391C; FI885094A0; EP0670328A1; HUT48466A; EP0317128B1; EP0317128A3; KR890008160A; US5574149A; GB8726136D0; PT88948B; DE3854811T2; MX9203217A; AU616914B2; JPH01153697A; GR3019379T3; ATE131826T1; DE3854811D1

Description

(54) ELJÁRÁS GYÓGYHATÁSÚ NUKLEOZIDOK ELŐÁLLÍTÁSÁRA (57) KIVONAT

A találmány tárgya vírus-ellenes hatású (I) általános képletű vegyületek származékai és ilyeneket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítási eljárása. Az (I) általános képletben

B jelentése (B) általános képletű csoport, amelyben

R² jelentése hidrogénatom vagy aminocsoport, és

R jelentése 3-6 szénatomos cikloalkil-amino-, előnyösen ciklopropil-amino-, 1-6 szénatomos egyenes vagy elágazóláncú alkoxi-, előnyösen metoxi-, 3-7 szénatomos cikloalkoxi-, előnyösen ciklopentoxi-csoport vagy 5- vagy 6-tagú telített egy nitrogénatomot tartalmazó heterociklusos gyűrű, amely a benne levő nitrogénatomon keresztül kapcsolódik a purinvázhoz, előnyösen például piperidinil-csoport.

A leírás terjedelme: 8 oldal, J ábra

HU 200 931 B

-1HU 200931 Β

A találmány tárgya eljárás bizonyos új 3’-fluor2’,3’-didezoxi-nukleozidok és ilyen vegyületeket tartalmazó vírus-ellenes gyógyszerkészítmények előállítására.

Mivel a vírusokat igen nehéz megtámadni, a vírus-ellenes kemoterápia területén csupán néhány olyan vegyület ismert, amelyek per se hatásosak a vírusok ellen. Az utóbbi időben megállapították, hogy a vírusok élet-ciklusában - amelyek vírusokként különböznek - vannak bizonyos, a vírusokra specifikus állapotok, fejlődési fokozatok. Ezek a fokozatok érzékenyek lehetnek a támadásokra, ahol elegendően különböznek a megfelelő gazdasejt működésétől. Azonban a gazdasejtek és a vírusok működésének igen nagy hasonlósága miatt, hatásos kezelést eddig még nem tudtak kialakítani.

Az utóbbi időkben egyre nagyobb fontosságú a vírusok egyik csoportja, a retrovírusok. A retrovírusok az RNS vírusok egy alcsoportját képezik, amelyeknek hogy megismételjék önmagukat, előbb „fordítottan át kell írni az RNS-ek genomjait DNSé (az „átírás szokásosan az RBS szintézisét írja le DNS-ból). Amint DNS formájában a vírusgenóm a gazdasejt genómjával egyesül, kedvező helyzetet teremt a gazdasejt átíró/átfordító mechanizmusának működéséhez, hogy önmagát megismételje. Egyesüléskor a vírus a gazda DNS-től gyakorlatilag nem különböztethető meg és ebben az állatpoban a vírus addig létezhet, amíg a sejt él. Minthogy ilyen formában gyakorlatilag megtámadhatatlan, minden kezelésnek az életciklus más állapotára kell irányulnia és szükségképpen addig kell folytatódni, amíg minden vírushordozó sejt el nem hal.

A retrovírusokat reprodukálhatóan izolálták AIDS-ben szenvedő betegkből és jelenleg humán immunhioány vírusként (HÍV) ismerik, de ismert mint humán T-sejt limfotropikus vírus III (HLV

III), AIDS-szel összefüggő retrovírus (ARV) vagy limfadenopátiával kapcsolatos vírus (LAV). Ez a vírus elsősorban az OKT⁴ felületi markert hordozó T-sejteket fertőzi és pusztítja és manapság az AIDS kórokozójaként fogadják el. A betegek fokozatosan elvesztik T-sejtjeiket, felborul az immmun-rendszer, csökken a fertőzésekkel szembeni ellenállóképesség és megnő a gyakran halálos kimenetelű fertőzések iránti hajlam. Ily módon az AIDS-ben szenvedő betegek halálát gyakran előforduló fertőzések, így például tüdőgyulladás vagy vírusos eredetű rákos megbetegedés és nem közvetlenül a HÍV fertőzés okozza.

Az utóbbi időben a HÍV vírusokat más szövet-típusokból, így például a T⁴ markert kifejező B-sejtekből, makrofágokból és a központi idegrendszer vénei nemkapcsolatos szöveteiből is izolálták. A központi idegrendszernek ez a fertőzése a betegeknél klasszikus AIDS tüneteket okoz és fokozatosan kifejlődő demyelisinatiót okoz, amely elgyengüléshez, encephalopathiahoz, progresszív disarthriahoz, ataxiához és dezorientációhoz vezet. További, a HÍV fertőzéssel összefüggő tünetek még a tünetmentes hordozó-állapot, a progresszíve általánosított lymphadenopatia (PGL) és az AIDS-szel kapcsolatos complex (ARC).

Azt tapasztaltuk, hogy bizonyos 3’-fluor-2,’3’-didezoxi-nukleozidok alkalmasak vírusfertőzések, különösen retrovírusok, speciálisan HÍV vírus által okozott fertőzések, így AIDS, PGL, ARC és HIVhordozó betegségek kezelésére és megelőzésére.

