FR2823112A1

FR2823112A1 - Produit bronzant et filtrant

Info

Publication number: FR2823112A1
Application number: FR0104808A
Authority: FR
Inventors: Rainer Schmidt; Marcelle Regnier; Christine Duval
Original assignee: LOreal SA
Current assignee: LOreal SA
Priority date: 2001-04-09
Filing date: 2001-04-09
Publication date: 2002-10-11
Anticipated expiration: 2021-04-09
Also published as: JP3870164B2; US20040170580A1; WO2002080878A3; FR2823112B1; JP2004525161A; WO2002080878A2; EP1385472A2

Abstract

L'invention a pour objet un produit comprenant au moins un agent filtrant les rayonnements ultraviolets et au moins un composé stimulant la synthèse de la mélanine, une composition comprenant au moins ledit produit, l'utilisation dudit produit dans une composition ou pour la préparation d'une composition destinée à protéger la peau de l'action néfaste des rayonnements ultraviolets, ainsi qu'un procédé de traitement cosmétique de la peau.

Description

Le rayonnement solaire est composé, entre autres, de rayonnement ultraviolet de type A de longueurs d'onde comprises entre 320 nm et 400 nm (UV-A), de rayonnements ultraviolets de type B de longueurs d'onde comprises entre 280 et 320 nm (UV-B) et de rayonnements ultraviolets de type C de longueurs d'onde comprises entre 200 et 280 nm (UV-C).

Les UV-B sont fortement énergétiques et peu pénétrants, faiblement représentés dans la lumière solaire, dépendants des variations climatiques (temps nuageux, couvert, etc.) et leur présence varie en fonction des heures de la journée (notion de pic (zénith)).

Les UV-A sont moins énergétiques que les UV-B mais plus pénétrants, présents en grande quantité dans la lumière solaire (au minimum 100 fois plus d'UV-A que d'UV-B), peu dépendants des variations climatiques et présents quelle que soit l'heure de la journée.

Les UV-C sont fortement énergétiques et peu pénétrants. Ils sont stoppés par la couche d'ozone et théoriquement n'arrivent pas sur la terre. Mais potentiellement ils peuvent être responsables de dégâts des acides nucléiques.

Il est connu que le rayonnement solaire est responsable d'effets bénéfiques sur la peau, comme par exemple le brunissement, mais qu'il est aussi susceptible d'induire des dommages de celle-ci, notamment dans le cas d'une peau dite "sensible"ou d'une peau continuellement exposée.

Au titre des bienfaits le brunissement, communément appelé bronzage, est un élément essentiel du système de défense de la peau. En effet en réponse aux rayonnements ultraviolets, les mélanocytes de la couche basale de l'épiderme synthétisent de la mélanine qui une fois incorporée aux kératinocytes constitue un filtre naturel situé à la surface de la peau, filtre qui absorbe le rayonnement ultraviolet. La mélanine, sous forme de particule, peut agir également comme écran réfléchissant les UV. Ceci a pour objectif de diminuer la quantité de rayonnement ultraviolet qui traverse les couches de la peau afin de l'empêcher

d'attendre les couches profondes et d'y causer des dommages néfastes pour la peau.

On sait par ailleurs combien il est important d'avoir une bonne mine et combien une peau bronzée est toujours signe de bonne santé. D'où l'engouement pour des expositions prolongées aux rayonnements ultraviolets pour acquérir un bronzage suffisant.

Cependant, au titre des effets nocifs, on sait qu'une exposition excessive de la peau aux rayonnements ultraviolets, aux rayonnements solaires en particulier, peut entraîner un changement dans l'élasticité de la peau, dans sa teneur en certains composés, et ainsi favoriser l'accélération du processus naturel de vieillissement de la peau. Ce processus de vieillissement accéléré ou prématuré. dû aux rayonnements ultraviolets est généralement appelé photo-vieillissement ou vieillissement actinique ou dermatohéliose.

Les UV-B faiblement pénétrants atteignent principalement l'épiderme. Le rôle des UV-B a été clairement démontré dans l'induction de cancers de la peau UV-induits. Ils ont en effet comme principal chromophore les acides nucléiques en particulier l'acide désoxyribonucléique, au sein duquel ils induisent des lésions et/ou des mutations (Eller M. S., 1995, in Photodamage. 26-56, Blackwell ed).

On comprend donc le dilemme qui existe à d'un côté vouloir s'exposer au rayonnement ultraviolet pour présenter un aspect bronzé et d'un autre côté l'absolue nécessité de se protéger de ces mêmes rayonnements du fait de leurs effets nocifs.

Jusqu'à présent une des solutions proposées est de fournir des compositions comprenant un agent filtrant possédant un indice de protection moyen permettant à la fois une certaine protection et un certain brunissement. En effet, si l'agent filtrant est en quantité élevée, il va d'autant plus limiter la stimulation par les ultraviolets de la synthèse de la mélanine par les mélanocytes. A l'inverse, une composition contenant une quantité faible ou moyenne d'agent filtrant ne présente pas les garanties suffisantes en terme de protection contre les effets néfastes du rayonnement ultraviolet, ni ne procure une satisfaction suffisante en terme d'obtention d'un brunissement.

