HU196217B - Process for production of new vinblastin-ensime-conjugates and their derivatives and medical compounds containing such substances - Google Patents
Process for production of new vinblastin-ensime-conjugates and their derivatives and medical compounds containing such substances Download PDFInfo
- Publication number
- HU196217B HU196217B HU864190A HU419086A HU196217B HU 196217 B HU196217 B HU 196217B HU 864190 A HU864190 A HU 864190A HU 419086 A HU419086 A HU 419086A HU 196217 B HU196217 B HU 196217B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- conjugates
- vinblastine
- group
- derivatives
- immunoglobulin
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
- C07D519/04—Dimeric indole alkaloids, e.g. vincaleucoblastine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/6805—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a vinca alkaloid
Landscapes
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás új vinblasztin-konjugátumok cs származékaik, valamint ilyen vegyülcteket hatóanyagként tartalmazó tumorellenes hatású gyógyszerkészítmények előállítására.
Ismert, hogy vinblasztint cs néhány származékát, különösen a vinkrisztint és/vagy vindezint peptidekhez, így például albuminhoz vagy immunoglobulinokhoz kötik, amelyeket konjugátumoknak neveznek. Ilyen konjugátuinokat írnak le például a következő irodalmi helyeken: J. D. Teale, Jacqueline M. Clough és V. Marks, Br. J. Clin. Pharmac. 4. 169-172 (1977); C. H. J. Ford, C. E. Newman, J. R. Johnson, C. S. Woodhousc, T. A. Reeder, G. F. Rowland, R. G. Simmonds: Br. J. Canccr 47. 35—42 (1983); M. J. Emblcton,
G. F. Rowland, R. G. Simmonds, E. Jacobs, C.
H. Marsden, R. W. Baldwin: Br. J. Canccr 47. 43-49 (1983); J. R. Johnson, C. H. J. Ford, C. E. Newman, C. S. Woodhousc, G. F. Rowland, R.
G. Simmonds: Br. J. Canccr, 44. 472—475 (1981); 56 322. számú európai közzétételi irat (Eh Lilly) és R. A. Conrad, G. J. Cullinan, K. Gerzon, G. A. Poorc, J. Med. Chem. 22, 391, (1979). Az iminunoglobulinok tumorokkal kapcsolatos antigén-felismerő képessége is szeles körben ismert a szakterületen [például Baldwin R. W. cs Byers V, S.: „Monoclonal Antibiodes fór Canccr Dctection and Therapy”, Ed. Acadeinic Press, London New York (1985); Koprowski II., Strcplcwski L., Herlyn D., „Study of Antibodics against I-Iumán Mclanoina”, Proc. Nat. Acad. Sci (USA), 1978, 75, 3405—3409; Thompson C. H., Whitchcad R.
H. , McKcnzicI. F. C., „AHumanBreast Associated Antigén Dctccted by a Monoclonal Antibody”, J. Nat. Canccr. Inst., 1983, 70, 409-420; Síkora K., Wright R., „Humán Monoclonal antibodies to Lung Cancer Antigens”, Brit. J. Canccr, 1981,43,696-700.].
A 0 124 502. sz. európai közzétett szabadalmi bejelentésben bisz-indol-származékok fehérjékhez, fehérje-fragmensekhez vagy aminokhoz való kapcsolódását ismertetik —COCH,— vagy —CO (CH,)„=CO-csoportokon — a képietekben n értéke 1 cs 5 közötti egész szám — keresztül, amelyek még alkil- vagy aminocsoporttal szubsztituálva lehetnek.
Ezen bisz-indol-származékok előállításának célja nemcsak új iminunoglobulin-származékok előállítása, hanem olyan tumor-ellenes gyógyszerkészítmények biztosítása is, amelyek aktívabbak, szelektívebbek és kevésbé toxikusak mint az ismert vegyületek.
Ez utóbbi szempontból számos fehérje cs más tumor-ellenes szer-konjugátnmot vizsgáltak, különösen antitestek és ricin fragmensek vagy albumin és metotrexát konjugátumokat [2 437 213. sz. francia szabadalmi leírás; B. C. F. Chu cs munkatársai, J. of Pharmacology and Exp. Thcrapeatics, 219 (2),389-393, (1981)].