Ennek alapján a találmányunk tárgya eljárás (I) általános képletű 3’-fluor-2’,3’-didezoxi-nukleozidok, és ilyen vegyületeket tartalmazó, a fenti vírusfertőzések kezelésére alkalmas gyógyszerkészítménynek előállítására. Az (I) általános képletben

B jelentése (B) általános képletű csoport, amelyben

R jelentése hidrogénatom vagy aminocsoport, és

R³ jelentése 3-6 szénatomos cikloalkil-amino-, előnyösen ciklopropil-amino-, 1-6 szénatomos egyenes vagy elágazóláncú alkoxi-, előnyösen metoxi-, 3-7 szénatomos cikloalkoxi-, előnyösen ciklopentoxi-csoport vagy 5- vagy 6-tagú telített 1 nitrogénatomot tartalmazó heterociklusos gyűrű, amely a benne levő nitrogénatomon keresztül kapcsolódik a purinvázhoz, előnyösen például piperidinilcsoport.

A találmány szerinti eljárással előállított vegyüietek különösen nagy aktivitásűak humán retrovírusok, így például a humán T-sejt limfotropikus vírusok (HTLV), különösen a HTLV-I, HTLV-II és HÍV (HTLV-III) vírusokkal szemben.

Az (I) általános képletű vegyüietek előnyösen alkalmazhatók retrovírusok által okozott fertőzések egyéb klinikai tüneteinek kezelésére és megelőzésére, így például a következő esetekben: Kaposiszarkóma, thromopenia purpura, AIDS-szel összefüggő complex, AIDS-antitestet hordozó betegeknél, vagy akik seropozitívek AIDS-szel szemben, valamint krónikus neuroalgiai esetekben, így például sclerosis multiplex vagy trópusi spastic paraparasis esetében. A vegyüietek alkalmasak továbbá HTLV-I, HTLV-II, HTLV-IV és HIV-2, valamint egyéb más AIDS-szel kapcsolatos retrovírus okozta és immunhiány-okozta betegségek, fertőzések kezelésére és megelőzésére, valamint psoriasis esetében.

Az (I) általános képletű vegyüietek hatásosak továbbá olyan vírusokkal szemben is, amelyek retrovírusok és amelyek a retrovírusokhoz hasonló DNS-vírusok és amelyek az élet-ciklus alatt a gazda-genómba beépülnek, azaz hatásosak a retrovírus-szerű DNS-vírusokkal szemben is. Ily módon alkalmazhatók retrovírus- vagy retrovírus-szerű fertőzések kezelésére és megelőzésére is.

A találmány szerinti eljárással előállított vegyüietek egyaránt alkalmazhatók humán vagy állatgyógyászati készítmények hatóanyagaként.

Előnyösek azok az (I) általános képletű vegyületek, amelyek képletében R² jelentése hidrogénatom, R³ jelentése 3-6 szénatomos cikloalkil-amino-csoport és amelyekben R² jelentése aminocsoport és R³ jelentése 1-6 szénatomos alkoxi-csoport.

Néhány konkrét vegyület például a következő:

1. 6-ciklopropil-amino-9-(béta-D-2,3-didezoxi3-fIuor-ribofuranozil)-9H-purin

2. 2-amino-6-metoxi-9-(béta-D-2,3-dÍdezoxi-3fluor-ribofuranozil)-9H-purin

3. 6-ciklopentoxi-9-(béta-D-2,3-didezoxi-3-fluor-ribofuranozil)-9H-purin

4. 6-izopropoxi-9-(béta-D-2,3-didezoxi-3-fluor-2HU 200931 Β ribofuranozil-9H-purin

5. 6-piperidiníl-9-(béta-D-2,3-didezoxi-3-fluorribofuranozil)-9H-purin

A találmány szerinti eljárással előállított vegyületeket más egyéb ismert, gyógyhatású anyaggal együttesen is alkalmazhatjuk a fentiekben részletezett vírusfertőzések kezelésére, így például alkalmazhatjuk a következő HIV-fertőzések kezelésére alkalmas vegyületekkel kombináltan: 3’-azido-3’dezoxi-timidin (zidovudin), más 2’,3’-didezoxinukleozidok, így például 2’,3’-didezoxi-citidin, 2’3’-didezoxi-adenozin, 2’,3’-didezoxi-inozin, karbociklusos nukleozidok, így például karbovin vagy aciklusos nukleozidok, így például karbovin vagy aciklusos nukleozidok, például aciklovir, interferonok, így például alfa-inerferon, vese kiválasztást gátló anyagok, így például probenicid, nukleozidátvitelt gátló anyagok, így például dipiridanol, valamint immunomodulátorok, így például interleukin II és leukocita marofág kolónia stimuláló faktorok. Az említett vegyületek adagolása történhet egyideűlegakár közös, akár külön készítmény formájában vagy külön időben, így például egymást követően.

A találmány szerinti eljárással előállított vegyületeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények lehetnek orális, rektális, nazális, helyi (például bukkális vagy szublinguális), vaginális vagy parenterális (így például szubkután, intramuszkuláris, intravénás vagy intradermális) adagolásra alkalmas készítmények. A legmegfelelőbb adagolási módot az orvos választja meg és függ a beteg állapotától, a fertőzés fajtájától és az adagolni kívánt vegyülettől. A dózis általában 0,1-120 mg testtömegkilogrammonként naponta, előnyösen 0,5-40 ^mg> még előnyösebben 1-15 mg. A kívánt adagot két, három, négy, öt, hat vagy még több részletben is adagolhatjuk, meghatározott időközönként, amelyek lehetnek egységdózisok, így például 101500 mg, előnyösen 20-1000 mg, még előnyösebben 50-700 mg hatóanyagtartalmú dózisok.