Il persiste donc un besoin en composition filtrante qui d'une part présenteraient un pouvoir filtrant élevé et d'autre part une capacité à stimuler le brunissement dans

des propositions également élevées.

La demanderesse vient maintenant de montrer que l'association d'un agent filtrant le rayonnement ultraviolet et d'un composé stimulant la synthèse de la mélanine présente un effet surprenant qui conduit à l'obtention d'un produit filtrant et bronzant ayant des qualités filtrantes et un pouvoir de stimulation de la synthèse de la mélanine élevés.

L'invention a donc pour objet premier un produit composé par au moins l'association d'au moins un agent filtrant les rayonnements ultraviolets et d'un agent stimulant la synthèse de la mélanine.

L'invention a aussi pour objet une composition comprenant au moins l'association d'au moins un agent filtrant les rayonnements ultraviolets et d'un agent stimulant la synthèse de la mélanine.

L'agent filtrant les rayonnements ultraviolets est de préférence choisi parmi les filtres organiques et/ou les filtres minéraux.

Comme filtres organiques on peut notamment citer les dérivés cinnamiques, les dérivés salicyliques, les dérivés du camphre, les dérivés de triazine, les dérivés de la benzophénone, les dérivés du dibenzoylméthane, les dérivés de p, ss- diphénylacrylate, les dérivés de l'acide p-aminobenzoïque, les polymères filtres et silicones filtres décrits dans la demande W0-93/04665ou encore les filtres organiques décrits dans la demande de brevet EP-A 0 487 404.

Comme filtres minéraux on peut notamment citer des pigments ou bien encore des nanopigments (taille moyenne des particules primaires : généralement entre 5 nm et 100 nm, de préférence entre 10 et 50 nm) d'oxydes métalliques enrobés ou non comme par exemple des nanopigments d'oxyde de titane (amorphe ou cristallisé sous forme rutile et/ou anatase), de fer, de zinc, de zirconium ou de cérium qui sont tous des agents photoprotecteurs bien connus en soi agissant par blocage physique (réflection et/ou diffusion) du rayonnement UV. Des agents d'enrobage classiques sont par ailleurs l'alumine et/ou le stéarate d'aluminium. De tels nanopigments d'oxydes métalliques, enrobés ou non enrobés, sont en particulier décrits dans les demandes de brevets EP-A-0 518 772 et EP-A-0 518 773.

Comme exemples de filtres solaires actifs dans l'UV-A et/ou l'UV-B, on peut citer : l'acide p-aminobenzoïque, le p-aminobenzoate oxyéthyléné (25mol), le p-diméthylaminobenzoate de 2-éthylhexyle, le p-aminobenzoate d'éthyle N-oxypropyléné le p-aminobenzoate de glycérol, le salicylate d'homomenthyle, le salicylate de 2-éthylhexyle, le salicylate de triéthanolamine,

le salicylate de 4-isopropylbenzyle, le 4-ter-butyl-4'-méthoxy-dibenzoylméthane, le 4-isopropyl-dibenzoylméthane, l'anthranilate de menthyle, le 2-éthylhexyl-2-cyano-3, 3'-diphénylacrylate, l'éthyl-2-cyano-3, 3'-diphénylacrylate, l'acide 2-phényl benzimidazol 5-sulfonique et ses sels, le 3- (4'-triméthylammonium)-benzylidèn-bornan-2-on-méthylsutfate, le 2-hydroxy-4-méthoxybenzophénone, le 2-hydroxy-4-méthoxybenzophénone-5-sulfonate, le 2, 4-dihydroxybenzophénone, le 2,2', 4,4'-tétrahydroxybenzophénone, le 2,2'-dihydroxy-4, 4'diméthoxybenzophénone, le 2-hydroxy-4-n-octoxybenzophénone,

le 2-hydroxy-4-méthoxy-4'-méthylbenzophénone, l'acide a- (2-oxoborn-3-ylidène)-tolyl-4-sulfonique et ses sels le 3- (4'-sulfo) benzylidèn-bornan-2-one et ses sels, le 3- (4'méthylbenzylidène)-d, l-camphre, le 3-benzylidène-d, l-camphre, l'acide benzène 1, 4-di (3-méthylidène-10-camphosulfonique) et ses sels, l'acide urocanique, la 2,4, 6-tris- [ p- (2'-éthylhexyl-1'-oxycarbonyl) anilino]-1, 3, 5-triazine, 2-[ (p- (tertiobutylamido) anilino]-4, 6-bis-[ (p- (2'-éthylhexyl-1'-oxycarbonyl) anilino]- 1,3, 5-triazine, la 2,4-bis {[4-2-éthyl-hexyloxy)]-2-hydroxy]-phenyl}-6-(4-méthoxy-phenyl)-1, 3, 5triazine ; le polymère de N- (2 et 4)-[(2-oxoborn-3-ylidèn)méthyl]benzyl]-acrylamide,

l'acide 4, 4-bis-benzimidazolyl-phénylèn-3, 3', 5, 5'-tétrasulfonique et ses sels le 2, 2'-méthylèn-bis-[6- (2H-benzotriazol-2-yl)-4- (1, 1, 3, 3-tétraméthylbutyl) phénol]. les polyorganosiloxanes à fonction malonate.

