FR2767060A1 - Vaccin meningocoque comportant la valence de souche bz83 - Google Patents

Abstract

L'invention a pour objet une composition pharmaceutique comprenant (i) la sous-unité de moindre poids moléculaire (Tbp2) du récepteur de la transferrine humaine (RTH) d'une souche de Neisseria meningitidis faisant partie du complexe ET-5 et possédant une séquence d'ADN codant pour Tbp2, (a) qui contient 2 sites de restriction AvaII, 3 sites de restriction HincII, aucun site de restriction VspI et aucun site de restriction XholI ou (b) à partir de laquelle il est possible de générer par PCR (polymérase chain reaction) à l'aide des amorces P3 de formule 5'-AAGACCAAGGCGGATACGGTTTTGC-3' et P4 de formule 5'-GAAGACGAGTCGGAAACAAAGGGATG-3', un polynucléotide de 765 à 775 nucléotides. Une telle souche est par exemple la souche BZ83 dont la séquence d'ADN codant pour Tbp2 est montrée dans le SEQ ID NO 1.

Description

La présente invention a pour objet une nouvelle composition pharmaceutique

destinée au traitement ou à la prévention des infections à méningocoques qui comporte la sous-unité Tbp2 (TbpB) du récepteur de la transferrine humaine (RTH) d'une souche de

Neisxeria meningitidis du complexe ET-5, groupe BZ83.

D'une manière générale, les méningites sont soit d'origine virale, soit d'origine bactérienne. Les bactéries principalement responsables sont: N. meningitidis et Haemophilus influenzae, respectivement impliquées dans environ 40 et 50 % des cas de

méningites bactériennes.

On dénombre en France, environ 600 à 800 cas par an de méningites à N.

mneningitidis. Aux Etats-Unis, le nombre de cas s'élève à environ 2 500 à 3 000 par an.

L'espèce N. meningitidis est subdivisée en sérogroupes selon la nature des polysaccharides capsulaires. Bien qu'il existe une douzaine de sérogroupes, 90 % des cas de méningites sont attribuables à 3 sérogroupes: A, B et C. Il existe des vaccins efficaces à base de polysaccharides capsulaires pour prévenir les méningites à N. meningi1idis sérogroupes A et C. Ces polysaccharides tels quels ne sont que peu ou pas immunogéniques chez les enfants de moins de 2 ans et n'induisent pas de mémoire immunitaire. Toutefois, ces inconvénients peuvent être surmontés en

conjuguant ces polysaccharides à une proteine porteuse.

Par contre, le polysaccharide de N. melingitidix groupe B n'est pas ou peu immunogène chez l'homme, qu'il soit sous forme conjuguée ou non. Ainsi, il apparaît hautement souhaitable de rechercher un vaccin à l'encontre des méningites induites par N.

meningitidix notamment du sérogroupe B, autre qu'un vaccin à base de polysaccharide.

A cette fin, différentes protéines de la membrane externe de N. mnenilgilidis ont déjà

été proposées. Il s'agit en particulier du récepteur membranaire de la transferrine humaine.

D'une manière générale, la grande majorité des bactéries ont besoin de fer pour leur croissance et elles ont développé des systèmes spécifiques d'acquisition de ce métal. En ce qui concerne notamment N. meninfgilidis qui est un pathogène strict de l'homme, le fer ne peut être prélevé qu'à partir de protéines humaines de transport du fer telles que la transferrine et la lactoferrine puisque la quantité de fer sous forme libre est négligeable chez l'homme (de l'ordre de 10-18 M), en tout cas insuffisante pour permettre la

croissance bactérienne.

-2 - Ainsi, N. meningitidis possède un récepteur de la transferrine humaine et un récepteur de la lactoferrine humaine qui lui permettent de fixer ces protéines chélatrices

du fer et de capter par la suite le fer nécessaire à sa croissance.

Le récepteur de la transferrine humaine de la souche N. meningitidis BI 6B6 a été purifié par Schryvers et al (WO 90/12591) à partir d'un extrait membranaire. Cette protéine telle que purifiée apparaît essentiellement constituée de 2 types de polypeptides: un polypeptide d'un poids moléculaire apparent élevé de 100 kDa et un polypeptide d'un poids moléculaire apparent moindre d'environ 70 kDa, telles que révélés après

électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de SDS.

Le produit de la purification notamment mise en oeuvre par Schryvers est par définition arbitraire et pour les besoins de la présente demande de brevet, appelé récepteur de la transferrine humaine (RTH) et les polypeptides le constituant, des sous-unités. Dans la suite du texte, les sous-unités de poids moléculaire élevé et de poids moléculaire

moindre sont respectivement appelées Tbpl (ou TbpA) et Tbp2 (ou TbpB).

Depuis les travaux pionniers de Schryvers et al, on a découvert que l'espèce N. menwingitidis se répartissait essentiellement en 2 types de souches qui différaient par la constitution de leurs RTH respectifs (voir WO 93/6861 et WO 93/7172). Un premier type de souche, dit type M982 (ou IM2169), possède une Tbp2 qui réagit avec un antisérum dirigé contre le RTH de la souche M9S2 mais qui ne réagit pas avec un antisérum dirigé contre le RTH de la souche B16B6 ( ou IM2394); tandis que l'autre type, dit type B16B6, possède une Tbp2 qui réagit avec un antisérum dirigé contre le RTH de la souche B1 6B6 mais qui ne réagit pas avec un antisérum dirigé contre le RTH de la souche M982. Il existe donc bien une diversité antigénique au niveau de la sous-unité de moindre poids moléculaire. Cette diversité est toutefois restreinte puisqu'elle se résout en 2 grands types, contrairement à ce qui est suggéré par Griffiths et al, FEMS Microbiol. Lett. (1990) 69 31. Des souches de type M982 sont par exemple la souche M982 dont la séquence du gène thp2 est décrite dans la demande de brevet EPA 586 266 et dans la banque de données EMBL sous le numéro de référence Z15130; les souches 6940, M978 et S3032 ont les séquences 5' des gènes hbp2 sont décrites dans WO 95/33049; les souches BZ83 et 8680 dont les séquences des gènes thp2 sont décrites dans WO 95/33049 et WO 97/13860 respectivement (ces séquences peuvent être aussi trouvées dans la banque de données EMBL sous les numéros de référence respectifs Z50732 et Y09977); ou encore les souche 32/94 et 8710 dont les séquences peuvent être trouvées dans la banque de données EMBL sous les numéros d'accession respectifs Y09617 et Y09618. Ces souches ainsi que d'autres sont disponibles auprès du Dr Caugant, Centre de Référence des Méningocoques collaborant avec l'Organisation Mondiale de la Santé, Institut National de la Santé Publique, Oslo, Norvège (voir Thèse de Doctorat présentée devant l'Université Claude Bernard - Lyon I par Bachra Rokbi, soutenue le 10 Oct. 1995, intitulée "Etude de la variabilité antigénique et moléculaire du récepteur de la transferrine humaine de N.

meningitidis). Les caractéristiques des souches citées sont présentées dans le tableau IV ci-

après. La séquence d'ADN codant pour la Tbp2 de la souche B16B6 est décrite dans EPA

586 266.

L'étude des fragments d'ADN codant pour diverses Tbp2 a révélé une différence dans la taille de ces fragments selon le type dont ils étaient issus. Ceci a permis de faire évoluer les définitions des types M982 et B16B6, originellement fournies dans WO 93/6861. On convient maintenant de définir les types de souches en fonction de la taille du gène hp2: environ de 2,1 à 2,3 kb pour thbp2 de type M982 et 1,8 kb pour bhp2 de type

B16B6.

La protéine Tbp2, plutôt que Tbpl, possède un certain nombre de caractéristiques qui en font un candidat vaccinal potentiel: une expression ubiquitaire, une accessibilité à la surface du germe, la capacité d'induire des anticorps bactéricides et une variabilité limitée puisque comme cela vient d'être exposé, deux groupes majeurs ont été identifiés à

ce jour.

En vertu de cette découverte, on a déjà proposé des compositions pharmaceutiques contenant: (i) le RTH d'au moins une souche de type B16B6 et le RTH d'au moins une souche de type M982 (WO 93/6861); ou (ii) la Tbp2 d'au moins une souche de type B16B6 et la Tbp2 d'au moins une

souche de type M982 (WO 93/7172).

Les souches responsables des cas de méningites de part le monde (cas isolés ou épidémie) sont collectées, étudiées et classées selon divers critères. Une méthode de classement d'usage international, repose sur la mobilité électrophorétique de certaines enzymes métaboliques. Il s'agit du MLEE (Multi Locus Electrophoresis Enzyme) dont l'emploi est en particulier décrit dans Caugant et al, PNAS (1986) 83: 4931. D'une manière générale on analyseles 15 enzymes suivantes: l'enzyme malique (MAE), la -4glucose-6-phosphate déhydrogénase (G6P), la peptidase (PEP), l'isocitrate déhydrogénase (IDH), les glutamate déhydrogénases nicotinamide adénine dinucléotide (NAD) phosphate dépendante (GD1 et GD2), l'alcool déhydrogénase (ADH), la fumarase (FUM), la phosphatase alcaline (ALK), les indophénol oxydases (IP1 et IP2), l'adénylate kinase (ADK) et la déhydrogénase (UDH). Les électromorphes (ou alloenzymes) de chaque enzyme correspondent à des allèles d'un même locus génétique. Une combinaison particulière des allèles de ces 15 enzymes constitue un type électrophorétique (ET). Ces types peuvent être regroupés en famille ou complexe (cluster). Par exemple, le complexe ET-5 est constitué de 22 types électrophorétiques très étroitement reliés (la distance génétique maximum est de 0,16). Dans le tableau suivant, on indique le profil allélique des souches du complexe ET-5 (nombre d'allèle par locus pour chacune des 15 enzymes) ainsi que les enzymes pour lesquelles le ou les allèles sont susceptibles de varier (G6P et

UDH, en gras).

Tableau I Enzvmcs MAE G6P PEP IDH|ACO GDIGD2 ADH FUM ALK IP 1 IP2 ADK UDH Alliles I I 1 7 8 4 2 3 2 I I 2 3 2 3 Au cours des derniers 25 ans, les souches responsables d'un grand nombre de méningites de part le monde (e.g., Etats-Unis (Oregon, état de Washington), Norvège, Cuba, Chili, Brésil) se sont révélees appartenir au complexe ET-5. Il est donc très vite apparu souhaitable de proposer un vaccin comportant un antigène, par exemple une Tbp2, provenant d'une souche de ce complexe. En fait c'est ce qui est déjà réalisé dans les différentes compositions vaccinales déjà connues dans la mesure o elles emploient une Tbp2 provenant de la souche 8680 (voir WO 97/13860). Cette souche appartient en effet

au complexe ET-5.

Cependant on a maintenant découvert que les isolats cliniques appartenant au complexe ET-5 présentaient une certaine variabilité au niveau du gène thp 2. L'étude a porté sur 31 isolats responsables de récentes épidémies de méningites par le monde. Les gènes /hp2 ont été analysés (a) d'une part pour leurs profils de restriction par les enzymes AvaII, HinleI, V.spI et XhoI après amplification du gène à partir de l'ADN génomique et à l'aide des amorces PI (SEQ ID NO: 9; P1 correspond aux positions 115 à 113 de la séquence du gène M982 thp2, tel que trouvé dans la banque EMBL, sous le numéro d'accession Z15130) et P2 (anti-sens; SEQ 1D NO: 10; P2 correspond aux positions 2264 à 2244 de la séquence du gène M982 thbp2, tel que trouvé dans la banque EMBL, - ó - sous le numéro d'accession Z15130); et (b) d'autre part pour la taille du fragment PCR (polymerase chain reaction), dérivé du gène lhp2 qui peut être amplifié à partir de l'ADN

génomique à l'aide des amorces P3 (SEQ ID NO: 11) et P4 (anti-sens; SEQ ID NO: 12).

S Les profils de restriction des gènes /1hp2 des souches M982, BZ83 et 8680 sont présentés dans le tableau II ci-après. On note que la souche M982 n'appartient pas au complexe ET-5. Néanmoins elle est étudiée car elle sert de référence pour l'ensemble des

souches possédant un gène lhp2 de 2,1 à 2,3 kb.

Tableau II A cva Il /sp I Xho I Hinc Il M982 NC 131 nt NC 1229 nt 769 nt 319 nt 281 nt 259 nt BZ83 1184 nt NC NC 1155 nt 477 nt 385 nt 415 nt 276 nt r 257 nt 8680 1507nt 1298nt 1551 nt 1191 nt 445 nt 470 nt 483 nt 527 nt 266 nt 316 nt NC:.oil cowi/)é Ces profils ont été appelés par des lettres dans le tableau 111 ci-après

Tableau III

Ava cIl ls/) I!.7lo I Hi[c' 11

M982 N G N I

BZ83 A N N B

8680 C D E F

Les résultats pour l'ensemble des souches sont présentés dans le tableau IV ci-après 6 -

Tableau IV

Taillc du Souche Sérogroupe Année Origine produit PCR Profil de restriction (nt) (a) du gène tbp2 (b) avec il'a I1l 1[sp 1 7?oI HInclI BZ83 B:15: - 1984 Pays-Bas 772 A N N B BZ 169 B:15:P I.16 1985 Pays-Bas 772 A N N B NG080 B:15:P I.16 1981 Norvège 772 A N N B NG1/84 B:15:PI.16 1985 Norvège 772 A N N B NGP355 B:15:Pl.15 1975 Norvègc 772 A N N B NGPB24 B:15:PI.7,16 1984 Norvege 772 A N N B NGPB37 B: 15:PI.7,16 1987 Norvège 772 A N N B 32/94 B: 15: P 1.7,161994 Norvège 772 A N N B 44 B: 15:PI.7,16 1993 Finlande 772 A N N B 52 B:15:PI.7.16 1993 Finhlandc 772 A N N B Glll/91 B:15:P1.3.15 1991 Islande 772 A N N B M359/91 B:15:PI.3.15 1991 Islandc 772 A N N B MA-5850 B:4:PI.15 1985 Espagnc 772 A N N B 281 B:4:PI.15 1992 Espagne 772 A N N B 8679 B:15:PI.3 1987 Chili 772 A N N B A015 B:4:PI.12 1988 Afriquedu 772 A N N B Sud AO2() B:4:P1.15 1989 Afrique du 772 A N N B Sud 8680 B: I 5:PI.3 1987 Chili 805 C D E F 8726 B:4:PI.3 1987 Chili 805 C D E F NG3/83 B:15:PI.16 1984 Norvègc 805 C D E F

* ' 1982 B:9:.1PI1.9 USA 844 NV G NIV I

NG144/82 B: 15:PI.16 1982 Norvège 844 N G N H 58/94 B:15:12.13a 1994 Norvège 844 N G N I 92/94 B:15:7.16 1994 Norvège 844 N G N I 504/91 B:4:1991 Argentine 844 N G N J M871 B: 15:P 1.7.161992 Israël 844 N G N F 230/89 B:4:PI.15 1989 Cuba 844 N N N F BB393 B:15:PI.3 1986 Chili 844 N N N F BB396 B:15:PI.3 1986 Chili 844 N N N F 8694 B:15:- 1987 Chili 844 N N N F 8696 B: 15:PI.3 1987 Chili 844 N N N F 8710 B:15:PI.3 1987 Chili 832 N N N G

L 'astérisque signla/e la souche M982 qui ne fait pas partie du conmplexe ET-5.