A hatóanyagmennyiséget úgy választjuk egy, hogy a plazma-koncentráció csúcsa 1-75 p.mól, előnyösen 2-50 μπιόΙ, még előnyösebben 3-30 μπιόΙ értéknél legyen. Ezt elérhetjük, ha például intravénás injekciók esetében a hatóanyag mennyisége 0,15% sóoldatban vagy orális adagolás esetében a bolus 1-100 mg/kg hatóanyag tartalmú. A kívánatos vérszintet folyamatos infúzióval is fenntarthatjuk, amely infúziós készítmény mennyisége 0,01-5 mg/kg/óra vagy szakaszos adagolás esetében 0,4-15 mg/kg.

Bár az aktív alkotórészt lehet önmagában is adagolni, azonban előnyösebb gyógyászati készítmények alkalmazása. A jelen találmány szerinti készítmények legalább egy, az előzőekben meghatározott aktív alkotórészt tartalmazó egy vagy több elfogadható hordozóanyaggal, és tetszés szerint más gyógyhatású szerekkel kombinálva. Mindegyik hordozóanyagnak „elfogadható-nak kell lennie olyan értelemben, hogy a készítmény más alkotórészeivel öszszeférhető legyen, és a betegre ne legyen káros. A készítmények magukba foglalják azokat, melyek orális, rektális, nazális, helyi (beleértve a száji és nyelvalatti), vaginális vagy parenterális beleértve a szubkután, intramuszkuláris, intravénás és intra4 dermális) adagolásra használhatók. A készítmények szokásosan dózisegység formájában adagolhatók és a gyógyszergyártásban bánnilyen jól ismert módszerrel előállíthatók. Ilyen módszerek magukba foglalják az aktív alkotórész egy vagy több járulékos alkotórészből álló hordozóanyaggal történő egyesítésének műveletét. Általában a készítmények az aktív alkotórész folyékony hordozóanyaggal, vagy finomeloszlású szilárd hordozóanyaggal, vagy mindkettővel történő egyenletes és alapos egyesítésével állíthatók elő és ha szükséges, a termék formálható.

A találmány szerinti orális adagolásra alkalmas készítmények különálló egységekként, mint kapszulák, ostyák vagy tabletták, melyek mindegyike az alkotórész előre meghatározott mennyiségét tartalmazza; mint a porok vagy granulátumok; vagy mint olaj-vízben folyékony emulziók, vagy víz-olajban folyékony emulziók adagolhatók. Az aktív alkotórész pirula, liktárium vagy paszta formájában is adagolható. Az orális készítmények szokásosan további más szereket is tartalmazhatnak, mint amilyenek az édesítőszerek, ízesítőszerek és a sűrítők.

A tabletták préseléssel vagy sajtolással készíthetők, tetszés szerint egy vagy több kiegészítő alkotórésszel. A préselt tabletták megfelelő gépen, az aktív alkotórész tetszés szerint kötőanyaggal (povidon, zselatin, hidroxi-propil-metil-cellulóz), csúsztatószerekkel inért hígítóanyagokkal, tartósítószerekkel, szétesést biztosító szerekkel (például nátrium-keményítő-glikolát, térhálósított povidon, térhálósított nátrium-karboxi-metil-cellulóz), felületaktív vagy diszpergálószerekkel kezelve, laza por vagy granulátum formájában történő préseléssel készíthetők. A sajtolt tabletták megfelelően gépen, inért folyékony hígítóanyaggal nedvesített porkeverék sajtolásával készíthetők. A tabletták tetszés szerint bevonhatók vagy vagy vájattal elláthatók, és oly módon formálhatók, hogy az az aktív alkotórész lassú vagy ellenőrzött felszabadulását tegye lehetővé, például különböző arányban hidroxi-propil-metil-cellulóz alkalmazásával, hogy kívánt felszabadulási profilt biztosítson. A tabkettákat olyan bevonattal is elláthatjuk, amelyek biztosítják, hogy a hatóanyag felszabadulása ne a gyomorban menjen végbe. Ez különösen akkor előnyös, ha az (I) általános képletű vegyületben B jelentése purincsoport, mivel ezek a vegyületek savas hidrolízisre érzékenyek.

Szájban, helyi adagolásra alkalmas készítmények az aktív alkotórészt ízesítőanyagban, szokásosan cukorban, akácmézgában, tragantban, tartalmazó gyógycukorkák; az aktív alkotórész inért anyagban, mint zselatinban és glicerinben vagy cukorban és akácmézgában, tartalmazó pasztillák; és az aktív alkotórészt erre alkalmas folyékony hordozóanyagban tartalmazó szájvizek.

A rektális adagolásra alkalmas készítmények mint végbélkúpok adagolhatók, erre alkalmas anyaggal, például kakaóvajjal vagy szaliciláttal készülnek.

A vaginális adagolásra alkalmas készítmények mint pesszárium, tampon, krém, gél, paszta, hab vagy spray kerülhetnek felhasználásra, melyek az aktív alkotórészen kívül az előzőekből ismert vivő3

-3HU 200931 Β anyagokat tartalmaznak.

Pareneterális adagolásra alkalmas készítmények magukba foglalják a vizes és nem-vizes izotónikus steril injekciós oldatokat, melyek antioxidánsokat, puffereket, bakteriosztatikus anyagokat és olyan oldott anyagokat tartalmaznak, melyek a készítményt a választott recipiens vérével izotónikussá teszi; és szuszpendálószcrckct és sűrítőszcrckct tartalmazó vizes és nemvizes steril szuszpenziókat.