La quantité de composé reconnu comme agent filtrant des rayonnements ultraviolets, contenue dans la composition de l'invention est bien entendu fonction de l'effet recherché et peut donc varier dans une large mesure.

Pour donner un ordre de grandeur, la quantité d'agents filtrants des rayonnements ultraviolets contenue dans la composition est en une quantité représentant de 0,1% à 25% du poids total de la composition et préférentiellement en une quantité représentant de 0,5% à 10% du poids total de la composition.

Le ou les agents stimulant la synthèse de la mélanine peuvent être choisi parmi :

-des analogues de substrats de la tyrosinase, enzyme clé de la mélanogénèse tels que la tyrosine, la L-dopa ou la L-dihydroxylphenylalanine - des activateurs de l'activité ou de l'expression de la tyrosinase tels que la forskoline, les bases xanthiques (théophylline, caféine), les peptides pro- opiomélanocortiques (ACTH, alpha-MSH ou autres agonistes de des récepteurs MC1), les diacylglycérols, les diols aliphatiques ou cycliques, les psoralènes, les prostaglandines et analogues, les activateurs de la protéine kinase G NO/cGMP dépendante, -- des activateurs de transfert des mélanosomes vers les kératinocytes tels que les sérine protéases ou d'agonistes des récepteurs PAR-2.

Préférentiellement selon l'invention on utilise un extrait de Burnet (Sanguisorba officinalis) ou encore un extrait d'au moins un végétal du genre Chrysanthemum, particulièrement de l'espèce Chrysanthemum sinensis.

L'extrait d'au moins un végétal du genre Chrysanthemum peut être tout extrait préparé à partir de tout matériel végétal issu d'un végétal du genre Chrysanthemum.

La composition peut contenir au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Chrysanthemum obtenu à partir de matériel issu d'un végétal cultivé in vivo ou issu de culture in vitro.

Par culture in vivo on entend toute culture de type classique c'est à dire en sol à l'air libre ou en serre, ou encore hors sol.

On peut ainsi utiliser par exemple selon l'invention un extrait de différentes parties du végétal, feuilles, fleurs, tiges, racines, cellules indifférenciées, seules ou en mélange, que le végétal soit cultivé in vivo ou in vitro.

La pression de sélection imposée par les conditions physico-chimiques lors de la croissance des cellules végétales in vitro permet d'obtenir un matériel végétal standardisé et disponible tout au long de l'année contrairement aux plantes cultivées in vivo.

Par culture in vitro, on entend l'ensemble des techniques connues de l'homme du métier qui permet de manière artificielle l'obtention d'un végétal ou d'une partie d'un végétal.

De préférence on utilise un extrait obtenu à partir de matériel végétai cultivé in vivo et encore plus préférentiellement un extrait obtenu à partir de feuilles de végétaux du genre Chrysanthemum cultivées in vivo.

Par extrait d'au moins un végétal du genre Chrysanthemum, on entend aussi bien un mélange brut de parties du végétal grossièrement réduites en morceaux et du solvant d'extraction que des préparations élaborés des principes actifs solubilisés lors de l'extraction. Un extrait particulièrement utilisable selon l'invention est réalisé par le broyage fin de parties du végétal suivi d'une macération dans le solvant d'extraction et finalement d'une filtration. Bien évidemment l'extrait selon l'invention peut être chacun des extraits ainsi obtenus utilisé seul ou en mélange avec l'un ou plusieurs des autres extraits.

Toute méthode d'extraction connue de l'homme du métier peut être utilisée selon l'invention.

On peut en particulier citer les extraits aqueux, alcooliques, notamment éthanoliques, les extraits hydroalcooliques.

Quelque soit la forme de l'extrait que l'on désire utiliser, les techniques utilisées pour l'obtenir sont celles généralement décrites dans l'art antérieur et bien connues de l'homme du métier.

On peut également utiliser un extrait préparé par la méthode décrite dans la demande de brevet français no 95-02379.

Ainsi, dans une première étape on broie le matériel végétal dans une solution aqueuse à froid, dans une deuxième étape les particules en suspension sont éliminées de la solution aqueuse issue de la première étape, et dans une troisième étape on stérilise la solution aqueuse issue de la deuxième étape. Cette solution aqueuse correspond à l'extrait.

D'autre part, la première étape peut avantageusement être remplacée par une opération de congélation simple des tissus végétaux (par exemple à-20 C), suivie d'une extraction aqueuse reprenant les deuxièmes et troisième étapes ci-dessus décrites.

