HU194315B - Process for preparing new antibiotics containing carbohydrates - Google Patents

Process for preparing new antibiotics containing carbohydrates Download PDF

Info

Publication number
HU194315B
HU194315B HU853482A HU348285A HU194315B HU 194315 B HU194315 B HU 194315B HU 853482 A HU853482 A HU 853482A HU 348285 A HU348285 A HU 348285A HU 194315 B HU194315 B HU 194315B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
atcc
actinomadura
melliaura
chloroform
formula
Prior art date
Application number
HU853482A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT42527A (en
Inventor
Anne C Horan
Jerzy Golik
James A Matson
Mahesh G Patel
Original Assignee
Schering Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Schering Corp filed Critical Schering Corp
Publication of HUT42527A publication Critical patent/HUT42527A/hu
Publication of HU194315B publication Critical patent/HU194315B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C12P1/02—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
    • C12P19/28—N-glycosides
    • C12P19/38—Nucleosides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/044—Pyrrole radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
    • C12P19/58—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen atom of the saccharide radical directly bound through only acyclic carbon atoms to a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. bleomycin, phleomycin

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)

Description

A találmány tárgya eljárás gyógyhatású (1) általános képletű új vegyületek - amelyekben X hidrogénvagy klóratom és R hidrogénatom vagy metilcsoport valamint gyógyászatilag elfogadható sóinak előállítására.
Bármelyik szénhidrát gyűrűhöz kapcsolódó szubszÜtuensek bármely lehetséges sztereokémia! konfigurációjúak lehetnek. Mindegyik szénhidrát gyűrűnek a konformációja lehet szék- és/vagy kádforma.
Az új vegyületek baktériumellenes és rákellenes szerekként használhatók. A baktériumellenes hatásuk miatt az új vegyületeket antibiotikumoknak nevezzük a továbbiakban, noha nemantibiotikus hatást is kifejthetnek.
A találmány szerinti vegyületeket az Actinomadura nembe tartozó új Actionomicetes faj felhasználásával állítjuk elő, amelyet most Actinomadura melliaura sp. nov. SCC1655-nek, korábban Actinomadura futva sp. nov.-nak neveztünk.
Az AT 2433 antibiotikum komplexet az új Actinomadure melliaura törzs biológiailag tiszta tenyészetének fermentálásával állítjuk elő. Az AT 2433 antibiotikum 4 komponensből áll, amelyek mindegyike az (I) általános képletnek felel meg. A négy komponens elegyét az AT 2433 antibiotikum komplexnek nevezzük. Az AT 2433 egyes komponenseinek a jele AT 2433 Aj, A2, B, és B2, és az (1) általános képlettel, valamint az I. táblázatban található jelen-
tésekkel határozhatók meg.
AT 2433 komponens X I. táblázat R
Aj Cl CH3
a2 a H
Bj H ch3
b2 H H
A találmány szerint az AT 2433 antibiotikum
komplexet úgy állítjuk elő, hogy egy, az AT 2433 antibiotikum komplex előállítására képes Actinomadura melliaura sp. nov. törzset vizes, asszimilálható nitrogén-, és szénforrást tartalmazó táptalajon sülylyesztett, aerob körülmények között addig fermentálunk, amíg AT 2433 antibiotikum komplex képződik az említett törzs közreműködésével az említett táptalajon. Az AT 2433 antibiotikum komplexet kinyerjük és az AT 2433 At, A2, Bj és B2 jelű négy komponensére választjuk szét.
Valamely (I) általános képletű vegyület és az AT 2433 antibiotikum komplex előállítására az Actinomadura melliaura mikroorganizmus biológiailag tiszta tenyészete előnyös, amelynek azonosítási száma ATCC 39691.
Az AT 2433 antibiotikum komplex és az abból elkülöníthető négy vegyület különféle Gram-pozitív és ( , am-negatív baktérium ellen hatásos, és kísérleti állati tumor rendszerek, például egérben a P-388 leukémia ellen is fejt ki hatást.
A találmány lehetővé teszi olyan gyógyászati készítmények előállítását is, amelyek X helyén hidrogén- vagy klóratomot és R helyén hidrogén- vagy metilcsoportot tartalmazó (1) általános képletű vegyületeket vagy gyógyászatilag elfogadható sóikat inért gyógyászatilag elfogadható hordozó- vagy vivőanyaggal együtt tartalmazzák.
A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek alkalmasak valamely rosszindulatú daganatos megbetegedésben szenvedő emlős kezelési eljárására is, amely abban áll, hogy az említett, rosszindulatú daganatos betegségben szenvedőnek valamely (1) általános képletű vegyület vagy gyógyászatilag elfogadható sójának hatásos mennyiségét adjuk be.
A találmány lehetővé teszi érzékeny baktériumok által okozott fertőzések kezelését is, oly módon, hogy az ilyen kezelésre szoruló betegnek az (I) általános képletű vegyület vagy gyógyászatilag elfogadható sójának olyan mennyiségét adjuk be, amely ilyen fertőzés kezelésére elegendő.
Az (I) általános képletnek megfelelő AT 2433 antibiotikum komplexet az SCC 1655 számmal jelölt, Actinomadura melliaura sp. nov. mikroorganizmus biológiailag tiszta tenyészetével állítjuk elő. Az Actinomadura melliaura SC 1655 törzset Bristol Cove (Califomia) területén gyűjtött talajmintából izoláltuk.
E mikroorganizmus egy másodlagos tenyészetét az „American Type Culture Collection ’-nél deponáltuk (Rockville, Maryland) ATCC 39691 nyilvántartási szám alatt.
Az Actinomadura melliaura sp. nov. ATCC 39691 termelő törzs leírásához azokat a taxonómiai eljárásokat alkalmaztuk, amelyekre Gordon Gordon, R. W.: „Soma criteria fór the re<jogniíion of Norcardia madurae (Vincent) Blanchard ’ J. Gén. Microbiol., 45, 355—364, 1966, Leudemann és Brodsky (Leudemann, G. M. And Brodsky, B„ Micronomospora carbonacea sp. nov. and Eveminomicin-producing organism , Antimicrob. Agents Chemother., 47-52 (1964), Horan és Brodsky (Horan, A. C. and B. C. Brodsky: „A növel antíbiotic-producingrtcrirtomíM'ura, Actinomadura kijaniata sp. nov. , Int. J. Syst. Bacteriol., 32, ,195-200, 1982) Becker és munkatársai (Becker, B. Lechevalier, Μ. P. and Lechevalier, H. A.: „Chemical composition of cell wall preparations from^strains of various genera or aerobic actinomycetes , Appl. Microbiol., 13, 236—243,(1966), Lechevalier és Lechevalier (Lechevalier, Μ. P. and Lechevalier, H. A.: Chemical composition as a qriteria in the classification of aerobic actinomycetes , Int. J. Syst. Bacteriol., 20, 487—493, (1970), Shirling és Gottlieb (Shirling, E. B. and D. Gottlieb: „Methods fór characterization of Streptomyces species, Int. J. Syst. Baceriol., 16, 313—340, (1966) és Waksman (Waksman, S. A.: „The Actinomycetales , Vol. 2., The Williams and Wilkins Co., Baltimore, Md.) hivatkozott a fentebb felsorolt cikkekben.
Az Actinomadura melliaura ATCC 39691 14—21 nap után 30°C-on jól növekszik Emerson NZA-glükóz, élesztőkivonat-glükóz, ISP 2, 6 és 7 agaron. A fentiek kivételével a legtöbb táptalajon csekély növekedés tapasztalható. A vizsgált táptalajokon diffundálódó színezékek nem képződtek. Czapek-agaron tömegesen fehér légmicélium képződik. A vegetatív micélium pigmentek színe a cserszínűtől az aranyon át a barnáig változik. A pigmentek le>; írására használt színek a „Color Harmony Manuel (4. kiadás, Container Corp. of America, Chicago, 1958.) és a Descriptlve Color Names Dictíonary (Container Corp. of America, Chicago, 1050,Taylor, H. D., Knoche, L. and Granville, W. C.) színelnevezéseinek felelnek meg. A tenyészetek jellemzőit a 11. táblázatban adjuk meg. ___________________________________
Az Actinomadura melliaura A TCC 3961 mikroszkopikus jellemzői:
Vizes agaron 10—14 nap után 30 C-on bőséges, finom, 0,5-0,8 mikron átmérőjű légmicéliumok képződnek. A légmicéliumok mentén hosszú spóratartók helyezkednek el, amelyek egyenes vagy enyhén csavart láncok 10-20 spórával. Jellemző módon a légmicélium végénél két spóratartó figyelhető meg spórákkal. A spórák hengeresek, nem mozgékonyak, 1 2 mikron átmérőjűek és bársonyos felületűnek látπ a V
Az Actinomadunt meliiaum ATCC 39691 fiziológiai jellemzői:
Élesztőkivonat glükóz agaron kb. 27-40°C-on nő az Actinomadunt melíiaura ATCC 39691. A növekedés szempontjából optimális a kb. 30 és 35°C közötti hőmérséklet. Kb. 10 és 45°C-on gyenge növekedést figyeltünk meg. A törzs egyéb fiziológiai tulajdonságait a III. táblázatban foglaltuk össze. Az Actlnomadura melíiaura ATCC 39691 a legtöbb szénhidrátot és egy sor szerves savat felhasznál a növekedéshez. A szénfelhasználás eredményeit a IV. táblázat tartalmazza.
