HRP930658A2 - Improved vaccine compositions - Google Patents

Improved vaccine compositions Download PDF

Info

Publication number
HRP930658A2
HRP930658A2 HRP-796/91A HRP930658A HRP930658A2 HR P930658 A2 HRP930658 A2 HR P930658A2 HR P930658 A HRP930658 A HR P930658A HR P930658 A2 HRP930658 A2 HR P930658A2
Authority
HR
Croatia
Prior art keywords
preparation according
amino acid
polypeptide
virus
group
Prior art date
Application number
HRP-796/91A
Other languages
English (en)
Inventor
Christopher L Penny
Original Assignee
Christopher L. Penny
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Christopher L. Penny filed Critical Christopher L. Penny
Publication of HRP930658A2 publication Critical patent/HRP930658A2/hr

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511Organic adjuvants
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2730/00Reverse transcribing DNA viruses
    • C12N2730/00011Details
    • C12N2730/10011Hepadnaviridae
    • C12N2730/10111Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
    • C12N2730/10122New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011Details
    • C12N2740/10011Retroviridae
    • C12N2740/16011Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16211Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV gagpol
    • C12N2740/16222New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02ATECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Diaphragms For Electromechanical Transducers (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Oscillators With Electromechanical Resonators (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Područje tehnike
Izum je iz područja imunokemije i odnosi se na preparate za cijepljenje.
Tehnički problem
Tehnički problem koji je riješen sadašnjim izumom jesu preparati za cijepljenje koji imaju poboljšanu imunogenost. Točnije, preparati iz izuma obuhvaćaju poli-peptidni imunogen u kombinaciji s dugolančanim alkilnim spojem koji funkcionira kao imunododatak.
Stanje tehnike
Dobro je poznato da su cjepiva važna u profilaksi bolesti. Cjepiva djeluju izlaganjem životinje pacijenta stranom materijalu koji je namijenjen da aktivira imuni sistem tako da poslije životinji-pacijentu daje imunitet protiv materijala bez izlaganja pacijenta riziku od bolesti. Trenutačno je za komercijalnu primjenu razvijeno oko 20 cjepiva. Najveći broj tih cjepiva načinjen je detoksifikacijom organizma koji je uzročnik bolesti, ili dijela tog organizma, pomoću jednog od postupaka kao što su, primjerice, izoliranje specifičnog netoksičnog dijela organizma ili tretiranje toksičnog dijela organizma kemikalijama, zagrijavanje ili genetsko slabljenje. Postupak detoksifikacije često producira heterogene produkte koji su kontaminirani toksičnim nusproduktima neodređenog sastava. Zbog toga djelo-tvornostr nečistih detoksificiranih cjepiva kao imunogenih materijala može biti oštećena. Nadalje, mogu nastati neugodni i ponekad permanentno štetni sporedni efekti. Dobro poznati primjer je primjena netaknutih bakterija B. pertussis kao osnova za cjepivo za dječji veliki kašalj. Cjepivo koje se trenutačno koristi u SAD je suštinski ista verzija koja je uvedena 1940. godine. Sporedni efekti variraju od minornih reakcija do objavljenih slučajeva paralize, permanentnog oštećenja mozga i čak smrti.
Napredak rekombinantnih i drugih duboko znanstvenih kemijskih tehnologija olakšao je razvoj čistijih, pa time i sigurnijih cjepiva. Međutim, zbog ove poboljšane čistoće, koja često znači da se prirodni imunostimulanti moraju odvojiti, nova cjepiva su često slaba, ili slabo imunogena, naročito kada se usporede s njihovim prethodnicima. U cilju nadoknađivanja ovog efekta, za ispoljavanje pojačane produkcije antijela, zajedno s cjepivima koriste se imunododaci.
Trenutačno se samo soli aluminija i kalcija koriste kao dodaci za komercijalna cjepiva. Međutim, soli aluminija i kalcija nisu snažni imunododaci. Nađeno je da soli kalcija imaju samo ograničenu primjenu, a soli aluminija mogu izazvati prolazne ili kronične lokalne granulome na mjestu infekcije. L.H. Collier u Lancet na str. 1364-1367 (1970), navodi da učestanost i jačina reakcija na cjepivo za tetanusni toksoid zavisi od čistoće antigena kao i od prisutnosti aluminijeva dodatka. Pravljenje aluminijevih dodataka nije uvijek reproduktivno. Dalje, sam aluminij može stimulirati produkciju IgE antitijela koja su odgovorna za posredovanje trenutnih hipersenzitivnih reakcija. Ovo je opisano u T. Mathuhasi et al, J. Infectious Disease, 146, 290 (1982).
Posljednjih godina pozornost je usmjerena korištenju organskih spojeva kao dodataka. Samo nekoliko organskih spojeva funkcionira na sličan način s komercijalno dostupnim anorganskim solima, tj. kao nosač s laganim oslobađanjem ili depo-antigen (cjepivo) pri čemu se antigen oslobađa u toku relativno dugog vremenskog perioda na mjestu injekcije. Primjeri takvih organskih spojeva su organski surfaktanti kao što su Pluronics i Tetronics koji su neionski blok kopolimeri polioksietilena i polioksipropilena koje proizvodi BASF Corporation. Takav mehanizam laganog oslobađanja dopunskog efekta bio je dugo prihvaćen za humanu primjenu pošto se smanjuje mogućnost za pretjeranu stimulaciju imunog sistema. Pretjerana stimulacija imunog sistema može dovesti do autoimune reakcije kao što će se javiti korištenjem nekog snažnog imunostimulanta, na primjer, Freundovog dodatka. Tako je mehanizam s laganim oslobađanjem poželjni mehanizam.
Mada je pokazano da su organski dodaci većinom snažni imunostimulanti, takvi visokoaktivni dodaci teže biti toksični i stoga su neprihvatljivi za humanu primjenu. Primjeri poznatih organskih dodataka su Freundov kompletan dodatak i muramil dipeptid koji su snažni imunostimulanti, ali oba ova spoja imaju ograničenu primjenu u istraživanju na životinjama zbog razmatranja toksičnosti. Mnogi organski dodaci koji imitiraju aluminijske soli su toksičniji od aluminijskih soli na primjer, za dugolančane alkilamine koje je opisao D. Gali u Imunology, 11, 369-386, 1966, navodi se da su toksični spojevi koji uglavnom remete strukturu ćelijskih membrana.