Quel que soit le mode de préparation utilisé selon l'invention des étapes subséquentes visant à favoriser la conservation et/ou la stabilisation peuvent être ajoutées sans pour cela modifier la nature même de l'extrait. Ainsi, par exemple l'extrait obtenu peut être lyophilisé par toutes méthodes classiques de lyophilisation. On obtient ainsi une poudre qui peut être utilisée directement ou bien mélanger dans un solvant approprié avant utilisation.

Préférentiellement selon l'invention on utilise un extrait aqueux.

La quantité de composé stimulant la synthèse de la mélanine contenue dans la composition de l'invention est bien entendu fonction de l'effet recherché et peut donc varier dans une large mesure.

Pour donner un ordre de grandeur, le composé stimulant la synthèse de la mélanine contenue dans la composition est en une quantité représentant de 0, 01% à 15% du poids total de la composition et préférentiellement en une quantité représentant de 1 % à 5% du poids total de la composition.

Les compositions selon l'invention peuvent également contenir des agents de bronzage et/ou de brunissage artificiels de la peau (agents autobronzants), tels que par exemple de la dihydroxyacétone (DHA).

Les compositions de l'invention peuvent comprendre en outre des adjuvants cosmétiques classiques notamment choisis parmi les corps gras, les solvants organiques, les épaississants, les adoucissants, les antioxydants, les opacifiants, les stabilisants, les émollients, les hydroxyacides, les agents anti-mousse, les agents hydratants, les vitamines, les parfums, les conservateurs, les tensioactifs, les charges, les séquestrants, les propulseurs, les agents alcalinisant ou

acidifiants, les colorants, ou tout autre ingrédient habituellement utilisé en cosmétique, en particulier pour la fabrication de compositions antisolaires sous forme d'émulsions.

Les corps gras peuvent être constitués par une huile ou une cire ou leurs mélanges, et ils comprennent également les acides gras, les alcools gras et les esters d'acides gras. Les huiles peuvent être choisies parmi les huiles animales, végétales, minérales ou de synthèse et notamment parmi l'huile de vaseline, l'huile de paraffine, les huiles de silicone, volatiles ou non, les isoparaffines, les huiles fluorées et perfluorées. De même, les cires peuvent être choisies parmi les cires animales, fossiles, végétales, minérales ou de synthèse connues en soi Parmi les solvants organiques, on peut citer les alcools et polyols inférieurs.

Les épaississants peuvent être choisis notamment parmi les homopolymères d'acide acrylique réticulés, les gommes de guar et celluloses modifiées ou non telles que la gomme de guar hydroxypropylée, la méthylhydroxyéthylcellulose, l'hydroxypropylméthyl cellulose ou encore l'hydroxyéthylcellulose.

Bien entendu, l'homme de l'art veillera à choisir ce ou ces éventuels composés complémentaires et/ou leurs quantités de manière telle que les propriétés avantageuses, en particulier le niveau de photoprotection, attachées intrinsèquement à l'association binaire conforme à l'invention ne soient pas, ou substantiellement pas, altérées par la ou les adjonctions envisagées.

Les compositions de l'invention peuvent être préparées selon les techniques bien connues de l'homme de l'art, en particulier celles destinées à la préparation d'émulsions de type huile-dans-eau ou eau-dans-huile, ou encore des compositions anhydres.

Cette composition peut se présenter en particulier sous forme d'émulsion, simple ou complexe (H/E, E/H, H/E/H ou E/H/E) telle qu'une crème, un lait, un gel ou un gel crème, de poudre, de composition solide, de pâtes souples et éventuellement être conditionnée en aérosol et se présenter sous forme de mousse ou de spray.

Lorsqu'il s'agit d'une émulsion, la phase aqueuse de celle-ci peut comprendre une dispersion vésiculaire non ionique préparée selon des procédés connus

(Bangham, Standish and Watkins. J. Mol. Biol. 13, 238 (1965), FR2315991 et FR2416008). La composition cosmétique de l'invention peut être utilisée comme composition protectrice de l'épiderme humain ou des cheveux contre les rayons ultraviolets, comme composition antisolaire ou comme produit de maquillage.

Lorsque la composition cosmétique selon l'invention est utilisée pour la protection de l'épiderme humain contre les rayons UV, ou comme composition antisolaire, elle peut se présenter sous forme de suspension ou de dispersion dans des solvants ou des corps gras, sous forme de dispersion vésiculaire non ionique ou encore sous forme d'émulsion, de préférence de type huile-dans-eau, telle qu'une

crème ou un lait, sous forme de pommade, de gel, de gel crème, de stick, de pâtes souples, de mousse aérosol ou de spray.

Lorsque la composition cosmétique selon l'invention est utilisée pour la protection des cheveux, elle peut se présenter sous forme de shampooing, de lotion, de gel, d'émulsion, de dispersion vésiculaire non ionique et constituer par exemple une composition à rincer, à appliquer avant ou après shampooing, avant ou après coloration ou décoloration, avant, pendant ou après permanente ou défrisage, une lotion ou un gel coiffants ou traitants, une lotion ou un gel pour le brushing ou la mise en plis, une composition de permanente ou de défrisage, de coloration ou décoloration des cheveux.