Monoklón-antitestek, különösen humáneredetű monoklón antitestek ismert tumor-ellenes hatású hatóanyagokkal képzett konjugátumait különösen sokat vizsgálták.
A bisz-indol alkaloidok és tubulin 1:1 arányú komplexét ismertetik a 854 053. számú belga szabadalmi leírásban. Egyes esetekben kisebb toxiei2 tás cs jelentősebb kemoterápiás aktivitás mutatható ki a szabad alkaloidokhoz viszonyítva.
A találmány tárgya új vegyületek előállítása, amelyek vinblasztin cs iminunoglobulin vagy adott esetben galaktolizált albumin konjugátumai cs a kötés a vinblasztin-váz 4-es helyzetű hidroxücsoportján kialakított csztcrcsoporton keresztül történik.
A találmány szerinti konjugátumok előállításánál a fehérjét úgy kapcsoljuk a vinblasztinhoz, hogy azt előzőleg — adott esetben aktivált — bifunkciós szerves vegyülettel kondenzáljuk.
A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek az (I) általános képletű vegyületeknek felelnek meg, amely képletben
A jelentése:
NH-R —COCH—(CH,)„—CO képletű csoport,
NH-R amelyben n jelentése 1 vagy 2 cs
R jelentése alkilcsoport, előnyösen acetil-, vagy bcnzil-oxi-karbonil-csoport,
R, jelentése iminunoglobulin- vagy adott esetben galaktoziiált albumin-csoport,
R2 jelentése nictoxi-csoport,
R3 jelentése alfa-hidroxilcsoport.
Az eljárással nyert konjugátumok fehérje-komponense bármely, antigénfclismcrő képességgel rendelkező fehérje lehet, mivel a felismerés lényege a vinka alkaloida cs a fehérje közötti kapcsolást létesítő A csoport megválasztásában van és a fehérje szerepe nyilvánvalóan csak az, hogy adott specifikus tulajdonsága réven a hatóanyagot a kívánt helyre irányítsa. A kötés minden esetben a fehérjemolekula valamely — NH, vagy — SH-csoportján keresztül történik.
A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek gyógyászati hatása nagyobb mint az eddig ismert vcgyiilctckc, toxieitásuk viszont kisebb.
A találmány szerinti eljárásnál először a 4-0dczacctil-vinblasztin 4-es helyzetű szénatomján lévő hidroxilcsoportot valamely, azaminocsoportján adott esetben szubsztituált anhidriddcl, így például aszparaginsav vagy glutamínsav- anhidridjével kondenzáljuk, majd az így kapott hemiaszpartát. hcmi-glutamát származékot alkalmas oldószer jelenlétében a fehérjével vagy fehérje-fragmcnsscl kondenzáljuk. Alkalmas oldószerként víz/ dioxán elegyet használunk, amelynek pH-ját megfelelő puffénál, például foszfát-pufferral a kívánt értekre bcál'ítjuk. A kondenzáció vcgbemenetelét kromatográfiával vagy elcktroforézisse! ellenőrizzük. Ez utóbbi esetben radioaktív (például triciált) vinblasztint alkalmazunk a könnyű kimutathatóság érdekében.
Kémiai szempontból a kondenzáció végbemenetclét úgy magyarázzuk, hogy a fehérje lízinjének
-2196 217 aminocsoportja cs az adott esetben szubsztituált hemiaszpartát vagy hemi-glutamát aktivált észtercsoportja között kovalens kötés alakul ki.
A szarvasmarha szérum albumin például 56 lizin-aminocsoportot tartalmaz. A fchcrjcmolckulánkcnt kapcsolódó vinblasztin molekulák száma függ a reakciókörülményektől cs érteke általában 1 és 34 közötti érték.
Az aktiválást ismert eljárások szerint végezzük, így például klór-hangyasavas alkil-csztcrrel, előnyösen etil- vagy izobutil-észtcrrcl.
A kondenzációt in situ, az aktivált anhidridet tartalmazó reakcióelegyben végezzük, bár kondenzáció előtt az aktivált anhidridet izolálhatjuk is.