A készítmények dózisegységben, vagy többszörös 10 dózisban, lezárt edényekben, például ampullákban vagy fiolákban is kiszerelhetők és fagyasztó-szárítás (liofilizálás) körülményei között tárolhatók, melyekhez közvetlenül a felhasználás előtt, csak a steril folyékony hordozóanyagot, például vizet kell 15 hozzáadni. Azonnali felhasználásra való injekciós oldatok és szuszpenziók az előzőekben leírtakhoz hasonló steril porokból, granulátumokból és tablettákból is elkészíthetők.

Előnyös dózisegység készítmények azok, ame- 20 lyek az aktív alkotórész napi dózisát vagy egységét az előzőekben megadott napi egységdózist, vagy megfelelő részét taralmazzák.

A találmány szerinti eljárással előállított vegyületeket hatóanyagként alkalmazhatjuk állatgyógyá- 25 szati készítményekben is.

A találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítmények a fentieken kívül tartalmazhatnak még a készítmény fajtájától függően egyéb ismert adalékanyagokat is, így például édesítőszere- 30 két, sűrítőanyagokat vagy ízesítőanyagokat.

Az (I) általános képletű vegyületeket és származékaikat a találmnány szerinti eljárással a következőképpen állítjuk elő:

egy (III) általános képletű purin- - a képletben 35 B jelentése a fenti - vagy annak reakcióképes származékát a kívánt ribofuranzil-csoportnak a 9-es vagy 1-es helyzetbe való bevitelére alkalmas vegyülettel reagáltatjuk.

így például, ha kiindulási vegyületek olyan cső- 40 portokat tartalmaznak, amelyek a reakció folyamán nem-kívánt reakcióba léphetnek azokat védőcsoporttal láthatjuk el, amelyeket a reakció végén eltávolítunk.

A (III) általános képletű vegyületet - a megfele- 45 lő purin- bázist - vagy annak sóját 2’,3’-didezoxi-timidinnel reagáltatjuk a megfelelő pentozil átvivő enzim jelenlétében (purin nukleozid foszforiláz és timidin foszforiláz).

A következő példákkal a korlátozás szándéka 50 nélkül a találmány szerinti eljárást közelebbről illusztráljuk. A „hatóanyag megnevezés minden esetben valamely találmány szerinti eljárással nyert vegyületet jelent.

(e) Magnézium-sztearát	5 500	3 300
B összetétel mgltabletta	mgltabletta
(a) hatóanyag	250	250
(b) Laktóz	150	—
(c) Avicel PH 101	60	26
(d) Povidon B.P:	15	9
(e) Nátrium-keményítő glikolát	20	12
(f) magnézium-sztearát	5	3
	500	300
C összetétel	mgltabletta
Hatóanyag		100
Laktóz		200
Keményítő		50
Povidon		5
Magnézium-sztearát		4 359

A következő D és E összetételek esetében közvetlen sajtolással nyertük a tablettákat. Az E öszszetételben lévő laktóz közvetlen sajtolásra alkalmas típus (zeparox, tejipari eredetű).

D összetétel	mg/kapszula
Hatóanyag		250
előgélesített keményítő NF15	150
		400
E összetétel	mg/kapszula
Hatóanyag	250
Laktóz	150
Avicel	100
	500

F összetétel (szabályozott felszabadulású készítmény)

A készítményt szintén az összetevők nedves granulálása és magnézium-sztearát adagolása után sajtolással nyerjük.

Összetétel mgltabletta (a) Hatóanyag 500 (b) Hidroxi-propil-metil-cellulóz (Methocel K4M Prémium) 112 (c) Laktóz B.P. 53 (d) Povidone B.P.C. 28 (e) Magnézium-sztearát 7

700

A hatóanyag felszabadulása kb. 6-8 óra út alatt megy végbe és 12 óra elteltével fejeződik be teljesen

7. példa

Tabletta készítményA következő A és B összetételeket az alkotók povidon-oldattal való nedves granulálás után, sajtolással nyertük.

A összetétel mgltabletta mgltablleta (a) Hatóanyag (b) Laktóz B.P.

(c) Povidon B.P.

(d) Nátrium-keményítő glikólát

2. példa

Kapszula készítmény A összetétel

A kapszula készítményt úgy állítjuk elő, hogy D összetételű keverőket kétszeres zselatin kapszulá60 ba töltjük. A B összetételt hasonlóképpen formulázzuk.

250	250
210	26	B összetétel	mg/kapszula
15	9	(a) hatóanyag	250
20	12	65 (b) Laktóz B.P.	143

-4HU 200931 Β (c) Nátrium-keményítő-glikolát 25 (d) magnézium-sztearát 2

420

C összetétel mg/kapszula (a) Hatóanyag 250 (b) Macrogol 4000 BP 350

600

A készítményt úgy nyerjük, hogy a Macrogol 4000 BP-t megolvasztjuk, a hatóanyagot az olvadékban díszpergáljuk és kétrészes zselatin kapszulákba töltjük.

D összetétel mg/kapszula

Hatóanyag 250

Lecitin 100

Arachis olaj 100

450

A készítményt úgy állítjuk elő, hogy a hatóanyagot a lecitinben és az olajban díszpergáljuk és lágy, elasztikus kapszulákba töltjük.

