HU192960B - Process for the imcrease of lankacidine production - Google Patents
Process for the imcrease of lankacidine production Download PDFInfo
- Publication number
- HU192960B HU192960B HU831253A HU125383A HU192960B HU 192960 B HU192960 B HU 192960B HU 831253 A HU831253 A HU 831253A HU 125383 A HU125383 A HU 125383A HU 192960 B HU192960 B HU 192960B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- cyclodextrin
- medium
- streptomyces
- microorganism
- acetyl
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
- C07D493/02—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D493/08—Bridged systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/181—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system, e.g. Salinomycin, Septamycin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/24—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carbonyl group
- C12P7/26—Ketones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/886—Streptomyces
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Description
A találmány tárgya tökéletesített eljárás a lankacidinek előállítására.
Lankacidinek alatt az (I) és (II) általános képlettel jellemezhető vegyületekből, valamint a lankacidin K és lankacidin L néven ismert, Bzerkezetileg nem azonosított vegyületekből álló antibiotikum-csoportot értjük. Az (I) általános képletben
R1 jelentése oxigénatom, vagy hidrogénatom es hidroxilcsoport f (a) általános képletű csoport],
R2 jelentése hidrogénatom vagy acetilcsoport; a (II, általános képletben R3 jelentése acetilcsoport.
A lankacidineket más nevei» T-2636 antibiotikumoknak is nevezik. Idetartoznak a lankacidin A (I; R*=oxigénatom, R’z-COCIh), lankacidin C (I; R1=oxigónatom, R“=hidrogónatom), lankacidinol A (I; RJ=(a) képletű csoport, R’=-C0CH3), lankacidinol fi; R*=(a) képletű csoport, R3=hidrogénatoml, lankaciklinol (II; R3=hidrogónatom), lankaciklinol A (II; R3=-C0CHa) és a fentebb már említett, ismeretlen Bzerkezetű lankacidin K és L.
Az (I) és (II) általános képletű lankacidinek fizikai-kémiai és biológiai tulajdonságai ismertek [J. Antibiotics 24, 1 (1971); ibid. 26, 647 (1973); Chem. Pharm. Bull. 22, 99 (1974); ibid. 23, 2201 (1975)1; a lankacidin K és L fizikai-kémiai és biológiai sajátságai a 150 018/ /1981. Bzémú, 1981 szeptember 22-én bejelentett japán szabadalmi leírásból ismertek.
A lankacidinek felhasználhatóságát széles körben vizsgálva kimutatták, hogy azok baktérium- és daganatellenes hatással rendelkeznek. A lankacidinek iránti igény várhatólag egyre nagyobb lesz, mivel toxicilásuk igen alacsony.
A fentiek ismeretében célunk olyan eljárás kidolgozása volt, amelynek segítségével a lankacidinek olcsón, nagy mennyiségben állíthatók elő,
A találmány szerinti eljárás értelmében a lankacidin-termelósre alkalmas mikroorganizmust ciklodextrin jelenlétében tenyésztjük a táptalajban.
Mikroorganizmusként bármelyik lankacidin-termelésre képes, a Streptomyces nemzetségbe tartozó mikroorganizmust használhatjuk, (a továbbiakban „St.” rövidítés alatt a Streptomyces nemzetséget értjük). Előnyösen használhatók például a St. rochei subsp. volubilis (IFO-12 507; ATCC-21 250; FERM P-6155; lásd 3 626 055. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás), St. griseofuscus [IFO-12 870; ATCC-23 916; ATCC Catalogue of Strains I (14th ed., 1980), 175. oldali, St. violaceoniger (NRRL-2834; IFO-14 166; 3 118 812. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás) és St. sp. 6642-GCi [IFO-14 172; Agr. Bioi. Chem. 35(1), 27 (1971)].
Az eljárásban használt ciklodextrin <c-ciklodextrin, í-ciklodextrin, ^-ciklodextrin vagy 6-ciklodextrin lehet. A ciklodextrineket külön-külön, vagy két vagy több ciklodextrint kombinálva használhatjuk, például 0-ciklodextrinből és j-ciklodextrinból álló elegyet használhatunk.
A táptalaj ciklodextrin-koncentrációja nem kritikus, feltéve, hogy nem gátolja a mikroorganizmus szaporodását, általában 1-150 mmól/1, előnyösen 2-100 nimól/1, legelőnyösebben 4-50 minól/l koncentrációban alkalmazzunk.
A ciklodextrinek kristályos, por vagy cseppfolyós formában lehetnek, szennyeződéseket is tartalmazhatnak, például cukrot vagy keményítőt. A szennyezett ciklodextrinekből olyan mennyiséget kell használni, hogy a tiszta ciklodextrin-koncenlréció a fent megadott határok közé essen.
A ciklodextrineket a tenyésztés során bármely időpontban hozzáadhatjuk a táptalajhoz, előnyösen akkor adagoljuk, mikor a mikroorganizmussal beoltjuk a táptalajt, illetve mikor a mikroorganizmust ótvisezük a táptalajba.
A táptalajban szénforrásként nemcsak szacharidokat - például keményítőt, dextrint, glükózt, maltózt, szacharózt, szorbitolt, melaszokat, gabona szirupokat vagy köleskocsonyát - használhatunk, hanem szerves savakat - például ecetsavat vagy borostyánkősavat több hidroxilcsoportot tartalmazó alkoholokat - például glicerint -, zsírokat vagy olajokat is. Nilrogénforrésként szervetlen vegyületeket, például ammóniumsókat, nitrátokat vagy karbamidot, vagy természetes eredetű szerves anyagokat, például élesztőkivonatot, kazeint, húskivonatot, gyapotmaglekvárt, kukoricalekvárt vagy szójabablekvárt használunk. A fentieken kívül a táptalaj tartalmazhat még szervetlen eókat, például vassókat (így vas-szulfátot), magnéziumsókat (például magnézium-szulfátot), mangánsókat (például mangán-szulfátot), kobaltsókat (például kobalt-szulfátot), rézsókat (például réz-szulfátot), nátriumeókat. (nátrium-kloridot), káliumsókat (például kálium-karbonátot), kalciumsókat (például kalcium-karbonátot), cinksókat (például cink-kloridot) és egyéb hasonló sókat. A táptalajban ezenkívül különböző aminosavak, vitaminok vagy nukleinsav-bázisok is lehetnek, a használt mikroorganizmustól függően.
Nyugvó, levegőztetett-kevert vagy rázott tenyészetet egyaránt használhatunk, előnyösen levegőztetett és kevert tenyészetet használunk. A tenyésztést 15 és 40 °C közötti hőmérsékleten végezzük, előnyösen 20 és 34 °C közötti hőmérsékleten dolgozunk. A táptalaj pH-ja 4 és 9 között van. A tenyésztés közben a táptalaj pH-értékét nátrium-hidroxid, kálium-hidroxid, vizes ammónia, vagy hig vizes kéneav- vagy hidrogén-klorid-oldat hozzáadásával biztosítjuk. A táptalajhoz alkálifémsókat, például kálium-karbonátot, vagy nátrium-karbonátot is adhatunk. A tenyésztést addig folytatjuk, inig a táptalajban jelentős mennyiségű lankacidin halmozódik fel, rendszerint 2-12 nap alatt kapunk
maximális hozamot.
A táptalajban felhalmozódott lankacidineket a szokásos módon, hagyományos eljárásokkal választhatjuk el, többek között a tenyészetet vagy annak szürletet vízzel nem elegyedő oldószerrel, például egy ketonnal például acetonnal, 4-metil-2-pentanonnal észterrel - például etil-acetáttal, etil-propionáttal -, vagy valamely szénhidrogénnel például hexánnal vagy benzollal - extraháljuk, előnyösen olyan oldószert használunk, amely semleges ée lipofil tulajdonságú. Az extraktumot vizes savoldattal és vizes lúgoldatlal mossuk, majd bepárolva nyers lankacidint kapunk. A nyersterméket kívánt esetben szilikagélen, alumíniumon vagy hasonló adezorbensen oszlopkromatográfiás módszerrel tovább tisztíthatjuk, a fenti irodalmi utalásokban leírt eljárások szerint. A kapott lankacidineket az egyes összetevőkre ia szétválaszthatjuk.
A lankacidin 14-helyzetóben levő hidroxilcsoportot Bzelektíven észtercsoporttá alakíthatjuk úgy, hogy a tenyészethez, vagy előnyösen annak szűrletéhez az ecetsav valamely 1-4 szénatomos alkohollal, glikollal vagy glicerinnel alkotott észterét adjuk. Az észterekre példaként az etil-acetátot, monoacetint vagy triacetint említhetjük. A 14-helyzetben levő hidroxilcsoportot a táptalajban levő enzim észterezi, például a táptalajhoz etil-acetátot adva a megfelelő 14-acetil-éezter-származék keletkezik. Az észterezést például úgy folytatjuk le, hogy a tenyészet szűrletéhez 1/4-2-szer annyi észtert adunk, mint a szűrlet, ós a szűrletet addig keverjük, míg emulziót kapunk, rendszerint 1 perc - 1 óra hosszáig, 15-70 ’C-on, előnyösen 20-40 ’C-on, pH 4-9 értéken. A fenti módon kapott észterszármazékot ezt követően a már említett módszerrel választjuk el a reakcióelegyból.
A találmány szerinti eljárással előállított lankacidineket daganatellenes vagy baktériumellenes szerként, vagy sertés dizentéria kezelésére alkalmas antibiotikumként használhatjuk.
A találmány szerinti eljárást a következő példákkal kívánjuk közelebbről megvilágítani.
1. példa (1) 25 ml, 1 vegyesX oldékony keményítőt, 2 vegyesX nyers szójalisztet, 1 vegyesX kalcium-karbonátot és 0,1 vegyesX szójaolajat tartalmazó táptalajt 200 ml-es lombikba mérünk és sterilezzük. A táptalajt egy kacs ferde agaron fenntartott Streptomyces rochei subsp volubilis (IFO-12 507) tenyészettel beoltjuk és 28 ’C-on 200 fordulat/perc sebességgel működő rázógépen 24 órán keresztül rázatjuk. A kapott tenyészetet a továbbiakban inokulumként használjuk.
ml, 10 vegyesX glicerint, 2 vegyesX
Proflo-t (Treders Oil Mill Co., Amerikai Egyesült Államok), 0,5 vegyesX kukoricalekvart, 1 vegyesX Polypepton-t (Daigo Nutritive Chemicals, Ltd., Japán), 0,1 vegyesX vas-szulfátot és 0,01 vegyesX szójaolajat tartalmazó táptalajhoz különböző, az 1. táblázatban felsorolt koncentrációban β-ciklodextrint adunk. A táptalaj pH-ját 20 vegyesX-os vizes nátrium-hidroxid-oldattal 7-re állítjuk.
Az előző lépés szerint elkészített táptalajokból 20-20 ml-t 200 ml-es lombikba mérünk és sterilezzük. A táptalajt 1 ml inokulummal beoltjuk, ós 24 ’C-on 96 órán keresztül 200 fordulat/perc sebességű rotációs rázón rázatjuk. A táptalajon felhalmozódott lankacidinek mennyiségét ismert módon [J. Antibiotícs, 24, 1 (1971)1 kvantitativen meghatározzuk. A lankacidinek mennyiségét az alábbi módon számítjuk ki a biológiai értékmérés adataiból:
A fentebb leírt módon előállított lankacidint metil-izobutil-ketonnal extraháljuk. Az extraktumot vékonyréteg-kromatográfiás módszerrel futtatjuk (spot film, Tokyo Kaséi Co., Japán), futtattóelegyként etil-acetát és etil-éter 1:3 arányú elegyet használunk. A Sarcina luteaval (PCI-1001) kapott gátlási gyűrű átmérőjét a standarddal (ismert raenynyiségű lankacidinnel) kapott gátlási zóna átmérőjével hasonlítjuk össze.
Az eredményeket az 1. táblázatban foglaljuk össze.
(2) 1 1, 9 mmól/1 3-ciklodextrin jelenlétében kapott tenyészetet centrifugálunk. A felülúszót 1 1 4-metil-2-pentanonnal extraháljuk, vízzel mossuk, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A koncentrátumhoz 100 ml n-hexánt adva 3 g csapadékot kapunk. 2,5 g így kapott nyersterméket 25 ml kloroform-etil-acetát (1:1) elegyben oldunk, majd 75 g szilikagélen (0,05-0,2 mm; Merck és Co., Amerikai Egyesült Államok) adszorpciós kromatográfiás módszerrel tisztítunk.
Az oszlopon 250 ml étert folyatunk ót, majd az anyagot egymást követően 1 1 éter-etil-acetét (1:1) eleggyel, 1 1 etil-acetáttal és etil-acetát-aceton (1:1) eleggyel eluáljuk. Az így kapott eluátumok tartalmazzák az antibakteriólis hatÓBÚ frakciók többségét.
A baktériumellenes hatással rendelkező frakciókat összegyűjtve és koncentrálva 1,4 g sárga port kapunk. A fenti nyersterméket 0,5 kg szilikagélen (HF254; Merck és Co., Amerikai Egyesült Államok) vékonyréteg-kromatográfiás módszerrel a lankacidin-csoportot alkotó megfelelő egyes összetevőkre választjuk szét.
A kromatogrammot etil-acetát-éter (1:3) futtatóeleggyel fejlesztjük ki, és etil-acetáttal extraháijuk. Vizes mosáe után az extraktumot szárítjuk, koncentráljuk, majd átkristályosítjuk, ily módon 40 mg lankacidin C-t ós 3,5 mg lankacidin A-t kapunk.
A termékek olvadáspontja, fajlagoe forgatóképessége (c=l,0; etanol), ultraibolya abszorpciója (227 nm-nél) és elemanalizise pon-37 tosan' megegyezik a (J. Antibiotics 24, 13 (1971)] irodalmi helyen közölt adatokkal.
1. táblázat
| 0-ciklodextrin | Lankacidin | C Lankacidin A |
| koncentrációja a táptalajban (mmól/1) | (mmól/1) | (mmól/1) |
| 0 | 0.40 | 0.05 |
| 1 | 0.60 | 0.07 |
| 3 | 1.74 | 0.19 |
| 5 | 4.00 | , 0.44 |
| 7 | 4.00 | 0.52 |
| 9 | 4.20 | 0.53 |
| 11 | 4.60 | 0.55 |
| 30 | 4.50 | 0.55 |
| 50 | 4.52 | 0.55 |
2. példa ml, 5 vegyes% glükózt 0,5 vegyes% glicerint, 1 vegyesX Polypeptont, 0,5 ve5 gyes% húskivonatot, 1 vegyes% szójalisztet, 0,1 vegyes% magnézium-szulfátot ée 0,5 vegyes% kálium-karbonátot tartalmazó táptalajt 200 ml-es lombikba mérünk ée a 2. táblázatban felsorolt koncentrációban 0-ciklodextrin10 nel egészítjük ki, majd sterilezzük.
A fenti táptalajok mindegyikéhez 1 ml 1.
példa szerint előllított Streptomyces rochei subsp volubilis (IFO-12 507) inokulumot adunk. A tenyésztést 24 *C-on, 200 fordulat/ j5 /perc sebességű rotációs rázógépen 96 órán keresztüli rázatáasal végezzük. Az egyes táptalajokban felhalmozódott lankacidinek mennyiségét az 1. példában leírtak szerint határozzuk meg, az eredmények a 2. táblá2Q zatban láthatók.
2. táblázat
| Táptalajhoz adott 3-ciklodextrin koncentrációja (mmól/1) | Lankacidinol (mmól/1) | Lankacidinol A (mmól/1) | Lankaciklinol (mraól/1) |
| 0 | 0.21 | 0.04 | 0.13 |
| 1 | 0.32 | 0.06 | 0.19 |
| 3 | 1.23 | 0.16 | 0.55 |
| 5 | 2.80 | 0.39 | 1.40 |
| 7 | 2.85 | 0.41 | 1.42 |
| 9 | 2.91 | 0.41 | 1.40 |
| 11 | 2.91 | 0.42 | 1.39 |
| 30 | 2.89 | 0.40 | 1.41 |
| 50 | 2.88 | 0.40 | 1.40 |
3. példa
Az 1. példa (1) lépését ismételjük meg, azzal az eltéréssel, hogy a -ciklodextrin helyett a 3. táblázatban felsorolt koncentrációban adunk különböző ciklodextrineket, egyedül vagy kombinációban. A kapott lankacidinek mennyiségét az 1. példa (1) lépésében leírtak szerint határozzuk meg.
Az eredményeket a 3. táblázatban közöljük.
| 3. táblázat | |||
| Táptalajhoz adott ciklodextrinek koncentrá- ciója (ramól/1) | Lankacidin C (mmól/1) | Lankacidin A (mmól/1) | |
| β -ciklodextrin | 10 | 4.40 | 0.54 |
| — | — | ---————. | |
| tf-ciklodextrin | 10 | 0.75 | 0.08 |
| •j-ciklodextrin | 10 | - 3.01 | 0.35 |
| -------------- | —------- | ||
| 0-ciklodextrin cc-ciklodextrin | 5 5 | 4.10 | 0.49 |
| ^-ciklodextrin 7-ciklodextrin | 5 5 | 4.25 | 0.51 |
3. táblázat
Táptalaj- Lankacidin C Lankacidin A hoz adott (mmól/1) (mniól/1) ciklodextrinek koncentrációja (iumól/l) «-ciklodextrin 5 3.21 0.40
7-ciklodextrin 5 «-ciklodextrin 3 * β -ciklodextrin 3 3.02 0.38
7-ciklodextrin 3 ciklodextrin 0.40 0.05 nélkü!
4. példa ml, 2,8 vegyesX oldékony keményítőt, 3,0 vegyesX nyers földimogyorólisztet, 0,5 YegyesX melaszt, 0,5 vegyesX Polipeptont, 0,3 vegyesX kalcium-karbonátot, 0,25 vegyesX nátrium-kloridot, 0,003 vegyesX cink-szulfátot, 0,0007 vegyesX réz-szulfátot, 0,0007 vegyesX mangán-szulfátot és 0,2 vegyesX szójaolajat tartalmazó táptalajt 200 ml-es lombikba mérünk és sterilezzük. A táptalajt egy kacs ferde agaron fenntartott Streptomyces griseofuscus (IFO 12 870) tenyészettel beoltjuk, ós 200 fordulat/perc sebességű rázógépen 28 °C-on 30 órán keresztül rázatjuk. A kapott tenyészetet a továbbiakban inokulumként használjuk.
ml fenti összetételű táptalajt a 4. táblázatban ismertetett koncentrációban és összetételben különböző ciklodextrinekkel egészítjük ki. Az elegyeket 200 ml-es lombikba mérjük és sterilezzük.
A fentebb kapott inokulumból 1 ml-t mérünk minden egyes ciklodextrin-tartalmú elegybe, és a táptalajokat 200 fordulat/perc sebességű rotációs rózógépen 24 °C-on 96 órán keresztül rázatjuk. A táptalajban felhalmozódott lankacídinek mennyiségét az 1. példa (1) lépésében leírtak szerint határozzuk meg. Az eredményeket a 4. táblázatban adjuk meg.
4. táblázat
| Táptalajhoz adott ciklodextrin koncentrációja (minól/l) | Lankacidin C (inmól/1) | Lankacidin A (mmól/1) | |
| β -ciklodextrin | 10 | 1.55 | 0.21 |
| «-ciklodextrin | 10 | 0.31 | 0.04 |
| 7-ciklodextrin | 10 | 1.10 | 0.12 |
| 3-ciklodextrin | 5 | 1.50 | 0.19 |
| «-ciklodextrin | 5 | ||
| Λ-ciklodextrin | 5 | 1.53 | 0.20 |
| 7-ciklodextrin | 5 | ||
| «-ciklodextrin | 5 | 1.12 | 0.13 |
| 7-ciklodextrin | 5 | ||
| «-ciklodextrin | 3 | ||
| β -ciklodextrin | 3 | 1.11 | 0.13 |
7-ciklodextrin 3
| ciklodextrin | 0.15 | 0.02 |
| nélkül |
5. példa
500 ml, 3 vegyesX glükózt, 3,5 vegyesX kukoricalekvárt, 0,02 vegyesX magnézium-szulfétot, 0,1 vegyesX dikálium-hidrogén-foezfátot, 0,05 vegyesX szójaolajat, és 1,5 vegyesX kalcium-karbonátot tartalmazó táptalaj pH-jót 20 vegyesX-os vizes nátrium-hidroxid-oldattal 7,0-re állítjuk. A táptalajt 2 1-es Sakaguchi-lonibikba helyezzük, vattadugóval lezárjuk és sterilezzük. A táptalajt ezután ferde agaron tenyésztett Streptomyces rochei subsp volubilia (IFO-12 507) tenyészettel beoltjuk és lengő rézógépen 28 °C-on 24 órán keresztül rázatjuk. 30 1 fenti összetételű táptalajt 50 1-es fermentorba mérünk és sterilezzük. A fenti tenyészet 500 ml-ével beoltjuk a fermentorban levő táptalajt és a tenyésztést 24 °C-on levegőztetés (1 levegőtérfogat/perc/táptalaj-térfogat) és keverés (150 fordulat/perc) mellett 24 órán keresztül folytatjuk. Az ily módon kapott tenyészetet inokuluroként használjuk.
200 1-es fermentorba 100 1 10 vegyesX glicerint, 2 vegyesX Proflo-t, 0,5 vegyesX kukoricalekvért, 1 vegyesX Polipeptont, 0,1 vegyesX vas-szulfátot, 0,1 vegyesX szójaolajat és 1 vegyesX A-ciklodextrint tartalmazó táptalajt mérünk és sterilezzük. A fenti táptalajt beoltjuk 5 1 fentebb ismertetett módon kapott inokulummal, és 24 °C-on levegőztetés
-5π (1 levegótérfogat/perc/táptalaj-térfogat) éa keverés (165 fordulat/perc) mellett inkubáljuk.
1 fentebb kapott tenyészethez 20 1 vizet és 2 kg Hyflo-Supercel-t (Johns Manville Products Corp., Amerikai Egyesült Államok) adunk, ób az elegyet leszűrjük. 70 1 szürletet kapunk. A szürlet egy részét megvizsgálva úgy találtuk, hogy 3,3 mmól/1 lankacidin C-t és 0,2 mmól/1 lankacidin A-t tartalmaz. A 70 1 szürletet 200 1-es, keverővei ellátott edénybe visszük, hozzáadunk 35 1 etil-acetátot, és az elegyet szobahőmérsékleten 30 percen keresztül 120 fordulat/perc sebességgel keverjük, majd az elegy egy részéből újra meghatározzuk a lankacidinek mennyiségét. A mintában nem találtunk lankacidin C-t, csak lankacidin A-t. Az elegyet ezután további 1 órán keresztül keverjük, majd az etil-acetátos fázist elválasztjuk, rotációs bepárlón 5 1-re töményítjük (belső hőmérséklet 30 °C) A koncentrátumot 10 kg, toluollal ekvilibrált szilikagélen (0,05-0,2 mm; Merck Co., Amerikai Egyesült Államok) adszorpciós kromatográfiás módszerrel tisztítjuk. Az oszlopot 30 1 toluollal, majd 120 1 toluol-etil-acetát (8:2) eleggyel eluáljuk. Minden egyes eluátumból 1 1-es alikvotokat gyűjtünk, a biológiailag hatásoe frakciókat rotációs bepárlón bepároljuk (belső hőmérséklet 30 eC), kristályos maradékot kapunk. A kristályokat megszárítva 80,0 g kristályos lankacidin A-t kapunk.
6. példa vegyes% glükózt, 1 vegyes% Proflo-t, 3,5 vegyes% kukoricalekvárt, 0,02 vegyes% magnézium-szulfátot, 0,1 vegyes% dikálium-hidrogón-foBzfátot és 1,5 vegyeeX kalcium-karbonátot tartalmazó táptalajhoz 20 vegyes%-oe vizes nátrium-hidroxid-oldatot csepegtetve a táptalaj pH-ját 6,5-re állítjuk. 25 ml fenti táptalajt 200 ml-es Brlenmeyer-lombikba mérünk, vattával lezárjuk és sterilezzük. A táptalajt egy kacs ferde agaron tenyésztett Streptomyces violaceoniger (IFO-14 166) tenyészettel beoltjuk ós 28 ’C-on 200 fordulat/perc sebességű rotációs rázógépen 24 órán keresztül rázatjuk. Az így kapott tenyészetet inokulumként használjuk.
vegyee% glicerint, 2 vegyes% Proflo-t, 0,5 vegyesX kukoricalekvárt, 1 vegyes% Polypeptont, 0,1 vegyee% vas-azulfátot, 0,0025 vegyes% réz-szulfátot és 0,5 vegyes% nátrium-kloridot tartalmazó táptalajhoz az 5. táblázatban feltüntetett mennyiségben 3-ciklodextrint adunk. A táptalaj pH-ját 6,5-re állítjuk, cseppenként adagolt 20 vegyes%-os vizes nátrium-hidroxid-oldattal. 25 ml fenti táptalajt 200 ml-es Erlenmeyer-lombikba viszünk, majd 120 ’C-on 20 percen át sterilezzük. A táptalajt 1 ml inokulummal beoltjuk, majd 24 ’C-on 200 fordulat/perc sebességű rotációs rázógépen 96 órán keresztül rázatjuk. A táptalajban felhalmozódott lankacidinek mennyiségét az 1. példában ismertetett módszerrel határozzuk meg. Az eredményeket az 5. táblázatban közöljük.
5. táblázat
Táptalaj- Lankacidin C Lankacidinol hoz adott (mmól/1) (mmól/1) β-ciklodextrin koncentrációja (mmól/1)
| 0 | 0.40 | 0.06 |
| 2.25 | 2.55 | 0.78 |
| 4.5 | 3.76 | 0.80 |
| 9 | 4.60 | 1.25 |
| 13.5 | 4.04 | 2.33 |
| 18 | 4.01 | 2.66 |
7. példa ml 6. példa szerinti, 9 mmól/1 jj-ciklodextrint tartalmazó tenyészetet (lásd 5. táblázat) szobahőmérsékleten 2000 fordulat/perc sebességgel centrifugálunk. 6 ml felülúszót 100 ml-es, dugós Erlenmeyerlombikba viszünk, és 6 ml etil-acetátot adunk hozzá. Az elegyet 18 ’C-on 30 percen keresztül 200 fordulat/perc sebességgel keverjük, az acetilezés elősegítése céljából. Az etil-acetátos fázist 50 ml-es választótölcsérben elválasztjuk, majd meghatározzuk a lankacidinek mennyiségét-az 1. pélában leirt módszerrel. Az eredmények a
6. táblázatban láthatók.
6. táblázat
Lankacidinek Keakciótermék koncentrációja (mmól/1)
Lankacidin A 4.55
Lankacidinol A 1.21
8. példa
A tenyésztést 0 6. példában leírtak szerint végezzük, azzal az eltéréssel, hogy a Streptomyces violaceoniger (IFO-14 166) helyett Streptomyces sp. 6642-GCi-et (1F0-14 172) használunk. A táptalajban felhalmozódott lankacidinek mennyiségét az 1. példában leírtakkal azonos módon határozzuk meg. Az eredményeket a 7. táblázatban foglaljuk össze.
-613
7. táblázat
| 3-ciklodextrin koncentrációja α táptalajban (mmól/1) | Lankacidin C (mmól/1) | Lankacidinol (mmól/1) 5 |
| 0 | 0.39 | 0.037 |
| 2.25 | 0.68 | 0.101 10 |
| 4.5 | 0.79 | 0.135 |
| 9 | 0.59 | 0.060 |
| 13.5 | 0.54 | 0.051 |
| 18 | 0.54 | 0.050 |
-ciklodextrint tartalmazó táptalajban nyert tenyészetet (lásd 7. táblázat) a 7. példában leírt módon acilezünk. Az eredményeket a 8. táblázatban adjuk meg.
8. táblázat
Lankacidinek Reakciótermek koncentrációja (mmól/1)
Lankacidin A 0.75
Lanakcidinol A 0.138
9. példa ml 8. példa szerinti, 4,5 mmól/1 3- 20
Az 1-9. példák szerint előállított lankacidinek fizikai állandóit a 9. táblázatban foglaljuk össze.
9. táblázat: Lankacidinek fizikai állandói
| Vegyület | Megjelenés | Olvadáspont | [<£]» (°) | Összegképlet UV- | |
| -spektrum | |||||
| (példa száma) | (kristályosításra | <°C) | (c=0.5, | etanol | |
| (nm), (c) | |||||
| használt oldószer) | (bomlással) | etanol) | λ·« | ||
| Lankacidin A | lemezes kristály | 207-210 | -235 | ChHssNOs | 228 (46 900) |
| (1, 3, 4, 7, 9) | (dietil-éter) | ||||
| Lankacidin C | tűs kristály | 201-203 | -240 | CísHaaNO? | 227 (46 700) |
| (1, 3, 4, 6, 8) | (etil-acetát- -dietil-éter) | ||||
| Lankacidinol A | tűs kristály | 190-191 | -226 | CnHasNOs | 229 (48 000) |
| (2, 7, 9) | (metanol-etil- -acetát) | ||||
| Lankacidinol | tűs kristály | 178-179 | -210» | CjsHasNOi | 228 (48 400) |
| (2, 6, 8) | (metanol) | ||||
| Lankaciklinol A | tűs kristály | 228-230 | -320» | ΟιβΗϊΐΝΟβ | 227 (68 300) |
| (2) | (aceton) | ||||
| »: etanol helyett dimetil-formamidban | mérve | ||||
| (ok) | fermentálásával és kívánt | esetben az | |||
| egyes lankacidinek | izolálásával, | azzal jelle- |
SZABADALMI IGÉNYPONTOK
Claims (6)
1. Eljárás az (I) és (IX) általános képletű lankacidin-antibiotikumok - a képletekben R1 jelentése oxigénatom vagy (a) képletű csoport,
R3 jelentése hidrogénatom vagy acetilcsoport 60 és
R3 jelentése acetilcsoport - vagy azok elegyeinek előállítására, a Streptomyces nemzetségbe tartozó, lankacidin-termeló mikroorganizmus- 65 mezve, hogy a mikroorganizmust ciklodextrint tartalmazó táptalajon tenyésztjük.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a ciklodextrint a táptalaj mikroorganizmussal -történő beoltása előtt adjuk a táptalajhoz, 1-150 mmól/1 koncentrációban.
3. Az 1. igénypont ezerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy mikroorganizmusként Streptomyces rochei subsp volubilis (ATCC-21 250), Streptomyces griseofuscust (ATCC-23 916), Streptomyces violaceonigert (IFO-7i
15 192960 16
-14 166) vagy Streptomyces ap. 6642-GCi-et (IFO-14 172) használunk.
4. Eljárás az (I) általános képletű lankacidin-antibiotikumok - a képletben Rl jelentése oxigénatom vagy (a) képletű csoport és
RJ jelentése acetilCBoport -, vagy a fenti vegyületekben feldúsult elegyek előállítására, a Streptomyces nemzetségbe tartozó, lankacidin-termelő mikroorganizmus(ok) fermentálásával és kívánt esetben az egyes lankacidinek izolálásával, azzal jellemezve, hogy a mikroorganizmust ciklodextrint tartalmazó táptalajon tenyésztjük, majd a tenyészethez vagy annak szűrletéhez egy 1-4 szénatomos alkohollal, glikollal vagy glicerinnel alkotott eceteavésztert adunk.
5. A 4. igénypont szerinti eljárás 146 -acetil-lankacidin C, vagy 14-acetil-lankacidin C-ben feldúsult elegy előállítására, azzal jellemezve, hogy eceteavészterként etil-acetátot használunk.
6. Az 5. igénypont szerinti eljárás, azzal 10 jellemezve, hogy mikroorganizmusként Streptomyces rochei subsp. volubilist (ATCC-21 250) használunk.
1 lap rajz
A kiadásért felel a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója
88.568.66-4 Alföldi Nyomda Debrecen - Felelóe vezető: Benkő István vezérigazgató
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57061342A JPS58179496A (ja) | 1982-04-12 | 1982-04-12 | ランカシジンの改良製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU192960B true HU192960B (en) | 1987-08-28 |
Family
ID=13168356
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU831253A HU192960B (en) | 1982-04-12 | 1983-04-11 | Process for the imcrease of lankacidine production |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4480033A (hu) |
| EP (1) | EP0091781B1 (hu) |
| JP (1) | JPS58179496A (hu) |
| KR (1) | KR920009510B1 (hu) |
| CA (1) | CA1190165A (hu) |
| DE (1) | DE3367618D1 (hu) |
| DK (1) | DK160510C (hu) |
| ES (1) | ES8502159A1 (hu) |
| HU (1) | HU192960B (hu) |
| SG (1) | SG86088G (hu) |
| ZA (1) | ZA832470B (hu) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61271986A (ja) * | 1985-05-27 | 1986-12-02 | Agency Of Ind Science & Technol | リンパ系細胞用培地 |
| US4914206A (en) * | 1985-10-06 | 1990-04-03 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Lankacidin derivatives and production thereof |
| EP0226896B1 (en) * | 1985-12-05 | 1993-09-15 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Lankacidin derivatives and production thereof |
| HU202283B (en) * | 1986-11-28 | 1991-02-28 | Takeda Chemical Industries Ltd | Process for producing carboxylic acid esters by enzymatic reaction |
| US5436140A (en) * | 1988-02-02 | 1995-07-25 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Process for producing WS-9326A and WS-9326B |
| US5217952A (en) * | 1988-02-02 | 1993-06-08 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Peptides WS-9326a and WS-9326b, derivatives thereof and uses thereof |
| US6683100B2 (en) | 1999-01-19 | 2004-01-27 | Novartis Ag | Organic compounds |
| US6194181B1 (en) | 1998-02-19 | 2001-02-27 | Novartis Ag | Fermentative preparation process for and crystal forms of cytostatics |
| CN101497595A (zh) | 2004-01-29 | 2009-08-05 | 卫材R&D管理有限公司 | 大环内酯类化合物的稳定化方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3188272A (en) * | 1954-11-29 | 1965-06-08 | Univ Illinois | Antibiotic filipin |
| DK117626C (da) * | 1967-05-18 | 1970-10-19 | Takeda Chemical Industries Ltd | Fremgangsmåde til fremstilling af det antibiotiske stof T-2636 eller dets komponenter. |
| JPS4810442B1 (hu) * | 1968-10-26 | 1973-04-03 |
-
1982
- 1982-04-12 JP JP57061342A patent/JPS58179496A/ja active Granted
-
1983
- 1983-04-05 CA CA000425213A patent/CA1190165A/en not_active Expired
- 1983-04-06 US US06/482,552 patent/US4480033A/en not_active Expired - Lifetime
- 1983-04-06 EP EP83301940A patent/EP0091781B1/en not_active Expired
- 1983-04-06 DE DE8383301940T patent/DE3367618D1/de not_active Expired
- 1983-04-08 ZA ZA832470A patent/ZA832470B/xx unknown
- 1983-04-11 KR KR1019830001508A patent/KR920009510B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1983-04-11 ES ES521361A patent/ES8502159A1/es not_active Expired
- 1983-04-11 DK DK158983A patent/DK160510C/da not_active IP Right Cessation
- 1983-04-11 HU HU831253A patent/HU192960B/hu unknown
-
1988
- 1988-12-06 SG SG860/88A patent/SG86088G/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK158983A (da) | 1983-10-13 |
| JPS6314950B2 (hu) | 1988-04-02 |
| DK160510C (da) | 1991-08-26 |
| KR840004442A (ko) | 1984-10-15 |
| DK158983D0 (da) | 1983-04-11 |
| DE3367618D1 (en) | 1987-01-02 |
| ES521361A0 (es) | 1984-12-16 |
| DK160510B (da) | 1991-03-18 |
| ZA832470B (en) | 1983-12-28 |
| SG86088G (en) | 1989-06-16 |
| US4480033A (en) | 1984-10-30 |
| ES8502159A1 (es) | 1984-12-16 |
| EP0091781A1 (en) | 1983-10-19 |
| EP0091781B1 (en) | 1986-11-12 |
| JPS58179496A (ja) | 1983-10-20 |
| CA1190165A (en) | 1985-07-09 |
| KR920009510B1 (ko) | 1992-10-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU192960B (en) | Process for the imcrease of lankacidine production | |
| JPS6316120B2 (hu) | ||
| JPH0428710B2 (hu) | ||
| US4009262A (en) | Antibiotic a-28086 recovery process | |
| US4366247A (en) | Process for preparing tylactone | |
| US4247542A (en) | A-40104 Antibiotics and process for production thereof | |
| US3975235A (en) | Process for the production of cephamycin type antibiotic substances | |
| US4362881A (en) | Tylactone | |
| US4129721A (en) | A-40104 antibiotics and process for production thereof | |
| JPH0120153B2 (hu) | ||
| US4353986A (en) | Process for producing antibiotic nanaomycin E | |
| Mukherjee et al. | Penicillins and related antibiotics | |
| JPH0434555B2 (hu) | ||
| US3986928A (en) | Antibiotic a-32390 and process for preparation thereof | |
| US5965407A (en) | Anthracycline compound 0624 | |
| JP2716728B2 (ja) | 新規微生物並びに９−ケト型１６員環マクロライド抗生物質の製法 | |
| US3979433A (en) | 1,6-Di-O-(2-isocyano-3-methylcrotonyl)-D-mannitol compounds | |
| US3692633A (en) | Process for preparing 6-chloro-2-quinoxalinecarboxylic acid-1,4-dioxide | |
| US3251867A (en) | 11alpha-hydroxylation of funtumine and derivatives thereof | |
| JPS6338038B2 (hu) | ||
| JPS5914035B2 (ja) | 新規抗生物質ナナオマイシンｄおよびその製造方法 | |
| JPS5932120B2 (ja) | ９−β−Ｄアラビノフラノシル・アデニンの製造法 | |
| JPS6219156B2 (hu) | ||
| JPH0462317B2 (hu) | ||
| JPH08208644A (ja) | 新規抗生物質クレミマイシンとその製造法及び用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HU90 | Patent valid on 900628 | ||
| HPC4 | Succession in title of patentee |
Owner name: TAKEDA SCHERING-PLOUGH ANIMAL HEALTH K.K., JP |