Λ találmány szerinti eljárással nyert konjugátumoí ismert eljárások szerint izoláljuk. Eljárhatunk úgy, hogy a konjugátumot acetonnal kicsapjuk, centrifugáljuk, mossuk, liofdizáljuk, majd gclszűrcssel tisztítjuk. Kívánt esetben az így kapott konjugátumot meg szukcinálhatjuk is, hogy a konjugált és nem-konjugált fehérjéknél ismert aggregációs problémákat elkerülhessük.
A találmány szerinti eljárásnál előnyösen alkalmazott fehérjék a szarvasmarha vagy humán szérum albumin, vagy az immunoglobulinok, így például a monokíón antitest eljárással nyert immunoglobulinok. Ez utóbbi esetben a humán eredetű monoklón antitestek alkalmazása előnyös, mivel ezek bizonyos affinitást mutatnak a humán daganatokhoz.
A konjugátumok előállításánál alkalmazott fehérjék módosított, így galaktozilált. fehérjék. E módosítás lehetővé teszi, hogy az új konjugátumok a felhasználásuk során bizonyos szövetekben, így például a májban koncentrálódjanak. Agalaktozilálást például G. Witson eljárása szerint (J. of Biochemistry, 253, (7) 1978/, 2070 -2072) végezhetjük.
A találmány szerinti eljárással előállított konjugátumok in vitro vizsgálatai azt mutatják, hogy c vegyületek tumor-ellenes hatása sokkal nagyobb, mint a 3-as helyzetben kapcsolt konjugátumokc.
A találmány oltalmi körébe tartozik az (I) általános kcpletű vegyületeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítási eljárása is, amelyek előnyösen alkalmazhatók a humán gyógyászatban tumor-ellenes hatásuk alapján.
Különösen előnyösen alkalmazhatók c hatóanyagok cs készítmények leukémia, glioma, nyirokszövet-szarkóma vagy más rosszindulatú daganatok, így például az ún. „szilárd” daganatok kezelésére.
A humán gyógyászatban előnyösen alkalmazhatók továbbá a Hodgkin-félc megbetegedések, valamint olyan daganatok kezelésére, amelyeknél a vinblasztin, vinkrisztin vagy vindezin felhasználható.
A találmány szerinti eljárással előállított hatóanyagokat általában liofilizált formában alkalmazzuk, amelyeket parantcralisan adagolunk gyógyászatilag elfogadható oldószerrel készült oldat formájában. Oldószerként előnyösen használhatunk például adott esetben pufferolt, így például foszfáttal pufferolt fiziológiás sóoldatokat.
A hatóanyagokat általában 50 cs több gramm közötti mennyiségben adagoljuk, adott esetben más ismert tumor-ellenes hatású készítménnyel együtt.
A következő példákkal a találmány szerinti eljárást közelebbről mutatjuk be.
/. példa
a) Alfa- és béta-d-fl-dczacctil-d-ft-L-N-acetil-hemiaszpartát-vinblasztiii
250 mg N-acetii-L-aszparaginsavanhidridct adagolunk 20 ml vízmentes diklór-metánban oldott 700 mg (0,91 mmól) 4-0-dezacctil-vinblasztinhoz, majd a kapott reakeiókeveréket 20 órán át szobahőmérsékleten keverjük, az oldószert vákuumban ledesztilláljuk cs a visszamaradó anyagot kromatografáljuk (szilikagél, ctcr/mctanol/25%-os ammónium-hidroxid, 60/49.75/0,25).
A kapott termeket ezután diklór-metán és petrol-éter elegyóvel elkeverjük, amikoris 650 mg
4-0-dczacctil-4-O-L-N-acctil-hcmiaszpartát-vinblasztint nyerünk fehér por formájában, kitermelés 77%.
HPLC (nagynyomású rctegkromatográfia) segítségével mindkét (alfa cs béta) izomer jelenléte kimutatható, arányuk 85/15.
IR spektrum (KBr): 3420, 2960, 2880, 1737, 1660, 1613, 1501, 1460, 1430 cm-1.
