FR3117869A1 - Extrait de NaDES de rose et composition cosmétique - Google Patents
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Abstract
La présente invention concerne un extrait de rose obtenu par la mise en contact d’un échantillon de rose avec un solvant naturel eutectique profond ou NaDES (« Natural Deep Eutectic Solvent ») liquide à température ambiante, caractérisé en ce que ledit NaDES consiste en un mélange de sucre, de polyol et d’eau dans un ratio molaire allant de 1 :1 :3 à 1 :1 :5, dans lequel l’échantillon de rose est de préférence choisi parmi les fleurs de rose, le bois de rose, les fruits de rose, les bourgeons de rose, les feuilles de rose, les racines de rose, et un mélange quelconque de ceux-ci, de préférence les fleurs de rose. L’invention concerne en outre des compositions comprenant un tel extrait, ainsi que les utilisations cosmétiques d’un tel extrait.
Description
Domaine de l’invention
La présente invention concerne le domaine cosmétique et en particulier un extrait de rose obtenu par la mise en contact d’un échantillon de rose obtenu à l’aide d’un solvant naturel eutectique appelé NaDES (« Natural Deep Eutectic Solvent » ou solvant naturel eutectique profond). La présente invention concerne également des compositions comprenant un tel extrait ainsi que les utilisations d’un tel extrait pour augmenter les pouvoirs de la régénération de la peau et atténuer les réactions de défense naturelles excessives de la peau en favorisant le processus de retour à l’équilibre, notamment pour prévenir et/ou diminuer le vieillissement de la peau et la formation des rides et/ou ridules.
Etat de la Technique
La peau est la première barrière de protection de l'organisme vis-à-vis de l'environnement. Elle est donc soumise à des stress via des facteurs d’origine exogène (ex : rayonnements UV, variations de température, pollution atmosphérique, fumée de cigarette…) ou endogène (ex : hormones…) susceptibles d’induire des signes du vieillissement cutané, que l’on peut respectivement appeler vieillissement extrinsèque et vieillissement intrinsèque (ou physiologique).
Ces facteurs exogènes et/ou endogènes peuvent être une source de stress pour la peau. Ils peuvent conduire à une augmentation de réactions naturelles de défense de la peau qui peuvent être excessives et devenir délétères à long terme si elles ne sont pas contrôlées (notamment en cas d’expositions répétées à ces facteurs). Cette augmentation d’une réaction naturelle de la peau est susceptible de générer, si elle n’est pas résolue dans le temps et d’engendrer un affaiblissement d’autres systèmes de défense des cellules, et avoir pour conséquence l’apparition de rides, un relâchement de la peau, une sécheresse cutanée, un teint terne et inhomogène et/ou la formation d'une peau ayant perdu son éclat, son équilibre, sa fermeté, sa souplesse et son élasticité. Les fonctions barrière/différenciation, d’adhésion/cohésion, d’hydratation et détoxification de la peau peuvent notamment être atténuées. Avec l’âge, l’épiderme, plus fin et plus fragile, est également plus perméable face à ces facteurs qui génèrent un stress de ses cellules et déséquilibrent son état naturel d’homéostasie.
On recherche donc de nouveaux ingrédients anti-âges capables de favoriser un retour à l’homéostasie pour d’atténuer les réactions naturelles excessives de défense de la peau, potentiellement délétères quand elles deviennent chroniques, et ainsi prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané.
Il a été démontré que les médiateurs de la résolution ou SPM (pour « Specialized Proresolving Mediators » ou médiateurs spécialisés de la résolution), tels que les lipoxines et les résolvines, sont essentiels pour que les tissus cutanés reviennent à l'homéostasie après des stress liés à des facteurs d’origine exogène ou endogène (Ryan and Godson, Current Opinion in Pharmaco, 2010 ; Hellmann et al., J Invest Dermatol, 2018 ; Motwani et al., JCI Insight, 2018).
Par ailleurs, les actifs cosmétiques végétaux, tels que les actifs contenus dans les plantes, les herbes aromatiques et les épices, sont généralement présents à de très faibles concentrations dans les plantes et nécessite une étape visant à les extraire de leur matrice végétale. Plusieurs méthodes d’extraction sont utilisées de manière classique, telles que l’extraction par solvant pétrochimique, l’entraînement à la vapeur, l’hydrodiffusion et la macération. Cependant, ces actifs cosmétiques sont pour la plupart thermosensibles et vulnérables aux réactions chimiques. La perte de certains constituants, la dégradation de certains composés insaturés par effet thermique ou par hydrolyse, ainsi que la présence de résidus de solvants organiques et/ou pétrochimique plus ou moins toxiques peuvent être engendrés par ces techniques d’extraction. De plus, ces procédés génèrent des rejets difficilement valorisables ou recyclables, et qui peuvent être nocifs pour l’environnement. Ainsi, ces procédés ne répondent pas aux principes de l’éco-extraction.
Les extraits végétaux peuvent notamment être obtenus à partir de solvants contenant de l’éthanol. Toutefois, l’éthanol est inflammable et nécessite aujourd’hui de travailler en zone « ATEX » (« ATmospheres EXplosives »).
On recherche donc de nouveaux procédés d’obtention des actifs cosmétiques végétaux et de nouveaux extraits végétaux, plus simples et moins risqués pour les manipulateurs et transformateurs, et qui remplissent les grands critères de l’éco-extraction. On recherche notamment de nouveaux solvants d’extraction qui ne contiennent pas d’éthanol.
De manière inattendue, les Inventeurs ont mis au point de nouveaux extraits actifs de rose obtenus sans utiliser de solvants issus de la pétrochimie, par un procédé uniquement basé sur l’éco-extraction. En effet, ces nouveaux éco-extraits de rose sont obtenus par la mise en contact d’un échantillon de rose avec un solvant naturel, le NaDES.
Les Inventeurs ont mis en évidence l’effetin vitrode ces nouveaux extraits de rose (appelés extraits de NaDES de rose) sur la stimulation de la production de SPM par des explants de peau issus de donneurs d’âges différents.
En parallèle, les Inventeurs ont également démontré que de tels extraits de NaDES de rose sont capables d’induire l’expression de différents gènes cibles impliqués notamment dans la fonction barrière, la différenciation, l’adhésion, la cohésion, l’hydratation et la détoxification de la peau.
Ainsi, un tel extrait de NaDES de rose donne à la peau le pouvoir de retourner à l’homéostasie et de se régénérer, et ainsi prévenir et limiter le vieillissement de la peau, en atténuant les réactions naturelles de défense excessives, néfastes à long terme sur l’homéostasie de l’épiderme et sa régénération, et en préservant ses fonctions essentielles de barrière, de cohésion, d’hydratation et de détoxification.
Ainsi, les nouveaux extraits de NaDES mis au point dans le cadre de la présente invention offrent le double avantage d’être des éco-extraits, biodégradables, issus de ressources renouvelables, plus écologiques et plus sûrs que les extraits de plantes obtenus classiquement par pétrochimie, tout en ayant des propriétés cosmétiques anti-âges renforcées.
Dans le cadre de la présente invention, les Inventeurs ont mis au point un nouvel extrait de rose. Les Inventeurs ont ainsi mis en évidence, de manière tout à fait surprenante, qu’un extrait de rose peut être obtenu par éco-extraction, par la mise en contact d’un échantillon de rose avec un solvant naturel eutectique appelé NaDES. Les Inventeurs ont notamment montré qu’en utilisant un NaDES consistant en un mélange de sucre, de polyol et d’eau dans un ratio molaire allant de 1 :1 :3 à 1 :1 :5, on obtient un extrait de rose ayant d’excellentes propriétés anti-âges. Les données montrent que, de manière inattendue, un tel extrait NaDES de rose permet d’augmenter les pouvoirs de régénération de la peau et d’atténuer les réactions de défense naturelles excessives de la peau de manière significative, en agissant notamment sur les médiateurs de la résolution ou SPMLes Inventeurs ont également montré, de manière inattendue, qu’un tel extrait NaDES de rose contribue à l’amélioration de manière significative et efficace des fonctions barrière/différenciation, d’adhésion/cohésion, d’hydratation et détoxification de la peau. De manière particulièrement inattendue, ces effets avantageux sont observés à la fois chez les peaux jeunes et chez les peaux matures.
Ainsi, les données montrent que les extraits NaDES de rose selon l’invention sont particulièrement efficaces pour améliorer la régénération cellulaire de la peau, améliorer la cohésion et/ou la différenciation épidermique, améliorer le renouvellement épidermique, renforcer la fonction barrière cutanée, améliorer l’hydratation de la peau, améliorer le lissage de la peau, améliorer, améliorer l’éclat et/ou l’homogénéité de la peau, renforcer la résistance de la peau aux stress (oxydatif et/ou inflammatoire…), et/ou prévenir et/ou diminuer la formation des rides et/ou ridules.
La présente invention concerne donc un nouvel extrait de rose obtenu par la mise en contact d’un échantillon de rose avec un NaDES liquide à température ambiante, dans lequel le NaDES consiste en un mélange de sucre, de polyol et d’eau dans un ratio molaire allant de 1 :1 :3 à 1 :1 :5. La présente invention concerne en particulier un éco-extrait de NaDES de rose.
La présente invention porte également sur une composition, en particulier une composition cosmétique, comprenant au moins un extrait de rose selon l’invention.
L’invention concerne en outre un procédé cosmétique de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques, en particulier de la peau et/ou des lèvres, comprenant l’application, sur lesdites matières kératiniques, d’au moins une composition cosmétique selon l’invention. Le procédé cosmétique selon l’invention permet notamment d’améliorer la régénération cellulaire, d’améliorer la cohésion et/ou la différenciation épidermique, d’améliorer le renouvellement épidermique, de renforcer la fonction barrière cutanée, d’améliorer l’hydratation, d’améliorer le lissage de la peau, de la peau, d’améliorer l’éclat et/ou l’homogénéité de la peau, de renforcer la résistance de la peau au stress oxydatif, et/ou de prévenir et/ou de diminuer la formation des rides et/ou ridules.
La présente invention porte également sur l’utilisation cosmétique non thérapeutique d’un extrait de rose selon l’invention, comme agent destiné à améliorer la régénération cellulaire, améliorer la cohésion et/ou la différenciation épidermique, améliorer le renouvellement épidermique, renforcer la fonction barrière cutanée, améliorer l’hydratation, améliorer le lissage de la peau, améliorer l’éclat et/ou l’homogénéité de la peau, renforcer la résistance de la peau au stress oxydatif, et/ou prévenir et/ou diminuer la formation des rides et/ou ridules.
Description detaillée de l’invention
Définitions
Par «éco-extrait» ou «extrait vert», on entend un extrait, en particulier un extrait de plante, obtenu par éco-extraction. Par « éco-extraction » on entend un procédé d’extraction, en particulier un procédé d’extraction de plante, utilisant des solvants alternatifs à ceux de la chimie « classique » (tels que des solvants biosourcés et/ou agro-sourcés) et des ressources végétales renouvelables, dont la mise en œuvre nécessite une consommation d’énergie réduite, tout en garantissant un produit/extrait sur et de qualité. L’éco-extraction répond notamment aux six principes suivants, tels que définis en janvier 2010 par plus de 60 experts (universitaires et privés) spécialistes du domaine de l’extraction de composés naturels, sous l’impulsion de « France Eco extractions ».
