FR3006890A1 - Utilisation cosmetique de la dermicidine, analogues ou fragments de celle-ci pour la prevention et/ou le traitement et le diagnostic de la peau grasse et des desordres esthetiques cutanes qui y sont associes - Google Patents

Abstract

La présente invention a, notamment, pour objet l'utilisation d'une composition contenant au moins une séquence d'acides aminés de la Dermicidine, d'un analogue ou d'un fragment de celle-ci pour prévenir ou traiter la peau grasse et/ou les désordres esthétiques cutanés qui lui sont associés. Elle concerne également un procédé de traitement cosmétique pour la prévention et le traitement des peaux grasses et/ou les désordres esthétiques cutanés qui lui sont associés. La présente invention a, également, pour objet l'utilisation d'un biomarqueur pour le diagnostic des peaux grasses.

Description

La présente invention a pour objet l'utilisation d'au moins une séquence d'acides aminés de la Dermicidine, d'un analogue ou d'un fragment de celle-ci, ou d'une composition la contenant pour la prévention et/ou le traitement et/ou le diagnostic des peaux grasses et/ou des désordres esthétiques cutanés qui lui sont associés. Elle concerne également un procédé de traitement cosmétique pour la prévention et le traitement des peaux grasses et/ou les désordres esthétiques cutanés qui lui sont associés.

La présente invention a, également, pour objet l'utilisation d'un biomarqueur pour le diagnostic des peaux grasses. Au sens de l'invention, on entend désigner par « peau » l'ensemble de l'épiderme du corps humain. Plus particulièrement, la peau considérée dans la présente invention est de préférence la peau du visage, du scalp, du décolleté, du dos, et de manière préférée, la peau du visage et/ou du scalp. Par « peau grasse » au sens de l'invention, on entend une peau présentant une hyperseborrhé caractérisée par une sécrétion et une excrétion exagérées de sébum. Classiquement, un taux de sébum supérieur à 150/200 ug/cm2 est considéré comme caractéristique d'une telle peau 20 grasse. Par « prévenir », on entend le fait de diminuer le risque de survenue de la manifestation du désordre considéré, à savoir dans la présente invention peau luisante brillante et/ou à des imperfections cutanées telles que des pores dilatés, un grain de peau épais et/ou un défaut de desquamation. 25 Selon l'invention, les désordres esthétiques cutanés associés aux peaux grasses sont des désordres non pathologiques. De manière préférée les désordres cutanés sont dus à une hyperséborré. Les désordres esthétiques cutanés associés aux peaux grasses selon l'invention peuvent notamment être un grain de peau épais, une peau luisante, une peau présentant des 30 orifices folliculaires ou des pores dilatés ou une peau présentant un défaut de desquamation.

L'hyperséborré ou surproduction de sébum est très courante et se traduit par une peau à l'aspect gras, brillant et des pores élargis. Mais elle est également très sensible aux facteurs environnementaux tels que la température, l'humidité ou l'alimentation. Par ailleurs il a été démontré que Propionibacterium acnes est directement impliqué dans la stimulation de l'axe IGF-1/IGF-1Rcutané, qui est un récepteur que l'on retrouve à la surface de la peau, et induit, par conséquent, une hyper séborrhée ainsi qu'une prolifération et une différenciation anormale des kératinocytes (Isard et al., 2011). Sur un plan clinique, des travaux démontrent une corrélation directe entre le taux sérique d'IGF-1 et la quantité de sébum secrétée au niveau du visage (Aizawa and Niimura, 1995;Cappel et al., 2005;Vora et al., 2008). De plus Linuma et al ont pu mettre en évidence, in vitro, une augmentation intracellulaire de la formation de gouttes lipidiques au sein des sébocytes, une augmentation de la synthèse des triacylglycérols ainsi qu'une augmentation de l'accumulation de sébum dans les glandes et conduits sébacés après avoir exposé des cultures de sébocytes à un milieu de culture contenant les souches P.acnes. Ils ont, en outre, confirmé ces résultats in vivo en exposant des oreilles de hamsters pendant 4 semaines à la souche P.acnes, démontrant une augmentation de l'accumulation de sébum dans les glandes et conduits sébacés. La présence de P.acnes sur la peau serait donc à l'origine d'une surproduction de sébum et de la peau grasse ainsi que des désordres cutanés qui y sont associés.

Une peau grasse conduit le plus généralement à une peau luisante brillante et/ou à des imperfections cutanées telles que des pores dilatés, un grain de peau épais et/ou un défaut de desquamation.

En conséquence, l'hyper-séborrhée du à la présence de P.acnes à la surface de la peau est manifestement un phénomène qu'il apparaît important de contrôler efficacement pour prévenir la manifestation des désordres esthétique cutanés associés. Pour lutter contre les agents pathogènes tels que Propionibacterium acnes, on utilise couramment des actifs tels le que les rétinoïdes, l'acide azélaïque, le peroxyde de benzole, la Clindamycine, l'érythromycine et le sulfacétamide de sodium. Mais l'utilisation de ces actifs n'est pas dénuée d'effets secondaires. Ainsi, les rétinoïdes et l'acide azélique ne sont utilisés que dans le cas d'acné légère car ils sont peu efficaces sur les lésions inflammatoires et peuvent induire une sécheresse de la peau. Le peroxyde de benzole est susceptible de provoquer des irritations de la peau, le blanchiment des cheveux ainsi que des réactions photo-allergiques, il présente donc une toxicité non négligeable (Recherche chez l'homme du pouvoir phototoxique du peroxyde de henzoyle à 5%. M Jeanmougin, J Pedreiro, J Bouchet, J Civatte - Dermatology, 1983. , Drug-induced photoallergic and phototoxic reactions. July 2007, Vol. 6, No. 4 , Pages 431-443 Kevin R Stein & Noah S ScheinfeldLa Clindamycine, l'érythromycine et le sulfamide de sodium sous forme de sels sont des substances sensibilisantes, susceptibles de provoquer des allergies, et entrainant des résistances (D Sasseville - Progrès en Dermato-Allergologie Tome XVI: Strasbourg 2010 Il subsiste donc le besoin d'actifs d'application topique ayant un effet sur les germes du genre Propionibacterium, et particulièrement Propionibacterium acnes tout en ne présentant pas les inconvénients des composés connus pour cette utilisation. Par ailleurs le développement de résistance contre certains de ces antimicrobiens révèle le besoin d'identifier de nouvelles molécules afin de maintenir dans le temps une action efficace sur l'inhibition de croissance de P.acnes.