E öjrzetóíe/(szabályozott fclszabadulású készítmény)

A készítményt úgy állítjuk elő, hogy az a), b) és c) összetevőket extrudáljuk, majd formázzuk és szárítjuk. A szárított pelletet a felszabadulást szabályozó anyaggal bevonjuk.

mg/kapszula (a) Hatóanyag 250 (b) Mikrokristályos cellulóz 125 (c) Laktóz BP 125 (d) Etil-cellulóz 13

513

3. példa

Injekció készítmény

A összetétel

Hatóanyag 0,200 g

Sósav, 0,1 mól 4,0-7,0-ig

Nátrium-hidroxid, 0,1 mól 4,0-7,0-ig

Steril víz 10 ml-ig

A hatóanyagot a víz túlnyomó részében oldjuk 35-40 ’C hőmérsékleten, a pH-értékét ezután 4-7 közé beállítjuk a sósav vagy nátrium-hidroxid alkalmazásával, majd a kívánt térfogatra kiegészítjük, sterilen szűrjük, steril 10 ml-es ampullákba töltjük és sterilen zárjuk.

B összetétel

Hatóanyag 0,125 g

Steril pirogén-anyagtól mentes, pH = 7 foszfát-puffer 25 ml-ig

4. példa

Intramuszkuláris injekció készítmény

Összetétel

Hatóanyag 0,20 g

Benzil-alkohol 0,10 g

Glycofurol 75 1,45 g

Víz injekció célra 3,00 ml-ig

A hatóanyagot a glikofurolban oldjuk, hozzáadjuk a benzil-alkoholt, oldjuk és vízzel 3 ml-re kiegészítjük, majd sterilen szűrjük, sterilen lezáijuk.

5. példa

Szirup készítmény

Hatóanyag 0,25 g

Szorbit oldat 1,50 g

Glicerin 2,00 g

Nátrium-benzoát 0,005 g ízanyag, Peach 17,42,3169 0,0125 ml

Desztillált víz 5,00 ml-ig

A hatóanyagot glicerin és a víz túlnyomó részében oldjuk, hozzáadjuk a nátrium-benzoát vizes oldatát, majd a szorbit-oldatot és az ízanyagot, végül vízzel a kívánt térfogatra kiegészítjük.

6. példa

Kúpkészítmény mg/kúp

Hatóanyag (63 μπι)* 250

Kemény zsír, BP (Witepsol H15Dynamit NoBel) 1770

2020 *A hatóanyag szemcsemérete 90%-ban 63 μΐη-es vagy annál kisebb.

A készítményt úgy állítjuk elő, hogy a Witepsol H15 kb. 1/5 részét gőzköpenyes edényben 45 ’C-on megolvasztjuk, a hatóanyagot 200 μηι-es sátán átszitáljuk és az olvadékban elkeverjük, homogenizáljuk. A keveréket 45 ’C hőmérsékleten tartjuk, hozzáadjuk a Witepsol H15 többi részét és teljes homogenitásig keverjük. A szuszpenziót ezután250 μΐη-es rozsdamentes sátán átengedjük folyamatos keverés mellett, hagyjuk lehűlni 40 ’C-ra, majd 38 ’C hőmérsékleten 2 ml-es műanyag formákba öntjük és szobahőmérsékletre hűtjük.

7. példa

Pesszárium mg/pesszárium

Hatóanyag (63 μηι) 250

Vízmentes Dextróz 380

Burgonya keményítő 363

Magnézium-sztearát 7

100

A megadott összetevőket homogenizáljuk és közvetlen sajtolással pesszárium-készítménnyé alakítjuk.

8. példa

6-ciklopropil-amino-9-(béta-D-2’3’-didezoM-3 ’-fluor-ribofuranozil)-9H-purin

0,42 g (2,2 mmól) 6-ciklopropil-amino-purint és 0.29 g (1,1 mmól) 2’,3’ didezoxi-3-'-üuor-timidint 10 ml Ν’,Ν’-dimeíil-formamidban oldunk, hozzá5

-5HU 200931 Β adunk 35 ml 10 mmólos kálium-foszfát puffért, amely még 0,04% kálium-azidot is tartalmaz (pH = 6,8), majd 5000I.U. tisztított timidin-foszforilázt és 10 000 I.U. purin-nukleozid-foszforilázt (Krenitsky és munkatársai, Biochemistry, 20,36151981 és 4,381,444 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás) adagolunk a szuszpenzióhoz 5 ml DEAE gyantán abszorbeálva, és a kapott anyagot 35 °C hőmérsékleten keverjük. A 12. napon további 5000 I.U. tisztított timidin-foszforilázt és 10 000 I.U. purin-nukleozid-foszforilázt adagolunk hozzá 5 ml DEAE gyantán abszorbeálva és a keverést tovább folytatjuk. A 13. napon a reakciókcvcréket leszűrjük, a szűrletet egymás után kapcsolt oszlopokra adagoljuk. Az első oszlop 2,5 x 20 cmes, Dowex-l-hidroxid-töltetű, a második oszlop 2,5 x 10 cm méretű és a töltete Amberlite XAD-2 gyanta. A minta felvitele után az oszlopokat nagy mennyiségű vízzel átmossuk és a terméket metanollal eluáljuk. A terméket tartalmazó frakciókhoz kb.

ml vízmentes szilikagélt adunk, az oldószert vákuumban elpárologtatjuk és ezt a szilikagélt egy 2,5 x 50 cm méretű szilikagél töltetű oszlopra visszük és kloroform/metanol = 9/1 eleggyel eluáljuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, az oldószert vákuumban elpárologtatjuk, a visszamaradó szilárd anyagot 10 ml 95%-os etanolban oldjuk, az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a terméket ismételen 10 ml 95%-os etanolban oldjuk. Szűréssel a szilikagél nyomokat is eltávolítjuk, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a terméket vízben oldjuk, majd liofilizáljuk. Ily módon 0,084 g cím szerinti vegyületet nyerünk.