Tömegspektrum: DCl (izobután): 925 (M+), 939 (M' +14), 857,769, 693. 635.
b) Alfa- és béta 4-0-dezaceti[-4-0-L-N-acetil-liemiaszpartúl metil-észter-vinblasztin
514) mg (0,54 mmól) 4-0-dezaccti 1-4-0-L-N-acctil-hemiaszpartát-vinbíasztint 10 ml abszolút metanolban oldunk, száraz sósavgázzal telítjük és szobahőmérsékleten 20 órán át keverjük. Ezután az oldószert vákuumban ledesztilláljuk, a maradékot 15 ml víz cs 15 ml diklór-metán elegyében fclveszszük, ammónium-hidroxiddal meglúgosítjuk, a vizes fázist 3-szor diklór-inctánnal extraháljuk, a szerves fázisokat egyesítjük, 40 ml vízzel és 40 ml telített nátrium-klorid oldattal mossuk, vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk cs csökkentett nyomáson betöményítjük. A visszamaradó anyagot kromatográfiásan tisztítjuk (szilikagél, metilénklorid/mctanol, 95/5). Ily módon 410 mg alfa és béta 4-0-dczacctil-4-0-L-N-acctil-hcmiaszpartátmctil-csztcr-vinblasztint nyerünk, kitermelés 81%.
A kromatografálás után nyert egyes izomerek analízis adatai: fő frakció: («izomer):
tömegspektrum (DCl, izobután): 939 (M+), 940 (M4+1), 953 (M1 +14)
IR spektrum (KBr): 2950, 2880,1740, 1675, 1615, 1503 em-'.
NMR spektrum (CDCI3, 360 MHz) <5: 9,65 (OH), 8.02 (NI I), 7,52 (LI—9'),7,16—7.05 (H-10'. I liiII-12'). 6.61 (H-9), 6.52 (NH), 6,07.(1112), 5.75 (II-14). 5.52 (H-17), 5,17 (H—15),
4,75 (—CH—NH), 3.95 (H-17A'), 3,80 (OMe), 3.77 (-OMe). 3.70 (-OMe), 3.60 (OMe). 2.80 (II—21 A', 11-21B'), 2,67 (NMe), 2,62 (H—21), 2.00 (MeCO). 0,92-0.75 (2 Me) Rf: 0,51 (CII,CÍ2: CH3 = OH-90:10, szilikagél) Mellek frakció:
196 217
Tömegspektrum (DCI-izobután): 939 (M'*·), 940 (M++l)
IR spektrum (KBr): 1740,1675.1615 cm->
NMR spektrum (CDC13> 360 MHz) <5: 9,25 (OH), 8,02 (NH), 7,50 (H-9'), 7,16-7,05 (H-10'. H-11', H-12'), 6,61 (H-9), 6,52 (NH). 6,08 (H-12), 5,82 (H-14), 5,47 (H-17), 5,28 (H— 15), 4,75 (CH-NHAc), 3,93, (H-17A'), 3,77 (2xOMc), 3,60 (OMc), 2,70 (NMc), 2,02 (McCo~), 0,95-0,77 (2 Mc)
Rf: 0,39 (CHjCh: CH3OH=90: 10szilikagél)
2. példa
Alfa- és gamma 4-0-dezacelil-4-0-L-N-benzil~oxikarbonil-hemi-ghttamát-vinblasztin
300 mg (0,39 mól) 4-0-dezacctil-vinblaszíint és 114 mg (0,519 minői) N-karbobcnzil-oxi-L-glutaminsavanhidridet 5 ml diklór-metánban oldunk cs szobahőmérsékleten 20 órán át keverjük. Ezután az oldószert vákuumban ledesztílláljuk, a visszamaradó anyagot szilikagélen kromatografáljuk (étcr/metanol/25%-os ammónium-hidroxid, 50/ 49,5/0,5), amikoris 230 ing alfa cs béta 4-0-dczaeetil-4-O-L-N-karbobenzil-oxi-hciniglutamát-vinblasztint nyerünk, amely az a és γ izomerek keveréke cs ezek aránya az elvégzett IIPLC kromatográfiás adatok szerint 60:40,
ÍR spektrum (KBr): 3450, 2960, 2880,1730,1612, 1593,1501,1459,1432,1228 cm-'. Tömegspektrum (DCI-izobután): 1032 (M++I), 984,928,723 cm-1.