Or, la Demanderesse a découvert que la Dermicidine, antimicrobien naturel, permet d'atteindre ce but. Ce composé naturel présente, de façon inattendue, une inhibition de croissance de P.acnes. En particulier, les inventeurs ont découvert qu'un des peptides issus du clivage de la dermicidine, le peptide antimicrobien DCD-1L connu pour être présent au niveau de la sueur était actif sur la croissance de P.acnes et pouvaient donc être utilisés dans une composition cosmétique, en particulier en tant qu'actif permettant de prévenir et/ou traiter la peau grasse ainsi que les désordres esthétiques cutané qui y sont associés. L'invention a donc pour objet l'utilisation d'une composition cosmétique contenant au 30 moins une séquence d'acides aminés de la Dermicidine, d'un analogue ou d'un fragment de celle-ci pour prévenir et/ou traiter la peau grasse et les désordres esthétique cutanés qui y sont associés. L'invention concerne également un procédé de traitement cosmétique, dans lequel on applique sur la peau, une composition cosmétique comprenant une séquence d'acide aminé de la Dermicidine, un analogue ou un fragment de celle-ci tel que défini ci-après. Un autre aspect de l'invention est l'utilisation de la Dermicidine ou d'une séquence d'acide aminé dérivée de cette protéine, un analogue ou un fragment de celle-ci ou une séquence d'acides nucléiques codant pour une séquence d'acide aminé conforme à l'invention, notamment à titre de biomarqueur pour le diagnostic de la peau grasse. Dermicidine La Dermicidine/Protease Inducing Factor (DCD/PIF) associée à son peptide signal est une protéine de 110 aa comportant un peptide signal de 19aa dont le gène est localisé sur le chromosome 12, locus 12q13.1 et qui est exprimée de façon constitutive dans la glande sudoripare (Rieg, Garbe et al. 2004). De plus, deux isoformes sont recensées dans la base UniProt l'une plus courte (isoforme 1) l'autre plus longue isoforme 2 (Voir annexe ci-dessous). Elle est secrétée dans la sueur (Schittek, Hipfel et al. 2001). Après un processing post-traductionnel protéolytique (essentiellement par la cathepsine D) qui a lieu dans la sueur (Baechle, Flad et al. 2006), le précurseur protéique donne naissance à de nombreux peptides dont la longueur varie de 25 à 48 aa (Flad, Bogumil et al. 2002). Certains de ces peptides montrent des activités antimicrobiennes contre des microorganismes de type S. aureus, E. coli, Enterococcus faecalis, Candida albican. Une publication récente fait état de l'utilisation de la DCD comme un marqueur spécifique particulièrement sensible de la présence de traces de sueur par RT-PCR ou par ELISA utilisable dans le domaine médico-légal (Sakurada, Akutsu et al. 2009). Séquences d'acides aminés et d'acides nucléiques I.a présente invention couvre l'utilisation cosmétique d'au moins une séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO 11 à SEQ ID NO 20 ou un fragment de celle-ci pour prévenir et/ou traiter la peau grasse et/ou les désordres cutanés qui lui sont associées. La Dermicidine (DCD) associée à son peptide signal est une protéine de 110 acides aminés (SEQ ID NO: 11) comportant un peptide signal de 19 acides aminés (SEQ ID NO: 14) dont le gène est localisé sur le chromosome 12, locus 12q13.1. Deux isoformes de cette protéine sont recensées, l'une plus courte, isoforme I (SEQ ID NO: 12), l'autre plus longue, isoforrne 2 (SEQ ID NO: 13). Après clivage du peptide signal, la Dermicidine (DCD) est une protéine de 90 acides aminés selon la séquence SEQ ID NO : 16. 10 Après une maturation post-traductionnelle protéolytique, essentiellement par la Cathepsine D, qui n lieu dans la sueur (Baechle, nad et al., 2006), cc précurseur protéique donne naissance à la DCD-1 (SEQ ID NO: 19) et à la DCD-1L (SEQ ID NO :20) ainsi qu'à de nombreux peptides dont la longueur varie de 25 à 48 aa Bogumil et al., 2002). Sauf indication contraire, le terme « Dermicidine .» vise à désigner dans la présente 15 demande les séquences d'acides aminés représentées par SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: . 3, SEQ. ID NO: 16, SEQ ID NO: 19 et SEQ ID NO: 20, ayant ou non subi une maturation post-traductionnelle. Selon un mode de réalisation préféré, on entend désigner par Dermicidine la séquence d'acides aminés représentée par SEQ ID NO: 16. Selon un mode de réalisation encore préféré, 20 on entend, désigner par Dermicidine plus particulièrement la séquence d'acides aminés représentée par SEQ ID NO : 20. La partie N-terminale de la protéine (SEQ ID NO: 15) est constituée d'un facteur ogiquewent actif favorisant la survie cellulaire (Cunningham, Hodge et al. 1998). Par analogue d'une séquence d'acides aminés » conforme à l'invention, on entend désigner 25 toute séquence d'acides aminés ayant une identité de -séquence d'au moins 85 %, de préférence d'au moins 90 %, et plus préférentiellement d'au moins 95 %, et de manière encore plus préférée d'au moins 99% avec ladite séquence, et une activité biologique de. même nature. Par « activité biologique de même nature » à l'égard d'une .séquence d'acides aminés selon 30 l'invention, on entend les propriétés antimicrobiennes ou de stimulation de la survie etlou de la prolifération cellulaire habituellement attribuées à la Dermicidine.

L'identité de séquence peut être déterminée par comparaison visuelle ou au moyen de tout outil informatique généralement utilisé dans le domaine, tel que les programmes BLAST disponibles sur www.ncbi.nlm.nih.gov et utilisés avec les paramètres configurés par défaut.

Un analogue conforme à l'invention peut être un agent peptidomimétique. Un analogue d'une séquence d'acides aminés de l'invention peut résulter de modifications issues de mutation ou de variation dans les séquences des peptides selon l'invention provenant soit de la délétion ou de l'insertion d'un ou plusieurs acides aminés, soit de la substitution d'un ou plusieurs acides aminés, soit encore d'un épissage alternatif Plusieurs de ces modifications peuvent être combinées. Avantageusement, un analogue d'une séquence d'acides aminés de l'invention peut comprendre des substitutions conservatrices par rapport à cette séquence d'acides aminés. A titre d'exemple de mutations que l'on peut considérer dans la présente invention, il peut être mentionné, de manière non exhaustive, le remplacement d'un ou plusieurs résidus d'acides aminés par des résidus d'acides aminés ayant un indice hydropathique similaire sans pour autant affecter de manière sensible les propriétés biologiques du polypeptide. L'indice hydropathique est un indice attribué aux acides aminés en fonction de leur hydrophobicité et de leur charge (Kyte et al. (1982), J. Mol. Biol., 157 : 105). Une séquence d'acides aminés ou un analogue de celle-ci visé par la présente invention peut être une séquence d'acides aminés ayant subi une ou plusieurs maturation(s) post-traductionnelle(s).

Par « maturation(s) post-traductionnelle(s) », on entend englober l'ensemble des modifications qu'une séquence d'acides aminés est susceptible de subir à l'issue de sa synthèse dans une cellule, telle que par exemple une ou des phosphorylation(s), une ou des thiolation(s), une ou des acétylation(s), une ou des glycosylation(s), une ou des lipidation(s), telles qu'une farnésylation ou une palmitoylation, un réarrangement structural de type formation de ponts disulfures et/ou de type clivage à l'intérieur de la séquence peptidique.