Elemanalízis a C13H16FN5O2 összegképletű vegyületre:

Számított: C% = 53,24, H - 5,50, N% = 23,88, F% = 5,48,

Mért: C% - 53,42, H% = 5,56, N% = 23,73, F% = 6,26.

9. példa

2-amino-6-metoxi-9-(béta-D-2’,3’-didezoxi-3’-f luor-ribofuranozil)-9H-purin

0,51 g (3,1 mmól) 2-amino-6-metoxi-purint (előállítása: 2-amino-6-klór-purinból nátrium-metoxiddal végzett nukleofil helyettesítéssel) és 0,35 g (1,3 mmól) 2’,3’-didezoxi-3’-fluor-timidint feloldunk 5 ml Ν’,Ν’-dimetil-formamidban és 5 ml dimetil-szulfoxidban, majd hozzáadunk 30 ml 10 mólos kálium-foszfát puffért (pH = 6,8, 0,04% kálium-azid), majd 3300 I.U. tisztított timidin-foszforilázt és 6900 I.U. purin-nukleozid-foszforilázt 3 ml DEAE gyantán abszorbeálva és a kapott szuszpenziót 35 °C hőmérsékleten keverjük. 6 nap elteltével további 3300 I.U. tisztított timidin-foszforilázt és 6900 I.U. purin-nukleozid-foszforilázt adagolunk hozzá 5 ml DEAE gyantán abszorbeálva és a keverést tovább folytatjuk. További 7 nap elteltével 3300

I.U. tisztított timidin-foszforilázt és 6900 I.U. purin-nukleozid-foszforilázt adagolunk hozzá 5 ml DEAE gyantán abszorbeálva. 23 nap elteltével (a teljes reakcióidő36 nap) a reakciókeveréket leszűrjük, a szűrletet egymás után kapcsolt oszlopokra adagoljuk. Az első oszlop 2,5 x 10 cm méretű és a töltete Dowex-l-hidroxid, a második 2,5 x 10 mcrc6 tű és töltete Amberlite XAD-2 gyanta. A minták felvitele után az oszlopokat nagymennyiségű vízzel átmossuk és a terméket metanollal eluáljuk. A terméket tartalmazó frakciókhoz kb. 5 ml vízmentes szilikagélt adunk, az oldószert vákuumban elpárologtatjuk, az így kapott szilikagélt egy 2$ x 50 cm méretű, szilikagél töltetű oszlopra adjuk és az eluálást kloroform/metanol = 9/1 eleggyel végezzük. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, az oldószert vákuumban elpárologtatjuk, a visszamaradó szilárd anyagot 10 ml 95%-os etanolban oldjuk, az oldószert ismételten vákuumban elpárologtatjuk és a visszamaradó anyagot 10 ml 95%-os etanolban oldjuk, majd a szilikagél nyomok eltávolítására szűrjük. Az oldószert vákuumban elpárologtatjuk, a terméket vízben oldjuk és liofilizáljuk. Ily módon 0,204 g cím szerinti vegyületet nyerünk.

Elemanalízis a C13H16FN5O2 összegképletű vegyületre:

Számított: C% = 46,64, H% = 4,98, N% = 24,72, F% 6,71,

Mért: C% 46,10, H% = 5,09, N% 23,96, F% 6,74.

A termék szerkezetét 1H-NMR spektrummal és tömegspektrummal igazoltuk.

/0. példa

6-ciklopentiIoxi-9-(béta-D-2,3-didezoxi-3-fluo r-ribofuranozil)-9H-purin g (4,9 mmól) 6-ciklopentíl-oxÍ-purint (előállítása 6-klór-purinból) (Sigma Chemical Company, St. Louis, MO) nát rium-hidriddel végzett nukleoful helyettesítéssel) és 0,5 g (2,1 mmól) 2’3’-didezoxi3’-fluor-timidint 5 ml N’.N’-dimetil-formamidban és 5 ml dimetil-szulfoxidban szuszpendálunk és hozzáadunk 35 ml 10 mólos kálium-foszfát-puffert (pH = 6,8, 0,04% kálium-azid), majd 5000 I.U. purin-nukleozid-foszforilázt. 5 ml DEAE gyantán abszorbeálva és a kapott szuszpenziót 34°C hőmérsékleten keverjük. 35 nap elteltével további 3000

I.U. tisztított timidin-foszforilázt és 60001.U. tisztított nukleozid-foszforilázt (3 ml DEAE gyantán abszorbeálva) adagolunk, majd további 21 napig keverjük. Ezután a reakciókeveréket szűrjük, a szűrletet két egymás után kötött oszlopra adagoljuk. Az első oszlop 2^ x 10 cm méretű és AG1-X2 (OH-forma) töltetű, míg a második 2^ x 20 cm méretű és Amberlite XAD-2 gyanta töltetű. A minta felvitele után az oszlopokat nagy mennyiségű vízzel átmossuk és a terméket metanollal eluáljuk. A terméket ezután szilikagél oszlopon flash-kromatografáljuk (szilikagél, 2,5 x 48, diklór-metán/mtanol = 9/1). Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a temréket vízben oldjuk és liofilizáljuk. Ily módon 0,162 g cím szerinti vegyületet nyerünk.

Elemanalízis a C15H19FN4O3 összegképletű vegyületre:

Számított: C% = 55,89, H% = 5,94, N% = 17 38

Mért: C% = 56,01, H% = 5,94, N% = 17,20.