- Principe 1 : Favoriser l’innovation par la sélection variétale et l’utilisation de ressources végétales renouvelables ;
- Principe 2 : Privilégier les solvants alternatifs dits solvants verts et principalement ceux issus des agro-ressources (par exemple bio-solvants, solvant biosourcés et/ou agro-sourcés, NaDES, fluides supercritiques, eau, etc.) ;
- Principe 3 : Réduire la consommation énergétique par l’assistance des technologies innovantes et favoriser la récupération d’énergie (procédés à fables consommation, rapides, à des températures limitées, etc.) ;
- Principe 4 : Favoriser la création de coproduits (valorisés ou valorisables) au lieu de déchets pour intégrer la voie de la bio ou agro-raffinerie ;
- Principe 5 : réduire les opérations unitaires grâce à l’innovation technologique et favoriser les procédés surs, robustes et contrôlés ;
- Principe 6 : privilégier un produit non dénaturé, biodégradable, sans contaminants et surtout porteur de valeurs « éco-extrait ».
Par «NaDES» ou «Natural Deep Eutectic Solvent» ou «Solvant Eutectique Profond Naturel», on entend un mélange de composés d'origine naturelle susceptible d'être utilisé comme solvant et possédant une superstructure basée sur des interactions hydrogènes, dont le point de fusion est inférieur à celui des composés purs. Il s’agit de solvants formés par le mélange de deux ou plusieurs composés à une proportion qui correspond au point eutectique, qui correspond au point de fusion le plus bas du mélange. Ces mélanges sont constitués d’un donneur d’hydrogène et d’un accepteur, et éventuellement de l’eau (mélange ternaire). De nombreuses molécules peuvent ainsi être combinées.
La superstructure des NaDES ainsi que les méthodes permettant de la détecter sont bien connues de l'homme du métier, qui pourra notamment se référer aux articles de référence dans le domaine (tel que Dai Y. et al., 2013 (Analytica Chimica Acta, 766 : 61-68).
Les procédés de synthèse des NaDES sont également bien connus de l’homme du métier.
Les NaDES sont des solvants alternatifs (dits solvants verts), car ils sont obtenus à partir de composés naturels/d’origine naturelle (ils sont principalement issus des agro-ressources et/ou biosourcés). Ils répondent donc au second principe de l’éco-extraction tel que défini ci-dessus (Principe 2 : Privilégier les solvants alternatifs dits solvants verts et principalement ceux issus des agro-ressources).
Par «polyol», on entend un composé organique possédant au moins deux groupes alcools, tels que les diols, les triols et les sucres alcools. Il est entendu que les polyols au sens de l'invention ne possèdent pas de groupe carbonyle (aldéhyde ou cétone), ce qui les distingue des sucres ci-après définis. Les polyols comprennent notamment le glycérol, le sorbitol, le xylitol, le mannitol, l’inositol, le butylène glycol, le propanediol, l’isosorbide, etc.
Par «sucre», on entend un glucide. Les glucides sont des composés organiques contenant un groupe carbonyle (aldéhyde ou cétone) et au moins deux groupes hydroxyle (-OH). Les sucres ou glucides comprennent notamment les mono ou di- ou tri-saccharides ou polysaccharides, tels que le fructose, le glucose, le lactose, le sucrose, le xylose, le galactose, le tréhalose etc.
Par «réaction naturelle de défense de la peau» on entend un mécanisme naturel (c’est-à-dire non pathologiques) de protection qui se déclenche dans les cellules cutanées en réponse à un stress mais pouvant générer, si elle est excessive ou devient chronique, un affaiblissement d’autres systèmes de défense des cellules, des dysfonctionnements du métabolisme cellulaire ayant pour conséquence à terme l’apparition de rides, un relâchement de la peau, une sécheresse cutanée, un teint terne et inhomogène et/ou la formation d'une peau Il est donc important de contrôler l’ampleur de cette réponse pour un retour à l’état basal ou à l’homéostasie du tissu. Par ailleurs il existe un mécanisme naturel de résolution capable de limiter les effets délétères de cette réaction excessive, potentiellement délétères quand elle apparaît de façon chronique. Ce processus de résolution est associé à la synthèse d’une famille de molécules spécifiques appelée SPM. Elles sont connues pour accélérer le processus de « nettoyage » (potentiels effets secondaires néfastes lié à la phase de défense) et de régénération des tissus, permettant le retour à l’homéostasie des tissus.
Par «SPM» ou «Specialized Pro-resolving Mediator» ou «médiateur spécialisé de la résolution» on entend une classe de molécules de signalisation cellulaire formée dans les cellules par le métabolisme des acides gras polyinsaturés (AGPI) par une ou une combinaison d'enzymes telles que la lipoxygénase, la cyclooxygénase et la monooxygénase du cytochrome P450. Cette classe de molécule comprend notamment les résolvines (telles que les résolvines de la série D (dérivées de l’acide docosahexaénoïque ou DHA), incluant les résolvines D1 (RvD1), D3 (RvD3), D4 (RvD4)), les protectines, les lipoxines (telles que les lipoxines A4 (LXA4) et B4 (LXB4) et les marésines.
Par «atténuer la réaction naturelle de défense de la peau» on entend l’action de diminuer /réduire/amoindrir la réaction naturelle de défense de la peau excessive chronique dans le temps, en agissant notamment sur les SPM, de manière à restaurer l’homéostasie de la peau. Ce retour à l’homéostasie du tissu est favorisé par la stimulation de la production d’au moins un SPM. Elle peut également comprendre la stimulation de l’expression d’au moins un gène impliqué dans les fonctions barrière/différenciation, d’adhésion/cohésion, d’hydratation et détoxification de la peau.
Par «matière kératinique» on entend la peau et/ou ses phanères, et les lèvres, en particulier la peau du visage et/ou du corps et les lèvres.
Extrait de rose : extrait de NaDES de rose
La présente invention concerne un nouvel extrait de rose obtenu par la mise en contact d’un échantillon de rose avec un NaDES liquide à température ambiante, caractérisé en ce que ledit NaDES consiste en un mélange de sucre, de polyol et d’eau dans un ratio molaire allant de 1 :1 :3 à 1 :1 :5.
Les extraits de l’invention sont des extraits de rose. On parlera indifféremment selon l’invention d’un extrait de rose, d’un extrait de rosier ou d’un extrait du genreRosa. On appellera notamment les extraits de rose selon l’invention des extraits de NaDES de rose (ou encore des extraits NaDES de rose).
Cet extrait peut être choisi parmi les différentes parties de la plante ou leurs mélanges, en particulier un extrait de feuilles, un extrait de fleurs (pétales), un extrait de sépales, un extrait de bois (tiges) ou leur mélange.
L’échantillon de rose est donc de préférence choisi parmi les fleurs de rose, le bois de rose, les fruits de rose, les bourgeons de rose, les feuilles de rose, les racines de rose, et un mélange quelconque de ceux-ci, de préférence les fleurs de rose.
Avantageusement, il s’agira d’un extrait de fleurs, et en particulier un extrait de fleurs fraîches.
L’échantillon de rose peut être un échantillon de rose fraiche, congelé, lyophilisé, ou un mélange quelconque de ceux-ci. Les échantillons congelés ou lyophilisés sont avantageusement obtenus à partir d’échantillon de rose fraiche. Cela permet notamment de préserver les différents principes actifs et propriétés de la rose fraiche. L’échantillon de rose est donc de préférence un échantillon de rose fraiche, lyophilisé, ou un mélange de rose fraiche et lyophilisé, de préférence encore un échantillon de rose lyophilisé. En effet, les données phytochimiques montrent que les extraits de NaDES de rose issus de la mise en œuvre de roses lyophilisées sont nettement plus concentrés que ceux issus de roses congelées (notamment en raison d’une mise en œuvre de végétal en équivalent poids sec 3 fois plus élevée pour la rose lyophilisée que pour la rose congelée).
Le genre Rosa comprend plus de 1000 espèces parmi lesquelles on peut citerRosa damascena, Rosa multiflora, Rosa centifolia, Rosa rugosa, Rosa chinensis, Rosa moschata, Rosa alba, Rosa alpina, Rosa canina, Rosa cinnamonea, Rosa gallica, Rosa repens, Rosa rubrifolia, Rosa rubiginosa, Rosa sempervirens, Rosa spinosissima, Rosa stylosa, Rosa tomentosa, ouRosa villosa.
L’homme du métier choisira de préférence des roses sélectionnées avec des capacités de résistance aux maladies, vigoureuses et florifères, en particulier avec des teintes pastel et dont les propriétés sont préservées par un environnement et un mode d’agriculture biologique. Selon un mode particulier et préféré, on utilisera un échantillon de rose de la variété Evanrat ou rose ‘Jardin de Granville®’, de préférence encore un échantillon de fleurs de rose de la variété Evanrat ou rose ‘Jardin de Granville®’.
Le rosier ou rose ‘Jardin de Granville®’ est une variété hybride proposée exclusivement par « Roses anciennes André Eve S.A.S » et protégée par Certificat d’Obtention Végétale sous le N°20110345 avec pour espèce la dénomination Rosa L. et pour la variété la dénomination EVANRAT. Ce rosier buisson appartient au groupe des hybrides modernes, qui, de mai à octobre, se couvre de roses en permanence, montrant ainsi un excellent caractère remontant. On le trouve notamment sous le nom INCI ‘Rosa Hybrid Flower Extract’.
Ainsi, selon un mode particulier et préféré de l’invention, l’extrait de rose selon l’invention est caractérisé en ce que les roses sont des roses de la variété Evanrat ou rose Jardin de Granville®.
L’extrait de rose selon l’invention est obtenu par la mise en contact d’un échantillon de rose avec un NaDES.
Par exemple, les NaDES peuvent être préparés par mélange de l'ensemble des composés à une température comprise entre 2 et 95°C, préférentiellement 70°C. Ce mélange peut par exemple être réalisé dans un réacteur agité équipé d'une double-enveloppe dans laquelle circule un fluide caloporteur. En fonction du NaDES considéré, l'homme du métier pourra choisir de faire varier la durée de l'étape de mélange de quelques minutes à quelques heures, au vu de ses connaissances techniques. Typiquement, cette durée est d'environ une heure à 4 heures.
Il est possible d'obtenir plusieurs NaDES pour une combinaison donnée de composés en faisant varier les proportions relatives des composés considérés. En d'autres termes, une combinaison donnée de composés peut donner lieu à plusieurs compositions chimiques répondant à la définition de NaDES, et qui se distinguent par leurs ratios molaires. C'est par exemple le cas du mélange glycérol/chlorure de choline qui est susceptible de former des NaDES notamment dans les rapports molaires 3:1 (Jhong et al. 2009) et 2:1 (Abbott et al. 2011), ou encore pour le mélange glycérol/acétate de choline, qui est susceptible de former des NaDES notamment dans les rapports molaires 1:1, 1,5:1 et 2:3 (Zhao et al., 2011).
L'homme du métier n'aura donc aucune difficulté, pour un mélange donné de l'invention, en faisant varier les proportions des composés, à obtenir un ou plusieurs NaDES.
Les NaDES peuvent notamment être obtenus à partir d’un mélange d’eau et d’au moins un polyol et/ou d’au moins un sucre.
L’homme du métier choisira avantageusement des NaDES qui sont physiquement stables, en particulier, des NaDES physiquement stables à une température comprise entre 4 et 40°C supérieure à 2°C.
Par «physiquement stable» on entend un composé, une formulation, une composition (par exemple un NaDES), qui ne précipite pas et reste limpide. En particulier, le NaDES ne forme pas de précipité après avoir été stocké à température ambiante pendant 1 an.