II. táblázat
Különböző, a tenyészet jellemzésére használt táptalajon tenyésztett Actlnomadura melíiaura ATCC 39691 makroszkopikus megjelenése
Bennett-agaT G:», gyenge
S: lapos, szemcsés AM: DFP: —
C: g 2 gc, bambusz
Czapek-szacharóz agar: G: ±-től +-ig, rossztól gyengéig
S: lapos, bársonyos AM: van, fehér DFP: C: g 2 gc, bambusz Glükóz-aszparagin agar: G:* gyenge
S: lapos, szemcsés AM:DFP: —
C: g 2 ea, világos búza
Glikol-aszparagin agar G:++, közepes
S: kiemelkedő, szemcsés
AM:DFP. C:g 2 le, mustár Tápagar G.+, gyenge
S: lapos, ráncostól barázdáltig AM: DFP. C: g 2 ic, mézsárga (arany)
Pepton-glükóz agar G: ±-tól *-ig, rossztól gyengéig
S: alig kiemelkedő, ráncos AM:DFP:C:g 2 gc, bambusz
Burgonya dextróz agar G:+*, közepes
S: kiemelkedő, ráncos
AM:DFP:C: g 3 lg, tégla-barna
Emerson-agar G:+++,jó
S: kiemelkedő, ráncos AM:DFP: _ κπ. w,, C:g 21c, mézsárga, (arany)
NZA glükóz agar G:***,jó
S: kiemelkedő AM: —
C: g 3 le, sárga juhar
Élesztőklvonat-glükózagar: G:«+,jó
S: kiemelkedő, ráncos AM: van, fehér DFP:C. g 3 le, sárga juhar
Paradicsompürézabliszt-agar G:*+, közepes,
S: lapos, enyhén ráncos AM:DFP: C:g31e, teve
Élesztőkivonat-malátaklvonat agar (ISP 2) G:+++,jó
S: kiemelkedő, ráncos AM: DFP:C:g3 le, sárga juhar
Zabliszt agar (ISP 3) G: *, gyenge
S: sima, bársonyos AM: van, fehér DFP: C: g 2 ic, mézsárga (arany) Szervetlen sók - keményítő agar (ISP 4) G:+, gyenge
S: simától szemcsésig AM: van, fehér DFP:C: g 2 ic, mézsárga (arany)
Keményítő agar (Waksman 21) G: ♦, gyenge
S: simától enyhén kiemelkedőig AM:DFP:C: g 21c, mézsárga (arany) Calcium-maleát-agar .
(Waksman 7) G: *, gyenge
S: simától enyhén kiemelkedőig AM:DFP: C: g 21c, mézsárga (arany)
Pepton-vas agar (ISP 6) G: *W, jó
S: kiemelkedő, ráncos AM:DFP:van, borostyán C:g3 ie, teve
Tirozin agar (SÍP 7) G:+*+,jó
S: kiemelkedő, ráncos AM: van, fehér DFP: C:g31g, barna
194 315
Keményítő agar (Gordon) G:*+, közepes
S: kiemelkedő, ráncos AM: —
DFP:C:g 2 ec.ekrü
G: növekedés, S: felületi jellemzők, AM: légmicélium DFP: oldható pigmentek, C: szín
III, táblázat kiActíonomadura melliaura ATCC 39691 fiziológiai tulajdonságai
Vizsgálat Eredmény
Vegyületek hidrolízise:
adenin ♦ hipoxantin - ♦ tlrozln + xantln kazein — zselatin + hippurát + xilán + keményítő +
VegyületekJebontása karbamid allantión Locffler szérum +, alig
Dorsett tojás Vegyületek képzése:
melanin — kénhidrogén —
Nitrát nltrltté redukálása +
Növekedés a következő vegyületek 50 mcg/ml koncentrációja jelenlétében:
(a koncentráció 50 mcg/ml)
Gentamicin +
Szlzomlcin ♦
Neomicin +
Kanamicin ♦
Szteptomicin ♦
Paromomicin ♦
Szpektlnomicin *
Rozaramicin +
Eveminomicin —
Rifamlcin —
Penicillin G +
Cefalotln +
Linkomlcin +
Tetraciklin +
Növekedés nátrlum-klorid jelenlétében 1% +4, jó
2% ♦, rossztól gyengéig
3% ±, rossz
Érzékenység: lizozomra ♦ szalicilé tra +
ÍV, táblázat
Az Actínomadura melliaura ATCC39691 szénhasznosítása
Vizsgálat Eredmény
Szénhidrát hasznosítás1
Adonlt *«Jó
D-arabinóz ♦«Jó L-arabinóz «+Jó cellobioz dextrln +++,jó dulcit ±, rossz erltrlt ±. rossz fruktóz +*+,jó
L-fukóz ♦♦♦Jó galaktóz ♦♦♦, jó glükóz +**Jó alfa-metll-d-glükozld ±, rossz metfl-béta-D-glükopiranozid ♦+♦, jó glicerin «+, jó inozit «+, jó inulin ++, közepes laktóz ±, rossz
maltóz *++,jó
mannit ♦++, jó
mannóz ♦♦♦JÓ
melibióz ±, rossz
mellzitóz ±, rossz
raffinóz ±, rossz
ramnóz ♦♦♦Jó
ribóz +*+JÓ
szacharóz ±, rossz
trehalóz ♦♦♦Jó
D-xilóz ♦++,jó
Szerves savak hasznosítása® Eredmény
acetát ♦
benzoát —
citrát ♦
formiát —
glutamát +
laktat ♦
maleát • +
olcát
oxalát —
propionát +
szukclnát
tartarát -
piruvát +
1. Leudemann-Brodsky médium (Antímicrob. Agents
Chemother. 47—52,1964)
2. Gordon médium (J. Gén. Mlcrobiol. 45 355364,1966)
Az actínomadura melliaura ATCC 39691 sejtfalát Becker és munkatársai (Appl. Mlcrobiol. 13, 236243, (1965)) valamint Yamaguchl (J. Bacteriol. 89, 441-453, (1965)) által leírt módon vizsgáltuk, és azt találtuk, hogy fnezo-diaminopimelin-savat tartalmaz. Az egész-sejt hidrolizátumában a jellemző szénhidrát komponenst madurózként (3-0-metil-D-galaktózként) azonosítottuk Lechevalier és Lechevaller eljárását követve (Blology of the Actinomycetes and Related OrganlsmslJ, 78—92, (1976)).
A sejtfal analízis és a morfológiai jellemzők alapján a tenyészetet az Actínomadura nembe soroljuk és Actínomadura melliaura ATCC 39691 névvel jelöljük. Az új Actínomadura melliaura ATCC 39691-et az Actínomadura nem 13 deponált fajtájával hasonlítottuk össze. A 13 deponált törzs közül az Actínomadura melliaura ATCC 39691 a vegetatív micélium színét tekintve megegyezik az A. hefrata, A. flava és A. brunnea törzsekkel, az Actínomadura melliaura ATCC 39691 a spóralánc morfológiájában, a légmlcéllum színében, a metil-béta-D-glükozld felhasználásában és az antibiotikum termelésben különbözik az A. hehata-tól, az Actínomadura melliaura ATCC
194 315
39691 az A. flava-tól a légmicélium képzésében, a spóratartó morfológiájában, ahol a valódi légmicélium spóraláncokká szakad szét, a metil-béta-D-glükozid felhasználásában és az antibiotikurti termelésében különbözik, míg az A. brunnea-tó\ morfológiailag, a légmicéliumok színében, a metil-béta-D-gjükozid és mannit felhasználásában valamint az antibiotikus hatásban tér el. Az V. táblázat összehasonlítja az Actinomadura melliaura ATCC 39691 törzset az említett Actinomadura törzsekkel.
Az Actinomadura melliaura ATCC 39691 törzset egyedülálló morfológiája és jellegzetes fiziológiai 5 és tenyésztési sajátságai, valamint az új AT 2433 jelű antibiotikum komplex termelése alapján az Actinomadura nem megkülönböztethető, új fajtának tekintjük. Ez azt jelenti, hogy ha az Actinomadura nembe tartozó új faj egy másik törzsét találják, a típustörzs a típusalfaj is.
V táblázat
Actinomadura fajok összehasonlító jellemzői
Taxon spóralánc spóra felszín a légmicélium színe a vegetatív micélium színe
Actinomadura melliaura egyenes, nyűt rövidtől hosszúig bársonyos fehér csertől-sárgásbar-
ATCC 39691 náig
A. citrea egyenestől görbültig rövid, egyenetlen sárgáskék citromsárga
ATCC 27887 A. flava a teljes légmicélium spóra- bársonyos ritkán képződik citromsárga—sár-
ATCC 29533 láncokra szakad egyenes, hosszú barna
A. helvata zárt spirálok, rövid bársonyos fehértől-rózsa- sötétzöld
ATCC 27295 színig
A. kijaniata ~ a teljes légmicélium spóraláncokra bársonyos fehértől halvány sötétzöld
szakad, csavarodó spirálok, hosszú zöldig
A. macra egyenestől csavarodóig bársonyos szürkés krémszínűtől
ATCC 31286 rövid szürkéig
A. madurae görbülttől hurkoltig, rövid bársonyos ritkán képződik rózsaszíntől
ATCC 19425 fehértől rózsaszínig pirosig
A. malachitica laza spirálok, rövid bársonyos ritkán képződik krémszínű
ATCC 27888 halványzöld
A. pelletieri görbülttől hurkoltig, rövid ritkán képződik, rózsaszínig krémszínű
A. pusílla zárt spirálok, bársonyos fehértől rózsa- bamásszürke—
ATCC 27296 rövid színig kék
A. roseoviolcacea hurkolttól zárt spirálokig bársonyos fehértől pirostól
ATCC 27297 egyenetlen rózsaszínig ibolyáig
A. rubra hurkolttól spirálig bársonyos ritkán képződik téglavörös
ATCC 27031 rövid egyenetlen fehértől rózsaszínig
A. spadix hurkolttól zárt spirálig, rövid bársonyos szürkés szürkésbama
A. verrucoso-spora ATCC 27299 ATCC 31466 hurkolttól spirálig egyenetlen szürkéskék rózsaszín
Természetesen a jelen találmány nem korlátozódik a fentebb leírt, különösen előnyös Actinomadura melliaura ATCC 39691 törzs vagy olyan organizmus alkalmazására, amely a fenti leírásnak teljes mértékben megfelel. Magábafoglalja az új faj más, AT 2433 komplex termelő törzsét vagy olyan mutánsait, amelyek hagyományos módon, pádéul röntgensugárral vagy UV-sugárral, nitrogén-mustárokkal való kezeléssel, fágképzéssel és hasonló módszrrtel állíthatók elő.
Az Actinomadura melliaura (például az ATCC 39691 szám alatt deponált) törzs ellenőrzött körülmények között, alkalmas közegben AT 2433 antibló45 tikum komplexet termel, amely (I) általános képlettel jellemezhető és AT 2433 At, AT 2433 Aa, AT 2433 Bi és AT 2433 B2 jellel megkülönböztetett négy vegyületre bontható szét.
Az antibiotikum termelésére szolgáló fermentálást azzal kezdjük, hogy - rendszerint két vagy három szakaszban végzett átoltással - életerős vegetatív tenyészetet állítunk elő.