A termék szerkezetét tömegspektrummal és NMR spektrummal igazoltuk.

11. példa

6-izopropoxi-9-(béta-D-2,3-didezoxi-3-fluorri

-6HU 200931 Β bofuranozil)-9H-purin

0,9 g (5 mmól) 6-izopropo»-purint (Sigma Chemical Company, St. Louis, MO) és 0,5 g (2,0 mmól) 2’3’-didezori-3’-fluor-timidint 5 ml Ν’,Ν’-fimetilformamidban és 5 ml metil-szulfoxidban szuszpendálunk, hozzáadunk 35 ml 10 mmólos kálium-foszfát puffért (pH = 6,8, 0,04% kálium-azid), majd 5000 I.U. tisztított timidin-foszforilázt cs 10 000

I.U. purin-nukleozid-foszforilázt 5 ml DEAE gyantán abszorbeálva és a kapott szuszpenziót 34 ’C hőmérsékleten keverjük. 35 nap elteltével további 3000 I.U. tisztított timidin-foszforilázt és 6000 I.U. purin-nukleozid-foszforilázt adunk hozzá 3 ml DEAE gyantán abszorbeálva és további 28 napon át keverjük. Ezután a reakciókeveréket szűrjük, a szűrletet egymás után kapcsolt oszlopokra adagoljuk. Az első oszlop 2,5 x 10 cm méretű, töltete AG1-X2 (OH-forma) gyanta, a második 2,5 x 20 cm méretű és a töltete Amberlite XAD-2 gyanta. A minták felvitele után az oszlopokat nagy mennyiségű vízzel átmossuk és a terméket metanollal eluáljuk. A terméket ezután flash-kromatografáljuk (szlikagél, 2,5 x 48 cm, diklór-metán/metanol = 9/1), majd a kapott terméket 25%-os acetonitrilben oldjuk és Cis HPLC oszlopra adagoljuk (Mikrosorb 22 mm (ID) x 500 mm) és 18 ml/perc sebességgel 25%-os acetonitrillel eluáljuk. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a terméket vízben oldjuk, majd liofilizáljuk. Ily módon 0,240 g cím szerinti vegyületet nyerünk, 0,15 hidrátja formájában.

Elemanalízis a C13H17FN4O3 0,15 H₂ összegképletű vegyületre:

Számított: C% = 52,70, H% = 5,78, N% = 18,91, F% = 6,41,

Mért: C% = 52,46, H% = 5,78, N% = 18,48, F% = 6,49.

A termék szerkezetét tömegspektrummal és NMR adatokkal igazoltuk.

12. példa

5-piperidinil-9-(béta-D-2,3-didezoxi-3-fluor-ri bofuranozil)-9H-purin g (5,1 mmól) 6-piperidinil-purint (Sigma Chemical Company, St. Louis MO) és 0,5 g (2 mmól) 2’3’-didezoxi-3’-fluor-timidint 5 ml Ν’,Ν’-dimctilformamidban és 5 ml metil-szulfoxidban szuszpendálunk, hozzáadunk 35 ml 10 mmólos kálium-foszfát-puffert (pH = 6,8, 0,04% kálium-azid), 5000

I.U. tisztított timidin-foszforilázt és 10 000 I.U. purin-nukleozid-foszforilázt 5 ml DEAE gyantán abszorbeálva és a kapott szuszpenziót 34 °C hőmérsékleten keverjük. 35 nap elteltével további I.U. tisztított nukleozid-foszforilázt adagolunk hozzá 3 ml DEAE gyantán abszorbeálva. További 58 nap elteltével a reakciókeveréket szűrjük és a születet egymás után kapcsolt oszlopokra adagoljuk. Az első oszlop 2,5 x 10 cm méretű és AG1-X2 (DHforma) töltetű, a második 2,5 x 10 cm méretű cs Amberilite XAD-2 gyanta töltetű. A minták felvitele után az oszlopokat nagy mennyiségű vízzel átmossuk és terméket metanollal eluáljuk. A terméket ezután flash-kromatografáljuk (szilikagél, 5 x 10 cm, diklór-metán/metanol = 9/1), az oldószert vákuumban eltávolijuk és a terméket vízben oldjuk, majd lioflilizáljuk. Ily módon 0,197 g cím szerinti vegyületet nyerünk, 0,35 etanol tartalommal.

Elemanalízis a C15H20FN5O2 0,15 EtOH öszszegképletű vegyületre:

Számított: C% = 55,88, H% = 6,60, N% = 20,75, F% = 5,63,

Mért: C% = 55,72, H% = 6,48, N% = 20,80, F% = 5,78.

A termék szerkezetét NMR és tömegspektrum adatokkal bizonyítottuk.

Vínts-ellenes aktivitás

A 9. példa szerinti vegyületek anti-HIV aktivitását MT4 sejteken vizsgáltuk és IC50 értékekre a következő adatot kaptuk: 9 μΐηόΐ.

8. példa

6-Ciklopropil-amino-purin-9-béta-D-2’3’-did ezoxi-3’-fluoro-ribofuranozid

o.p.: 144-146 °C ^]H NMR (200 MHz, DMSO-dó): δ 832 és 8,22 (2 s, 2H, H₂ és He), 7,97 (d, IH, NH, J = 4,1 Hz), 6,39 (dd, IH, Hí J = 5,7 Hz, J=9,2 Hz), 5,45 (m, IH, OHs), 5,43 (dd, IH, H₃ J =53,7 Hz, J = 43 Hz), 4,23 (dt, IH, H₄ J = 26,8 Hz, J = 4,6 Hz), 3,60 (m, 2H, H5, és H₅), 3,09 (m, IH, NCH), 2,91 és 2,64 (2m, 2H teljes, H₂, és H₂), és 0,72 és 0,60 (2m, 4H teljes, ciklopropil-csoport).