Selon un mode de réalisation avantageux, le NaDES de l’extrait de rose comprend au moins un premier et un deuxième composé choisis chacun dans le groupe comprenant la famille des polyols et la famille des sucres.
Avantageusement, le sucre du NaDES de l’extrait de rose selon l’invention est choisi dans le groupe comprenant le fructose, le glucose, le lactose, le sucrose, le xylose, le galactose et le tréhalose, de préférence le glucose et le fructose, de préférence encore le fructose. En effet, les données montrent que lorsque le NaDES de l’extrait de rose comprend un tel sucre, notamment du fructose, les propriétés anti-âges ainsi que les effets sur la régénération de la peau, l’atténuation des réactions de défense naturelles de la peau, et les fonctions barrière/différenciation, d’adhésion/cohésion, d’hydratation et détoxification de la peau, sont particulièrement élevés, à la fois chez les peaux jeunes et chez les peaux matures.
Avantageusement, le polyol est choisi parmi le glycérol, le sorbitol, le xylitol, le mannitol, l’inositol, le butylène glycol, le propanediol et l’isosorbide, de préférence le glycérol, le sorbitol, le xylitol, le butylène glycol, ou le propanediol, de préférence encore le glycérol ou le propanediol, de préférence encore le propanediol. En effet, les données montrent que lorsque le NaDES de l’extrait de rose comprend un tel polyol, notamment du glycérol ou du propanediol, les propriétés anti-âges ainsi que les effets sur la régénération de la peau, l’atténuation des réactions de défense naturelles de la peau, et les fonctions barrière/différenciation, d’adhésion/cohésion, d’hydratation et détoxification de la peau, sont particulièrement élevés, à la fois chez les peaux jeunes et chez les peaux matures.
De préférence, les NaDES de l’extrait de rose de l'invention comprend une combinaison d'un sucre choisi parmi le fructose et le glucose, avec un polyol choisi parmi le glycérol, le sorbitol, le xylitol, le mannitol, l’inositol, le butylène glycol, le propanediol et l’isosorbide.
Avantageusement, le NaDES de l’extrait de rose de l'invention a pour caractéristique d'être liquide à température ambiante, sans formation de cristaux, plus ou moins fluide c'est-à-dire avec une viscosité inférieure à 3000 mPa.s à 20°C. En effet, de telles caractéristiques de solvants sont particulièrement adaptées pour la préparation d'extraits végétaux, tels que des extraits de rose. En particulier, une telle viscosité confère une bonne pénétration de la matrice à extraire, et par conséquent augmente le rendement d'extraction.
Avantageusement, les NaDES de l’extrait de rose selon l'invention comprennent en outre une phase aqueuse, consistant en de l'eau. En effet, l'adjonction d'eau à la combinaison de composés décrite ci-dessus permet de réduire la viscosité du NaDES tout en conservant ses propriétés, notamment en préservant sa superstructure.
Aussi, de préférence, les NaDES de l’extrait de rose selon l'invention consistent en un mélange choisi dans le groupe comprenant :
- le fructose, le glycérol et l'eau,
- le fructose, le sorbitol et l'eau,
- le fructose, le xylitol et l'eau,
- le fructose, le mannitol et l'eau,
- le fructose, l’inositol et l'eau,
- le fructose, le butylène glycol et l'eau,
- le fructose, le propanediol et l'eau,
- le fructose, l’isosorbide et l'eau,
- le glucose, le glycérol et l'eau,
- le glucose le sorbitol et l'eau,
- le glucose le xylitol et l'eau,
- le glucose le mannitol et l'eau,
- le glucose l’inositol et l'eau,
- le glucose le butylène glycol et l'eau,
- le glucose le propanediol et l'eau,
- le glucose l’isosorbide et l'eau.
En effet, ces NaDES sont particulièrement stables physiquement. Cela permet notamment de garantir la qualité des procédés mis en œuvre et des extraits obtenus, ainsi qu’un stockage facile des extraits obtenus, notamment à température ambiante, et une stabilité sur de longue durée (pendant plusieurs mois, de préférence au moins 1 an). De plus, de tels NaDES sont bien tolérés par les cellules cutanées. Ils sont en outre particulièrement adaptés à des formulations cosmétiques (tels que des gels, émulsions, crèmes, baumes, huiles etc.).
De préférence, les NaDES de l’extrait de rose selon l'invention consistent en un mélange choisi dans le groupe comprenant :
- Le fructose, le glycérols et l'eau, dans un rapport molaire 1/1/3,
- Le fructose, le glycérols et l'eau, dans un rapport molaire 1/1/5,
- Le fructose, le butylène glycol, et l'eau, dans un rapport molaire 1/1/3,
- Le fructose, le sorbitol et l'eau, dans un rapport molaire 1/1/5, et
- Le fructose, le xylitol et l'eau, dans un rapport molaire 1/1/5.
Selon un mode de réalisation particulièrement préféré de l’invention, l’extrait de rose est caractérisé en ce que le NaDES est choisi parmi un NaDES consistant en un mélange de fructose, propanediol et eau dans un ratio molaire 1 :1 :3 et un NaDES consistant en un mélange de fructose, glycérol et eau dans un ratio molaire 1 :1 :5.
Ainsi, selon un mode de réalisation préféré, l’extrait de rose selon l’invention est caractérisé en ce que le NaDES consiste en un mélange de fructose, propanediol et eau dans un ratio molaire 1 :1 :3. Le nom INCI de cet extrait de rose est fructose (and) propanediol (and) water (and) Rose Extract. Lorsque l’échantillon de rose utilisé comprend, consiste essentiellement en ou consiste en des fleurs de rose, on peut également trouver cet extrait sous le nom INCI fructose (and) propanediol (and) water (and) Rosa Hybrid Flower Extract ou Rose Extract.
En outre, selon un mode de réalisation préféré, l’extrait de rose selon l’invention est caractérisé en ce que le NaDES consiste en un mélange de fructose, glycérol et eau dans un ratio molaire 1 :1 :5. Le nom INCI de cet extrait de rose est fructose (and) glycerol (and) water (and) Rose Extract. Lorsque l’échantillon de rose utilisé comprend, consiste essentiellement en ou consiste en des fleurs de rose, on peut également trouver cet extrait sous le nom INCI fructose (and) glycerol (and) water (and) Rosa Hybrid Flower Extract ou Rose Extract.
Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, l’extrait de rose selon l’invention est caractérisé en ce que le NaDES consiste en un mélange de fructose, propanediol et eau dans un ratio molaire 1 :1 :3.
L’extrait de NaDES de rose selon l’invention peut être préparé sans difficulté selon des méthodes usuelles à partir des composés indiqués ci-dessus, que l'homme de l'art pourra se procurer commercialement ou selon des méthodes de préparation bien connues.
L’extrait de NaDES de rose selon l’invention peut par exemple être préparé selon des procédés d'extraction d’un échantillon de rose comprenant au moins une étape dans laquelle l’échantillon de rose est mis en contact avec un NaDES liquide à température ambiante (notamment un NaDES tel que décrit ci-dessus).
Les procédés d’extraction peuvent mettre en œuvre les techniques d'extraction usuelles, telles que l'extraction solide/liquide, l'extraction assistée par micro-ondes, l'extraction assistée par ultrasons, l'extraction liquide sous pression, l'extraction au reflux, l'extraction avec macération, l'extraction à la température ambiante, l'extraction aux ultrasons.
Ces procédés peuvent être mis en œuvre dans des températures usuelles entre 20 et 80°C (avantageusement, à température ambiante).
Le procédé d’obtention de l’extrait de NaDES de rose selon l’invention est de préférence un procédé d’éco-extraction. L’extrait de NaDES de rose selon l’invention est donc de préférence obtenu par éco-extraction.
Les extraits de NaDES de rose selon l’invention comprennent des molécules naturelles extraites de la plante. Avantageusement, les extraits de NaDES de rose de l'invention comprennent des composés phénoliques, tels que les flavonoïdes (notamment astragaline, nicotiflorine, isoquercitrine, rutine et afzéline, en particulier l’astragaline) et l’acide gallique et dérivés. Avantageusement, les extraits de NaDES de rose de l'invention comprennent en outre des acides aminés, notamment de l’asparagine.
En effet, les données de caractérisation phytochimiques montrent que les extraits de NaDES de rose de l'invention comprennent ces différents composés phénoliques et acides aminés.
Selon un mode de réalisation préféré, l’extrait de NaDES de rose selon l’invention est un éco-extrait. En effet, les NaDES sont des solvants alternatifs (dits solvants verts), car ils sont obtenus à partir de composés naturels/d’origine naturelle (ils sont principalement issus des agro-ressources et/ou biosourcés). L’extrait de NaDES de rose selon l’invention répond donc au second principe de l’éco-extraction tel que défini ci-dessus (Principe 2 : Privilégier les solvants alternatifs dits solvants verts et principalement ceux issus des agro-ressources). De plus, le matériel extrait, c’est-à-dire la rose, est un matériel végétal maîtrisé et renouvelable. L’extrait de NaDES de rose selon l’invention répond donc également au premier principe de l’éco-extraction tel que défini ci-dessus (« Principe 1 : Favoriser l’innovation par la sélection variétale et l’utilisation de ressources végétales renouvelables »). L’extrait de NaDES de rose selon l’invention répond également aux 4 autres principes de l’éco-extraction tels que définis ci-dessus.
Galénique - Composition
La présente invention concerne une nouvelle composition comprenant au moins un extrait de NaDES de rose selon l’invention tel que défini ci-dessus.
La composition de l’invention est de préférence une composition cosmétique. La composition cosmétique de l’invention peut se présenter sous toute forme galénique adaptée à une application topique sur les matières kératiniques et en particulier la peau, par exemple un sérum, un sérum-huileux, une huile, une émulsion huile-dans-eau (H/E), une émulsion eau-dans-huile (E/H), une émulsion multiple, une microémulsion, une lotion, une suspension, un gel aqueux, un stick, une poudre, une crème, une mousse, un fluide, un baume, etc.
Selon un mode de réalisation préféré, la composition selon l’inventions est caractérisée en ce qu’il s’agit d’une émulsion, d’un sérum, d’une huile, d’une crème.
Les extraits de rose selon l'invention présentent les avantages d’être facilement formulables et stables dans des compositions cosmétiques telles que mentionnées ci-dessus (notamment de type gel et émulsion). En effet, les données montrent que l'extrait de NaDES de rose de l’invention n'entraîne pas d'instabilité physique dans la formulation au moment de la fabrication, ni ne nécessite l'ajout de composés stabilisants dans la formulation.
L’extrait de rose selon l’invention est présent dans la composition cosmétique de l’invention dans une quantité efficace pour obtenir l’effet recherché.
En particulier, il est présent en une teneur allant de 0,01% à 25%, de préférence de 0,3% à 20%, de préférence de 0,5% à 10%, de préférence encore de 1% à 5%, de préférence encore de 2% à 4%, de préférence encore 3%, en poids de matière première par rapport au poids total de la composition. Des exemples illustratifs de compositions sont donnés ci-après.
Avantageusement, on utilisera une composition cosmétique comprenant au moins un extrait de NaDES de rose selon l’invention, et optionnellement en outre au moins un ingrédient choisi parmi une huile, un gélifiant, et un tensioactif.
Lorsque les compositions sont des émulsions, elles pourront comprendre les émulsionnants et co-émulsionnants généralement utilisés dans le domaine cosmétique.
Lorsque les compositions sont des gels, elles pourront avantageusement comprendre des gélifiants hydrophiles.
La composition selon l’invention peut être une composition de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques (peau, lèvres, cheveux, ongles, etc.)
Les compositions selon l'invention sont par conséquent susceptibles de comprendre, outre au moins un extrait de rose selon l'invention, d'autres ingrédients conventionnels pour ce type de compositions tels que des parfums, des colorants, des filtres UVA, des filtres UVB, ou des excipients.
La composition est préférentiellement destinée à être appliquée sur la peau du visage et/ou du corps ou sur les lèvres et se présente par exemple sous la forme d’une lotion, d'une crème de soin, d’un sérum, d'un fluide pour le visage, d’un gel de soin pour le visage et/ou le corps, d’une composition de soin des lèvres, d’un baume à lèvres, d’un rouge à lèvre, ou d’un gloss.
Selon un mode particulier, la composition cosmétique selon l’invention est sous la forme d’une crème de soin et/ou de maquillage pour le visage.
Procédé cosmétique
La présente invention concerne également un procédé cosmétique de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques, en particulier de la peau et/ou des lèvres, comprenant l’application, sur lesdites matières kératiniques, d’au moins une composition cosmétique selon l’invention (au moins une composition cosmétique comprenant au moins un extrait de NaDES de rose, telle que défini ci-dessus).
Selon un mode de réalisation, le procédé cosmétique est caractérisé en ce que la composition est appliquée sur des peaux et/ou des lèvres saines en ayant besoin, pour améliorer la régénération cellulaire, améliorer la cohésion et/ou la différenciation épidermique, améliorer le renouvellement épidermique, renforcer la fonction barrière cutanée, améliorer l’hydratation, améliorer le lissage de la peau, améliorer l’éclat et/ou l’homogénéité de la peau, renforcer la résistance de la peau au stress oxydatif, et/ou prévenir et/ou diminuer la formation des rides et/ou ridules.
La composition peut être appliquée sur le corps, le visage et/ou le cou. Selon un mode particulier, la composition est appliquée sur la peau du visage (y compris du contour des yeux et des lèvres) et/ou du cou.
Le procédé cosmétique selon l’invention est notamment un procédé non thérapeutique. La composition est donc appliquée de préférence sur une peau et/ou des lèvres saines, c’est-à-dire ne présentant pas de troubles ou de désordres qui relèveraient d’un état pathologique.
Selon un mode particulier, la composition peut être appliquée sur une peau sèche, fragile, sensible, stressée, et notamment une peau fatiguée ayant perdu son éclat, son équilibre, sa fermeté, sa souplesse et son élasticité (ladite peau étant de préférence saine).
Selon un autre mode particulier, la composition est appliquée sur des lèvres sèches, fragiles, sensibles et/ou stressées, Selon un mode particulier, la composition est appliquée sur des lèvres sèches et/ou fragiles (lesdites lèvres étant de préférence saines).
Utilisation cosmétique
L’invention porte en outre sur l’utilisation cosmétique non thérapeutique d’un extrait de NaDES de rose selon l’invention tel que défini ci-dessus, comme agent destiné à améliorer la régénération cellulaire, améliorer la cohésion et/ou la différenciation épidermique, améliorer le renouvellement épidermique, renforcer la fonction barrière cutanée, améliorer l’hydratation, améliorer le lissage de la peau, améliorer l’éclat et/ou l’homogénéité de la peau, renforcer la résistance de la peau au stress oxydatif, et/ou prévenir et/ou diminuer la formation des rides et/ou ridules.
Les extraits de NaDES de roses utilisés selon l’invention sont tels que décrits ci-dessus.
De préférence, on utilisera un extrait de NaDES de rose (de préférence de fleurs de rose) de la variété Evanrat ou Rose Jardin de Granville®.
Selon un mode particulier, la quantité efficace d’au moins un extrait de rose selon l’invention stimule la production des médiateurs de la résolution ou SPM, essentiels au maintien de l'homéostasie dans les tissus cutanés. En particulier, l’extrait de NaDES rose selon l’invention favorise la production des lipoxines LXA4 et/ou LXB4, et/ou des résolvines RvD1, RvD3 et/ou RvD4, dans les peaux jeunes et les peaux matures.
Selon un mode particulier, la quantité efficace d’au moins un extrait de rose selon l’invention stimule l’expression de gènes impliqués dans les fonctions barrière/différenciation, adhésion/cohésion, hydratation et détoxification/oxygénation des cellules de la peau. En particulier, l’extrait de NaDES rose selon l’invention induit l’expression des gènes codant pour les protéines suivantes : Filaggrine, Transglutaminase 1, Kallikrein related peptidase 7, Cornifine, Céramide synthase 3, Cytokératine 1, Zinc Finger Protein 750 ou Epigenin, Connexin 43, Desmogleine 1, Occludine, Claudine 1, Neurogenic locus notch homolog protein 1, Aquaporine 3, Aquaporine 9, Aquaporine 10, Fatty Acid Binding Protein 5, ATP-binding cassette sub-family A (ABC-1), member 12, Methionine sulfoxide reductase B1 (SELX), Multidrug-Resistance like Protein 2, Solute carrier family 2 (facilitated glucose transporter) member 1.
En effet, les Inventeurs ont démontré qu’un extrait de rose selon l’invention est capable de stimuler efficacement la production des SPM et l’expression des gènes susmentionnés par les cellules cutanées.
Les exemples qui suivent visent à illustrer la présente invention, et ne sauraient être considérés comme limitatifs. Sans instruction contraire, les % sont exprimés en poids de matière première par rapport au poids total de la composition.
Description des figures
Exemples
EXEMPLE 1 : Préparation de l’extrait de rose (NaDES de rose)
Le matériel végétal utilisé pour obtenir les extraits de rose illustrés dans les présents exemples sont des roses de la variété Evanrat, en particulier des fleurs de rosier Jardin de Granville®, disponible chez les pépiniéristes.
1.1. Protocole de préparation des extraits de Rose NaDES
Pour préparer les extraits de Rose NaDES selon l’invention, les roses peuvent être utilisées fraichement coupées, ou bien après stockage négatif/congélation. Le végétal sera alors utilisé sous cette forme (fraichement coupé ou congelé) et une étape de séchage pourra être ajoutée par séchage naturel ou forcé (par étuve/séchoir), lyophilisation ou zéodrataion.
Deux protocoles alternatifs sont ici décrits, respectivement avec des roses lyophilisées ou avec des roses fraîches congelées.
1.1.1. Préparation à partir de roses lyophilisées
Plantes :
Fleurs de roses (variété Jardin de Granville®) lyophilisées broyées, issu de la lyophilisation de roses congelées.
Solvants:
Les solvants NaDES sont listés ci-dessous.
NaDES FPE113 : mélange Fructose/ Propanediol/ Eau à un ratio molaire 1:1:3
NaDES FGE115 : mélange Fructose/ Glycérine/ Eau à un ratio molaire 1:1:5
Protocole de fabrication des extraits
a) Extraction S/L (solide/liquide) :
- ratio massique plante/ solvant 5:95
- extraction à 70°C pendant 3h sous agitation continue
b) Séparation S/ L
c) Filtration jusqu’à 0.22µm.
Extraits obtenus selon le protocole décrit ci-dessus :
On obtient ainsi les deux extraits suivants, obtenus à partir de roses lyophilisées :
- Extrait NaDES (Fructose/Propanediol/Eau) 1:1:3 de fleur de rose (appelé ci-après NaDES rose FPE 113).
Nom INCI : fructose (and) propanediol (and) water (and) Rosa Hybrid Flower Extract ou ou
Nom INCI : fructose (and) propanediol (and) water (and) Rose Extract.
- Extrait NaDES (Fructose/Glycérol/Eau) 1:1:5 de fleur de rose (appelé ci-après NaDES rose FGE 115).
Nom INCI : fructose (and) glycerol (and) water (and) Rosa Hybrid Flower Extract
Ou
Nom INCI : fructose (and) glycerol (and) water (and) Rosa Extract.
Ces extraits contiennent une teneur en matière sèche de rose allant de 0,5 à 10% en poids par rapport au poids total du NaDES.
1.1.2. Préparation à partir de roses fraîches congelées
Plantes :
Fleurs de roses (variété Jardin de Granville®) fraîches congelées.
Solvants:
Les solvants NaDES sont listés ci-dessous.
Solvant NaDES FPE113 : mélange Fructose/ Propanediol/ Eau à un ratio molaire 1:1:3
Solvant NaDES FGE115 : mélange Fructose/ Glycérine/ Eau à un ratio molaire 1:1:5
Protocole de fabrication des extraits
a) Extraction S/L (solide/liquide) :
- ratio massique plante (cryocoupée)/ solvant 7,4:92,6
- extraction à 70°C pendant 3h sous agitation continue
b) Séparation S/ L
c) Filtration jusqu’à 0.2µm
Extraits obtenus selon ce protocole :
On obtient ainsi les deux extraits suivants, à partir de roses fraîches congelées :
- Extrait NaDES (Fructose/Propanediol/Eau) 1:1:3 de fleur de rose (appelé ci-après NaDES rose FPE 113).
Nom INCI : fructose (and) propanediol (and) water (and) Rosa Hybrid Flower Extract ou Rose Extract.
- Extrait NaDES (Fructose/Glycérol/Eau) 1:1:5 de fleur de rose (appelé ci-après NaDES rose FGE 115).
Nom INCI : fructose (and) glycerol (and) water (and) Rosa Hybrid Flower Extract ou Rose Extract.
Ces extraits contiennent une teneur en matière sèche de rose allant de 0,5 à 10% en poids par rapport au poids total du NaDES.
1.2. Caractérisation phytochimique
1.2.1. Méthodes
Composition
Les composés phénoliques (flavonoïdes ainsi que l’acide gallique et ses dérivés), les acides
aminés libres ont été recherchés et quantifiés par chromatographie dans les extraits NaDES de roses lyophilisées (obtenus selon le protocole 1.1.1 ci-dessus) et des extraits NaDES de roses congelées (obtenus selon le protocole 1.1.2 ci-dessus).
- Analyse Flavonoïdes : RP-UHPLC-DAD, calibration avec l’astragaline (λ : 350 nm).
- Analyse Acide gallique et dérivés : RP-UHPLC-DAD, calibration l’acide gallique (λ : 275 nm).
- Analyse Acides aminés libres : UHPLC, calibration externe avec un kit de dérivatisation Waters AccQ-Tag. 19 acides aminés sont recherchés.
Stabilité
Une étude de stabilité des extraits NaDES de roses lyophilisées (obtenus selon le protocole 1.1.1) et des extraits NaDES de roses congelées (obtenus selon le protocole 1.1.2) a été réalisée selon les paramètres suivants : emballages inertés à l’azote, stockés à l’abri de la lumière à 3 températures (4°C, 25°C et 40°C) avec un contrôlea minimaaprès 3, 6 et 9 mois de tout ou partie des paramètres suivants : aspect, odeur, indice de couleur, pH, concentration en flavonoïdes. La stabilité a été testée pendant 9 mois pour les extraits de rose lyophilisée et pendant 1.5 mois pour les extraits de rose congelée.
1.2.2. Résultats
Les résultats des analyses phytochimiques pour les extraits de NaDES de rose obtenus selon l’exemple 1.1.1 ci-dessus (roses lyophilisées) sont montrés dans le Tableau 1 ci-dessous. Les données sont notamment comparées aux analyses phytochimiques d’extraits de fleurs de roses lyophilisées obtenus en parallèle par des procédés d’extraction classiques mettant en œuvre des solvants contenant de l’éthanol (mélanges éthanol/eau à 90/10 ou éthanol eau à 50/50) ou de l’eau.
Les données sont également comparées à des extraits de NaDES de roses lyophilisées obtenus avec des NaDES contenant de la bétaïne :
- NaDES BBgE115 : extrait de rose obtenu avec un NaDES Bétaïne/Butylène glycol/Eau au ratio molaire 1 :1 :5.
- NaDES BSE115 : extrait de rose obtenu avec un NaDES Bétaïne/Sorbitol/Eau au ratio molaire 1 :1 :5.
Tableau 1 : Concentration en flavonoïdes, en acides galliques et dérivés et en acides aminés libres pour les extraits de NaDES de roses lyophilisées obtenus selon l’exemple 1.1.1, en comparaisons avec des extraits de NADES roses obtenus avec des NaDES contenant de la bétaïne ou des extraits de roses lyophilisées obtenus avec des mélanges éthanol/eau.
| Flavonoïdes | Dérivés d'acide gallique | Acides aminés libres | |||||||
| Solvant d’extraction | Astragaline (mg/Kg) | Flavonoïdes totaux (mg/Kg) |
Astragaline / Flavonoïdes | Acide gallique (mg/Kg) |
Ac. gallique et dérivés galliques (mg/Kg) | Acide gallique / dérivésgalliques |
Asparagine (mg/Kg) | AA libres totaux (mg/kg) |
Asparagine / AA libres |
| EtOH/Eau 90/10 | 494 | 968 | 51% | 13 | 50 | 26% | 192 | 385 | 50% |
| EtOH/Eau 50/50 | 462 | 945 | 49% | 12 | 142 | 8% | 570 | 934 | 61% |
| Eau | 115 | 264 | 44% | 39 | 105 | 37% | 2616 | 2676 | 98% |
| NaDES FPE113 | 435 | 897 | 48% | 5 | 96 | 5% | 519 | 969 | 54% |
| NaDES FGE115 | 393 | 810 | 49% | 16 | 203 | 8% | 549 | 965 | 57% |
| NaDES BBgE115 | 460 | 978 | 47% | 63 | 677 | 9% | 438 | 807 | 54% |
| NaDES BSE115 | 348 | 718 | 48% | 87 | 569 | 15% | 502 | 844 | 59% |
Les résultats des analyses phytochimiques pour les extraits de NaDES de rose obtenus selon l’exemple 1.1.2 ci-dessus (roses congelées) sont montrés dans le Tableau 2 ci-dessous. Le Tableau 3 ci-dessous montre les résultats des analyses phytochimiques d’extraits de fleurs de roses obtenus en parallèle par des procédés d’extraction classiques mettant en œuvre des solvants contenant de l’éthanol (mélanges éthanol/eau à 90/10 ou éthanol eau à 50/50) ou de l’eau.
Les données sont également comparées à des extraits de NaDES de roses congelées obtenus avec des NaDES contenant de la bétaïne :
- NaDES BBgE115 : extrait de rose obtenu avec un NaDES Bétaïne/Butylène glycol/Eau au ratio molaire 1 :1 :5.
- NaDES BSE115 : extrait de rose obtenu avec un NaDES Bétaïne/Sorbitol/Eau au ratio molaire 1 :1 :5.
Tableau 2 : Analyses phytochimiques des extraits de NaDES de roses congelées obtenus selon l’exemple 1.1.2, en comparaison avec des extraits de NADES roses obtenus avec des NaDES contenant de la bétaïne.
| Analyse | Méthode | NaDES rose FPE113 | NaDES rose FGE115 | NaDES rose BBgE115 | NaDES rose FSE115 |
| Aspect | - Tube verre 5mL, dia 1cm - Flacon verre 60mL, dia 3cm |
- Limpide, jaune clair -Limpide, orange doré |
- Limpide jaune pâle - Limpide, jaune doré citron |
- Limpide, ambré clair - Limpide, brun jaune |
- Limpide, jaune ambre - Limpide, orange lég. ambré |
| Odeur | Peu intense. Caractéristique de la rose |
Peu intense. Caractéristique de la rose |
Intensité moyenne. Non caractéristique de la rose, peu agréable |
Intensité moyenne. Végétale, mais différente de la rose |
|
| Couleur Gardner | Lico 100 | 4 | 4 | 7 | 5 |
| Couleur Gardner | Minolta CR-5 (cuve PMMA 10mm, Observateur 2°, Illuminant C) | 4 | 4 | 6 | 5 |
| L*a*b* | Minolta CR-5 (cuve PMMA 10mm, Observateur 10°, Illuminant D65, ΔE’’ab) | 96,6/-4,8/22,3 | 97,1/-4,7/21,0 | 87,7/-2,0/45,5 | 92,6/-4,1/36,1 |
| pH(dilution ½ m/v dans eau) | 5,3 | 5,2 | 5,8 | 5,7 | |
| Flavonoïdemajoritaire : Astragaline (mg/kg) |
UHPLC-UV | 143 | 130 | 163 | 122 |
| Acides aminés libres totaux(mg/kg) | UHPLC-UV | 295,0 | 288,3 | 211,2 | 237,4 |
| Asparagine | 94 | 98 | 87 | 97 | |
| Autres AA libres | 201 | 190 | 124 | 140 |
Tableau 3 : Analyses phytochimiques des extraits classiques de roses congelées obtenus avec des mélanges éthanol/eau.
| Analyse | Méthode | EtOH/Eau 90/10 | EtOH/Eau 50/50 | Eau |
| Aspect | - Tube verre 5mL, dia 1cm - Flacon verre 60mL, dia 3cm |
- Limpide, jaune vif -Limpide, vert jaunâtre vif |
- Limpide jaune un peu ambré - Limpide, jaune brunâtre ambré |
- Limpide, jaune pâle - Limpide, jaune citron vif |
| Odeur | Intensité forte, alcoolique | Intensité moyenne, alcoolique | Intensité moyenne. Caractéristique de la rose |
|
| Couleur Gardner | Lico 100 | 6 | 6 | 2 |
| Couleur Gardner | Minolta CR-5 (cuve PMMA 10mm, Observateur 2°, Illuminant C) | 6 | 5 | 3 |
| L*a*b* | Minolta CR-5 (cuve PMMA 10mm, Observateur 10°, Illuminant D65, ΔE’’ab) | 93,3/-8,1/49,6 | 92,0/-5,7/36,4 | 97, 8/-3,6/14,7 |
| pH | 5,4 | 5,6 | 5,4 | |
| Flavonoïdemajoritaire : Astragaline (mg/kg) |
UHPLC-UV | 157 | 155 | 79 |
| Acides aminés libres totaux(mg/kg) | UHPLC-UV | 236,6 | 276,0 | 404,9 |
| Asparagine | 101 | 130 | 191 | |
| Autres AA libres | 136 | 146 | 214 |
Ces analyses montrent que les extraits obtenus par NaDES permettent d’extraire des composés de familles polyphénoliques d’intérêt en quantité importante. Les solvants d’extraction NaDES selon l’invention sont donc bien substituables à des solvants contenant de l’éthanol. La mise en œuvre de tels solvants NaDES est plus simple et moins risquée pour les manipulateurs/ transformateurs que l’utilisation de solvants à base d’éthanol, celui-ci étant inflammable et nécessitant de travailler en zone ATEX.
Ces analyses ont permis de favoriser les extraits NADES par rapport aux extraits traditionnels (Eau/Ethanol) car leur odeur et leur couleur Gardner (< 5) est plus favorable à la mise en formule.
De plus, les analyses montrent que l’extraction avec les solvants NaDES proposés permettent d’extraire plus de flavonoïdes que l’eau.
Ces analyses montrent en outre la supériorité des propriétés phytochimiques des extraits de rose NaDES FPE113 et NaDES FGE 115 par rapport aux 2 autres extraits NADES BBgE115 et BSE115 (contenant de la bétaïne). En particulier, les données montrent que la couleur Gardner des extraits de rose NaDES FPE113 et NaDES FGE 115 (< 5) est plus favorable à la mise en formule que celle des extraits NaDES de rose contenant de la bétaïne et leur odeur est moins intense.
Les teneurs en acides aminés des extraits de rose NaDES FPE113 et NaDES FGE 115 sont supérieurs à celle des extraits NaDES de rose contenant de la bétaïne.
La teneur en flavonoïdes des extraits de rose NaDES FPE113 et NaDES FGE 115 est favorable à l’obtention d’activités biologiques.
Dans l’ensemble, ces données montrent que les extraits de rose NaDES FPE113 et NaDES FGE 115 selon l’invention présentent des propriétés phytochimiques supérieures à celles des extraits de rose classiques (solvant éthanol/eau) et des extraits NaDES de rose contenant de la bétaïne.
1.2.3. Comparaison des extraits de NaDES de rose congelées vs lyophilisées
Les résultats des comparaisons des données phytochimiques des extraits de rose NaDES FPE113 et NaDES FGE 115 obtenus avec les données phytochimiques des extraits de rose NaDES FPE113 et NaDES FGE 115 obtenus avec des roses congelées sont décrits ci-dessous.
Composés phénoliques
Qualitativement, les profils UHPLC-UV des composés phénoliques des extraits issus de roses congelées sont identiques à ceux issus de roses lyophilisées (données non montrées). Toutefois et, comme attendu, les extraits NaDES issus de roses congelées sont nettement moins concentrés que ceux issus de roses lyophilisées, en raison d’une mise en œuvre de végétal en équivalent poids sec 3,4 fois plus faible pour les roses congelées.
Les flavonoïdes de type flavonol sous forme d’hétérosides de kaempférol et de quercétine et ainsi que les dérivés d’acide gallique constituent les 2 familles repérées.
- Flavonoïdes
Les 7 flavonoïdes repérés dans les extraits de roses lyophilisées sont également présents dans les extraits de roses congelées : astragaline, nicotiflorine, isoquercitrine, rutine, afzéline.
Quel que soit le solvant d’extraction, l’astragaline reste le flavonoïde majoritaire.
La performance d’extraction obtenue avec les roses congelées est identique à celle des roses lyophilisées.
- Acide gallique et dérivés
L’acide gallique et composés dérivés de l’acide gallique détectés dans les extraits de roses lyophilisées sont également présents dans les extraits de roses congelées.
Acides aminés libres
L’asparagine est l’acide aminé libre retrouvé en large majorité à la fois pour les extraits de roses lyophilisées et pour les extraits de roses congelées.
L’asparagine représente 30 à 60% de la totalité des acides aminés libres dans les extraits testés.
Stabilité
Les deux extraits présentent une stabilité satisfaisante.
EXEMPLE 2 : Effets sur la régénération et les réactions de défense naturelles de la peau : Marqueurs SPMs
2.1 - Introduction
Les stress endogènes et/ou exogènes peuvent être une cause majeure d’une augmentation de la réaction naturelle de défense excessive de la peau face à un stress, susceptible de générer des micro-inflammations chroniques et silencieuses. Cette augmentation de la réaction naturelle de la peau peut être responsable à terme d’un affaiblissement d’autres systèmes de défense des cellules, ayant pour conséquence, à terme, l’apparition de rides, un relâchement de la peau, une sécheresse cutanée, et/ou un teint terne et inhomogène. Il est donc important de diminuer cette réactivité excessive néfaste à long terme sur l’homéostasie de l’épiderme et sa régénération. Dans ce contexte, les médiateurs de la résolution ou SPM, tels que les lipoxines et les résolvines, sont essentiels pour que les tissus cutanés reviennent à l'homéostasie.
2.2. Objectifs de cette étude
La présente étude vise à étudier les propriétés des extraits NaDES de rose préparés selon l’exemple 1 dans la production de médiateurs SPMs (c'est-à-dire les lipoxines LXA4 et LXB4, ainsi que les résolvines RvD1, RvD3 et RvD4), dans des biopsies cutanées soumises à un stress inflammatoire médié par le PMA (phorbitol myristate acétate).
Les explants cutanés sont prétraités topiquement avec l’extrait NaDES de rose préparé à l’exemple 1 (1% en formulation gel décrite ci-dessous) pendant 16h avant d'être testés par le PMA (1,5% en formulation gel décrite ci-dessous) en présence d’un nouvel extrait NaDES de rose (également préparé selon l’exemple 1) pendant 2h, 4h, 8h, 24h et 48h. La production de lipides bioactifs est quantifiée par LC-MS/MS pour chaque point temporel de culture. La cinétique de production à 5 points permet le calcul de l’aire sous la courbe pour identifier l’effet des différents extraits NaDES comparativement.
2.3. Matériels et méthodes
2.3.1. Culture cellulaire
Les explants de tissu cutané humain sont obtenus avec le consentement éclairé des patients qui subissent un rejet chirurgical, conformément aux directives éthiques de l'Institut de la Banque de Tissus (Hôpital Edouard Herriot, Lyon, France).
Les explants de peau ont été obtenus à partir de 3 biopsies de l'abdomen de donneuses caucasiennes.
Les explants de peau sont découpés en petits morceaux (biopsie à l'emporte-pièce de 10 mm) avant d'être mis dans les encarts de culture de Snapwell™ (Corning). Les explants de peau sont cultivés à 37°C dans 5% de CO2, à l'interface air-liquide, dans un milieu Prime-3D (CnT-PR-3D, CELLnTEC) complété par Normocin™ (Invivogen).
2.3.2. Stress médié par le PMA (explants contrôles)
En guise de contrôle, une partie des explants est traitée avec le PMA uniquement (explants contrôles : non traités par les extraits de NaDES de rose ou par les solvants NaDES correspondants).
Pendant la culture cellulaire, les explants de peau sont traités topiquement avec 50µl de formulation de gel contenant du PMA 1,5% (phorbitol myristate acétate ; Sigma), puis cultivés pendant 48h (explants contrôles). Les explants de peau non traités sont utilisés comme témoin interne. Les explants de peau traités topiquement par une formulation de gel sans PMA sont utilisés comme placebo.
Composition de la formulation du gel (contenant du PMA):
Eau déionisée (Sigma)............................91%
Xanthan gum (Rhodicare XC, Solvay)..........0,5%
Glycérine (Sigma)................................5
Propanediol (Zemea propanediol, DuPont)..2%
PMA (Sigma)......................................1,5
Après 48h de culture, les explants de peau contrôles sont récoltés, congelés dans de l'azote liquide et stockés à -80°C jusqu'à la quantification des lipides bioactifs.
2.3.3. Traitement actif
Les explants de peau restants sont prétraités topiquement avec les extraits NaDES de rose, ou solvants NaDES correspondants (sans extrait de rose) tels que préparés à l’exemple 1 ci-dessus et utilisés à 1% d’extrait de NaDES de rose en formulation gel) pendant 16h avant d'être soumis à un stress par le PMA (1,5% en formulation gel) en présence de nouveaux extraits NaDES de rose pendant 48h. Les explants de peau traités topiquement par formulation de gel sans extrait NaDES de rose ni PMA sont utilisés comme placebo. La composition de la formulation gel avec extrait NaDES de rose ou solvant NaDES (sans PMA) utilisée pour le prétraitement, ainsi que la composition de la formulation gel avec PMA et extrait NaDES de rose ou solvant NaDES utilisée pour le stress PMA, sont indiquées ci-après.
Par 1% d’extrait de NaDES de rose en formulation gel, on entend 1% de l’extrait NaDES (avec solvants) tel que préparé à l’exemple 1.
Les extraits NaDES de rose testés sont produits selon l’exemple 1 et sont:
- NaDES Rose FPE113
- NaDES Rose FGE115
- Solvant NaDES FPE113: mélange Fructose/ Propanediol/ Eau à un ratio molaire 1:1:3
- Solvant NaDES FGE115: mélange Fructose/ Glycérine/ Eau à un ratio molaire 1:1:5
Composition de la formulation du gel de prétraitement avec les extraits NaDES de rose, ou solvants NaDES correspondants (sans extrait de rose) tels que préparés à l’exemple 1
Eau déionisée (Sigma)..............................................91,5 %
Xanthan gum (Rhodicare XC, Solvay)............................0,5 %
Glycérine (Sigma)...................................................5 %
Propanediol (Zemea propanediol, DuPont)......................2 %
NADES ROSE GRANVILLE ou solvant NADES correspondant....1 %
Composition de la formulation du gel de traitement avec du PMA et les extraits NaDES de rose (ou solvants NaDES correspondants) tels que préparés à l’exemple 1
Eau déionisée (Sigma)...........................................90%
Xanthan gum (Rhodicare XC, Solvay)..........................0,5%
Glycérine (Sigma).................................................5%
Propanediol (Zemea propanediol, DuPont)....................2%
NADES ROSE GRANVILLE ou solvant NADES correspondant..1%
PMA (Sigma).........................................................1,5%
Les explants de peau sont récoltés, congelés dans de l'azote liquide et stockés à -80°C jusqu'à la quantification des lipides bioactifs.
2.3.4. Étude métabololipidomique
L'extraction des lipides bioactifs et l’analyse LC-MS/MS sont réalisées en utilisant les procédures opérationnelles adaptées de Le Faouder et al. (J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2013, 1, 932:123-33). En particulier, les tissus sont lysés et une extraction en phase solide est effectuée pour extraire les lipides bioactifs des explants de la peau.
L'analyse LC-MS/MS est effectuée sur un système UHPLC (Agilent LC1290 Infinity) couplé à un système MS triple quadripôle Agilent 6490 (Agilent Technologies) équipé d'une ionisation par électrospray fonctionnant en mode négatif.
2.4. Résultats et statistiques
Les résultats sont montrés par les figures 1 à 3. Ils sont exprimés en quantité de lipides en µg/mg de tissu cutané. L'aire sous la courbe (AUC) est calculée selon la règle du trapèze. Les données sont exprimées sous forme de moyenne ± l'erreur standard de la moyenne (MEB) de 3 expériences indépendantes. Les résultats obtenus avec les explants traités avec les extraits de NaDES de rose ou avec les solvants NaDES correspondants sont normalisés par rapport aux résultats obtenus avec les explants contrôles traités par la formulation PMA uniquement.
Les données montrent que l’extrait de NaDES de rose FPE 113 induit la production des lipoxines LXA4 et LXB4 dans les explants de peau issus d’un donneur jeune (24 ans), de manière significativement supérieure au solvant NaDES FPE 113 (solvant NaDES sans extrait de rose ; Figures 1A et 1B).
Les figures 2A et 2B montrent que l’extrait de NaDES de rose FPE 113 induit la production des résolvines RvD1 et RvD3 dans les explants de peau issus d’un donneur âgé (62 ans). Les niveaux d’induction obtenus avec l’extrait de NaDES de rose FPE 113 sont significativement supérieurs à ceux obtenus avec le solvant NaDES FPE 113 (solvant NaDES sans extrait de rose).
Les figures 3A et 3B montrent que l’extrait de NaDES de rose FPE 113 et l’extrait de NaDES de rose FGE 115 induisent une augmentation importante de la production des résolvines RvD3 et RvD4 dans les explants de peau issus d’un donneur jeune (24 ans). Les niveaux d’induction obtenus avec l’extrait de NaDES de rose FPE 113 et l’extrait de NaDES de rose FGE 115 sont significativement supérieurs à ceux obtenus avec le solvant NaDES FPE 113 et le solvant NaDES FGE 115 (solvant NaDES sans extrait de rose), respectivement. En outre, l’extrait de NaDES de rose FGE 115 induit la production des résolvines RvD3 et RvD4 de manière significativement plus élevée que l’extrait de NaDES de rose FPE 113.
Les données obtenues montrent en premier lieu que les effets stimulants obtenus sont dûs aux extraits de NaDES de rose et non pas à un effet des solvants NaDES.
L’ensemble de ces données révèle que les extraits de NaDES de rose FPE 113 et FGE 115 sont capables de stimuler les lipoxines. Les lipoxines favorisent notamment une efficacité de résolution à un stade précoce. Ainsi, l'activité stimulante des extraits de NaDES de rose FPE 113 et FGE 115 selon l’invention sur les lipoxines permet donc un retour précoce et efficace des tissus cutanés à l'homéostasie.
En outre, ces résultats mettent en évidence l’effet stimulant des extraits de NaDES de rose FPE 113 et FGE 115 sur les résolvines de la série D, à la fois dans la peau jeune et dans la peau de donneur plus âgé. Ces résolvines de la série D sont connues pour améliorer la résistance naturelle de la peau au stress.
Ces résultats sur la modulation de l’expression de marqueurs de la résolution mesurés dans de la peau de donneurs jeunes et âgés révèlent la puissance des extraits de NaDES de rose FPE 113 et FGE 115 selon l’invention.
Ainsi, les extraits de NaDES de rose FPE 113 et FGE 115 selon l’invention accompagnent efficacement la régénération et les réactions de défense naturelles de la peau à la fois chez les peaux jeunes et chez les peaux matures. En particulier, les données montrent que les extraits de NaDES de rose FPE 113 et FGE 115 selon l’invention peuvent être utilisés pour soutenir les propriétés apaisantes de la peau chez les peaux jeunes pour éviter l’accumulation de méfaits dus à des phases de défenses naturelles excessives mal résolues ainsi que les propriétés protectrices et réparatrices de la peau chez les peaux matures.
EXEMPLE 3 : Effets des NaDES de rose sur l’expression
de gènes dans des kératinocytes humains normaux (carte TLDA)
L’impact de l’extrait NaDES de rose selon l’invention a été vérifié sur l’expression de gènes impliqués dans la différenciation, la barrière cutanée, les lipides de la peau, la desquamation, l’adhésion, la cohésion, la communication des cellules de la peau, l’hydratation, la détoxification et la protection antioxydante.
3.1. Matériels et méthodes
3.1.1. NaDES de Rose
Des kératinocytes humains normaux (KHN) sont mis en culture puis traités avec les extraits NaDES de rose, ou solvants NaDES correspondants (sans extrait de rose) préparés à l’exemple 1 à 0,03% dans le milieu de culture), ou avec de l’acide rétinoïque (RA) à 1μM (0,3% dans le milieu de culture).
Après traitement des KHN, une étude par Taqman Low Density Array (TLDA) sur les gènes étudiés est effectuée à partir des ADNc obtenus après transcription inverse des ARN totaux extraits.
Les extraits NaDES de Rose testés sont produits selon l’exemple 1 et sont:
- NaDES Rose FPE113,
- NaDES Rose FGE115,
- Solvant NaDES FPE113: mélange Fructose/ Propanediol/ Eau à un ratio molaire 1:1:3
- Solvant NaDES FGE115: mélange Fructose/ Glycérine/ Eau à un ratio molaire 1:1:5
3.1.2. Culture des KHN
Les kératinocytes humains normaux sont issus d’un prélèvement cutané issu de chirurgie plastique. Les cellules sont cultivées sur du milieu Epilife complet à P5 avec une densité d’ensemencement de 50.000 cellules par puits, dans des plaques 12 puits. A sub-confluence, les cellules sont traitées 24 heures avec les doses d’extraits de NaDES de rose décrites ci-dessus.
3.1.3. RT-PCR quantitative en temps réel
Obtention des ARN totaux
Le milieu de culture des cellules est éliminé, et 250 µL de tampon de lyse RLT (fourni dans le kit Nucleospin RNA trace, Macherey-Nagel) sont ajoutés. Les cellules sont raclées à l’aide d’un Cell Scraper puis, le lysat cellulaire est récupéré. Les ARN totaux sont extraits selon les protocoles définis (kit Nucleospin RNA).
Les solutions d’ARN totaux obtenues sont dosées, et leur qualité vérifiée, à l'aide d'un lecteur de microplaques, le spectrostarNANO (BMG Labtech) couplé au MicrolabSTAR. Cet appareil est relié à l'ordinateur pilotant la plateforme Robotique et possède le logiciel spécifique d'analyse des résultats (logiciel MARS). La technique nécessite une micro-plaque de 384 puits (LoBase), un contrôle positif (RNA 250, AM7155, Thermofisher) permettant de valider les pipetages réalisés par le robot ainsi que les valeurs générées par le lecteur spectrostarNANO.
Synthèse des ADN complémentaires
Le kit de reverse transcription (RT) utilisé est le High Capacity Reverse Transcription Kit (Thermo Fisher). Il a été utilisé selon le protocole fourni. 500 ng d’ARN totaux sont dilués dans de l’eau pour un volume final de 25 µL. Ils sont ensuite incubés pendant 10 minutes à 25°C puis 2 heures à 37°C en présence de 25 µL de mélange réactionnel de High Capacity Reverse Transcription Kit 2X préalablement préparé comme indiqué ci-dessous (Tableau 4). Les différentes incubations sont faites au sein du TRobot (Biométra).
Tableau 4 : Mélange réactionnel High Capacity Reverse Transcription Kit 2X pour 1 réaction
| Réactifs | RT tampon | dNTP | Primer | RNase OUT | RT | H2O |
| Volume | 5 µL | 2 µL | 5 µL | 0,5 µL | 2,5 µL | 10 µL |
PCR-TaqMan Low Density Array
15 µL de chaque RT sont mélangés à 60 µl d’eau puis 75 µL de TaqMan Gene Expression master mix (ThermoFisher), contenant l’ADN polymérase, sont ajoutés. Après homogénéisation, 100 µL sont déposés sur les cartes microfluidiques contenant les sondes correspondant aux gènes testés (tableau 5 ci-dessous), ces dernières sont centrifugées puis scellées. Le CD Rom correspondant au profil des gènes déposés sur les plaques est chargé dans le logiciel SDS 2.3, précisant l’emplacement de chaque gène sur la carte. Le gène contrôle (ou « endogeneous » gene) à utiliser pour la normalisation des résultats est à indiquer avant le lancement de la PCR. Cette dernière est réalisée selon le protocole fourni par Applied Biosystems dans l’appareil ABI Prism 7900HT Sequence detection system. Les étapes de la qPCR sont 2 min à 50°C, 10 min à 94,5°C puis 30s à 97°C et 1 min à 59,7°C pour 40 cycles.
Tableau 5 : liste des gènes présents sur la carte microfluidique.
| Gène | Symbole | Référence TaqMan | RefSeq N° d’accession GeneBank |
| Filagrine | FLG | Hs00856927_g1 | NM_002016 |
| Transglutaminase 1 | TGM1 | Hs00165929_m1 | NM_000359 |
| Kallikrein related peptidase 7 | KLK7 | Hs00192503_m1 | NM_001207053.1 NM_001243126.1 NM_005046.3 NM_139277.2 |
| Cornifine | SPRR1 b | Hs00824893_m1 | NM_003125.2 |
| Céramide synthase 3 | CERS3 | Hs00698859_m1 | NM_001290341.2 NM_001290342.2 NM_001290343.1 NM_178842.4 |
| Cytokératine 1 | KRT1 | Hs00196158_m1 | NM_006121.3 |
| Zinc Finger Protein 750 ou Epigenin | ZNF750 | Hs00363852_m1 | NM_024702 |
| Connexin 43 | GJA1 | Hs00748445_s1 | NM_000165.4 |
| Desmogleine 1 | DSG1 | Hs00170047_m1 | NM_001942.3 |
| Occludine | OCLN | Hs00170162_m1 | NM_001205254.2 |
| Claudine 1 | CLDN1 | Hs00221623_m1 | NM_021101.4 |
| Neurogenic locus notch homolog protein 1 | NOTCH1 | Hs00413187_m1 | NM_017617 |
| Aquaporine 3 | AQP3 | Hs00185020_m1 | NM_004925 |
| Aquaporine 9 | AQP9 | Hs00175573_m1 | NM_002638.3 |
| Aquaporine 10 | AQP10 | Hs00369738_m1 | NM_080429 |
| Fatty Acid Binding Protein 5 | FABP5 | Hs00192700_m1 | NM_005094.3 |
| ATP-binding cassette sub-family A (ABC-1), member 12 | ABCA12 | Hs00292421_m1 | NM_015657 |
| Methionine sulfoxide reductase B1 (SELX) | MSRB1 | Hs00249482 | NM_016332 |
| Multidrug-Resistance like Protein 2 | ABCC2 | Hs00166123_m1 | NM_000392 |
| Solute carrier family 2 (facilitated glucose transporter), member 1 | SLC2A1 | Hs00892681_m1 | NM_006516 |
| Glyceraldehyde-3-phosphate Dehydrogenase | GAPDH | Hs99999905_m1 | NM_002046 |
Analyses statistiques
La PCR quantitative en temps réel peut être exploitée si son efficacité est comprise entre 90% et 110%. Pour chaque échantillon, le nombre de cycles auquel apparaît le signal est déterminé par le logiciel SDS 2.3. Pour un même essai, les niveaux d’expression des transcrits d’intérêt obtenus sont normalisés par rapport à la valeur obtenue pour le gène de ménage Beta-2-microglobuline. Ce gène dont l’expression est constitutive et invariante permet de s’affranchir toutes variations induites au cours de l’expérience (dosage des ARNs totaux, pipetages, étape de réverse transcription, PCR dans l’appareillage).
Dans la méthode de RT-PCR TLDA, la quantification est effectuée en utilisant la méthode comparative de ΔΔCt. Les valeurs de quantification relative (RQ) obtenues correspondent au niveau d’amplitude (x fois plus ou moins que le contrôle) de l’expression par rapport à notre contrôle ici le non irradié. Le RQ est obtenu par le calcul suivant où le contrôle est égal à 1:
RQ = 2-ΔΔCt = 2-(ΔCt traité - ΔCt non traité)
ΔCt traité = Ct gène cible traité – Ct gène de ménage traité
ΔCt non traité Ct gène cible non traité – Ct gène de ménage non traité
Afin d’évaluer des variations d’activité transcriptionnelle statistiquement significative, nous utiliserons le test t de Student. Chaque condition est réalisée en triplicat (3 non traités et 3 traités dans les mêmes conditions). Le test-F de Fischer est tout d’abord appliqué en comparant les deux matrices de données. Lorsque la valeur est supérieure à α = 0,05 alors la variance pour le test t de Student est de 2, lorsque le test-F de Fischer est inférieur à α = 0,05 alors la variance sera égale à 3. Les variations transcriptionnelles retenues seront celles qui ont un test t de Student inférieur à α = 0,05.
Les résultats sont présentés en moyenne sur n=3. Le test t de Student a été utilisé pour comparer l’effet entre les cellules traitées et non traitées.
Les résultats sont considérés comme significatifs pour p<0,05(*) ou p<0,01(**).
3.2. Résultats
Les résultats obtenus sont récapitulés dans le tableau 6 ci-dessous. Les valeurs indiquées dans le tableau correspondent au rapport : niveaux d’expression mesurés avec l’extrait de NaDES de rose à 0,03% / niveaux d’expression mesurés avec le solvant NaDES correspondant (sans extrait de rose) à 0,03%.
Tableau 6 : liste des gènes présents sur la carte microfluidique.
| 115 FGE 0.03% | 113 FPE 0.03% | |||
| Type Gènes | Gène | Symbole | ||
| Différenciation/ Barrière cutanée/ Lipides/ Desquamation |
Filagrine | FLG | 2,190 | 1,626 |
| Transglutaminase 1 | TGM1 | 1,981 | 1,800 | |
| Kallikrein related peptidase 7 | KLK7 | 2,420 | 2,349 | |
| Small Prolin-Rich Protein 1B (Cornifin) | SPRR1B | 2,680 | 2,607 | |
| Céramide synthase | CERS3 | 1,671 | 1,612 | |
| Cytokératine 1 | KRT1 | 4,040 | 4,021 | |
| Zinc Finger Protein 750 ou Epigenin | ZNF750 | 3,680 | 3,215 | |
| Adhésion/Cohésion/Communication |
Connexin 43 | GJA1 | 1,525 | 2,065 |
| Desmoglein | DSG1 | 3,452 | 3,672 | |
| Occludin | OCLN | 1,571 | 1,858 | |
| Claudin-1 | CLDN1 | 1,505 | 1,924 | |
| Neurogenic locus notch homolog protein 1 | NOTCH1 | 1,572 | 1,592 | |
| Hydratation-Eau-Solutés-Lipides |
Aquaporine 3 | AQP3 | 2,455 | 2,319 |
| Aquaporine 9 | AQP9 | 2,522 | 1,991 | |
| Aquaporine 10 | AQP10 | 2,385 | 2,075 | |
| Fatty acid binding protein 5 | FABP5 | 2,877 | 3,485 | |
| ATP-binding cassette sub-family A (ABC-1), member 12 | ABCA12 | 1,512 | 1,560 | |
| Détoxification/ Protection anti-oxydante |
Methionine sulfoxide reductase B1 (SELX) | MSRB1 | 1,648 | 1,651 |
| Multidrug-Resistance like Protein 2 | ABCC2 | 1,953 | 1,596 | |
| Oxygénation | Solute carrier family 2 (facilitated glucose transporter), member 1 | SLC2A1 | 1,978 | 2,206 |
| Gène de ménage (contrôle) | Glyceraldehyde-3-phosphate Dehydrogenase | GAPDH | - | - |
Les données montrent que les extraits de NaDES de rose FPE 113 et FGE 115 selon l’invention, appliqués sur les KHN, induisent l’expression de l’ensemble des différents gènes testés que sont les gènes de la différenciation/barrière cutanée/lipides/desquamation, les gènes de l’adhésion/cohésion/communication, les gènes de l’hydratation-eau-solutés-lipides, les gènes de la détoxification/protection antioxydante et les gènes de l’oxygénation.
De même, les données montrent que, comme attendu, le traitement des KHN avec les extraits de NaDES de rose FPE 113 et FGE 115 selon l’invention n’a aucun effet (signe -) sur les niveaux d’expression du gène contrôle (GAPDH).
Ainsi, l’ensemble de ces résultats biologiques mettent en évidence les propriétés de stimulation des gènes cibles impliqués dans les fonctions barrière/différenciation, adhésion/cohésion, hydratation et détoxification/oxygénation des cellules de la peau, par les extraits de NaDES de rose selon l’invention.
Ces données démontrent que les extraits de NaDES de rose FPE 113 et FGE 115 selon l’invention accompagnent efficacement la régénération et les réactions de défense naturelles de la peau à la fois chez les peaux jeunes et chez les peaux matures. En particulier, les données confirment que les extraits de NaDES de rose FPE 113 et FGE 115 selon l’invention peuvent être utilisés pour prévenir, chez les peux jeunes, les effets délétères dus à l’activation chronique, excessive des réactions de défense naturelle (en particulier, rôle des marqueurs précoces tels que les lipoxines) et chez les peaux matures, pour bénéficier de la réparation (surexpression des marqueurs tels que les résolvines).
EXEMPLE 4 : Exemples de compositions cosmétiques
Des exemples de formulations sont décrits ci-après sans que cela ne soit limitatif. Les pourcentages sont des pourcentages pondéraux exprimés en poids par rapport au poids total de la composition.
4.1. Composition sous la forme d’une émulsion
Phase aqueuse :
Eau déminéralisée qsp 100%
Glycols 20%
Conservateurs 0,6%
Chélatant 0,04%
Carbomer (Carbopol® 981) 0,3%
Sodium polyacrylate (Covacryl® MV60) 0,2%
Sodium Hydroxyde 0,15%
Extrait NaDES FPE 113 de rose lyophilisée selon l’invention * 3%
Phase grasse:
Huile végétale, esters, silicones 16%
Anti-oxydant 0,2%
Concentré de parfum 0,4%
Steareth-2 0,8%
Steareth-21 1,5%
*tel que décrit dans l’exemple 1 ci-dessus.
La composition est préparée selon le mode opératoire suivant :
- les gélifiants sont dispersés dans la phase aqueuse (hors extrait NaDES de rose et sodium hydroxyde) qui est portée à 70°C ;
- la phase grasse (hors concentré de parfum, antioxydant et) est chauffée à 70°C ;
- l’émulsion est réalisée par introduction de la phase grasse dans la phase aqueuse sous forte agitation ;
- les gélifiants sont neutralisés par ajout de sodium hydroxyde et l’émulsion est refroidie sous agitation modérée avec introduction du concentré de parfum, de l’antioxydant et de l’extrait NaDES de rose à basse température.
Une application de cette composition sur la peau du visage diminue la réactivité de la peau, favorise la régénération de la peau et l’effet anti-âge, et améliore le métabolisme lipidique, la barrière cutanée et l’hydratation.
4.2. Composition sous la forme d’une dispersion solide de corps gras, de forme sphérique ou sphéroïde
Phase aqueuse :
Eau déminéralisée qsp100%
Extrait NaDES FGE 115 de rose lyophilisée selon l’invention * 3.00%
Phenoxyethanol 0.42%
Gomme de xanthane 0.36%
Phase grasse:
C10-18 triglycerides 38.84%
Anti Oxydant 0.1%
*tel que décrit dans l’exemple 1 ci-dessus.
La composition est préparée selon le mode opératoire suivant :
- chauffage de la cire (C10-18 triglycérides = Lipocire de Gatefossé) au-dessus de son point de fusion (quelques degrés) avec l’antioxydant;
- la phase grasse fondue est versée sous agitation dans de l’eau préalablement chauffée à la même température que la phase grasse ;
- l’ensemble est maintenu sous agitation par un système rotatif pendant quelques minutes jusqu’à obtenir la taille de gouttelettes souhaitée ;
- la dispersion obtenue est rapidement refroidie par addition d’eau glycolée préalablement refroidie (environ -4°C) pour solidifier les sphéroïdes lipidiques ;
- l’agitation est arrêtée lorsque les sphéroïdes sont solidifiés puis sont récupérés à la surface ou filtrés ;
- la phase aqueuse est préparée en mélangeant l’eau , la gomme de xanthane , le conservateur et l’extrait NaDES de rose ;
- les sphéroïdes sont récupérés à la surface et incorporés dans le gel de xanthane contenant l’extrait NaDES de rose.
Une application de cette composition sur la peau du visage diminue la réactivité de la peau, favorise la régénération de la peau et l’effet anti-âge, et améliore le métabolisme lipidique, la barrière cutanée et l’hydratation.
4.3. Composition sous la forme de gouttes huileuses stabilisées par une membrane polymérique en surface, dans une phase aqueuse gélifiée
Phase aqueuse:
Eau déminéralisée qsp 100%
Glycols 20%
Conservateurs 0,6%
Chélatant 0,04%
Sodium polyacrylate (Covacryl® MV60) 0,2%
Sodium Hydroxyde 0,15%
Extrait NaDES FPE 113 de rose congelée selon l’invention * 3%
Phase grasse :
Huile végétale, esters, silicones 16%
Anti-oxydant 0,2%
Concentré de parfum 0,4%
Amodimethicone (Dow Corning 2-8566 aminofluid®) 0, 07%
*tels que décrits dans l’exemple 1 ci-dessus.
La composition est préparée selon le mode opératoire suivant :
- les gélifiants sont dispersés dans la phase aqueuse hors extrait NaDES de rose et sodium hydroxyde,
- l’émulsion est réalisée à T°C ambiante par introduction de la phase grasse dans la phase aqueuse sous forte agitation,
- les gélifiants sont neutralisés par ajouts de sodium hydroxyde avant introduction de l’extrait NaDES de rose.
Une application de cette composition sur la peau du visage diminue la réactivité de la peau, favorise la régénération de la peau et l’effet anti-âge, et améliore le métabolisme lipidique, la barrière cutanée et l’hydratation.
4.4. Composition sous la forme d’un gel aqueux pour le visage
Extrait NaDES FGE 115 de rose congelée selon l’invention * 80.00%
Conservateurs 0,50%
Sucre 0,20%
Carbomer 0,70%
Eau purifiée Qsp 100%
EDTA tetrasodique poudre 0,20%
Sodium hydroxide 0,17%
* tel que décrit dans l’exemple 1 ci-dessus
L’extrait NaDES de rose selon l’invention et les conservateurs sont mélangés et homogénéisés à température ambiante sous agitation. Les sucres sont ajoutés sous agitation, puis le carbomer, puis l’eau et l’EDTA sous agitation. Le gel aqueux est ensuite neutralisé avec l’ajout d’hydroxyde de sodium sous agitation jusqu’à l’obtention d’un gel homogène.
Appliqué sur la peau du visage, ce gel aqueux corrige les sècheresses cutanées et le teint terne ou inhomogène, diminue la réactivité de la peau, augmente la réaction de défense naturelle de la peau et contribue à la jeunesse de la peau.
4.5. Composition sous la forme d’un gel-sérum micronutritif pour le contour des yeux
Eau purifiée Qsp 100.00%
Glycols 13,0%
Conservateurs 0,60%
Carbomer 0,80%
Glyceryl stearate citrate 0,70%
Isostearate isostearyle 9,0%
Silice 2,0%
Nacres 1,0%
Extrait NaDES FPE 113 de rose lyophilisée selon l’invention*3,0%
Tocopheryl acetate 0,10%
* tels que décrits dans l’exemple 1 ci-dessus.
Les ingrédients de la phase aqueuse (l’eau, les glycols et le carbomer) sont mélangés à 80°C sous agitation. On ajoute ensuite les conservateurs, puis les gélifiants à 80°C sous agitation puis la température est abaissée à 75°C. Puis les tensioactifs sont émulsionnés dans la phase aqueuse sous agitation. Les charges et nacres, préalablement empâtées et homogénéisées, sont ajoutées à 40°C. Sont ensuite ajoutés à 40°C l’extrait NaDES de rose selon l’invention, sous agitation jusqu’à 30°C.
Après application sur le contour des yeux de ce gel-sérum contribue à défroisser rides et ridules, la zone du regard est raffermie, l’apparence des cernes et des poches est atténuée. La jeunesse du regard se reconstitue au fil des applications.
4.6. Baume à lèvres
Silice 10%
Poudre de nylon 7%
Cire de polyéthylène 17%
Glycérine 14%
Extrait NaDES FGE 115 de rose lyophilisée selon l’invention *
3,0%
Myristate d’isopropyle Qsp 100%
Cette composition est préparée par mélange des ingrédients selon les méthodes classiques de formulation des baumes.
Ce baume à lèvres, après application sur des lèvres sèches et/ou fragiles, permet de les régénérer, les protéger, les hydrater et les lisser.
Claims (10)
- Extrait de rose obtenu par la mise en contact d’un échantillon de rose avec un solvant naturel eutectique profond ou NaDES (pour « Natural Deep Eutectic Solvent ») liquide à température ambiante, caractérisé en ce que ledit NaDES consiste en un mélange de sucre, de polyol et d’eau dans un ratio molaire allant de 1 :1 :3 à 1 :1 :5, dans lequel l’échantillon de rose est de préférence choisi parmi les fleurs de rose, le bois de rose, les fruits de rose, les bourgeons de rose, les feuilles de rose, les racines de rose, et un mélange quelconque de ceux-ci, de préférence les fleurs de rose.
- Extrait de rose selon la revendication 1, caractérisé en ce que :
- le sucre est choisi dans le groupe comprenant le fructose, le glucose, le lactose, le sucrose, le xylose, le galactose et le tréhalose, de préférence le glucose et le fructose, de préférence encore le fructose, et
- le polyol est choisi parmi le glycérol, le sorbitol, le xylitol, le mannitol, l’inositol, le butylène glycol, le propanediol et l’isosorbide, de préférence le glycérol, le sorbitol, le xylitol, le butylène glycol, ou le propanediol, de préférence encore le glycérol ou le propanediol, de préférence encore le propanediol.
- Extrait de rose selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que le NaDES consiste en un mélange de fructose, propanediol et eau dans un ratio molaire 1 :1 :3.
- Extrait de rose selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que le NaDES consiste en un mélange de fructose, glycérol et eau dans un ratio molaire 1 :1 :5.
- Extrait de rose selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que les roses sont des roses de la variété Evanrat.
- Composition comprenant au moins un extrait de rose tel que défini dans l’une quelconque des revendications précédentes, et optionnellement en outre au moins un ingrédient choisi parmi une huile, un gélifiant, et un tensioactif.
- Composition selon la revendication 6, caractérisée en ce qu’il s’agit d’une émulsion, d’un sérum, d’une huile, ou d’une crème.
- Procédé cosmétique de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques, en particulier de la peau et/ou des lèvres, comprenant l’application, sur lesdites matières kératiniques, d’au moins une composition cosmétique selon la revendication 6 ou 7.
- Procédé cosmétique selon la revendication 8, caractérisé en ce que la composition est appliquée sur des peaux et/ou des lèvres saines en ayant besoin, pour améliorer la régénération cellulaire, améliorer la cohésion et/ou la différenciation épidermique, améliorer le renouvellement épidermique, renforcer la fonction barrière cutanée, améliorer l’hydratation, améliorer le lissage de la peau, améliorer l’éclat et/ou l’homogénéité de la peau, renforcer la résistance de la peau au stress oxydatif, et/ou prévenir et/ou diminuer la formation des rides et/ou ridules.
- Utilisation cosmétique non thérapeutique d’un extrait de rose selon l’une quelconque des revendications 1 à 5, comme agent destiné à améliorer la régénération cellulaire, améliorer la cohésion et/ou la différenciation épidermique, améliorer le renouvellement épidermique, renforcer la fonction barrière cutanée, améliorer l’hydratation, améliorer le lissage de la peau, , améliorer l’éclat et/ou l’homogénéité de la peau, renforcer la résistance de la peau au stress oxydatif, et/ou prévenir et/ou diminuer la formation des rides et/ou ridules.
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