(ac) La taille du fragment indiqué est celle du fracgmenl/ amplifié à partir de 'AD)N géntomique à l aide des amorces P3 et P4, calculée à la hase près lorsque la séquence complète du gène était disponible (souches M892, BZ83 el 8680) oul déterminée après migration suri un gel à 3 % d'agarose par comparaison aec le fragment PCR généré pour -7- les souches Mv892, BZ83 et 868'0. Pour mener à bien cette étude, on a tout d'abord extrait Il'ADN génomique des souches cultivées sur des plaques d'agar Mueller-Hiniton (IflHA Difco). L'extraction de 'ADN a été effectuée en utilisant une méthode rapide au

guanidiuim isothiocyanate (Pitcher et al, Letters in Applied Microbiology (1989) 8: 151).

/es réactions PCR ont été mises en oeuvre sous un volume de 100 /I contenant 200 FM (chacun) de dCTP, dGTP, dATP et dTTP (Pharmacia-LKB3); 0, 2 /uM de chacune des amorces et 2,5 U de Taq polymérase (Appligène). Les amplifications ont eu lieu dans un DNA thermocycler (Biometra, 7riothermobloc) programmé comme suit: dénaturation initiale à 95 C pendant 5 min puis 25 cycles; chacun comprenant une dénaturation consécutive (30 sec, 95 C), amîealing (30 sec, 58 C) et extension die la chaîhe d'ADN ( 1 mini, 72 C). La taille des Jfragments amplifiés est déterminée après électrophorèse di

produit d'amplification sur gel d'agarose à 3 %.

(b) Profils de restriction des gènes amplifiés par PCR à partir de l'ADN génomique, à l'aide des amorces PI et P2; Les lettres A à G et N font reéférence aux profils de restriclion indiqués dans le tableau III (H correspond ait profil de restriction: 1230, 320, 270, 210 et 80 nt; J corre.spond au profil de restriction: 1350, 570 et 330 ni,). Polur rmener à bien cette étude, I'ADN des souches a été préparé comme décrit ci-dessus en (a) puis amplifié dans les conditions suivanles: 25 cycles; chaccun comprenant nile dénaturation de l'ADN (1 min, 94 C), annealing (2 min, 58 C), et extension (3 min, 72'C). Chacun desfi'ag-nielts amplifiés a été purifié sur une colonnie Qiaquick (Qiagen) et digéré par les quatre enzymes dans quatre réactionls sép/arées en suivant les instructions di fahriquant (New Enigland Biolahs). Les produlits de restriction ont été séparés par

électrophorèse sur gel d'agarose à 2 %.

On a ainsi montré que la variabilité évoquée ci-avant se résolvait en 3 groupes majeurs (voir Tableau IV). Le groupe le plus important contenait 17 souches, dont la souche BZ83 (pourcentage de représentation 54,8 %). Il était suivi d'un groupe de 10 souches caractérisé par un fragment PCR de taille unique (844 nt) et identique à celle du

fragment PCR obtenue avec la souche M982. Bien que la souche M982 ne fasse pas elle-

même partie de ce groupe, on le désigne cependant par la suite sous le nom de groupe M982 en raison de cette identité de taille (on notera que les termes groupe M982 et type M982 ne désignent pas la même chose). Parmi ces 10 souches, les profils de restriction des gènes thp2 présentent une certaine hétérogénéité: aucun des gènes n'est coupé par AvaII ni par XholI; en ce qui concerne VspI, soit il n'y a pas de site de restriction, soit il offre un profil de restriction de type G; et les profils de restriction obtenus avec HinclI sont encore plus hétérogènes. En terme de représentation, venait ensuite un groupe de 3 souches parmi lesquelles la souche 8680. Bien que la souche 8710 se caractérise par un fragment PCR de taille plus petite que ceux caractérisant les souches du groupe M982, le -8 - profil de restriction de son gène tbp2 montre bien que cette souche s'apparente au groupe M982. Pour confirmer la valeur de prédiction de la classification basée sur le type du fragment PCR, les gènes tbp2 des souches 32/94, 8726 et 8710 (citées dans tableau IV ci- avant) ont été clonés, séquences et alignés avec les séquences des gènes hb)2 des souches prototype BZ83, M982 et 8680 en utilisant le programme d'alignement multiple Clustal d'Infobiogen (Dessen et al, Bisance: "un programme français pour accéder aux banques de données de séquences biomoléculaires" (1990) Cabios 6: 355). Les résultats des comparaisons sont donnés dans le tableau V ci- après, en termes de pourcentages d'homologie (identité) et confirment bien la pertinence de la classification par analyse PCR.

Tableau V

32/94 8680 8710 8726 BZ83 M982

32/94 100 74 77 75 99 78

8680 - 100 79 90 74 75

8710 - - 100 80 77 86

8726 - - 100 76 74

BZ83 - - 100 79

M9829 '- J l| 100 Sachant que la sélection des isolats testés représente des épidémies d'origine territoriale variée et compte tenu de l'importante représentation parmi eux du groupe illustré par la souche BZ83, il n'est pas douteux que les souches de ce groupe soient prédominantes dans les récentes épidémies. Il apparaît souhaitable d'inclure dans un

vaccin une Tbp2 provenant d'une souche du groupe illustré par la souche BZ83, appelé ci-

après groupe BZ83.

C'est pourquoi l'invention a pour objet une composition pharmaceutique comprenant (i) la sous-unité de moindre poids moléculaire (Tbp2) du récepteur de la transferrine humaine (RTH) d'une souche de Neisseria meningilidis faisant partie du complexe ET-5 et possédant une séquence d'ADN codant pour Tbp2, (a) qui contient 2 sites de restriction AvaII, 3 sites de restriction Hincl, aucun site de restriction Vspl et aucun site de restriction VspI et XhoI ou, de préférence et, (b) à partir de laquelle il est possible de

générer par PCR (polymérase chain reaction) à l'aide des amorces P3 de formule 5'-

-9-

AAGACCAAGGCGGATACGGTTTTGC-3' et P4 de formule 5'-

GAAGACGAGTCGGAAACAAAGGGATG-3', un polynucléotide de 765 à 775 nucléotides, de préférence de 772 nucléotides (souche du groupe BZ83); ou (ii) un

fragment de ladite Tbp2.

Par "sous-unité Tbp2 d'une souche, ou qui dérive, provient ou est issue d'une souche de N. meningitidis" on entend bien évidemment une dérive prise dans son sens le plus général; c'est-à-dire non limitée à un procédé physique, mais le fruit d'un processus intellectuel. Ainsi cette expression recouvre i.a. une Tbp2 produite par voie recombinante

e.g. dans E. coli.

Selon un mode avantageux, la Tbp2 entrant dans la composition selon l'invention provient d'une souche de N. ineningiidis possédant une séquence d'ADN codant pour Tbp2 qui présente un profil de restriction par AvaII constitué de 3 fragments de 1184, 477 et 415 nt et un profil de restriction par HinclI constitué de 4 fragments de 1155, 385, 276, et 257 nt. De préférence, cette Tbp2 possède la séquence d'acides aminés telle que

montrée dans le SEQ ID NO: 2 (souche BZ83).

De manière alternative on peut utiliser des fragments dérivés d'une Tbp2 d'une souche adhoc. Des fragments utiles à des fins vaccinales peuvent être définis selon la

méthode proposée dans WO 95/33049.

WO 95/33049 enseigne que l'étude des sous-unités Tbp2 quelque soit la souche d'origine, permet de mettre en évidence, trois domaines de structure principaux associés pour au moins l'un d'entre eux à des propriétés particulières. Par définition, les domaines de Tbp2 M982 et Tbp2 B1 6B6 ont été fixés comme le montre le tableau VI ci-après, en indiquant la position des acides aminés, bornes incluses des différents domaines, et par référence à la numérotation apparaissant dans les SEQ ID NO 4 et 8, Tableau VI Tbp2 M982 Tbp2 B I16B6 Domaine N-terminal ou premier domaine 1-345 1-325 Domaine charnière ou deuxième domaine 346- 543 326-442 Domaine C-terminal ou troisième domaine 544-691 443-579

- 10 -

Cette définition s'applique de même à toutes les Tbp2s de type M982 ou B16B6, après alignement d'une séquence type M982 ou B16B6 sur la séquence de référence, au maximum d'homologie. Ainsi, à titre d'exemple, on indique la position des domaines de la sous-unité Tbp2 de la souche 8680 comme suit: premier domaine (1 - 334), deuxième domaine (335 - 530) et troisième domaine (531 - 677). Sachant que le domaine N-terminal ou premier domaine comporte dans son intégralité le site de liaison à la transferrine et se trouve donc très vraisemblablement exposé vers l'extérieur, le seul domaine N-terminal constitue par conséquent un élément

de choix à des fins i.a. vaccinales.

D'autre part, l'étude comparative des séquences Tbp2s M982 et B16B6 alignées au maximum d'homologie, met en évidence quatre portions hypervariables localisées au sein de la région charnière (aussi appelée domaine charnière, comme cela apparaît dans le tableau ci-dessus) de Tbp2 M982; portions qui sont absentes dans la Tbp2 B16B6. Ces portions hypervariables se retrouvent chez toutes les Tbp2s de type M982. Les souches de type B16B6 en sont dépourvues. Par la suite, on entend par "région charnière de type

M982" une région charnière qui possède ces quatre portions hypervariables.

Par comparaison des séquences de diverses Tbp2s de type M982, on sait aussi que la

région charnière présente une variabilité supérieure à celle des deux autres domaines.

Dans la mesure o la région charnière ne semblait pas indispensable à la fonction de fixation de la transferrine humaine, on a postulé que le rôle de cette région est au moins en partie d'induire une variabilité- "écran" afin d'éviter la reconnaissance d'une souche par le

système immunitaire d'un individu ayant connu ultérieurement une autre souche.

Dans cette hypothèse, la région charnière des souches de type M982 constitue un problème majeur dans la réalisation d'un vaccin. En effet si cette région est immunodominante, lors d'une immunisation, les anticorps induits seront dirieés majoritairement contre cette région et par conséquent la réponse immunitaire sera

spécifique de la protéine Tbp2 de la souche homologue.

En tenant compte des observations et hypothèses évoquées ci-dessus, il donc été déjà proposé d'utiliser i.a. à des fins vaccinales, non plus des Tbp2s de type M982 entières, mais des Tbp2s au moins délétées de leurs quatre portions hypervariables ou de

façon alternative, délétées des deuxième et troisième domaines.

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Une composition selon l'invention peut aussi contenir une Tbp2 provenant d'une

souche du groupe M982 ou du groupe illustré par 8680 (groupe 8680).

Ainsi, une composition selon l'invention peut comprendre en outre (i) une première Tbp2 additionnelle provenant d'une souche de N. meninigiidis faisant partie du complexe ET-5 et possédant une séquence d'ADN codant pour Tbp2 (a) qui ne contient pas de sites de restriction Avall et XhoI ou, de préférence et, (b) à partir de laquelle il est possible de

générer par PCR à l'aide des amorces P3 de formule 5'-

AAGACCAAGGCGGATACGGTTTTGC-3' et P4 de formule 5'-

GAAGACGAGTCGGAAACAAAGGGATG-3', un polynucléotide de 840 à 850 nucléotides, de préférence de 844 nucléotides (souche du groupe M982); ou (ii) un fragment de ladite première Tbp2 additionnelle, Selon un mode avantageux, la première Tbp2 additionnelle provient d'une souche de N. meningilidis possédant une séquence d'ADN codant pour Tbp2 qui contient I site de restriction VspI et 3 sites de restriction HindclI. De manière préférée, cette Tbp2 provient d'une souche de N. meninigitidis possédant une séquence d'ADN codant pour Tbp2 qui présente un profil de restriction par VspI constitué de 2 fragments de 1311 et 769 nt et un

profil de restriction par HincII constitué de 4 fragments de 1229, 319, 281 et 259 nt.

Une composition pharmaceutique selon l'invention peut aussi comprendre en outre (i) une deuxième Tbp2 additionnelle provenant d'une souche de N. menfingitidis faisant partie du complexe ET-5 et possédant une séquence d'ADN codant pour Tbp2 (a) qui contient I site de restriction AvalI, 2 sites de restriction V,7pI, I site de restriction,XhoI et 2 sites de restriction HincII ou, de préférence et, (b) à partir de laquelle il est possible de

génerer par PCR à l'aide des amorces P3 de formule 5'-

AAGACCAAGGCGGATACGGTTTTGC-3' et P4 de formule 5'-

GAAGACGAGTCGGAAACAAAGGGATG-3', un polynucléotide de 800 à 810 nucléotides, de préférence de 805 nucleotides (souche du groupe 8680); ou (ii) un

fragment de ladite deuxième Tbp2 additionnelle.

Selon un mode avantageux, la deuxième Tbp2 additionnelle provient d'une souche de N. meningilidis possédant une séquence d'ADN codant pour Tbp2 qui présente un profil de restriction par AiaII constitué de 2 fragments de 1507 et 445 nt, un profil de restriction par V.spI constitué de 3 fragments de 1298, 470 et 266 nt, un profil de restriction par XhoI constitué de 2 fragments de 1551 et 483 nt et un profil de restriction par HincII constitué de 3 fragments de 1191, 527 et 316 nt. De manière préférée, cette

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deuxième Tbp2 additionnelle possède la séquence d'acides aminés telle que montrée dans

le SEQ ID NO: 6 (souche 8680).

Outre des Tbp2s provenant de souches du complexe ET-5, une composition selon l'invention peut aussi contenir une ou plusieurs Tbp2s provenant de souches d'autres complexes électrophorétiques. En particulier, on prévoit d'adjoindre (i) une Tbp2 d'une souche du type M982 (c'est-à-dire d'une souche possédant un gène tbl)2 d'environ 2,1 à 2,3 kb) dont le degré d'homologie (identité) avec la Tbp2 M982 serait plus important que ceux observés en comparant les Tbp2s des souches du complexe ET-5 et la Tbp2 M982 (homologie au niveau de la séquence d'acides aminés) ou (ii) une Tbp2 d'une souche du

type B16B6 c'est-à-dire d'une souche possédant un gène Ib)2 d'environ 1, 8 kb.

Ainsi, une composition pharmaceutique selon l'invention peut comprendre en outre (i) une Tbp2 possédant une séquence d'acides aminés dont le degré d'homologie avec la séquence montrée dans le SEQ ID NO: 4, de l'acide aminé en position 1 à l'acide aminé en position 691, est d'au moins 85 %, de manière avantageuse d'au moins 90 % ou (ii) un fragment de ladite Tbp2. De manière préférée, il s'agira de la Tbp2 de la souche M982 qui

possède la séquence d'acides aminés telle que montrée dans le SEQ ID NO: 4.

Une composition pharmaceutique selon l'invention peut aussi comprendre en outre (i) une Tbp2 possédant une séquence d'acides aminés dont le degré d'homologie avec la séquence montrée dans le SEQ ID NO: 8, de l'acide aminé en position I à l'acide aminé en position 579, est d'au moins 95 %, de préférence 100 % (souche de type B16B6); ou

(ii) un fragment de ladite Tbp2.

En alternative aux diverses Tbp2s additionnelles possibles, on peut aussi utiliser un fragment de ces dernières. Les fragments utiles peuvent être déterminés comme cela est

expliqué dans WO 95/33049.

Les Tbp2s utiles aux fins de la présente invention peuvent être sous formedissociée de la sous-unité de haut poids moléculaire (Tbpl) de la souche de N. rneningifidi.S dont est

issue la Tbp2 ou bien en association avec cette Tbpl, formant ainsi un complexe Tbpl-

Tbp2 considéré comme le récepteur de la transferrine humaine; en d'autres termes, elles peuvent être sous forme dépourvue de leurs sous- unités de haut poids moléculaire (Tbpls) correspondantes ou bien associée à cette dernière, de manière à former un RTH. Qu'elle soit sous forme dissociée ou sous forme de complexe Tbpl-Tbp2, la sous-unité Tbp2 selon l'invention doit être substantiellement purifiée; c'est-à-dire séparée de l'environnement dans lequel elle existe de manière naturelle. Entre autres, il peut s'agir

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d'une préparation notamment dépourvue des protéines cytoplasmiques et périplasmiques

de N. meningitidis.