9. példa

2-Amino-6-metoxi-purin-9-béta-D-2’,3’-didez oxi-3’-fluoro-ribofuranozid

o.p.: 145’C *H NMR (200 MHz, DMSO-dó): δ 8,08 (s, IH, Hs), 6,46 (b, 2H, NH₂), 6,24 (dd, IH, Hí J = 5,7 Hz, J = 9,2 Hz), 5,39 (dd, IH, H₃ J = 54 Hz, J=4,2 Hz), 5,18 (t, IH, OHs J = 5,6 Hz), 4,16 (dt, IH, H4 J = 4,9 Hz, J = 27 Hz), 3,94 (s, 3H, OCH3), 3,56 (t, 21H, Hs, és H₅ J = 5,2 Hz), 2,80 (m, 2H, H₂, és H₂)

10. példa

6-Ciklopentoxi-9-(2’,3’-didezoxi-3’-fluoro-béta

-D-eritropentofuranozil)-9H-purin

o.p.: 111-113’C 'h NMR (200 MHz, DMSO-dó): δ 8,56 és 8,51 (2s, 2H, H₂ és Hs), 6,46 (dd, IH, Hí J = 5,9 Hz, J = 9,0 Hz), 5,68 (m, IH, OCH), 5,45 (dd, IH, H₃J = 53,6 Hz, J=4,4 Hz), 5,22 9t, IH, 5’ OH, J = 5,7 Hz), 4 (dt, IH, H₄ J = 26,4 Hz, J = 4,8 Hz), 3,60 (t, 2H, Hs, és Hs J = 5,3 Hz), 2 (m 2H, H₂, és H₂), 2,00 és 1,73 (2m, 2H és 6H, 4 CH₂).

11. példa

6-Izopropoxi-9-(2’,3’-didezoxi-3’-fluoro-bétaD-eritropentofuranozil)-9H-purin

o.p.: 147-148’C ’H NMR (300 MHz, DMSO-dó): δ 8,58 és 8,53 (2s, 2H, H₂ és H₈), 6,48 (dd, IH, Hí J = 5,9 Hz, J = 8,9 Hz), 5,60 (m, IH, OCH, J = 6,2 Hz), 5,46 (dd, IH, H3 J = 53,6 Hz, J=4,5 Hz), 5,25 (b, IH, OH5,), 4,26 (dt, 1H, H₄ J = 26,6 Hz, J = 4,8 Hz), 3,61 (b, 2H, Hs, és Hs), 3,04 és 2,71 (1 m, 2H, H₂, és H₂), 1,40 (d, 6H, 2-CH3, J = 6,2Hz).

72. példa

6-Piperidinil-9-(2’,3’-didezoxi-3’-fluoro-béta7

-7HU 200931 Β

D-eritropentofuranozil)-9H-purin o.p.: 144-145 °C ³H NMR (200 MHz, DMSO-ds) δ 8,37 és 8,22 (2s, 2H, H₂ és H₈), 6,42 (dd, IH, Hí J = 5,7 Hz, J=9,2 Hz), 5,44 (dd, IH, H₃ J = 53,7 Hz, J = 4,3 Hz), 5,47 (t, IH, 5’ OH, J = 5,7 Hz), 4,32 és 4,18 (2m, 5H, H₄, és 2-CH2-), 3,61 (t, 2H, H_S, és H₅, J = 4,9 Hz), 2,93 (m, 2H, H2 és H₂) és 1,63 (m, 6H, 3-CH₂).

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Eljárás (I) általános képletű vegyületek előállítására - a képletben

B jelentése (B) általános képletű csoport, amelyekben

R² jelentése hidrogénatom vagy aminocsoport, ^és 3

R jelentése 3-6 szénatomos cikloalkil-amino-, 1-6 szénatomos egyenes vagy elágazóláncú alkoxi-,

3-7 szénatomos cikloalkoxi-, vagy 5- vagy 6-tagú telített, egy nitrogénatomot tartalmazó (heterociklusos gyűrű, amely a benne lévő nitrogénatomon keresztül kapcsolódik a purinvázhoz, azzal jellemezve, hogy egy (III) általános képletű purin- - a képletben

B jelentése a fenti - vagy annak reakcióképes származékát a kívánt ribofuranozil-csoportnak a 9-es vagy 1-es helyzetbe való bevitelére alkalmas vegyülettel reagáltatjuk.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan kiindulási anyagot alkalmazunk, amelynek képletében R³ jelentése ciklopropil-amino-, metoxi-, ciklopentoxi- vagy piperidinil-csoport.
3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan (II) általános képletű vegyületet alkalmazunk, amelynek képletében R_a jelentése észter-, éter- vagy aralkoxi-csoport.
4. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a (III) általános képletű vegyületet 2’,3’-didezoxi-3’-fluor-timidinnel reagáltatjuk pentozil-átvivő enzim jelenlétében.
5. Eljárás gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely, az 1. igénypont szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyületet a képletben B jelentése az 1. igénypont szerinti - gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyaggal és/vagy segédanyaggal összekeverjük és adagolásra alkalmas gyógyszerkészítménnyé alakítjuk.

-8HU 200931Β

Int. Cl⁵: A 61K 31/70, A 07 H19/73