Lorsque la composition est utilisée comme produit de maquillage des cils, des sourcils ou de la peau, tel que crème de traitement de l'épiderme, fond de teint, bâton de rouge à lèvres, fard à paupières, fard à joues, mascara ou ligneur encore appelé"eye liner", elle peut se présenter sous forme solide ou pâteuse, anhydre ou aqueuse, comme des émulsions huile dans eau ou eau dans huile, des dispersions vésiculaires non ioniques ou encore des suspensions.

A titre indicatif, pour les formulations antisolaires conformes à l'invention qui présentent un support de type émulsion huile-dans-eau, la phase aqueuse (comprenant notamment les filtres hydrophiles) représente généralement de 50 à 95% en poids, de préférence de 70 à 90% en poids, par rapport à l'ensemble de la formulation, la phase huileuse (comprenant notamment les filtres lipophiles) de 5 à 50% en poids, de préférence de 10 à 30% en poids, par rapport à l'ensemble de la

formulation, et le ou les (co) émulsionnant (s) de 0, 5 à 20% en poids, de préférence de 2 à 10% en poids, par rapport à l'ensemble de la formulation.

L'invention a encore pour objet l'utilisation de l'association d'au moins un agent filtrant les rayonnements ultra-violets et d'un ou plusieurs agents stimulant la synthèse de la mélanine, dans une composition ou pour la préparation d'une composition filtrante bronzante.

L'invention a en outre pour objet un procédé de traitement cosmétique de la peau destiné à la protéger contre les effets des rayons UV tout en lui conférant un bronzage naturel consistant à appliquer sur la peau une quantité efficace d'un produit tel que défini précédemment ou d'une composition cosmétique le comprenant.

Les exemples et compositions suivants illustrent l'invention sans la limiter aucunement. Dans les compositions les proportions indiquées sont des pourcentages en poids.

Exemple 1 : Préparation d'un extrait de Chrysanthemum sinensis : Des feuilles de plants de Chrysanthemum sinensis cultivés sous serre sont prélevées et séchées durant 48 heures dans une étuves ventilées à une température de 4SoC.

Les feuilles séchées sont ensuite réduites en poudre par broyage sur un broyeur à couteau du type Culatti.

La poudre obtenue est tamisée sur une grille dont les trous ont un diamètre de 1 mm.

C'est cette poudre tamisée qui est utilisée pour la préparation de l'extrait.

Protocole 1 : La poudre est mélangée à un solvant d'extraction aqueux constitué par du milieu de culture cellulaire DMEM/F 12,3 : 1 vendu par la société Life Technologies, à raison d'une concentration de 5 grammes de poudre sèche pour 100 ml de solvant. Le mélange est maintenu sous agitation pendant 4 heures à température ambiante. Le mélange est alors centrifugé à 1000 tours/minute pendant 8 minutes et le surnageant est prélevé et soumis à deux cycles de

centrifugations/prélèvement identiques.

Le dernier surnageant prélevé est filtré sur filtre 0, 22 ! J. m de type Millipore en conditions aseptiques afin d'être stérilisé et conservé à une température de 4 C. jusqu'à utilisation.

Protocole 2 : La poudre est mélangée à de l'eau déminéralisée stérile ayant un pH de 6,5 à raison d'une concentration de 2,5 grammes de poudre sèche pour 100 ml d'eau. Le mélange est maintenu sous agitation pendant 30 minutes à température ambiante. Le mélange est alors filtré sur membranes GFD vendues par la société Whatmann ayant une porosité de 0, 7. Le filtrat obtenu est alors filtré sur filtre 0,22 ! J. m de type Naigene en conditions aseptiques afin d'être stérilisé et conservé à une température de 4 oC. jusqu'à utilisation.

Protocole 3 : Le protocole précédent est réalisé en remplaçant l'eau par un solvant d'extraction aqueux constitué par du milieu de culture cellulaire DMEM/F 12,3 : 1 vendu par la société Life Technologies.

Protocole 4 : L'extrait obtenu au protocole 2 est lyophilisé à 30 C après congélation à-20 C. La poudre obtenue est utilisé directement.

Exemple 2 : Mesure de l'effet photoprotecteur et propigmentant de l'association du Mexoryl SXOE) (3, 3'- (1,'phenylènedimethylidyne) bis (7, 7dimethyl-2oxobicyclo[2, 2, 1] heptane-1-methanesuifonicacid) avec soit un extrait de Burnet soit un extrait de Chrysanthemum sinensis obtenu par le protocole 2 de l'exemple 1.

L'effet photoprotecteur et propigmentant de l'association a été testé sur cocultures de kératinocytes/mélanocytes humains normaux selon la méthode décrite dans le brevet FR95 06491 par évaluation de la mélanogenèse induite par les UV. Le taux de la synthèse de mélanine est évalué par l'incorporation de thiouracile marquée au C14. Il est rapporté à la quantité de protéine.