Un analogue d'une séquence d'acides aminés présente, par ailleurs, sensiblement la même activité biologique que cette séquence d'acides aminés. Il est par ailleurs connu qu'une séquence primaire d'acides aminés, peut comprendre des sites spécifiquement reconnus par des enzymes de type protéase, telles que la trypsine, qui, une fois la reconnaissance de ces sites effective vont induire le clivage de la séquence par protéolyse. Cette protéolyse résulte en la génération de divers peptides, ou fragments de séquences d'acides aminés de l'invention. En conséquence, l'invention s'étend également aux fragments de la Dermicidine, issus le cas échéant de sa protéolyse. Au sens de l'invention, on entend par « fragment d'une séquence d'acides aminés» toute portion de la séquence d'acides aminés conforme à l'invention comprenant de 3 à 48 acides aminés consécutifs de ladite séquence. Selon un mode de réalisation, une séquence d'acides aminés convenant à 15 l'invention peut être une séquence d'acides aminés représentée par une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 11 à 20. Selon un mode de réalisation préférée, une séquence d'acides aminés convenant à l'invention peut être une séquence d'acides aminés représentée par une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, 20 SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO : 19, SEQ ID NO : 20, un analogue, ou un fragment de celle-ci. Selon un mode de réalisation préférée, une séquence d'acides aminés convenant à l'invention peut être une séquence d'acides aminés représentée par une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 16 ou SEQ ID NO: 20, un analogue, ou un fragment de celle-ci. 25 De manière encore préférée, une séquence d'acides aminés convenant l'invention peut être une séquence d'acides aminés représentée par la séquence SEQ ID NO : 20, un analogue ou un fragment de celle-ci. Selon un autre mode de réalisation, un polypeptide convenant à l'invention peut 30 également être une séquence d'acides aminés naturelle ou synthétique, le cas échéant10 susceptible d'être obtenue après hydrolyse enzymatique ou chimique de la Dermicidine ou par synthèse chimique ou biologique ou par extraction à partir d'un tissu biologique, comme par exemple la peau, exprimant naturellement cette séquence d'acides aminés ou après transfection de celui-ci, ainsi que les différentes formes post-traductionnelles de celui-ci, ou encore toute séquence d'acides aminés naturelle ou synthétique dont la séquence comprend totalement ou partiellement une séquence d'acides aminés précitée, par exemple les variants et les analogues. L'homme de l'art peut obtenir une séquence d'acides aminés conforme à l'invention au moyen de procédés à base d'ADN recombinant, comme par exemple, ceux décrits dans le manuel « Molecular Cloning - A Laboratory Manual » (2ème édition), Sambrook et al., 1989, Vol. I-III, Coldspring Harbor Laboratory, Coldspring Harbor Press, NY, (Sambrook). Selon un autre mode de réalisation, la présente invention concerne également des 15 séquences d'acides nucléiques SEQ ID NO : 1 à SEQ ID NO :10 codant respectivement pour les séquences d'acides aminés SEQ ID NO :11 à SEQ ID NO :20 de l'invention et leur mise en oeuvre dans les différentes utilisations et procédés conformes à l'invention. Au sens de la présente invention, on entend par « fragment de séquence d'acides 20 nucléiques », une séquence d'acides nucléiques codant pour une séquence d'acides aminés ayant une activité biologique de même nature que la séquence d'acides aminés codée par ladite séquence. Au sens de la présente invention, on entend par « analogue d'une séquence d'acides nucléiques » une séquence d'acides nucléiques ayant une identité de séquence d'au 25 moins 85 %, de préférence d'au moins 90 %, et plus préférentiellement d'au moins 95 %, et de manière encore plus préférée d'au moins 99% avec ladite séquence, et codant pour une séquence d'acides aminés ayant une activité biologique de même nature que la séquence d'acides aminés codée par ladite séquence. Par « analogue d'une séquence d'acides nucléiques », on entend désigner une 30 séquence d'acides nucléiques, éventuellement résultant de la dégénérescence du code des acides nucléiques, et codant pour une séquence d'acides aminés conforme à l'invention, notamment tel que défini précédemment. Selon un mode de réalisation préféré, une séquence d'acides nucléiques de l'invention peut être représentée par au moins une séquence choisie parmi SEQ ID NO :6 ou 5 SEQ ID NO :10 et de manière encore préférée est la SEQ ID NO :10. Une séquence d'acides nucléiques de l'invention peut être de toutes origines possibles, à savoir soit animale, en particulier de mammifères et encore plus particulièrement humaine, soit végétale, soit de micro-organismes, tels que par exemple virus, phages, ou 10 bactéries entre autres, ou encore de champignons, sans préjuger du fait qu'elles soient présentes de manière naturelle ou non dans ledit organisme d'origine. Selon un mode de réalisation, l'invention se rapporte également aux séquences d'acides nucléiques isolées et purifiées codant pour une séquence d'acides aminés considérés selon l'invention, ainsi qu'à leurs analogues et fragments. 15 Une séquence d'acides nucléiques conforme à l'invention peut comprendre une séquence sens, anti-sens ou interférentielle correspondant à une séquence codant pour un polypeptide conforme à l'invention. Composition cosmétique 20 La présente invention concerne également des compositions cométiques comprenant dans un milieu cosmétiquement acceptable une quantité efficace d'au moins une séquence d'acides aminés ou d'acide nucléique de l'invention. Au sens de la présente invention, on entend par « quantité efficace » d'un composé de 25 l'invention, une quantité suffisante et nécessaire de ce composé pour obtenir un effet recherché, soit l'effet de prévention et/ou traitement à l'égard des peaux grasses et/ou des défauts esthétiques. Une telle quantité peut être déterminée par toute méthode connue de l'homme de l'art, par exemple au moyen d'essais in vitro, ex vivo ou in vivo, tels que des essais cliniques.

La quantité de séquence d'acides aminés, ou de séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou d'agent actif conformes à l'invention contenue dans une composition de l'invention, encore dite « quantité efficace » est, bien entendu, fonction de la nature de l'actif et de l'effet recherché et peut donc varier dans une large mesure.

Pour donner un ordre de grandeur, une composition peut contenir une séquence d'acides aminés, ou une séquence d'acides nucléiques, ou un agent actif conformes à l'invention en une quantité représentant de 0,00001 % à 5 % du poids total de la composition, en particulier en une quantité représentant de 0,001 % à 2 % du poids total de la composition, et plus particulièrement en une quantité représentant de 0,1 % à 1 % du poids total de la composition. Dans le cadre de l'utilisation selon l'invention, la composition cosmétique est de préférence mise en oeuvre par voie topique.

Plus particulièrement, l'invention concerne une composition cosmétique comprenant un peptide représenté par une séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO: 16 ou SEQ ID NO: 20, un analogue ou un fragment de celle-ci ou une séquence d'acides nucléiques ou d'acide nucléique codant pour un tel peptide (SEQ ID NO : 6 à SEQ ID NO : 10).

De manière préférée, l'invention concerne une composition cosmétique comprenant un peptide représenté par la séquence d'acide aminés SEQ ID NO : 20, un analogue ou un fragment de celle-ci ou une séquence d'acides nucléiques codant pour un tel peptide.

Cette composition peut se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées pour une application topique sur la peau ou le cheveu, notamment sous forme d'une solution huileuse, d'une émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile ou multiple, d'une émulsion siliconée, d'une microémulsion ou nanoémulsion, d'un gel huileux, d'un produit anhydre liquide, pâteux ou solide, d'une dispersion d'huile dans une phase aqueuse en présence de sphérules, ces sphérules pouvant être des nanoparticules polymériques telles que les nanosphères et les nanocapsules ou, mieux, des vésicules lipidiques de type ionique et/ou non-ionique. Cette composition peut être plus ou moins fluide et avoir l'aspect d'une crème blanche ou colorée, d'une pommade, d'un lait, d'une lotion, d'un sérum, d'une pâte, d'une mousse ou d'un gel. Elle peut éventuellement être appliquée sur la peau ou le cheveu sous forme d'aérosol. Elle peut également se présenter sous forme solide, et par exemple sous forme de stick. Elle peut être utilisée comme produit de soin et/ou de toilette et/ou de shampoing, masque capillaire, après shampoing et/ou comme produit de maquillage de la peau.

Une composition de l'invention peut contenir des adjuvants habituels dans le domaine considéré, tels que des gélifiants hydrophiles ou lipophiles, des additifs hydrophiles ou lipophiles, des conservateurs, des antioxydants, des solvants, des parfums, des charges, des filtres, des absorbeurs d'odeurs et des matières colorantes.

Les quantités des différents constituants des compositions selon l'invention sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés. Utilisation cosmétique La présente invention concerne l'utilisation cosmétique d'une quantité efficace d'au moins une séquence d'acides aminés ou d'acide nucléique ou d' à titre d'agent actif pour prévenir et/ou traiter la peau grasse et/ou l'apparition des désordres esthétiques cutanés qui y sont associées. Selon un autre aspect, la présente invention concerne un procédé cosmétique, non thérapeutique, pour prévenir et/ou traiter la peau grasse et/ou l'apparition des désordres esthétiques cutanés qui y sont associées chez un individu en ayant besoin. Le procédé comprenant au moins une étape consistant à administrer audit individu, au moins une composition comprenant à titre d'agent actif (i) au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, notamment telle que définis ci-avant.

Un procédé ou une utilisation de l'invention permettent de prévenir et/ou traiter la peau grasse et/ou l'apparition des désordres esthétiques cutanés qui y sont associées. Un procédé ou une utilisation de l'invention permettent de conférer et/ou de retrouver une peau saine.

Par « peau saine » au sens de l'invention, on entend une peau non luisante, non brillante et ne présentant pas, ou peu de désordres esthétiques cutanés tels que des pores dilatés, des comédons, des points noirs ou un microrelief épais. De manière préférée, un procédé de l'invention peut comprendre l'application par voie topique sur au moins une partie de la peau d'un individu en ayant besoin, en particulier sur la peau du visage, du dos et/ou du décolleté, du scalp, d'au moins une couche d'une composition topique de l'invention. Un procédé cosmétique selon l'invention peut être mis en oeuvre de façon journalière, par exemple à raison d'application unique par jour, ou d'une administration fractionnée en deux ou trois fois par jour, par exemple une fois le matin et une fois le soir. Un procédé cosmétique selon l'invention peut être mis en oeuvre sur une période de temps variant d'une semaine à plusieurs semaines, voire plusieurs mois, cette période pouvant par ailleurs être répétée après des périodes de non traitement pendant plusieurs mois, voire plusieurs années.

A titre d'exemple, de procédé cosmétique selon l'invention on peut prévoir une application d'une composition cosmétique de l'invention, par exemple, à raison de 1, 2 ou 3 fois par jour, ou plus, et généralement sur une durée prolongé d'au moins 4 semaines, voire 4 à 15 semaines, avec le cas échéant une ou plusieurs périodes d'interruption. Dans un deuxième mode de réalisation, la présente invention se rapporte au domaine des biomarqueurs de la peau, et plus particulièrement de la peau grasse, hyperséborrhéique, ainsi qu'à leur mise en oeuvre à titre de cibles ou d'agents actifs cosmétiques.

Ces facteurs peuvent être utilisés à titre de biomarqueurs de la peau, comme cibles de criblage, voire comme actifs cosmétiques. Il existe également un besoin de disposer de nouveaux biomarqueurs permettant de caractériser un état de la peau, et en particulier d'une peau grasse, ou à imperfections afin d' obtenir des données quantitatives permettant d' évaluer objectivement cet état physiologique. Biomarqueur De manière inattendue, au cours d'une étude de protéomique différentielle par la technologie « iTRAQ », les inventeurs ont observé à partir de protéines extraites de strippings vernis prélevés chez 24 sujets hyperséborrhéiques et 24 sujets normo-séborrhéiques d'âge différent, que la Dermicidine (ou DCD) se révélait être un biomarqueur sensible et spécifique de la peau grasse. Plus précisément, les inventeurs ont observé que le taux d'expression de la Dermicidine, et plus particulièrement de peptides issus de la Dermicidine et identifiés par les séquences SEQ ID NO: 11 à SEQ ID NO: 20 et notamment la SEQ ID NO : 20 étaient systématiquement diminués dans les peaux grasses par rapport aux peaux saines, notamment avec un ratio de 0,32 en moyenne obtenus avec 3 expériences indépendantes. A la connaissance des inventeurs, cette protéine antimicrobienne de la surface 20 cutanée n'a jamais été classée comme variant des peaux grasses et encore moins comme l'un des biomarqueurs les plus pertinents ressortant de ce type d'études. Il est connu que la sudation diminue avec l'âge (Anderson and Kenney 1987 ; Kenney and Fowler 1988) et que la Dermicidine est une protéine sudoripare (Schittek, Hipfel et al., 2001). En revanche, les données expérimentales obtenues par les inventeurs montrent 25 de façon inattendue qu'il existe un déficit spécifique d'expression et/ou de maturation de la DCD chez les peaux grasses car celle-ci est sous-exprimée dans les échantillons cutanés. La présente invention concerne l'utilisation d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, à titre de biomarqueur d'un état de la peau.