3. példa
4-0-dezacetil-4-0-L-N-acetil-hemiciszpartát-vtnblasztin és humán eredetű galaktozilált albumin kapcsolása
a) 80,6 g 4-0-dezacctil-4-0-L-N-acetií-hciniaszpartát-vínblasztint 2 ml dioxánban oldunk, jégfiirdóben lehűtjük, hozzáadunk 0,5 ml dioxánban oldott 24,4 /d trietil-amint és 0.5 ml dioxánban oldott 22,6 /<1 klór-hangyasavas-izobutil-észtcrt és a kapott reakciókeveréket 1 órán át keverjük. Közben 37 ml vízben feloldunk 200 mg galaktozilált humán albumint a pH értékét 0,1 n nátriumhidroxiddal 8,5-es értekre beállítjuk, majd az elegyet hűtőszekrényben 4°C-on tároljuk. 1 óra elteltével a fenti aktivált észtert hozzáadjuk az oldathoz, 4°C-on 14 órán át keverjük, miközben a pH értékét 0,1 n nátrium-hidroxid adagolásával
8,5-es értéken tartjuk. Ezután az oldatot 9 ezrelékes náíriunVkloriddal kiegyensúlyozott Scphadex gél G 25-ön szűrjük (pH = 7,5), a konjngátumokat tartalmazó frakciókat egyesítjük, ultraccntrii'ugálással betöményítjük és sterilizáljuk. A fehérjetartalmat a Lowry módszerrel, az alkaloidtartalmat a radioaktivitásmcrcsscl határozzuk meg.
Λ kapott konjugátum 13 mól vinblasztint tartalmaz 1 mól galaktozilált humán albuminra vonatkoztatva és a HPLC segítségével 82% monomer és 18% dimer konjugátum mutatható ki. Retenciós idő: 20167 (HPLC; Sorbax G. F. 250 és GF 450 töltetű oszlopon meghatározva).
b) 80,6 mg 4-0-dezacetil-4~0-L-N-accíil-hciniaszpartát-vinblasztint 2 ml dioxánban oldunk, majd jégfiirdőn lehűtjük és hozzáadunk 0,5 ml dioxánban oldott 24,4 /d trietil-amint cs 0,5 ml dioxánban oldott 22,6 ,<d klór-hangyasavas-izobittil-észtert.
Ezután 200 mg galaktozilált humán albumint feloldunk 37 ml 0,1 mólos foszfát pufferban, (pH = 8,2) és a pH-t 1 n nátrium-hidroxiddal
8,5-ös értékre beállítjuk.
/V kapott oldatott 4°C-on tároljuk, majd 1 óra cll éltével hozzáadjuk a fenti aktivált észtert. A kapott rcakciókcvcrékct 14 órán át 4°C-on keverjük, miközben a pH értékét 8,5-es értéken tartjuk 1 n nátrium-hidroxid adagolásával. Az oldatot a fentiek szerint gcl-szűrjük, a konjugátumot tartalmazó frakciókat egyesítjük, ulíracentrifugálással betöményítjük, sterilizáljuk és a fehérjetartalmat a lowry és az alkaloidtartaímat radioaktivitásmérésscl meghatározzuk.
A kapott konjugátum 9,3 mól vinblasztint tartalmaz l mól galaktozilált humán albuminra vonatkoztatva. A HPLC analízis 91,5% monomer, 7% dimer és 1,5% polimer konjugátumot mutat ki.
A fentiek szerint nyert konjugátum lizozim enzimekkel szembeni cllenállókcpességct 5 mmól cisztcin, 40 mmól acetát puffer cs lizozim enzim jelenlétében vizsgáljuk 48 órán át való, 37°C-on végzett ínkubáláissai. A meghatározáshoz alikvot résztveszünkés40tf% triklór-ecetsavhozzáadásával kicsapjuk a nem-elbomlott fehérjét, majd 4‘’Con tároljuk 1 órán át, centrifugáljuk cs a fciiiiűsző folyadékrészének radioaktivitását vizsgáljuk. A konjugátum bomlckonyságának mértéke az oldható rész radioaktivitása. A mérések azt mutatták, hogy 24 óra elteltével a konjugátum 75%-a elbomlik cs további változás 48 óráig nem mutatható ki.