Poznato je da će heterogeni antigeni velike molekulske mase različitog sastava stvarati komplekse s netopljivim organskim molekulama, pri čemu ove posljednje funkcioniraju kao dodaci. Ovo je fenomen nespecifičnog vezanja po tome što će se on, ako je antigeni materijal velik i dovoljno različit, vezati za ma koju netopljivu organsku molekulu, bez obzira na naboj i polarnost. Kompleksnost između organskog dodatka i biomolekula javlja se preko raznih slabih, nekovalentnih sila, kao što su hidrofobne interakcije i vodikova veza.
Ova fenomen se vidi u U.S. patentu 4 428 932 od Overella i U.S. patentu 4 258 0294 od Moloneva i suradnika. Overell opisuje da alkiltirozin funkcionira kao dodatak za terapiju alergije desenzibilizacijom kada se kompleksira s heterogenim višekomponentnim alergenima velike molekulske mase, kao što je ekstrakt raži, trave i polena. Moloney et al govore o korištenju estera aminokiselina i dugo-lančanih alkohola kao dodataka, kada se kompleksiraju s višekomponentnim tetanusnim toksoidom velike molekulske mase i poliomielitis virusom tipa I, II i III.
Tako postoji potreba da se razviju netoksični preparati tipa cjepivo-dodatak koji imaju poboljšanu imunogenost i u kojima su imunogen i dodatak netoksični.
Opis rješenja tehničkog problema s primjerima izvođenja
Predmetni izum odnosi se na poboljšane preparate za cijepljenje koji obuhvaćaju neki homogeni imunogeni polipeptid i netoksičan dugolančani alki! dodatak. Tako je, prema jednom aspektu sadašnjeg izuma, osiguran preparat za cijepljenje koji obuhvaća homogeni imunogeni polipeptid i neki dodatak koji je dugolančani alkilni spoj koji se nalazi u djelotvornoj količini za pojačavanje imunogenosti polipeptida.
Prema drugom aspektu izuma, osiguran je postupak za izražavanje imune reakcije koji obuhvaća aplikaciju toplokrvnoj životinji, uključujući čovjeka, djelotvorne količine preparata za cijepljenje, ovog izuma.
Neočekivano je nađeno da, prema ovom izumu, netoksični pozitivno nabijeni dugo-lančani alkilni spojevi, naročito esteri aminokiselina ili peptida, mogu vezati homogene polipeptide na selektivan način. Ovo je specifičan fenomen koji zavisi od tipa prisutne aminokiseline u netopljivom esteru kao i od tipa homogenog poli-peptida. Ova neočekivana specifičnost je karakteristika homogenih polipeptida koji se koriste prema ovom izumu, i ne inhibira se pomoću polipeptida slične molekulske mase. Također je prema ovom izumu nađeno da kada se standardni dodatak koji sadrži aluminij zamijeni s netoksičnim dugolančanim alkilnim spojem kao dodattkom, tipično s alkil esterom dugolančane aminokiseline, može se javiti jedan ili više efekata u svezi sa izotipom produciranog antitijela. Ovaj efekt odnosi se na proizvodnju IgE antitijela. Specifično, kada se koriste dodatni preparati dugog alkilnog niza iz izuma, razine IgE antitijela neće se bitno povećati i ostati će suštinski na zapaženim razinama, usporedivši s povećanom IgE razinom kada se koriste dodaci koji sadrže aluminij. IgE antitijela su odgovorna za neposredno posredovanje u reakcijama hiperosjetljivosti. Ima izvještaja o anafilaktičkim reakcijama, pa čak i o smrti, zbog produkcije IgE u reakciji na imunizaciju s cjepivima koja sadrže aluminij. Vidi Matuhasi i suradnici, rad koji je razmotren gore. Tako su zapažene smanjene razine stvaranja IgE s dopunskim dugolančanim alkilnim preparatima iz izuma što je blagotvoran terapeutski efekt.
Drugi efekt je taj da je odnos IgG2a antitijela prema IgG1 viši po tome što su razine oba tipa antitijela povećane kada se koriste dugolančani alkilni dodaci u preparatima iz izuma, nasuprot odnosu koji se zapaža kada se koriste dodaci sa aluminijem. Ovo povećanje odnosa je također blagotvoran efekt pošto je IgG2a antitijelo važno jer je to najdjelotvornije mišje antitijelo glede aktivacije mehanizma komplementa i ćelijske citotoksičnosti zavisne od antitijela i zaštite protiv tumora i parazita.
Pojam "homogen" kako se ovdje koristi za definiranje korištenih polipeptida u preparatima cjepiva iz izuma označava imunogene polipeptidne specije koje suštinski sadrže jedan ili više epitopa patogenog sredstva koji su načinjeni kemijskom sintezom ili biološkom sintezom. U slučaju da je prisutan više nego jedan epitop, tada će homogeni polipeptid obuhvaćati imunodominantan epitop ili epitope. Kemijska sinteza se uglavnom koristi kada je prisutan jedan epitop, dok se u situaciji kada je prisutan više nego jedan epitop može koristiti kemijska ili biološka sinteza. Homogeni polipeptid može obuhvaćati druge dijelove patogenog sredstva koji nisu toksični i koji ne utječu štetno na imunogenost homogenog polipeptida.
Netoksičan dodatak je poželjno pozitivno nabijen ester aminokiseline ili peptida, određeno ester alkilalkohola koji sadrži 14 do 20 atoma ugljika i aminokiseline, dipeptida i tripeptida.
Homogeni imunogeni polipeptid koji se koristi u preparatima iz izuma je netoksičan i može pokazati imunu reakciju u pacijentu. Imunogeni polipeptid se suštinski sastoji od jednog ili više epitopa koji su izvedeni iz patogenih sredstava koja su odgovorna za AIDS, hepatitis A, hepatitits B, hepatitis C, tetanus, polio, pertusis (toksin faktora za promociju limfocitoze (LPF)), herpes simplex, respiratorni sinzitalni virus, boginje, virus influence, bjesnoću, groznicu, rotavirus, adenovirus, rinovirus, bolest stopala i usta, virus volovske i mačje leukemije, virus goveđe kuge, virus denga gripe, encefalitis koji prenosi krpelj, malariju i virus parainfluence.
U mnogim slučajevima, poželjno je da se modificira aminokiselinska sekvenca polipeptidnog imunogena koji se javlja u prirodi, s ciljem da se omogući da homogeni polipeptid bude korisniji u preparatima za cijepljenje, koji ne mijenjaju svoja imunogena svojstva. Primjeri takvih promjena uključuju modifikacije bočnih nizova aminokiselina s ciljem imitiranja posttranslacijskih modifikacija ili za mijenjanje kemijskih osobina imunogena. Moguće su također modifikacije polipeptida s ciljem poboljšanja vremena trajanja imunogena in vivo. Dalje, moguće je dodavanje ostatka cisterna na amino ili karbonilnom terminusu polipeptida s ciljem olakšavanja vezanja (kupliranja) polipeptida za noseći protein.
Ove promjene ili modifikacije mogu biti ubacivanja, izostavljanja i supstitucije, konzervativne ili nekonzervativne. Takve promjene uključuju kombinacije aminokiselina koje se javljaju u prirodi i koje se koriste u sintezi proteina, kao što je gly, ala; val, ile, leu; asp, glu; asn, gln; ser, thr; lys, arg; phe, tyr; ala, ser; ala, thr; ala, val; ala, pro; ala, glu; leu, glu, gln, gly, phe; ile, ser; i ile, met.
Imunogeni homogeni polipeptid može se proizvesti ma kojim pogodnim postupkom, tako se polipeptid može proizvesti rekombinantnim ili sintetskim tehnikama, ili njihovim kombinacijama. Poznate rekombinantne tehnike opisane su u Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratorv, Cold Spring Harbor, New York (1982), T. Maniatis et al. Na primjer, stanica se može planirati sa više nego što izrazi željeni polipeptid putem transfekcije s genom koji kodira za taj polipeptid.
Pogodni postupci za kemijsku sintezu uključuju sintezu peptida u krutoj ili u tekućoj fazi. Pogodni postupci opisani su u Principles of Peptide Synthesis, Springer Verlag, 1984, M. Bodanszkv; Solid Phase Peptide Synthesis, second edition, 1984, Pierce Chemical Companv, John Moeeow Stuart and Janis Dillaha Young.
Polipeptidi mogu biti poznatim tehnikama ili zatupljeni, izduženi ili na drugi način modificirani. Dalje, polipeptid može biti linearan ili cikličan.
Pročišćavanje imunogenog polipeptida može se vršiti korištenjem ma koje obično korištene tehnike. Može se koristiti ma koji kemijski ili biosintetski postupak koji razara ili odvaja druge biomolekule i neželjeni materijal, a ostavlja nedirnut željeni imunogeni polipeptid. Poželjno se imunogeni polipeptid pročišćava kromatografskim tehnikama. Određeno, mogu se koristiti takve kromatografske tehnike kao što su kromatografija s isključivanjem mase, ionska izmjena, afinitetna kromatografija ili, najpoželjnije, tekuća kromatografija visokih svojstava (HPLC). Čistoća imunogenog polipeptida može se verificirati gel-elektroforezom.
Imunogeni polipeptid treba biti dovoljne veličine da ga pacijent može prepoznati i identificirati kao stranca. Imunogen obično ima molekularnu masu najmanje 10 000 daltona. Ako je polipeptid ispod kritične veličine koju će određeni pacijent prepoznati, polipeptid se mora vezati (kuplirati) za neki nosač što će učiniti konjugat polipeptid-nosač imunogenim. Poželjno nosači su proteini. Poželjni nosači sa korištenje na životinjama su albumin volovskog seruma i kevhole Limpet hemocijanin (KLD). Nosači koji su pogodni za humanu upotrebu uključuju tetanusni toksoid, toksoid difterije, nestanično pertusis cjepivo (LPF), materijale za ukrštenu reakciju (CRM materijali) koji su antigeno slični s bakterijskim toksinima ali su netoksični na osnovu mutacije, poželjno CRM197, koji je dobiven prema Pappenheimer et al, An Immunological Study of the Diphteria Toxin Molecule, Immunochemistrv 9, 891-906 (1927), i drugi bakterijski proteinski nosači, na primjer meningokokni protein vanjske membrane. Poželjno je da je sam proteinski nosač imunogen.
Polipeptid se može vezati (kuplirati) za nosač ma kojim konvencionalnim postupkom poznatim iz tehnike. Mada je korištenje simetričnih linkera (vezivnih elemenata) kao što su neki alkil aldehidi (npr. glutaraldehid) ili neki alkil diimidat (npr. dimetilsuberimidat) unutar obima izuma, poželjno je da se koristi heterobifunkcionalni linker. Posljednji osigurava da se veza polipeptida s nosačem javlja na definiran i reproduktivan način, izbjegavanjem takvih sporednih reakcija kao što je umrežavanje nosećih molekula, što bi vodilo do nežistih heterogenih preparata. Primjeri poželjnih heterobifunkcionalnih linkera uključuju N-sukcinimidil-3-(2-piuridilditio)propionat kao što je opisano u J. Carlsson et al, Biochem. J. 173, 733-737 (1978), i sulfosukcinimidil-4-(p-maleimidofenil)butirat, kao što je opisano u J.D. Bangs et al, /. Cell. Biology 103, 255-263 (1966). Najpoželjniji je sulfo-sukcinimidil-4-(N-maleimidometil)cikloheksan-l-karboksilat, kao što je opisano u S. Hashida et al, J. Applied Biochem. 6, 56-63 (1984).
Primjeri pogodnih homogenih polipeptida su oni koji suštinski sadrže istu aminokiselinsku sekvencu kao površinski antigen hepatitis virusa, kao što je homogeni polipeptid koji suštinski sadrži istu aminokiselinsku sekvencu kao površinski antigen hepatitisa B. Drugi primjer je homogeni polipeptid koji sadrži jedan ili više epitopa površinskog antigena hepatitisa. Dalji primjeri su homogeni polipetid koji suštinski sadrži istu aminokiselinsku sekvencu kao površinski antigen gD podjedinice herpes simplex virusa, homogeni polipeptid koji suštinski sadrži jedan ili više epitopa gp41 humanog virusa imunodeficijencije ili homogeni polipeptid koji suštinski sadrži istu aminokiselinsku sekvencu kao faktor za promociju limfocitoze (LPF).
Alkil dugolančani dodatak, kao i ma koji spojevi koji proizlaze iz njegova metabolizma u pacijentu, trebaju biti netoksični. Dobro je poznato da su masni dugolančani alkoholi prirodne netoksične tvari. Kao jedan primjer, nađeno je da je oktadekanol posve netoksičan na ljudima, kao što je naznačeno s oralnom LD50vrijednošću koja je veća od 15 g/kg kao što se nalazi u Gosselin "Clinical Toxicology of Commercial Products", Fourth Edition, 1976. Nađeno je da je oktadeciltirozin netoksičan na životinjama i glavni dio prirodnih aminokiselina je netoksičan: CL. Pennev et al, Vaccine 4, 99-100 (1986). Zato treba očekivati da oktadecil-tirozin i esteri drugih alkohola i aminokiselina neće ispoljavati nikakvu toksičnost na ljudima.
Dodatak treba biti sposoban stvarati mikrodijelove veličine između oko 150 µm-1 mm (poželjno oko 250 µm) u vodenom mediju, tako da se stvara suspenzija jednolike konzistencije. Dalje, mikrodjelići dodatka trebaju omogućiti adsorpciju imunogena, tako da se omogućuje polagano oslobađanje imunogena u pacijenta.
U poželjnoj realizaciji sadašnjeg izuma je spoj formule:
[image]
u kojoj je C atom vodika, aminokiselinski ostatak ili peptidni ostatak, uključujući ostatake do 10 aminokiselina (tj. do dekapeptida); D je atom vodika ili takva farmaceutski prihvatljiva kiselina kao što je klorovodična, bromovodična, fosforna, sumporna, vinska, mliječna ili octena kiselina; E je 4-hidroksibenzil, benzil, 4-hidroksifenil, fenil, 4-aminobutil, izopropil, metil, vodik ili drugi ostatak aminokiseline koja se javlja u prirodi; A je (CH2)n, kisik ili CH2O i B je (CH2)n ili kisik, gdje je n 0 do 4, ali je A≠B za (CH2)n ili kisik; i R je alkil grupa koja sadrži 12 do 20 atoma ugljika.
Poželjno C može biti ili vodik, neka aminokiselina, neki dipeptid ili neki tripeptid. Ako je C aminokiselina, aminokiselinska sekvenca dodatka mora se izabrati od, na primjer, tirozil-glicina, glicil-glicina, glicil-tirozina ili fenil-alanil-glicina. Ako je C neki dipeptid, aminokiselinska sekvenca dodatka mora se izabrati od, na primjer, tirozil-glicil-glicina ili tirozil-alanil-glicina. Ako je aminokiselinski ostatak kiralni, može se koristiti D-enantiomer, L-enantiomer ili njihove smjese. Naročito je poželjno da dodatak obuhvaća a-aminokiselinu.
Naročito je poželjno za E da je izabran iz grupe koja sadrži 4-hidroksibenzil, benzil, 4-hidroksifenil, fenil i vodik. E je najpoželjnije da bude 4-hidroksibenzil.
Kada je A CH2O i B je (CH2)n spojevi su N-aminoaciletanolamin-O-stearati.
Kada je A CH2O i B je kisik spojevi su karbonati.
Poželjnije je dodatak klorhidrat estera aminokiseline, gdje je C vodik, D je klorovodična kiselina, A je (CH2)n, gdje je n 0-4, i B je kisik.
Najpoželjnije je dodatak oktadecil-tirozin klorhidrat gdje je C vodik, D je klorovodična kiselina, E je 4-hidroksibenzil i R je oktadecil, A je (CH2)n gdje je n nula i B je kisik.
Uglavnom, kada C nije vodik, skelet dodatka obuhvaća suštinski peptidne veze, tj. karboksilat aminokiselinskog ostatka, na način glava-rep. Alternativno, peptidna veza može biti tioamidna.
Dodatak se može načiniti ma kojim pogodnim postupkom, na primjer, aminoesterski dio dodatka može se sintetizirati ma kojim jednim od većeg broja poznatih postupaka kao što je opisano u M. Bodanszkv et al, "Peptide Synthesis" Second Edition, Wiley, New York, 1976, i R.W. Roeske, Petides (N.Y.) 3, 102 (1981). Naročito poželjan postupak je postupak esterifikacije koji je kataliziran sa metansulfonskom kiselinom, koji je opisan u C. Penney et al, J. Organic Chemistiy 50, 1457-1459 (1985).
Kada je dodatak di- ili tripeptid, peptidne veze se mogu stvarati ma kojim od postupaka koji su opisani u "Peptide Synthesis", tekstu koji je spomenut gore. Dalje, peptidne veze se mogu formirati ili prema protokolima u čvrstoj fazi ili u tekućoj fazi. Mnogi protokoli i reagensi postoje koji su korisni za stvaranje amidnih, tioamidnih ili tioesterskih veza.
Za vrijeme spravljanja dodatka, može biti poželjno da se privremeni zaštite reaktivne funkcionalne grupe. Na primjer, amini se mogu zaštititi uretanskim tipovima grupa. Aikoholi sa t-butil ili benzii grupama i kiseiine esterskim grupama. Pogodni uvjeti za zaštitu/uklanjanje zaštite opisani su u "Peptide Synthesis", tekstu koji je gore spomenut.
Dodatak se može pročistiti ma kojim od ranije opisanih tehnika. Poželjna tehnika pročišćavanja je kromatografija na silikagelu, naročito "fleš" (brza) kromatografskja tehnika kao što je opisana u W. Clark Still et al, J. Organic Chemistry 43, 2923-2925 (1978). Međutim, mogu se koristiti drugi kromatografski postupci, uključujući HPLC, za pročišćavanje dodatka. Također se može koristiti kristalizacija za pročišćavanje dodatka. U nekim služajevima nije potrebno pročišćavanje pošto se izravno iz sinteze dobiva produkt analitičke čistoće.
Preparati za cijepljenje iz izuma priređuju se fizičkim miješanjem dodatka sa homogenim imunogenim polipeptidom u odgovarajućim sterilnim uvjetima u skladu s poznatim tehnikama za proizvodnju preparata sa dodatkom. Kao što će biti jasno iz daljnje diskusije, imunogeni polipeptid će se miješati s dodatkom ili samostalno ili zajedno s nekim pogodnim nosačem.
Količine dodatka i homogenog polipeptidnog imunogena, ili samostalnog ili vezanog (kupliranog) za neki nosač, koje su potrebne za izražavanje imune reakcije za ljudima su u međusobnoj svezi, ali su unutar intervala koji se uglavnom koriste u konvencionalnim cjepivima. Na primjer, korištenje povećavajućih količina dodatka može sugerirati da se mogu koristiti smanjujuće količine imunogena, i obrnuto. Poželjna količina dodatka je 0,01 do 5 mg/ml preparata, na primjer, 0,05 mg/ml do 3 mg/ml, poželjno 0,5 do 1,0 mg/ml. Poželjna količina imunogena je između oko 1 do 100 mikrograma/ml, poželjno oko 5 do 40 mikro-grama/ml. Doza će zavisiti od pacijenta koji prima cjepivo i od takvih čimbenika kao što su veličina, težina i starost pacijenta.
Preparati za cijepljenje iz ovog izuma mogu se formulirati korištenjem sličnih tehnika s onima koje se koriste za druge farmaceutske polipeptidne preparate. Tako se dodatak i imunogen mogu pohraniti u liofiliziranom obliku i rekonstruirati u fiziološki prihvatljivom nosaču tako da se stvori prije davanja suspenzija. Alternativno se dodatak i imunogen mogu pohraniti u nosaču. Poželjni nosači su sterilne otopine, određeno, sterilne puferske otopine, kao što je fosfatna puferska slana otopina. Ma koji postupak za kombiniranje dodatka i imunogena u nosaču koji zadržava imunogenost smjese je odgovarajući.
Nosač može sadržavati prezervanse ili druge poznate aditive koji se koriste za poboljšavanje sterilnosti na polici ili djelotvornosti smjese. Pogodni prezervansi uključuju, primjerice, timerosal.
Volumen jedne doze cjepiva iz ovog izuma može varirati ali će uglavnom biti unutar intervala koji se obično koriste u konvencionalnim cjepivima. Volumen jedne doze je poželjno između oko 0,2 ml i oko 0,5 ml pri koncentracijama imunogena i dodatka koje su gore naznačene.
Preparati za cijepljenje iz izuma mogu se davati ma kojim pogodnim sredstvima. Poželjni postupci za davanje uključuju potkožno, intramuskularno, intradermalno ili nazalno davanje. Alternativno se smjesa može oslobađati iz biodifundirajućeg implanta. Može se koristiti jedno davanje. Alternativno se može izvršiti serija davanja tijekom nekoliko dana ili tjedana.
Primjeri
Sljedeći neograničavajući primjeri ilustriraju izum.
Primjer 1
Ovaj primjer opisuje priređivanje homogenog površinskog antigena hepatitisa B (HBsAg). Rekombinantni HBsAg je izoliran iz humanih 3T3 ćelija koje se inficiraju s površinskim antigenom virusa hepatititisa B koji je osigurala Mount Sinai School of Medicine (Sells et al, Production of Hepatitis B virus particles in HepG2 cells transfected with clones Hepatitits B virus DNA. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, 1005 (1987). Stanice su rasle na RPMI podlozi (Gibco) koja je dopunjena sa 10% FCS (Gibco), 1 mM natrij-piruvata i 0,5% gentamicina. U ovom trenutku, mogu se koristiti postupci pročišćavanja, naime centrifugiranje s gradijentom gustoće ili imunoafinitetna kromatografija. U centrifugiranju s gradijentom gustoće, stanični supernatant se vrti na 2000 rpm 10 minuta da se odvoje ma kakve 3T3 stanice, i tada se antigen pročisti taloženjem uz pomoć polietilenglikola (MW 8000) pri koncentraciji 10% (w/v). Dobivena granula se resuspendira u TNE puferu (10 mM Tris HC1 (pH 8,0), 100 mM NaCl, 1 mM EDTA (pH 8,0)) i vrši se centrifugiranje u gradijentu 20% do 50% (w/v) cezij-klorida u TNE puferu u SW41 polialomernim epruvetama. Gradijenti se centrifugiraju pri 35 000 rpm 60 sati na 4°C. Frakcije se skupe sa dna epruvete i gustoća se odredi korištenjem refraktometra. Frakcije s gustoćom (1,351-1,358) se spoje i dijaliziraju se prema PBS, koncentriraju se i analiziraju za homogenu koncentraciju HBsAg korištenjem Abbot RIA kita, korištenjem pozitivne kontrole kao ekvivalenta za 20 ng/ml antigena.
Postupak imunoafinitetne kromatografije se uglavnom vrši centrifugiranjem staničnog supernatanta pri 2000 rpm tijekom 10 minuta tako da se odvoje ma kakve 3T3 stanice. Anti-HBsAg afinitetna kolona, načinjena kovalentnim vezanjem anti-HBsAg monoklonskog antitijela za bromcijanom aktiviranu Sepharose CL4B se ispere sa PBS. Provjeri se OD280 nm eluenta i treba biti < 0,010 (OD280 nm=optička gustoća (apsorbancija) na 280 nm). Supernatant teče kroz kolonu dva puta da se osigura da se antigen apsorbirao na koloni. Kolona se tada ispere 3 puta da se odvoji ma kakvo nespecifično vezanje proteina za kolonu (provjeriti OD280 nm<0,010), i zatim se eluira sa glicinom/HCl (pH 2,8). Pripremi se 10 epruveta s dovoljno tris pufera (pH 11) u svakoj epruveti za neutralizaciju frakcije od 2 ml glicina/HCl. Deset epruveta se analizira pomoću OD280 nm ili mjerenjem HBsAg pomoću RIA. Frakcije koje sadrže homogeni polipeptid se kombiniraju i dijaliziraju prema PBS. Kolona se ispere 3 puta sa PBS. Kolona se čuva na PBS/natrij-azid.
Primjer 2
Sljedeće poglavlje opisuje opći postupak za kompleksiranje homogenog polipetidnog imunogena sa imunododatkom na bazi dugolančanog alkilestera.
Dugolančani alkilester aminokiseline kao imunododatak (50 mg) stavi se u normalnu posudu od 25 ml ili u Erlenmaverovu tikvicu s polugom za miješanje i zatvori se pamučnim čepom, ili drugim materijalom koji labavo zatvara. Oblik soli imunododatka se sterilizira zagrijavanjem u peći na odgovarajućoj temperaturi, kao što je diktirano točkom taljenja, tijekom 20 sati. U ohlađenu tikvicu se doda slana otopina koja je puferirana fosfatom (25 ml), sterilizirana filtracijom, >50 mM, pH=6-7. Dobivena suspenzija se blago miješa 3-20 sati, čep se zamijeni sa staklenim poklopcem i sve se drži na 4°C dok ne bude potrebno za kompleksiranje.
Za kompleksiranje imunododatka s homogenim polipeptidom. suspenzija se dovede na sobnu temperaturu i potpuno se miješa. Potrebni volumen suspenzije se prenese pipetom širokog otvora u jednaki volumen polipeptidne otopine, tako da je konačna koncentracija imunododatka bila 1 mg/ml. Međutim, volumen razrjeđivanja može se podesiti prema potrebi tako da se dobije ma koja druga željena koncentracija imunododatka. Suspenzija imunododatak-polipeptid se blago miješa preko noći na 4°C. Na kraju reakcije kompleksiranja pusti se da se suspenzija staloži, centrifugira se ako je potrebno, i mjeri se apsorbancija supernatanta na 280 nm da se odredi količina nevezanog polipeptida. Uglavnom, 30%-90% vezanog polipeptida predstavlja dobar kompleks imunododatak-polipeptidni imunogen.
Primjer 3
Ovaj primjer pokazuje sposobnost nekoliko oktadecil aminokiselinskih estera da budu dodatak homogenom polipeptidu koji je kandidat za cjepivo protiv hepatitisa.
BALB/c miševi se imuniziraju sa 50 ng površinskog antigena hepatititsa B u prisutnosti dodatka za miševe nekontrole i u odsutnosti dodatka za kontrolne miševe. Površinski antigen hepatitisa B dobiven je iz 3T3 stanica inficiranih s genom za površinski antigen. 100 µg oktadecil-aminokiseline kompleksira se sa polipeptidom kao što je opisano u primjeru 2. Ova smjesa, ukupnog volumena 0,1 ml, injicira se na dan 1 intramuskularnim putem i miševi se uzorkuju u dane 7, 14, 21, 28, 35, 42 i 61. Miševi se tretiraju s 35 ng polipeptida na dan 21.
Odredi se koncentracija antitijela u serumima pomoću radioimunotesta. Koncentracija antitijela procijenjena je uspoređivanjem sa standardnom krivuljom koja je dobivena korištenjem monoklonskog antitijela. Rezultati su prikazani u tablici 1.
Tablica 1
Reakcija antitijela na površinski antigen hepatitisa B u prisutnostu oktadecil-aminokiseline kao imunododatka
[image] *Koncentracija anti-HBsAg antitijela, ng/ml
Aminokiselinsku sekvencu površinskog antigena hepatitisa B za aminokiseline 1 do 226 (HBsAg-adw (S genski produkt)) opisao je Bhatnagar P.K. et al, Proc. Natl. Acad. Science USA 79, 4400-4404 (1982), i taj rad je ovdje specifično unijet kao referenca.
Rezultati u tablici 1 pokazuju da je zapažen efekt dodatka između dugolančanog alkilestera sa aminokiselinama i imunogenog polipeptida, površinskog antigena hepatitisa B, specifičan fenomen. Ovo se može vidjeti uspoređivanjem oktadecil-tirozina i oktadecil-lizina, i uspoređivanjem oktadecil-forfenicinola i oktadecil-forfe-nicina.
Primjer 4
Ovaj primjer demonstrira sposobnost oktadecil-tirozina da funkcionira kao doza dodatka sa polipeptidom koji je kandidatno cjepivo za hepatitis.
Protokol je opisan gore, osim što su miševi imunizirani sa 80 ng površinskog antigena hepatitisa B, dano im je 50 ng polipeptida i žrtvovani su u dane 7, 14, 28 i 35. Imunizacije se vrše u prisutnosti dodatka za miševe nekontrole i u odsutnosti dodatka za kontrolne miševe. Rezultati su prikazani u tablici 2.
Tablica 2
Reakcija antitijela na površinski antigen hepatitisa B u prisutnosti oktadecil-tirozina
[image] *CPM, vrijednost prije žrtvovanja bila je 11,5
Rezultati u tablici 2 pokazuju da je efekt dodatka zavisan od koncentracije dugolančanog alkilestera, oktadecil-tirozina, prisutnog u preparatu. Kada se aplicirana količina dodatka povećava, javlja se srazmjerno smanjivanje titra antitijela dok se ne dostigne optimalna vrijednost titra, izvan koje se titar antitijela ne povećava.
Primjer 5
Ovaj primjer demonstrira sposobnost oktadecil-tirozina da funkcionira kao doza dodatka, sa polipeptidom koji odgovara fuziogenoj sekvenci iz proteina omotača virusa humane imunodeficijencije, HIV-1.
1) HIV Peptidna sekvenca
Peptidna sekvenca HlV-a bila je kako slijedi.
Produkt: BC-101
303-
H-Val-Ala-Pro-Thr-Lys-Ala-Lys-Arg-Arg-Val-Val-Gln-Arg-GIu-Lys-Arg-Ala-Val-GIy-Ile-Gly-Ala-Leu-Phe-Leu-GIy-Phe-Leu-Gly-Ala-Ala-Gly-Ser 535
Mol. masa 3585,14 (skelet)
2) Eksperimenti s miševima
BALB/c miševi se imuniziraju sa 100 ug kemijski sintetiziranog polipeptida, koji odgovara aminokiselinskoj sekvenci ostataka 503-535 HIV-1, koje je vezana (kuplirana) sa Keyhole Limpet hemocijaninom (KLH). Oktadecil-tirozin klorhidrat, 10-100 µg, kompleksira se sa polipeptidom kao što je opisano u primjeru 2. Ova smjesa, u ukupnom volumenu 0,1 ml, injicira se na dan 1, i opet na dan 21. Miševi se uzorkuju u dane 7, 14, 21, 28 i 35.
Koncentracija antitijela u serumima određena je radioimuno-testom. Koncentracija antitijela procijenjena je uspoređivanjem sa standardnom krivuljom koja je dobivena korištenjem poliklonskog antitijela. Rezultati su prikazani u tablici 3.
Tablica 3
Reakcija antitijela na HIV-1 polipeptid, ostatke 503-535, u prisutnosti oktadecil-tirozina
[image] *Koncentracija antipeptidnog antitijela, ug/ml
Rezultati u tablici 1 pokazuju da dugolančani alkilester, oktadecil-tirozin, pokazuje efekt dodatka, zavisan o koncentraciji, s drugim imunogenim polipeptidom, naime s polipeptidom koji je izveden iz aminokiselina 503 do 535 HIV proteina gp41. Opet, dostiže se optimalni titar antitijela izvan kojega se titar dalje ne povećava.
3) Eksperimenti s babunima
Babuni se imuniziraju sa 300 µg kemijski sintetiziranog polipeptida, koji odgovara aminokiselinskoj sekvenci ostataka 503-535 HIV-1, vezanoj (kupliranoj) na Kevhole Limpet hemocijanin. 500 ug oktadecil-tirozin klorhidrata kompleksira se sa polipeptidom, kao što je opisano u primjeru 2. Ova smjesa u ukupnom volumenu 1,0 ml injicira se na dan 1 i opet na dan 35. Životinje se uzorkuju 3 dana prije prve imunizacije i u dane 14, 32 i 49. Isti eksperiment je proveden s druga dva babuna, ali sa polipeptidom koji odgovara aminokiselinskoj sekvenci 526-535 HIV-1.
Koncentracija antitijela u serumima mjerena je izravno radioimunotestom. Titracija se vrši inkubacijom uzoraka na pločama presvučenim s konjugatom peptid-albumin, i reakcijom sa zečjim antimajmunskim imunoglobulinom koji je obilježen jodom-125. Rezultati su prikazani u tablici 4.
Tablica 4
Reakcija antitijela na HIV-1 polipeptid na babunima u prisutnosti 500 ug oktadecil-tirozin klorhidrata
[image] *CPM poslije povlačenja iz skeleta albumina iz volovskog seruma sa presvučenih ploča.
Rezultati u tablici 4 pokazuju da je zapažen efekt dodatka između dugolančanog alkilestera, oktadecil tirozina i imunogenog HIV polipeptida, na višim životinjama, primjerice babunima.
Primjer 6
Ovaj primjer demonstrira promjenu u izotopu koja se javlja idući od kandidatnog cjepiva koje je dopunjeno spojem aluminija do kandidatnog cjepiva koje je dopunjeno oktadecil-tirozinom.
Protokol je bio kao što je bilo opisano u primjeru 5, poglavlje 2 (miševi), osim što je korišteno 50 µg oktadecil-tirozina i za primarnu i za sekundarnu (dan 21) imunizaciju. Reakcija izotopa antitijela određena je radioimunotestom. Koristi se anti-mišje izotopno antitijelo koje je obilježeno tricijem. Titracija se vrši inkubacijom uzoraka na pločama koje su presvučene površinskim antigenom hepatititsa B koji je pročišćen imunoafinitetnom kromatografijom. Rezultati koji su dani kao radioaktivnost (cpm) vezanog izotopa antitijela, prikazani su u tablici 5.
Tablica 5
Variranje reakcije antitijela površinskog antigena anti-hepatititsa B
[image] Rezultati koji su prikazani u tablici 5 pokazuju da promjena u reakciji na izotop antitijela ide od aluminija do dugolančanog alkilestera (oktadecil-tirozina, OT), kada se koriste kao dodatak za imunogeni polipeptid, površinski antigen hepatitisa B. Određeno, naglašava se da su razine IgE antitijela povišene kada se koristi aluminij, dok nema značajnog povećanja u razinama IgE, u usporedbi- s onima koje se dobivaju s kontrolom, kada se koristi oktadecil-tirozin (OT).

Claims (26)

1. Preparat za cijepljenje, naznačen time, što obuhvaća homogeni imunogen polipeptid i djelotvornu količinu najmanje jednog dodatka formule: [image] u kojoj C se bira iz grupe koju čine vodik, aminokiselinski ostatak i peptidni ostatak; D se bira iz grupe koju čine vodik i farmaceutski prihvatljiva kiselina; E se bira iz grupe koju čine 4-hidroksibenzil, benzil, 4-hidroksifenil, fenil, 4-aminobutil, izopropil, metil, vodik i ostatak prirodno zastupljene kiseline; , A je (CH2)n, kisik ili CH2O i B je (CH2)n ili kisik, gdje je n 0-4, uz ograničenje da A i B nisu isti za (CH2)n i kisik; i R je alkil koji sadrži 12 do 20 atoma ugljika.
2. Preparat prema zahtjevu 1, naznačen time, što spomenuti dodatak obuhvaća amino-kiselinu koja ima L-konfiguraciju.
3. Preparat prema zahtjevu 1, naznačen time, što spomenuti dodatak obuhvaća aminokiselinu koja ima D-konfiguraciju.
4. Preparat prema zahtjevu 1, naznačen time, što spomenuti dodatak obuhvaća amino-kiselinsku smjesu D i L-konfiguracije.
5. Preparat prema zahtjevu 1, naznačen time, što se E bira iz grupe koju čine 4-hidoksibenzil, benzil, 4-hidroksifenil, fenil i vodik.
6. Preparat prema zahtjevu 5, naznačen time, što je E 4-hidroksibenzil.
7. Preparat prema zahtjevu 1, naznačen time, što se C bira iz grupe koju čine vodik, aminokiselina i peptidni ostatak koji uključuje do 10 aminokiselinskih ostataka.
8. Preparat prema zahtjevu 7, naznačen time, što se spomenuti peptidni ostatak bira između dipeptida i tripeptida.
9. Preparat prema zahtjevu 7, naznačen time, što se aminokiselina bira iz grupe koju čine tirozil-glicin, glicil-glicin, glicil-tirozin i fenilalanil-glicin.
10. Preparat prema zahtjevu 8, naznačen time, što je C dipeptid i bira se iz grupe koju čine tirozil-glicilglicin i tirozil-alanilglicin.
11. Preparat prema zahtjevu 1, naznačen time, što se farmaceutski prihvatljiva kiselina bira iz grupe koju čine klorovodična, bromovodična, sumporna, vinska, mliječna i octena kiselina.
12. Preparat prema zahtjevu 1, naznačen time, što spomenuti dodatak obuhvaća a-aminokiselinu.
13. Preparat prema 'zahtjevu 1, naznačen time, što se spomenuti homogeni polipeptid bira iz grupe koja sadrži linearan i ciklički polipeptid.
14. Preparat prema zahtjevu 13, naznačen time, što je spomenuti homogeni polipeptid vezan (kupliran) za biološki nosač.
15. Preparat prema zahtjevu 14, naznačen time, što se spomenuti nosač bira iz grupe koju čine tetanusni toksoid, difterijski toksoid, nećelijsko pertusis cjepivo (LPF), materijal za križnu reakciju (CRM) i bakterijski proteinski nosač.
16. Preparat prema zahtjevu 1, naznačen time, što je spomenuti CRM CRM 197.
17. Preparat prema zahtjevu 1, naznačen time, što se spomenuti homogeni polipeptid sastoji suštinski od jednog ili više epitopa izvedenih iz patogenih sredstava koja su odgovorna za stanje izabrano od sljedećih: AIDS (SIDA), hepatitis A, hepatitis B, hepatitis C, tetanus, polio, pertussis (toksin faktora za promociju limfocitoze), herpes simplex, respiratorni sincitalni virus, boginje, virus inluence, bjesnoća, lasa groznica, rotavirus, adenovirus, rinovirus, bolest stopala i usta, virus volovske i mačje leukemije, virus goveđe kuge, virus denga gripe, encefalitis koji prenose krpelji, malarija i virus parainfluence.
18. Preparat prema zahtjevu 1, naznačen time, što spomenuti homogeni polipeptid ima suštinski istu aminokiselinsku sekvencu kao površinski antigen hepatitis virusa.
19. Preparat prema zahtjevu 1, naznačen time, gdje spomenuti polipeptid obuhvaća jedan ili više epitopa površinskog antigena hepatitis virusa.
20. Preparat prema zahtjevu 1, naznačen time, što spomenuti homogeni polipeptid obuhvaća suštinski istu aminokiselinsku sekvencu kao površinski antigen hepatitisa B.
21. Preparat prema zahtjevu 20, naznačen time, što spomenuti homogeni polipeptid ima suštinski istu aminokiselinsku sekvencu kao površinski antigen podjedinice herpes simplex virusa.
22. Preparat prema zahtjevu 20, naznačen time, što spomenuti homogeni polipeptid obuhvaća jedan ili više epitopa qpl20 virusa humane imunodeficijencije.
23. Postupak za priređivanje preparata za cijepljenje, naznačen time, što spomenuti homogeni polipeptid obuhvaća jedan ili više epitopa qp41 virusa humane imunodeficijencije.
24. Preparat prema zahtjevu 1, naznačen time, što spomenuti homogeni polipeptid ima suštinski isu aminokiselinsku sekvencu kao i faktor za promociju limfocitoze.
25. Preparat prema zahtjevu 1, naznačen time, što je dodatak ester alkil alkohola koji sadrži 14 do 20 atoma ugljika i aminokiseline, dipeptida ili tripeptida.
26. Preparat prema zahtjevu 25, naznačen time, što je spomenuti dodatak oktadecil tirozin.
HRP-796/91A 1990-05-07 1993-04-01 Improved vaccine compositions HRP930658A2 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US51846090A 1990-05-07 1990-05-07
YU79691A YU79691A (sh) 1990-05-07 1991-05-07 Poboljšani preparati vakcine

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HRP930658A2 true HRP930658A2 (en) 1997-12-31

Family

ID=24064028

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HRP-796/91A HRP930658A2 (en) 1990-05-07 1993-04-01 Improved vaccine compositions

Country Status (22)

Country Link
EP (1) EP0597838B1 (hr)
JP (1) JPH05506234A (hr)
CN (1) CN1056816A (hr)
AT (1) ATE173936T1 (hr)
AU (1) AU7777991A (hr)
CA (1) CA2082425A1 (hr)
CS (1) CS131891A3 (hr)
DE (1) DE69130576T2 (hr)
DK (1) DK0597838T3 (hr)
ES (1) ES2124701T3 (hr)
FI (1) FI925032A0 (hr)
HR (1) HRP930658A2 (hr)
HU (1) HUT65493A (hr)
IE (1) IE911527A1 (hr)
IL (1) IL97985A0 (hr)
MX (1) MX172210B (hr)
NO (1) NO924271L (hr)
NZ (1) NZ238042A (hr)
TW (1) TW221676B (hr)
WO (1) WO1991016926A1 (hr)
YU (1) YU79691A (hr)
ZA (1) ZA913214B (hr)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MY111880A (en) * 1992-03-27 2001-02-28 Smithkline Beecham Biologicals S A Hepatitis vaccines containing 3-0 deacylated monophosphoryl lipid a
US6620414B2 (en) 1992-03-27 2003-09-16 Smithkline Beecham Biologicals (S.A.) Hepatitis vaccines containing 3-0-deacylated monophoshoryl lipid A
AU3541495A (en) * 1994-09-01 1996-03-22 Wisconsin Alumni Research Foundation Therapeutic remodeling in aids
FR2726471B1 (fr) * 1994-11-07 1997-01-31 Pf Medicament Procede pour ameliorer l'immunogenicite d'un compose immunogene ou d'un haptene et application a la preparation de vaccins
US6027731A (en) * 1998-11-17 2000-02-22 Wisconsin Alumni Research Foundation Pertussis toxin induced lymphocytosis
JP2003523721A (ja) 1998-12-31 2003-08-12 カイロン コーポレイション 抗原性hivc型ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ポリペプチド、およびそれらの使用
ES2299276T3 (es) 1998-12-31 2008-05-16 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Polipeptidos env del vih modificados.
US7211659B2 (en) 2001-07-05 2007-05-01 Chiron Corporation Polynucleotides encoding antigenic HIV type C polypeptides, polypeptides and uses thereof
US20030170614A1 (en) 2001-08-31 2003-09-11 Megede Jan Zur Polynucleotides encoding antigenic HIV type B polypeptides, polypeptides and uses thereof
JP2006502213A (ja) * 2002-10-10 2006-01-19 イエダ リサーチ アンド デベロップメント カンパニー リミテッド 脂肪族アルコール類の塩基性エステルおよび抗炎症薬または免疫調整薬としての使用

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1138773A (en) * 1979-04-18 1983-01-04 George Wojcik Synthetic adjuvants for stimulation of antigenic responses
US4639371A (en) * 1984-10-02 1987-01-27 New York Blood Center, Inc. Hepatitis B antigenic compositions and vaccines against hepatitis B derived therefrom
GB8807860D0 (en) * 1988-04-05 1988-05-05 Connaught Lab Pertussis vaccine
NZ230424A (en) * 1988-08-25 1992-05-26 Liposome Co Inc Liposomal composition comprising an externally disposed antigen

Also Published As

Publication number Publication date
EP0597838A1 (en) 1994-05-25
HU9203480D0 (en) 1993-01-28
NO924271D0 (no) 1992-11-06
MX172210B (es) 1993-12-07
TW221676B (hr) 1994-03-11
FI925032A (fi) 1992-11-06
IE911527A1 (en) 1991-11-20
DK0597838T3 (da) 1999-08-16
EP0597838B1 (en) 1998-12-02
NZ238042A (en) 1993-12-23
DE69130576D1 (de) 1999-01-14
CN1056816A (zh) 1991-12-11
ZA913214B (en) 1992-09-30
ATE173936T1 (de) 1998-12-15
JPH05506234A (ja) 1993-09-16
NO924271L (no) 1993-01-07
AU7777991A (en) 1991-11-27
WO1991016926A1 (en) 1991-11-14
YU79691A (sh) 1994-06-10
IL97985A0 (en) 1992-06-21
CA2082425A1 (en) 1991-11-08
FI925032A0 (fi) 1992-11-06
ES2124701T3 (es) 1999-02-16
DE69130576T2 (de) 1999-07-29
HUT65493A (en) 1994-06-28
CS131891A3 (en) 1992-02-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA1329766C (en) T cell epitopes of the hepatitis b virus nucleocapsid protein
ES2207177T3 (es) Proteinas nucleo de la hepatitis b estrategicamente modificas y sus derivados.
US5143726A (en) T cell epitopes of the hepatitis B virus nucleocapsid protein
US4818527A (en) T cell epitopes of the hepatitis B virus nucleocapsid protein
AU623106B2 (en) Diagnostic system
US5039522A (en) Immunogens containing peptides with an attached hydrophobic tail for adsorption to hepatitis B virus surface antigen
JPS61501705A (ja) T細胞及びb細胞決定基の両者を含む合成b型肝炎ウイルスワクチン
JPH0674210B2 (ja) 抗原の免疫原性の増強
WO1995031480A1 (en) Heterodimer polypeptide immunogen carrier composition and method
AU2195395A (en) Synthetic peptide based immunogens for the treatment of allergy
Boeckler et al. Design of highly immunogenic liposomal constructs combining structurally independent B cell and T helper cell peptide epitopes
CA2331258A1 (en) Enhancement of b cell activation and immunoglobulin secretion by co-stimulation of receptors for antigen and ebv gp350/220
CZ303217B6 (cs) Zpusob výroby vakcíny proti hepatitide typu B
JP2004189751A (ja) 非細胞性(Acellular)百日咳ワクチン及びその調製方法
HRP930658A2 (en) Improved vaccine compositions
US4584195A (en) Broad spectrum vaccine against gonorrhea
JP4099059B2 (ja) 特定交叉反応性を高める抗原構造を得る方法
US4622223A (en) Broad spectrum vaccine against gonorrhea
Leibl et al. Adjuvant/carrier activity of inactivated tick-borne encephalitis virus
EP0542753A1 (en) Epitopes of the pre-s region of hepatitis b virus surface antigen
Martin Polymerized serum albumin beads for use as slow-release adjuvants
JPH05170797A (ja) 環状hiv主要中和決定基ペプチド
JPH0222300A (ja) 免疫原性接合体およびその製法ならびに免疫を生ぜしめる方法
MXPA00007859A (en) Strategically modified hepatitis b core proteins and their derivatives

Legal Events

Date Code Title Description
A1OB Publication of a patent application
ODBC Application rejected