Une sous-unité Tbp2 utile aux fins de la présente invention peut être sous forme dissociée de la sous-unité de haut poids moléculaire (Tbpl) de la souche de N. meningitidis dont est issue la Tbp2 ou bien en association avec cette Tbpl, formant ainsi un complexe Tbpl-Tbp2 considéré comme le récepteur de la transferrine humaine. Qu'elle soit sous forme dissociée ou sous forme de complexe Tbpl-Tbp2, la sous-unité Tbp2 selon l'invention doit être substantiellement purifiée; c'est-à- dire séparée de l'environnement dans lequel elle existe de manière naturelle. Entre autres, il peut s'agir d'une préparation notamment dépourvue des protéines cytoplasmiques et périplasmiques

de N. menilgitidis.

Aux fins de la présente invention, on peut utiliser une ou des Tbp2s purifiées à partir des souches de méningocoque selon des méthodes déjà connues (voir entre autre WO 97/13860) ou bien obtenues par voie recombinante dans un système d'expression

homologue ou hétérologue.

Un système d'expression approprié est à la portée de l'homme de l'art dans la mesure o il dispose des séquences des gènes tlp2. Il lui faut en particulier construire une cassette d'expression dans laquelle un fragment d'ADN codant pour une Tbp2 mature ou un fragment de celle-ci sera placé sous le contrôle d'un promoteur approprié. Ce fragment d'ADN peut être ou non fusionné à un bloc d'ADN codant pour le peptide signal homologue ou pour un peptide signal hétérologue, selon que l'on recherche ou non la sécrétion du polypeptide. De préférence, cette sécrétion sera recherchée et on utilisera une

séquence signal dérivée d'un gène codant pour une lipoprotéine.

Des éléments tels qu'un bloc d'ADN codant pour un peptide signal hétérologue (région signal) ou un promoteur existent déjà en assez grand nombre et sont connus de I'homme du métier. Ses compétences générales lui permettront de choisir une région signal ou un promoteur particulier qui seront adaptés à la cellule-hôte dans laquelle il

envisage l'expression.

Aux fins du procédé selon l'invention, la cellule-hôte peut être une cellule de mammifère, une bactérie ou une levure; ces deux dernières étant préférées. Là aussi, le

choix d'une lignée particulière est à la portée de l'homme du métier.

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L'invention a aussi pour objet une composition pharmaceutique qui comprend une molécule d'ADN codant pour (i) la Tbp2 du récepteur de la transferrine humaine (RTH) d'une souche de Neisseria meningitidis faisant partie du complexe ET-5 et possédant une séquence d'ADN codant pour Tbp2, (a) qui contient 2 sites de restriction AvaII, 3 sites de restriction HindcI, aucun site de restriction V:)pI et aucun site de restriction VspI et XhoI ou, de préférence et, (b) à partir de laquelle il est possible de générer par PCR

(polymérase chain reaction) à l'aide des amorces P3 de formule 5'-

AAGACCAAGGCGGATACGGTTTTGC-3' et P4 de formule 5'-

GAAGACGAGTCGGAAACAAAGGGATG-3', un polynucléotide de 765 à 775 nucléotides, de préférence de 772 nucléotides (souche du groupe BZ83); ou (ii) un

fragment de ladite Tbp2.

Selon un mode avantageux, cette molécule d'ADN code pour une Tbp2 qui provient d'une souche de N. meningilidis possédant une séquence d'ADN codant pour Tbp2 qui présente un profil de restriction par AvalI constitué de 3 fragments de 1184, 477 et 415 nt

et un profil de restriction par HincI constitué de 4 fragments de 1155, 385, 276, et 257 nt.

De préférence, cette molécule d'ADN code pour une Tbp2 qui possède la séquence

d'acides aminés telle que montrée dans le SEQ ID NO: 2 (souche BZ83).

Une composition selon l'invention à base d'ADN peut comprendre en outre une première molécule d'ADN codant pour (i) une Tbp2 provenant d'une souche de N. meningi/idis faisant partie du complexe ET-5 et possédant une séquence d'ADN codant pour Tbp2 (a) qui ne contient pas de sites de restriction Avacil et XhoI ou, de préférence et, (b) à partir de laquelle il est possible de générer par PCR à l'aide des amorces P3 de

formule 5'-AAGACCAAGGCGGATACGGTTTTGC-3' et P4 de formule 5'-

GAAGACGAGTCGGAAACAAAGGGATG-3', un polynucléotide de 840 à 850 nucléotides, de préférence de 844 nucléotides (souche du groupe M982); ou (ii) un

fragment de ladite Tbp2.

Selon un mode avantageux, la première molécule d'ADN additionnelle code pour une Tbp2 qui provient d'une souche de N. meningiWidis possédant une séquence d'ADN codant pour Tbp2, qui contient 1 site de restriction Vx1)I et 3 sites de restriction HilcII. De manière préférée, cette molécule d'ADN code pour une Tbp2 qui provient d'une souche de N. meningifidis possédant une séquence d'ADN codant pour Tbp2 qui présente un profil de restriction par V.spI constitué de 2 fragments de 1311 et 769 nt et un profil de

restriction par HincII constitué de 4 fragments de 1229, 319, 281 et 259 nt.

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Une composition selon l'invention à base d'ADN peut aussi comprendre en outre une deuxième molécule d'ADN additionnelle codant pour (i) une Tbp2 provenant d'une souche de N. meningitidis faisant partie du complexe ET- 5 et possédant une séquence d'ADN codant pour Tbp2 (a) qui contient I site de restriction AvalIl, 2 sites de restriction VspI, 1 site de restriction XhoI et 2 sites de restriction HincI ou, de préférence et, (b) à

partir de laquelle il est possible de générer par PCR à l'aide des amorces P3 de formule 5'-

AAGACCAAGGCGGATACGGTTTTGC-3' et P4 de formule 5'-

GAAGACGAGTCGGAAACAAAGGGATG-3', un polynucléotide de 800 à 810 nucléotides, de préférence de 805 nucléotides (souche de groupe 8680); ou (ii) un

fragment de ladite Tbp2.

Selon un mode avantageux, la deuxième molécule d'ADN additionnelle code pour une Tbp2 qui provient d'une souche de N. meningiidis possédant une séquence d'ADN codant pour Tbp2 qui présente un profil de restriction par AvalII constitué de 2 fragments de 1507 et 445 nt, un profil de restriction par V.s)I constitué de 3 fragments de 1298, 470 et 266 nt, un profil de restriction par Ah7oI constitué de 2 fragments de 1551 et 483 nt et un profil de restriction par HincI constitué de 3 fragments de 1191, 527 et 316 nt. De manière préférée, cette molécule d'ADN code pour une Tbp2 qui possède la séquence

d'acides aminés telle que montrée dans le SEQ ID NO: 6 (souche 8680).

Une composition selon l'invention à base d'ADN peut comprendre en outre une molécule d'ADN codant pour (i) une Tbp2 possédant une séquence d'acides aminés dont le degré d'homologie avec la séquence montrée dans le SEQ ID NO: 4 est d'au moins 85 %, de manière avantageuse d'au moins 90 % ou (ii) un fragment de ladite Tbp2. De manière préférée, il s'agira d'une molécule d'ADN codant pour la Tbp2 de la souche M982 qui

possède la séquence d'acides aminés telle que montrée dans le SEQ ID NO: 4.

Une composition selon l'invention à base d'ADN peut aussi comprendre en outre une molécule d'ADN codant pour (i) une Tbp2 possédant une séquence d'acides aminés dont le degré d'homologie avec la séquence montrée dans le SEQ ID NO: 8 est d'au moins 95 %, de préférence 100 % (souche de type B16B6); ou (ii) un fragment de ladite Tbp2. La molécule d'ADN peut avantageusement être un plasmide qui est incapable à la fois de se répliquer et de s'intégrer de manière substantielle dans le génome d'un mammifère. La séquence codante citée ci-dessus est placée sous le contrôle d'un promoteur permettant l'expression dans une cellule de mammifère. Ce promoteur peut être ubiquitaire ou spécifique d'un tissu. Parmi les promoteurs ubiquitaires, on cite le - 16- promoteur précoce du Cytomegalovirus (décrit dans le brevet US n 4,168,062) et le

promoteur du virus du sarcome de Rous (décrit dans Norton & Coffin, Molec. Cell. Biol.

(1985) 5: 281). Le promoteur desmine (Li et al, Gene (1989) 78: 243; Li & Paulin, J. Biol. Chem. (1993) 268: 10403) est un promoteur sélectif permet l'expression dans les cellules musculaires et aussi dans les cellules de la peau. Un promoteur spécifique des cellules musculaires est par exemple le promoteur du gène de la myosine ou de la dystrophine. Des vecteurs plasmidiques que l'on peut utiliser aux fins de la présente invention sont décrits i.a., dans WO 94/21797 et Hartikka et al, Human Gene Therapy

(1996) 7: 1205.

Dans une composition selon la présente invention à base d'ADN, la ou les molécules d'ADN peuvent être formulées ou non. Le choix de la formulation est très varié. L'ADN peut être simplement dilué dans une solution acceptable d'un point de vue physiologique avec ou sans porteur. Lorsque ce dernier est présent, il peut être isotonique ou faiblement hypertonique et avoir basse force ionique. Par exemple, ces conditions peuvent être

remplies par une solution de sucrose e.g. à 20 %.

De manière alternative, la ou les molécules d'ADN peuvent être associées avec des agents qui favorise l'entrée dans la cellule. Ce peut être (ii) un agent chimique qui modifie la perméabilité cellulaire, telle que la bupivacaine (voir par exemple WO 94/16737) ou (ii) un agent s'associant au polynucléotide et agissant en tant que véhicule facilitant le transport du polynucléotide. Ce dernier peut être notamment des polymères cationiques e.g. de la polylysine ou une polyamine e.g. des dérivés de la spermine (voir WO 93/18759). Ce peut être également des peptides fusogéniques e.g. du GALA ou de la Gramicidine S (voir WO 93/19768) ou bien encore des peptides dérivés des protéines de

fusion virales.

Il peut aussi s'agir de lipides anioniques ou cationiques. Les lipides anioniques ou neutres sont connus depuis longtemps comme pouvant servir d'agents de transport, par exemple sous forme de liposomes, à un grand nombre de composés y compris les

polynucléotides. Une description détaillée de ces liposomes, de leurs constituants et de

leurs procédés de fabrication est par exemple fournit par Liposomes: A Practical

Approach, RPC New Ed, IRL press (1990).

Les lipides cationiques sont aussi connus et communément utilisés comme agents de transport pour les polynucléotides. On cite par exemple la LipofectinTM aussi connue sous le nom de DOTMA (N-[1-(2,3-dioleyloxy) propyl]-N,N,N-trimethylammonium chloride), le DOTAP (1,2bis(oleyloxy)-3-(trimethylammonio) propane), le DDAB

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(dimethyldioctadecylammonium bromide), le DOGS (dioctadecylamidoglycyl spermine)

et les dérivés du cholestérol tel que le DC-chol (3 bêta -(N-(N',N'dimethyl aminoethane)-

carbamoyl) cholestérol). Une description de ces lipides est fournie par EP 187,702, WO

/11092, le brevet US N 5,283,185, WO 91/15501, WO 95/26356 et le brevet US N 5,527,928. Les lipides cationiques sont utilisés de préférence avec un lipide neutre tel que la DOPE (dioleyl phosphatidylethanolamine) comme cela est par exemple décrit dans WO

/11092.

Des microparticules d'or ou de tungstène peuvent aussi être utilisées comme agents de transport, tel que c'est décrit dans WO 91/359, WO 93/17706 et Tang et al, Nature (1992) 356: 152. Dans ce cas là, le polynucléotide est précipité sur les microparticules en présence de chlorure de calcium et de spermidine puis l'ensemble est administré par jet à haute vitesse dans le derme ou dans l'épiderme, à l'aide d'un appareil sans aiguille tel que

ceux décrits dans les brevets US N 4,945,050 et N 5,015,580 et WO 94/24243.

La quantité d'ADN qui peut être utilisée pour vacciner un individu dépend d'un certains nombre de facteurs tels que par exemple la force du promoteur utilisé afin d'exprimer l'antigène, l'immunogénicité du produit exprimé, la condition du mammifère auquel est destinée l'administration (e.g., le poids, l'âge, et l'état de santé général), le mode d'administration et le type de formulation. On indique en particulier, que l'administration par voie intramusculaire requiert une quantité d'ADN plus importante que l'administration par voie intradermique à l'aide d'un appareil sans aiguille. En général une dose appropriée à un usage prophylactique ou thérapeutique chez un adulte de l'espèce humaine est d'environ I pg à environ 5 mg, de préférence d'environ 10 lg à environ 1 mg, et de

manière tout particulièrement préférée d'environ 25 glg à environ 500 g. g.

Lorsqu'une une composition selon la présente invention à base d'ADN contient plusieurs molécules d'ADN (l'une codant pour la Tbp2 d'une souche du groupe BZ83 et les autres pour la Tbp2 d'une souche d'un autre groupe ou type), ces molécules peuvent exister sous forme séparée les unes des autres (e.g., un plasmide / séquence codante) ou bien peuvent constituer un ou des ensembles (e.g., un seul et même plasmide / deux

séquences codantes ou plus).

Une composition selon la présente invention à base d'ADN peut en outre contenir des composés autres que l'agent immunogene lui-même, la nature de ces composés dépendant dans une certaine mesure i.a., de la voie d'administration. Ainsi comme on l'a déjà vu précédemment, la composition pharmaceutique peut inclure différents agents de

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formulation. A titre d'information, on indique que d'une manière générale, une molécule

d'ADN peut ne pas requérir l'adjonction d'un adjuvant.

Les compositions pharmaceutiques selon l'invention sont notamment utiles pour induire une réponse immunitaire chez les humains à l'encontre de N. meninigitidis, entre autre un effet vaccinal de manière à protéger les humains contre des infections à N.

meningitidis, en prévention ou en thérapie.

Les compositions selon la présente invention peuvent être fabriquées de manière conventionnelle. En particulier, elles peuvent être formulées avec un diluant, support ou un porteur acceptable d'un point de vue pharmaceutique e.g., de l'eau ou une solution saline. En général, le diluant ou le porteur peut être sélectionné en fonction du mode et de la voie d'administration et selon les pratiques pharmaceutiques standard. Des porteurs ou des diluants appropriés ainsi que ce qui est indispensable à l'élaboration d'une composition pharmaceutique sont décrits dans RemringIon', Pharmaceutical Sciences, un livre de référence standard dans ce domaine. Les compositions à base de Tbp2s peuvent aussi

contenir un adjuvant.

Une composition selon l'invention peut être administrée par toute voie d'administration conventionnelle en usage dans le domaine des vaccins. Avantageusement, on utilise la voie systémique i.a., la voie parentérale qui elle-même peut être choisie parmi les voies intraveineuse, intramusculaire, intradermique, intraépidermique et sous-cutanée

ces quatre dernières étant toutefois préférées à la voie intraveineuse.

Afin d'obtenir un effet protecteur ou thérapeutique, l'opération qui consiste à administrer une composition pharmaceutique selon la présente invention peut être répétée une ou plusieurs fois, en laissant un certain intervalle de temps entre chaque administration; intervalle qui est de l'ordre de la semaine ou du mois. Sa détermination précise est à la portée de l'homme du métier et peut varier en fonction de divers facteurs tels que la nature de l'agent immunogêne, l'àge de l'individu, etc.

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EXEMPLE 1: Vaccin méningocoque comportant quatre valences de souche (BZ83, 8680, M982 et B16B6) 1A. Purification des RTH natifs Le RTH de chacune des souches est purifié selon]a méthode décrite pour le RTH de

la souche 8680, dans l'Exemple I de WO 97/13860.

lB. Purification des Tbp2s natives La Tbp2 de chacune des souches est purifiée selon la méthode décrite pour la Tbp2

de la souche 8680, dans l'Exemple 2 de WO 97/13860.

1C. Préparation des Tbp2s recombinantes Pour chacune des Tbp2s, des plasmides d'expression sont construits dans lesquelles les séquences codants pour les Tbp2s matures sont fusionnées à la séquence signal r/p)B d'E. co/i (Takase et al, J. Bact. (1983) 169: 50692) et placées sous le contrôle du promoteur araB de Salmote//lla lyphinmurium (Horwitz et al, Gene (1981) 14: 309, Cagnon et al, Protein Engineering (1991) 4(7): 843 et Legrain et al, Prot. Express. Purif. (1995) 6

570).

Ces plasmides comportent aussi une origine de réplication fonctionnelle dans E. coli, un gène de résistance à la kanamycine et le locus cer (Summers & Sherratt, Cell

(1984) 36: 1097).

Chacun de ces plasmides sert à transformer la souche d'E. coili BL21.

Afin de produire les Tbp2s, chacun des transformants sélectionnés est mis en culture dans un fermenteur de 20 litres en milieu TGMI6 (Slos et aI, Prot. Express. Purif. (1994) 6: 518) en absence d'ampicilline. En phase exponentielle (densité optique à 600 nm supérieure à 40), on ajoute 0,2 % d'arabinose (inducteur de l'expression). Après une heure

d'induction, les cellules sont récoltées et conservées à - 20 C.

Les culots bactériens sont resuspendus en tampon Tris et soumis à lyse à haute pression (Rannie). Une série de lavages et de centrifugations s'en suit. Le culot final est solubilisé dans du tampon Tris contenant du zwittergent Z3-14, puis ultracentrifugé. Le surnageant est chargé sur une colonne de Q-Sépharose. L'éluat direct contenant la Tbp2 est chargé sur une deuxième colonne de Q-Sépharose et la Tbp2 est élué en gradient de NaCI. Afin d'enlever les produits de dégradation et les endotoxines, la fraction contenant Tbp2 est purifiée par gel filtration sur une colonne de chromatographie S-300. Les

préparations finales sont stérilisées par filtration et soumise à congélation.

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1D. Compositions vaccinales On utilise ensemble soit les 4 RTHs préparés comme décrit dans l'Exemple lA, soit les 4 Tbp2s préparées comme décrit dans l'Exemple lB, soit les 4 Tbp2s préparées comme décrit dans l'Exemple IC. Une composition vaccinale est obtenue en mélangeant des quantités équimolaires de chacune des préparations Tbp2s BZ83, 8680, M982 et B16B6 pour obtenir une

concentration finale en Tbp2s de l'ordre de 0,2 mg/ml.

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LISTE DE SEQUENCES

(1) INFORMATIONS GENERALES:

(i) DEPOSANT: (A) NOM: Pasteur Merieux serums & vaccins (B) RUE: 58, avenue Leclerc (C) VILLE: Lyon (E) PAYS: France

(F) CODE POSTAL: 69007

(G) TELEPHONE: 04. 72. 73. 79. 31

(H) TELECOPIE: 04. 72. 73. 78. 50

(ii) TITRE DE L' INVENTION: Vaccin meningocoque comportant la valence de souche BZ83 (iii) NOMBRE DE SEQUENCES: 12 (iv) FORME DECHIFFRABLE PAR ORDINATEUR: (A) TYPE DE SUPPORT: Floppy disk (B) ORDINATEUR: IBM PC compatible

(C) SYSTEME D' EXPLOITATION: PC-DOS/MS-DOS

(D) LOGICIEL: PatentIn Release #1.0, Version 41.30 (OEB)

(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 1:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 2125 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique) (ix) CARACTERISTIQUE:

(A) NOM/CLE: CDS

(B) EMPLACEMENT:;1..2067

(ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: sig_peptide

(B) EMPLACEMENT:1. 60

(ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: mat_peptide

(B) EMPLACEMENT:61..2067

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 1:

ATG AAC AAT CCA TTG GTA AAT CAG GCT GCT ATG GTG CTG CCT GTG TTT 48

Met Asn Asn Pro Leu Val Asn Gln Ala Ala Met Val Leu Pro Val Phe

*-20 -15 -10 -5

TTG TTG AGT GCT TGT CTG GGC GGA GGC GGC AGT TTC GAT CTT GAT TCT 96

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Leu Leu Ser Ala Cys Leu Gly Gly Gly Gly Ser Phe Asp Leu Asp Ser

1 5 10

GTC GAT ACC GAA GCC CCG CGT CCC GCG CCA AAG TAT CAA GAT GTT TCT 144

Val Asp Thr Glu Ala Pro Arg Pro Ala Pro Lys Tyr Gln Asp Val Ser

20 25

TCC GAA ACA CCG CAA GCC CAA AAA GAC CAA GGC GGA TAC GGT TTT GCA 192

Ser Glu Thr Pro Gln Ala Gln Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Gly Phe Ala

35 40

ATG CGC TTC AAG CGG CGG AAT TGG TAC CCA AAA AAT GAA GAA GAT CAT 240

Met Arg Phe Lys Arg Arg Asn Trp Tyr Pro Lys Asn Glu Glu Asp His

50 55 60

AAG GCA TTA TCA GAA GCG GAT TGG GAG AAG TTA GGT GCG GGT AAG CCA 288

Lys Ala Leu Ser Glu Ala Asp Trp Glu Lys Leu Gly Ala Gly Lys Pro

70 75

GAT GAG TTT CCC CAA AGG AAT GAA ATA TTG AAT ATG ACT GAC GGA ATT 336

Asp Glu Phe Pro Gln Arg Asn Glu Ile Leu Asn Met Thr Asp Gly Ile

85 90

CTG AGT GAG TCT CTT CAG CTG GGT GAG GGC GGC AAA AGC CGC GTA GAA 384

Leu Ser Glu Ser Leu Gln Leu Giy Glu Gly Giy Lys Ser Arg Val Glu

100 105

GGA TAC ACG GAT TTC CAA TAT GTC CGC TCG GGC TAT ATC TAC CGC AAC 432

Giy Tyr Thr Asp Phe Gln Tyr Val Arg Ser Gly Tyr Ile Tyr Arg Asn

115 120

GGT GCC AAT AAA ATC GAT TTC CAA AAA AAA ATC GCC CTT TCC GGT CCG 480

Gly Ala Asn Lys Ile Asp Phe Gln Lys Lys Ile Ala Leu Ser Gly Pro

130 135 140

GAC GGC TAC CTT TTC TAC AAA GGC AGC AAT CCT TCC CAA GCT CTG CCG 528

Asp Gly Tyr Leu Phe Tyr Lys Gly Ser Asn Pro Ser Gln Ala Leu Pro

150 155

ATG GGT AAG GTA GGT TAT AAA GGT ACT TGG GAT TAT GTA ACC GAT GCC 576

Met Giy Lys Val Gly Tyr Lys Gly Thr Trp Asp Tyr Val Thr Asp Ala

165 170

AAG ATG GGA CAA AAA TTT TCC CAG TTG GCT GGT TTT CCA GCG GGG GAT 624

Lys Met Gly Gln Lys Phe Ser Gln Leu Ala Gly Phe Pro Ala Gly Asp

180 185

AGG TAT GGG GCT TTG TCT GCC GAG GAA GCG GAT GTG TTG CGC AAC AAA 672

Arg Tyr Gly Ala Leu Ser Ala Glu Glu Ala Asp Val Leu Arg Asn Lys

195 200

AGC GAG GCA CAG CAA GGT CAG ACC GAT TTC GGG CTG ACC AGC GAG TTT 720

Ser Glu Ala Gln Gln Gly Gln Thr Asp Phe Gly Leu Thr Ser Glu Phe

205 210 215 220

GAG GTG GAT TTC GCC GCC AAG ACC ATG ACC GGC GCG CTC TAC CGC AAT 768

Glu Val Asp Phe Ala Ala Lys Thr Met Thr Gly Ala Leu Tyr Arg Asn -23-

225 230 235

AAC CGG ATT ACT AAT AAC GAA ACC GAA AAT AAA GCC AAA CAA ATT AAA 816

Asn Arg Ile Thr Asn Asn Glu Thr Glu Asn Lys Ala Lys Gln Ile Lys

240 245 250

CGT TAC GAC ATT CAG GCT GAC CTG CAC GGT AAC CGC TTC AGC GGC AAG 864

Arg Tyr Asp Ile Gln Ala Asp Leu His Gly Asn Arg Phe Ser Gly Lys

255 260 265

GCA ACG GCA ACC GAC AAA CCC AAA AAC GAC GAA ACC AAG GAA CAT CCC 912

Ala Thr Ala Thr Asp Lys Pro Lys Asn Asp Glu Thr Lys Glu His Pro

270 275 280

TTT GTT TCC GAC TCG TCT TCT TTG AGC GGC GGC TTT TTC GGT CCG AAG 960

Phe Val Ser Asp Ser Ser Ser Leu Ser Gly Gly Phe Phe Gly Pro Lys

285 290 295 300

GGT GAG GAA TTG GGT TTC CGC TTT TTG AGC GAC GAT CAA AAA GTT GCC 1008

Gly Glu Glu Leu Gly Phe Arg Phe Leu Ser Asp Asp Gln Lys Val Ala

305 310 315

GTT GTC GGC AGC GCG AAA ACC AAA GAC AAA CTG GAA AAT GGC GCG GCG 1056

Val Val Gly Ser Ala Lys Thr Lys Asp Lys Leu Glu Asn Gly Ala Ala

320 325 330

GCT TCA GGC AGC ACA GGT GCG GCA GCA TCG GGC GGT GCG GCA GAT ATG 1104

Ala Ser Gly Ser Thr Gly Ala Ala Ala Ser Gly Gly Ala Ala Asp Met

335 340 345

CCG TCT GAA AAC GGT AAG CTG ACC ACG GTT TTG GAT GCG GTT GAG CTG 1152

Pro Ser Glu Asn Gly Lys Leu Thr Thr Val Leu Asp Ala Val Glu Leu

350 355 360

AAA TCT GGC GGT AAG GAA GTC AAA AAT CTC GAC AAC TTC AGC AAT GCC 1200

Lys Ser Gly Gly Lys Glu Val Lys Asn Leu Asp Asn Phe Ser Asn Ala

365 370 375 380

GCC CAA CTG GTT GTC GAC GGC ATT ATG ATT CCG CTC CTG CCC AAG AAT 1248

Ala Gln Leu Val Val Asp Gly Ile Met Ile Pro Leu Leu Pro Lys Asn

385 390 395

TCC GAA AGC GAG AGC AAT CAG GCA GAT AAA GGT AAA AAC GGC GGA ACA 1296

Ser Glu Ser Glu Ser Asn Gln Ala Asp Lys Gly Lys Asn Gly Gly Thr

400 405 410

GCC TTT ACC CGC AAA TTT GAA CAC ACG CCG GAA AGT GAT AAA AAA GAC 1344

Ala Phe Thr Arg Lys Phe Glu His Thr Pro Glu Ser Asp Lys Lys Asp

415 420 425

ACC CAA GCA GGT ACG GCG GAG AAT GGC AAT CCA GCC GCT TCA AAT ACG 1392

Thr Gln Ala Gly Thr Ala Glu Asn Gly Asn Pro Ala Ala Ser Asn Thr

430 435 440

GCA GGT GAT ACC AAT GGC AAA ACA AAA ACC TAT GAA GTC GAA GTC TGC 1440

Ala Gly Asp Thr Asn Gly Lys Thr Lys Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys

445 450 455 460

- 24 -

TGT TCC AAC CTC AAT TAT CTG AAA TAC GGA ATG TTG ACG CGT AAA AAC 1488

Cys Ser Asn Leu Asn Tyr Leu Lys Tyr Gly Met Leu Thr Arg Lys Asn

465 470 475

AGC AAG TCC GCG ATG CAG GCA GGC GAA AAC GGT AGT CTA GCT GAC GCT 1536

Ser Lys Ser Ala Met Gln Ala Gly Glu Asn Gly Ser Leu Ala Asp Ala

480 485 490

AAA ACG GAA CAA GTT GAA CAA AGT ATG TTC CTC CAA GGC GAG CGC ACC 1584

Lys Thr Glu Gln Val Glu Gin Ser Met Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr

495 500 505

GAT GAA AAA GAG ATT CCA AAA GAG CAA CAA GAC ATC GTT TAT CGG GGG 1632

Asp Glu Lys Glu Ile Pro Lys Glu Gln Gln Asp Ile Val Tyr Arg Gly

510 515 520

TCT TGG TAC GGG CAT ATT GCC AAC GAC ACA AGC TGG AGC GGC AAT GCT 1680

Ser Trp Tyr Gly His Ile Ala Asn Asp Thr Ser Trp Ser Gly Asn Ala

525 530 535 540

TCA GAT AGA GAG GGC GGC AAC AGG GCG GAC TTT ACC GTG AAT TTT GGT 1728

Ser Asp Arg Glu Gly Gly Asn Arg Ala Asp Phe Thr Val Asn Phe Gly

545 550 555

ACG AAA AAA ATT AAC GGA ACG TTA ACC GCT GAA AAC AGG CAG GAG GCA 1776

Thr Lys Lys Ile Asn Gly Thr Leu Thr Ala Glu Asn Arg Gln Glu Ala

560 565 570

ACC TTT ACC ATT GTG GGC GAT ATT AAG GAC AAC GGC TTT GAA GGT ACG 1824

Thr Phe Thr Ile Val Gly Asp Ile Lys Asp Asn Gly Phe Glu Gly Thr

575 580 585

GCG AAA ACT GCT GAC TCA GGT TTT GAT CTC GAT CAA AGC AAT ACC ACC 1872

Ala Lys Thr Ala Asp Ser Gly Phe Asp Leu Asp Gln Ser Asn Thr Thr

590 595 600

CGC ACG CCT AAG GCA TAT ATC ACA GAT GCC AAG GTG AAG GGC GGT TTT 1920

Arg Thr Pro Lys Ala Tyr Ile Thr Asp Ala Lys Val Lys Gly Giy Phe

605 610 615 620

TAC GGG CCT AAA GCC GAA GAG TTG GGC GGA TGG TTT GCC TAT CCG GGC 1968

Tyr Gly Pro Lys Ala Glu Glu Leu Gly Gly Trp Phe Ala Tyr Pro Gly

625 630 635

GAT AAA CAA ACG GAA AAG GCA ACG GTT ACA TCC GGC GAT GGA AAT TCA 2016

Asp Lys Gln Thr Glu Lys Ala Thr Val Thr Ser Gly Asp Gly Asn Ser

640 645 650

GCA AGC AGT GCA ACT GTC GTA TTC GGT GCG AAA CGC CAA AAG CCT GTG 2064

Ala Ser Ser Ala Thr Val Val Phe Gly Ala Lys Arg Gln Lys Pro Val

655 660 665

CAA TAAAGTTTCG ATCTTGATTC TGTCGATACC GAAGCCCCGC GTCCCGCGCC AAATAAAA 2125

Gln -25-

(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 2:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 689 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 2:

Met Asn Asn Pro Leu Val Asn Gln Ala Ala Met Val Leu Pro Val Phe

-20 -15 -10 -5

Leu Leu Ser Ala Cys Leu Gly Gly Gly Gly Ser Phe Asp Leu Asp Ser

1 5 10

Val Asp Thr Glu Ala Pro Arg Pro Ala Pro Lys Tyr Gln Asp Val Ser

20 25

Ser Glu Thr Pro Gln Ala Gln Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Gly Phe Ala

35 40

Met Arg Phe Lys Arg Arg Asn Trp Tyr Pro Lys Asn Glu Glu Asp His

50 55 60

Lys Ala Leu Ser Glu Ala Asp Trp Glu Lys Leu Gly Ala Gly Lys Pro

70 75

Asp Glu Phe Pro Gln Arg Asn Glu Ile Leu Asn Met Thr Asp Gly I85 90

Leu Ser Glu Ser Leu Gln Leu Gly Glu Gly Gly Lys Ser Arg Val Glu

100 105

Gly Tyr Thr Asp Phe Gln Tyr Val Arg Ser Gly Tyr Ile Tyr Arg Asn

115 120

Gly Ala Asn Lys Ile Asp Phe Gln Lys Lys Ile Ala Leu Ser Gly Pro

130 135 140

Asp Gly Tyr Leu Phe Tyr Lys Gly Ser Asn Pro Ser Gln Ala Leu Pro

150 155

Met Gly Lys Val Gly Tyr Lys Gly Thr Trp Asp Tyr Val Thr Asp Ala

165 170

Lys Met Gly Gln Lys Phe Ser Gln Leu Ala Gly Phe Pro Ala Gly Asp

180 185

Arg Tyr Gly Ala Leu Ser Ala Glu Glu Ala Asp Val Leu Arg Asn Lys

195 200

Ser Glu Ala Gln Gln Gly Gln Thr Asp Phe Gly Leu Thr Ser Glu Phe

205 210 215 220

Glu Val Asp Phe Ala Ala Lys Thr Met Thr Gly Ala Leu Tyr Arg Asn

- 26 -

225 230 235

Asn Arg Ile Thr Asn Asn Glu Thr Glu Asn Lys Ala Lys Gin Ile Lys

240 245 250

Arg Tyr Asp Ile Gln Ala Asp Leu His Gly Asn Arg Phe Ser Gly Lys

255 260 265

Ala Thr Ala Thr Asp Lys Pro Lys Asn Asp Glu Thr Lys Glu His Pro

270 275 280

Phe Val Ser Asp Ser Ser Ser Leu Ser Gly Gly Phe Phe Gly Pro Lys

285 290 295 300

Gly Glu Glu Leu Gly Phe Arg Phe Leu Ser Asp Asp Gln Lys Val Ala

305 310 315

Val Val Gly Ser Ala Lys Thr Lys Asp Lys Leu Glu Asn Gly Ala Ala

320 325 330

Ala Ser Gly Ser Thr Gly Ala Ala Ala Ser Gly Gly Ala Ala Asp Met

335 340 345

Pro Ser Glu Asn Gly Lys Leu Thr Thr Val Leu Asp Ala Val Glu Leu

350 355 360

Lys Ser Gly Gly Lys Glu Val Lys Asn Leu Asp Asn Phe Ser Asn Ala

365 370 375 380

Ala Gln Leu Val Val Asp Gly Ile Met Ile Pro Leu Leu Pro Lys Asn

385 390 395

Ser Glu Ser Glu Ser Asn Gln Ala Asp Lys Gly Lys Asn Gly Gly Thr

400 405 410

Ala Phe Thr Arg Lys Phe Glu His Thr Pro Glu Ser Asp Lys Lys Asp

415 420 425

Thr Gln Ala Gly Thr Ala Glu Asn Gly Asn Pro Ala Ala Ser Asn Thr

430 435 440

Ala Gly Asp Thr Asn Gly Lys Thr Lys Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys

445 450 455 460

Cys Ser Asn Leu Asn Tyr Leu Lys Tyr Gly Met Leu Thr Arg Lys Asn

465 470 475

Ser Lys Ser Ala Met Gln Ala Gly Glu Asn Gly Ser Leu Ala Asp Ala

480 485 490

Lys Thr Glu Gln Val Glu Gln Ser Met Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr

495 500 505

Asp Glu Lys Glu Ile Pro Lys Glu Gln Gln Asp Ile Val Tyr Arg Gly

510 515 520

Ser Trp Tyr Gly His Ile Ala Asn Asp Thr Ser Trp Ser Gly Asn Ala

- 27 -

525 530 535 540

Ser Asp Arg Glu Gly Gly Asn Arg Ala Asp Phe Thr Val Asn Phe Gly

545 550 555

Thr Lys Lys Ile Asn Gly Thr Leu Thr Ala Glu Asn Arg Gln Glu Ala

560 565 570

Thr Phe Thr Ile Val Gly Asp Ile Lys Asp Asn Gly Phe Glu Gly Thr

575 580 585

Ala Lys Thr Ala Asp Ser Gly Phe Asp Leu Asp Gln Ser Asn Thr Thr

590 595 600

Arg Thr Pro Lys Ala Tyr Ile Thr Asp Ala Lys Val Lys Gly Gly Phe

605 610 615 620

Tyr Gly Pro Lys Ala Glu Glu Leu Gly Gly Trp Phe Ala Tyr Pro Gly

625 630 635

Asp Lys Gln Thr Glu Lys Ala Thr Val Thr Ser Gly Asp Gly Asn Ser

640 645 650

Ala Ser Ser Ala Thr Val Val Phe Gly Ala Lys Arg Gln Lys Pro Val

655 660 665

Gln

(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 3:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 2230 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique) (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: Neisseria meningitidis

(B) SOUCHE: IM2169

(ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: sig_peptide

(B) EMPLACEMENT:60..119

(ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: mat_peptide

(B) EMPLACEMENT:120..2192

(ix) CARACTERISTIQUE:

(A) NOM/CLE: CDS

(B) EMPLACEMENT:60..2192

(ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: miscfeature

- 28 -

(B) EMPLACEMENT:120..1154

(ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: miscfeature

(B) EMPLACEMENT:1155..1748

(ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: miscfeature

(B) EMPLACEMENT:1749..2192

(ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: misc_binding

(B) EMPLACEMENT:237..1169

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 3:

ATTTGTTAAA AATAAATAAA ATAATAATCC TTATCATTCT TTAATTGAAT TGGGTTTAT 59

ATG AAC AAT CCA TTG GTA AAT CAG GCT GCT ATG GTG CTG CCT GTG TTT 107

Met Asn Asn Pro Leu Val Asn Gln Ala Ala Met Val Leu Pro Val Phe

-20 -15 -10 -5

* TTG TTG AGT GCC TGT CTG GGC GGC GGC GGC AGT TTC GAT CTT GAT TCT 155

Leu Leu Ser Ala Cys Leu Gly Gly Gly Gly Ser Phe Asp Leu Asp Ser

1 5 10

GTC GAT ACC GAA GCC CCG CGT CCC GCG CCA AAG TAT CAA GAT GTT TCT 203

Val Asp Thr Glu Ala Pro Arg Pro Ala Pro Lys Tyr Gln Asp Val Ser

20 25

TCC GAA AAA CCG CAA GCC CAA AAA GAC CAA GGC GGA TAC GGT TTT GCG 251

Ser Glu Lys Pro Gln Ala Gln Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Gly Phe Ala

35 40

ATG AGG TTG AAA CGG AGG AAT TGG TAT CCG GGG GCA GAA GAA AGC GAG 299

Met Arg Leu Lys Arg Arg Asn Trp Tyr Pro Gly Ala Glu Glu Ser Glu

50 55 60

GTT AAA CTG AAC GAG AGT GAT TGG GAG GCG ACG GGA TTG CCG ACA AAA 347

Val Lys Leu Asn Glu Ser Asp Trp Glu Ala Thr Gly Leu Pro Thr Lys

70 75

CCC AAG GAA CTT CCT AAA CGG CAA AAA TCG GTT ATT GAA AAA GTA GAA 395

Pro Lys Glu Leu Pro Lys Arg Gln Lys Ser Val Ile Glu Lys Val Glu

85 90

ACA GAC GGC GAC AGC GAT ATT TAT TCT TCC CCC TAT CTC ACA CCA TCA 443

Thr Asp Gly Asp Ser Asp Ile Tyr Ser Ser Pro Tyr Leu Thr Pro Ser

100 105

AAC CAT CAA AAC GGC AGC GCT GGC AAC GGT GTA AAT CAA CCT AAA AAT 491

Asn His Gln Asn Gly Ser Ala Gly Asn Gly Val Asn Gln Pro Lys Asn

115 120

CAG GCA ACA GGT CAC GAA AAT TTC CAA TAT GTT TAT TCC GGT TGG TTT 539

Gln Ala Thr Gly His Glu Asn Phe Gln Tyr Val Tyr Ser Gly Trp Phe

- 29 -

130 135 140

TAT AAA CAT GCA GCG AGT GAA AAA GAT TTC AGT AAC AAA AAA ATT AAG 587

Tyr Lys His Ala Ala Ser Glu Lys Asp Phe Ser Asn Lys Lys Ile Lys

150 155

TCA GGC GAC GAT GGT TAT ATC TTC TAT CAC GGT GAA AAA CCT TCC CGA 635

Ser Gly Asp Asp Gly Tyr Ile Phe Tyr His Gly Glu Lys Pro Ser Arg

165 170

CAA CTT CCT GCT TCT GGA AAA GTT ATC TAC AAA GGT GTG TGG CAT TTT 683

Gln Leu Pro Ala Ser Gly Lys Val Ile Tyr Lys Gly Val Trp His Phe

180 185

GTA ACC GAT ACA AAA AAG GGT CAA GAT TTT CGT GAA ATT ATC CAG CCT 731

Val Thr Asp Thr Lys Lys Gly Gln Asp Phe Arg Glu Ile Ile Gln Pro

195 200

TCA AAA AAA CAA GGC GAC AGG TAT AGC GGA TTT TCT GGT GAT GGC AGC 779

Ser Lys Lys Gln Gly Asp Arg Tyr Ser Gly Phe Ser Gly Asp Giy Ser

205 210 215 220

GAA GAA TAT TCC AAC AAA AAC GAA TCC ACG CTG AAA GAT GAT CAC GAG 827

Glu Glu Tyr Ser Asn Lys Asn Glu Ser Thr Leu Lys Asp Asp His Glu

225 230 235

GGT TAT GGT TTT ACC TCG AAT TTA GAA GTG GAT TTC GGC AAT AAG AAA 875

Gly Tyr Gly Phe Thr Ser Asn Leu Glu Val Asp Phe Gly Asn Lys Lys

240 245 250

TTG ACG GGT AAA TTA ATA CGC AAT AAT GCG AGC CTA AAT AAT AAT ACT 923

Leu Thr Gly Lys Leu Ile Arg Asn Asn Ala Ser Leu Asn Asn Asn Thr

255 260 265

AAT AAT GAC AAA CAT ACC ACC CAA TAC TAC AGC CTT GAT GCA CAA ATA 971

Asn Asn Asp Lys His Thr Thr Gln Tyr Tyr Ser Leu Asp Ala Gln Ile

270 275 280

ACA GGC AAC CGC TTC AAC GGC ACG GCA ACG GCA ACT GAC AAA AAA GAG 1019

Thr Gly Asn Arg Phe Asn Gly Thr Ala Thr Ala Thr Asp Lys Lys Glu

285 290 295 300

AAT GAA ACC AAA CTA CAT CCC TTT GTT TCC GAC TCG TCT TCT TTG AGC 1067

Asn Glu Thr Lys Leu His Pro Phe Val Ser Asp Ser Ser Ser Leu Ser

305 310 315

GGC GGC TTT TTC GGC CCG CAG GGT GAG GAA TTG GGT TTC CGC TTT TTG 1115

Gly Gly Phe Phe Gly Pro Gln Gly Glu Glu Leu Gly Phe Arg Phe Leu

320 325 330

AGC GAC GAT CAA AAA GTT GCC GTT GTC GGC AGC GCG AAA ACC AAA GAC 1163

Ser Asp Asp Gln Lys Val Ala Val Val Gly Ser Ala Lys Thr Lys Asp

335 340 345

AAA CTG GAA AAT GGC GCG GCG GCT TCA GGC AGC ACA GGT GCG GCA GCA 1211

Lys Leu Glu Asn Gly Ala Ala Ala Ser Gly Ser Thr Gly Ala Ala Ala

350 355 360

-30-

TCG GGC GGT GCG GCA GGC ACG TCG TCT GAA AAC AGT AAG CTG ACC ACG 1259

Ser Gly Gly Ala Ala Gly Thr Ser Ser Glu Asn Ser Lys Leu Thr Thr

365 370 375 380

GTT TTG GAT GCG GTT GAA TTG ACA CTA AAC GAC AAG AAA ATC AAA AAT 1307

Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Thr Leu Asn Asp Lys Lys Ile Lys Asn

385 390 395

CTC GAC AAC TTC AGC AAT GCC GCC CAA CTG GTT GTC GAC GGC ATT ATG 1355

Leu Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Asp Gly Ile Met

400 405 410

ATT CCG CTC CTG CCC AAG GAT TCC GAA AGC GGG AAC ACT CAG GCA GAT 1403

Ile Pro Leu Leu Pro Lys Asp Ser Glu Ser Gly Asn Thr Gln Ala Asp

415 420 425

AAA GGT AAA AAC GGC GGA ACA GAA TTT ACC CGC AAA TTT GAA CAC ACG 1451

Lys Gly Lys Asn Gly Gly Thr Glu Phe Thr Arg Lys Phe Glu His Thr

430 435 440

CCG GAA AGT GAT AAA AAA GAC GCC CAA GCA GGT ACG CAG ACG AAT GGG 1499

Pro Glu Ser Asp Lys Lys Asp Ala Gln Ala Gly Thr Gln Thr Asn Gly

445 450 455 460

GCG CAA ACC GCT TCA AAT ACG GCA GGT GAT ACC AAT GGC AAA ACA AAA 1547

Ala Gln Thr Ala Ser Asn Thr Ala Gly Asp Thr Asn Gly Lys Thr Lys

465 470 475

ACC TAT GAA GTC GAA GTC TGC TGT TCC AAC CTC AAT TAT CTG AAA TAC 1595

Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Ser Asn Leu Asn Tyr Leu Lys Tyr

480 485 490

GGA ATG TTG ACG CGC AAA AAC AGC AAG TCC GCG ATG CAG GCA GGA GGA 1643

Gly Met Leu Thr Arg Lys Asn Ser Lys Ser Ala Met Gln Ala Gly Gly

495 500 505

AAC AGT AGT CAA GCT GAT GCT AAA ACG GAA CAA GTT GAA CAA AGT ATG 1691

Asn Ser Ser Gln Ala Asp Ala Lys Thr Glu Gln Val Glu Gln Ser Met

510 515 520

TTC CTC CAA GGC GAG CGT ACC GAT GAA AAA GAG ATT CCA ACC GAC CAA 1739

Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro Thr Asp Gln

525 530 535 540

AAC GTC GTT TAT CGG GGG TCT TGG TAC GGG CAT ATT GCC AAC GGC ACA 1787

Asn Val Val Tyr Arg Gly Ser Trp Tyr Gly His Ile Ala Asn Gly Thr

545 550 555

AGC TGG AGC GGC AAT GCT TCT GAT AAA GAG GGC GGC AAC AGG GCG GAA 1835

Ser Trp Ser Gly Asn Ala Ser Asp Lys Glu Gly Gly Asn Arg Ala Glu

560 565 570

TTT ACT GTG AAT TTT GCC GAT AAA AAA ATT ACC GGC AAG TTA ACC GCT 1883

Phe Thr Val Asn Phe Ala Asp Lys Lys Ile Thr Gly Lys Leu Thr Ala

575 580 585

- 31 -

GAA AAC AGG CAG GCG CAA ACC TTT ACC ATT GAG GGA ATG ATT CAG GGC 1931

Glu Asn Arg Gln Ala Gln Thr Phe Thr Ile Glu Gly Met Ile Gln Gly

590 595 600

AAC GGC TTT GAA GGT ACG GCG AAA ACT GCT GAG TCA GGT TTT GAT CTC 1979

Asn Gly Phe Glu Gly Thr Ala Lys Thr Ala Glu Ser Gly Phe Asp Leu

605 610 615 620

GAT CAA AAA AAT ACC ACC CGC ACG CCT AAG GCA TAT ATC ACA GAT GCC 2027

Asp Gln Lys Asn Thr Thr Arg Thr Pro Lys Ala Tyr Ile Thr Asp Ala

625 630 635

AAG GTA AAG GGC GGT TTT TAC GGG CCT AAA GCC GAA GAG TTG GGC GGA 2075

Lys Val Lys Gly Gly Phe Tyr Gly Pro Lys Ala Glu Glu Leu Gly Gly

640 645 650

TGG TTT GCC TAT CCG GGC GAT AAA CAA ACG GAA AAG GCA ACA GCT ACA 2123

Trp Phe Ala Tyr Pro Gly Asp Lys Gln Thr Glu Lys Ala Thr Ala Thr

655 660 665

TCC AGC GAT GGA AAT TCA GCA AGC AGC GCG ACC GTG GTA TTC GGT GCG 2171

Ser Ser Asp Gly Asn Ser Ala Ser Ser Ala Thr Val Val Phe Gly Ala

670 675 680

AAA CGC CAA CAG CCT GTG CAA TAAGCACGGT TGCCGAACAA TCAAGAATAA 2222

Lys Arg Gln Gln Pro Val Gln

685 690

GGCTTCAG 2230

(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 4:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 711 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 4:

Met Asn Asn Pro Leu Val Asn Gln Ala Ala Met Val Leu Pro Val Phe

-20 -15 -10 -5

Leu Leu Ser Ala Cys Leu Gly Gly Gly Gly Ser Phe Asp Leu Asp Ser

1 5 10

Val Asp Thr Glu Ala Pro Arg Pro Ala Pro Lys Tyr Gln Asp Val Ser

20 25

Ser Glu Lys Pro Gln Ala Gln Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Gly Phe Ala

35 40

Met Arg Leu Lys Arg Arg Asn Trp Tyr Pro Gly Ala Glu Glu Ser Glu

50 55 60

Val Lys Leu Asn Glu Ser Asp Trp Glu Ala Thr Gly Leu Pro Thr Lys -32-

70 75

Pro Lys Glu Leu Pro Lys Arg Gln Lys Ser Val Ile Glu Lys Val Glu

85 90

Thr Asp Gly Asp Ser Asp Ile Tyr Ser Ser Pro Tyr Leu Thr Pro Ser

100 105

Asn His Gln Asn Gly Ser Ala Gly Asn Gly Val Asn Gln Pro Lys Asn

115 120

Gln Ala Thr Gly His Glu Asn Phe Gln Tyr Val Tyr Ser Gly Trp Phe

130 135 140

Tyr Lys His Ala Ala Ser Glu Lys Asp Phe Ser Asn Lys Lys Ile Lys

150 155

Ser Gly Asp Asp Gly Tyr Ile Phe Tyr His Gly Glu Lys Pro Ser Arg

165 170

Gln Leu Pro Ala Ser Gly Lys Val Ile Tyr Lys Gly Val Trp His Phe

180 185

Val Thr Asp Thr Lys Lys Gly Gln Asp Phe Arg Glu Ile Ile Gln Pro

195 200

Ser Lys Lys Gln Gly Asp Arg Tyr Ser Gly Phe Ser Gly Asp Gly Ser

205 210 215 220

Glu Glu Tyr Ser Asn Lys Asn Glu Ser Thr Leu Lys Asp Asp His Glu

225 230 235

Gly Tyr Gly Phe Thr Ser Asn Leu Glu Val Asp Phe Gly Asn Lys Lys

240 245 250

Leu Thr Gly Lys Leu Ile Arg Asn Asn Ala Ser Leu Asn Asn Asn Thr

255 260 265

Asn Asn Asp Lys His Thr Thr Gln Tyr Tyr Ser Leu Asp Ala Gln Ile

270 275 280

Thr Gly Asn Arg Phe Asn Gly Thr Ala Thr Ala Thr Asp Lys Lys Glu

285 290 295 300

Asn Glu Thr Lys Leu His Pro Phe Val Ser Asp Ser Ser Ser Leu Ser

305 310 315

Gly Gly Phe Phe Gly Pro Gln Gly Glu Glu Leu Gly Phe Arg Phe Leu

320 325 330

Ser Asp Asp Gln Lys Val Ala Val Val Gly Ser Ala Lys Thr Lys Asp

335 340 345

Lys Leu Glu Asn Gly Ala Ala Ala Ser Gly Ser Thr Gly Ala Ala Ala

350 355 360

Ser Gly Gly Ala Ala Gly Thr Ser Ser Glu Asn Ser Lys Leu Thr Thr

- 33 -

365 370 375 380

Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Thr Leu Asn Asp Lys Lys Ile Lys Asn

385 390 395

Leu Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Asp Gly Ile Met

400 405 410

Ile Pro Leu Leu Pro Lys Asp Ser Glu Ser Gly Asn Thr Gln Ala Asp

415 420 425

Lys Gly Lys Asn Gly Gly Thr Glu Phe Thr Arg Lys Phe Glu His Thr

430 435 440

Pro Glu Ser Asp Lys Lys Asp Ala Gln Ala Gly Thr Gln Thr Asn Gly

445 450 455 460

Ala Gln Thr Ala Ser Asn Thr Ala Gly Asp Thr Asn Gly Lys Thr Lys

465 470 475

Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Ser Asn Leu Asn Tyr Leu Lys Tyr

480 485 490

Gly Met Leu Thr Arg Lys Asn Ser Lys Ser Ala Met Gln Ala Gly Gly

495 500 505

Asn Ser Ser Gln Ala Asp Ala Lys Thr Glu Gln Val Glu Gln Ser Met

510 515 520

Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro Thr Asp Gln

525 530 535 540

Asn Val Val Tyr Arg Gly Ser Trp Tyr Giy His Ile Ala Asn Gly Thr

545 550 555

Ser Trp Ser Gly Asn Ala Ser Asp Lys Glu Gly Gly Asn Arg Ala Glu

560 565 570

Phe Thr Val Asn Phe Ala Asp Lys Lys Ile Thr Gly Lys Leu Thr Ala

575 580 585

Glu Asn Arg Gln Ala Gln Thr Phe Thr Ile Glu Gly Met Ile Gln Gly

590 595 600

Asn Gly Phe Glu Gly Thr Ala Lys Thr Ala Glu Ser Gly Phe Asp Leu

605 610 615 620

Asp Gln Lys Asn Thr Thr Arg Thr Pro Lys Ala Tyr Ile Thr Asp Ala

625 630 635

Lys Val Lys Gly Gly Phe Tyr Gly Pro Lys Ala Glu Glu Leu Gly Gly

640 645 650

Trp Phe Ala Tyr Pro Gly Asp Lys Gln Thr Glu Lys Ala Thr Ala Thr

655 660 665

Ser Ser Asp Gly Asn Ser Ala Ser Ser Ala Thr Val Val Phe Gly Ala -34-

670 675 680

Lys Arg Gln Gln Pro Val Gin

685 690

(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 5:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 2064 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique) (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: Neisseria meningitidis

(B) SOUCHE: 8680

(ix) CARACTERISTIQUE:

(A) NOM/CLE: CDS

(B) EMPLACEMENT:l..2061 (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: sig_peptide (B) EMPLACEMENT:l..30 (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: mat_peptide

(B) EMPLACEMENT:31..2061

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 5:

ATG GTG CTG CCT GTG TTT TTG TCG AGT GCT TGT CTG GGC GGA GGC GGC 48

Met Val Leu Pro Val Phe Leu Ser Ser Ala Cys Leu Gly Gly Gly Gly

-10 -5 1 5

GGC AGT TTC GAT CTT GAT TCT GTC GAT ACC GAA GCC CCG CGT CCC GCG 96

Gly Ser Phe Asp Leu Asp Ser Val Asp Thr Glu Ala Pro Arg Pro Ala

15 20

CCA AAG TAT CAA GAT GTT TCT TCC GAA AAG CCG AAA GCC CAA AAA GAC 144

Pro Lys Tyr Gln Asp Val Ser Ser Glu Lys Pro Lys Ala Gln Lys Asp

*30 35

CAA GGC GGA TAC GGT TTT GCA ATG CGC TTT AAG CGG AGG AAT TGG TAT 192

Gln Gly Gly Tyr Gly Phe Ala Met Arg Phe Lys Arg Arg Asn Trp Tyr

45 50

CAG AAG GCG AAT CCT AAA GAA GAT GAG ATA AAA CTC TCT GAA AAT GAT 240

Gln Lys Ala Asn Pro Lys Glu Asp Glu Ile Lys Leu Ser Glu Asn Asp

60 65 70

TGG GAA CAA ACG GAT AAT GGT GAT ATC AAA AAC CCT TCC AAA CAA AAA 288

Trp Glu Gln Thr Asp Asn Gly Asp Ile Lys Asn Pro Ser Lys Gln Lys

80 85

- 35 -

AAT ATT ATT AAT GCC TTA CCT GGA AAT AAT GGA GGA GCT ACA TTG CAA 336

Asn Ile Ile Asn Ala Leu Pro Gly Asn Asn Gly Gly Ala Thr Leu Gln

95 100

GAT TCC AGT CAA GAA AAT CAG GGT ATA TCT AAG GTT ACG GAC TAT CAC 384

Asp Ser Ser Gln Glu Asn Gln Gly Ile Ser Lys Val Thr Asp Tyr His

110 115

AAT TTC CAA TAC GTA TGG TCG GGG TTT TTT TAT AAA CAG ATT AAA AAT 432

Asn Phe Gln Tyr Val Trp Ser Gly Phe Phe Tyr Lys Gln Ile Lys Asn

125 130

ACA ATT GAA AAA AAC GGT TCA TCT ATA ACC GCA GCC AGA AAC GGT CCT 480

Thr Ile Glu Lys Asn Gly Ser Ser Ile Thr Ala Ala Arg Asn Gly Pro

140 145 150

GAC GGT TAT ATT TTT TAT AAA GGC AAA GAT CCC TCG AGA CAA CTC CCT 528

Asp Gly Tyr Ile Phe Tyr Lys Gly Lys Asp Pro Ser Arg Gln Leu Pro

160 165

GTA TTG GGA CAG GTT ACG TAT AAA GGG ACT TGG GAT TTC TTA ACT GAT 576

Val Leu Gly Gln Val Thr Tyr Lys Gly Thr Trp Asp Phe Leu Thr Asp

175 180

GTG AAA ATA AAT CAG AAA TTT ATA GAT TTA GGG AAT ACT TCT ACG AAA 624

Val Lys Ile Asn Gln Lys Phe Ile Asp Leu Gly Asn Thr Ser Thr Lys

190 195

CCC GGC GAC CGA TAT AGT GCT TTT TCC GGG GAG TTG GAT TAT ATC GTC 672

Pro Gly Asp Arg Tyr Ser Ala Phe Ser Gly Glu Leu Asp Tyr Ile Val

205 210

AAT AAA GAT AGC GAT AAG AAA GAC GGG CAC GTA GCA AAG GGA TTA ACA 720

Asn Lys Asp Ser Asp Lys Lys Asp Gly His Val Ala Lys Gly Leu Thr

215 220 225 230

ACG GAA ATA ACG GTT GAT TTT GAG AAA AAA ACC CTC AAC GGA AAA TTA 768

Thr Glu Ile Thr Val Asp Phe Glu Lys Lys Thr Leu Asn Gly Lys Leu

235 240 245

ATT AAA AAC AAC AGT GTA AGC AAT AAT GAG TTC AAC GCT AAA TAC ACC 816

Ile Lys Asn Asn Ser Val Ser Asn Asn Glu Phe Asn Ala Lys Tyr Thr

250 255 260

ACC CAA TAC TAT AGC CTT GAT GCG ACG CTT AGG GGA AAC CGC TTC AAC 864

Thr Gln Tyr Tyr Ser Leu Asp Ala Thr Leu Arg Gly Asn Arg Phe Asn

265 270 275

GGC AAG GCA ACG GCA ACC GAC AAA CCT GGC ACT GGA GAA ACC AAA CAA 912

Gly Lys Ala Thr Ala Thr Asp Lys Pro Gly Thr Gly Glu Thr Lys Gln

280 285 290

CAT CCC TTT GTT TCC GAC TCG TCT TCT TTG AGC GGC GGC TTT TTC GGC 960

His Pro Phe Val Ser Asp Ser Ser Ser Leu Ser Gly Gly Phe Phe Gly

295 300 305 310

-36-

CCG AAG GGT GAG GAA TTG GGT TTC CGC TTT TTG AGC GAC GAT AAA AAA 1008

Pro Lys Gly Glu Glu Leu Gly Phe Arg Phe Leu Ser Asp Asp Lys Lys

315 320 325

GTT GCG GTT GTC GGC AGC GCG AAA ACC CAA GAC AAA CCG GGA AAT GGC 1056

Val Ala Val Val Gly Ser Ala Lys Thr Gln Asp Lys Pro Gly Asn Gly

330 335 340

GCG GCG GCT TCA GAC GGC GAG GTG CGG CAG CAT CAA ACG GTG CGG CAG 1104

Ala Ala Ala Ser Asp Gly Glu Val Arg Gln His Gln Thr Val Arg Gln

345 350 355

CTA GAT GGC TCT GAA AAC GGT AAG CTG ACC ACG GTT TTG GAT GCG GTC 1152

Leu Asp Gly Ser Glu Asn Gly Lys Leu Thr Thr Val Leu Asp Ala Val

360 365 370

GAG CTG ACG CAC GGC GGC ACA GCA ATC AAA AAT CTC GAC AAC TTC AGC 1200

Glu Leu Thr His Gly Gly Thr Ala Ile Lys Asn Leu Asp Asn Phe Ser

375 380 385 390

AAC GCC GCC CAA CTG GTT GTC GAC GGC ATT ATG ATT CCG CTC CCT GCC 1248

Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Asp Gly Ile Met Ile Pro Leu Pro Ala

395 400 405

GAG GCT TCC GAA AGT GGG AAC AAT CAA GCC AAT CAA GGT ACA AAT GGC 1296

Glu Ala Ser Glu Ser Gly Asn Asn Gln Ala Asn Gln Gly Thr Asn Gly

410 415 420

GGA ACA GCC TTT ACC CGC AAA TTT GAC CAC ACG CCG AAA AGC GAT GAA 1344

Gly Thr Ala Phe Thr Arg Lys Phe Asp His Thr Pro Lys Ser Asp Glu

425 430 435

AAA GAC ACC CAA GCA GGT ACG GCG GCG AAT GGC AAT CCA GCC GCT TCA 1392

Lys Asp Thr Gln Ala Gly Thr Ala Ala Asn Gly Asn Pro Ala Ala Ser

440 445 450

AAT ACG GCA GGT GAT ACC AAT GGC AAA ACA AAA ACC TAT GAA GTC GAA 1440

Asn Thr Ala Gly Asp Thr Asn Gly Lys Thr Lys Thr Tyr Glu Val Glu

455 460 465 470

GTC TGC TGT TCC AAC CTC AAT TAT CTG AAA TAC GGG TTG CTG ACG CGC 1488

Val Cys Cys Ser Asn Leu Asn Tyr Leu Lys Tyr Gly Leu Leu Thr Arg

475 480 485

AAA ACT GCC GGT AAC ACG GTG GGA AGC GGC AAC GGC AGC CCA ACC GCC 1536

Lys Thr Ala Gly Asn Thr Val Gly Ser Gly Asn Gly Ser Pro Thr Ala

490 495 500

GCC GCC CAA ACG GAC GCG CAG AGT ATG TTC TTA CAA GGC GAG CGC ACC 1584

Ala Ala Gln Thr Asp Ala Gln Ser Met Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr

505 510 515

GAT GAA AAA GAG ATT CCA AGC GAG CAA AAC GTC GTT TAT CGG GGG TCT 1632

Asp Glu Lys Glu Ile Pro Ser Glu Gln Asn Val Val Tyr Arg Gly Ser

520 525 530

TGG TAC GGG CAT ATT GCC AAC AGC ACA AGC TGG AGC GGC AAT GCT TCC 1680

-37- Trp Tyr Gly His Ile Ala Asn Ser Thr Ser Trp Ser Gly Asn Ala Ser

535 540 545 550

AAT GCA ACG AGT GGC AAC AAG GCG GAC TTT ACC GTG AAT TTT GGC GAG 1728

Asn Ala Thr Ser Gly Asn Lys Ala Asp Phe Thr Val Asn Phe Gly Glu

555 560 565

AAA AAA ATT ACC GGC ATG TTA ACC GCT GAA AAC AGG CAG GCG GCA ACC 1776

Lys Lys Ile Thr Gly Met Leu Thr Ala Glu Asn Arg Gin Ala Ala Thr

570 575 580

TTT ACC ATT GAG GGA ACG ATT CAG GGC AAC GGT TTT TCC GGT ACG GCA 1824

Phe Thr Ile Glu Gly Thr Ile Gln Gly Asn Gly Phe Ser Gly Thr Ala

585 590 595

AAA ACT GCT GAC TCA GGC TTT GAT CTC GAT CAA AGC AAT ACC ACC GGC 1872

Lys Thr Ala Asp Ser Gly Phe Asp Leu Asp Gln Ser Asn Thr Thr Gly

600 605 610

ACG CCT AAG GCA TAT ATC ACA AAC GCC AAG GTG CAG GGC GGT TTT TAC 1920

Thr Pro Lys Ala Tyr Ile Thr Asn Ala Lys Val Gln Gly Gly Phe Tyr

615 620 625 630

GGG CCT AAA GCC GAA GAA ATG GGT GGA TGG TTT GCT TAT CCG GGC GAC 1968

Gly Pro Lys Ala Glu Glu Met Gly Gly Trp Phe Ala Tyr Pro Gly Asp

635 640 645

AGT CAG ACG CAG CGG TCC GCT TCG GGG TCA GGC GCA TCA GCC GCC AAC 2016

Ser Gln Thr Gln Arg Ser Ala Ser Gly Ser Gly Ala Ser Ala Ala Asn

650 655 660

AGC GCG ACC GTG GTA TTC GGT GCG AAA CGC CAA CAG CTT GTG CAA 2061

Ser Ala Thr Val Val Phe Gly Ala Lys Arg Gln Gln Leu Val Gln

665 670 675

TAA 2064

(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 6:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 687 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 6:

Met Val Leu Pro Val Phe Leu Ser Ser Ala Cys Leu Gly Gly Gly Gly

-10 -5 1 5

Gly Ser Phe Asp Leu Asp Ser Val Asp Thr Glu Ala Pro Arg Pro Ala

15 20

Pro Lys Tyr Gln Asp Val Ser Ser Glu Lys Pro Lys Ala Gln Lys Asp

30 35

- 38 -

Gln Gly Gly Tyr Gly Phe Ala Met Arg Phe Lys Arg Arg Asn Trp Tyr

45 50

Gln Lys Ala Asn Pro Lys Glu Asp Glu Ile Lys Leu Ser Glu Asn Asp

60 65 70

Trp Glu Gln Thr Asp Asn Gly Asp Ile Lys Asn Pro Ser Lys Gln Lys

80 85

Asn Ile Ile Asn Ala Leu Pro Gly Asn Asn Gly Gly Ala Thr Leu Gln

95 100

Asp Ser Ser Gln Glu Asn Gln Gly Ile Ser Lys Val Thr Asp Tyr His

110 115

Asn Phe Gln Tyr Val Trp Ser Gly Phe Phe Tyr Lys Gln Ile Lys Asn

125 130

Thr Ile Glu Lys Asn Gly Ser Ser Ile Thr Ala Ala Arg Asn Gly Pro

140 145 150

Asp Gly Tyr Ile Phe Tyr Lys Gly Lys Asp Pro Ser Arg Gln Leu Pro

160 165

Val Leu Gly Gln Val Thr Tyr Lys Gly Thr Trp Asp Phe Leu Thr Asp

175 180

Val Lys Ile Asn Gln Lys Phe Ile Asp Leu Gly Asn Thr Ser Thr Lys

190 195

Pro Gly Asp Arg Tyr Ser Ala Phe Ser Gly Glu Leu Asp Tyr Ile Val

205 210

Asn Lys Asp Ser Asp Lys Lys Asp Gly His Val Ala Lys Gly Leu Thr

215 220 225 230

Thr Glu Ile Thr Val Asp Phe Glu Lys Lys Thr Leu Asn Gly Lys Leu

235 240 245

Ile Lys Asn Asn Ser Val Ser Asn Asn Glu Phe Asn Ala Lys Tyr Thr

250 255 260

Thr Gln Tyr Tyr Ser Leu Asp Ala Thr Leu Arg Gly Asn Arg Phe Asn

265 270 275

Gly Lys Ala Thr Ala Thr Asp Lys Pro Gly Thr Gly Glu Thr Lys Gln

280 285 290

His Pro Phe Val Ser Asp Ser Ser Ser Leu Ser Gly Gly Phe Phe Gly

295 300 305 310

Pro Lys Gly Glu Glu Leu Gly Phe Arg Phe Leu Ser Asp Asp Lys Lys

315 320 325

Val Ala Val Val Gly Ser Ala Lys Thr Gln Asp Lys Pro Gly Asn Gly

330 335 340

- 39 -

Ala Ala Ala Ser Asp Gly Glu Val Arg Gln His Gln Thr Val Arg Gln

345 350 355

Leu Asp Gly Ser Glu Asn Gly Lys Leu Thr Thr Val Leu Asp Ala Val

360 365 370

Glu Leu Thr His Gly Gly Thr Ala Ile Lys Asn Leu Asp Asn Phe Ser

375 380 385 390

Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Asp Gly Ile Met Ile Pro Leu Pro Ala

395 400 405

Glu Ala Ser Glu Ser Gly Asn Asn Gln Ala Asn Gln Gly Thr Asn Gly

410 415 420

Gly Thr Ala Phe Thr Arg Lys Phe Asp His Thr Pro Lys Ser Asp Glu

425 430 435

Lys Asp Thr Gln Ala Gly Thr Ala Ala Asn Gly Asn Pro Ala Ala Ser

440 445 450

Asn Thr Ala Gly Asp Thr Asn Gly Lys Thr Lys Thr Tyr Glu Val Glu

455 460 465 470

Val Cys Cys Ser Asn Leu Asn Tyr Leu Lys Tyr Gly Leu Leu Thr Arg

475 480 485

Lys Thr Ala Gly Asn Thr Val Gly Ser Gly Asn Gly Ser Pro Thr Ala

490 495 500

Ala Ala Gln Thr Asp Ala Gln Ser Met Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr

505 510 515

Asp Glu Lys Glu Ile Pro Ser Glu Gln Asn Val Val Tyr Arg Gly Ser

520 525 530

Trp Tyr Gly His Ile Ala Asn Ser Thr Ser Trp Ser Gly Asn Ala Ser

535 540 545 550

Asn Ala Thr Ser Gly Asn Lys Ala Asp Phe Thr Val Asn Phe Gly Glu

555 560 565

Lys Lys Ile Thr Gly Met Leu Thr Ala Glu Asn Arg Gln Ala Ala Thr

570 575 580

Phe Thr Ile Glu Gly Thr Ile Gln Gly Asn Gly Phe Ser Gly Thr Ala

585 590 595

Lys Thr Ala Asp Ser Gly Phe Asp Leu Asp Gln Ser Asn Thr Thr Gly

600 605 610

Thr Pro Lys Ala Tyr Ile Thr Asn Ala Lys Val Gln Gly Gly Phe Tyr

615 620 625 630

Gly Pro Lys Ala Glu Glu Met Gly Gly Trp Phe Ala Tyr Pro Gly Asp

635 640 645

-40- Ser Gln Thr Gln Arg Ser Ala Ser Gly Ser Gly Ala Ser Ala Ala Asn

650 655 660

Ser Ala Thr Val Val Phe Gly Ala Lys Arg Gln Gln Leu Val Gln

665 670 675

(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 7:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 1808 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique) (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: N. meningitidis

(B) SOUCHE: IM2394

(ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: sig_peptide (B) EMPLACEMENT:l..60 (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: matpeptide

(B) EMPLACEMENT:61..1797

(ix) CARACTERISTIQUE:

(A) NOM/CLE: CDS

(B) EMPLACEMENT:1..1797

(ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: misc feature

(B) EMPLACEMENT:61..1035

(ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: misc _feature

(B) EMPLACEMENT:1036..1386

(ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: miscfeature

(B) EMPLACEMENT:1387..1797

(ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: misc_binding

(B) EMPLACEMENT:46..1050

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 7:

ATG AAC AAT CCA TTG GTA AAT CAG GCT GCT ATG GTG CTG CCT GTG TTT 48

Met Asn Asn Pro Leu Val Asn Gln Ala Ala Met Val Leu Pro Val Phe

-20 -15 -10 -5

TTG TTG AGT GCT TGT CTG GGT GGC GGC GGC AGT TTC GAT TTG GAC AGC 96 Leu Leu Ser Ala Cys Leu Gly Gly Gly Gly Ser Phe Asp Leu Asp Ser -41 -

1 5 10

GTG GAA ACC GTG CAA GAT ATG CAC TCC AAA CCT AAG TAT GAG GAT GAA 144

Val Glu Thr Val Gln Asp Met His Ser Lys Pro Lys Tyr Glu Asp Glu

20 25

AAA AGC CAG CCT GAA AGC CAA CAG GAT GTA TCG GAA AAC AGC GGC GCG 192

Lys Ser Gln Pro Glu Ser Gln Gln Asp Val Ser Glu Asn Ser Gly Ala

35 40

GCT TAT GGC TTT GCA GTA AAA CTA CCT CGC CGG AAT GCA CAT TTT AAT 240

Ala Tyr Gly Phe Ala Val Lys Leu Pro Arg Arg Asn Ala His Phe Asn

50 55 60

* CCT AAA TAT AAG GAA AAG CAC AAA CCA TTG GGT TCA ATG GAT TGG AAA 288

Pro Lys Tyr Lys Glu Lys His Lys Pro Leu Gly Ser Met Asp Trp Lys

70 75

AAA CTG CAA AGA GGA GAA CCA AAT AGT TTT AGT GAG AGG GAT GAA TTG 336

Lys Leu Gln Arg Gly Glu Pro Asn Ser Phe Ser Glu Arg Asp Glu Leu

85 90

GAA AAA AAA CGG GGT AGT TCT GAA CTT ATT GAA TCA AAA TGG GAA GAT 384

Glu Lys Lys Arg Gly Ser Ser Glu Leu Ile Glu Ser Lys Trp Glu Asp

100 105

GGG CAA AGT CGT GTA GTT GGT TAT ACA AAT TTC ACT TAT GTC CGT TCG 432

Gly Gln Ser Arg Val Val Gly Tyr Thr Asn Phe Thr Tyr Val Arg Ser

115 120

GGA TAT GTT TAC CTT AAT AAA AAT AAT ATT GAT ATT AAG AAT AAT ATA 480

Gly Tyr Val Tyr Leu Asn Lys Asn Asn Ile Asp Ile Lys Asn Asn Ile

130 135 140

GTT CTT TTT GGA CCT GAC GGA TAT CTT TAC TAT AAA GGG AAA GAA CCT 528

Val Leu Phe Gly Pro Asp Gly Tyr Leu Tyr Tyr Lys Gly Lys Glu Pro

150 155

TCC AAG GAG CTG CCA TCG GAA AAG ATA ACT TAT AAA GGT ACT TGG GAT 576

Ser Lys Glu Leu Pro Ser Glu Lys Ile Thr Tyr Lys Gly Thr Trp Asp

165 170

TAT GTT ACT GAT GCT ATG GAA AAA CAA AGG TTT GAA GGA TTG GGT AGT 624

Tyr Val Thr Asp Ala Met Glu Lys Gln Arg Phe Glu Gly Leu Gly Ser

180 185

GCA GCA GGA GGA GAT AAA TCG GGG GCG TTG TCT GCA TTA GAA GAA GGG 672

Ala Ala Gly Gly Asp Lys Ser Gly Ala Leu Ser Ala Leu Glu Glu Gly

195 200

GTA TTG CGT AAT CAG GCA GAG GCA TCA TCC GGT CAT ACC GAT TTT GGT 720

Val Leu Arg Asn Gln Ala Glu Ala Ser Ser Gly His Thr Asp Phe Gly

205 210 215 220

ATG ACT AGT GAG TTT GAG GTT GAT TTT TCT GAT AAA ACA ATA AAG GGC 768

Met Thr Ser Glu Phe Glu Val Asp Phe Ser Asp Lys Thr Ile Lys Gly

225 230 235

- 42 -

ACA CTT TAT CGT AAC AAC CGT ATT ACT CAA AAT AAT AGT GAA AAC AAA 816

Thr Leu Tyr Arg Asn Asn Arg Ile Thr Gln Asn Asn Ser Glu Asn Lys

240 245 250

CAA ATA AAA ACT ACG CGT TAC ACC ATT CAA GCA ACT CTT CAC GGC AAC 864

Gln Ile Lys Thr Thr Arg Tyr Thr Ile Gln Ala Thr Leu His Gly Asn

255 260 265

CGT TTC AAA GGT AAG GCG TTG GCG GCA GAT AAA GGT GCA ACA AAT GGA 912

Arg Phe Lys Gly Lys Ala Leu Ala Ala Asp Lys Gly Ala Thr Asn Gly

270 275 280

AGT CAT CCC TTT ATT TCC GAC TCC GAC AGT TTG GAA GGC GGA TTT TAC 960

Ser His Pro Phe Ile Ser Asp Ser Asp Ser Leu Glu Gly Gly Phe Tyr

285 290 295 300

GGG CCG AAA GGC GAG GAA CTT GCC GGT AAA TTC TTG AGC AAC GAC AAC 1008

Gly Pro Lys Gly Glu Glu Leu Ala Gly Lys Phe Leu Ser Asn Asp Asn

305 310 315

AAA GTT GCA GCG GTG TTT GGT GCG AAG CAG AAA GAT AAG AAG GAT GGG 1056

Lys Val Ala Ala Val Phe Gly Ala Lys Gln Lys Asp Lys Lys Asp Gly

320 325 330

GAA AAC GCG GCA GGG CCT GCA ACG GAA ACC GTG ATA GAT GCA TAC CGT 1104

Glu Asn Ala Ala Gly Pro Ala Thr Glu Thr Val Ile Asp Ala Tyr Arg

335 340 345

ATT ACC GGC GAG GAG TTT AAG AAA GAG CAA ATA GAC AGT TTT GGA GAT 1152

Ile Thr Gly Glu Glu Phe Lys Lys Glu Gln Ile Asp Ser Phe Gly Asp

350 355 360

GTG AAA AAG CTG CTG GTT GAC GGA GTG GAG CTT TCA CTG CTG CCG TCT 1200

Val Lys Lys Leu Leu Val Asp Gly Val Glu Leu Ser Leu Leu Pro Ser

365 370 375 380

GAG GGC AAT AAG GCG GCA TTT CAG CAC GAG ATT GAG CAA AAC GGC GTG 1248

Glu Gly Asn Lys Ala Ala Phe Gln His Glu Ile Glu Gln Asn Gly Val

385 390 395

AAG GCA ACG GTG TGT TGT TCC AAC TTG GAT TAC ATG AGT TTT GGG AAG 1296

Lys Ala Thr Val Cys Cys Ser Asn Leu Asp Tyr Met Ser Phe Gly Lys

400 405 410

CTG TCA AAA GAA AAT AAA GAC GAT ATG TTC CTG CAA GGT GTC CGC ACT 1344

Leu Ser Lys Glu Asn Lys Asp Asp Met Phe Leu Gln Gly Val Arg Thr

415 420 425

CCA GTA TCC GAT GTG GCG GCA AGG ACG GAG GCA AAC GCC AAA TAT CGC 1392

Pro Val Ser Asp Val Ala Ala Arg Thr Glu Ala Asn Ala Lys Tyr Arg

430 435 440

GGT ACT TGG TAC GGA TAT ATT GCC AAC GGC ACA AGC TGG AGC GGC GAA 1440

Gly Thr Trp Tyr Gly Tyr Ile Ala Asn Gly Thr Ser Trp Ser Gly Glu

445 450 455 460

-43-

GCC TCC AAT CAG GAA GGT GGT AAT AGG GCA GAG TTT GAC GTG GAT TTT 1488

Ala Ser Asn Gln Glu Gly Gly Asn Arg Ala Glu Phe Asp Val Asp Phe

465 470 475

TCC ACT AAA AAA ATC AGT GGC ACA CTG ACG GCA AAA GAC CGT ACG TCT 1536

Ser Thr Lys Lys Ile Ser Gly Thr Leu Thr Ala Lys Asp Arg Thr Ser

480 485 490

CCT GCG TTT ACT ATT ACT GCC ATG ATT AAG GAC AAC GGT TTT TCA GGT 1584

Pro Ala Phe Thr Ile Thr Ala Met Ile Lys Asp Asn Gly Phe Ser Gly

495 500 505

GTG GCG AAA ACC GGT GAA AAC GGC TTT GCG CTG GAT CCG CAA AAT ACC 1632

Val Ala Lys Thr Gly Glu Asn Gly Phe Ala Leu Asp Pro Gln Asn Thr

510 515 520

GGA AAT TCC CAC TAT ACG CAT ATT GAA GCC ACT GTA TCC GGC GGT TTC 1680

Gly Asn Ser His Tyr Thr His Ile Glu Ala Thr Val Ser Gly Gly Phe

525 530 535 540

TAC GGC AAA AAC GCC ATC GAG ATG GGC GGA TCG TTC TCA TTT CCG GGA 1728

Tyr Gly Lys Asn Ala Ile Glu Met Gly Gly Ser Phe Ser Phe Pro Gly

545 550 555

AAT GCA CCA GAG GGA AAA CAA GAA AAA GCA TCG GTG GTA TTC GGT GCG 1776

Asn Ala Pro Glu Gly Lys Gln Glu Lys Ala Ser Val Val Phe Gly Ala

560 565 570

AAA CGC CAA CAG CTT GTG CAA TAAGCACGGC T 1808

Lys Arg Gln Gln Leu Val Gln

(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 8:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 599 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 8:

Met Asn Asn Pro Leu Val Asn Gln Ala Ala Met Val Leu Pro Val Phe

-20 -15 -10 -5

Leu Leu Ser Ala Cys Leu Gly Gly Gly Gly Ser Phe Asp Leu Asp Ser

1 5 10

Val Glu Thr Val Gln Asp Met His Ser Lys Pro Lys Tyr Glu Asp Glu

20 25

Lys Ser Gln Pro Glu Ser Gln Gln Asp Val Ser Glu Asn Ser Gly Ala

35 40

Ala Tyr Gly Phe Ala Val Lys Leu Pro Arg Arg Asn Ala His Phe Asn

50 55 60

- 44 -

Pro Lys Tyr Lys Glu Lys His Lys Pro Leu Gly Ser Met Asp Trp Lys

70 75

Lys Leu Gln Arg Gly Glu Pro Asn Ser Phe Ser Glu Arg Asp Glu Leu

85 90

Glu Lys Lys Arg Gly Ser Ser Glu Leu Ile Glu Ser Lys Trp Glu Asp

100 105

Gly Gln Ser Arg Val Val Gly Tyr Thr Asn Phe Thr Tyr Val Arg Ser

115 120

Gly Tyr Val Tyr Leu Asn Lys Asn Asn Ile Asp Ile Lys Asn Asn Ile

130 135 140

Val Leu Phe Gly Pro Asp Gly Tyr Leu Tyr Tyr Lys Gly Lys Glu Pro

150 155

Ser Lys Glu Leu Pro Ser Glu Lys Ile Thr Tyr Lys Gly Thr Trp Asp

165 170

Tyr Val Thr Asp Ala Met Glu Lys Gln Arg Phe Glu Gly Leu Gly Ser

180 185

Ala Ala Gly Gly Asp Lys Ser Gly Ala Leu Ser Ala Leu Glu Glu Gly

195 200

Val Leu Arg Asn Gln Ala Glu Ala Ser Ser Gly His Thr Asp Phe Gly

205 210 215 220

Met Thr Ser Glu Phe Glu Val Asp Phe Ser Asp Lys Thr Ile Lys Gly

225 230 235

Thr Leu Tyr Arg Asn Asn Arg Ile Thr Gln Asn Asn Ser Glu Asn Lys

240 245 250

Gln Ile Lys Thr Thr Arg Tyr Thr Ile Gln Ala Thr Leu His Gly Asn

255 260 265

Arg Phe Lys Gly Lys Ala Leu Ala Ala Asp Lys Gly Ala Thr Asn Gly

270 275 280

Ser His Pro Phe Ile Ser Asp Ser Asp Ser Leu Glu Gly Gly Phe Tyr

285 290 295 300

Gly Pro Lys Gly Glu Glu Leu Ala Gly Lys Phe Leu Ser Asn Asp Asn

305 310 315

Lys Val Ala Ala Val Phe Gly Ala Lys Gln Lys Asp Lys Lys Asp Gly

320 325 330

Glu Asn Ala Ala Gly Pro Ala Thr Glu Thr Val Ile Asp Ala Tyr Arg

335 340 345

Ile Thr Gly Glu Glu Phe Lys Lys Glu Gln Ile Asp Ser Phe Gly Asp

350 355 360

- 45 -

Val Lys Lys Leu Leu Val Asp Gly Val Glu Leu Ser Leu Leu Pro Ser

365 370 375 380

Glu Gly Asn Lys Ala Ala Phe Gln His Glu Ile Glu Gln Asn Gly Val

385 390 395

Lys Ala Thr Val Cys Cys Ser Asn Leu Asp Tyr Met Ser Phe Gly Lys

400 405 410

Leu Ser Lys Glu Asn Lys Asp Asp Met Phe Leu Gln Gly Val Arg Thr

415 420 425

Pro Val Ser Asp Val Ala Ala Arg Thr Glu Ala Asn Ala Lys Tyr Arg

430 435 440

Gly Thr Trp Tyr Gly Tyr Ile Ala Asn Gly Thr Ser Trp Ser Gly Glu

445 450 455 460

Ala Ser Asn Gln Glu Gly Gly Asn Arg Ala Glu Phe Asp Val Asp Phe

465 470 475

Ser Thr Lys Lys Ile Ser Gly Thr Leu Thr Ala Lys Asp Arg Thr Ser

480 485 490

Pro Ala Phe Thr Ile Thr Ala Met Ile Lys Asp Asn Gly Phe Ser Gly

495 500 505

Val Ala Lys Thr Gly Glu Asn Gly Phe Ala Leu Asp Pro Gln Asn Thr

510 515 520

Gly Asn Ser His Tyr Thr His Ile Glu Ala Thr Val Ser Gly Gly Phe

525 530 535 540

Tyr Gly Lys Asn Ala Ile Glu Met Gly Gly Ser Phe Ser Phe Pro Gly

545 550 555

Asn Ala Pro Glu Gly Lys Gln Glu Lys Ala Ser Val Val Phe Gly Ala

560 565 570

Lys Arg Gln Gln Leu Val Gln

(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 9:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 19 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 9:

- 46 -

TGCTATGGTG CTGCCTGTG 19

(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 10:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 19 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 10:

TGCCGTCGAA GCCTTATTC 19

(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 11:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 25 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 11:

AAGACCAAGG CGGATACGGT TTTGC 25

(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 12:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 26 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 12:

GAAGACGAGT CGGAAACAAA GGGATG 26

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Claims (18)

Revendications

1. Une composition pharmaceutique comprenant (i) la sous-unité de moindre poids moléculaire (Tbp2) du récepteur de la transferrine humaine (RTH) d'une souche de Neisseria meningitidis faisant partie du complexe ET-5 et possédant une séquence d'ADN codant pour Tbp2, (a) qui contient 2 sites de restriction AvalI, 3 sites de restriction HilnclI, aucun site de restriction VspI et aucun site de restriction XhoI ou, de préférence et, (b) à partir de laquelle il est possible de générer par PCR

(polymérase chain reaction) à l'aide des amorces P3 de formule 5'-

AAGACCAAGGCGGATACGGTTTTGC-3' et P4 de formule 5'-

GAAGACGAGTCGGAAACAAAGGGATG-3', un polynucléotide de 765 à 775 nucléotides, de préférence de 772 nucléotides (souche du groupe BZ83); ou (ii) un

fragment de ladite Tbp2.

2. Une composition pharmaceutique selon la revendication 1, dans laquelle la Tbp2 provient d'une souche de N. meningitidis possédant une séquence d'ADN codant pour Tbp2 qui présente un profil de restriction par AvaII constitué de 3 fragments de 1184,477 et 415 nt et un profil de restriction par HinclI constitué de 4 fragments de

1155, 385, 276, et 257 nt (souche du groupe BZ83).

3. Une composition pharmaceutique selon la revendication 2, dans laquelle la Tbp2 possède la séquence d'acides aminés telle que montrée dans le SEQ ID NO 2

(souche BZ83).

4. Une composition pharmaceutique selon l'une des revendications 1 à 3, qui comprend

en outre (i) une première Tbp2 additionnelle provenant d'une souche de N. newningitidis faisant partie du complexe ET-S et possédant une séquence d'ADN codant pour Tbp2 (a) qui ne contient pas de sites de restriction AvalI et XhoI ou, de préférence et, (b) à partir de laquelle il est possible de générer par PCR à l'aide des amorces P3 de formule 5'AAGACCAAGGCGGATACGGTTTTGC-3' et P4 de formule 5'GAAGACGAGTCGGAAACAAAGGGATG-3', un polynucléotide de 840 à 850 nucléotides, de préférence de 844 (souche du groupe M982); ou (ii) un

fragment de ladite première Tbp2 additionnelle.

5. Une composition pharmaceutique selon la revendication 4, dans laquelle la première Tbp2 additionnelle provient d'une souche de N. meningitidis possédant une séquence d'ADN codant pour Tbp2 qui contient 1 site de restriction VspI et 3 sites de

restriction HincI (souche du groupe M982).

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6. Une composition pharmaceutique selon la revendication 5, dans laquelle la Tbp2 provient d'une souche de N. meningitidis possédant une séquence d'ADN codant pour Tbp2 qui présente un profil de restriction par VspI constitué de 2 fragments de 1311 et 769 nt et un profil de restriction par HincII constitué de 4 fragments de

1229, 319, 281 et 259 nt (souche du groupe M982).

7. Une composition pharmaceutique selon l'une des revendications I à 6, qui comprend

en outre (i) une deuxième Tbp2 additionnelle provenant d'une souche de N. nieningitidis faisant partie du complexe ET-5 et possédant une séquence d'ADN codant pour Tbp2 (a) qui contient I site de restriction AvaII, 2 sites de restriction V.sp)I, I site de restriction XhoI et 2 sites de restriction Hil;cII ou, de préférence et, (b) à partir de laquelle il est possible de générer par PCR à l'aide des amorces P3 de

formule 5'-AAGACCAAGGCGGATACGGTTTTGC-3' et P4 de formule 5'-

GAAGACGAGTCGGAAACAAAGGGATG-3', un polynucléotide de 800 à 810 nucléotides, de préférence de 805 (souche de groupe 8680) ou (ii) un fragment de

ladite deuxième Tbp2 additionnelle.

8. Une composition pharmaceutique selon la revendication 7, dans laquelle la deuxième Tbp2 additionnelle provient d'une souche de N. mineningilidis possédant une séquence d'ADN codant pour Tbp2 qui présente un profil de restriction par AvacII constitué de 2 fragments de 1507 et 445 nt, un profil de restriction par V.JKl constitué de 3 fragments de 1298, 470 et 266 nt, un profil de restriction par Xhol constitué de 2 fragments de 1551 et 483 nt et un profil de restriction par HincII

constitué de 3 fragments de 1191, 527 et 316 nt (souche de groupe 8680).

9. Une composition pharmaceutique selon la revendication 8, dans laquelle la deuxième Tbp2 additionnelle possède la séquence d'acides aminés telle que montrée

dans le SEQ ID NO: 6 (souche 8680).

10. Une composition pharmaceutique selon l'une des revendications I à 9, qui comprend

en outre (i) une Tbp2 possédant une séquence d'acides aminés dont le degré d'homologie avec la séquence montrée dans le SEQ ID NO 4 est d'au moins 85 %, de préférence d'au moins 90 % (souche de type M982); ou (ii) un fragment de

ladite Tbp2.

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11. Une composition pharmaceutique selon la revendication 10, dans laquelle la Tbp2 possède la séquence d'acides aminés telle que montrée dans le SEQ ID NO: 4

(souche M982).

12. Une composition pharmaceutique selon l'une des revendications 1 à 11, qui

comprend en outre (i) une Tbp2 possédant une séquence d'acides aminés dont le degré d'homologie avec la séquence montrée dans le SEQ ID NO: 8 est d'au moins

% (souche de type B16B6); ou (ii) un fragment de ladite Tbp2.

13. Une composition pharmaceutique selon l'une des revendications 1 à 12, dans

laquelle la Tbp2 telle que définie dans l'une des revendications I à 3, la première

Tbp2 additionnelle telle que définie dans l'une des revendications 4 à 6, la deuxième

Tbp2 additionnelle telle que définie dans l'une des revendications 7 à 9, la Tbp2

telle que définie dans la revendication 10 ou 11, ou la Tbp2 telle que définie dans la revendication 12 est associée à la sous-unité de haut poids moléculaire (Tbpl) qui

lui correspond, de manière à former un RTH.

14. Une composition pharmaceutique qui comprend une molécule d'ADN codant pour

une Tbp2 telle que définie dans l'une des revendications 1 à 3.

15. Une composition pharmaceutique selon la revendication 14, qui comprend en outre une première molécule d'ADN additionnelle codant pour une Tbp2 telle que définie

dans l'une des revendications 4 à 6.

16. Une composition pharmaceutique selon la revendication 14 ou 15, qui comprend en outre une deuxième molécule d'ADN additionnelle codant pour une Tbp2 telle que

définie dans l'une des revendications 7 à 9.

17. Une composition pharmaceutique selon l'une des revendications 14 à 16, qui

comprend en outre une molécule d'ADN codant pour une Tbp2 telle que définie

dans la revendication 10 ou 1 1.

18. Une composition pharmaceutique selon l'une des revendications 14 à 17, qui

comprend en outre une molécule d'ADN codant pour une Tbp2 telle que définie

dans la revendication 12.