HU194314B - Process for preparing new, alpha-glucosidase inhibiting pseudooligosaccharides - Google Patents

Process for preparing new, alpha-glucosidase inhibiting pseudooligosaccharides Download PDF

Info

Publication number
HU194314B
HU194314B HU853253A HU325385A HU194314B HU 194314 B HU194314 B HU 194314B HU 853253 A HU853253 A HU 853253A HU 325385 A HU325385 A HU 325385A HU 194314 B HU194314 B HU 194314B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
inhibitors
inhibitor
formula
pseudooligosaccharides
strain
Prior art date
Application number
HU853253A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT39472A (en
Inventor
Laszlo Vertessy
Rudolf Bender
Hans-Wolfram Fehihaber
Karl Geissen
Original Assignee
Hoechst Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoechst Ag filed Critical Hoechst Ag
Publication of HUT39472A publication Critical patent/HUT39472A/hu
Publication of HU194314B publication Critical patent/HU194314B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/22—Cyclohexane rings, substituted by nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H3/00—Compounds containing only hydrogen atoms and saccharide radicals having only carbon, hydrogen, and oxygen atoms
    • C07H3/06—Oligosaccharides, i.e. having three to five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/12—Disaccharides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Description

A találmány tárgy eljárás új, biológiailag aktív pszeudo-oligoszacharidok, valamint fiziológiailag elviselhető sóik előállítására. Az új vegyületek az a-glózidáz-enzimeket, így például az α-amflázt és a diszacharázt gátolják, ezért a humán és állatgyógyászatban, az állati takarmányozás területén, valamint a keményítő biotechnológiai alkalmazásban használhatók.
Az új pszeudoollgoszacharidok az (1) általános képletnek felelnek meg, amelyben p jelentése 1 vagy 2 m jelentése 1,2 vagy 3 és n jelentése 1 és 6 közötti egész szám.
A vegyületeknek redukáló jellege, valamint bázikus kémhatása van.
Előnyösek az olyan (I) általános képletű pszeudoolgiszacharidok, amelyekben p = 1, m = 1 vagy 2 és n = 1, 2, 3 vagy 4. Különösen az olyan (I) általános képletű vegyületeket részesítjük előnyben, amelyekben
P=1 m = 2ésn = l :C«4H74NaO32, mólsuly = 1142 (W46 A), P M«mi3Mcí-462B),5ésH’4NaO3’’
Az (I) általános képletű vegyületeket az alábbiakban W-46, illetve W-46 A, B és C jelű inhibitornak is nevezzük. A vegyületeket vagy elegy ként, vagy külön-külön elválasztott vegyületként izoláljuk.
A találmány a fenti pszeudooligíszacharidok, előnyösen a W46 A, B és C jelű inhibitorok, valamint az azokat tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására vonatkozik. A találmány szerinti eljárás abban áll, hogy az (I) általános képletű pszeudooligoszacharidokat termelő Streptomyoes törzseket sülylyesztett kultúrában, tápközegben tenyésztünk, az inhibitorokat a micéliumból vagy a tenyészléből önmagában ismert módon kinyerjük, tisztítjuk és kívánt esetben savaddiciós sóvá alakítjuk. Különösen alkalmas a Streptomyces galbus subsp. FH 1716 jelű törzs, amely a Német Mikroorganizmustörzs gyűjteményben (DMS) 3007 szám alatt van letétben. A W-46 jelű inhibitorok előállításához azonban a nevezett törzs variánsait és mutánsait is alkalmazhatjuk.
A Streptomyces galbus subsp. FH 1716 jelű, DSM 3007 szám alatt letétbe helyezett törzs taxonómiai tulajdonságai a Streptomyces galbus leírásának (Bergey s Manual of Detenninative Bacterology, 8. kiadás, Verlag Williams u. Willdns Corp. Baltimore 1974) megfelelnek. Különbség a leírt törzsekhez képest néhány fiziológiai jellemzőben van. összehasonlító és referencia törzsként a Streptomyces galbus DSM 40480 törzset választottuk, a két törzs jellemzőit az alábbi 1. táblázatban közöljük:
1. táblázat
Str. galbus FH 1716 Str. galbus DMS 40480
arabinóz ♦ (*)
xilóz (♦) ♦
ramnóz
raffinóz _ (♦)
mannóz +
Inodt _ ♦
keményítő (♦)
p-hidroxibenzoesav (*) ♦
oxalát <*)
malonát (♦)
lak tát _ (♦)
dükonát -
szénforrás értékesítés jelölése:
+ = jó hasznosítás — = nincs hasznosítás (*) = hasznosítás kérdéses.
A fenti táblázat jobb oszlopában megadott tulaj donságú Streptomyces galbus törzset az irodalom mindezideig nem írta le, a DMS 3007 sz. alatt letétbe helyezett Streptomyces galbus FH 1716 törzs tehát új.
A W-46 inhibitorok előállítása során az alábbiak szerint járunk el.
A Streptomyces galbus FH 1716 törzset vizes tápközegben süllyesztett és előnyösen aerob tenyészetben addig tenyésztjük, míg a W-46 jelű Inhibitorok elegendő koncentrációban keletkeztek. A tápközeg egyrészt szénforrást, így például szénhidrátokat, másrészt nitrogénforrást, így protein-tartalmú anyagokat tartalmaz. Előnyös szénforrások például az alábbiak; glükóz, szacharóz, glicerin, malátakivonat, keményítő, olajok, zsírok, stb. Nitrogénforrásként a következőket részesítjük előnyben: kukoricalekvár, élesztőkivonat, szójaliszt, halliszt, sovány tejpor, félig emésztett kazein és húskivonat. Lehetséges az ún. „szintetikus tápoldatok alkalmazása Is. Előnyös lehet, ha a tápközeghez nyomelemeket, így cinket, magnéziumot, vasat, kobaltot vagy mangánt adunk.
A W-46 jelű inhibitort eredményező fermentálást széles hőmérséklettartományon belül valósíthatjuk meg. Fermentálhatunk például 10—49°C-on, előnyösen mintegy 20-35°C-on. A tápközeg pH-értékét olyan értéken tartjuk, amely a mikroorganizmus növekedése szempontjából kedvező, például 4,0 és 10,0 közötti érték, előnyösen 6,0 és 9,0 közötti érték. A tápközeg minőségi és mennyiségi összetételétől, a tenyésztés körülményeitől, így a levegőztetés mértékétől, a hőmérséklettől és a pH-értéktől függően a W-46 jelű inhibitor mintegy 1-10 nap alatt keletkezik a tápközegben.
A W-46 jelű inhibitorok mind a micéliumban, mind a tenyészlében jelen vannak, a főtömeg általában a szürletben van. Ezért előnyösen a vizes fázist például szűréssel vagy · centrifugálással elválasztjuk a micéllumtól, és a kívánt termést ismert módon izoláljuk és tisztítjuk. Éne számos eljárás alkalmas, így például ioncserélős kromatográfia, molekulaszűrő, adszorbeáló gyanták, oldószerekkel vagy sókkal végzett kicsapás, ultraszűrés, Craig-elosztás, stb.
A W-46 A, B és C jelű inhibitorok kinyerésére
194 314 előnyösen úgy járunk el, hogy alkalmas gyantához például pollsztirol bázisú gyantához adszorbeáltatjuk az inhibitorokat a tény észléből, majd később alkalmas puffer-oldattal, így például foszfát- vagy nátrium-acetát-pufferrel, vagy adott esetben vizet tartalmazó szerves oldószerrel (metanol, etanol, aceton, előnyösen vizes izopropanol) eluálva izoláljuk. Az inhibitort tartalmazó eluátumokat ismert módon ultraszűréssel töményítjük, egyidejűleg sómentesítjük. Az Inhibitorok vizes, ionokban szegény oldatát ioncserélő gyantával töltött oszlopon Ismert módon szétválasztjuk komponenseire. Gyantaként előnyösen erősen vagy gyengén savas kationcserélő gyantát, például sztirol-divinflbenzol-kopolimer bázisút alkalmazunk, amely funkcionális csoportként -SO3H vagy -COOH csoportokat tartalmaz (Dowex 50 W) (Amerllte CG 120), vagy módosított szulfopropil-bázisút (SP Sephadex), de a kereskedelmi forgalomban lévő számos ioncserélő gyanta szintén alkalmas. A kinyerés utolsó lépése a molekulaszűrő, például poliakrilamid-gél bázisú molekulaszűrő (Biogel P-6) vagy módosított cellulóz bázisú molekulaszűrő (Biogel P-6) vagy módosított cellulóz bázisú molekulaszűrő (Sephadex) alkalmazása. így a tisztított anyag vizes oldatát kapjuk, amelyet például llofilizálással szárítunk. A fajlagos aktivitás 1 mg szilárd termékre vonatkoztatva 4x10* a-amilázinhibitor egység.
A fentiekben leírt eljárás szerint kapott anyag lényegében mentes ugyan a szennyeződésektől, de nem kel] kémiailag egyneműnek lennie. Ismételten végzett ioncserélős kromatográfiával, például SP-Sephadex-en, vagy molekulaszűrővel végzett kromatografálással, nagynyomású folyadék kromatográfiával (például NH2-csoportokat tartalmazó megfordított fázisú hordozón, így Lichrosorb NH2-hordozón acetonitríl és víz 3 : 1 arányú elegyével végzett), vagy hasonló módszerekkel az egyes fermentálások során kapott termékek a biológiailag hatásos komponensekké szétválaszthatok. A három fő komponenst W-46 A, W-46 B és W-46 C a-amfláz-inhibitornak neveztük el. E három főkomponens mellett még egyéb, enzimgátló hatással rendelkező pszeudooligiszacharidok is előfordulnak.
A tiszta inhibitorok színtelen, amorf pszeudooligoszacharidok. Nitrogént tartalmaznak, kémhatásuk enyhén lúgos, például savas pufferrel, így például vizes hangyasav/ecetsav elegyckkel végzett nagyfeszültségű elektroforézisben az Inhibitorok a katód irányában vándorolnak. Az új inhibitorok kötött glükózt tartalmaznak, savas hidrolízis esetén glükóz mellett többnyire nitrogén-tartalmú bomlási termékek keletkeznek. További jellemzőjük a redukáló képesség, amelyet — mint ahogy a cukorkémiában szokás - például trifenil-tetrazolium-kloriddal (TTC) kimutathatunk.
Az irodalomban már több pszeudooligoszacharid jellegű a-glükozldáz-lnhibitort ismertettek (E. Truscheit és társai, Angew. Chem. 93, 738—755. o. (1981), T. Tájin és társai, Agric. Bioi. Chem. 47, 671 -679 (1983), K. Yokose és társai, J. AntibioticsJő, 1157-1175 (1983)).
A találmány szerint előállítható W-46 jelű inhibitorok azonban a redukáló tulajdonságai, valamint az (1) általános képlet révén az összes ismert a-glükozidáz-inhibitortól különböznek, tehát új anyagokról van szó. Az új anyagok kevéssé polárisok, és mikrobiológiai úton jó hozammal állíthatók elő.
A találmány szerint előállítható inhibitorok kezelése, a beteges elhízás kezelése és a diétás étrend segítése szempontjából érdekesek. Ugyanezek miatt a tulajdonságok miatt a pszeudooligoszacharidok diagnosztikai célú reagensként is alkalmasak.
Keményítőtartalmú élelmiszer mind az emberi, mind az állati szervezetben a vércukorszint növekedését, és így a hasnyálmirigy fokozott inzulintermelését eredményezi. A hlperglikémia oka, hogy a gyomorbél-rendszerben az amüáz és maltáz hatására a keményítő glükózzá bomlik. Cukorbetegeknél a hipergÜkémia különösen erős, hosszantartó.
A keményítő felvétel utáni alimentáris hiperglikémia valamint a hiperinzulinémia a találmány szerint előállított amíláz-inhibitorok, főleg a W-46 A, B és C inhibitor segítségével csökkenhető. Ez a hatás a dózistól függ. Az új inhibitorok ezért cukorbetegség, előzményei, beteges elhízás és a diétás étrend segítése céljából alkalmazhatók. Az orális beadás előnyös, ajánlatos étkezéskor szedni az 5-500 mg egyszeri dózist, amelyet a beteg súlyától és egyedi szükségleteitől függően kell megállapítani. A dózis indokolt esetekben nagyobb, vagy kisebb is lehet.
A találmány szerint előállított amiláz-inhibitorok különösen az orális applikációra alkalmasak. Adagolhatjuk a hatóanyagokat önmagukban, savaddiclós sóik alakjában vagy a szokásos hordozóés segédanyagokkal készített gyógyászati készítmények formájában. Az is lehet előnyös, hogy az új hatóanyagokat egyéb gyógyszerekkel, például a vércukorszlntet csökkentő vagy a lipidszintet csökkentő anyagokkal együtt kombinálva alkalmazzuk. Tekintettel arra, hogy a nagyobb molekulasúlyú szacharidok a gyomor-bél-rendszerben egyáltalán nem vagy csak kevéssé szívódnak fel, az új inhibitoroknak nem lehetnek toxikus mellékhatásai. Ennek megfelelően még p. o. igen nagy adag W-46 amilázinhibitorral kezelt kísérleti állat esetén sem lehetett semmilyen tünetet észlelni. Az amilázinhibitor farmakológia! hatásának kimutatása céljából éheztetett, hímnemű, 200-250 g testsúlyú Wistar-patkányoknak 1 kg-ra számítva 2 g keményítővel együtt W46 inhibitort (vagy azok keverékét) adtuk be orálisan. Az inhibitor adagolása előtt, alatt és után vett vérminták cukorszintje kimutatja a készítmény hatását.
A vércukorszint szabályozásán kívül az új inhibitorok a nyálban lévő α-amiláz enzim gátlására is alkalmasak. Ez az enzim a szájüregben bontja a keményítőt cukorrá, és az ott keletkezett cukor a fogszuvasodást elősegíti. Az új inhibitorok tehát a fogszuvasodás megelőzésére vagy visszaszorítására is alkalmazhatók. Végül a vegyületek biokémiai reagensként és diagnosztikai eszközként alkalmazhatók.
Amildz-teszt
Egy amilázinhibitor-egység (AIE) definíció szerint az az inhibitor mennyiség, amely rögzített kísérleti körülmények között két amiláz-egységet (AE) 50%-ig gátolja. Egy amlláz-egység a nemzetközi megállapodás szerint az az enzim mennyiség, amely a keményítőben 1 perc alatt 1 mlkroegyenértéknyi glükózkötést bont. A bontott glükózld-kötések mikroegyenértékelt a redukáló cukor mikroegyenértékeiként határozzuk meg, fotometrikusan, dinltroszalicilsawal, majd kalibráló görbe segítségével maltóz-mikromólban fejezzük ki.
194 314
A teszt végrehajtása:
Sertés hasnyálmirigyből nyert α-amflázt és a meg-, vizsgálandó oldatokat együtt 1,0 ml 20 mmólos foszfátpufferban (pH 6,9 ♦ 10 mmól NaCl) 37°C-on 10— 20 percen át előinkubáljuk. Az enzimes reakciót Zulkowskl szerint 1,0 ml oldható keményítő (a megadott pufferrel készített 0,25%-os oldat alakjában) hozzáadásával indítjuk. Pontosan 10 perc múlva a reakciót 2,0 ml düiitroszalicOsav reagens (Boehringer Mannheim: Biochemica-Information II szerint) adagolásával leállítjuk, és az oldatot 5 percet át fonó vízfürdőn tartjuk, hogy a szín kifejlődjék. Lehűlés után 546 nm hullámhosszon méljük az extinkciót, az üres reagensekkel töltött küvetta ellen. Az 50%-os gátlást a nem gátolt enzimreakcióhoz viszonyítva állapítjuk meg, különböző mennyiségű Inhibitor felfelhasználásával kalibráló görbét készítve.
1. példa
A W-46 jelű inhibitor kinyerésének első lépéseként oltóanyagot tenyésztünk a mikrobiológiai gyakorlatban szokásos módon a Streptomyces galbus FH 1716, DSM 3007 sz. törzs fagyasztva szárított konzervált formájából, egyetlen telepet ferdeagaron passzálva. A fermentáláshoz szükséges mennyiségű spórát szintén szilárd táptalajon, Roux palackokban állítjuk elő. A szilárd táptalaj összetétele:
dextrin 15,0 g/1 nádcukor 3,0 húskivonat 1,0 élesztőkivonat 2,0 konyhasó 0,5
K2HP04 0,5
FeSO4x7H2O 0,01 agar-agar 2,0
PH.’73, sterilezés 120°C-on 20 percen át, inkubálás 30eC-on 9 napon át.
A beoltott ferdeagart és a Roux-palackot 30°C-on 7 napon át inkubáljuk, majd ♦ 4°C-on tartjuk. A spórákat 10 ml desztillált vízzel (vagy fiziológiás konyhasóoldat is alkalmas) lemossuk a táptalaj felületéről. Az így kapott szuszpenzió 5—4 nú-jével 200 ml-es Erlenmeyer lombik beoltásához használjuk fel. A lombikokban 500-500 ml sterilezett vizes, 7,7 pH-jú tápközeg van.
összetétel (tömegű-bán):
glükóz 1,00 kazein-pepton 0,40 húskivonat 0,40
NaG 0,25 élesztőkivonat 0,05 májpor 0.05.
rázógépen 48 órán át rázzuk. Az így kapott előtenyészetet 12 literes fermentorba visszük, amelyben 9 liter sterilezett vizes, 7,4 pH-jú tápoldat van. A főtenyészet tápközegének összetétele az alábbi (tömegű):
húskivonat 2,0
malátakivonat 2,0
kalcium-karbonát 1,0
habzásgátló 0,1
víz ad. 100
A főtenyészetet 28eC-on 2 napon át fermentáljuk, 850 perc * fordulatszám és 420 1/óra levegőztetés mellett. 18, 24, 30, 36, 40, 44 és 48 óra fermentálás után az α-amflázinhlbitor koncentrációját R. Bender és társai (Anal. Blochem. 137, 307-312 (1984) előírása szerint meghatározzuk. A Str. galbus FH 1716 törzs a leírt kísérleti és termelési körülmények között 5 x 10s AIE/m] mennyiségű inhibitort termelt, a végső pH-érték 9,0 volt.
2. példa
Az 1. példa szerint kapott 8 liter tenyészléből centrifuga segítségével elválasztjuk a biomasszát, a tiszta szürlet pH-értékét 9,5-re állítjuk. Az oldatot 0,8 liter polisztirol-alapú adszorbeáló gyantát tartalmazó oszlopra visszük (Dalon HP-20), az oszlopot
1,5 liter vízzel mossuk, majd víz-izopropanol-gradlenssel eluáljuk. A 10% izopropanolt tartalmazó elegy kioldja az inhibitort az oszlopról. Az aktív frakciókat (1,2 liter) ultraszűréssel betöményítjük és víz hozzáadása mellett további ultraszűréssel teljesen sómentesítjük. A kapott koncentrátumot (0,2 liter) szulfopropfl-csoportokkal módosított cellulóz adszorbensen (ff-formájú SP-Spehadex) szétválasztjuk, eluensként ammónium-acetát-gradienst (0-0,5 mólos) alkalmazva. Az a-amflázgátló anyagot tartalmazó frakciókat ultraszűrő cellákban (Amicon) feldúsítjuk és sómentesítjük. A végleges tisztításhoz pollakrilamid-gélt (Biogel P-6) és futtató folyadékként tiszta vizet alkalmazunk. A W-46 jelű inhibitort tartalmazó frakciókat gyűjtök és fagyasztva szárítjuk. 1,5 g amorf, drapp színű port kapunk, amelynek α-amfláz-gátló aktivitása 4 x 10* AIE/mg. Az 1. ábra az anyag KBr-ban felvett IR-színképét, a 2. ábra a dlinetil-szulfoxidban felvett NMR-színképet mutatja.
3. példa
A 2. példa szerint kapott inhibitor-elegy 100 mgját 0,01%-os, 7,8 pH-jú foszfátpufferben oldjuk, és az anyagokat 150 g Lichrosorb RP 18 hordozón acéloszlopban nagynyomású folyadékkromatográfiás módszerrel szétválasztjuk. Eluensként 95% 0,01%-os foszfátpuffert (pH 7,8,5% acetonnitril) alkalmazunk, az eluátumok vizsgálata 210 nm hullámhosszán végzett UV-adszorpció méréssel történik. 4, 5, 8, Illetve 75 perc elteltével jelenik meg az inhibitor hatású anyag, külön-külön kinyeijük. A frakciókat betörnényitjuk, sómentesitjük és fagyasztva szárítjuk.
Az alábbi elemzési adatokat kapjuk:
I. csúcs:
(a nagynyomású folyadékkromatográfla 4. perce után):
C:45,8%,H:6,5%,N:2,l%,O:46,0%. *
FAB-tömegspektrográfiával 1467-nél M+H -csúcsot találtunk (W-46 C), (Fást Atom Bombardment)
II. csúcs (a nagynyomású folyadékkromatográfla kezdete után 5,8 perccel):
C: 46,1%, H: 6,5%, N: 2,1%, 0:45,4%.
FAB-tömegspektrográfia: M+H* -csúcs 1305-nél (W-46 B),
III. csúcs:
(a nagynyomású folyadékkrotmatográfla kezdete után 7,5 perccel),
C:463%, H: 6,5%, N: 2,5%, 0:44,8%,
FAB-tömegspektrográfla: M+π-csúcs 1143-nál (W46 A).
4. példa
A 2. példa szerint kapott anyag 100 mg-ját 05 ml
194 314 vízben feloldjuk, az oldat pH-értékét 0°C-on sósavoldattal 1-re állítjuk, majd 5 ml acetont adunk az. elegyhez. A kivált csapadékot centrifugáljuk, vízben feloldjuk és az oldatot fagyasztva szárítjuk. A kapott anyag az Inhlbltor-elegy hldrokloridja.
5. példa
Keményítővel etetett patkányok vércukorszintjének emelkedésében tapasztalható különbségek az orálisan adott W-46 jelű inhlbltor-elegy dózisának függvényében.
Módszer db hímnemű albino-patkányt 18 órán át éheztettünk, majd csoportosan (n = 8—10) 0,3, 0,6, illetve 1,0 .mg/kg dózisú inhibitor (2. példa szerinti) és g/kg keményítő csapvízzel készített szuszpenzióját adtuk nekik gyomorszondán keresztül. Az alkalmazott térfogat 1 m]/100 g testsúly volt. A 18 állatból álló kontroli-csoport csak keményltő-szuszpenziót kapott.
Közvetlenül a kezelés előtt, valamint 0,5, 1,2, és 5 órával később 10 pl vért vettünk, és a vércukorszintet enzimes módszenei megmértük.
Eredmények
A W46 jelű inhibltor-elegy dózisfüggő módon csökkentette a keményítő felvétel utáni vércukorszint emelkedését. A kezelés után egy órával 0,3, 0,6, illetve 1 mg/kg inhibitor a vércukorszint emelkedését 16, 23, illetve 25%-kal fékezte, a kontrollcsoporthoz viszonyítva. A dózisfüggőség statisztikailag biztosított. A vércukorszint átlagos százaléka 3 órás emelkedésének határérték-dózisa 0,4 mg/kg.
6. példa
A 2, példa szerint kapott Inhibitor 50 g-ját 946 g manittal és 4 g citromsavval összekeverjük, a keveréket őröljük, majd vízzel nedvesen granuláljuk. A granulátumot szárítószekrényben szárítjuk, majd 500 mg-os adagokban légzáró réteggel bevont kis tasakokba töltjük. A granulátum lehetővé teszi az inhibitor vizes oldat alakjában történő alkalmazását, de a szórókészítménykéntí felhasználását is.
SZABADALMI IGÉNYPONTOK

Claims (5)

10 1. Eljárás az (I) általános képletű pszeudoollgoszacharidok - az (I) általános képletben p jelentése 1 vagy 2, m jelentése 1,2 vagy 3 és n jelentése 1 és 6 közötti egész szám — valamint fiziológiailag elfogadható savaddidós sóik előállítá15 sára, azzal jellemezve, hogy valamely Streptomyces galbus törzset tápközegben süllyesztett kultúrában fermentálunk, a pszeudooligoszacharidokat a micéliumból vagy a tenyészléből kinyerjük, tisztítjuk, majd kívánt esetben flziológla2Q lag elviselhető savaddíciós sóvá alakítjuk.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy termelő törzsként a Streptomyces galbus DMS 3007 törzset fermentáljuk.
3. Az 1. Igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan (I) általános képletű pszeu25 dooligoszacharidot nyerünk ki, amelyben p = 1, m = 1 vagy 2 és n = 1,2,3 vagy 4.
4. Eljárás gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy egy (I) általános képletű pszeudooligoszacharidot vagy savaddíciós sóját — az (I) általános képletű pszeudooligoszacharidot
30 vagy savaddidós sóját — az (I) általános képletben p, m és n jelentése az 1. igénypontban megadott — a szokásos hordozó- és töltőanyagokkal összekeverve gyógyászati készítménnyé alakítjuk.
5. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal j e 1_ _ 1 e m e z v e, hogy olyan (I) általános képletű pszeudooligoszacharidot alkalmazunk, amelyben p = 1, m = 1 vagy 2 és η = 1,2,3 vagy 4.
HU853253A 1984-09-04 1985-08-28 Process for preparing new, alpha-glucosidase inhibiting pseudooligosaccharides HU194314B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE3432431 1984-09-04

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT39472A HUT39472A (en) 1986-09-29
HU194314B true HU194314B (en) 1988-01-28

Family

ID=6244578

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU853253A HU194314B (en) 1984-09-04 1985-08-28 Process for preparing new, alpha-glucosidase inhibiting pseudooligosaccharides

Country Status (14)

Country Link
US (1) US4632917A (hu)
EP (1) EP0173948A3 (hu)
JP (1) JPS6169787A (hu)
AU (1) AU569689B2 (hu)
CA (1) CA1247544A (hu)
DK (1) DK402585A (hu)
ES (1) ES8605034A1 (hu)
FI (1) FI853368L (hu)
GR (1) GR852127B (hu)
HU (1) HU194314B (hu)
IL (1) IL76273A0 (hu)
NO (1) NO853460L (hu)
PT (1) PT81076B (hu)
ZA (1) ZA856735B (hu)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0257418B1 (de) * 1986-08-13 1993-05-19 Hoechst Aktiengesellschaft Oxiran-Pseudooligosaccharide, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und pharmazeutische Präparate
AT389516B (de) * 1987-10-08 1989-12-27 Hoechst Ag Neue oxiran-pseudooligosaccharide, verfahren zu ihrer herstellung, ihre verwendung und sie enthaltende pharmazeutische praeparate
US5929037A (en) * 1995-06-07 1999-07-27 Alberta Research Council Modified α-D-Glcρ-(1-2)-α-D-Glcρ-(1-3)-α-D-Glcρ-analogues
US5633233A (en) * 1995-06-07 1997-05-27 Alberta Research Council Modified kojibiosides analogues

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4062950A (en) * 1973-09-22 1977-12-13 Bayer Aktiengesellschaft Amino sugar derivatives
US4065557A (en) * 1974-03-21 1977-12-27 Bayer Aktiengesellschaft Amino sugars and their use in improving the meat:fat ratio in animals
JPS5953920B2 (ja) * 1977-12-28 1984-12-27 東洋醸造株式会社 新規なアミノ糖化合物およびその製法

Also Published As

Publication number Publication date
FI853368A0 (fi) 1985-09-02
PT81076B (de) 1987-03-30
FI853368L (fi) 1986-03-05
DK402585A (da) 1986-03-05
EP0173948A2 (de) 1986-03-12
AU569689B2 (en) 1988-02-11
ES8605034A1 (es) 1986-03-01
EP0173948A3 (de) 1987-11-04
NO853460L (no) 1986-03-05
ZA856735B (en) 1986-04-30
IL76273A0 (en) 1986-01-31
HUT39472A (en) 1986-09-29
GR852127B (hu) 1986-01-03
PT81076A (de) 1985-10-01
ES546647A0 (es) 1986-03-01
CA1247544A (en) 1988-12-28
DK402585D0 (da) 1985-09-03
JPS6169787A (ja) 1986-04-10
AU4701985A (en) 1986-07-17
US4632917A (en) 1986-12-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4062950A (en) Amino sugar derivatives
EP0182315B1 (en) Novel antibiotic nk84-0218 pharmaceutical compositions containing it and process for the production of the same
JPS643877B2 (hu)
CA1044164A (en) Glycoside hydrolase inhibiting amino sugar derivatives
HU192495B (en) Process for producing new polypeptides of alpha-amilase-inhibiting activity and pharmaceutical compositions containing them
JPH02117666A (ja) 抗生物質ｔａｎ―１０５７，その製造法および用途
EP0187722B1 (en) Antibiotics called &#34;chloropolysporins b and c&#34;, a process for their preparation, and their therapeutic and veterinary use
JP4054576B2 (ja) 抗生物質トリプロペプチン類およびその製造法
US4618602A (en) Amine containing pseudooligosaccharide, pharmaceutical composition and method of use
HU194314B (en) Process for preparing new, alpha-glucosidase inhibiting pseudooligosaccharides
FR2517697A1 (fr) Nouveaux aminoglycosides antibiotiques appeles saccharocines et leur production
KR950013857B1 (ko) 신규 항생물질 무레이도마이신 a, b, c 및 d 그의 제조 방법 및 치료학적 용도
JPH10508033A (ja) 新規なアミノオリゴ糖誘導体およびその製造方法
US4990500A (en) Oxirane pseudooligosaccharides, a process for their preparation, their use and pharmaceutical preparations
HU184846B (en) Process for producing homo-citric acid-oligoryboside derivatives
JP3643925B2 (ja) Ｆａ−７０ｃ１物質
US4950605A (en) FR-900493 substance, a process for its production and a pharmaceutical composition containing the same
JPH0430400B2 (hu)
US4298599A (en) Novel antibiotic BN-235 substance, and process for the production thereof
KR830001068B1 (ko) 아미노당 유도체의 제조방법
HU194310B (en) Process for preparing alkali metal, alkali earth metal, ammonium salt and n-deacetylated derivative of novel tan-588 antibiotic
JPH0429356B2 (hu)
TW200487B (hu)
JPS6337098B2 (hu)
JP3673302B2 (ja) 分岐サイクロイソマルトヘプタオース及びその製造法