194 315
V. táblázat folytatása
Taxon Mezo-diaminópimelinsav és maduróz Antiblotikus hatás Xantin hidrolízis
Actinomadura melliaura
ATCC 39691 F — '
A. citrea ATCC 27887 ♦ —
A. Hava ATCC 29533 + F -
A. helvata ATCC 27295 + —
A. kijaniata ATCC 31588 ♦ ► +
A. macra ATCC 31286 ♦ F —
A. madurae ATCC 19425 + F —
A. malachitica ATCC 27888 4* - -
A. pelletieri ATCC 14816 F F —
A. pusilla ATCC 27296 A. roseoviolacea + F —
A. rubra ATCC 270031 F F —
A. spadix ATCC 27298 + -
A. verrucospora ATCC 27299 ATCC 31466 — ♦ »
Metil-béta Mannit
D-glükozid felhasználás ♦
♦ •F ♦
Az ilyen oltóanyag előállítására alkalmas közeget az alábbiakban A táptalajként és B táptalajként ismertetjük. A beoltást és a fermentálást olyan közegben hajtjuk végre, amelyben a pH-t 6,5 és 8,5 között, előnyösen az oltóanyag számára 7,5 és a fermentálás számára 7,0 értéken tartjuk. A helyes pH határokat rendszerint úgy tartjuk fenn, hogy a közeghez alkalmas pufferanyagokat, így például kalcium-karbonátot adunk.
A vegetatív oltóanyag előállítását és a fermentálást 27°C és kb. 40°C közötti hőmérsékleten hajtjuk végre. A vegetatív oltóanyag előállítására és a fermentálás végrehajtására legelőnyösebb hőmérséklet kb. 30°C és 35°C között van.
Általában a táptalajt olyan alkalmas fermentáló kádban vagy lombikban állítjuk elő, amelyet a beoltás előtt sterilizálunk. Azonban a táptalajt a felhasználás előtt 0°C alatti hőmérsékleten aszeptikus körülmények között tárolni is lehet.
Az Actinomadura melliaura törzstenyészeteket fagyasztott teljes tenyészet formájában tartjuk fenn. Oltóanyag előállítása
A találmány szerinti AT 2433 antibiotikum komplex termelésére előnyös életerősen fejlődő vegetatív oltóanyagot használni.
Az oltóanyag előállítását általában két vagy több szakaszban hajtjuk végre. Nagy méretekben való fermentálás (például 50 liter femientlé) esetében az oltóanyagot előnyösen három szakaszban állítjuk elő.
A lomblkot percenként 300 fordulatú, 5 cm löketű rázógépen 48-96 óra, előnyösen 72 óra hosszat kb. 30°C-on Inkubáljuk.
Második oltási szakasz
Az első oltóanyag 25 ml-ével egy 2 literes Erlenmeyer lombikban levő 500 ml steril A táptalajt oltunk be. Az inkubálást az első szakaszban leírtak szerint végezzük.
* A pH-t szükség esetén nátrium-hidroxiddal 7,5-re állítjuk.
Harmadik oltási szakasz
A második oltóanyag 25—32 mi ével oltunk be egy sorozat, 2 literes Erlenmeyer lombikban lévő 500-500 ml-nyi steril B táptalajt. A lombikokat percenként 350 fordulattal keverve^ 24—72 óra hosszat, előnyösen 48 óra hosszat 30bC-ra inkubáljuk. A lombikokat a fermentlé térfogatára számított percenkénti 0,35 térfogat levegővel levegőztetjük.
A találmány szerint úgy Is eljárhatunk, hogy kihagyjuk a harmadik oltási szakaszt.
I
Antibiotikum termelés (fermentálás)
A következő, B-vel jelölt táptalajt találtuk alkalmasnak az antibiotikum kielégítő és reprodukálható kitermeléssel való előállítására:
A vegetatív oltóanyag előállítására alkalmas 1
talaj összetétele a következő
A táptalaj*
húskivonat 3g
triptóz 1 g
cerelóz 1 g
burgonyakeményitő 24 g
élesztőkivonat 5g
kalcium-karbonát 2g
cupvizzel kiegészítve 1,0 literre.
A steril A táptalaj 50 ml-ének beoltására 2
frissen felolvasztott Actinomadura melliaura teljes tenyészetet használunk.
B táptalaj élesztőkivonat 5 g/liter cerelóz 10 g/liter oldható keményítő 20 g/liter
NZ amin (Difco) 5 g/liter kalcium-karbonát 2 g/liter kobalt(II)klorid (c: 10 ’ mól) 1 m/liter csapvízzel kiegészítve 1 literre, az utósterilízálás pH-ja 7,0
A fent leírt második vagy harmadik oltási szakaszban kapott oltóanyag 500 ml-ével 10 liter steril B táptalajt oltunk be. A fermentáció keveréket 27°C és 40őC közötti hőmérsékleten, előnyösen 30eC és 35eC közötti hőmérsékleten, percenként 350
194 315 fordulattal keverve és percenként a fermentlé térfogatára számított 0,35 térfogat levegővel levegőztetve inkubáljuk. Szükség esetén a fermentlé ρΗ-ját híg sav vagy alkáll-hidroxi hozzáadásával 6,8 és 7,5 között tartjuk. A normális fermentálásban a pH értéke általában 7,5-ig emelkedik, majd a fermentálás végén semlegesre csökken.
Az AT 2433 antibiotikum termelését a tenyészet Micrococcus luteus ATCC 9341 vagy Staphylococcus aureus 209 P törzsekkel szemben neomicin meghatározására szolgáló agarban (BBL) mutatott hatásának mérésével követtük.
Az AT 2433 komplex antibiotikum elkülönítése és AT 2433 Aj, A2, Bj és B2 antibiotikumokra való szétválasztása.
Az AT 2433 komplex antibiotikumot úgy különítjük el, hogy a fermentlevet vízzel nem elegyedő oldószernek, például etil-acetátnak két térfogatnyi menynyiségével kétszer extraháljuk. A kivonatokat egyesítjük, bepároljuk, és a maradékot szénhidrogén oldószerben, például Skellysolve B-ben és metanolban oldjuk. 10 rész metanolhoz 1 rész vizet adunk, és az AT 2433 komplex antibiotikumot a folyadékok között megosztjuk. A vizes metanolos réteget elválasztjuk, és például SkeDysolve B két térfogatnyi mennyiségével extraháljuk. További víz hozzáadásával a víz metanol térfogat arányát 1 : 3-ra állítjuk, és például széntetraklorid 3 térfogatnyi mennyiségével extraháljuk. Víz Ismételt hozzáadásával a víz : metanol térfogatarányt 1 : 2-re állítjuk, és hat térfogat kloroformmal vagy metilén-kloriddal extraháljuk. A kloroformos extraktumokat egyesítjük és bepároljuk. A maradékot közepes nyomáson kovasavgél oszlopon folyadékkromatografáljuk. eluálószerként a kloroform, metanol, víz 4 : 4 : 3 elegy alsó fázisát használjuk. Az eluálást elkezdjük és azt AT 2433 Aj és A2 antibiotikumokat tartalmazó frakciókat (amelyeket kovasavgél vékonyréteg lemezen a hasonló Rr érték alapján határozunk meg) bepároljuk, így az AT 2433 A, és A2 elegyét kapjuk. Hasonló módon az 2433 Bj -t és B2-t tartalmazó frakciókat is összeöntjük és bepároljuk, így az AT 2433 Bi és B2 keverékét kapjuk. Az AT 2433 Ai és A2 keverékét közepes nyomáson kovasavgélen 1% ammónlum-hidroxidot tartalmazó kloroform és 1% ammónium-hidroxidot tartalmazó, 1 : 10 térfogatarányú metanol és kloroform elegy lineáris gradiensével folyadékkromatografáljuk. Az AT 2433 Aj-et és A2-t tartalmazó frakciókat (vékonyréteg-kromatoráfiás meghatározás alapján) összeöntjük és szárazra pároljuk, így szilárd anyagot kapunk. Hasonló módon tisztítjuk az AT 2433 Bj-et és B2-t. Az AT 2433 A! komponenst az AT 2433 A2-től közepes nyornásonson, okladecfl-szilánnal kezelt kovasavgél (C-18 kovasagél) oszlopon folyadékkromatográfiás módszerrel választjuk el, eluálószerként acetonitril : metanol: 0,1 M ammónium-acetát 4:3:3 térfogatarányú elegyét használjuk. Az eluclót vékonyrétegkromatográfiásan követjük, és a szennyezett AT 2433 Aj -et, illetve a szennyezett AT 2433 A2-t tartalmazó frakciókat összeöntjük és szárazra pároljuk. A szennyezett AT 2433 At és Aa komponenseket a közepes nyomáson, C-18 kovasagélen végzett folyadékkromatográfiás eljárást ismételve tisztítjuk.
Az AT 2433 Bj -t az AT 2433 B2-től közepes nyomáson, C-18 kovasavgélen végzett folyadékkromatográfiás módszerrel választjuk el, eluálószerként acetonitril : metanol : ammórüum-acetát 4:3:3 térfogatarányú elegyet használunk.
A találmány szerinti vegyületek, azaz az AT 2433 Aj, AT 2433 A2, AT 2433 B, és AT 2433 B2 szerkezetét az infravörös, ultraibolya ’H és lJC NMR-spektrumok, valamint tömegspektrumok analízise alapján határoztuk meg.
Az AT 2433 A,, AT 2433 A,, AT 2433 B, és AT 2433 B2 biológiai tulajdonságai:
Az AT 2433 Aj, AT 2433 A2, AT 2433 B, és AT 2433 B2 antibiotikumok antibakteriáüs hatásának meghatározására a vegyületeket számos Grampozitív és Gram-negatív organizmussal szemben in vitro vizsgáltuk.
Az in vitro antibakteriális hatásvizsgálatokat a hagyományos agar hígításos módszerekkel MueflHintom agaron (MHA) pH 7,4-en végeztük.
A vizsgálat alapján az AT 2433 Aj, A2, Bj és B2 antibiotikumokat Gram-pozitív baktériumokkal szemben hatásosnak találtuk. Mind a négy antibiotikum a legnagyobb antibakteriális hatást in vitro a Sarcina lutea-val (ATCC 9341) szemben fejtette ki, az AT 2433 Aj és Bj minimális gátló koncentrációja (MIC) 0,25 (mcg/ml, MHA, 48 óra), az AT 2433 A2 és B2 minimális gátló koncentrációja pedig 1,0, Illetve 4,0. A négy végyületnek meghatároztuk az in vitro antibakteriális hatását Baclllus subtilis (ATCC 6633), és két Staphylococcus törzs: falcium (ATCC 09790) és fascaljs (ATCC 29212) esetében is.
Az AT 2433 Bj in vitro hatást mutatott az E. coll SS 1431 Gram-negatív baktériummal szemben is. A minimális gátló koncentrációja 16.0 (mcg/ml, MHA, 48 óra).
A találmány szerinti AT 2433 Aj és AT 2433 Bj vegyületek in vivő tumorellenes hatást fejtenek ki átültetett egér P-388 leukémia ellen.
A tumorellenes hatást a standard Natlon Cancer Instltute vizsgálattal határoztuk meg, amelyet a Cancer Chemother. Rcp. 3 : 1-103, (1972) irodalmi helyen közöltek.
A vizsgálat során 104 p-388 leukémia sejtet (halálos dózis) adtunk be egerenként interperitoneálisan a 0. napon. A vizsgálandó vegyületeket sorozatban hígítottuk (1 : 2, 1 : 4, 1 : 8 stb.) és minden oldatot interperitoneálisan adtunk be az egereknek az 1., 4, és a 7. napon.
A vizsgálat eredményeit a VI. táblázatban foglaltuk össze.
194 315
Az AT2433 Ay és Bx hatása a P-388 leukémiára* ,2 JZLtébliteau
Anyag Dózis, IP® mst£ MST*'.’ tömegváltozás túlélők
(mg/kg/inj) (nap) (%T/C) · g-ban az 5. napon az 5. napon '
AT 2433 A, 16 Tox4 Tox4 -3,2 2/6
AT 2433 A, 8 17,5 194 -4,1 4/6
AT 2433 A, 4 14,0 156 -2,3 5/6
AT 2433 A, 2 15,5 172 -2,2 6/6
AT 2433 A, 1 13,5 150 -0,7 6/6
AT 2433 A, 0,5 13,5 150 -0,2 6/6
AT 2433 B, 16 13,0 144 -0,7 6/6
AT 2433 Bi 8 12,0 133 -03 6/6
AT 2433 B, 4 12,0 133 -0,6 6/6
AT 2433 B, 2 11,0 122 0,0 6/6
AT 2433 B, 1 10,5 117 3,0 5/5
AT 2433 B1 0,5 10,0 111 3,0 5/5
Kontroll 0,56 mL 9,0 100 *1,6 10/10
Lábjegyzetek: 1 Tumor oltóanyag: 1 Gazdaállat·} ’ Kezelés ideje: 106 ascites sejt.ip. CDF i him egér az AT 2433 A! és B, ip. adagolva az 1 .,4. és 7. napon
Tox: toxikus, azaz az 5. napon 4/6-nál kevesebb egér él s MST: az átlagos túlélési idő napban kifejezve * %T/C: (MST-kezelt/MST-kontroll) x 100 7 Kritérium: ha a %T/C nagyobb, mint 125, a vizsgált vegyületet úgy tekintjük, mint amely szignifikáns tumorellenes hatást fejt ki az adott dózisban.
Az AT 2433 Aj esetében a maximális tolerált dózist (nincs elhalás az 5. vagy korábbi napokon a toxicitás miatt), 2 mg/kg-t adtunk három naponként három injekció formájában, az élettartam a kontrollokkal szemben 72%-kal nőtt (%T/C = 172). Az AT 2433 B, legnagyobb vizsgált dózisa 16 mg/kg volt, amely a daganatnövekedést gátolta, de az AT 2433 Aj -nél kisebb mértékben.
Hasonló hatást várunk az AT 2433 A2-től és az AT 2433 Ba-tői is.
Gyógyászati alkalmazás
A találmány szerinti, (I) általános képletű vegyületek, mint már említettük, különböző Gram-pozitív és egy esetben (AT 2433 Bj) Gram-negatív baktérium ellen hatásosak.
A találmány így lehetővé teszi érzékeny bakteriális fertőzések kezelését, amely abból áH, hogy a gazdának, azaz a melegvérű emlősnek, amely ilyen kezelést igényel, egy találmány szerinti (I) általános képletű vegyületet vagy ilyen vegyületet tartalmazó gyógyászati készítményt adunk olyan mennyiségben, amely az ilyen fertőzés kezelésére megfelel.
A találmány szerinti vegyületek daganatellenes hatást is kifejtenek például emlősök rosszindulatú daganatai, Így például P-388 leukémia ellen egérben.
így a találmány lehetővé teszi valamely rosszindulatú daganatos megbetegedésben szenvedő emlősök kezelését is, oly módon, hogy a találmány szerinti, (I) általános képletű vegyület, vagy Ilyen vegyületet tartalmazó gyógyászati készítmény gyógyászatiig hatásos mennyiségét adjuk a rosszindulatú daganatos megbetegedésben szenvedő emlősnek.
A találmány körébe tartozik az olyan gyógyászati készítmény előállítása is, amely egy találmány szerinti (I) általános képletű vegyületet vagy gyógyászatiig elfogadható sóját inért, gyógyászatiig elfogadható hordozóval vagy hígítóval együtt tartalmazza.
A gyógyászatiig elfogadható sók különösen azok a savaddídós sók, amelyek akkor képződnek, ha a találmány szerinti vegyülethez ásványi sav, például sósav, hidrogén-fluorid, salétromsav, kénsav vagy foszforsav, vagy egy szerves sav, például ecetsav, propionsav, oxálsav, valeriánsav, olajsav, palmitinsav, sztearínsav, laurinsav, benzoesav, tejsav, paia-toluolszulfonsav, metánszulfonsav, citromsav, maleinsav, furmársay, borostyánkősav és hasonlók ekvivalens mennyiségét adjuk.
A gyógyászati készítményeket úgy állíthatjuk elő, hogy a találmány szerinti vegyületet vagy gyógyászatiig elfogadható sóját alkalmas, például inért gyógyszerészeti hordozó- vagy hígítóval keverjük össze, és orálisan, parenterálisan vagy helyileg alkalmazható formában adagoljuk.
Ilyen készítmények például az orális adagolásra alkalmas szilárd készítmények, például tabletták, kapszulák, pilulák, porok és granulátumok, orális adagolásra alkalmas folyékony készítmények az oldatok, szuszpenziók és emulziók. Ezeket steril szilárd készítmények formájában is előállíthatjuk, amelyeket közvetlenül a felhasználás előtt steril vizben, fiziológiás sóoldatban vagy más steril Injektálható közegben feloldunk.
A találmány szerinti vegyületek vagy gyógyászatiig elfogadható sóik adott esetben előnyös dózisai az alkalmazott vegyülettől, a készítménytől, az alkalmazás módjától és a kezelendő betegtől és a kezelendő betegségtől függ. A kezelő orvosnak még sok, a szer hatását módosító faktort, így a beteg korát, testtömegét, nemét, táplálkozását, az adagolás idejét.
194 315 a kiürülés sebességét, a beteg állapotát, a gyógyszerkombinációkat, az érzékenységet és a betegség súlyosságát kell flgyelembevennie. Az adagolás történhet folyamatosan vagy periodikusan a maximális tolerált dózison belül. Az adott körülményeknek megfelelő optimális alkalmazási arányt a kezelő orvos könnyen megállapíthatja a hagyományos dózismeghatározó vizsgálatok segítségével.
A következő példák a találmányt szemléltetik.
Az oszlopkromatográfiás, a közepes nyomású folyadékkromatográfiás eljárásokhoz és a kicsapáshoz használt oldószerek nem voltak újradesztlíláltak. A kloroform, széntetraklorld és metanol analitikai minőségű volt. A víz egy Mfllipore 4 szakaszos reagens fokú vízrendszeren keresztülbocsájtott deionizált vizet jelent (18 megohm Mflli-O-víz). Az acetonitrü és dlmetilszulfoxid a nagynyomású folyadékkromatográfiás eljáráshoz megfelelő minőségű volt. A Skellysolve B-t a Getty Oil-tól vásároltuk és nem tisztítottuk tovább. Az ammónium-acetát Fischer által garantált ÁCS minőségű volt. Az oszlopról lejövő eluátumot (általában 50 ml-es frakciókban gyűjtöttük), 405—435 nm-nél ISCO UV-detektorral vizsgáltuk. A részek térfogatrészek.
A vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatokat Whatman LK5DF vagy LK6DF kovasavgél lemezeken (20 mx20cmx0,25 mm) végeztük. A lemezeket Desaga vékonyréteg-kromatográfiás kádakban fejlesztettük ki. A kádakba 100 ml oldószert tettünk, és hagytuk, hogy az egyensúly beálljon, mielőtt a lemezt behelyeztük. A kifejlesztett levegőn szárított lemezeket 355 nm-es UV fényben vizsgáltuk.
Az IR-spektrumokat Beckman 4230-as IR készüléken, az UV-spektrumokat pedig Beckman Acta III UV-készüléken vettük fel. Az ’H és13 C NMR-spektrumokat Brucker WM-360 készüléken, 360 és 90 MHz-nél mértük. A kémiai ionizációs tömegspektrumokat Hewlett-Packard HP 5985B műszeren vettük fel, reagens gázként metánt alkalmazva. A térdeszorpciós kis- és nagyfelbontású tömegspektrumokat Varian M AT-731 készüléken mértük.
1. példa
Az AT2433 antibiotikum komplex termelésének fermentációs feltételei
Törzstenyészet:
Az Actinomadura melliaura ATCC 39691 törzstenyészetét fagyasztott teljes tenyészet formájában tároltuk.
Oltóanyag előállítása
A) Első oltási szakasz: Az Actinomadura melliaura (ATCC 39691) felolvasztott törzsszuszpenziójából egy 5 térfogat%-os oltóanyaggal oltottunk be 70 ml A táptalajt (marhakivonat 3,0 g, tripton 5,0 g, élesztőkivonat 5,0 g, cerelóz 1,0 g, burgonyakeményítő 24,0 g, kalcium-karbonát 2,0 g, csapvíz 1000 ml, pH 7,6 nátrium-hidroxiddal beállítva) egy 300 ml-es Erlenmeyer lombikban. A lombikot 30°C-on 48 órán át inkubáltuk egy 300-s fordulatszámú, 5 cm löketű rázógépen.
B) Második oltási szakasz: 500 ml A táptalajt az első oltási szakaszból vett inokulum 25 ml-éveí (5 tf%) oltottunk be egy 2 literes Erlenmeyer lombikban, és az A) szakasz szerint inkubáltuk.
C) Fermentálás: egy 14 literes fermentorban 10 liter fermentációs B táptalajt (élesztőkivonat, 5,0 g, NZ-amin 5,0 g, cerelóz 10,0 g, oldható keményítő 20,0 g, kalcium-karbonát 4,0 g, csapvíz 1000 inl,
CoCl2 c: ΙΟ-3 M, 1,0 ml) 70 ml második oltóanyaggal beoltunk. A fermentációt 96 órán át 30°C-on, 350-es fordulattal keverve és 0,35 térfogat levegővel levegőztetve végezzük.
Az AT 2433 komplex antibiotikum termelését a tenyészetnek a Micrococcus luteus ATCC 9341 vagy Staphylococcus aureus 209P törzsekkel szembeni hatásának neómicin meghatározására szolgáló agárban (BBL) való mérésével követtük.
D) Elkülönítés
110 liter fermentlevet 2x110 liter etil-acetáttal extrahálunk. Az etil-acetátos extraktumokat egyesítjük, és az oldószert vákuumban lepároljuk, így
32,6 g nyers, szilárd AT 2433 antibiotikum komplexet kapunk.
2. példa
Az AT2433 komplex antibiotikum AT2433 A (Ai + A.2)ésAT2433B(Bi ★ B2) antibiotikumokra bontása
A) A nyers, szilárd AT 2433 komplex antibiotikum folyadékok közötti megosztása
A nyers, szilárd AT 2433 komplex antibiotikumot (32,6 g), amelyet az 1. példában kapunk, 200 ml Skellysolve B-ben és 200 ml metanolban oldjuk Cole-Palmer (Model 8845-60) ultrahangos tisztítóban. Az oldatot 1 literes választótölcsérbe visszük, és 22,2 ml vízzel hígítjuk. Az elegyet összerázzuk, és hagyjuk, hogy a fázisok elváljanak. Az (alsó) vizes-metanolos fázist egy második választótölcsérbe visszük és még két alkalommal 200-200 ml Skellysolve B-vel extraháljuk, amelyet előzőleg 10 térfogat% vizet tartalmazó metanollá] telítettünk, A vizes metanolos fázist 44,4 ml vízzel hígítjuk, és 3 alkalommal 200-200 ml széntetrakloriddal extraháljuk, amelyet előzőleg azonos térfogatú, 25% vizet tartalmazó metanollá telítettünk. A vizes metanolos fázist 41 ml vízzel hígítjuk, és 6 alkalommal 200-200 ml kloroformmal extraháljuk. A kloroformot előzőleg 35 térfogat% vizet tartalmazó metanollal telítettük. A kloroformos extraktumokat összeöntjük, és forgó bepárlóban vákuumban szárazra pároljuk, így 5,45 g A maradékot kapunk, amely mind a négy AT 2433 komponenst, így az Aj-t, A2-t, Bj-t, és a B2 -t is tartalmazza.
B) Az A maradék oszlopkromatografálása
Egy 6 literes választótölcsérben a következő oldószereket rázzuk össze: 2160 ml kloroform, 2160 ml metanol és 1620 ml víz. A kapott fázisokat elválasztjuk. Az alsó fázist használjuk az oszlop- és vékonyréteg-kromatografáláshoz eluálószerként.
Egy 2 cm belső átmérőjű és 100 cin magas oszlopot (Glenco, 3500 Universal LC Column) 140 g Woelm kovasavgél (0,032-0,063 mm) fenti eluálószerrel készült szuszpenziójával töltünk meg. Az A maradék 5,45 g-ját 10 ml eluálószerben oldjuk, és a 15 ml-es mintatartóba visszük. A mintatartót összekapcsoljuk a közepes nyomású folyadékkromatográfiás rendszerrel. Az eluciót kb. 21/ml/perc átfolyási sebességgel kezdjük, és a következő frakciólent szedjük*
1. frakció 180 ml, 2. frakció 100 ml, 3. frakció 50 ml, 4-33. frakció 75-75 ml. Minden frakcióból 25 mlkrolitert Whatman LK6DF kovasavgél vékonyréteg-kromatogrflás lemezre viszünk. A lemezeket az eluálószerrel fejlesztjük ki, és UV fényben 366 nm-nél vizsgáljuk. A 7-14. frakciókat összeöntjük és forgó bepárlóban vákuumban bepároljuk, így 1,4
194 315 g nyers AT 2433 B-t, azaz AT 2433 Bj és B2 keveréket kapunk.
C) A nyers AT 2433 A oszlopkromatografálása
Egy 2 cm belső átmérőjű és 30 cm magas Glenco oszlopot 37 g Woelm kovasavgél (0,060-0,200 mm) kloroformos szuszpenziójával töltünk meg. Az oszlop tetejéről egy 4 cm-es kovasavgél réteget leveszünk, és a nyers AT 2433 A (1,7 g) 200 ml, 2 rész kloroformot és 1 rész metanolt tartalmazó eleggyel készült oldatához adjuk. Az oldószert vákuumban forgó bepárlóban lepároljuk. A kapott élénk sárga port kloroformmal elkeverjük, és az oszlop tetejére visszük. Az oszlopot 300 ml, ammónium-hidroxiddal telített kloroform átszivatá savai hozzuk egyensúlyba (1 térfogat% tömény ammónium-hidroxld — 99 térfogatai) ldoroform, alsó fázis).
Az eluciót 2 1, ammónium-hidroxiddal telített kloroform lineáris gradiensével kezdjük (1 térfogat% ammónium-hidroxidot adva hozzá), és 21 ml/perc átfolyási sebességnél 40 frakciót szedünk. Az eluátumot 405 nm-nél vizsgáljuk. A 31—34. frakciókat összeöntjük és vákuumban, forgó bepárlóban szárazra pároljuk. A maradékot 50 ml, 2 rész kloroformot és 1 rész metanolt tartalmazó elegyben oldjuk. Az oldatot nagyon lassan 1700 ml, gyorsan kevert Skellysolve B-hez adjuk. A kivált csapadékot szűréssel összegyűjtjük, így 697,5 mg homogén AT 2433 A-t kapunk, amely az AT 2433 Aj és A2 elegye, és nem tartalmaz AT 2433 Bt-t és B2-t.
D) A nyers AT 2433 B oszlopkromatografálása
Egy 2 cm belső átmérőjű és 30 cm magas Glenco oszlopot 37 g Woelm kovasavgél, (0,032—0,63 mm) kloroformos szuszpenziójával töltünk meg. Az oszlop tetejéről egy 2 cm-es kovasavgél réteget eltávolítunk, és 500 mg nyers AT 2433 B, amely AT 2433 Bi és B2 elegye, 50 ml, két rész kloroformot és 1 rész. metanolt tartalmazó eleggyel készült oldatához adjuk. Az oldószert vákuumban, forgó bepárlóban eltávolítjuk. Az élénk sárga impregnált kovasavgélt kloroformban szuszpendáljuk, és az oszlop tetejére visszük. Az oszlopot tömény ammónium-hidroxiddal (1 térfogat%) telített kloroformmal hozzuk egyensúlyba. Az eluációt 2 liter, ammónium-liidroxiddal telített kloroform lineáris gradiensével végezzük (1 térfogat% tömény ammónium-hidroxidot adva hozzá) és 16, megközelítőleg 100-100 ml-es frakciót szedünk. Az eluátumot 405-nél vizsgáljuk. A kromatogram alapján a következő frakciókat képezzük: 1. 0— 1218 ml, 2. 1219-1746 ml, 3. 1765-2000 ml. A
2. frakciót vákuumban, forgó bepárlóban szárazra pároljuk. A maradékot 5 ml, 2 rész kloroformot és 1 rész metanolt tartalmazó elegyben oldjuk. Az oldatot 1 liter, nagyon gyorsan kevert Skellysolve B-be öntjük. A kivált csapadékot szűréssel összegyűjtük, így 454 mg homogén AT 2433 b-t, az AT 2433 Bi és B2 keverékét kapjuk, amely AT 2433 A i -t és Á2 -t nem tartalmaz.
3. példa
A z A T2433 A i és A elválasztása
A) egy 2,65 cm belső átmérőjű és 60 cm magas Glencö oszlopot 0,040 mm átlagos szemcseméretű Baker (MR kovasavgél (oktadecíl-szilánnal kezelt kovasavgél) metanolos szuszpenziójával töltünk meg. Az oszlopot közepes nyomású folyadékkromatográfiás rendszerbe kapcsoljuk, és 4 rész acetonitrilt, 3 rész metanolt és 3 rész. 0,1 mólos ammónium-acetátot tartalmazó elegy 600 ml-ével hozzuk egyensúlyba. A 2C) példában kapott AT 2433 A 360 mg-ját 1 ml dirnetüszulfoxidban a mintatartóba visszük és az eluálószerrel az oszlopra szivatjuk. Az eluciót megkezdjük, és az eluátumot 405 és 435 nm-nél vizsgáljuk. Megközelítőleg 50 ml-es frakciókat szedünk kb. 10 ml/ perc-es átfolyási sebességnél. Az eluciós kromatogram alapján a 12-16. frakciókat egyesítve az 1. és a 17-24. frakciókat egyesítve a 2. frakciót kapjuk. A kromatografálást négy alkalommal megismételjük a 2C) példában kapott AT 2433 A újabb mennyiségeinek felhasználásával (a 2. menetben 100 mg, a 3-ban 167 mg, a 4.-ben 160 mg és az 5.-ben 188 mg anyagot kromatografálunk. (Mind az 5 menet 1. frakcióját összeöntjük és 1000 ml kloroformmal extraháljuk. Az extraktumot (az alsó fázist) szárazra pároljuk, és így nyers AT 2433 A2-t kapunk. Minden menet 2. frakcióját külön dolgozzuk fel. A frakciókat 500 ml kloroformmal extraháljuk. Az extraktumot (alsó fázis) szárazra pároljuk, a maradékot 2 ml, 2 rész kloroformot és 1 rész metanolt tartalmazó elegyben oldjuk. Ezt az oldatot gyors keverés közben 500 ml Skellysolve B-hez adjuk. A kivált csapadékot szűréssel Összegyűjtők, így AT 2433 Α,-t kapunk.
B) Egy 1,65 cm belső átmérőjű és 60 cm magas Glanco oszlopot Baker C-18 kovasavgél metanolos szuszpenziójával töltünk meg. Az oszlopot közepes nyomású folyadékkromatográfiás rendszerbe kapcsoljuk, és a fentebb említett eluálószerrel hozzuk egyensúlyba. A 3 A) példában kapott nyers AT 2433 A2-t 1 ml dimetil-szulfoxidban oldjuk. Az oldatot a 15 ml-es mintatartóba visszük, és onnan az oszlopra szivatjuk. Az eluciót megkezdjük, és körülbelül 50 ml-es frakciókat szedünk. Az eluátumot 405 és 435 nm-nél 1SCO UV-detektorral vizsgáljuk. A kapott kromatogram alapján a 16—28. frakciókat egyesítjük, és 1000 ml kloroformmal extraháljuk. Az alsó (kloroformos) fázist elválasztjuk és vákuumban, forgó lepárlóban szárazra pároljuk. A maradékot 5 ml, 2 rész kloroformot és egy rész metanolt tartalmazó elegyben oldjuk. Ezt az oldatot gyors keverés közben 500 ml Skellysolve B-be öntjük. A kivált csapadékot szűréssel összegyűjtük, így AT 2433 A2-t kapunk.
Az AT 2433 Aj és AT 2433 A2 fizikai és kémiai tulajdonságait a VII. és VIII. táblázatban foglaljuk össze:
VII. táblázat
AT 2433 Aj: olyan 0) általános képletű vegyület, amelyben X klóratomot és R metilcsoportot jelent.
Leírás: sárga amorf szilárd anyag vagy finom tűs kristály anyag összegképlet: C3 4 H3 5 QN09
Molekulasúly: 679,17 Kémiai ionizációs tömegspektrometriás módszerrel meghatározva, reaktáns gázként metánt használva (CI-MS-CH4)
UV-spektrum: lambda (c 0,02290 g/1, CI13OII) A mért maximumok es elnyelések (zárójelben) * 200 nm (45.5), 235 run (58.9), 283 nirt (50.6), 316 nm (67.2), 395 nm (5.7)
IR-spektrum: lambda (KBr): 3425, 3362, 2940, 1696, 1581, 1475, 1462, 1442, 1382, 1335, 1277,1242,1194,1128,1078,1052,768,
759 cm'1.
1H NMR-spektrum (360 MHz): A mért kémiai elto10
-101
194 315 lódások és csatolások: delta,. (DMSO-de):
10.64 (s, 1H, N5 -H), 9,27 (d, 1H, Cl-H orCl -H), 9.18 (d, 1H, Ο -H vagy Cl-H),, 7.88 (d, 1H, C4-H), 7.73 (m, 2H, C3-H és C3 -H), 7.49 (m, 2H, C2-H és C2’H), 6.91, (d, 1H, OH), 5.48 (brs, 1H, C3 -OH), 4.81 (brs, 1H, C3 -QH), 4.21 (brd, 1H, C6a’-H), 4.08 (brd, 1H, C5 -H), 3.99 idd, 1H, C6b ’-H), £.77 (d& 1H, C£ ,-H), 3.$03.70 (m, 6H, C2 -H, Cr -H, C4 -H, C5a , H, C5b ”, -HY 3.68 (s, 3H, C4-H -0CH3), 3.40 (m, 1H, C4 -H átfedés H, O-val), 325 (s, 3H, N8-CH3), 2.30 (ni, 2H, C4 ,-NH, C2 -H)s2.22 (s, 3H, C4’”-NCH3), 1.78 (m, 1H, C2b ,-H).
18C NMR-spektrutn (90 MHz)
A mért kémiai eltolódások és hozzárendelések:
delta^ (DMSO-dfi):
PPM Szénatom PP Szénatom
169.0 C7 117.6 C5b
169.0 C7’ 116.4 C4
140.2 C4a 112.1 C4
138.1 C4a’ 99.0 Cl”’
130.0 C5a 84.7 Cl
129.7 C3 78.8 C3’’
129.5 U5a’ 78.1 C4 ,
127.8 C3 77.5 C5
125.3 C5c 72.2 C2”
124.6 Cl 66.5 C3’
123.4 Cl 66.0 C6
122.4 C2 61.8 C5 ”
121.4 C5c’ 61.7 C4*”
121.3 C6 60.1 C4„;OCH3
121.0 C2’ 37.0 C2,„
119.2 C6’ 33.9 C4 -NCH3
118.4 C5b’ 23.6 CtCH3
Tömegspektrum (CI-MS-CH4): M/Z = (M ♦ 1}
Vili. táblázat
AT 2433 A2: olyan (I) általános képletű vegyület, amelyben X klóratomot és R hidrogénatomot jelent.
Leírás: Sárga amorf szilárd anyag összegképlet: C33H33C1N4O9
Molekulatömeg: 665,10 Térdaszorpciós kis- és nagyfelbontású tömegspektrometrlás módszerrel meghatározva
US-spektrum: lambda^^ (c 0,0158 g/1 CH3OH) A mért maximumok és elnyelések (zárójelben) = 198 nm (45.9), 233,5 (mn (58.2), 286 nm (0.6), 314 nm (66.1), 394 nm (5.2).
IR-spektrum: lambda (KBr): 3420, 3355, 2930, J745, 1691, 1575, 1472, 1458, 1438, 1380, 1330, 1278, 1240, 1140, 1120, 1080, 1045, 765, 755 cm’1.
*H NMR-spektrum (360 MHz): A mért kémiai eltolódások és csatolások: delta.. (DMSO-d6):
10.64 (s, 1H, N5’-H), 9.27 (d, 1H, Cl-H vagy Cl’-H), 9.18 (d, 1H, Cl’-H vagy Cl-H), 788 (d, 1H, C4’-H), 7.33 (m, 2H, C3-H és C3’-h), 7.49 (m, 2H, C2-H és f2’-H), 6.91 (d, 1H, Cl”-H), 5.48 (brs, 1H, C3”-OH), 5.14 (in, 1H, Cl”,-H), 5.06 (brs, 1H, C2 OH), 4.81 (brs, 1H, C3’’,-OH), 4.21 (brd, 1H, C6a”-H), 4.08 (brd, 1H, C5”-H), 3.99 (dd, 1H, C6b”-H), 3.68 (s, 3H, C4”-OCH3), 3.72 -3.30 (m, 7H, C2”-H, C3”-H, C4”-H, C3’” -H, C4’”-H, C5a’”-H, C5b”'-H átfedés H2O-val), 3.25 (s, 3H, N8-CH3), 2.55 (m, 2H, C4’”-HN2), 232 (ra, 1H, C2a”'-H), 1.73 (m, 1H, C2b’”-H).
Tömegspektrum: Térdeszorpdós kis- és nagyfelbontású mérések:
FD-LR-MS: m/z 664 (M)+
M/Z 687 (M+Na)+
FD-HR-MS: m/z 664,1795 mért,
664,1936 a C33H33C1N4O» összegképlet alapján számított
4. példa
Az AT2433 Bx és B2 elválasztása:
Egy 2,65 cm belső átmérőjű és 60 cm magas Glenco oszlopot Baker C-18 kovasavgél (0,040 mm az átlagos részecskeméret) metanolos szuszpenziójával töltünk meg. Az oszlopot közepes nyomású kromatográfiás rendszerbe kapcsoljuk, és 3 rész acetonltrilt, 3 rész metanolt és 4 rész 0,1 mólos ammóniumacetátot tartalmazó eluálószerrel hozzuk egyensúlyba. A 2D) példában kapott AT 2433 B anyag 360 mg-ját 2 ml dimetil-szulfoxidban a mintatartóba visszük, és az eluálószerrel az oszlopra szivatjuk. Megkezdjük az eluálást, és az eluátumot ISCO UVdetektorral 405 és 435 nm-né] vizsgáljuk. A 14—19. frakciókból 5 mikrolitemyi mennyiségeket u-Bondapak C-18 oszlopon HPLC technikával kromatografálunk, 4 rész acetonitrilt, 3 rész metanolt és 3 rész 0,1 mólos ammónium-acetátot tartalmazó elegyet használva eluálószerként. A 14-16, frakciókat összeöntjük, és 500 ml kloroformmal extraháljuk. Az alsó, kloroformos fázist elválasztjuk és szárazra pároljuk, így AT 2433 B2-t kapunk. A 17—24. frakciókat is egyesítjük és 500 ml kloroformmal extraháljuk. Az alsó, kloroformos fázist elválasztjuk, és szárazra pároljuk, így nyers AT 2433 B2-t kapunk. A nyers AT 2433 B,-t újrakromatografáljuk, és a fentiek szerint különítjük el, így megközelítőleg 180 mg tiszta AT 2433 Bt -t kapunk.
Az AT 2433 Bt és B2 fizikai és kémiai tulajdonságait a IX. és X. táblázatban foglaltuk össze:
IX. táblázat
AT 2433 B,: olyan (1) általános képletű vegyület, amelyben X hidrogénatomot és R metiicsoportot jelent.
Leírás: sárga amorf szilárd anyag összegképlet :C34H36N4O9
Molekulatömeg: 644,68 'Térdeszorpdós lds- és nagyfelbontású tömegspektrornetriás és CI-MS-Clí4 módszerrel meghatározva
UV-spektrum: lambda^. (c 0,0222 gg/1 CH30H),
A mért maximumok es elnyelések (zárójelben) 202 nm (45.0), 234 nm (64.1), 284 nm (52.2), 316 nm (72.9), 400 nm (6.3).
IR-spektrum: lambda (KBr): 3363, 2940, 1750, 1692, 1575, 1475, 1460, 1435, 1380, 1332, 1240,1185,1105,1010, 750 cm’1.
1H NMR-spektrum (360 MHz): A mért kémiai eltolódások és csatolások: deltaH (DMSO-d6):
10.50 (brs, 1H, N5’-H)?932 (d, 1H, Cl-H vagy Cl’-H), 9.21 (d, 1H, Cl’-H vagy Cl-H), 8.14 (d, 1H, C4-H), 7.86 (d, 1H, C4’-H), 7.68 (m, 2H, C3-H és C3'H), 7.48 (m, 2H, C2-H és C2‘H), 6.44 (d, 1H, Cl’-H), 5.6-4.6 (br. m, 4H, C3”-oH, C’”-H, C2”-OH, C3”-OH), 4.3-3.2 (m, 10H, C2”-H, C3”-H, C4”-H, C5”-H, C6a”-H, C6b”-H, C3”'-H, C4’”-H, C5a”’-H, C5b'”-H), 3.68 (s, 3H, C4”-OCH3), 3.25 (s, 3H, N8-CH3), 235 (m, 1H, C4”’-NH), 2.30 (s, 3H, C4’”-NCH3), 2.03 (m, lH,C2a”’-H), 1.60 (m, lH,C2b'”-H).
-112
194 315 *’C NMR-spektrum (90 MHz)
A mért kémiai eltolódások (PPM):
169.6, 169.5, 140.5, 139.5, 127,4, 127.2, 127.0
126.7, 124.5, 124.3, 124.2, 120.9, 120.3, 114.7,
111.7, 97.8, 86.5, 79.1, 76.2, 76.0, 71.7, 66.3,
65.7, 61.9,60.3,60.0,38.0,23.6.
Tömegspektrum (CI-MS-CH»): m/z = 645, (M+l)+ Térdeszorpciós kis- és nagyfelbontású mérések LR-MS: 111/z = 644, (M)+ m/z = 667, (M+Na)+
HR-MS: m/z = 644,2401 mért, m/z = 644, 2476 a C34H36N4O9 összegképlet alapján számított
X. táblázat
AT 2433 B2. olyan (1) általános képletű vegyület, amelyben X és R hidrogénatomot jelent.
Leírás: sárga amorf szilárd anyag összegképlet: C33H34N4O9
Molekulatömeg: 630,65 Térdeszorpciós kis- és nagyfelbontású tömegspektrometriás módszerrel meghatározva.
UV-spektrum: lambda (c 0,0184 gfl CH30H),
A mért maximumok és elnyelések (zárójelben) = 201 nm (48.9), 233 nm (65.2), 282 nm (53.0), 315 nm (74.5), 400 nm (6.3).
IR-spektrum: lambda x (KBr): 3500 sh, 2940, 1750, 1692,1578, ¥478,1462,1437, 1381,1332, 1277, 1241, 1115, 1085, 1055, 1012, 995, 750 cm'1.
1H NMR-spektrum (360 MHz): A mért kémiai eltolódások és csatolások: deltaH (DMS0-de):
10.50 (brs, 1H, N5’-H),^.32 (d, 1H, Cl-H vagy Cl’-H), 9.21 (d, 1H, Cl’-H vagy Cl-H), 8.14 (d, 1H, C4-H), 7.86 (d, 1H, C4’-H), 7.68 (m, 2H, C3-H és C3’-H), 7.48 (in, 2H, C2-H és C2’-H), 6.44 (d, 1H, Cl’-H), 5.6 4.6 (br. m, C3”-OH, a’”-H, C2”-0H, C3”-OH), 4.3-3.2 (m, 10H, C2”-H, C3”-H, C4”-H, C5”-H, C6a”-H, C6b”-H, C3’”-H, C4”’-H, C5a”’-H’,C5b”’-H), 3.68 (s, 3H, C4”-OCH3), 3.25 (s, 3H, N8-CH3), 2.55 (m, 2H, C4”’-NH2), 2.03 (m, 1H, C2a”'H), 1.60 (in, 1H, C2b’”-H).
Tömegspektrum: Térdeszorpciós kis- és nagyfelbontású mérések:
LR-MS: m/z = 630 (M)+ m/z = 653 (M+Na)+
HR-MS: m/z = 630, 2224 mért, m/z = 630,2316 számított a C33H34N4O9 összegképlet alapján
5. példa
Az A T 2433 A1 antibiotikum hldroklorld sója
750 mg (1,1 mmol) AT 2433A3 antibiotikumnak
20 : 80 tf. arányú metanol és kloroform 12 ml-nyi élegyével készült oldatát mágneses keverés mellett jeges fürdőben hűtjük. A jéghideg oldathoz lassan
1,5 ml 4n metanolos sósavat adunk, majd a kapott szuszpenziót 5 percig a jeges fürdőn keverjük. Az . _ oldószert és a hidrogénklorld feleslegét rotációs bepárlóval eltávolítjuk. A maradékhoz 600 ml ionmentesített vizet adunk és szűrjük. A szüredéket fagyasztva szárítva 654 mg (0,91 mmol) cím szerint hidroklorid sót kapunk.
NMR-spektrumát az 1. ábrán mutatjuk be.
Elemi összetétele (%) a C34H36Cl2N4O9
alapján C H N Cl
számított 57,07 5,07 7,83 9,91
talált 51,73 5,00 6,45 9,62
képlet

Claims (2)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    25 1. Eljárás az (I) általános képletű vegyületek - ebben a képletben
    X hidrogénatom és klóratom és R hidrogénatom vagy metílcsoport és gyógyászatiig elfogadható sóik előállítására, a zzal jellemezve, hogy egy — ilyen vegyületek
    30 termelésére képes - Actinomadura melllaura fajhoz tartozó mikroorganizmus törzset vizes táptalajon tenyésztünk, a kapott antibiotikumkomplexet kívánt esetben komponenseire szétválasztjuk és legalább egy (I) általános képletű vegyületet bázis vagy gyógyászatilag elfogadható só formájában elkülönítünk.
    35 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az Actinomadura melliaura ATCC 39691 törzset vagy annak valamely mutánsát használjuk.
    3. Eljárás (1) általános képletű vegyületeket — a képletben R és X jelentése az 1. Igénypontban meg40 adott - vagy gyógyászatflag elfogadható sóikat tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására, a zzal jellemezve, hogy az egy vagy több, az 1. igénypont szerinti eljárással előállított hatóanyagot gyógyszerészeti hordozókkal és/vagy egyéb segéd45 anyagokkal gyógyászati készítménnyé alakítunk.
  2. 2 db rajz
HU853482A 1984-09-17 1985-09-16 Process for preparing new antibiotics containing carbohydrates HU194315B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US06/651,498 US4743594A (en) 1984-09-17 1984-09-17 Antibiotic, antitumor compounds and their use

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT42527A HUT42527A (en) 1987-07-28
HU194315B true HU194315B (en) 1988-01-28

Family

ID=24613073

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU853482A HU194315B (en) 1984-09-17 1985-09-16 Process for preparing new antibiotics containing carbohydrates

Country Status (18)

Country Link
US (1) US4743594A (hu)
EP (1) EP0175284B1 (hu)
JP (1) JPS61106592A (hu)
KR (1) KR860002574A (hu)
AT (1) ATE42305T1 (hu)
AU (1) AU4741785A (hu)
CA (1) CA1315230C (hu)
DE (1) DE3569538D1 (hu)
DK (1) DK415185A (hu)
ES (1) ES8703931A1 (hu)
FI (1) FI853506L (hu)
GR (1) GR852224B (hu)
HK (1) HK4992A (hu)
HU (1) HU194315B (hu)
NO (1) NO853567L (hu)
PT (1) PT81118B (hu)
YU (1) YU147385A (hu)
ZA (1) ZA857003B (hu)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3835842A1 (de) * 1988-10-21 1990-04-26 Goedecke Ag Indolocarbazol-derivate, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung als arzneimittel
US5015578A (en) * 1989-03-23 1991-05-14 Bristol-Myers Squibb Company BMY-41950 antitumor antibiotic
ES2125976T3 (es) * 1992-03-20 1999-03-16 Wellcome Found Otros derivados de indol con accion antiviral.

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5918035A (ja) * 1982-07-20 1984-01-30 Katsuyuki Taniguchi ダンプ車の荷箱の支点構造
US4487925A (en) * 1983-01-28 1984-12-11 Bristol-Myers Company Rebeccamycin and process for its preparation
US4524145A (en) * 1984-09-04 1985-06-18 Bristol-Myers Company 4'-Deschlororebeccamycin pharmaceutical composition and method of use

Also Published As

Publication number Publication date
DE3569538D1 (en) 1989-05-24
ES546915A0 (es) 1987-03-01
EP0175284A3 (en) 1986-12-17
EP0175284A2 (en) 1986-03-26
EP0175284B1 (en) 1989-04-19
DK415185A (da) 1986-03-18
JPH0558440B2 (hu) 1993-08-26
ES8703931A1 (es) 1987-03-01
JPS61106592A (ja) 1986-05-24
ATE42305T1 (de) 1989-05-15
CA1315230C (en) 1993-03-30
US4743594A (en) 1988-05-10
ZA857003B (en) 1986-12-30
PT81118B (en) 1987-07-06
HUT42527A (en) 1987-07-28
KR860002574A (ko) 1986-04-26
GR852224B (hu) 1986-01-13
FI853506A0 (fi) 1985-09-13
FI853506L (fi) 1986-03-18
YU147385A (en) 1988-06-30
NO853567L (no) 1986-03-18
DK415185D0 (da) 1985-09-12
PT81118A (en) 1985-10-01
AU4741785A (en) 1986-04-24
HK4992A (en) 1992-01-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0182315B1 (en) Novel antibiotic nk84-0218 pharmaceutical compositions containing it and process for the production of the same
EP0349049A3 (en) Immunosuppressant compound
IE904496A1 (en) Indolocarbazoles from saccharothrix aerocolonigenes subsp.¹copiosa subsp. nov. scc 1951, atcc 53856
US4524145A (en) 4&#39;-Deschlororebeccamycin pharmaceutical composition and method of use
DK145200B (da) Fremgangsmaade til fremstilling af anthtacyclinglycosid-antibiotika
US4567143A (en) Process for preparing 4&#39;-deschlororebeccamycin
KR100659680B1 (ko) 항생 물질 카프라자마이신류 및 그 제조법
US5618809A (en) Indolocarbazoles from saccharothrix aerocolonigenes copiosa subsp. nov SCC 1951 ATCC 53856
HU194315B (en) Process for preparing new antibiotics containing carbohydrates
EP2423319B1 (en) Amycolamicin, method for production thereof, and use thereof
EP1001957B1 (en) Macrolides with antitumor activity
US4373028A (en) Culture of Nocardia ATCC 31309
US4598145A (en) Albacarcins V and M
EP0702691B1 (en) New thiodepsipeptide isolated from a marine actinomycete
EP0376609B1 (en) Antibiotic A80915 and process for its production
US4461831A (en) Antitumor agents albacarcins V and M
EP0396400A1 (en) Microbial transformation product
US5427941A (en) Actinomadura brunnea var. antibiotica strains
US4908316A (en) Streptomyces sp. N664-30 which produces an ionophore antibacterial agent
US4751317A (en) Inophore antibacterial agent from streptomyces
EP0264138B1 (en) Novel compound dc-102 and process for production thereof
US4792545A (en) Boholmycin antibiotic
EP0423247B1 (en) Coumamidine compounds
WO1990009435A1 (en) Altromycin compounds
US8318684B2 (en) Antibiotics, bispolides A1, A2, and A3 as well as bispolides B1, B2a, B2b and B3 and processes for producing said antibiotics

Legal Events

Date Code Title Description
HU90 Patent valid on 900628
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee