FR3011739A1 - Utilisation cosmetique de la dermcidine, analogues ou fragments de celle-ci pour prevenir et/ou traiter les odeurs corporelles ainsi que pour le diagnostique des sueurs odorantes - Google Patents

Abstract

La présente invention a pour objet l'utilisation cosmétique de la Dermcidine, analogues ou fragments de celle-ci ou d'une composition la contenant pour prévenir et/ou traiter les odeurs corporelles, particulièrement des aisselles et des pieds ainsi que pour le diagnostique des sueurs odorantes. Elle concerne également un procédé d'application de la composition cosmétique précitée pour prévenir et/ou traiter les odeurs corporelles. La présente invention a, également, pour objet l'utilisation d'un biomarqueur pour le diagnostic des sueurs odorantes.

Description

« Utilisation cosmétique de la Dermcidine, analogues ou fragments de celle-ci pour prévenir et/ou traiter les odeurs corporelles ainsi que pour le diagnostique des sueurs odorantes.» La présente invention a pour objet l'utilisation cosmétique de la Dermcidine, analogues ou fragments de celle-ci ou d'une composition la contenant pour prévenir et/ou traiter les odeurs corporelles, particulièrement des aisselles et des pieds ainsi que pour le diagnostique des sueurs odorantes.

Elle concerne également un procédé d'application de la composition cosmétique précitée pour prévenir et/ou traiter les odeurs corporelles. La présente invention a, également, pour objet l'utilisation d'un biomarqueur pour le diagnostic des sueurs odorantes. Elle concerne en outre un procédé de criblage d'agents actifs susceptibles de prévenir ou traiter les odeurs corporelles. Au sens de l'invention, on entend désigner par « peau » l'ensemble de l'épiderme du corps humain. Plus particulièrement, la peau considérée dans la présente invention est de préférence la peau des aisselles, du cuir chevelu, des pieds et de façon préférée la peau des aisselles. 30 La définition d'« odeurs corporelles » au sens de l'invention est donnée dans l'ouvrage « Cosmetic Science and Technology Series » - 1988 / Volume 7 chap.10 - Mc. Les « odeurs corporelles » au sens de l'invention sont dues à une sueur odorante. 25 L'anatomie et la physiologie de la peau varient d'une partie à l'autre du corps. Mais quelle que soit la région anatomique, la peau contient des glandes sébacées et sudoripares dont les excrétions sont constituées entre autres d'eau, d'acides aminés, d'urée, d'électrolytes et/ou d'acides gras spécifiques. Outre que ces excrétions représentent un excellent milieu nutritif pour l'ensemble de la flore, principalement bactérienne, qui colonise la peau, leurs composants une fois au contact de l'air subissent des réactions chimiques comme par exemple l'oxydation, qui les dégradent et donnent naissances à des produits responsables d'odeurs corporelles qui peuvent parfois s'avérer gênantes.

Dans le domaine cosmétique, il est bien connu d'utiliser en application topique des produits déodorants contenant des substances actives de type anti-transpirant pour diminuer, voire supprimer, les odeurs corporelles, en particulier les odeurs axillaires, généralement désagréables. Cependant, les excrétions cutanées ne sont pas les seules responsables des odeurs corporelles dues aux sueurs odorantes. La flore cutanée elle-même en est en partie responsable.

La microflore axillaire est principalement composée de bactéries Gram+, comme les staphylocoques (e.g., S.epidermidis, S.hominis, etc.), les corynéformes (plus particulièrement C.xerosis), les microcoques (e.g., M.Luteus), de Brevibacteries et de Propionib acteries.

Les produits bactéricides classiquement utilisés en vue d'obtenir une bonne efficacité déodorante entraînent la destruction sans distinction de la flore cutanée totale. Afin d'obtenir une efficacité déodorante sans altérer l'équilibre de la flore microbienne il est nécessaire d'utiliser de nouveaux actifs sans les inconvénients des substances actives antérieurement employées dans les compositions déodorantes.

Or, la Demanderesse a découvert avec étonnement que la Dermcidine, peptide antimicrobien naturel, et particulièrement les isoformes 1 (DCD-1) et 2 (DCD-2), et de manière préférée des peptides issus du clivage des isoformes DCD1 et DCD2 permet d'atteindre ce but. Son utilisation ou bien l'utilisation d'actifs augmentant sa synthèse pourraient donc être utilisés dans une composition cosmétique ou dermatologique, en particulier en tant qu'actif anti-odeur. L'invention a donc pour objet l'utilisation d'une composition cosmétique contenant au moins une séquence d'acides aminés de la Dermcidine, et plus particulièrement de ses isoformes 1 et 2 (DCD-1 et DCD-2), ou d'un peptide dérivé de cette protéine, un analogue ou un fragment de celle-ci ou une séquence d'acides nucléiques codant pour un peptide conforme à l'invention pour prévenir et/ou traiter les odeurs corporelles, particulièrement des aisselles, du cuir chevelu et des pieds, ainsi que pour le diagnostique des peaux odorantes.

L'invention concerne également un procédé de traitement cosmétique, dans lequel on applique sur la peau, une composition cosmétique comprenant une séquence d'acides aminés de la Dermcidine, et plus particulièrement de son isoforme 1 ou 2, d'un analogue ou d'un fragment de celui-ci et/ou de manière préférée au moins un peptide conforme à l'invention, au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour un peptide conforme à l'invention, ou au moins un agent modulateur de l'expression ou de l'activité, notamment biologique, dudit peptide.

Un autre aspect de l'invention est l'utilisation de la Dermcidine, et plus particulièrement de son isoforme 1 ou 2, d'un analogue ou d'un fragment de celui-ci et/ou de manière préférée au moins un peptide conforme à l'invention, au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour un peptide conforme à l'invention, notamment à titre de biomarqueur pour le diagnostique d'une peau et/ou d'une sueur odorante.

De façon préférée, l'utilisation de la Dermcidine, et plus particulièrement de son isoforme 1 ou 2, d'un analogue ou d'un fragment de celui-ci et/ou de manière préférée au moins un peptide conforme à l'invention, au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour un peptide conforme à l'invention à titre de biomarqueur pour l'évaluation du niveau d'odeur de la peau, et/ou de la sueur. Elle concerne en outre un procédé de criblage d'agents actifs susceptibles de moduler l'expression ou l'activité, notamment biologique, dudit peptide. Dermcidine La Dermcidine/Protease Inducing Factor (DCD/PIF) est une protéine de 110 aa comportant un peptide signal de 19aa dont le gène est localisé sur le chromosome 12, locus 12q13.1 et qui est exprimée de façon constitutive dans la glande sudoripare (Rieg, Garbe et al. 2004). De plus, deux isoformes sont recensées dans la base UniProt l'une plus courte, l'isoforme 1 (DCD-1) l'autre plus longue isoforme 2 (DCD-2). Elle est secrétée dans la sueur (Schittek, Hipfel et al. 2001). Après un processing post-traductionnel protéolytique (essentiellement par la cathepsine D) qui a lieu dans la sueur (Baechle, Flad et al. 2006), le précurseur protéique donne naissance à de nombreux peptides dont la longueur varie de 25 à 48 aa (Flad, Bogumil et al. 2002). Certains de ces peptides montrent des activités antimicrobiennes contre des microorganismes de type S. aureus, E. coli, Enterococcus faecalis, Candida albicans... Les peptides antimicrobiens sont dérivés de la partie C-terminale de la protéine. L'activité de ces peptides est indépendante de leur charge (Steffen, Rieg et al. 2006) et passerait par une étape d'interaction avec les phospholipides bactériens (Li, Rigby et al. 2009). La partie N-terminale de la protéine est constituée d'un facteur biologiquement actif favorisant la survie cellulaire (Cunningham, Hodge et al. 1998). La diminution de la DCD observée dans la sueur des atopiques peut expliquer en partie les susceptibilités microbiennes de ce type de peaux (Rieg, Steffen et al. 2005). Certains de ses fragments antimicrobiens ainsi que de sa partie Nter sont capables de stimuler la production de cytokines/chemokines par des kératinocytes ou d'autres types cellulaires l'impliquant encore plus dans la régulation de l'immunité cutanée (Watchorn, Dowidar et al. 2005; Niyonsaba, Suzuki et al. 2009). Une publication récente fait état de l'utilisation de la DCD comme un marqueur spécifique particulièrement sensible de la présence de traces de sueur par RT-PCR ou par ELISA utilisable dans le domaine médico-légal (Sakurada, Akutsu et al. 2009).

Séquences d'acides aminés et d'acides nucléiques La Dermcidine ou Preproteolysin (DCD) est une protéine de 110 acides aminés (SEQ ID NO: 1) comportant un peptide signal de 19 acides aminés (SEQ ID NO:3) dont le gène est localisé sur le chromosome 12, locus 12q13.1. Deux isoformes de cette protéine sont recensées, l'une plus courte, isoforme 1 (SEQ ID NO:4), l'autre plus longue, isoforme 2 (SEQ ID NO: 5). Après clivage du peptide signal, la Dermcidine (DCD) est une protéine de 90 acides aminés selon la séquence SEQ ID NO : 2.

Après une maturation post-traductionnelle protéolytique, essentiellement par la Cathepsine D, qui a lieu dans la sueur (Baechle, Flad et al., 2006), ce précurseur protéique donne naissance à de nombreux peptides dont la longueur varie de 25 à 48 aa (Flad, Bogumil et al., 2002). Parmi ces peptides les inventeurs ont mis en évidence que certains d'entre eux étaient fortement sous-exprimés dans les sueurs odorantes.

Dermcidin 1 (DCD1) SEQ ID NO 4 SSLLEKGLDGAKKAVGGLGKLGKDAVEDLESVGKGAVHDVKDVLDSVL SEQ ID NO 6 AVEDLESVGKGAVH SEQ ID NO 7 AVH DVKDVLDS SEQ ID NO 8 DVKDVLDS SEQ ID NO 9 ESVGkGAVH DVKDVLDSV SEQ ID NO 10 VEDLESVGkGAVHDVKDVL SEQ ID NO 11 VH DVKDVLD SEQ ID NO 12 AVH DVkDVLDS SEQ ID NO 13 GAVHDVkDVLDS SEQ ID NO 14 G kDAVEDLESVG kGA SEQ ID NO 15 G KGAVH DVKDVLDS SEQ ID NO 16 IESVG kGAVHDVkD SEQ ID NO 17 SVG kGAVHDVkDVLDSV SEQ ID NO 18 VEDLESVG kGAVH DV SEQ ID NO 19 Dermcidin 2 (DCD2) SEQ ID NO 5 SSLLEKG LDGAKKAVG G LG KLG KDAVEDLESVG KG G EER LVFGAPVN LTSI PLTSVSRP SEQ ID NO 20 APVNLTSIPLTSVSRP SEQ ID NO 21 ESVGkGGEER SEQ ID NO 22 FGAPVN LTSIPLTSVSRP SEQ ID NO 23 VFGAPVNLTSI PLTSVSRP SEQ ID NO 24 LESVGKGGEER SEQ ID NO 25 GAPVN LTSIPLTSVSRP SEQ ID NO 26 Parmi les peptides issus de la maturation de la Dermcidine, comme décrit dans US 2008/020976, certains montrent des activités antimicrobiennes contre différents microorganismes, tel que Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Enterococcus faecalis, ou Candida albicans. Les peptides antimicrobiens sont dérivés de la partie C-terminale de la protéine et ne correspondent pas à l'ensemble des peptides identifiés représentés par les SEQ ID NO 6 à SEQ ID NO 26.

Par « analogue d'une séquence d'acides aminés » conforme à l'invention, on entend désigner toute séquence d'acides aminés ayant une identité de séquence d'au moins 85 %, de préférence d'au moins 90 %, et plus préférentiellement d'au moins 95 %, et de manière encore plus préférée d'au moins 99% avec ladite séquence, et une activité biologique de même nature.

Par « activité biologique de même nature » à l'égard d'une séquence d'acides aminés selon l'invention, on entend les propriétés antimicrobiennes ou de stimulation de la survie et/ou de la prolifération cellulaire habituellement attribuées à la Dermcidine. L'identité de séquence peut être déterminée par comparaison visuelle ou au moyen de tout outil informatique généralement utilisé dans le domaine, tel que les programmes BLAST disponibles sur www.ncbi.nlm.nih.gov et utilisés avec les paramètres configurés par défaut. Un analogue conforme à l'invention peut être un agent peptidomimétique. Un analogue d'une séquence d'acides aminés de l'invention peut résulter de modifications issues de mutation ou de variation dans les séquences des peptides selon l'invention provenant soit de la délétion ou de l'insertion d'un ou plusieurs acides aminés, soit de la substitution d'un ou plusieurs acides aminés, soit encore d'un épissage alternatif. Plusieurs de ces modifications peuvent être combinées. Avantageusement, un analogue d'une séquence d'acides aminés de l'invention peut comprendre des substitutions conservatrices par rapport à cette séquence d'acides 25 aminés. A titre d'exemple de mutations que l'on peut considérer dans la présente invention, il peut être mentionné, de manière non exhaustive, le remplacement d'un ou plusieurs résidus d'acides aminés par des résidus d'acides aminés ayant un indice hydropathique similaire sans pour autant affecter de manière sensible les propriétés 30 biologiques du polypeptide. L'indice hydropathique est un indice attribué aux acides aminés en fonction de leur hydrophobicité et de leur charge (Kyte et al. (1982), J. Mol. Biol., 157 : 105).

Une séquence d'acides aminés ou un analogue de celle-ci visé par la présente invention peut être une séquence d'acides aminés ayant subi une ou plusieurs maturation(s) post-traductionnelle(s). Par « maturation(s) post-traductionnelle(s) », on entend englober l'ensemble des modifications qu'une séquence d'acides aminés est susceptible de subir à l'issue de sa synthèse dans une cellule, telle que par exemple une ou des phosphorylation(s), une déamidation, une ou des thiolation(s), une ou des acétylation(s), une ou des glycosylation(s), une ou des lipidation(s), telles qu'une farnésylation ou une palmitoylation, un réarrangement structural de type formation de ponts disulfures et/ou de type clivage à l'intérieur de la séquence peptidique. Un analogue d'une séquence d'acides aminés présente, par ailleurs, sensiblement la même activité biologique que cette séquence d'acides aminés. Il est par ailleurs connu qu'une séquence primaire d'acides aminés, peut comprendre des sites spécifiquement reconnus par des enzymes de type protéase, telles que la trypsine, qui, une fois la reconnaissance de ces sites effective vont induire le clivage de la séquence par protéolyse. Cette protéolyse résulte en la génération de divers peptides, ou fragments de séquences d'acides aminés de l'invention. En conséquence, l'invention s'étend également aux fragments de la Dermcidine ou de ses isoformes 1 et 2 ou de ses peptides, issus le cas échéant de sa 20 protéolyse. Au sens de l'invention, on entend par « fragment d'une séquence d'acides aminés » toute portion de la séquence d'acides aminés conforme à l'invention comprenant de 3 à 48 acides aminés consécutifs de ladite séquence. Selon un mode de réalisation, une séquence d'acides aminés convenant à 25 l'invention peut être une séquence d'acides aminés représentée par une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 4 à 26, notamment parmi SEQ ID NO: 6 à SEQ ID NO: 26, un analogue, ou un fragment de celle-ci. Selon un autre mode de réalisation, un peptide convenant à l'invention peut 30 également être une séquence d'acides aminés naturelle ou synthétique, le cas échéant susceptible d'être obtenue après hydrolyse enzymatique ou chimique de la Dermcidine ou par synthèse chimique ou biologique ou encore toute séquence d'acides aminés naturelle ou synthétique dont la séquence comprend totalement ou partiellement une séquence d'acides aminés précitée. L'homme de l'art peut obtenir une séquence d'acides aminés conforme à l'invention au moyen de procédés à base d'ADN recombinant, comme par exemple, ceux décrits dans le manuel « Molecular Cloning - A Laboratory Manual » (2ème édition), Sambrook et al., 1989, Vol. I-III, Coldspring Harbor Laboratory, Coldspring Harbor Press, NY, (Sambrook). Selon un objet, la présente invention concerne en tant que tel un peptide isolé représenté par une séquence d'acides aminés choisi parmi SEQ ID NO : 6, SEQ ID NO : 7, SEQ ID NO : 8, SEQ ID NO : 9, SEQ ID NO : 10, SEQ ID NO : 11, SEQ ID NO : 12, SEQ ID NO : 13, SEQ ID NO : 14, SEQ ID NO : 15, SEQ ID NO : 16, SEQ ID NO : 17, SEQ ID NO : 18, SEQ ID NO : 19, SEQ ID NO : 20, SEQ ID NO : 21, SEQ ID NO : 22, SEQ ID NO : 23, SEQ ID NO : 24, SEQ ID NO : 25 et/ou SEQ ID NO : 26, un analogue ou un fragment de celle-ci. La présente invention concerne également des compositions cométiques comprenant dans un milieu cosmétiquement acceptable une quantité efficace d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention. Plus particulièrement, l'invention concerne une composition cosmétique comprenant un peptide représenté par une séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO: 6 à SEQ ID NO: 26, un analogue ou un fragment de celle-ci. Les quantités des différents constituants des compositions selon l'invention sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés. La quantité de séquence d'acides aminés, ou de séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou d'agent actif conformes à l'invention contenue dans une composition de l'invention, encore dite « quantité efficace » est, bien entendu, fonction de la nature de l'actif et de l'effet recherché et peut donc varier dans une large mesure.

Pour donner un ordre de grandeur, une composition peut contenir une séquence d'acides aminés, ou un agent actif conformes à l'invention en une quantité représentant de 0,00001 % à 5 % du poids total de la composition, en particulier en une quantité représentant de 0,001 % à 2 % du poids total de la composition, et plus particulièrement en une quantité représentant de 0,1 % à 1 % du poids total de la composition. Au sens de la présente invention, on entend par « quantité efficace » d'un composé de l'invention, une quantité suffisante et nécessaire de ce composé pour obtenir un effet recherché, et plus particulièrement pour prévenir et/ou traiter les odeurs corporelles. Au sens de l'invention, on entend par « prévenir », le fait de réduire le risque de survenue ou de ralentir la survenue d'un phénomène donné, à savoir dans la présente invention, les odeurs corporelles.

La composition cosmétique selon l'invention peut comprendre, outre la SEQ ID NO 4 ou SEQ ID NO 5 ou un peptide dérivé de ces protéines, un analogue ou un fragment de celle-ci conforme à l'invention, des actifs déodorants ou antitranspirants classiquement utilisés dans les compositions déodorantes ou antitranspirantes.

Parmi les actifs déodorants on peut citer par exemple, des sels hydrosolubles de zinc, comme le pyrrolidone carboxylate de zinc (plus communément appelé pidolate de zinc), le sulfate de zinc, le chlorure de zinc, le lactate de zinc, le gluconate de zinc et le phénolsulfonate de zinc, des bactéricides tels que le 2,4,4'-trichloro-2'- hydroxydiphényléther (Triclosan), ou le 3,7,11-triméthyldodéca-2,5,10-triénol (Farnesol). Parmi les actifs antitranspirants, on peut citer par exemple les sels d'aluminium, comme le chlorure d'aluminium et les hydroxyhalogénures d'aluminium, des hydroxyhalogénures d'aluminium/zirconium, comme par exemple des sels d'hydroxyzirconyle, les complexes de métaux (comme l'aluminium ou le zirconium) avec un acide aminé (comme par exemple la glycine) et tels que décrits dans le brevet US-3792068. La composition cosmétique selon l'invention est formulée classiquement selon la forme de présentation à laquelle elle est destinée. Elle est plus particulièrement formulée dans un véhicule cosmétiquement acceptable qui peut être notamment essentiellement aqueux, ou contenir des solvants organiques et notamment des monoalcools en C1-C4, de préférence de l'éthanol pour accélérer l'évaporation du produit, ou du propylène glycol, du dipropylène glycol ou leurs éthers. La composition cosmétique selon l'invention peut également être formulée en émulsion eau-dans-huile, huile-dans-eau, ou en émulsion triple eau-dans-huile-dans-eau, (de telles 5 émulsions sont connues et décrites par exemple par C. FOX dans « Cosmetics and Toiletries » - november 1986 - Vol 101 - pages 101-112). La composition cosmétique selon l'invention peut comprendre en outre des adjuvants cosmétiques choisis parmi les corps gras, les gélifiants, les émollients, les adoucissants, 10 les antioxydants, les opacifiants, les stabilisants, les agents anti-mousse, les agents hydratants, les vitamines, les parfums, les conservateurs, les tensioactifs, les charges, les séquestrants, les polymères, les propulseurs, les agents alcalinisants ou acidifiants, les parfums, les colorants, les pigments, les agents épaississants, ou tout autre ingrédient habituellement utilisé en cosmétique pour ce type d'application. 15 Bien entendu, l'homme de métier veillera à choisir ce ou ces éventuels composés complémentaires de manière telle que les propriétés avantageuses attachées intrinsèquement à la composition cosmétique conforme à l'invention ne soient pas, ou substantiellement pas, altérées par la ou les adjonctions envisagées. 20 Les tensio-actifs sont choisis de préférence parmi les tensio-actifs anioniques, amphotères ou non-ioniques. Les corps gras peuvent être constitués par une huile ou une cire ou leur mélange, la vaseline, la paraffine, la lanoline, la lanoline hydrogénée, la lanoline acétylée. 25 La composition cosmétique selon l'invention peut ainsi se présenter sous forme de lotion, de crème ou de gel fluide distribué en spray aérosol, en flacon pompe ou en roll-on, sous forme de crème épaisse distribuée en tube et sous forme de stick ou de poudre, et contenir 30 à cet égard les ingrédients et propulseurs généralement utilisés dans ce type de produits et bien connus de l'homme de l'art.

Utilisation cosmétique La présente invention concerne l'utilisation cosmétique d'une quantité efficace d'au moins une séquence d'acides aminés à titre d'agent actif pour prévenir et/ou traiter les odeurs corporelles. Selon un autre aspect, la présente invention concerne un procédé cosmétique, ou non thérapeutique, pour prévenir et/ou traiter les odeurs corporelles chez un individu en ayant besoin, le procédé comprenant au moins une étape consistant à administrer audit individu, au moins une composition comprenant à titre d'agent actif au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, notamment telle que définis ci-avant. Un procédé ou une utilisation de l'invention permettent de prévenir et/ou traiter les odeurs corporelles. De manière préférée, un procédé de l'invention peut comprendre l'application par voie topique sur au moins une partie de la peau d'un individu en ayant besoin, en particulier sur la peau des aisselles, du cuir chevelu et/ou des pieds, d'au moins une couche d'une composition topique de l'invention. Un procédé cosmétique selon l'invention peut être mis en oeuvre de façon 20 journalière, par exemple à raison d'application unique par jour, ou d'une administration fractionnée en deux ou trois fois par jour, par exemple une fois le matin et une fois le soir. Un procédé cosmétique selon l'invention peut être mis en oeuvre sur une période de temps variant d'une semaine à plusieurs semaines, voire plusieurs mois, cette période pouvant par ailleurs être répétée après des périodes de non traitement pendant 25 plusieurs mois, voire plusieurs années. A titre d'exemple, de procédé cosmétique selon l'invention on peut prévoir une application d'une composition cosmétique de l'invention, par exemple, à raison de 1, 2 ou 3 fois par jour, ou plus, et généralement sur une durée prolongé d'au moins 4 semaines, voire 4 à 15 semaines, avec le cas échéant une ou plusieurs périodes 30 d'interruption.

Biomarqueur De manière inattendue, au cours d'une étude de protéomique différentielle par la technologie « iTRAQ », les inventeurs ont observé à partir de la sueur liquide prélevée sur 24 sujets masculins sains après 45 min de sauna, que la Dermcidine (ou DCD) et plus particulièrement son isoforme 1 (DCD-1) se révélait être un biomarqueur sensible et spécifique du niveau d'odeur corporelle de la peau et/ou de la sueur. Plus précisément, les inventeurs ont observé que le taux d'expression de 10 peptides issus de la SEQ ID NO 4 et SEQ ID NO 5 et identifiés par les séquences SEQ ID NO: 6 à SEQ ID NO :26 étaient systématiquement diminués dans les sueurs odorantes par rapport aux sueurs non odorantes. A la connaissance des inventeurs, cette protéine antimicrobienne de la surface cutanée et plus particulièrement ses isoformes caractérisés par la séquence SEQ ID NO 4 15 et SEQ ID NO 5 et encore plus particulièrement les peptides identifiés par les SEQ ID NO 6 à SEQ ID NO 26 n'ont jamais été classés comme variant des sueurs odorantes et encore moins comme l'un des biomarqueurs les plus pertinents ressortant de ce type d'études. A la connaissance des inventeurs l'isoforme 2 n'a elle-même jamais été décrite dans la sueur. Il est connu que la sudation diminue avec l'âge (Anderson and Kenney 1987 ; 20 Kenney and Fowler 1988) et que la Dermcidine est une protéine sudoripare (Schittek, Hipfel et al., 2001). En revanche, les données expérimentales obtenues par les inventeurs montrent de façon inattendue qu'il existe un déficit spécifique d'expression et/ou de maturation des peptides identifiés par les SEQ ID NO 6 à SEQ ID NO 26 dans les sueurs odorantes, car celles-ci sous sous-représentées dans les échantillons étudiés. 25 La présente invention concerne l'utilisation d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention à titre de biomarqueur du niveau d'odeur corporelle de la peau. De manière préférée, une utilisation conforme à l'invention permet de caractériser le niveau d'odeur corporelle. Au sens de l'invention, on entend par « biomarqueur », une molécule ou 30 l'activité d'une molécule, dont la présence, la teneur ou le degré d'activité est caractéristique d'un processus biologique, physiologique ou pathologique, ou de l'impact ou de l'effet induit par l'administration d'un agent actif ou d'un traitement physique sur un tel processus.

Selon un mode de réalisation, une diminution de l'activité, de l'expression ou de la maturation dudit biomarqueur peut être indicative d'une peau et/ou d'une sueur odorante.

Dans une utilisation conforme à l'invention, une diminution ou une augmentation de l'activité, de l'expression ou de la maturation dudit biomarqueur peut être déterminée par comparaison à une mesure de référence obtenue selon toute méthode connue de l'homme de l'art. Une « mesure de référence » au regard d'un paramètre donné, est une mesure qualitative ou quantitative de ce paramètre effectuée dans des conditions dites « contrôles » ou « normales », par exemple déterminée dans un échantillon de référence, ou déterminée dans un échantillon en l'absence d'un traitement présumé avoir un effet sur le paramètre. Par exemple, une mesure de référence pour une séquence d'acides aminés ou une séquence d'acides nucléiques conforme à l'invention peut être une valeur quantitative ou qualitative relative à l'expression, la maturation ou l'activité desdites séquences déterminée dans un échantillon de peau ou de sueur non odorantes ou odorantes avant un traitement cosmétique. De préférence, une mesure de référence est une mesure statistique, c'est à dire ayant été répétée sur différents échantillons de sorte à obtenir une moyenne. La mesure de référence peut être effectuée parallèlement ou séquentiellement à la mesure test. Elle peut également être une mesure « historique », c'est-à-dire effectuée antérieurement à la mesure test, et stockée, par exemple dans une base de données, en vue d'une utilisation ultérieure. Une comparaison de la mesure test à une mesure de référence, et une observation d'une déviation ou d'une absence de déviation entre les deux mesures, permet de tirer une information quant au paramètre mesuré, par exemple la diminution ou l'augmentation l'expression, de la maturation ou de l'activité d'une séquence d'acides aminés conformes à l'invention. Une telle information peut être ultérieurement mise en oeuvre pour déterminer le caractère odorant d'une peau et/ou d'une sueur et en identifier les déséquilibres spécifiques.

Selon un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé, en particulier in vitro ou ex vivo, pour caractériser le niveau d'odeur corporelle de la peau et/ou de la sueur.

La mesure qualitative ou quantitative, de l'expression, de la maturation, ou de l'activité d'une séquence d'acides aminés de l'invention peut être effectuée au moyen de toute méthode connue de l'homme de l'art. A titre de méthodes de détection de l'expression, de la maturation, ou de l'activité d'une séquence d'acides aminés, il peut être fait mention du Western-blot, du Slot-blot, du Dot-blot, des méthodes ELISA (Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay) de type singleplex ou multiplex, des méthodes de protéomique ou de glycomique, de coloration de polypeptides dans un gel de polyacrylamide par un colorant à base d'Argent, par le bleu de Coomassie ou par le SYPRO, de l'immunofluorescence, de l'absorption UV, de méthodes immunohistochimiques en microscopie classique, électronique ou confocale, de FRET (fluorescence resonance energy transfer/transfert d'énergie par résonance de fluorescence), des méthodes de TR-FRET (time resolved FRET/FRET en résolution de temps), des méthodes de FLIM (fluorescence lifetime imaging microscopy/imagerie par microscopie en temps de fluorescence), des méthodes de FSPIM (fluorescence spectral imaging microscopy/imagerie par microscopie en spectre de fluorescence), des méthodes de FRAP (fluorescence recovery after photobleaching/recouvrement de fluorescence après photoblanchiment), des méthodes par gène rapporteur, des méthodes d'AFM (atomic force microscopy/microscopie par force atomique), des méthodes de résonance plasmonique de surface, des méthodes de microcalorimétrie, des méthodes de cytométrie en flux, des méthodes de biosenseurs, des méthodes de radioimmuno-essais (RIA), des méthodes de focalisation isoélectrique, et des tests enzymatiques, des méthodes mettant en oeuvre des puces à peptides, des puces à sucre, des puces d'anticorps, des méthodes de spectrométrie de masse quantitatives de type iTRAQ, MIRM ou SWATH, des méthodes de spectrométrie de type MALDI-TOF. De façon plus générale, des méthodes de dosage immunoenzymatiques à partir de solutions de protéines, plus quantitatives et sensibles peuvent en particulier être utilisées. Ces méthodes de type ELISA associent des couples d'anticorps de capture et de détection spécifique de l'antigène ciblé. Des anticorps commerciaux ou des anticorps polyclonaux, monoclonaux ou recombinants développés spécifiquement peuvent être utilisés. Des techniques ELISA multiplexes de grande capacité peuvent également être mises en oeuvre. On peut ainsi citer l'approche multiplexe de type anticorps sur billes Luminex (par exemple Bioplex de Bio-Rad), de type anticorps sur surface plane (« antibodies-arrays ») (par exemple approche proposée par la société MesoScale Discovery).. Dans une approche récente une technique nouvelle basée sur des anticorps appelés « Quenchbodies » proposés par la société japonaise Ushio permet de n'utiliser qu'un anticorps. En particulier, il peut être avantageux de détecter l'expression d'une séquence d'acides aminés de l'invention au moyen d'un anticorps, le cas échéant sous une forme marquée ou « taggée ». Un tel anticorps peut être marqué au moyen d'une substance détectable directement (par exemple avec un tag GFP) ou détectable par réaction avec un autre réactif. Par « anticorps », on entend désigner de manière générale des anticorps monoclonaux ou polyclonaux, ainsi que des fragments d'immunoglobuline susceptibles de lier un antigène et qui peuvent être produits par toute technique de génie génétique connue de l'homme de l'art ou par coupure enzymatique ou chimique d'anticorps intact. Un anticorps susceptible d'être utilisé à titre d'outil d'évaluation d'un état d'un épiderme peut être obtenu par tout procédé connu de l'homme de l'art, tel que décrit dans « Antibodies: A Laboratory Manual », Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990). Selon un mode de réalisation préféré, il peut être avantageux de détecter l'expression d'une séquence d'acides aminés de l'invention au moyen d'une méthode protéomique différentielle « iTRAQ ». Une telle méthode est connue de l'homme de l'art et peut avantageusement être mise en oeuvre comme décrit dans les exemples ci-après. De manière préférée, la détermination d'un état de la peau et/ou de la sueur, ou la caractérisation de l'efficacité d'un traitement cosmétique de la peau et/ou de la sueur peuvent être effectuées par mesure de la variation de l'expression d'une séquence d'acides aminées de l'invention, et de préférence représentée par une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8,SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO : 11, SEQ ID NO : 12, SEQ ID NO : 13, SEQ ID NO : 14, SEQ ID NO : 15, SEQ ID NO : 16, SEQ ID NO : 17, SEQ ID NO : 18, SEQ ID NO : 19, SEQ ID NO : 20, SEQ ID NO : 21, SEQ ID NO : 22, SEQ ID NO : 23, SEQ ID NO : 24, SEQ ID NO : 25, SEQ ID NO : 26, un analogue ou un fragment de celle-ci. Les procédés de l'invention sont particulièrement avantageux dans la mesure où leur mise en oeuvre ne nécessite pas de recourir à une technique invasive. Un échantillon de sueur liquide peut ainsi être directement prélevé et analysé par une technique d'analyse conventionnelle connue de l'homme de l'art. Avantageusement, un des marqueurs de l'invention peut être mise en oeuvre à des fins de sélection préclinique, plus efficace et plus rigoureuse, d'individus, en vue d'évaluer l'efficacité de traitement ou d'actif cosmétique pour la diminution des odeurs corporelles. Egalement, un biomarqueur de l'invention peut avantageusement être mis en oeuvre pour évaluer l'efficacité d'un agent actif, in vitro, ex vivo ou in vivo. Egalement, un biomarqueur de l'invention peut être mis en oeuvre pour établir un conseil personnalisé d'un traitement cosmétique pour un individu en fonction de son profil d'expression de biomarqueurs cutanés. Selon encore un autre de ses objets, la présente invention concerne l'utilisation (i) d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, pour cribler des agents actifs ou des traitements physiques susceptibles de moduler l'activité, l'expression ou la maturation de ladite séquence d'acides aminés. Au sens de l'invention on entend par « expression » à l'égard d'une séquence d'acides aminés, par exemple une protéine ou un peptide, sa teneur ou la variation de sa teneur par rapport à une référence.

Au sens de l'invention on entend par « maturation » à l'égard d'une séquence d'acides aminés, par exemple une protéine ou un peptide, les modifications qui suivent leur synthèse dans un environnement cellulaire. Par exemple, dans le cas d'une séquence d'acides aminés, on entend par « maturation », les modifications post-traductionnelles, telles que la glycosylation ou la farnésylation de certains acides aminés, ou les étapes protéolytiques conduisant à l'élimination de séquences dites « signal » ou « sécrétoire » ou à la libération de séquences présentant des propriétés biologiques particulières. Au sens de l'invention on entend par « activité », à l'égard d'une séquence d'acides aminés, par exemple une protéine ou un peptide, l'activité biologique de la séquence d'acides aminés, le cas échéant après maturation, telle qu'une activité enzymatique, une activité d'agoniste ou d'antagoniste vis-à-vis d'un récepteur, ou d'activateur ou d'inhibiteur d'une enzyme, une activité dite de « structure », ou une activité antimicrobienne. Selon un autre de ses objets, la présente invention concerne l'utilisation (i) d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, pour caractériser le niveau d'odeur corporelle de la peau et/ou de la sueur. Egalement, selon un autre avantage, la présente invention permet de proposer de nouveaux agents actifs convenant à la prévention et/ou au traitement des peaux et/ou sueurs odorantes. Criblage Il existe encore un besoin de disposer de nouveaux outils de criblage d'agents actifs ou de traitements physiques particulièrement utiles pour prévenir et/ou traiter les peaux et/ou sueurs odorantes. La présente invention a pour objet de satisfaire à ces besoins. Selon un de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation d'une séquence d'acides aminés, pour cribler ou dans un procédé de criblage, en particulier in vitro ou ex vivo, d'agents actifs convenant particulièrement pour la prévention et/ ou le traitement des peaux et/ou sueurs odorantes. Les agents actifs criblés peuvent notamment convenir pour la prévention et/ ou le traitement des peaux et/ou sueurs odorantes.

Une utilisation ou un procédé de l'invention peuvent comprendre la comparaison d'une mesure de l'activité, de l'expression ou de la maturation d'une séquence d'acide aminés ou d'une séquence d'acides nucléiques conforme à l'invention à une mesure de référence.

Une mesure de référence peut être telle que définie précédemment. En particulier une mesure de référence peut être une valeur quantitative ou qualitative relative à l'expression, la maturation ou l'activité desdites séquences déterminée dans un échantillon en l'absence d'agent actif ou de traitement physique testé.

Ainsi, une mesure de référence peut être obtenue en réitérant les étapes d'un procédé de l'invention, et notamment les étapes a), b) et c) d'un procédé de l'invention tel que défini précédemment, en l'absence de composés biologiques ou chimiques à tester. Une comparaison de la mesure test à une mesure de référence, et une observation d'une déviation ou d'une absence de déviation entre les deux mesures, permet de tirer une information quant à l'effet de l'agent actif testé. La détermination quantitative ou qualitative de l'expression, de la maturation ou de l'activité d'une séquence d'acides aminés de l'invention peut être effectuée par toute méthode connue de l'homme de l'art, et notamment comme décrit précédemment.

Selon un mode de réalisation, le criblage d'un agent actif susceptible de moduler l'activité d'une séquence d'acides aminées de l'invention peut se faire par mesure de l'activité ou de l'expression d'une molécule cible appartenant aux voies de signalisation ou de métabolisme dans lesquelles peut être impliqué ladite d'une séquence d'acides aminés, tel que par exemple un système de gène rapporteur. Selon un mode de réalisation, un procédé de l'invention peut être mis en oeuvre dans un système acellulaire, i.e. dans un système ne comprenant pas de cellules mais reproduisant des fonctions cellulaires, ou dans un échantillon cellulaire isolé. Un procédé conforme à l'invention peut être effectué sur un échantillon cellulaire isolé, un échantillon acellulaire, sur une séquence d'acides aminés isolée ou sur une séquence d'acides nucléiques isolée de l'invention, notamment à partir d'un prélèvement de sueur liquide. De manière préférée, le criblage d'un agent actif ou d'un traitement physique peut être effectuée par mesure de la variation de l'expression, en présence et en absence de l'agent actif criblé, d'une séquence d'acides aminés de l'invention, et de préférence représentée par une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 4 à SEQ ID NO: 26, un analogue ou un fragment de celle-ci.

Les agents actifs issus d'un criblage selon l'invention peuvent être avantageusement utilisés à des fins cosmétiques, notamment pour les peaux et/ou sueurs odorantes.

Selon un mode de réalisation, un agent actif de l'invention peut être un agent stimulateur de l'activité, de l'expression ou de la maturation d'une séquence d'acides aminés de l'invention.

Au sens de la présente invention, « un » doit se comprendre, sauf indication contraire, au sens de « au moins un ». Les exemples et figures ci-après sont présentés à titre illustratif et non limitatif de l'invention.

EXEMPLE 1 : Etude protéomique iTRAQ du profil d'expression de la Dermcidine dans les sueurs odorantes et non odorantes 1- Matériels et méthodes a- Protocole iTRAQ La détection de l'expression de la Dermcidine (DCD), de ses isoformes et de ses peptide a été réalisée au moyen de la méthode iTRAQ (Isobaric Tagging Reagents for Quantitative Proteomic Analysis) développée par la société Applied Biosystems. Cette méthode permet la quantification de peptides préalablement marqués par un Tag isobarique. Il existe 4 tags différents et on peut comparer jusqu'à 4 types d'échantillons distincts dans une même analyse LC/MS-MS. Le principe de cette méthode est le suivant : - Digestion d'extraits protéiques et marquage : Dans un premier temps, chaque extrait protéique est digéré par une enzyme protéolytique : la trypsine. Dans un second temps, chaque mélange peptidique obtenu est marqué avec un Tag isobarique d'une masse totale 145, comprenant un groupe « reporter » de masse 114, 115, 116 ou 117, et un groupe « balance » de masse 31, 30, 29 ou 28, liés entre eux par un site de fragmentation MS.

Le marquage est obtenu par réaction du Peptide Reactive Group de chaque tag avec les amines primaires des peptides (extrémité N-terminale des peptides ou la chaîne latérale des lysines ou des tyrosines. - Analyse LC/MS-MS et quantification : Après l'étape de marquage, les échantillons sont mis en commun et analysés par spectrométrie de masse. Un peptide donné, présent dans plusieurs échantillons, aura une masse parente identique mais son spectre de fragmentation MS/MS va générer la masse du groupe rapporteur caractéristique de chacun des réactifs iTRAQ. La comparaison de l'intensité de chaque ion rapporteur (114, 115, 116 ou 117) permet alors la quantification du peptide. La méthode iTRAQ est plus précisément décrite par Zieske (J. Exp. Bot., 2006, 57 :1501) ou Wiese et al. (Proteomics, 2007, 7 :340). b- Prélèvement et traitement des échantillons de sueurs La sueur liquide a été prélevée chez des sujets sains de sexe masculin après 45 min de sauna. 24 sujets ont été sélectionnés pour cette analyse peptidomique : 12 sujets UAO(intensité odeur comprise entre 1 et 3,5) et 12 sujets UAO+ (intensité odeur comprise entre 6 et 9). Les prélèvements sont conservés à -20°C avant l'analyse.

Dans cette étude, nous avions une comparaison à faire sujets odorants vs. non odorants, avec 12 sujets / groupe, nous avons fait le choix de réaliser deux expériences iTRAQ à 4 marqueurs avec les 4 replicats biologiques suivants : Groupe NO pool 1 (UAO- pool 1) : sujets 6, 15 et 30 pool 2 (UAO- pool 2): sujets 28, 36 et 40 pool 3 (UAO- pool 3): sujets 12, 17 et 26 pool 4 (UAO- pool 4): sujets 25, 27 et 34 Groupe O pool 1 (UAO+ pool 1): sujets 13, 33 et 35 pool 2 (UAO+ pool 2): sujets 18, 23 et 41 pool 3 (UAO+ pool 3): sujets 31, 46 et 47 pool 4 (UAO+ pool 4): sujets 32, 44 et 45 Ces prélèvements de sueur sont ensuite analysés par protéomique au moyen de la technique dite de « marquage isobarique », précédemment décrite, en utilisant le kit 5 iTRAQ Reagents Multiplex kit (4352135), d'Applied Biosystems, conformément aux instructions du fabricant. c) Résultats Le seuil de significativité a été fixé à : - Inférieur ou égal à 0.8 pour les peptides sous-exprimés chez les sujets odorants comparés 10 aux sujets non odorants. - Supérieur ou égal à 1,2 pour les peptides sur-exprimés chez les sujets odorants comparés aux sujets non odorants. Peptide séquence N Ratio moyen Séquences de DCD1 SEQ ID NO 4 SSLLEKGLDGAKKAVGGLGKLGKDAVEDLESVGKGAVHDVKDVLDSVL SEQ ID NO 6 AVEDLESVGKGAVH SEQ ID NO 7 3 0.43 AVHDVKDVLDS SEQ ID NO 8 3 0.33 DVKDVLDS SEQ ID NO 9 3 0.56 ESVGkGAVHDVKDVLDSV SEQ ID NO 10 3 0.23 VEDLESVGkGAVHDVKDVL SEQ ID NO 11 3 0.36 VHDVKDVLD SEQ ID NO 12 3 0.6 AVHDVKDVLDS SEQ ID NO 13 3 0.33 GAVHDVKDVLDS SEQ ID NO 14 3 0.47 GKDAVEDLESVGKGA SEQ ID NO 15 4 0.56 GKGAVHDVKDVLDS SEQ ID NO 16 3 0.23 LESVGKGAVHDVKD SEQ ID NO 17 3 0.23 SVGKGAVHDVKDVLDSV SEQ ID NO 18 4 0.43 VEDLESVGKGAVHDV SEQ ID NO 19 3 0.37 Séquences de DCD2 SEQ ID NO 5 APVNLTSIPLTSVSRP SEQ ID NO 21 3 0.43 ESVGKGGEER SEQ ID NO 22 3 0.5 FGAPVNLTSIPLTSVSRP SEQ ID NO 23 4 0.43 VFGAPVNLTSIPLTSVSRP SEQ ID NO 24 4 0.46 LESVGKGGEER SEQ ID NO 25 3 0.43 GAPVNLTSIPLTSVSRP SEQ ID NO 26 3 0.47 N = Nombre de répétition des expériences 15 On observe clairement une sous expression des séquences suivantes SEQ ID NO 7 à SEQ ID NO 19 de l'isoforme DCD-1 et SEQ ID NO 21 à SEQ ID NO 26 de l'isoforme DCD-2 dans les sueurs odorantes avec des ratios d'expression inférieurs à 0.8. Cela confirme leur utilisation comme biomarqueur pour définir le niveau d'odeurs corporelles. EXEMPLE 2 : Etude par ELISA du profil d'expression de la Dermcidine dans les sueurs odorantes et non odorantes (Figure 1).

Les échantillons de sueurs axillaire (odorantes et non odorantes) ont été centrifugés 8 minutes à 4°C afin d'éliminer les cornéocytes et les bactéries. Les surnageants ont été conservés à -20°C jusqu'à analyse.

ELISA Essay La quantité de Dermcidine a été mesurée dans 25111 de surnageants. L'anticorps de capture (AbDserotec) a été fixé au fond des puits à une concentration de 2001.1g/m1 sur des plaques de 96 puits (MesoScale). Une courbe étalon a été effectuée avec des concentration de DCD-1 allant de 0.4 à 25ng/ml. Les puits ont été saturés dans du tampon pendant une heure à température ambiante. pl des échantillons ont été ajoutés dans chaque puits, chaque mesure a été réalisée en triplicate. La plaque a été mise sous agitation pendant une heure à température ambiante, puis lavée 5 fois avec du tampon Tris de lavage. Puis les plaques ont été incubées pendant 25 lh à température ambiante avec 251.1.1 d'anticorps primaire à une concentration de 1iag/m1 dans chaque puits (polyclonal goat SC27466) puis lavé 5 fois avec du tampon tris de lavage. Et enfin incubé 1 heure à température ambiante avec 25111 d'anticorps secondaire à une concentration de 1iag/m1 (donkey anti goat sulfo tagged antibody). Les plaques ont été lavées 5 fois avec tampon Tris de lavage avant d'ajouter dans chaque 30 puits 1541 de 1X READ buffer T. Les plaques ont été lues avec Sector Imager 6000.

La quantité de DCD-1 a été mesurée à partir de courbe étalon en ng/ml. Les inventeurs ont montré que la protéine DCD-létait sous exprimée de manière significative dans les sueurs odorantes (Figure 1). -

Claims (3)

1. REVENDICATIONS1.) Utilisation cosmétique d'une séquence d'acides. aminés SEQ ID NO 6 ou un fragment de celle-ci pour prévenir ou inhiber le développement des odeurs corporelles liées à la transpiration humaine.
2. 2) Utilisation selon la revendication l caractérisée en ce que ladite séquence est utilisée à titre d'actif dans une composition cosmétique.
3. 3) Utilisation cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé cn ce que les odeurs corporelles sont celles des aisselles et/ou des pieds