A fenti példa szerint nyert konjugátum kemoterápiás aktivitását P 388 Leukémia fcríozéscs nőstény BDF, egereken határoztuk meg: a 0. napon 16r> daganatos sejtet inokuláltunk pcrítoncáüsan az egereken, majd a konjugátumot az 1. napon adagoltuk. Λ vizsgálati eredmények azt mutatták, hogy a konjugátum igen hatásos, mivel 650%-kaí növeli az életbenmaradást 60 mg/kg dózis esetében cs a tű lélő egerek száma 60 nap után 5/5.
4. példa
Alfa- és gamma N~(4-fí-dczacetil-4-0-L-N-acetil-hemiaszpartái-vinblasztinoH-23)-L-eiil-iriptofttnát
Az 1. példa szerint eljárva, M-(dczaccti 1-4-0vÍnbla.sztii)oil-23)-L-ctil-tripíofanátoí-N (4-0-dezacetil-4-O-N-acctil-hcniiaszpartát-vinblasztinoil23)-tripto-cti!-trsptofanáttá alakítjuk (alfa és gamma izomer keveréke),
A kapott maradékot kromatográfiával tisztítjuk (szilikagél, cter/metanol/ 25%-os ammónium-hidroxid, 50/49, 75/0,25) és 314 g kiindulási anyag esetében 200 mg termeket nyerünk.
Tömegspektruin (DCl, aceton): i 126 (fvl·1), 1066. 984,970.951.911.
IR spektrum (KBr) 3400, 2960, 2940, 1740, 1665, 1618 cm-'.
196 717
5. példa
Alfa- és béta izomer N-(4-ö-dezacelil-4-0-L-N-aeelil-liemiaszpartát-viiiblasztinoil-23)-L-etil-izoleucinát
A 4. pclda szerint eljárva N-(dczacetil-4-0-vinblasztinoil-23)-L-etil-izoleucinátot N-(4-0-dczacctil-4-O-L-N-acctÍI-hemiaszpartát-vinblasztinoil23)-L-ctiI-izolcucináttá alakítunk.
Tömegspektrum (DCI, aceton): 1051 (Mf), 1036, 10
1009,977, 897, 838,755,709,652.
IR spektrum (KBr): 3410, 2963, 2929,2880,1734,
1676, 1612, 1500, 1460, 1430, 1372, 1333, 1293 cm-'.
6. példa
Alfa- és gamma izomer 4-0-dezacetil-4-Q-L-N-ace(il-hemigliitamát-vinblaszlin
A 2. példa szerint eljárva 4-0-dczacctil-vinblasztint N-acetil-L-glutaminsavanhidriddel kezelünk, am i kőris 271 g 4-0-dczaceti 1-4-0-L-N-accti 1 -hem iglutamát-vinblasztint nyerünk alfa cs gamma izomerjeik formájában, 380 mg 4-0-dczacctil-vinb- 25 lasztinból kiindulva.
Tömegspektrum (DCI, aceton): 940 (M+1), 871,
707.
ÍR spektrum (KBr): 3470,2960,2880, 1740,1665,
1617 cm-'. 30
7. példa
4-0-dezacetil-4-0-N-acetil-lieiniaszpartát-vinbIasztin és CTMOJ* feliérje kapcsolása 35
0,77 g (0,83 mmól) 4-0-dczacctil-N-acctil-hcmiaszpartátot 72 ml dioxánban oldunk, jégfürdőben lehűtjük, hozzáadunk 1,66 mmól trietil-amint és
1,66 mmól klór-hangyasav-izobutil-észtert és a 40 kapott keveréket 15 percen át keverjük. Közben a kapcsolni kívánt monoklón antitest (lg G típus)
2,5 g-ját 2 ml 0,1 mólos foszfát pufferban oldjuk pH = 8,5 értéken. A 15 perc elteltével a monoklón antitest oldatot a fenti aktivált észterhez 45 adjuk cs szobahőmérsékleten 24 órán át keverjük.
A kapott konjugátumot gel-szűrjük 9 ezrelékes kálcium-klorid oldattal kiegyensúlyozott Sephadex 25 oszlopon (2,6x40 cm) pH = 7,5-cn. A konjugátumot tartalmazó frakciókat egyesítjük, 50 betőményitjük, ultraszűrjük, sterilizáljuk. A meghűtoít vinblasztin-hcmiaszpartát mennyiséget radioaktivitás mcrcs segítségével határozzuk meg.
A kapott konjugátum4,7 mól vinblasztint tartalmaz 1 mól lg G-rc számolva. Retenciós idő (Sor- 55 bax GF 250, GF 450 oszlop): 19347. Kitermeié.*:
51% az antitestre számolva.
* = Humán tejzsír-vörösvértest membrán elleni monoklón antitest amely felismeri a humán mell carcinoma sejteket gg biopsisban vagy áttételben. (B. Ledet és A. Trónét:
Revue IRFTijdschrift II, (2) (1987).
8. példa
Etil-N-(4-0-dezaceiil-4-0-N-acetil-liemiaszpartátvÍnbkisztiiioil-23)-L-triptofniiát kapcsolása a 4. példa szerint nyert terméket a 3a) példa szerint eljárva galaktozilált humán albuminhoz kapcsolunk. A kapott konjugátum 1 mól galaktozilált humán albuminra vonatkoztatva 7 vinkainolekulát tartalmaz,
Retenciós idő (Sorbax GF250 és GF450 oszlopon): 20’240, kitermelés; 57% az albuminra vonatkoztatva.
Claims (6)
1. Eljárás (1) általános kcpletű vinblasztin konjugátumok — a képletben A jelentése:
-CO-(CH2)„-CHCO- vagy
NH —R —COCH —(CIL)„—CO— kcpletű csoport,
NH-R amelyben
N jelentése l vagy 2 és
R jelentése 2—5 szénatomos alkanoil-, vagy bcnzil-oxi-karbonil-csoport,
R1 jelentése immunoglobulin- vagy adott esetben galaktozilált albumin-csoport
R2 jelentése mctoxi-csoport
R3 jelentése «-hidroxilcsoport azzal jellemezve, hogy (II) általános kcpletű sav anhidridjét vagy annak aktivált származékát a 4-dezacetil-vinblasztinnal kondenzáljuk, majd tt kapott termeket a fenti R*-nek megfelelő fehérjével kondenzáljuk és a kapott vegyületet ismert módon a rcakcióclcgyból kinyerjük.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az első kondenzálást túlnyomórészt diklór-metán oldószerben cs a második kondenzálást víz/dioxán elegyben végezzük.
3. Az 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a (Π) általános képletű kiindulási vegyület aktiválását klór-hangyasavas-alkil-cszterrcl, így például -etil- vagy izobutil-észtcrrcl végezzük.
4. Az I —3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kapott terméket centrifugáljuk, mossuk, liofilizáljuk és/vagy gclszűrésscl tisztítjuk.
5. Az 1—4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy immunoglobulinként humán monoklón antitest eljárással nyert i mmunoglobu I i n t alkalmazu n k.
6. Eljárás gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely, 1—5. igénypont szerint előállított (1) általános képletű vinblasztin konjugátumot. — a képletben A, R(, R2 és R3 jelentése a fenti — gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyaggal cs/vagy egyéb segédanyaggal összekeverünk és 'adagolásra alkalmas gyógyszerkészítménnyé alakítjuk.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| LU86157A LU86157A1 (fr) | 1985-11-12 | 1985-11-12 | Nouveau procede de fabrication de conjugues de la vinblastine et de ses derives |
| EP86870042A EP0222722B1 (fr) | 1985-11-12 | 1986-04-08 | Nouveaux conjugués de la vinblastine et de ses dérivés, procédé pour leur préparation et compositions pharmaceutiques contenant ces conjugués |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT42493A HUT42493A (en) | 1987-07-28 |
| HU196217B true HU196217B (en) | 1988-10-28 |
Family
ID=26106792
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU864190A HU196217B (en) | 1985-11-12 | 1986-10-06 | Process for production of new vinblastin-ensime-conjugates and their derivatives and medical compounds containing such substances |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| AT (1) | ATE89567T1 (hu) |
| AU (1) | AU577206B2 (hu) |
| DK (1) | DK164107C (hu) |
| GR (1) | GR862436B (hu) |
| HU (1) | HU196217B (hu) |
| OA (1) | OA08424A (hu) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2508905B1 (hu) * | 1981-07-01 | 1984-01-27 | Roussel Uclaf | |
| CA1285866C (en) * | 1984-10-19 | 1991-07-09 | Akiko Kubodera | Immunoassay for estriol-3-sulfate |
| ZA873600B (en) * | 1986-05-27 | 1988-12-28 | Lilly Co Eli | Immunoglobulin conjugates |
| US5094849A (en) * | 1988-08-08 | 1992-03-10 | Eli Lilly And Company | Cytotoxic antibody conjugates of hydrazide derivatized vinca analogs via simple organic linkers |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GR81790B (hu) * | 1983-04-29 | 1984-12-12 | Omnichem Sa |
-
1986
- 1986-04-08 AT AT86870042T patent/ATE89567T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-09-24 GR GR862436A patent/GR862436B/el unknown
- 1986-09-30 AU AU63401/86A patent/AU577206B2/en not_active Ceased
- 1986-10-03 DK DK473286A patent/DK164107C/da not_active IP Right Cessation
- 1986-10-06 HU HU864190A patent/HU196217B/hu not_active IP Right Cessation
- 1986-10-07 OA OA58971A patent/OA08424A/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GR862436B (en) | 1986-12-23 |
| AU6340186A (en) | 1988-04-14 |
| HUT42493A (en) | 1987-07-28 |
| DK164107C (da) | 1992-10-05 |
| DK473286A (da) | 1987-05-13 |
| OA08424A (fr) | 1988-06-30 |
| ATE89567T1 (de) | 1993-06-15 |
| DK164107B (da) | 1992-05-11 |
| DK473286D0 (da) | 1986-10-03 |
| AU577206B2 (en) | 1988-09-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4870162A (en) | Conjugates of vinblastine, a process for their preparation and their use in therapy | |
| JP2930965B2 (ja) | Ｃ―３位に脂肪鎖を有するビンカ誘導体の複合体 | |
| EP1390370B1 (en) | Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents | |
| US6825166B2 (en) | Molecular conjugates for use in treatment of cancer | |
| KR20220025861A (ko) | 항체 약물 복합체, 이의 중간체, 제조 방법 및 용도 | |
| HU193737B (en) | Process for preparing transferrin-indole-dihydroindole alkaloid derivatives | |
| US5030620A (en) | Vinblastine derivatives, and pharmaceutical compositions containing them | |
| JPH02131499A (ja) | 細胞毒性薬物コンジュゲートおよびその製法 | |
| HU205135B (en) | Process for producing monoclonal antibody nucleoside conjugates | |
| CN117731798A (zh) | 抗体偶联药物、其中间体、制备方法及应用 | |
| JPS61291590A (ja) | ４−デスアセチルインド−ル−ジヒドロインド−ルアルカロイド誘導体 | |
| HU196217B (en) | Process for production of new vinblastin-ensime-conjugates and their derivatives and medical compounds containing such substances | |
| US5661175A (en) | Hemiasterlin and geodiamolide TA | |
| HUT54308A (en) | Process for producing immunoglobulin conjugates and medicaments comprising same | |
| EP0222722B1 (fr) | Nouveaux conjugués de la vinblastine et de ses dérivés, procédé pour leur préparation et compositions pharmaceutiques contenant ces conjugués | |
| US20080255090A1 (en) | Ceratamines A and B, and Analogues, Syntheses and Pharmaceutical Compositions Thereof | |
| JP2021536475A (ja) | チューブリシンおよびそれらの中間体の調製のための代替プロセス | |
| JPS61291589A (ja) | インド−ル−ジヒドロインド−ルアルカロイドのヒドラジドイミド誘導体類 | |
| RU2800137C1 (ru) | Конъюгат антитело-лекарственное средство, промежуточное соединение для его получения, способ его получения и его применение | |
| JPS62195387A (ja) | ビンブラスチンおよびその誘導体の新規結合体、その製造方法、並びにそれを含む製剤組成物 | |
| LU85161A1 (fr) | Nouveaux conjugues de la vinblastine,leur procede de preparation et leur utilisation therapeutique | |
| JP2000510450A (ja) | 群体ホヤ類のリッソクリヌム種からの環状ヘプタ―ペプチド誘導体 | |
| JP2023551203A (ja) | 抗体－薬物コンジュゲートのためのグリコシド二重切断リンカー | |
| PH26447A (en) | New conjugates or vinblastine and its derivatives a process for their preparation and pharmaceutical compositions containing the same |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HU90 | Patent valid on 900628 | ||
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |