HU193039B - Process for preparing a-21978c cyclic n-substituted peptide derivatives - Google Patents

Description

A találmány tárgya eljárás antibiotikus tulajdonságokkal rendelkező ciklusos peptidek új N-szubsztituált származékainak félszintetikus úton való előállítására.

Nagy szükség van új antibiotikumok kifejlesztésére, mivel állandóan fenyeget az a lehetőség, hogy kórokozó mikroorganizmusok antibiotikum-specifikus rezisztens törzsei jelennek meg. Különösen a Gram-pozitív Staphylococcus és Streptococcus nembe tartozó kórokozók rezisztensek gyakran a szokásosan használt antibiotikumokkal, mint a penicillinnel és erütromicinnel szemben /lásd például

W.O. Foye, Principles of Medicinái Chemistry, 684-686. oldal, 1974/.

A találmány szerint hatékony antibiotikus vegyületeknek találtuk az A-21978C ciklusos peptidek új származékait és gyógyszerészetileg elfogadható sóikat.

Ezeket az új származékokat úgy állítjuk elő, hogy az A-21978C magot vagy ennek védett származékait — melyeket a megfelelően védett A-21978C komplex vagy az utóbbi megfelelően védett egyedi C_o, C„ C₂, C₃, C₄ vagy C₅ faktorainak dezacilezésével állítottunk elő — a kívánt acilezőszerrel vagy annak reakcióképes származékával reagáltatjuk, vagy—az alkilezett származékok esetében —megfelelő Schiffbázist képezünk, majd a bázis ímin-kötését redukáljuk.

A találmány szerinti 1 általános képletű A-21978C ciklusos peptidek — melyekben R hidrogénatom, 4-14 szénatomos alkil-,

7-16 szénatomos alkanoil-, 11-19 szénatomos alkenoilcsoport vagy benziloxikarbonilcsoport,

R^l hidrogénatom, 2-19 szénatomos alkanoil· vagy 9-11 szénatomos alkenoilcsoport,

R² hidrogénatom, 4-14 szénatomos alkil-,

2-15 szénatomos alkanoil-, ω-karboxi-(2-4 szénatomos)-alkanoilcsoport, és

R³, R⁴ és R⁵ hidrogénatom, vagy (i) R⁴ és R és/vagy (ii) R⁵ és R² együttesen 4-14 szénatomos alkilidéncsoportot jelenthet, azzal a feltétellel, hogy

1) R, R ¹ és R² közül legalább az egyik szubsztituens hidrogénatomtól eltérő jelentésű legyen,

2) R¹ és R² közül legalább az egyik szubsztituens hidrogénatomot jelentsen,

3) az R, R¹ és R² csoportok együtt legalább 4 szénatomot tartalmazzanak, és

4) ha R¹ és R² jelentése hidrogénatom, R 8-metil-dekanoil-, 10-metil-undekanoil-, lO-metil-dodekanoil-csoporttóí, az A-21978C C_o faktor — hatásos félszintetikus antíbakteriális anyagoknak bizonyultak, vagy ilyen anyagokhoz köztitermékekként használhatók.

A leírásban a következő, általánosan ismert rövidítéseket alkalmazzuk:

Alá: alanin Asp: aszparaginsav Gly: glicin

Kyn: kinurenin

Orn: ornítin

Ser: szerin

Thr: treonin

Trp: triptofán t-BOC: terc-butoxi-karbonil

Cbz: benzil-oxi-karbonil DMF: dimetil-formamjd

THF: tetrahidrofurán

HPLC: nagyhatékonyságú folyadékkromatográfia

NMR. proton-mágneses magrezonancia

TLC: vékonyréteg-kromatográfia

UV: ultraibolya

Az A-21978C antibiotikumok egymással szoros rokonságban álló savas peptid antibiotikumok, és az itt hivatkozott 4,208,403 számú Amerikai Egyesült Allamok-beli szabadalmi leírás ismerteti őket. A 4,208,403 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás szerint az A-21978 antibiotikum komplex főkomponense a C faktor, mely maga is szoros kapcsolatban álló faktorok komplexe. Az A-21978C faktor, melyet A-21978C komplexnek nevezünk, egyedi Co,C,,C₂,C₃,C₄ és C₅ faktorokat tartalmaz. A C,, C₂ és C₃ faktorok a nagyobb faktorok és a C_o, C₄ és C₅ faktorok a kisebbek. Az A-21978C faktorok szerkezetét a 2 általános képlet szemlélteti, melyben „3MG L-treo-3-metil-glutaminsavat és R* egy specifikus zsírsavrészt jelent. A faktorok specifikus R^csoportjai a következők:

A-21978C faktor R*rész

C, 8-metil-dekanoil

C₂ 10-metil-undekanoil

C₃ 10-metil-dodekanoil

C_o C₁₀-alkanoil*

C₄ C_!2-alkanoil*

C₅ C,₂-alkanoil* *Még nincs azonosítva.

Ha peptid antibiotikumok dezacilezésének problémája merül fel, rendkívül nehéz kiderí-. teni, létezik-e ilyen célra felhasználható alkalmas enzim. Ilyen enzimet találni még nehezebb,, ha a szubsztrát antibiotikum ciklusos peptid magot tartalmaz. Mivel az enzimek szubsztrát-specificitása nagyfokú, a szubsztrát pepiidrészében és oldalláncában levő különbségek ki fognak hatni a dezacilezési kísérlet kimenetére. Ezenfelül sok mikroorganizmus nagy számban termel peptidázokat, melyek a peptidrész különböző részeit támadják. Ez gyakran a termékek kezelhetetlen keverékéhez vezet.

A triptofán alfa-aminocsoportjához kapcsolódó zsírsav-oldallánc dezacilezésére használható enzimet az Actinoplanaceae családba tartozó egyes mikroorganizmusok, előnyösen áz Actinoplanes utahensis NRRL 12052 mikroorganizmus, vagy egy variánsa termeli. A dezacilezés végrehajtása céljából az A-21978C komplex, az A-21978C C_o, C,, C₂, C₃, C₄ és C₅ faktorok, a blokkolt A-21978C komplex és a védett A-21978C C_o, Cj, C₂, C₃, C₄ és C₅ faktorok közül kiválasztott antibiotikumokat

-2193039 hozzáadjuk a mikroorganizmus tenyészetéhez. A „védett A-21978C faktorok és a„védett A-21978C komplex meghatározás olyan egyedi A-21978C faktorokra vagy a faktorok keverékeire /komplex/vonatkozik, ahol az ornitin és/vagy kinureniri aminocsoportját amino-védőcsoport blokkolja. Előnyösen az amino-védőcsoport az egyedi faktor vagy a faktorkeverék ornitinrészének delta-aminocsoportján helyezkedik el. A tenyészetet a szubsztráttal addig inkubáljuk, amíg a dezacileződés teljesen végbemegy. A kapott megfelelő A-21978C ciklusos pepiidet a fermentléből ismert módon különítjük el.

Az enzimatikus dezacilezéssel kapott ciklusos peptidek és sóik a 3 általános képlettel írhatók le, ahol R' és R° egymástól függetlenül hidrogénatomot vagy aminovédőcsoportot jelent.

Az A-21978C komplex vagy az A-21978C komplex egyes C_o, C,, C₂, C₃, C₄ és C₅ faktorának acilrészét eltávolítva 3 általános képletű vegyületet kapunk, ahol R° és R’ hidrogénatomot jelent. A dezqcilezett molekula az A-21978C antibiotikum faktorok mindegyikében meglévő közös ciklusos pepiid. Kényelmi okból e vegyületet A-21978C magnak fogjuk nevezni. E vegyület a 4 képlettel is leírható, melyben „3MG L-treo-3-metil-glutaminsavat jelent.

A 3 általános képletű vegyületeket, melyekben R° és R’ hidrogénatomtól eltérő jelentésű, a megfelelően védett antibiotikus A-21978C C_o, C,, C₂, C₃, C₄ és C₅ faktorok dezacilezésével állítjuk elő. Kényelmi okokból itt e vegyületeket védett A-21978C magoknak fogjuk nevezni. E védett vegyületek hasznos köztitermékek egyes 1 általános képletű peptidek előállításához, azaz olyan vegyületekéhez, melyekben R¹ és R² közül legalább az egyik szubsztituens amino-védőcsoportot jelent.

A szakember előtt nyilvánvaló, hogy az A-21978C mag és a blokkolt A-21978C mag akár szabad amin, akár savaddiciós só formájában előállítható. Noha bármilyen alkalmas savaddiciós só használható, előnyben részesítjük a gyógyszerészetileg elfogadhatókat. „Gyógyszerészetileg elfogadható sók azok, amelyek melegvérű állatok kemoterápiájában alkalmazhatók.

A 3 általános képtetű mag előállításának módszerét, melynél különböző mikroorganizmusokat használunk, részletesen ismertetjük a T/30.775 sz. magyar nyilvánosságrahozatali iratban. Az előnyben részesített dezacílező enzimet, az A. utahensis NRRL 12052-t az „Agricultural Research Culture Collection /NRRL/, Nothern Régiónál Research Center, U.S. Department of Agriculture, 1815 North University St., Peoria, Illinois 61604, U.S.A.” bocsátja a nyilvánosság rendelkezésére NRRL 12052 nyilvántartási számmal. Az itt leírt 1. preparálás az A-21978C mag fermentációs előállítását ismerteti, melynek során szub4 sztrátként A-21978C komplexet és mikroorganizmusként Actinoplanes utahensis NRRL 12052-t használunk.

A 3 általános képletű A-21978C mag előállítására használható egyéb Actinoplanaceae tenyészetek a nyilvánosság részére a Nothern Régiónál Research Laboratory-ból állnak rendelkezésre, a következő nyilvántartási számokon:

Actinoplanes missouriensis NRRL 12053 Actinoplanes sp. NRRL 8122

Actinoplanes sp. NRRL 12065

Streptosporangíum roseum var. hoilandensis NRRL 12Θ64

Az Actinoplanaceae családon belül valamely adott mikroorganizmus törzs dezacílező hatásosságát a következő eljárással határozzuk meg. Alkalmas táptalajt beoltunk a mikroorganizmussal. A tenyészetet rotációs rázógépen mintegy 28°C-on 2-3 napig inkubáljuk. Ezután a szubsztrát antibiotikumok egyikét hozzáadjuk a tenyészethez, a fermentációs közeg pH-ját körülbelül 6,5 értéken tartva. A tenyészet aktivitását Micrococcus luteus próbával mutatjuk ki. Az antibiotikus aktivitás csökkenése azt jelenti, hogy a mikroorganizmus termeli a dezacilezéshez szükséges enzimet. Ezt azonban a következő módszerek valamelyikével kell igazolni: 1/HPLC elemzés az ép mag jelenlétének kimutatására, vagy 2/ alkalmas oldallánccal /például lauroil-, n-dekanoil- vagy n-dodekanoilcsoport/ való újraacilezés az aktivitás visszaállítása céljából.

A találmány tárgyát az A-21978C mag /3 általános képletű vegyület/, valamely A-21978C faktor, vagy blokkolt A-21978C faktor acilezése útján kapott, 1 általános képlettel leírható új vegyületek — ahol R, R¹, R², R³, R⁴ és R⁵ az előzőekben megadott — vagy e vegyületek gyógyszerészetileg elfogadható sóinak előállítása képezi.

A 4-14 szénatomos alkilidén-csoport megjelölés a általános képletű csoportra vonatkozik, ahol R³ és R⁴ hidrogénatomot vagy 3-13 szénatomszámú alkilcsoportot jelent, azzal a kikötéssel, hogy R³ és R⁴ egyike hidrogénatomtól eltérő jelentésű legyen, ezenfelül az R³ és R⁴ szubsztituensek szénatomjainak összege ne legyen több 13-nál. Azokat a vegyületeket, melyekben az R, R¹ vagy R² szubsztituensek egyike 4-14 szénatomos alkilidén-csoportot jelent, Schiff-bázisokként ismertek.

Ha az R csoport alkanoilcsoportot jelent, az alkilrész egyértékű telített, egyenes vagy elágazó láncú szénhidrogéncsoport. Ha R alkenoilcsoportot jelent, az alkenilrész egyértékű telítetlen, egyenes vagy elágazó láncú szénhidrogéncsoport, amely nem tartalmaz

3-nál több kettőskötést. A telítetlen szénhidrogénlánc kettőskötés-része/i/ cisz- vagy transz-konfigurációjdak lehetnek.

Az „amino-védőcsoport” meghatározás olyan ismert amino-védőcsoportot jelöl, amely összeegyeztethető az A-21978C molekula más 3

-3193039 funkciós csoportjaival. Előnyösek azok az amino-védőcsoportok, amelyek az utólag acilezett vegyületből könnyen eltávolíthatók. Alkalmas védőcsoportokra példák találhatók a következő munkában: „Protective Groups in Organic Synthesis”, Theodora W. Green; John Wiley and Sons, New York, 1981, 7. fejezet. Különösen előnyös amino-védőcsoport a terc-butoxi-karbonil- és a benzil-oxi-karbonilcsoport.

A találmány szerint előnyben részesítjük az alábbi 1 általános képletű vegyületeket:

HÍ /a/ az R szubsztituens CH₃/CH₂/_n-Cképletű alkanoilcsoportot jelent, ahol n 3-14 közötti egész szárny /b/ R jelentése CH₃/CH₂/„-C- képletű csoport, ahol n = 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 vagy 14; θ /c/ R jelentése CH₃/CH₂/„-CH/CH₂/_m-Cképletü csoport, ahol n és m egymástól függetlenül 0-12 közötti egész számot jelentenek, azzal a kikötéssel, hogy n -j- ^{m nem} lehet kevesebb 3-nál és nem lehet nagyobb 12-néI; továbbá, ha π = 0, m nem lehet 8, és ha n = 1, m nem lehet 6 vagy 8;

/d/ R jelentése CH₃/CH₂/„CH = = CH/CH₂/_m-é- képletű cisz- vagy transz-alkenoilcsoport, ahol n és m egymástól függetlenül 0-14 közötti egész szám, azzal a kikötéssel, hogy n + m nem lehet kevesebb 7-nél és nagyobb 15-nél;

*/e/ R jelentése CH₂=CH/CH₂/„-é- képletű cisz- vagy transz-alkenoilcsoport, ahol n 8-15 közötti egész számot jelent;

/f/ R jelentése CH₃/CH₂/n- képletű alkilcsoport, ahol n 5-12 közötti egész szám; és /g/ R jelentése CH₃/CH₂/₅-CCH₃/CH₂/₆A ch₃/ch₂/₇-cs ch₃/ch₂/₈-c0

CH₃/CH₂/₉-Ó ch₃/ch₂/₁₀-<5- _o ch₂=ch-/ch₂/₈-cCH₃/CH₂/_irl CH₃/CH₂/i₂-jt6

CH₃-/CH₂/₃-CH=CH-/CH₂/₇-éCH₃/CH₂/₁₃-Cch₃ch₂ch/ch₃/-ch₂/₆-cch₃/ch₂/„ch₃/ch₂/₁₀ch= ch₃/ch₂/₆ch₃/ch₂/₆ch= ch₃/ch₂/₉ch₃/ch₂/₈ch=

Azokat az 1 általános képletű vegyületeket, melyekben R, R¹ vagy R² alkanoil-, alkenoilcsoportot vagy amino-védőcsoportot jelent, úgy állítjuk elő, hogy egy A-21978C faktort, •'gy védett A-21978C faktort, egy 3 általános képletű vegyületet, vagy a triptofán alfa-aminocsoportján védett 3 általános képletű vegyületet a kívánt alkanoil- vagy alkenoil-oldallánccal acilezzük, amidkötés kialakítására használatos módszerek segítségével. Az acilezést általában úgy hajtjuk végre, hogy a választott vegyületet a kívánt acil-oldallánccsoportnak /R, R¹ vagy R²/ megfelelő alkánsav vagy alkénsav reakcióképes származékával reagáltatjuk. A „reakcióképes származék megjelölés olyan származékra vonatkozik, amely az acilezőszer karboxil-funkcióját reaktívvá teszi a primer aminocsoporttal való kapcsolódáshoz, hogy a képződő amidkötés az acil-oldalláncot a maghoz kösse. A szakember ismeri az alkalmas reakcióképes származékokat, előállításuk módját és primer aminokhoz acilezőszerként való felhasználásukat. Előnyös reakcióképes származékok a következők: /a/ savhalogenidek /például savklorid/; /b/ savanhidridek /például alkoxi-hangyasavanhidrid/, vagy /c/ aktív észterek /például 2,4,5-triklór-fenil-észterek/. A karboxilfunkció reakcióképessé tételének további módszerei közé tartozik a karbonsav karbonil-diimiddel /például N,N’-diciklohexil-karbodiimiddel vagy N.N'-diizopropil-karbodiimiddel/ való reagáltatása, amikor is reakcióképes köztitermék képződik, melyet bomlékony§ága miatt nem izolálunk. Ilyen reakció a primer aminnal in situ hajtható végre.

A szakember előtt érthető módon az 1 általános képletű vegyületeket szelektív acilezéssel állítjuk elő amino-védőcsoportok jelenlétében. Például ha a kiindulási anyagként olyan 3 általános képletű vegyületet használunk, aho! R’ és R° hidrogénatomot jelent, az acilezés mind a triptofán alfa-aminocsoportján, mini az ornitin delta-aminocsoportján végbemehet és N_Trp,N<?r_n-diacilszármazékok képződnek. Ezért ha a triptofán alfa-aminocsoportján monoacilezett származékot akarunk előállítani, előnyös olyan 3 általános képletű ve-4193039 gyületet acilezni, melyben az ornitin deltar -aminocsoportját /R° pozíció/ amino-védőcsoport blokkolja. Ilyen kiindulási anyagokat előnyösen úgy kapunk, hogy az A-21978C faktort ebben a pozícióban védjük a dezacilezés előtt. A kinurenin aromás aminocsoportja az A-21978C mag három szabad aminocsoportja közül a legkevésbé reakcióképes. A kinurenin acilezésekor. megfelelően védjük a triptofán és ornitin aminocsoportjait, de az R vagy R¹ helyzetben történő acilezéskor a kinurenin aminocsoportját általáéban nem blokkoljuk.

Az I., II. és III. reakcióvázlat az olyan 1 általános képletű vegyületek előállításának általános módszereit mutatja be, ahol az R, R' vagy R² szubsztituensek egyike alkanoil-, alkenoilcsoport vagy amino-védőcsoport. E reakcióvázlatokban a következő szimbólumokat alkalmazzuk:

l*]	= az A-21978C maradványa
NT	= triptofán alfa-aminocsoportja
No	= ornitin delta-aminocsoportja
NK	= kinurenin aromás aminocsoportja
R, R1, R2	=szubsztituensek, a meghatározás szerint
Rh	= természetes faktor acilcsoportja
Β, B	= amino-védőcsoportok
acil	= acilező művelet
dezacil	= dezacilező művelet
blokk	= acilezés amino-védőcsoport jelenlétében
deblokk	= amino-védőcsoport eltávolítása
Az I.	reakcióvázlatban az A-21978C Nrrp-

-monoacilszármazékait' a 3 általános képlet és az A-2I978C Ντ_Γρ, No_rn-diacilszármazékait a 4 általános képlet szemlélteti. Azokat az Nr_rp, No_r„-diacilszármazékokat, melyekben az N_rrp-acilcsoport természetes A-21978C faktor megfelelő csoportjából származik, a 8 általános képlet mutatja be.

A II. reakcióvázlatban az A-21978C Nr_rp, Nxin-diacilszármazékait a 10 általános képlet szemlélteti. Azokat az NT_/p,N_Kl„-diacilszármazékokat, ahol az N_Trp-acilcsoport természetes A-21978C faktor megfelelő csoportjából származik, a 12 általános képlet mutatja be. Az 5, 6 és 7 általános képletű vegyületeket ugyancsak leírja az I, reakcióvázlat.

A III. reakcióvázlatban az A-21978C No_rn-monoacilszármazékait a 18 általános képlet, az A-21978C N^-monoacilszármazékait a 15 általános képlet,’és az A-21978C Nű_r„,Nj;,_n-diacilszármazékait a 20 általános képlet szemlélteti. A 6 általános képletű vegyületeket szintén leírja az I. és a II. reakcióvázlat.

Azokat az 1 általános képletű vegyületeket, melyekben egy vagy több aminocsoportot alkilidenilcsoport /a Schiff-bázisok/ vagy alkilcsoport /a redukált Schiff-bázisok/ szubsztituálják, Schiff-bázisok előállítására, illetve az ilyen bázisok redukálására használatos ismert eljárásokkal állítjuk elő. Így a Schiíf-bázisokat úgy kapjuk meg, hogy az A-21978C 'riptofán, ornitin vagy kinurenin aminosavának primer aminocsoportját alkalmas oldószerben megfelelő aldehiddel vagy ketonnal reagáltatjuk /kondenzáció/. Olyan megfelelő 1 általános képletű vegyület előállítása céljából, melyben R, R¹ vagy R² alkilcsoportot jelent, a Schiff-bázis iminkötését ismert szelektív redukciós eljárásokkal redukáljuk. E reakcióhoz előnyben részesítjük a nátrium-ciano-bór-hidrid redukálószert.

Az alkalmazott in vitro próbák körülményei között a Schiff-bázisok nem mutatnak antibakteriális hatékonyságot, feltehetően a reakcióközegben bekövetkező bomlékonyságuk következtében. Felhasználhatók azonban köztitermékekként a redukált Schiff-bázisokhoz. Ha köztitermékként Schiff-bázist alkalmazunk, nem kell a köztiterméket izolálni a redukált Schiff-bázissá való alakításhoz szűkséges redukció végrehajtása előtt.

Azokat az 1 általános képletű vegyületeket, ahol R, R¹ vagy R² egyike alkanoil- vagy alkenoilcsoportot jelent, előnyösen az aktív észter-eljárással állítjuk elő. A 3 általános képletű vegyület, ahol R’ — H és R° = t-BOC, azaz az A-21978C t-BOC mag vagy „tBOC mag különösen előnyös kiindulási anyag az 1 általános képletű vegyületek előállításához. A kívánt sav-oldallánc 2,4,5-triklór-fenil-észtere a leginkább előnyben részesített acilező reagens. E módszer szerint feles mennyiségű aktív észtert reagáltatunk a t-BOC maggal szobahőmérsékleten, közömbös szerves oldószerben, mint DMF-bán, THF-ban, dietil-éterben vagy diklór-metánban. A reakcióidő nem kritikus, bár előnyös a mintegy 6-20 órás reagáltatás. A reakciót végrehajtva az oldószert eltávolítjuk,és a maradékot tisztítjuk. Különösen hasznos tisztító eljárás a fordított fázisú HPLC, álló fázisként szilikagél/C,„ fordított fázisú gyantát és oldószerrendszerként H₂O/CH₃OH/CH₃CN/piridin/HOAc elegyet használva. A t-BOC csoport trifluor-ecetsav/anizol/trietil-szilán, vagy előnyösen trifluor-ecetsav/ 1,2-etánditiol keverékek segítségével szobahőmérsékleten mintegy 3-5 perc alatt távolítható el. Az oldószer lepárlása után a maradék fordított fázisú HPLC-vel tisztítható.

Alternatív acilező eljárás a módosított Schotten-Baumann reakció, melynél a nem-blokkolt magot a kívánt alkánsav vagy alkénsav savkloridjával kezeljük piridín/víz elegyben. E módszernél, közömbös szerves oldószerben /mint aceton/ oldott feles menynyiségü savkloridot adunk lassan a mag 90% piridin/10% víz /v per v/ eleggyel készült oldatához. A nem reagált savkloridot a reakció termékétől vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel /például dietil-éter/ való kivonással választjuk el. A végső tisztítás fordított fázisú HPLC-vel történik, a fentebb leírtak szerint.

Az acilezési reakcióban kiindulási anyagokként használt alkán- és alkénsavak és reakcióképes származékaik /különösen a savklo5

-5193039 ridok és a 2,4,5-triklór-íenil-észterek/ előállítására használt alkán- és alkénsav kiindulási anyagok ismert vegyületek, vagy ismert vegyületekből ismert eljárásokkal előállíthatók. A 2,4,5-triklór-fenil-észtereket célszerűen úgy állítjuk elő, hogy az alkán- vagy alkénsav savkloridját 2,4,5-triklór-fenollal kezeljük piridin jelenlétében, vagy a szabad alkán- vagy alkénsavat 2,4,5-triklór-fenollal kezeljük N;N’-diciklohexil-karbodiimid jelenlétében. A

2,4,5-triklór-fenil-észter származékok szilikagélen oszlopkromatográfiával tisztíthatok.

A találmány szerinti A-21978C ciklusos peptidek baktériumellenes anyagokként használva orálisan vagy parenterálisan alkalmazhatók. A szakember előtt érthető, hogy az A-21978C vegyületet szokásosan gyógyszerészetileg elfogadható hordozóval vagy hígítóval együtt alkalmazzuk. Az A-21978C vegyület dózisát számos megfontolás befolyásolja, mint például a használandó vegyület és a kezelendő fertőzés természete és súlyossága. Az alkalmazandó dózis-tartományokat vagy dózis-egységeket a szakember előtt ismert módon a MIC /minimális gátló koncentráció/ és az ED₅₀ /hatásos dózis 50%-a/ értékek, a toxicitási adatok, valamint egyéb, például farmakokinetíkaí tényezők, a beteg /gazdaszervezet/ és a fertőző mikroorganizmus jellemzői figyelembevételével határozzuk meg.

A találmány teljesebb bemutatására szolgálnak az alábbi példák, anélkül, hogy a találmány hatókörét korlátoznák.

1. preparálás

A-21978C mag előállítása

A. Actinoplanes utahensis fermentációja Ferde agaron Actinoplanes utahensis törzstenyészetet készítünk és tartunk fenn. Ferde agar táptalajként a következők egyikét hasz15 náljuk:

A. táptalaj

Komponensek Mennyiség

Előfőzött zabliszt 60,0 g

Élesztő 2,5 g

K₂HPO₄ 1,0 g

Czapek-féle ásványi törzsoldaf 5,0 ml

Agar 25,0 g

Ionmentesített víz 1 literig

Autoklávozás előtt a pH körülbelül 5,9; a pH-t nátrium-hidroxiddal 7,2-re állítjuk be; autoklávozás után a pH körülbelül 6,7.

*A Czapek-féle ásványi tőrzsoldat összetétele a következő:

Alkotórészek Mennyiség

FeSO₄-7H₂O /2 ml tömény HCLoldatban oldva/ 2 g

KC1 100 g

MgSO₄-7H₂O 100 g

Ionmentesített víz 1 literig

B. táptalaj

Mennyiség

5,0 g 0,5 g 3,0 g

Alkotórészek

Burgonya-dextrin Élesztőkivonat Enzimatikus kazein-hidrolizátum*

Marhahúskivonat	0,5 g
Glükóz	12,5 g
Kukoricakeményítő	5,0 g
Hús-pepton	5,0 g
Melasz	2,5 g
MgSO4-7H2O	0,25 g
CaCO3	1,0 g
Czapek-féle ásványi törzs-
oldat	2,0 ml
Agar	20,0 g

Mennyiseg

20,0 g 20,0 g 2,5 g

5,0 g 1,0 g

5,0 ml 1 literi?

Ionmentesített víz 1 literig *N-Z-Amine A, Humko Sheffield Chemical, Lyndhurst, NJ.

A ferde agart beoltjuk Actinoplanes utahensis NRRL 12052-vel és 30°C-on 8-10 napig inkubáljuk. A ferde agaron nőtt tenyészet felével beoltjuk az alábbi összetételű 50 ml vegetatív táptalajt:

Alkotórészek Előfőzött zabliszt Szacharóz Élesztő

Szárított szeszgyári gabonatörköly*

K₂HPO₄

Czapek-féle ásványi törzsoldat Ionmentesített víz

A pH-t nátrium-hidroxiddal 7,4-re állítjuk be; autoklávozás után a pH körülbelül 6,8.

*National Distillers Products Co., 99 Park Ave., New York, N.Y.

A beoltott vegetatív táptalajt 250 ml-es bőnyakú Erlenmeyer-lombikban 30°C-on mintegy 72 óráig inkubáljuk, 5 cm átmérőjű ív körül percenként 250 forgást végző rázógépen.

. A fenti inkubált vegetatív táptalajjal közvetlenül beoltunk egy második fokozatú vegetatív táptalajt. Előnyösen félretehetjük későbbi felhasználáshoz, a tenyészetet folyékony nitrogén gőzfázisában tartva. Ilyen tároláshoz a tenyészetet több kis fiolában állítjuk elő a következőképpen: mindegyik fiolába bemérünk 2 ml beoltott vegetatív táptalajt és 2 ml glicerin/laktóz oldatot (lásd W.A. Dailey és C.E. Higgins, „Preservation and Storage of Microorganisms in the Gas Phase of Liquid Nitrogén, Cryobiol. 10, 364-367 (1973)). Az előállított szuszpenziókai a folyékony nitrogén gőzfázísában tároljuk.

Az így elkészített, tárolt szuszpenziót (1 ml) használjuk 50 ml első fokozatú vegetatív táptalaj beoltására (melynek összetételét fentebb megadtuk). A beoltott első fokozalú vegetatív táptalajt a fentiek szerint inkubáljuk.

Nagyobb térfogatú inokulum előállítása céljából az inkubált első fokozatú vegetatív táptalaj 10 ml-ével beoltunk 400 ml második fokozatú vegetatív táptalajt, melynek összetétele azonos az első fokozatúéval. A második fokozatú táptalajt 2 literes bőnyakú Erlenmeyer-lombikban 30°C-on 48 óráig inkubál-6193039 juk 5 cm átmérőjű ív körül percenként 250 forgást végző rázógépen.

A fentiek szerint előállított, inkubált második fokozatú vegetatív táptalajjal (80 ml) beoltunk 10 liter steril szaporító táptalajt, melynek összetétele az alábbiak egyike:

1. táptalaj

Alkotórészek	Mennyiség (g per 1)
Földimogyoróliszt	10,0
Oldható hús-pepton	5,0
Szacharóz	20,0
KH2PO4	0,5
k2hpo4	1,2
MgSO4.7H2o	0,25
Csapvíz	1 literig
121°C-on 45 percig	mintegy 110-124 kPa
nyomás alatt végzett	autoklávozás után a
táptalaj pH-ja körülbelül 6,9.
II. táptalaj
Alkotórészek	Mennyiség (g per 1)
Szacharóz	30,0
Pepton	5,0
K2HPO4	1,0
KC1	0,5
MgSO4.7H2O	0,5
FeSO4.7H2O	0,002
Ionmentesített víz	1 literig
A pH-t HCl-val 7,0-	re állítjuk be; autoklá-
vozás után a pH körülbelül 7,0.
III. táptalaj
Alkotórészek	Mennyiség (g per 1)
Glükóz	20,0
NH4C1	3,0
Na2SO4	2,0
ZnCl2	0,019
MgCI2.6H2O	0,304
FeCl3.6H2O	0,062
MnCl2.4H2O	0,035
CuCl2.2H2O	0,005
CaCO3	6,0
KH2PO4*	0,67
Csapvíz	1 literig
* Külön sterilizálva	és fertőző anyagoktól
mentesen hozzáadva

Végső pH körülbelül 6,6.

A beoltott szaporító táptalaj fermentációját 14 literes fermentorban mintegy 30°C-on körülbelül 66 óráig folytatjuk. A fermentációs közeget szokásos keverőkkel körülbelül 600 ford/perc sebességgel keverjük és steril levegővel levegőztetjük úgy, hogy az oldott oxigén szintjét 30%-os levegőtelítés felett tartsuk légköri nyomáson.

B. Az A-21978C.dezacilezése

Az A. utahensis fermentációját az A. fejezetben leírtak szerint hajtjuk végre ferde A. táptalajt és I. szaporító táptalajt használva, és a szaporító táptalajt mintegy 67 óráig inkubálva. A fermentációs közeghez nyers A-21978C komplexet adunk (100 g) (előállítva a 4,208,403 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás szerint).

Az A-21978C komplex dezacilezését Micrococcus luteus-szal. végzett próba segítségével követjük. A fermentációt teljes dezacileződésig folytatjuk; ezt a M. luteus-szal szembeni aktivitás eltűnése jelzi (körülbelül 24 óra).

C. Az A-21978C mag izolálása

A B. fejezetben leírtak szerint kapott teljes fermentlevet (20 liter) szűrési segédanyaggal.(Hyflo Super-Cel, Johns Manville Corp.) átszűrjük. A micélium eltávolítása után a szürtlevet 1,5 liter HP-20 gyantát (DIAION High Porous Polymer, HP-Series, Mitsubushi Chemical Industries Ltd., Tokyo, Japan) tartalmazó oszlopon bocsátjuk át. A kapott effluenst ejöntjük. Az oszlopot ionmentesített vízzel (10 liter) mossuk a szü.rtlé maradékának eltávolítása céljából. A mosófolyadékot elöntjük. Ezután az oszlopot 10-10 liter víz/acetonitril elegyekkel (95:5, 9:1 és 4:1) eluáljuk, 1 literes frakciókat gyűjtve.

Az elúciót papírkromatográfiával ellenőrizzük, n-butanol/píridin/ecetsav/víz (15: :10:3:12) oldószerrendszert használva és a vegyületeket UV fluoreszcenciával detektálva. E rendszerben az A-21978C faktorok R/-értéke körülbelül 0,56 és az A-21978C mag R/-értéke körülbelül 0,32. A termék analitikai HPLC-vel is ellenőrizhető, fordított fázisú szilikagél/C_I8 adszorbenst és 0,1 % ammónium - acetátot tartalmazó víz/metanol (3:1) oldószerrendszert használva, a magot UV monitorral 254 nm hullámhossznál detektálva.

A magot tartalmazó frakciókat egyesítve, az acetonitrilt vákuumban lepárolva és a maradékot gyorshűtéses fagyasztással szárítva 40,6 g félig tisztított A-21978C magot kapunk.

D. Az A-21978C mag tisztítása

A C. fejezetben leírtak szerint kapott félig tisztított magot (15 g) 0,2 % ecetsavat és 0,8 % piridint tartalmazó 75 ml víz/metanol/acetonitril (82:10:8) elegyben oldjuk. Az oldatot 3,33 liter szilikagél/C₁₈ (Quantum LP-1, Quantum Industries, 341 Káplán Drive, Fairfield, N.J.07006) töltetet tartalmazó, 4,7 x 192 cm-es oszlopra szivattyúzzuk. Az oszlopot a fenti oldószerrendszerrel eluáljuk. 350 ml-es frakciókat gyűjtünk. Az elválasztást 280 nm hullámhosszon UV detektorral detektáljuk. A magot tartalmazó frakciókat egyesítve, az oldószereket vákuumban lepárolva és gyorshűtéssel szárítva

5,2 g tisztított A-21978C magot kapunk.

E. Az A-21978C mag jellemzői

Az A-21978C mag jellemzői a következők:

(a) Alak: fehér amorf szilárd anyag, mely rövidhullámú UV fényben fluoreszkál (b) Tapasztalati képlet: C₆₂H₈₂N_I6O₂₆ (c) Molekulasúly: 1466 (d) Oldhatóság: vízben oldódik (e) Infravörös abszorpciós spektrum (KBr) maximumok: 3300 (széles), 3042 (gyenge), 2909 (gyenge), 1655 (erős), 1530 /erős/, 1451 /gyenge/, 1399 /közepes/, 1222 /közepes/, 1165 /gyenge/, 1063 /gyenge/ és 758 /közepes - gyenge/ cm'¹ (f) UV abszorpciós spektrum (metanol)

-7193039 maximumok 223 nm (ε 41,482) és 260 nm (ε 8,687) (g) Elektrometrikus titrálás (66 % vizes DMF): 4 titrálható csoport van jelen, melyeknek pKa értéke körülbelül 5,2; 6,7; 8,5 és

11,1 (kezdeti pH 6,12).

2. preparálás

A-21978C mag alternatív előállítása

Az A-21978C magot az 1. preparálásban leírt eljárás szerint állítjuk elő, kivéve bizonyos változtatásokat a B. fejezetben. Az

A. utahensis tenyészetet először mintegy 48 óráig inkubáljuk; a szubsztrát félig tisztított A-21978C komplex (50 g); a szubsztrát hozzáadása után az inkubálási idő körülbelül 16 óra. A szürtlevet 3,1 liter HP-20 gyantát tartalmazó oszlopon bocsátjuk át. Az oszlopot 10 térfogat vízzel mossuk, majd víz/acetonitril (95:5) eleggyel eluáljuk. Az elúciót az 1. preparálásban leírtak szerint detektáljuk. 24 liter összegyűjtése után az eluenst kicseréljük víz/acetonitril (9:1) elegyre. A magot tartalmazó frakciókat egyesítjük, az acetonitril eltávolítása céljából vákuumban bepároljuk és gyorshűtéssel szárítjuk. 24,3 g félig tisztított A-21978C magot kapunk.

E félig tisztított magot (24,3 g) vízben (400 ml) oldjuk. Az oldatot 0,2 % ecetsavat és 0,8 % piridint tartalmazó víz/metanol/acetonitril (8:1:1) eleggyel készült 3,33 liter szilikagél [Quantum LP-1] /C,_g töltetet tartalmazó 4,7 x 192 cm-es acéloszlopra szivattyúzzuk. Az oszlopot a fenti oldószerrel körülbelül 13750 kPa nyomáson eluáljuk, 350 ml-es frakciókat gyűjtve. Az elúciót 280 nm-néí UV monitorral detektáljuk. A magot tartalmazó frakciókat egyesítjük, az oldószereket vákuumban lepároljuk és a maradékot gyorshűtéssel szárítjuk. 14 g nagytisztaságú A-21978C magot kapunk.

3. preparálás

N o_r„-t-BOC-A-21978C C₂ és C₃ faktorok előállítása

A-21978C C₂ és C₃ faktorok keverékét (10 g) (előállítva a 4,208,403 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás szerint) vízben (50 ml) oldjuk szonikálás közben (200 mg per ml). Az oldat pH-ját 4,05-ről

9,5-re állítjuk be 5n nátrium-hidroxid-oldat (3,6 ml) segítségével. Di-terc-butil-dikarbonátot (3,0 ml) adunk hozzá és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten 2 óráig keverjük-. Az elegy pH-ját 9,5-ön tartjuk 5n nátrium-hidroxid-oldat kézi hozzáadásával (6,5 ml lúghozzáadás 2 óra alatt).

A reakciót időnként szilikagéi TLC-vel ellenőrizzük acetonitril/víz (7:3 és 8:2) oldószerrendszert használva és UV fényben detektálva.

Körülbelül 10 perc múlva az oldat gyorsan megzavarosodik és a lúgfogyasztás emelkedik. 30 perc múlva csökken a zavarosodás sebessége és a lúgfogyasztás üteme, a reakció végét jelezve. Ennek ellenére a reakciót még 90 percig

8.

folytatjuk a teljes átalakulás biztosítása céljából. 2 órai reagáltatás után a képződött anyagot azonnal liofilizáljuk; 12,7 g. N<?r„-t-BOC-A-21978C C₂ és C₃ faktort kapunk.

Hasonló eljárást alkalmazva két 10 g-os és egy 30 g-os reakciót is indítunk. Ezeknél a reakcióidő csak 40 perc. A két 10 g-os kísérletből 11,9, illetve 12,1 g terméket kapunk. A 30 g-os reakció .35,4 g terméket eredményez.

4. Preparálás

A-21978C No^-t-BOC mag előállítása

A. A. utahensis fermentációja

Az A, utahensis fermentációját azl. prepará^:ás A. fejezetében leírtak szerint hajtjuk végre, ferde A. táptalajt és 1. szaporító táptalajt használva és a szaporító táptalajt mintegy 66 óráig inkubálva.

B. No™-t-BOC komplex dezacilezése

Az A-21978C N^-t-BOC komplexet (1185g nyers szubsztrát, mely körülbelül .176 g A-21978C komplexet tartalmaz) hozzáadjuk a fermentációs közeghez. A dezacilezést az

1. preparálás B. fejezetében leírtak szerint hajtjuk végre. HPLC elemzéssel kimutatva a dezacilezés körülbelül 24 óra alatt teljes.

C. A-21978C No^-t-BOC mag izolálása

A B. fejezetben leírtak szerint kapott fermcntlevet (100 liter) szűrési segédanyaggal (Hyflo Super-Cel) átszűrjük. A szürletet 7,5 liter gyantát (DIAION) tartalmazó oszlopon bocsátjuk át; az oszlopot vízzel (38 liter) mossuk. Az elúciót szilikagél/C₁₈ HPLC-vel ellenőrizzük 254 nm hullámhosszon, UV detektálással. Kevés mag a mosófolyadékkal eluálódik. A magot ezután a következő víz/acetonitril elegyekkel eluáljuk: (95:5) - 40 liter; (9:1) - 40 liter és (85:15) - 100 liter. A magot tartalmazó frakciókat egyesítjük, vákuumban bepároljuk és gyorshűtéssel szárítjuk. 298,5 g félig tisztított A-21978C N<?_r„-t-BOC magot kapunk.

D. \z A-21978C Nchr-t-BOC mag tisztítása

A C. fejezetben leírtak szerint kapott, félig tisztított A-21978C No,„-t-BOC magot (30 g) 0,2 % ecetsavat és 0,8 % piridint tartalmazó víz/acetonitril (9:1) elegyben (75 ml) oldjak. Az oldatot 3,33 liter szilikagéi IQuantum LP-1]/C_I8 töltetet tartalmazó, a fenti , oldószerrendszerrel kiegyensúlyozott

4,7 x 192 cm-es acéloszlopra visszük fel. Az oszlopot nyomás alatt 0,2 % ecetsavat és 0,8 % piridint tartalmazó víz/acetonitril/metanol (80:15:5) eleggyel eluáljuk. 350 ml-es frakciókat gyűjtünk,és a terméket 200 nm-nél UV monitorral detektáljuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, az oldószer eltávolítása céljából vákuumban bepároljuk, és gyorshűtéssel szárítjuk. 18,4 g tisztított A-21978C Nor„-t-BOC magot kapunk.

Az A-21978C Νσ,-,,-t-BOC mag jellemzői a kövekezők:

(a) Alak: fehér amorf szilárd anyag, amely rövidhullámú UV fényben fluoreszkál (b) Tapasztalati képlet: C₆₇H_9IN,₇O₂₇ (<) Molekulasúly: 1565

-8193039 (d) Oldhatóság: vízben oldódik (e) Infravörös abszorpciós spektrum (KBr) maximumai: 3345 (széles), 3065 (gyenge), 2975 (gyenge), 2936 (gyenge), ~1.710 (váll), 1660 (erős), 1530 (erős), 1452 (gyenge), 1395 (közepes), 1368 (gyenge), 1341 (gyenge) ,1250 (közepes), 1228 (közepes), 1166 (közepes - gyenge) és 1063 (gyenge) cm (f) UV abszorpciós spektrum maximumai (90 % etanolban): 220 nm (ε 42,000) és 260 nm (ε 10,600) (g) HPLC retenciós idő = 6 min, 4,6 x x300 mm-es szilikagél/C,₈ oszlopon, 0,2% ammónium-acetátot tartalmazó víz/acetonitril/ /metanol (80:15:5) oldószert használva 2 ml/ /min áramlási sebességgel, UV detektálással

5. preparálás

A-21978C Nq-í-BOC mag alternatív tisztítása

A 4. preparálás C. fejezetében leírtak szerint kapott, flig tisztított A-21978C Nom-t-BOC magot (10,8 g) vízben oldjuk és 80 ml Amberlite IRA-68 gyantát (acetát-ciklus; Rohm and Haas, Philadelphia, PA) tartalmazó oszlopra visszük fel. Az oszlopot vízzel mossuk és 5 ml/ /min áramlási sebességgel, egymás után 0,05n ecetsavoldattal (1080 ml), 0,ln ecetsavoldattal (840 ml) és 0,2n ecetsayoldattal (3120 ml) eluáljuk, 120 ml-es frakciókat gyűjtve. Az oszlop elúcióját analitikai HPLC-vel szilikagél/C₎₈ tölteten, 0,2% ammónium-acetátot tartalmazó víz/acetonitril/metanol (80:15:5) oldószerrendszert használva ellenőrizzük,és a terméket 254 nm-nél UV monitorral detektáljuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük; az oldat pH-ját piridinnel 5,8-ra állítjuk be; a kapott oldatot vákuumban mintegy 200 ml térfogatra bepároljuk. A koncentrátumhoz vizet adunk,és a kapott oldatot a piridin eltávolítása céljából ismét bepároljuk. A maradékból gyorshűtéses szárítás után 3,46 g tisztított A-21978C N^-t-BOC magot kapunk.

1-16. példa

A 3 általános képletű vegyületek acilezése útján kapott különböző alkanoil- és alkenoilszármazékok előállítását — az 1 általános képletű vegyületek jellemző preparálását —az alábbi I. táblázat mutatja be. Az I. táblázatban szereplő származékokat vagy módosított Schotten-Baumann reakcióval állítjuk elő acilezőszerként savkloridot használva (A. módszer), vagy pedig az „aktív észter eljárással, acilezőszerként 2,4,5-tr iklór-fenil-észtert alkalmazva (B. módszer). Az A. vagy

B. módszerben a következő általános acilező eljárásokat alkalmazzuk:

A. módszer /módosított Schotten-Baumann reakció/

Az eljárásban a 3 általános képletű magot (RL r° = H) a kívánt acil-oldalláncnak megfelelő alkán- vagy alkénsavkloriddal reagáltatjuk.

általános képletű vegyületet /1,95-2,16 g, 1,33-1,47 mmol/ vagy 2 általános képletű ve16 gyületet /409 mg, 0,25 mmol/ 200 ml piridin/ /víz /9:1/ elegyben oldunk. Az acilezőszert /18-20 mmol feleslegü savklorid 15 ml acetonban oldva/ cseppenként, 1-3 óra alatt adjuk hozzá, és az elegyet környezeti hőmérsékleten még 2-3 óráig keverjük. A reakcíókeveréket bepároljuk az aceton eltávolítása céljából. A visszamaradt vizes fázist vízzel körülbelül 200 ml térfogatra hígítjuk. Az oldat pH-ját jégecettel 3,0-3,5-re állítjuk be. Az oldatot 8x mossuk azonos térfogatú dietil-éterrel, majd liofilizáljuk.

A nyers acilezett származékot fordított fázisú HPLC-vel tisztítjuk a következőképpen: a vízben vagy az eluens rendszerben /körülbelül 4-6,5 ml/ oldott mintát LPj/Cjg adszorbenssel megtöltött 83 x 1,6 cm-es rozsdamentes acéloszlopra injektáljuk. Az oszlopot H₂O/MeOH/CH₃CN/piridin/HOAc oldószerrendszerrel eluáljuk. Az elúciót körülbelül 10350 — 13800 kPa nyomáson, mintegy 10-12 ml/min áramlási sebességgel, kétdugatytyús LDC pumpát /Milton Roy/ használva hajtjuk végre. Az effluenst 280 nm-nél UV detektorral /ISCO-UA-5/ detektáljuk. A kívánt frakciókat egyesítve és vákuumban szárazra párolva a kívánt alkanoilszármazékhoz jutunk. A tisztított terméket TLC-vel elemezzük fordított fázisú lemezeket /Whatman KC_l8/ és H₂O/MeOH/CH₃CN/piridin/HOAc /45:15: 40:2:2/ oldószerrendszert használva. A lemezeket UV fény alatt vizsgáljuk a termék detektálása céljából. A termékeket UV abszorpciós spektrofotometriával /extinkciós koefficiensek 220 és 260 nm-nél/ és aminosav-analízissel elemezzük.A tisztaságot analitikai fordított fázisú HPLC-vel /C₁₈ Microbondapak, Waters Co./ H₂O/MeOH/CH₃CN/piridin/HOAc oldószerrendszert használva határozzuk meg, az eluenst 280 nm-nél UV monitorral detektálva.

B. módszer /2,4,5-triklór-fenil „aktív észter” eljárás/

N<i_r„-t-BOC-A-21978C magot /1,0 g, 0,64 mmol/, A-21978C magot /0,5-1,0 g, 0,34-0,68 mmol/, vagy A-21978C-t /946 mg, 0,58 millimól/ és 3,5 mól feleslegü triklór-fenil-acil aktív észtert dimetil-formamidban /100 ml/ oldunk, és szobahőmérséklet és mintegy 50°C közötti hőmérsékleten körülbelül 6-20 óráig keverjük. A reakciókeveréket vákuumban bepárolva olajat kapunk. Az olajat eldörzsöljük 50 ml Et₂O/toluol /1:1/ eleggyel és Et₂O-val mossuk. A mono- és diacilezett A-21978C mag-származékokat, acilezett A-21978C,-et és acilezett t-BOC-A-21978C magot az A. módszerben leírtak szerint tisztítjuk.

Az acilezett t-BOC-A-21978C magról a védőcsoportot lehasítjuk 50 mg/ml trifluor-ecetsav/anizol/trietil-szilán /10:1:1/ eleggyel kezelve 3-5 percig, mintegy -Í0° és 0°C közötti hőmérsékleten. A reakcióelegyet vákuumban bepárolva olaj képződik, melyet kétszer 20 ml Et₂O-val eldörzsölünk. A nyers acilezett terméket fordított fázisú HPLC-vel tisztítjuk és az A. módszernél leírtak szerint elemezzük.

A következő I - X. táblázatban felsorolt példák vegyületei 1 általános képletűek.

-9’U 'Φ

t©

ω

I

un

un

MÍ

CM

©

MÍ

CM

©

cc

r->

un

r^

Γ'*-

©

un

CC

1

O

tr,

s£>

V—

MÍ

cc

cn

T—

Ό

T—

cc

un

cn

-r—

©

co

1 1

CM

CC

CM

CM

CM

cc

cc

cc

cc

CM

CM

cc

CM

CM

CM

CM

ϊ ·..táblázat

-21978C ciklusos peptidek N._r -monoaeilszármazékainak előállítása

H

1

1

tn

o

MÍ

un

un

o

o

o

LC

un

un

ο

un

ο

o

1

o

1

cc

cc

©

CC

cc

Mí

<r

Mí

MÍ

cc

m o>

<Τ

Μί

un

re

C0

•

··

CC

··

··

1

c

1

un

un

un

un

un un

un

un

LT>

··

un

o

··

un

un

un

CM

C3

Φ

V—

τ—

T—

T—

r—

T—

O

r—

t—

τ—

τ—

·>

i-4

2

1

·

o

1

P-i

r-4

1

©

un

uc

©

©

un

un

un

©

τ—

o

un

CM

un

©

un

1

ffi

Φ

1

LC

un

τ—

un

un

<±

Mí

un

cc

MÍ

MÍ

cc

co

1

*—

'Φ

1

4-1

4-1

μ

4-J

μ

μ

c

1

4J

4-J

4-J

μ

μ

μ

•μ

1

O

o

o

o

Ο

Ο

X

J3

(J

1

4-J

4-J

4-1

4-1

μ

μ

•μ

μ

co

1

'rl

Ή

μ

χμ

χμ

μ

Φ

a

4J

4-»

4-J

μ

μ

μ

• μ

Γ—·

•H

Φ

1

©

un

un

N

N

N

un

un

un

N

Μ

un

Μ

ο

(X

03

μ

2

cc

cc

cc

CO

co

co

cc

cc

co

C0

ο

C0

un

S

Φ

i-4

1

•μ

•μ

•μ

»·

··

··

• μ

•μ

·♦

• μ

··

6”ζ

Es

Φ

1

un

Lfj

m

4-J

4-»

4-J

un

un

un

4-1

μ

un

μ

un

CM

ο

μ

T·—

5—

τ—

τ—

λ

γ—1

Φ

o

fi

fi

fi

fi

ε

··

ε

«.

©

2

4-1

H-l

uC

©

©

Φ

Φ

Φ

o

©

o

Φ

Φ

©

Φ

un

μ

2

Pu

1

Ld

uc

UC

2

2

c

τ—

un

un

2

2

CM

C

cc

μ

h-l

f£

1

r--“i

2

>

μ

'0

Z-\

1

>

Ü

• H

JP

1

<1

O

s—'

1

-sí

iá

-ΰ

, >,

ο

Λ!

1

o

CC

CM

o

un

CM

CM

mJ-

CM

o

CM

©

ο

©

©

κ

03

*o

1

CM

CM

CM

CM

CM

CM

CM

CM

CM

Μί

CM

Φ X oi ·Η ©

I *0 e © co © 'Φ

X c

Φ

1 ©

τ—

©

CM

©

un

©

\O

o

CM

o

T—

Mí

r^.

©

o

o

• μ

μ

μ

1 ο

CM

un

©

©

σ>

©

©

o

T—

o

cc

Mí

CC

O

o

fenj

•μ

φ

1 ©

Μί

cc

©

Μί

un

CM

©

©

CS

©

r^·

CM

Mí

MÍ

X

• μ

ο

Ν

1

CC

Mí

cc

τ-

o

μ

<

2

1

·«

• μ

1

o

Ο-

I ©

Ο

©

©

©

©

©

o

©

©

o

Ο

O

©

o

o

oJ

ζ\

1 CM

un

©

Ο

©

©

O

©

©

©

o

o

o

o

o

o

r-rj

B-S

©

r—l

Ö0

1 ©

cn

©

©

©

r—

©

©

©

©

Ü

©

o

©

©

©

u

’T—

2

'2

ε

ί

Τ—

1—

CM

r—

CM

r—

*—

τ-

τ—

V—

T—

r—

QJ

£ w μ

I ·μ <u cö m N CX '03 co Φ Η τ3 μ 'Φ ό χ μ g

4-J I ΦΙ i—H :21 oi SM W3 ΦΙ >1 pq<cq<cQ<pQ<pQoQpqcocOcQpO (ill

I I I

OOO

OOOOOOOüOOOOO © © © © © © · ςρ Φ > £ S £*£ £ 7 z'—S /—\ X\ χ-Ν, /X X“X ζ—X z“X z—X ζ—N ζ—X «Μ N N cJ N c\l es) ,\j <s.' fj

KKKarcxSercesei OUUUOOUootJUOO í<*> «1 ’C C ff) O <0 C (Cjf^iTi uuuuuu ^ououuoou — M r: <t lT \C r- X Τ’ O co © co o p>

CQ 4-J μ μ

F

L o

				I	ο 1
				I	1 ©
	Ο			•μ
	©				UC
	>	1		<
		X			μ
	Μ	©		ξ·	• Φ
	X	II	1	μ	1—1
1	©	X	Ο	2
Ο	V—'	©	©	Λ	'Φ
ο	X	Μ	h		co
Λ	©	X			μ
ζ—Ν	II	©	Μ	*	'φ
Μ	X	X	X	X	S
X	©	©	©		50
©	<c	II	Ν-Ζ-	II	X
Ν_·'		X	X		'0
	Ν	©	©		•μ
X	X	Μ	II	X	CJ
©	©	X	X
:ι		©	©	«κ	2
¢4	CC	tC		V·	Φ
X	X	τϊ	X	oi	Oi
©	©	©	©	θ’ '	ti

CN cn <f in to

-10193039

S ι 1 ο 1

o

o

o

o

o

o

o

o

o

o

o

o

4-> C •rl

kD I

o

o

o

o

o

o

o

m

o

o

o

o

tó

CN I

<r

Lö

o

o

<4

00

T—

r*.

o

CN

kO

KO

•H

X 1

«X

<e

*

Ij

? ' í?l 1

o

o

o

ON

on

on

σι

CN

σ»

σ*

t—

•r4

X &5 CN

% o

CN

CN x

ö £

o tó

X tótó

CO • Φ t—4 φ Φ Φ

S <1 w cú > H « 'rt Ο β N

4-> I cd I NI 'cú1 r—I | rtl 'cd ι •UI

I •I

Hl

Hl

o

o

o

O

o

o

o

cn

o

o

o

o

•e

CO

Φ

o

o

o

o

o

o

o

<r

o

o

o

o

z—s

Φ

N

T—

ON

o

m

CN

o

m

*4

o

o

o

o

i—4

rt

CO

Λ

Λ

re

r.

re

Λ

re re

re

Λ

re

Λ

CÚ

tó

00

KO

KO

kO

kD

<4

00

co o

<4

<4

m

o

μ

4-)

(3

<4

<4

<1-

<4

<4

<4

<r m

m

*4·

<4

m

μι

μ

Φ

Ο

Φ

μ

μ

N

u

'Φ

CO

Φ

rt

N

•rl

ö

CO

tó

Φ

Ό

(3

tó

u

•rl

μ

i—4

m

m

o

o

O

o

o

V

O

o

O

Φ

o

CN

CN

<1*

<r

<4

<4

0N <j

o

*4-

*4“

<4

N

<4 t—

KO

·«

··

··

tfí

CO

z—s

m

m

m

m

m

m

m

m

m

m

tí

Ό

E>

V—

*—

τ—

T—

r—

T~

▼—

O O

O

t—

T—

T—

Φ

tó

•

#·

φ

ι—1

>

o

o

m

m

*n

m

m

o

ON

m

m

m

N

o

KO

kO

<4

<4

<4

<4

lo

cn

<4

<4

<4

CO

>

Φ

Z-*e

•«-rt

o

o

<4

z

3

··

o

r—ι

m

<n

M-l

t—

rt

ON

o

m

»-·

<4

rt

m

O

un

o

m

ON

co

CN -cí-

m

o

<r

o

Ó

o

00

00

r·

Γ

KO

m

m

-4- CO

CN

Γ-

tn

m

rt

aT t-H

oooooooooooo szó cú O · ⁶ ··

4-> ES N cú O ES rt ό Ο N <n cú ff 'Z

0)

Ό •μ

4-1

Q,

Φ

X co

O rJ tó

Oá oá

Φ i—1 rt öl <D >

rtrtrtrtrtrtKrttsrtrtrt rtrtrtrtrtfflrtESrtrtffirt ts

X ifi cJ O

ES II I

I u s c c u u U ES w f.

I I I I I ι,υ Ϊ X OOOOO/-? HU ^N OOOOOOOOOO eJ ES rt ES Ο Ο Ο Ο O „ ESUUO « „ _B g Ϊ S £50 „1fJNfslMMNNíM^eJl N U O ESESESíSESESíSíStSESESES κ II OOOOOOO OOUOOrtrt

II ' O U lOiOlO OiOrtlrtlO^^NtOtnN ESrtrtrtrtrtrtESrtrtrtrtrtES OOOOOOO OOOOOOO

CNHI<J-LT|<Or-~OOCSiO

CsI CO

	rt	e
'Φ	o	τ—4
l		Φ
o	o	μ
1—3		μ	ι—Ι
H	ES	φ	cd
		μ
r“i	Ό		Q
'Φ	N	XJ	Ο
ÖO	cú	Ο	ι—1
Φ	6	1	Φ
tó	r—1	φ	μ
•rl	Φ	<5	μ
r—1	4-1	ο	Φ
•rl	μ	tó	μ
N	cd
CO	μ	5-S	Φ
		CN	<ί
tó	μ	re	Ο
co	Ο	ο	tó
•rl	1
N	Φ	CO
'Φ		'Φ	V—
M-4	Ο
	tó	μ	co
4-1		Ö	'φ
U O	δ-s CN	•μ TJ	Ö
4-J		• μ	•μ
'rl		μ	tó
		•μ	•μ
μ	CO	X	μ
o	''φ		•μ
«4-4		6-S	X

c3~ <N

-S'S

O >rt <J

-11193039

		1						CN
		1						r.
'tf	tf	1 cn	LÖ	Τ-	o	00	nO	un	O
£j	k’X z*x	1 r-χ	n©	Ο	N0	un	NO		un
	1-1 tó)	1 CN	cn	CN		T—	cn	CN	un
tf	'3 e	1
H	w 'χ-'	1

	63 r-i
			o un ο ο o . <f· N <1 <] < q1 Ό		Ί— tf w 1
		β 1	..........cn cn			_
		cn 1	ir> O ír, L-1 in .. -·		'tf O	o
		3 1	cn cn ο o		i—l	cj
		U φ. 1			S cd	U-4
		>-l 3 1	un un un un un cn cn		•rl 4J
		rt r-4 1	<t σ' <t cn <		rt) H	CJ
		rt <D . 1			•rl tf
					μ u •rl	O o
		1 1			cu a	PQ
		ja 1 1	un
		tf '0 *O z—x 1	* ü cj <J		e< o
		1) Η Ό £ |	T- r- o oo -T oo 03	o	V rt
		Ρύ Ο ·Η 1	*- CN T- <\J T- --	CN	-d	Q)
			cn
		1 Uj 1	r>
		tf tf tf z^. 1	CO cn CN O CN ON NO	cn
		η n >, ω ι	O tn m. σ> — ii	CN
		Η K H g 1	CN T- un CN -r- o	T—
		U !O '3 1 <J n cn 1	CN r- r-		z—X
					>
		ι ι öü cd ι
	tf	3 Ό cd ί>-,^. 1	σ' ό ο ο a ο o	o	>
	w	•rl i—· t>i r—1 00 1	o <t ο ο ο ο o	o
	'tf	•H 3 ö '3 fi 1	ί σι in c ο o	o	>
	4-J	rt rt cd cn—' l	T— T— T—	T—
	vH
	i—l				z;
	t—1	1 1			o
	'tf	1 'Cd -Γ-Ι 1 Hl			r0
	*o	aj H cn rt QJ l	rt	QJ	tó
431	1—1	H cd 'cd Ό Ν 1	C « cj « μ m «	o	O
tűi	tf	rt ex·—ι g cn 1			·«
Ni					rt
'cd ι	ja				o
r—1 |	o
rtl	Jd	1 1			rt
'tf1	'tf	1 |			o
4-J 1	N	1 1	1 1	1	>·
1	tf	1 1	ο 1 1 ι o	o	o
•1	Ö	1 1	ooooo	o
Hl	W	1 1	cJO Ο O		rt
l·-11 1—11	'tf N	1 1 1 1	® tt cn ςρ x Ο Z^X Ζ—x ζ-χ Z~s	o. z—x”	Ό
	W	1 1	fi fi « fj N	CM	N
		1 1	ι ι rc m ce rt rt	tó	tf
	o	! 1	O O CJ CJ CJ U CJ	o o	g
	00	1 tó 1	OOO'—'	o
	r*>	1 1	(0 «ο Ο Ό ιΟ Λ m	« *ι	cd 3
	cn	1 1	rt rt o rt rt rt :e	ι rt	4-í ‘rl
	’C—	1 1	CJ CJ K U U CJ tJ	4-1 O	H rt
	CN	1 1			tf *rl	tf
	1	1 1			jj H	>
	<d				•rl	4J
	1	1 Ctí 1			-U (X	H
	i—l	1 1	l-fi (-rt r-l rt-1 *-r *r·	rt rt	o	tf
	•rd	4-J 1 1			ι e-s	4->
	CJ	tf 1 1			Ü o
	tf	1—1 1 1			<S σ\	3
	•rd	:3 1 1			o	o
	Π3	f>> 1 1			rt -	1
	1	bO 1 1			Ti	o
		- QJ 1 1	1 1 1		6-3 «rl	o
	i	> 1 1	.ooo	o	CN H	un
	o		ooo	o	* TJ
	&		w N> u		Ο rt	4->
	1	[ 1 1	Z'X Z—X Z~X	z—\	32	u
			C rt [j	N	cn 3	r—i
		?· 1 1	Üí tó tó	rt	OJ cd	ja
	V	! 1	ooo	o	>	'tf
	&	<	N^Z ___·	X—Z	4-1 cd	w
					3 cn	H
		1 1	·— <—·> 1	Z~\	•rl %O	'tf
		! 1	(Λ Λ efl | | | o	Λ	rt ja	fi
		1 1	rt rt rt ο ο ο o	tó	rt 3	ÍO
		1 1	• oooooo	ο	J-4 'tf	rt
		1 1	íti tó tó Z-X z—s Z-N1 ,-χ	x_x	•H >>'O
		1 1	rt	rt 4-J	•rl
		1 1 1 rt 1	OOO «J *f N N	o	w	tf
		N rl n rt ffi ÍE M		O	ja
		1 1	® rt rt ο ο ο o	tó	CN Uj	tf
		1 1	o o o	o	- O	tf
		1 1	<0 r; η η ,ι λ ®	Λ N	o «	tó
		1 1	rt ce rt K rt M ie	rt rt		o
		1 1	ooooooo	o o

tf e

'tf

N w

γ^-οοονο··—cN<n<tun ’-T-v-ojfNMNNN

-1223 , '—¹

4-> I Φ ΦΙ ··—: ΝΙ 'Φ ι λ: ι—< I ο .οι λ:

'ΦΙ 4-11 I •I >1

ΜΙ •Η

Ο •Η tó

I ε

t.

ο.

*ζ ο

C0

Γ-Χ σ>

CM

I <ί e

q ο

% ε

X

o	o	o	©	o
o	o	o	©	o
-Φ	©	©	©	©
*	Λ		F,	r	3»
o	X—	ON	00	σ>	z

>i ε	1
tói q	1	©	o	o	o	o
	1	©	o	©	©	©
O	1	©	o	©	CM	o
CM	1	*·	*·	*	*	r·
CM	1	nD		tn	CO	σ>
S	1

ο ϋ

Ü4 ül-Λ cö • Ρ τ—( φ 03 3

Ö r-<

<3 φ 'Μtó

Ν tó tó © ο O tn © o <r <r <* tn <t -3· tn tn ι-n tn m tn

Ln Ln m o Ln m > >

©	m		τ—	Γ0 X	00
©	r>	©	m		m
Fi	Λ		Fi	* >	λ
©	©	©	©	© tó	©

ι ο I I o o o vjO α ft4 <M I CJ 33 S 0 cj cj J o

Λ CJ co xi Ü O ü 33 J 33 CJ CJ

I o

cj cí

ÍŰ Ü υ u u o —

CQ

K I 33 C 44 U

33 33 33 31 33 33 :3

0C φ

>

w tJ

33 cj cj tó e

tó

N

I o

CJ cs

CJ «1 to I |

33 Ο O CJ CJ CJ CJ ‘ü' uj 31

33

CJ CJ n C4 el c4 33 33 33 33 CJ CJ

Q

Λ (Ο Ιθ (O

33 33 33 CJ CJ CJ CJ

CJ 33 CJ í'—' <M JJ cj CJ 33 --. CJ m <0 IS)

33 -Q CJ CJ CJ

-3· un ό m <34 O — — Ql

u
< o 33		Cfl
6-S		> tó
T—		tó
w		ÖŰ ω
tó		N
	ι-1	•rl
Ö	OJ	>
• rl tó	|	05
• r-l	o	υ
tó	tó	q
•rl	Cí	•H
tó	tó	q
	tó q	>
*—	tó	tó

o -tí * Z

CJ

	<0
te Τ’	B-S	tó
o	CM	o
tó	Fi	··
	©	tó
q		©
q	tó	<o
β	Φ	tó
tó	N	o
q	co	··
Γ*	tó	©
§	q
	φ tó	tó
r—1	tó	tó
Φ	φ	N
>	N	0}
1	CO	s
o	tó	tó
tó	tó	q
	tó	tó
	o	tó
τ—1		q
tó	**	tó

ÓO r—(

q	q	tó
	k	O
•r-í	$4	1
t—1	O	<J
Ή	tó	<3
N	tó	O
05	•r4	tó
tó	tó	&S
05	q	CM
•H	Ή	·»
N		©
tó	0)
M-l	q	05
	φ	tó z-s
tó	CJ	©
tó.	N	tó tó
O	CO	q ··
tó	Φ	•rl tn
\t-í		tó
tó	O	• i-4 · ·
Xi	q	Xi m
o	r—4	•rl
’tó	M-l	q.'—’

tó tf tó ©

<A tó

CJ §

tó

Ό

N

Φ e

r—4 tó

3-i

O o

<

o tó &<

CM ©

co tó tó tí •rl

3· tó •rl ex &<' CM

e.

o

4>O

-13193039

4-U etil

Nl 'etil

I—¹1 rOl '(til 4-11 í •I >1 '(ti «Ο •φ 'Φ

N e

μι '<0

N cn κ

		1
	r-l 60	1 CM
	'3 B	1
	C0	1
		1
'Φ		ι m
6		1 cn
q	J3
Φ	co	ι un
P	3	| τ-
	o m
	P 3	Ι o
	p i—'	ι m
	Ed <u	1 1

1	μ	1	1
•rl 1	φ		1 LT)
P q	•rd	r—1	ι «cn
•rl	X,	φ ,
u	Φ	β	ι un
O r-ι	B	CJ φ	ι
pq .rl	C	Ρ cn
ι ο	φ	Ρ q	1 ο
4J Cfl	μ	Ρ Φ	ι 'un

Ο /-·
•rl -3
Φ	ι σ	/—,
ρ	ι cn	>
cti 40
φ Ό		É>
Ρ -rl
1 3		Ed
φ φ cti		EJ
r—1 6*3 z-n	ι un	Cl
•H C0 r-Η 60'	1 *“	Ed
Ο Ο tf		CJ
·< Μ C0		··
		Ed
		O
1 ( 6C CÖ		<o
ρ3 Ό <0		Ed
•Η ρ—1 Ρη r~i 60	ι un	EJ
•Η 3 Ö '3	J X—	··
ρ Ρ cd cn		o
		oj
		Ed
ι 'cti -rí ι q		Ό
Φ 3 C0 Ρ Φ	1 tf	N
í-ι cti 'cti Ό N		cti
P P r-i g cn		B

4-11 etil Nl 'etil r—I | tf I Ol μι ι •I

Ml >1

E>

P tf tf cö

4J μ

cö μ

o ve

CN s

e o

CM

CM

X d

?

cj cn ο Φ tf 3 Ph γ—1 W Φ (S”

O

o.

un

O

O m

CM sD

SO tf μ

Φ i—4 tf >N

Φ >

tf tf μ Φ O l

• Γ-) Ö

Φ < r- O tf μ

Φ CM μ * Φ O ,—1 :3 co Ρ'Φ 60 sf, fel μ

Φ t—1

Ή >>

Φ >

tá υ

tö tf u

&

tf cö 'íÖ

N

W

	Φ	μ
	>	tí
		•μ
1	•	tf
o	00	•μ
EJ	CM	μ
CO		•μ
	CÖ	ο-
N
Ed	tf
EJ	ül	CM
N_Z	'cö	*.
	r-H	Ο
tf O	tf

tá tf o

tf o

Rf fordított fázisú szilikagél TLC-vel (Whatman KC,_S , flureszceris indikátor); 0,2% piridint és 0,2% HOAc-ot tartalmazó H^OeCH^OHiCH^CN oldószerrendszer 0,2% piridint és 0,2% HOAc-ot tartalmazó H_z0:CH OH:CH^CN:NH₄OAc sO

CM

-14193039

27.példa

N_T^,-/n-Dekanoil/-A-21978C mag /4. vegyület/

Á következő művelet a vegyületek „aktív észter eljárással történő, üzemi szintű előállítását illusztrálja.

A. 2.4,5-Triklór-fenil-n-dekanoát előállítása

Dekanoil-klorid (Pfaltz és Bauer, 5,6 ml) és 2,4,5-triklór-fenol (5,6 g) dietil-éterrel (1 liter) és piridinnel (120 ml) készült oldatát 4 óráig keverjük. A reakcióelegyet szűrjük és vákuumban szárítjuk. A 2,4,5-triklór-fenil-n-dekanoátot szilikagéloszlopon (Woelm) tisztítjuk toluol eluenst használva. A frakciókat TLC-vel ellenőrizzük, a detektáláshoz rövidhullámú UV fényt használva. A megfelelő frakciókat egyesítve és vákuumban megszárítva 10,4 g 2,4,5-triklór-íenil-n-dekanoátot kapunk.

B. N_o,„-t-BOC-A-21978C mag acilezése 2,4,5-trik!ór-fenil-n-dekanoáttal

N_cr„-t-BOC-A-21978C mag (15,0 g) és

2,4,5-triklór-fenil-n-dekanoát (15,0 g) vízmentes DMF-da! (500 rn!) készült oldatát nitrogéngáz alatt környezeti hőmérsékleten 25 óráig keverjük. Ezután az elegyet 60°C-on 5 óráig, vagy pedig addig keverjük, amíg a TLC a reakció befejeződését nem jelzi. A reakcióelegyet vákuumban körülbelül 200 ml-re bepároljuk és 1,2 liter Et₂O/toluol (5:1) eleggyel keverjük. A terméket szűréssel elkülönítjük, Et₂ü-val mossuk és vákuumban szárítjuk. 15,05 g NTr_?-/n-dekanoil/-No_rn-t-BOC-A-21978C mag köztiterméket kapunk (1 általános képlet: R = n-dekanoil, R¹ = H, R² — t-BOC).

C. Az Nr_rp-/n-dekanoÍl/-Nz?_r„-t-BQC-A-21978C mag tisztítása

Az Nr_rp-/n-dekanoil/-No_r„-t-BOC-A-21978C mag köztiterméket a következő módon tisztítjuk: a nyers készítményt körülbelül 50 ml eluáló oldószerrendszerben oldjuk₍és az oldatot HPLC-vel tisztítjuk, fordított fázisú szi1ikagél/C₁₈ adszorbenssel töltött patront tartalmazó Waters Prep 500 rendszert használva. A rendszert 0,2% piridinl és 0,2% ecetsavat tartalmazó H₂O/MeOH/CH₃CN (50:15:35) eleggyel eluáljuk. A frakciókat UV monitorral detektáljuk 280 nm hullámhosszon. A megfelelő frakciókat egyesítve és vákuumban szárítva 8,56 g tisztított N_Tr_P-/n-dekanoil/-N„_r,i-t--BOC-A-21978C magot kapunk.

D. Az Norn-t-BOC csoport eltávolítása

A t-BOC csoport eltávolítása céljából az Nr_rp-/n-dekanoil/-N0_rfi-t-BOC-A-21978C magot (1,47 g) 15 ml trifluor-ecetsav/l,2-etándiol (10:1) elegyben környezeti hőmérsékleten 3 percig keverjük. A reakcióelegyet vákuumban megszárítjuk és a maradékot Et₂O-val (50 ml) trituráljuk. 20 ml Et₂O-val való mosás után a triturált anyagot vákuumban megszárítva 2,59 g nyers N_7rp-/n-dekanoil/-A-21978C magot kapunk (1 általános képlet: R = n-dekanoil; R' és R² == H).

E. Az Nnp-/n-dekanoil/-A-21978C mag tisztítása

A nyers Nr_rp-/n-dekanoil/-A-21978C magot fordított fázisú HPLC-vel tisztítjuk a következőképpen: a mintát (2,59 g) 4,0 ml H₂O/ /MeOH/CH₃CN/piridin/HOAc (50:15:35:2:2) elegyben oldva LP-1/C₁₈ adszorbenssel megtöltött 83 x 2,54 cm-es rozsdamentes acéloszlopba injektáljuk. Az oszlopot a fenti oldószerrel eluáljuk. Áz elúciót 10-12 ml/min áramlási sebességgel hajtjuk végre LDC kétdugatytyús szivattyút (Milton-Roy) használva. Az effluenst UV detektorral (Isco Model UA-5, Instrument Speciálist Co., 4700 Superior Avenue, Lincoln, NB 68504) detektáljuk 280 nmnél. 2 percenként frakciókat (20-24 ml) gyűjtünk. A kívánt frakciókat— mikróbaellenes hatékonyságuk alapján — egyesítve és vákuumban szárítva 1,05 g terméket kapunk.

E tisztítási eljárást 4,35 g, 4,25 g, 2,14 g, 2,00 g és 1,75 g nyers kiindulási származékkal megismételve összesen 5,58 g tisztított Njv_P-/n-dekanoil/-A-21978C magot kapunk.

28. példa

N_Trp-/n-Dekanoil/-Nx, „-/n-dekanoil/-A-21978C (21. vegyület)

Az Nr,p-/n-dekanoil/-Nxi„-/n-dekanoil/-A-21978C mag (1 általános képlet: R és R¹ = n-dekanoil; R² = H) kis mennyiségben keletkezik a 27. példában leírt N_Trp-/n-dekanoil/-származék előállításakor. Az E. fejezetben leírt fordított fázisú HPLC tisztítás folyamán izoláljuk. A kívánt frakciókat egyesítve és vákuumban szárítva 211 mg nyersterméket kapunk. A vegyületet analitikai HPLC-vel/C,₈ Microbondapak, Waters Co./ tisztítjuk, H₂O/ /CH₃CN/NH₄OH/HOAc (6:23:15:0,5:0,5) eiuens rendszert használva (32 ismétlés, minden injektált minta 500 |»g). 4,4 mg N_Tr_P-/n-dekanoil/-Nx,„-/n-dekanoil/-A-21978C magot kapunk, melyet 360 MHz-es H⁺-NMR-rel azonosítunk.

29. példa

N_rrp-Cbz-NQ_Z„-Lauroil-A-21978C mag (20. vegyület)

E módszernél az N(?_r„-t-BOC-A-21978C mag triptofánjának alfa-aminocsoportját Cbz-csoporttal védjük meg, majd a t-BOC csoportot eltávolítjuk és a triklór-fenil-lauroil-észterrel acilezünk (az ornitin alfa-aminocsoportján).

A. Nrrp-Cbz-N0r„-t-BOC-A-21978C mag elő| J j Sa

Na„-t-BOC-A-21978C magot (1,0 g) DMFban (150 ml) oldunk, és az oldatot 60°C-ra melegítjük. N,O-bisz/trimetil-szilil/-acetamidot (0,55 ml), majd benzil-pentaklór-fenilkarbonátot,(257 mg) adunk hozzá. 20 órai keverés után a reakciókeveréket mintegy 20-25 ml térfogatra bepároljuk. Vizet (100 ml) adunk hozzá és az oldat pH-ját In nátrium15

-15193039

-hidroxid-oldatta 1 6,0-ra állítjuk be. A keveré két Et₂O-val (6 x 200 ml) mossuk, majd liofi-. lizáljuk.

A nyers származékot fordított fázisú HPLCvel tisztítjuk a következőképpen: a körülbelül 6 ml H₂O/MeOH/CH₃CN/piridin/HOAc (55:15:30:2:2) elegyben oldott mintát 83 x 1,27 cm-es LP-l/C,_g töltetet tartalmazó rozsdamentes acéloszlopba injektáljuk. A kívánt frakciókat UV abszorpció (280 nm) útján és antimikrobiális aktivitásuk alapján lokalizáljuk. E frakciókat egyesítve és liofilizálva 951 mg N_rrp-Cbz-Nff_r„-t-BOC-A-21978C mag-származékot kapunk.

B. A t-BOC csoport eltávolítása

A t-BOC csoportot úgy távolítjuk el, hogy a köztiterméket 50 mg/ml koncentrációban trif 1 uor-ecetsa v/anizol/trietil-szilán (10:1:1) elegyben oldva -10°C-on 3 percig keverjük. Az elegy bepárlása után olajat kapunk, melyet 2 x 25 ml Et₂O-val eldörzsölve 520 mg nyers NT_rp-Cbz-A-21978C mag képződik.

C. N_Tr_P-Cbz-A-21978C mag acilezése

Az Niy_p-Cbz-A-21978C magot a triklór-fenil aktív észter-eljárással acilezzük. Nn-p-Cbz-A-21978C-t (520 mg) adunk 1-hidroxi-benzotriazol (7 mg) és lauroil-triklór-íenol aktív észter (123 mg) piridinnel (150 rnt) készült oldatához. 20 óráig 60°C-on keverjük, majd a reakcióelegy bepárlása után kapott maradékot Et₂O-val (3 x 25 ml) eldörzsölve Nr^-Cbz-No_rn-lauroíI-A-21978C magot (550 mg) kapunk.

³⁰

30. példa

Schiff-bázisok és redukált Schiff-bázisok előállítása

Több reakciót hajtunk végre az alábbiak szerint:

A-21978C magot (40 mg) vízben (2 ml) oldunk. Az oldat pH-ját 4-ről 9-re állítjuk be In nátrium-hidroxidoldat segítségével. Az oldat alikvotjait (0,5 ml) a következő aldehidekkel (5 μΐ) elegyítjük:

1) heptaldehid

2) oktil-aldehid

3) decil-aldehid

4) undecii-aidehid metanolban (4 ml). A reakcióelegyet éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. A képződött Schiíf-bázisokat NaBH₃CN-dal (2,5 mg per reakció) redukáljuk 5 percig szobahőmérsékleten.

A reakcióelegyeket szilikagél TLC-vel vizsgáljuk CH₃CN/H₂O (7:3) oldószerrendszert használva, és Staphylococcus aureus-szal szembeni próbát alkalmazva. A Schiff-bázisok e próbában nem hatásosak S.aureus-szal szemben, feltehetően a próba körülményei között bekövetkező instabilitásuk következtében. Mindegyik redukált elegyben két faktor keletkezik. E vegyületek aktívak S. aureus-szal szemben és a TLC rendszerben hasonló elmozdulást mutatnak, ami arra utal, hogy a következőkben felsorolt 1 általános képletű vegvületek képződnek (minden esetben R¹ = = H):

Schiff-bázisok és redukált Schiff-bázisok előállítása

A21978C reakciója a.z alábbi aldehidekkel:	Termék	Hatás SU aureus-szal szemben	r/
R	R2-
heptaldehid	CH, (CHA CH=	Η		nem	0,4
	CH3(CHA -	H		igen	0,05
	CH, (CHA ch-	ch3(chA	CH=	nem	0,4
	CH, (CHA -	ch3(cha	-	igen	0,72
oktil-aldehid	CH,(CHJ6 ch=	ll		nem	0,4
	ch,(ch7)7-	H		igen	0,59
	CH3(CHj6CH=	CH,(CHjfe	CH =	nem	0,44
	CH3(CHz)7-	CH,(CH?).?	-	igen	0,72
decil-aldehid	CHx(CH,)9 ch=	H		nem	0,44
	ch,(chj9 -	H		igen	0,69
	CR,(CHJ8 ch=	CH3(CHA	C=	nem	0,51
	ch,(chA -	CHS(CG2)9	-	igen	0,73
undecil-
-aldehid	CH, (CHe)g ch=	H		nem	0,47
	ch3(ch2)w -	H		igen	0,69
	ch^(ch2)9 ch=	Cl\ (CH... )3	CH=	nem	0,53
	CH^(CHt),o -	ch3(cha		igen	0,73

E próbában a Schiff-bázisok aktivitásának hiánya a kísérleti körülmények közötti instabilitásukat tükrözheti *-szilikagél TLC, CH,CN/H_z0 (7:3) rendszer

-16193039

31. példa

Nr_rp-lauraldehid Schiff-bázis és Nr_rp,Ní?,_n-dilauraldehid Schiff-bázis, valamint a megfelelő redukált Schiff-bázisok előállítása (22. és 23. vegyület) 5

A-21978C magot (1 g) vízben (50 ml) oldunk, és dodecil-aldehid (500 μΐ) metanollal (200 ml) készült oldatát adjuk hozzá. A reakcióelegyet éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük, majd 50 percig redukáljuk nátrium- 10 -ciano-bór-hidridet (291 mg) hozzáadva. A reakciókeveréket vákuum alatt Whatman 1. szűrőpapírt használva átszűrjük az oldhatatlan részek eltávolítása céljából. A felülúszót bepárolva vizes oldatot kapunk, melyet liofi- 15 lizálunk. A kapott 1,256 g terméket analitikai HPLC-vel elemezzük és részletekben fordított fázisú HPLC-vel tisztítjuk. Minden részletet (350 mg) 50%-os vizes metanolban (6 ml) oldunk, az anyag oldódását szonikálás- 20 sál és melegítéssel segítjük elő. Ezután az oldatot 1,5 x 80 cm-es LP-1 /C₁₈ oszlopon bocsátjuk át, 0,2% piridint és 0,2% ecetsavat tartalmazó CH₃OH/CH₃CN/H₂O (25:40:35) eleggyel eluálva, mintegy 7,5 ml/min áram- 25 lási sebességet alkalmazva. Az elúciót 280 nmnél UV detektorral követjük. A kívánt termékeket tartalmazó frakciókat egyesítve összesen 104 mg Nr_rp-/n-dodecil/-A-21978C magot (22. vegyület) és 19,2 mg N_np-/n-dodecil/- 30 -No_rn-/n-dodecil/-A-21978C magot (23. vegyület) kapunk.

VXI. táblázat

Az előállított vegyűletek amino sav-analízise az alábbi:

	22. vegyü- 23. vegyü-
let	let
Asp	3,93*	3,99*
Thr	0,91	0,90
Gly	2,03	2,12
Alá	1,00	1,00
Ser	0,88	0,89
3MeGlu	0,90	0,87
Kyr	1,26	0,97
Orn	0,97	0,31

*A vizsgálati körülmények között az aszparagin aszparaginsawá (Asp) alakul.

32. példa

Az 1 általános képletű vegyűletek antibakteriális hatékonyságát in vitro mutatjuk ki. Egyes jellemző 1 általános képletű vegyűletek antibakteriális vizsgálatának eredményeit—melyekhez agarlemezen végzett standard diffúziós eljárással jutottunk — a VII. táblázatban közöljük. A VII. táblázatban az aktivitást a megfigyelt gátlási zónák méretével (átmérő mm-ben) fejezzük ki, melyekben a vizsgálandó vegyület a mikroorganizmus növekedését gátolja.

általános kégletu vegyűletek antibakteriális_aktivitása ££s*r lemezen^dif f uz iós Próbával ffl£ghatározya_

Vegyület Gátlási zóna mérete (mm)^a

száma	R	R’	' R1	Staphylococcus	Bacillus	Micrococcus	B. subtilis
				aureus	subtilis	luteuí
				ATCC 6738P	ATCC 6633	ATCC 9341	ATCC 6633
I.	CH, (CHj)j-CO-	H	H	17	15	21	16
2.	CH3 (CHí)s C0-	H	H	23	18	23	20
3.	CH, (CH2)7 CO-	H	H	20	16	18	27
4.	CH, (CH,), CO-	H	H	2«,	20	22	29
5.	CH, (CH,), CO-	H	H	19	19	21	21
6.	CH, (CH,),O CO-	H	H	25	20	19	32
7.	CH, (CH,),, CO-	H	H	2;	17	19	29
8.	CH,(CH,)12 CO-	H	H	22	21	21	28
9.	CH,(CH, )„ CO-	H	H	20	19	19	24
10.	CH5(CH,)m co-	H	H	19	17	17	23
1 1 .	CH2=CH-(CH ,), CO-	H	H	21	17	20	25
12.	CH, (CH,), CH=CH(CH,), CO-	H	H	22	19	20	30
13.	CHj CHj, CH=CHCHiCH=CH-ch2ch=ch(chz)7co-	H	H	15	13	20	14
14.	CH,CH, CH(CH„) (CH, )„ CO-	H	CH^CO-	2I	18	20	25
15.	CH,CH, CH(CH,) CO-	H	HOCO(CHt)t C0-	•2!	18,	19	25
16.	CH, (CH2)e CO -	H	CH, (CH, ). CO-	1 i	nyc	10	17
17.	CH, (CÍÍ2)3 CO-	H	CH, (CH, ), CO-	17	13	14	20
18.	CH,(CH,)„ C0-	H	CH,(CH, )„ CO-	12	nv	-	13
19.	CH,CH. CH(CH,) (CH,),. CO-	H	t-BOC	1 +	1 1	10	22
'0.	Cbz	H	CH,(CH2),O CO-	15	10	17	23

^aA vegyűleteket vízben szuszpendáljuk 1 mg/ml Koncentrációban; 7 mm-es korongot bemártunk a szuszpenzióba, majd az agar felületére helyezzük, inkubálás: 24-48 h

25-37^eC ^&Por-tápagaron (minimál nutrient agar) tenyésztve ^cny = nyomokban

Jellemző 1 általános képletű vegyűletek antibakteriális próbájának eredményeit - standard agar-hígításos· próbát alkalmazva — a Vili. táblázatban foglaljuk össze. A VIII. táblázatban a hatékonyságot a minimális gátló koncentrációval (MIC) mérjük, azaz azzal a legkisebb koncentrációval, amelynél a vizsgálandó vegyület gátolja a mikroorganizmu65 sok növekedését.

-17193039

CM <T un un un un cm

Ο ι •Hl ωι

4<íl 'ΦΙ

Hl

Hl 'ΦΙ

I

OI r— r— CM

CM un o

un

CM	un
ff	»>
o	o
		Φ
NO	un
o	CM	'Φ
		U
o	CM O	H

		'Φ	fH
NO	un	N	H
O	CM	:o	'Φ
»>	ff	Λ5	03
o	CM O		H
		cö	4x1

CO CO nO OO 00 ,.00 ·<Τ CO CM 00 r— cn etil cnl 'etil H I •Hl >!

ΉI Hl 441 cOl

I ml

4x11 •Hl Hl OI ♦«Ί I 431 Hl ·ΗΙ etil Hl Nl Cl 'tfll cOl <ι

431 4x11 'Cl 0)1 Hl Cl I -H| • I Hl IHl tűi Ml Q) I Ml fűi >1 J col OI col Cl fH 1 ·*! •Η , υι ι

Ul 001 r-l onI <«-1 CMI í I <1

gl	1 v~	CM					CM	« f	un	CM	un
I	1 ·Λ						• *>	cn	CM	• ff	CM
4x51	ι un	un	CM	CM		CM	un	o	y—	in	y—
ΦΙ	1
H|	1 o	o	t—	y—	Y—	CM	o	o	O	o	o
(Ul 00 1
M|	1
:3I	ι un	un
XI	l cm	CM		un			un	un		cn
Ml	1	T—	un	CM	un	un	CM	CM		o
ΦΙ		*			·>	ff	*>	»>		ff	CM
>1	1 o	o	o	o	o	o	O	o		o	cn

I

Hl «—11 'etil Ml col Nl <U •Hl >1

Wl dl m

NI •Hl

Cl

Cl bfl

Hl

OI

I •Hl Ul ΦΙ »—1I Hl '0)1 «I Ή| fcdl nO un un --κ o cm un un un · *> γ- cm cm cm <t un hO Ό Ή Η ^ΚΦ cn '0

X) 'Cö tö rH '0)

P un

CM un un un

o

o

o

·-

O

o

o

O CM

o

cn

cö

un

co

un

un

CM

un

'Φ

CM

cm un

un

un

un

•r—

CM

un

ff * ff

ff

n

*s

o

o o

o

o

o

o

o

CM

o

Ό

43

+J

un

Ι/Ϊ

un

un

« ff

un

un

NO

N

ff ff

ff

»k

un

CM

*k w—

'cö

o

O f-

o

T—

o

CM

T—

o

» *k

CM

' NO

*

43

T~

cm

▼—

CM

T—

o

O

t—

CM

'cö

JJ

un

H

CM

>

CM

cm <r

CM

CM

a

CM

CM

00

co

cn

'Φ

>

H

<r oo

00

f

00

-ö-

NO

NO

».

H

H

oo

oo oo

co

NO

00

CM

00

oo

00

cö

♦—

CM

CM

4x1

Y“

t—

o

a

Y

CM

'CÖ

W

fH

4x1

N

CO

CO

fű

tű

H

CO

N

N

fű

tű

CÖ

H

1

H

H

cn

fű

H

4-1

:o

:o.

χ-

o

fű

co

o

o

ι

Φ

4-J

4-f

•

T- O

cn

•H

CM

Φ

P

4

C—

<r <t

t—

TÖ

u

cö

o

:d

co

co

X

> X

CZ)

•H

Ή

co

1

X

tí

Ö

6

co

tí

a

ÖO

a

Φ

co

f

H

Φ

o

Φ

4-J

4-f

3)

d)

c

tí

NO

>

N

N

Φ

1 1

1

TÖ

1

Φ

d

NO

o

to

CO

H

x X

X

•H

X

b£

φ

X

NO

.ff

•H

d

1 1

1

P

1

O

ö

On

ö

N

N

Cö

Φ

X

P

Q

ON

Φ

Φ

Φ

w

43

H

H

d u ο o Ü o fH =

P cö co d

o ο

o ο

o

U p

0)

H

4J co

Öű ’-H Γ-Η O β

Η ·Η <J o Η -H

O (ti H M 0) 0) g fű g d H> o 'CÖ u

Cö

U fH o

UH σ ι

Hl

0)1

4x11 '0)1

Hl

Hl '0)1

I

OI

Ml gl

I

4<ll 0)1 Hl 0)1 ΜI 13)1 XI Ml 0)1 >ί

Ul rH I 'cöl * oa col Nl •Hl >1

Ul

CÖI

Nl 'cöl rH| rűl 'cöl

Ul

I •I

Hl

Hl

Hl >1

COl

2’

2)

NI •Hl

Öl cöl

Ott

Hl

OI

I •H| Ul ΦΙ 1-H I Hl 'ΦΙ

C0|

Hl

Xl

	1 1	un	un	un
CM	1	*k	ff	ff
CM	1 1	Ο Y-	Y- P --	Y- o Y“
	1 1			un
	1			CM
	1			γ— un
	1			ff «>.
CM	1	sr	CM NO CM	£N Ο O

cn γo

CM

Tá

I*X

Qj un

NO CM 00 CM CM St I 00 <t cn cn cn cm no oo <r oo oo oo oo NO CM CM CM CM

7 7 un

O 00 00 CM CM un un cm CM fCO CO Ο O <30 00 οονοοοοονΟνο<τ<τοο<τ f- f- f- CM NO

00 OO 00 00 <r co <r <r oo oo <r cm <r no cn

CM CM no cn cn

CM

CM

<r	<r	00	<r	00	<r		CM	cn	00
<r		00	00	00	00		CN	<r	CM
								nO	cn
co	00	00	00	00	00	00	oo	00	00
CM	CM	CM	CM	CM	CM	CM	CM	CM	CM
A	A	N	)\	Λ	A	A	A	A	Λ
						un	un
	Y—	CM		CM	CM	o	o	CM	Y—
							H
				Y“	CM
				Η	H		4x1
				tű	fű		H
				fű	fű		CÖ	4J
		U				cn	Pi	H	•P
	yO	O	fű	co		o		O	H
	y—	o	cn	•H		CM	Φ	P	O
<H	<r	<|-	Y—	TÖ		O	cö	o	P
X	>	X	co	•H			•H	co	o
				a		to	Ö	u	co
co				H		Φ	o		Φ
3*				0)		e	a	NO
Φ	1	1	1	Tö	1	Φ	d	NO	o
H	X	X	X	• H	χ	01	CU	X	NO
d	1	1	1	o	1	o	d		ON
cö				Φ		t>	P		ON
						(3

co d;

a o

o u

o fH oj cd

Hí cn .¹ J J Ί Ί Ί

-18193039

36

A jellemző 1 általános képletű A-21978C ciklusos peptid in vivő mikróbaellenes aktivitást mutat kísérletes baktériumos fertőzésekkel szemben. Ha a vizsgálandó vegyület két dózisát alkalmazzuk jellemző mikroorganizmusokkal fertőzött egereken, a megfigyelt aktivitást ED_5o értékként fejezzük ki [hatásos dózis mg/kg-ban, mely a kísérleti állatok 50%-át megvédi: lásd Warren Wick és munkatársai, J. Bacteriol. 81, 233-235 (1961)].

A kapott ED_5o értékeket a IX. táblázatban-tüntetjük fel.

IX. táblázat

A-21978C ciklusos peptidek in vivő aktivitása	o értékek Streptococcus	pyogenes
	1 általános képletű vegyület	ED$ Staphylococcus
				aureus
száma	R	R	R	Szubkután		'Szubkután	Orális
1.	CH, (CH,),C0-	H	H	2,65		1,49; 5,16	XV c
2.	CH. (CH.). CO-	H	H	3,75; 1,4	<2,	2; 0,65; 1,95^	>200
3.	CH4(CH, \ co-	H	H	0.5		0,14; 0,243	92-,117
4.	CH5(CH,), co-	H	H	0,28		0,03	66
5.	CH,(CHt), CO-	H	H	0,37		0,13	138
6.	CH.(CH,)„ CO-	H	H	0,44		0,05	69
7.	CH,(CH.)., CO-	H	H	0,54		0,046	45
8.	CH,(CH,),j CO-	H	H	1,17; 3,08	0,	98; 0,20; 0,54	<50; <200
9.	ch,(ch,),3 co-	H	H	8,3	<0	,5; 0,18	>200
10.	CH, (CH/),, CO-	H	Ή	>1,1		0,18	>200
1 1.	0Η,=0Η-(0Η.), CO-	H	H	0,93		0,068	138
12.	CH, (CH,), CH=CH(CH,), -CO-	Ή	H	3,28		0, 134	75
14.	CH,CH,CH(CH3) (CH,). CO-	H	CH.CO-	1 ,3		2,2; 1,9	163, >200
15.	CH,CH,CH(CH.) (CHj). CO-	Ή	HOCO-CCH,	,),CO- 6,27 .		1 ,4	>200
17.	CH,(CH,), CO-	H	CH.ÍCHJ,	-CO- 35		2,85	>200
22.	CH,(CH,)„ -	H	H	1,25		1,1*, 0,85	>200

^amg/kg x 2; ^bkét kísérlet; ^őnem vizsgáltuk’, ^dhárom kísérlet

Néhány 1 általános képletű A-21978C ciklusos pepiiden végzett mérgezőképtességi próba eredményét a X. táblázatban foglaljuk öszsze.

X. táblázat

Ay21978C ciklusos peptidek mérgezőképessége általános képletű vegyület LD_5O (mg per kg)

száma	R	4 *1	egérnél0'
R	R
1.	CHa (CH2 )5 CO-	H	H	>600
2.	CH3(CH2)e CO-	H	H	>600
3.	ch^(ch2)7 co-	H	H	>600
4.	CH3(CHj)3 co-	H	H	>300
5.	ch3 (CHj, co-	H	H	>600
6.	CH5(CH2)to CO-	H	H	144; 265fc
7.	CH3(CH2)h co-	H	H	112,5
8.	CHj(CHt)n CO-	H	H	62,5; <150
9.	ch3(chz),3 co-	H	H	56,25
10.	CH,(CHZ)„ CO-	H	H	50
11.	CHz=CH-(CHjs CO-	H	H	>500
12. '	ch5(ch.j3 ch=ch(ch2)7co-	H	H	450
14.	CH3CHzCH(CH}) (CH2)á CO-	H	CH3 CO-	>600; 600
15.	CH3CH2CH(CH3)(CH2)c CO-	H	H0C0(CHz)2C0-	450; 600
16.	CH3(CHz)e CO-	H	CHjCCHjA CO-	>600
17.	CHj(CH2)3 CO-	H	CH3 (CH^ )9 CO-	94
22.	CH/CHJ,. -	H	H	>300

^intravénásán alkalmazva ^bkét kísérlet

Claims (6)

1) R, R’ és R² közül legalább az egyik szubsztituens hidrogénatomtól eltérő jelentésű legyen,

1. Lijárás 1 általános képletű A-21978C ciklusos peplid-származékok —ahol R hidrogénatom, 4-14 szénatomos alkil-, 7-16 szénatomos alkanoil-, 11-19 szénatomos alkenoiicsoport vagy benziloxikarbonilcsoport,

R¹ hidrogénatom, 2-19 szénatomos alkanoilvagy 9-11 szénatomos alkenoiicsoport,

R² hidrogénatom, 4-14 szénatomos alkil-,

2. Az I. igénypont szerinti eljárás olyan 1 általános képletű ciklusos peptid-származékok előállítására, ahol

R, R¹ és R² az 1. igénypontban megadott és R³, R⁴ és R⁵ hidrogénatom, azzal jellemezve, hogy megfelelően szubsztituált anyagokból indulunk ki.

(Elsőbbsége: 1982.05.21.)

2) R¹ és R² közül legalább az egyik szubsztituens hidrogénatomot jelentsen,

2-15 szénatomos alkanoil-,ω-karboxi-(2-4 szén atomos)-alkanoilcsoport, és

R³, R⁴ és R⁵ hidrogénatom, vagy (i) R⁴ és R és/vagy (ií) R⁵ és R² együttesen 4-14 szénatomos alkilidéncsoportot jelenthet, azzal a feltétellel, hogy

3. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan 1 általános képletű ciklusos peptid-származékok előállítására, ahol

R jelentése CH₃(CH₂)„-<?- általános képletű alkanoilcsoport, melyben n 5-14 közötti egész számot jelent, és

R¹, R², R³, R⁴ és R⁵ az 1. igénypontban megadott, azzal jellemezve, hogy megfelelően szubsztituált anyagokból indulunk.ki.

(Elsőbbsége: 1983.05.20.)

3) Az R, R^! és R² csoportok együtt legalább 4 szénatomot tartalmazzanak, és,

4. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan 1 általános képletű ciklusos peptid-származékok előállítására, ahol

CH_S 0

I «

R jelentése . CH₃ (CH₂) „ -CH (CH₂) -C általános képletű alkanoilcsoport, melyben π és m egymástól függetlenül 0-12 közötti egész számot jelent, azzal a feltétellel, hogy n+m nem lehet kevesebb 3-nál és nagyobb 12-nél;

továbbá, ha n = 0, m nem lehet 8, és, ha n=l, m nem lehet 6 vagy 8, es R¹, R², R³, R⁴ és R⁵ az 1. igénypontban megadott, azzal jellemezve, hogy megfelelően szubsztituált anyagokból indulunk ki.

(Elsőbbsége: 1983.05.20.)

4) ha R¹ és R² jelentése hidrogénatom, R 8-metil-dekanoil-, 10-metil-undekanoil-, 10-metil-dodekanoiicsoporttói, az A-21978C C_o faktor specifikus C₁₀-alkanoilcsoportjától vagy az A-21978C C₄ és C₅ faktorok specifikus C_l2-alkanoilcsoportjától eltérőelőállítására, azzal jellemezve, hogy valamely 3 általános képletű A-21978C ciklusos peptidet, ahol

R' és R° egymástól függetlenül hidrogénatomot vagy a peptidkémiában önmagában ismert amino-védőcsoportot jelent—,

a) R®-COOH általános képletű acilezószerrel vagy ennek reakcióképes származékával—ahol R⁶ az R,R', illetve R² jelentésénél megadott alkanoil-, illetve alkenoil-csoportban levő alkil-, illetve alkenil-csoport szénatomszámával megegyező, adott esetben ω-karboxil-csoporttal szubsztituált alkil- vagy alkenilcsoportot jelent-: vagy _o

b) R⁷-C-R^s általános képletű karbonil-származékkal — ahol az R⁷R⁸C= általános képletű csoport jelentése 4-14 szénatomos alkilidéncsoport — reagáltatjuk; majd kívánt esetben az olyan 1 általános képletű vegyületek előállítására, ahol R, R¹ vagy R² jelentése 4-14 szénatomos alkilcsoport; a fenti b) műveletben kapott 4-14 szénatomos alkilidén-terméket—célszerűen nátrium-cianoborhidriddel—redukáljuk, és kívánt esetben — bármelyik fenti reakció során kapott termékben a jelenlévő R' és R° védőcsoportokat eltávolítjuk.

(Elsőbbsége': 1983.05.20.)

5. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan 1 általános képletű ciklusos peptid-származékok előállítására, ahol

R jelentése CH₂=CH(CH₂)„-C- általános képletű cisz- vagy transz-alkenoil-csoport, melyben n 8-15 közötti egész számot jelent, és

R¹, R², R³, R⁴ és R⁵ az 1. igénypontban megadott, azzal jellemezve, hogy megfelelően szubsztituált anyagokból indulunk ki.

(Elsőbbsége: 1983.05.20.)

6. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan 1 á-talános képletű ciklusos peptid-származékok előállítására, ahol

R és R⁴ együttes jelentése 4-14 szénatomos alkilidéncsoport, és

R¹, R², R³ és R⁵ az 1. igénypontban megadott, azzal jellemezve, hogy megfelelően szubsztituált anyagokból indulunk ki.

(Elsőbbsége: 1983.05.20.)

7. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan 1 általános képletű ciklusos peptid-származékok előállítására, ahol

R jelentése 4-14 szénatomos alkilcsoport, és R', R², R³, R⁴ és R⁵ az 1. igénypontban megadó· t, azzal jellemezve, hogy megfelelően szubsztituált anyagokból indulunk ki.

(Elsőbbsége: 1983.05.20.)

-20193039

8. A 7. igénypont szerinti eljárás olyan 1 általános képletű ciklusos peptid-származékok előállítására, ahol

R dodecilcsoportot jelent, és

R', R², R³, R⁴ és R^& az 1. igénypontban megadott, a,2zal jellemezve, hogy megfelelően szubsztituált anyagokból indulunk ki.

(Elsőbbsége: 1983.05.20.)

6 lap rajz