De manière préférée, une utilisation conforme à l'invention permet de caractériser un état de la peau tel que la peau grasse. La présente invention concerne un procédé in vitro ou ex vivo pour caractériser une peau grasse d'un sujet comprenant au moins les étapes consistant à: a) effectuer, dans un -échantillon isolé de peau d'un sujet, une mesure. qualitative ou quantitative de l'expression, de la maturation ou de l'activité du biomarqueur, b) comparer ladite mesure effectuée à l'étape a) à une mesure de référence. - c) Conclure qu'une diminution de l'activité, de l'expression ou de la maturation dudit biomarqueur par rapport à ladite mesure de référence est indicative d'une peau grasse 10 chez le sujet. Au sens de l'invention, on entend par « biomarqueur », une _molécule ou l'activité d'une molécule, dont la présence, la teneur ou le degré d'activité est caractéristique d'un processus biologique, physiologique ou pathologique, ou de l'impact ou de l'effet induit par 15 l'administration d'un agent actif sur un tel processus. La présente invention concerne, selon un autre de ses aspects, l'utilisation d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention. ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, pour caractériser l'efficacité d'un traitement cosmétique de la peau, et de préférence de la peau grasse. 20 Selon un mode de réalisation, une augmentation de l'activité, de l'expression ou. de la maturation dudit biomarqueur peut être indicative d'un traitement cosmétique efficace pour exercer un effet bénéfique sur la peau et plus préférentiellement un effet à l'égard de la peau Llrasse. Dans une utilisation conforme à l'invention, une diminution ou une augmentation 25 de l'activité, de l'expression ou de la maturation dudit biomarqueur peut être déterminée par comparaison à une mesure de référence obtenue selon toute méthode connue de l'homme de l'art. Une « mesure de référence » au regard d'un paramètre donné, est une mesure qualitative ou quantitative de ce paramètre effectuée dans des conditions dites « contrôles » ou « normales », par exemple déterminée dans un échantillon de référence, ou déterminée dans un échantillon en l'absence d'un traitement présumé avoir un effet sur le paramètre. Par exemple, une mesure de référence pour une séquence d'acides aminés ou une séquence d'acides nucléiques conforme à l'invention peut être une valeur quantitative ou qualitative relative à l'expression, la maturation ou l'activité desdites séquences déterminée dans un échantillon de peau physiologiquement saine, ou déterminée dans un échantillon de peau, notamment de peau acnéique, avant un traitement cosmétique ou thérapeutique. De préférence, une mesure de référence est une mesure statistique, c'est à dire ayant été répétée sur différents échantillons de sorte à obtenir une moyenne.

La mesure de référence peut être effectuée parallèlement ou séquentiellement à la mesure test. Elle peut également être une mesure « historique », c'est-à-dire effectuée antérieurement à la mesure test, et stockée, par exemple dans une base de données, en vue d'une utilisation ultérieure.

Une comparaison de la mesure test à une mesure de référence, et une observation d'une déviation ou d'une absence de déviation entre les deux mesures, permet de tirer une information quant au paramètre mesuré, par exemple la diminution ou l'augmentation l'expression, de la maturation ou de l'activité d'une séquence d'acides aminés ou d'une séquence d'acides nucléiques conformes à l'invention.

Une telle information peut être ultérieurement mise en oeuvre pour déterminer le caractère sain ou gras d'une peau. La mesure qualitative ou quantitative de l'expression, de la maturation ou de l'activité d'une séquence d'acides nucléiques de l'invention peut être déterminée par toute méthode connue de l'homme de l'art. A titre d'exemple de méthodes convenant à l'invention, il peut être fait mention de la réaction de polymérisation en chaîne (PCR), quantitative (Q-PCR) ou non, en présence ou non de transcriptase inverse (RT-PCR ou Q-RT-PCR), du Northern-blot, de la méthode 30 « ribonuclease protection assay », des méthodes avec des puces à ADN, des méthodes avec des puces transcriptomiques, des méthodes avec des puces à oligonucléotides, des méthodes d'hybridation in situ. A titre d'exemple d'agents convenant à la détection d'une séquence d'acides nucléiques de l'invention, et en particulier d'une séquence d'ARNm, il peut être fait mention de sondes d'acides nucléiques marquées pouvant s'hybrider à une séquence d'acides nucléiques de l'invention. Une telle sonde d'acide nucléique peut être aisément obtenue par toute méthode connue de l'homme de l'art. Ainsi, les séquences d'acides nucléiques conformes à l'invention peuvent être utilisées pour réaliser des amorces oligonucléotidiques sens et/ou anti-sens, qui s'hybrident dans des conditions de forte stringence à au moins une des séquences SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO : 9, SEQ ID NO : 10, un analogue ou un fragment celle-ci.

L'expression d'une séquence d'acide nucléique peut également être déterminée, de manière indirecte, par la détermination de l'expression de la séquence d'acides aminées codée par ladite séquence, au moyen de toute technique connue dans le domaine, telle que le Western-Blot, l'ELISA, la méthode de BRADFORD ou de LOWRY, ou comme indiqué ci-après.

La mesure qualitative ou quantitative, de l'expression, de la maturation, ou de l'activité d'une séquence d'acides aminés de l'invention peut être effectuée au moyen de toute méthode connue de l'homme de l'art. A titre de méthodes de détection de l'expression, de la maturation, ou de l'activité d'une séquence d'acides aminés, il peut être fait mention du Western-blot, du Slot-blot, du Dot-blot, des méthodes ELISA (Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay) de type singleplex ou multiplex, des méthodes de protéomique ou de glycomique, de coloration de polypeptides dans un gel de polyacrylamide par un colorant à base d'Argent, par le bleu de Coomassie ou par le SYPRO, de l'immunofluorescence, de l'absorption UV, de méthodes immunohistochimiques en microscopie classique, électronique ou confocale, de FRET (fluorescence resonance energy transfer/transfert d'énergie par résonance de fluorescence), des méthodes de TR-FRET (time resolved FRET/FRET en résolution de temps), des méthodes de FLIM (fluorescence lifetime imaging microscopy/imagerie par microscopie en temps de fluorescence), des méthodes de FSPIM (fluorescence spectral imaging microscopy/imagerie par microscopie en spectre de fluorescence), des méthodes de FRAP (fluorescence recovery after photobleaching/recouvrement de fluorescence après photoblanchiment), des méthodes par gène rapporteur, des méthodes d'AFM (atomic force microscopy/microscopie par force atomique), des méthodes de résonance plasmonique de surface, des méthodes de microcalorimétrie, des méthodes de cytométrie en flux, des méthodes de biosenseurs, des méthodes de radioimmuno-essais (RIA), des méthodes de focalisation isoélectrique, et des tests enzymatiques, des méthodes mettant en oeuvre des puces à peptides, des puces à sucre, des puces d'anticorps, des méthodes de spectrométrie de masse, des méthodes de spectrométrie de type SELDI-TOF (Ciphergen). De façon plus générale, des méthodes de dosage immunoenzymatiques à partir de solutions de protéines, plus quantitatives et sensibles peuvent en particulier être utilisées. Ces méthodes de type ELISA associent des couples d'anticorps de capture et de détection spécifique de l'antigène ciblé. Des anticorps commerciaux ou des anticorps polyclonaux, monoclonaux ou recombinants développés spécifiquement peuvent être utilisés. Des techniques ELISA multiplexes de grande capacité peuvent également être mises en oeuvre. On peut ainsi citer l'approche multiplexe de type anticorps sur billes Luminex (par exemple Bioplex de Bio-Rad), de type anticorps sur surface plane (« antibodies-arrays ») (par exemple approche proposée par la société MesoScale Discovery). On peut aussi citer la technologie sur cartouche microfluidique mise au point par la société Coréenne NanoEntek. Dans une approche récente une technique nouvelle basée sur des anticorps appelés « Quenchbodies » proposés par la société japonaise Ushio permet de n'utiliser qu'un anticorps. En particulier, il peut être avantageux de détecter l'expression d'une séquence d'acides aminés de l'invention au moyen d'un anticorps, le cas échéant sous une forme marquée. Un tel anticorps peut être marqué au moyen d'une substance détectable directement ou détectable par réaction avec un autre réactif. Par « anticorps », on entend désigner de manière générale des anticorps monoclonaux ou polyclonaux, ainsi que des fragments d'immunoglobuline susceptibles de lier un antigène et qui peuvent être produits par toute technique de génie génétique connue de l'homme de l'art ou par coupure enzymatique ou chimique d'anticorps intact.

Un anticorps susceptible d'être utilisé à titre d'outil d'évaluation d'un état d'un épiderme peut être obtenu par tout procédé connu de l'homme de l'art, tel que décrit dans « Antibodies: A Laboratory Manual », Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990).

Selon un mode de réalisation préféré, il peut être avantageux de détecter l'expression d'une séquence d'acides aminés de l'invention au moyen d'une méthode protéomique différentiel « iTRAQ ». Une telle méthode est connue de l'homme de l'art et peut avantageusement être mise en oeuvre comme décrit dans les exemples ci-après.

De manière particulière, par « activité » à l'égard d'une séquence d'acides aminés de l'invention on entend une activité antimicrobienne, une activité de stimulation de la survie cellulaire, une activité de stimulation de la prolifération cellulaire, ou une activité de réduction ou de prévention de la peau âgée et/ou des signes cutanés du vieillissement, comme indiqué ci-dessus.

Une telle activité peut être déterminée par toute méthode connue de l'homme de l'art, comme par exemple, par évaluation de la prolifération ou de la survie de cellules épidermiques en cultures, telles que des kératinocytes, ou par évaluation de l'activité antimicrobienne sur des bactéries en culture, telles que Staphylococcus aureus, Escherichia colt ou P.acnes.

De manière préférée, la détermination d'un état de la peau ou la caractérisation de l'efficacité d'un traitement cosmétique de la peau peuvent être effectuées par mesure de la variation de l'expression d'une séquence d'acides aminées de l'invention, et de préférence représentée par une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO : 19 ou SEQ ID NO : 20, un analogue ou un fragment de celle-ci.

Les procédés de l'invention sont particulièrement avantageux dans la mesure où leur mise en oeuvre ne nécessite pas de recourir à une technique invasive. Un échantillon d'épiderme peut ainsi être obtenu par des techniques dites de « stripping » et directement analysé par une technique d'analyse conventionnelle connue de l'homme de l'art.

Ces strippings sont des surfaces collantes appliquées à la surface de l'épiderme comme le Blenderm® de 3M, le D' squam (adhésif commercial de CuDERM), la colle cyanoacrylate ou la méthode du « stripping » vernis. Grâce à ces « strippings », les cornéocytes adhérents et le contenu de leurs espaces intercellulaires peuvent être prélevés et soumis par la suite à une extraction permettant d'avoir accès au contenu protéique. Le prélèvement d'un échantillon convenant à un procédé de l'invention peut aussi être effectué de façon plus directe par « lavage » de la surface cutanée, au moyen par exemple d'accessoires de type turbine à ailette, de type cellule à spirale telle que décrit dans le brevet FR 2 667 778 associée à un circuit fluidique, ou simplement par ajout/prélèvement d'une goutte de tampon à la surface de la peau. A titre indicatif, d'autres méthodes de prélèvement adaptées à la mise en oeuvre de l'invention peuvent être mentionnées, telles que des méthodes par grattage de la partie supérieure du stratum corneum au moyen d'un système bilames. Cette technique permet de recueillir des squames qui peuvent ensuite être directement analysés par différentes techniques pour déterminer les taux en minéraux, aminoacides ou lipides. Avantageusement, un des marqueurs de l'invention peut être mise en oeuvre à des fins de sélection préclinique, plus efficace et plus rigoureuse, d'individus, en vue d'évaluer l'efficacité de traitement ou d'actif cosmétique pour le soin de la peau. Egalement, un biomarqueur de l'invention peut avantageusement être mis en oeuvre comme indiqué précédemment pour évaluer l'efficacité d'un agent actif, in vitro, ex vivo ou in vivo. Egalement, un biomarqueur de l'invention peut être mis en oeuvre pour établir un conseil personnalisé d'un traitement cosmétique pour un individu en fonction de son profil d'expression de biomarqueurs cutanés.

Selon encore un autre de ses objets, la présente invention concerne l'utilisation (i) d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou (ii) d'une séquence d'acides nucléiques de l'invention, pour cribler des agents actifs ou de moduler l'activité, l'expression ou la maturation de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques.

Au sens de l'invention on entend par « expression » à l'égard d'une séquence d'acides aminés, par exemple une protéine ou un peptide, ou d'une séquence d'acides nucléiques, par exemple un ARNm, sa teneur ou la variation de sa teneur par rapport à une référence.

Au sens de l'invention on entend par « maturation » à l'égard d'une séquence d'acides aminés, par exemple une protéine ou un peptide, ou d'une séquence d'acides nucléiques, par exemple un ARNm, les modifications qui suivent leur synthèse dans un environnement cellulaire. Par exemple, dans le cas d'une séquence d'acides aminés, on entend par « maturation », les modifications post-traductionnelles, telle la glycosylation ou la farnésylation de certains acides aminés, ou les étapes protéolytiques conduisant à l'élimination de séquences dites « signal » ou « sécrétoire » ou à la libération de séquences présentant des propriétés biologiques particulières. Dans le cas d'une séquence d'acides nucléiques, on entend par « maturation », par exemple, l'épissage alternatif d'un ARNm. Au sens de l'invention on entend par « activité », à l'égard d'une séquence d'acides aminés, par exemple une protéine ou un peptide, l'activité biologique de la séquence d'acides aminés, le cas échéant après maturation, telle qu'une activité enzymatique, une activité d'agoniste ou d'antagoniste vis-à-vis d'un récepteur, ou d'activateur ou d'inhibiteur d'une enzyme, une activité dite de « structure », ou une activité antimicrobienne. Au sens de l'invention on entend par « activité », à l'égard d'une séquence d'acides nucléiques, par exemple un ARNm, sa traduction. Selon un autre de ses objets, la présente invention concerne l'utilisation (i) d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou (ii) d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, pour caractériser l'efficacité d'un traitement de la peau grasse.

Egalement, selon un autre avantage, la présente invention permet de proposer de nouveaux agents actifs convenant à la prévention et/ou au traitement des peaux grasses.

Criblage Il existe encore un besoin de disposer de nouveaux outils de criblage d'agents actifs convenant au soin de la peau, et plus particulièrement utiles pour prévenir et/ou traiter la peau grasse.

La présente invention a pour objet de satisfaire à ces besoins. Selon un de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation d'une séquence d'acides aminés, d'acides nucléiques de l'invention, pour cribler ou dans un procédé de criblage, en particulier in vitro ou ex vivo, d'agents actifs convenant particulièrement pour prévenir et/ou traiter la peau grasse et/ou prévenir les désordres esthétiques qui y sont associées. Procédé de criblage in vitro ou ex vivo d'agents actifs susceptibles de prévenir ou traiter la peau grasse ou prévenir l'apparition d'imperfections qui y sont associées, de moduler l'activité, l'expression ou la maturation d'une séquence d'acides aminés conforme à l'invention, ou d'une séquence d'acides nucléiques conforme à l'invention, comprenant au moins les étapes consistant à : a) disposer ladite séquence d'acides aminés ou ladite séquence d'acides nucléiques dans des conditions propices à l'activité, l'expression ou la maturation desdites séquences, b) mettre en contact ladite séquence d'acides aminés ou ladite séquence d'acides nucléiques avec au moins un agent actif à tester, c) effectuer une mesure qualitative ou quantitative de l'expression, de la maturation ou de l'activité de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques, et d) comparer la mesure obtenue à l'étape c) à une mesure de référence. e) Conclure que l'augmentation de l'activité ou de l'expression ou de la maturation d'une séquence d'acide aminé conforme à l'invention est indicative de l'efficacité dudit agent actif pour prévenir ou traiter la peau grasse ou prévenir l'apparition d'imperfections.

Les agents actifs criblés peuvent notamment convenir au traitement et/ou à la prévention de la peau grasse et/ou des imperfections qui y sont associées. Une utilisation ou un procédé de l'invention peuvent comprendre la comparaison d'une mesure de l'activité, de l'expression ou de la maturation d'une séquence d'acide aminés ou d'une séquence d'acides nucléiques conforme à l'invention à une mesure de référence. Une mesure de référence peut être telle que définie précédemment. En particulier une mesure de référence peut être une valeur quantitative ou qualitative relative à l'expression, la maturation ou l'activité desdites séquences déterminée dans un échantillon en l'absence d'agent actif Ainsi, une mesure de référence peut être obtenue en réitérant les étapes d'un procédé de l'invention, et notamment les étapes a), b), c), d) et e) d'un procédé de l'invention tel que défini précédemment, en l'absence de composés biologiques ou chimiques à tester. Une comparaison de la mesure test à une mesure de référence, et une observation d'une déviation ou d'une absence de déviation entre les deux mesures, permet de tirer une information quant à l'effet de l'agent actif testé. La détermination quantitative ou qualitative de l'expression, de la maturation ou de l'activité d'une séquence d'acides aminés ou d'une séquence d'acides nucléiques de l'invention peut être effectuée par toute méthode connue de l'homme de l'art, et notamment comme décrit précédemment.

Selon un mode de réalisation, le criblage d'un agent actif susceptible de moduler l'activité d'une séquence d'acides aminées de l'invention peut se faire par mesure de l'activité ou de l'expression d'une molécule cible appartenant aux voies de signalisation ou de métabolisme dans lesquelles peut être impliqué ladite d'une séquence d'acides aminées, tel que par exemple un système de gène reporteur. Selon un mode de réalisation, un procédé de l'invention peut être mis en oeuvre dans un système acellulaire, i.e. dans un système ne comprenant pas de cellules mais reproduisant des fonctions cellulaires, ou dans un échantillon cellulaire isolé. Un procédé conforme à l'invention peut être effectué sur un échantillon cellulaire isolé, un échantillon acellulaire, sur une séquence d'acides aminés isolée ou sur une séquence d'acides nucléiques isolée de l'invention, obtenus par biopsie cutanée, à partir de cellules en culture, notamment à partir d'un modèle épidermique, ou d'un prélèvement de surface cutané non-invasif, notamment par adhésif (« tape-stripping ») de stratum corneum ou par simple lavage, comme décrit précédemment. Avantageusement, à titre d'échantillon cellulaire convenant à l'invention, on peut mentionner un échantillon de kératinocytes ou tout autre type cellulaire de la peau exprimant une séquence d'acides aminés de l'invention. De manière préférée, le criblage d'un agent actif peut être effectuée par mesure de la variation de l'expression, en présence et en absence de l'agent actif criblé, d'une séquence d'acides aminées de l'invention, et de préférence représentée par une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO :18 ou SEQ ID NO: 20, un analogue ou un fragment de celle-ci et de manière encore préférée représentée par la SEQ ID NO : 20. Les agents actifs issus d'un criblage selon l'invention peuvent être avantageusement utilisés à des fins cosmétiques, notamment pour le traitement de la peau grasse.

Selon un mode de réalisation, un agent actif conforme à l'invention peut être un agent stimulateur de l'activité, de l'expression ou de la maturation d'une séquence d'acides aminées de l'invention. A titre d'agent modulateur susceptible d'être criblé selon une utilisation ou un procédé conforme à l'invention, on peut également mentionner les anticorps, ou les ARN 20 interférents. Au sens de la présente invention, « un » doit se comprendre, sauf indication contraire, au sens de « au moins un ». Les exemples et figures ci-après sont présentés à titre illustratif et non limitatif de l'invention. 25 EXEMPLES Exemple 1 Détermination de l'activité inhibitrice de la Dermicidine sur la croissance de P.acnes.

Une microméthode a été développée en microplaque. Le principe de l'essai repose sur la mise en contact de concentrations décroissantes de peptide antimicrobien (DCD-1L) avec un inoculum identique de P.acnes dans un milieu de culture propice à la croissance de P.acnes. Après incubation de la microplaque 48h avec la souche P. acnes, la Densité Optique de l'échantillon (620 nm) est mesurée et les résultats sont exprimés en pourcentage de croissance calculé par rapport à un témoin de croissance sans peptide antimicrobien (témoin négatif). De plus on met aussi en contact avec du trichlosan afin d'avoir un témoin positif La concentration minimale inhibitrice ou CMI est la plus petite concentration d'antibiotique suffisante pour inhiber, au laboratoire c'est-à-dire in vitro, la croissance d'une souche de bactéries (colonie bactérienne). La gamme de concentrations choisie allait de 5 à 100 lag/mL. Chaque concentration a été testée en triplicat.

L'activité inhibitrice des peptides a été évaluée sur le germe suivant : - P. acnes ATCC 6919 (bactérie à Gram+) Nom du peptide antimicrobien lnfosFournisseurs CMI en 1.1g/mL de lots Référence P. acnes HBD2 humain recombiante Interchim (Serotec) code produit PHP161X, batch 221210 75 RNASE 7 Extraction Ply Humain (corne de pied) >100 S100A7 humaine recombinante Interchim (Protera) folding vérifié par RMN lot EN00510- 23/24/25 >100 Lacritine Synthetisé par 100 hybrogenics Ref : Hgx 2238v1 Dermcidine (DCD1L) Synthetisé par jpt <5 SEQ ID NO :20 On observe que la croissance de P.acnes est fortement inhibée en présence d'une concentration faible du peptide DCD1L.

Exemple 2 Expression de la Dermicidine dans la peau 1- Matériels et méthodes a- Une étude in vivo de protéomique différentielle quantitative iTRAQ (isobaric tag for relative and absolute quantification) a été réalisée sur un groupe de 48 sujets afin de comparer l'expression de la dermicidine sur peaux hyperséborréhiques et normo-séborrhéiques. b- Protocole iTRAQ La détection de l'expression de la Dermicidine (DCD) a été réalisée au moyen de la méthode iTRAQ (Isobaric Tagging Reagents for Quantitative Proteomic Analysis) développée par la société Applied Biosystems. Cette méthode permet la quantification de peptides préalablement marqués par un Tag isobarique. Il existe 4 tags différents et on peut comparer jusqu'à 4 types d'échantillons distincts dans une même analyse LC/MS-MS.

Le principe de cette méthode est le suivant : - Digestion d'extraits protéiques et marquage : Dans un premier temps, chaque extrait protéique est digéré par une enzyme protéolytique : la trypsine. Dans un second temps, chaque mélange peptidique obtenu est marqué avec un Tag isobarique d'une masse totale 145, comprenant un groupe « reporter » de masse 114, 115, 116 ou 117, et un groupe « balance » de masse 31, 30, 29 ou 28, liés entre eux par un site de fragmentation MS.

Le marquage est obtenu par réaction du Peptide Reactive Group de chaque tag avec les amines primaires des peptides (extrémité N-terminale des peptides ou la chaîne latérale des lysines ou des tyrosines. - Analyse LC/MS-MS et quantification : Après l'étape de marquage, les échantillons sont mis en commun et analysés par spectrométrie de masse. Un peptide donné, présent dans plusieurs échantillons, aura une masse parente identique mais son spectre de fragmentation MS/MS va générer la masse du groupe rapporteur caractéristique de chacun des réactifs iTRAQ. La comparaison de l'intensité de chaque ion rapporteur (114, 115, 116 ou 117) permet alors la quantification du peptide. La méthode iTRAQ est plus précisément décrite par Zieske (J. Exp. Bot., 2006, 57 :1501) ou Wiese et al. (Proteomics, 2007, 7 :340). c- Prélèvement et traitement des échantillons cutanés Des prélèvements de type stripping-vernis de stratum corneum d'une surface de 90 cm2, sont obtenus selon le protocole décrit par Mehul et al., J. Biol. Chem., 2000, 275(17):12841-7, au niveau de la face externe de la jambe. Deux groupes de sujets sont prélevés : 1) Groupes « Peau saine » : 6 groupes de 4 donneurs de 5 strippings 2) Groupes « Peau grasse » : 6 groupes de 4 donneurs de 5 strippings Ces prélèvements de peau sont ensuite analysés par protéomique au moyen de la technique dite de « marquage isobarique », précédemment décrite, en utilisant le kit iTRAQ Reagents Multiplex kit (4352135), d'Applied Biosystems, conformément aux instructions du fabricant. No accession Identité de la protéine Ratio Moyen Ecart type Confiance P81605 DCD- HUMAN 0.32 0.09 3 DCD-1 (homo sapiens) Exemple 3 : lotion pour le visage On prépare une composition cosmétique comprenant les ingrédients suivants (% pondéraux) : Dermcidin 1 antiinflammatoire 0,05 antioxydant 0,05 isopropanol 40,0 conservateur 0,30 eau qsp 100 %15 Exemple 4 : gel pour le soin du visage On prépare une composition cosmétique comprenant les ingrédients suivants (% pondéraux) : Dermicidine 0,5 Hydroxypropylcellulose (Klucel H®) 5,00 Vitamine E 2,50 Isopropanol 40,00 Conservateur 0,30 Eau qsp 100 % Exemple 5 : Crème pour le soin du visage On prépare une composition cosmétique comprenant les ingrédients suivants (% pondéraux) : Arachidyl behenyl alcohol/arachidylglusoside 3,0 Isohexadecane 7,0 Dermicidine 1,00 Glycérine 2,0 BHT 3,0 POB méthyle 0,1 POB propyle 0,05 Eau qsp 100% BIBLIOGRAPHIE Anderson, R. K. and W. L. Kenney (1987). « Effect of age on heat-activated sweat gland density and flow during exercise in dry heat » J. Appl. Physiol. 63(3): 1089-1094.

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Gilhar A, Ish-Shalom S, Pillar T, Etzioni A, Silbermann M: Effect of antiinsulin-like20

Claims (7)

1. REVENDICATIONS1. Utilisation cosmétique d'au moins une séquence d'acides aminés choisie parmi. 5 SEQ ID NO I 1 à SEQ ID 20 ou un fragment de celle-ci pour prévenir et/ou traiter la peau grasse et/ou les désordres esthétiques cutanés qui lui sont associées.
2. 2. Utilisation cosmétique selon la revendication 1, caractérisé en ce que. les désordres esthétiques cutanés associés sont dus à une hyper-séborrhée. 10
3. 3. Utilisation cosmétique scion les revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que les désordres esthétiques cutanés associés sont sélectionnés parmi un grain de peau épais, une peau luisante, un peau présentant des orifices folliculaires ou des pores dilatés. 15
4. 4. Utilisation cosmétique selon la revendication 1 ; dans laquelle ladite séquence d'acides aminés SEQ ID NO: 11 à SEQ ID NO: 20ou un fragment de celles-ci, est choisie parmi SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: .18, SEQ H) NO. : 19, SEQ ID NO : 20, un analogue ou un fragment de celle-ci. 20
5. 5. Utilisation cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédentes dans laquelle ladite séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO 19, SEQ ID NO : 20 ou un fragment de celle-ci es: la SEQ ID NO 20, un analogue ou un fragment de celle-ci: 25
6. 6. Utilisation cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en cc que ladite séquence est utilisée .à titre d'actif dans une composition cosmétique. 30
7. 7. Utilisation cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'une séquence d'acides aminés représentant de 0.00001 t',; à 5 % du poids total de la composition. en particulier en une quantité représentant de 0,001 % à 2 % du poids total de la composition, et plus particulièrement en une quantité représentant de 0,1 % à 1 °/0 du poids total de la composition cosmétique. S. Procédé cosmétique pour traiter et/ou prévenir les peaux grasses etiou les désordres esthétiques cutanés associés de préférence pour traiter et/ou prévenir un grain de peau epais, une peau luisante, une peau présentant des pores dilatés chez un individu en ayant besoin, comprenant au moins une étape consistant à administrer audit individu, au moins une composition comprenant à titre d'agent actif au moins une séquence d'acides aminés telle que définie en revendications 1 à 7.