Les kératinocytes humains normaux (NHK) et les mélanocytes humains normaux (NHM) sont cultivés à partir de peau de prépuce. Les deux types de cellules sont

amplifiés et stockés congelés. Huit jours avant le test, chacun des types cellulaires est remis en culture. Les kératinocytes sont cultivés selon la méthode décrite par Rheinwald et Green (Cell (1975) 6,331-334) sur des cellules nourricières (fibroblastes 3T3) dans le milieu de croissance Green 7F (DMEM/F12 3 : 1, serum de veau foetal (Gibco) 10%, adenine 0,18 mM, facteur de croissance épidermique EGF 10 ng/ml, hydrocortisone 0, 4ug/ml ; insuline 5ug/ml, isoprotérénole 10uM, transferrine 5ug/ml, triiodothyronine, 2nM). Les mélanocytes sont amplifiés dans le milieu M2 (Olsson, M. J. et al., Lancet (1992) 340,981). Les milieux sont changés tous les deux jours.

3 jours avant le test, 250 000 kératinocytes humains normaux et 80 000 mélanocytes humains normaux sont mélangés et ensemencés par puits de plaques de 24 puits (type Costar) et cultivés trois jours dans le milieu de, croissance des kératinocytes (Green 7F) sans rouge de phenol.. Pendant les quatre jours suivants, le milieu de culture est remplacé quotidiennement par le milieu UV (DMEM/F12 3 : 1 sans rouge de phenol, serum de veau défini 2% (HyClone), EGF 10 ng/ml, facteur de croissance fibroblastique de type ss (PFGF) 10 ng/ml) L'induction de la pigmentation par les UV est réalisée par simulation solaire (SSR) à l'aide d'un simulateur solaire Oriel Xenon de 1000 Watts comprenant un filtre dichroïque 280-400nm (Oriel, modèle 81035) et un filtre WG 320 de marque Schott possédant une longueur d'onde de coupure de 311 nm (correspondant à une épaisseur d'environ 1. 5mm).

Les cultures cellulaires sont irradiées 1 fois par jour pendant 4 jours dans une solution tampon phosphate (PBS).

Les molécules propigmentantes sont mises en contact avec les cellules dans le PBS pendant l'irradiation et ajoutées au milieu de culture (milieu UV) après l'irradiation.

L'extrait de Burnet est testé à 0, 005%. Il est préparé dans une solution mère à 0. 5% dans un solvant (Dimethylsulfoxide DMSO) qui est ajouté au millième dans le PBS et dans le milieu UV. La concentration finale du solvant dans le milieu de culture est donc 1/1000.

L'extrait de Chrysanthemum sinensis obtenu selon les protocoles no 2 + 4 est testé à 1 %.

La tyrosine qui sert de contrôle positif est testée à 500 pM.

Le Mexoryl SXO est testé à 8 % (Merci de donner la composition des formulations utilisées.) Après chaque exposition aux UV, les formulations contant le filtre solaire sont appliquées à raison de 1,4 mg/cm2 sur une lame de quartz sur laquelle se trouve une bande de Transpose&commat; selon une méthode dérivée de celle utilisée pour la détermination des indices de protection solaire in vitro décrite par Diffey et Robson (J Soc Cosmet Chemists (1989) 300,230-235). L'ensemble est disposé au dessus des co-cultures pendant la durée de l'irradiation.

Après irradiation, les cellules sont incubées dans le milieu UV contenant 1 pCi/ml de thiouracile marquée au C14.

Mesure de la métanogenèse : Les témoins suivants sont réalisés : - culture contrôle : Pas de produit testé - culture contrôle solvant : le solvant des produits testés est ajouté - témoin positif de stimulation de la mélanogenèse : tyrosine 500uM ; 24 heures après la dernière irradiation UV, les cellules sont rincées en tampon phosphate. Les protéines sont précipitées à l'aide d'acide trichloracétique (TCA) à 5% et lavées afin d'éliminer la radioactivité libre. Les cellules sont Iysées pendant

la nuit à 400C à l'aide d'une solution de protéinase K à 100 ug/m ! dans du tampon Tris HCI-triton-EDTA.

5 ut d'extrait total sont prélevés et transférés dans une plaque 96 puits (Wallac) pour le dosage des protéines qui est effectué avec le kit MicroBCA *Protein Assay Reagent (Pierce).

Le reste de l'extrait, soit 950 ut, est filtré sur filtre DEAE Filtermat. Après rinçage, le filtre recouvert du scintillant solide Meltilex est transféré dans une plaque. La radioactivité est comptée à l'aide du compteur Wallac. Les résultats sont exprimés en pourcentage du contrôle témoin, ou du contrôle solvant si le produit est solubilisé dans un autre solvant que l'eau, selon les formules :

et

dans lesquelles : CP est la moyenne des désintégrations par minute (dpm) thiouracile 14C sur 3 puits similaires traités par un produit (P) ; Qté protéine P est la moyenne des quantités de protéines dans les puits correspondants (en milligramme), 14CT est la moyenne des dpm thiouracile 14 C sur 3 puits similaires témoin (T) ; Qté protéine T est la moyenne des quantités de protéines dans les puits correspondants (en milligramme), 14CS est la moyenne des dpm thiouracile 14 C sur 3 puits similaires contrôles solvant (S) ; qté protéine S est la moyenne des quantités de protéines dans les puits correspondants (en milligramme).

Résultats : % de variation de la synthèse de mélanine par rapport au contrôle (cellules non traitées par le produit et non irradiées)

<tb>
<tb> Produits <SEP> A
<tb> Irradiation <SEP> seule <SEP> (SSR) <SEP> 222
<tb> Irradiation <SEP> seule <SEP> + <SEP> solvant <SEP> 251
<tb> Tyrosine <SEP> 500 <SEP> M <SEP> 40
<tb> Extrait <SEP> de <SEP> Burnet <SEP> à <SEP> 0,005% <SEP> (solvant) <SEP> 110
<tb> Extrait <SEP> de <SEP> Chrysanthemum <SEP> sinensis <SEP> 1% <SEP> 500
<tb> SSR <SEP> + <SEP> Mexoryl <SEP> SX# <SEP> 8% <SEP> 15
<tb> SSR+ <SEP> solvant <SEP> + <SEP> Mexoryl <SEP> SX# <SEP> 8% <SEP> 36
<tb> SSR <SEP> + <SEP> Tyrosine <SEP> 500 <SEP> uM <SEP> 382
<tb> SSR <SEP> + <SEP> Extrait <SEP> de <SEP> Burnet <SEP> à <SEP> 0,005% <SEP> (solvant) <SEP> 466
<tb> SSR <SEP> + <SEP> Extrait <SEP> de <SEP> Chrysanthemum <SEP> sinensis <SEP> 1% <SEP> 588
<tb> SSR <SEP> + <SEP> Tyrosine <SEP> 500 <SEP> M <SEP> + <SEP> Mexoryl <SEP> SXO <SEP> 8% <SEP> 74
<tb> SSR <SEP> + <SEP> Extrait <SEP> de <SEP> Burnet <SEP> à <SEP> 0,005% <SEP> + <SEP> Mexoryl <SEP> SXO <SEP> 8% <SEP> (solvant) <SEP> 460
<tb> SSR <SEP> + <SEP> Extrait <SEP> de <SEP> Chrysanthemum <SEP> sinensis <SEP> 1% <SEP> + <SEP> Mexoryl <SEP> SX <SEP> (D <SEP> 8% <SEP> 428
<tb>

A = 14CthioU/qté protéine (%/contrôle) Les variations de synthèse de mélanine mesurée dans les différentes conditions donnent lieu au classement suivant : SSR + MSX < SSR + MSX + propigmentant < ou = SSR + propigmentant Conclusions : Ces résultats montrent, qu'en association avec un filtre en forte concentration, un produit propigmentant permet la restauration du brunissement (synthèse de mélanine).

Exemple 3 : Composition bronzante et filtrante à appliquer sur la peau.

Eau 60 terephthalylidene dicamphor sulfonic acid 8 propylenglycol 8 glycerine 7 huile de silicone 8 Alcool 12-15 alkyl benzoate 2 stearyl 1,5 pvp/eicosene copolymer 1 sodium stéaroyl glutamate 1 acide stéarique 1,5 stéarate de peg-100 0, 75 stéarate de glycéryl 0,75 carbomer 0,3 hydroxypropyl methylcellulose 0,1 triéthanolamine qs ph 7 Conservateur qs Parfum qs

Claims

REVENDICATIONS 1. : Produit composé par au moins l'association d'au moins un agent filtrant les rayonnements ultra-violets et d'au moins un agent stimulant la synthèse de la mélanine.

2. : Produit selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'agent filtrant les rayonnements ultraviolets est choisi parmi les filtres organiques et/ou les filtres minéraux.
3. : Produit selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que l'agent filtrant les rayonnements ultra-violets est un filtre organique choisi parmi les dérivés cinnamiques, les dérivés salicyliques, les dérivés du camphre, les dérivés de triazine, les dérivés de la benzophénone, les dérivés du dibenzoylméthane, les dérivés de ss, ss-diphénylacrylate, les dérivés de l'acide p- aminobenzoïque, tes polymères filtres et les silicones filtres.
4. : Produit selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que l'agent filtrant les rayonnements ultra-violets est un filtre minéral choisi parmi les pigments ou nanopigments d'oxydes métalliques enrobés ou non comme par exemple des nanopigments d'oxyde de titane (amorphe ou cristallisé sous forme rutile et/ou anatase), de fer, de zinc, de zirconium ou de cérium.
5. : Produit selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce

que l'agent filtrant les rayonnements ultra-violets est un filtre solaire actif dans l'UV-A et/ou l'UV-B, 6. : Produit selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que l'agent filtrant les rayonnements ultra-violets est choisi parmi l'acide p- aminobenzoïque, le p-aminobenzoate oxyéthyléné (25mol),

le p-diméthylaminobenzoate de 2-éthylhexyle, le p-aminobenzoate d'éthyle N-oxypropyléné le p-aminobenzoate de glycérol, le salicylate d'homomenthyle, le salicylate de 2-éthylhexyle, le salicylate de triéthanolamine,

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le salicylate de 4-isopropylbenzyle, te4-ter-buty)-4'-méthoxy-dibenzoy ! méthane, le 4-isopropyl-dibenzoylméthane, l'anthranilate de menthyle, le 2-éthylhexyl-2-cyano-3, 3'-diphénylacrylate, l'éthyl-2-cyano-3, 3'-d iphénylacrylate, l'acide 2-phényl benzimidazole 5-sulfonique et ses sels, le 3- (4'-triméthylammonium)-benzylidèn-bornan-2-on-méthylsulfate, le 2-hydroxy-4-méthoxybenzophénone, le 2-hydroxy-4-méthoxybenzophénone-5-su ! fonate, le 2,4-dihydroxybenzophénone, le 2, 2', 4,4'-tétrahydroxybenzophénone, le 2, 2'-dihydroxy-4,4'diméthoxybenzophénone, le 2-hydroxy-4-n-octoxybenzophénone,

le 2-hydroxy-4-méthoxy-4'-méthylbenzophénone, l'acide a- (2-oxoborn-3-ylidène)-tolyl-4-sulfonique et ses sels le 3- (4'-sulfo) benzylidèn-bornan-2-one et ses sels, le 3- (4'méthylbenzylidène)-d, l-camphre, le 3-benzylidène-d, l-camphre, l'acide benzène 1,4-di (3-méthylidène-10-camphosulfonique) et ses sels, l'acide urocanique, la 2,4, 6-tris-[p-(2'-éthylhexyl-1'-oxycarbonyl)anilino]-1, 3,5-triazine, 2- [ (p- (tertiobutylamido) anilino]-4, 6-bis- [ (p- (2'-éthylhexyl-1'-oxycarbonyl) anilino]- 1,3, 5-triazine, la 2,4-bis { (4-2-éthyl-hexyloxy) ]-2-hydroxy]-phenyl}-6- ( 4-méthoxy-phenyl)-1, 3, 5triazine ; le polymère de N- (2 et 4)-[(2-oxoborn-3-ylidèn)méthyl]benzyl]-acrylamide, l'acide 4, 4-bis-benzimidazolyl-phénylèn-3,3', 5, 5'-tétrasulfonique et ses sels

le 2, 2'-méthy ! èn-bis- [6- (2H-benzotriazot-2-y !)-4- (1, 1, 3, 3-tétraméthylbutyl) phénol]. les polyorganosiloxanes à fonction malonate.
7. : Produit selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que l'agent filtrant les rayonnements ultra-violets est en une quantité représentant de 0, 1% à 25% du poids total de la composition.
8. : Produit selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que l'agent filtrant les rayonnements ultra-violets est en une quantité représentant

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de 0, 5% à 10% du poids total de la composition.
9. : Produit selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que l'agent stimulant la synthèse de la mélanine est choisi parmi les analogues de substrats de la tyrosinase tels que la tyrosine, la L-dopa ou la L- dihydroxylphenylalanine, les activateurs de l'activité ou de l'expression de la tyrosinase tels que la forskoline, les bases xanthiques (théophylline, caféine), les peptides pro-opiomélanocortiques (ACTH, alpha-MSH ou autres agonistes de des récepteurs MC1), les diacylglycérols, les diols aliphatiques ou cycliques, les psoralènes, les prostaglandines et analogues, les activateurs de la proteine kinase G NO/cGMP dépendante, ou des activateurs de transfert des mélanosomes vers les kératinocytes tels que les sérine protéases ou d'agonistes des récepteurs PAR-2.
10. : Produit selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que l'agent stimulant la synthèse de la mélanine est un extrait de Burnet (Sanguisorba officinalis) ou encore un extrait d'au moins un végétal du genre Chrysanthemum.
11. : Produit selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, caractérisé en ce que l'agent stimulant la synthèse de la mélanine est un extrait d'au moins un végétal de l'espèce Chrysanthemum sinensis.
12. : Produit selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisé en ce que l'agent stimulant la synthèse de la mélanine est en une quantité représentant de 0, 01% à 15% du poids total de la composition.
13. : Produit selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, caractérisé en ce que l'agent stimulant la synthèse de la mélanine est en une quantité représentant de 1 % à 5% du poids total de la composition.
14. : Composition comprenant au moins un produit tel que défini dans l'une quelconque des revendications1 à 13.
15. : Utilisation dans une composition ou pour la préparation d'une composition d'au moins un produit tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 13.

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16. : Procédé de traitement cosmétique de la peau destiné à la protéger contre les effets des rayons UV tout en lui conférant un bronzage naturel consistant à appliquer sur la peau une quantité efficace d'un produit ou d'une composition cosmétique tels que définis dans l'une quelconque des revendications 1 à 15.