FR2720408A1 - Fragments Tbp2 de Neisseria meningitidis. - Google Patents

Abstract

L'invention a pour objet un polypeptide ayant une séquence d'acides aminés qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 du récepteur transferrine d'une souche de Neisseria meningitidis de type IM2169 ou IM2394 dont les premier, deuxième et troisième domaines sont définis par alignement au maximum d'homologie, sur la séquence de la sous-unité Tbp2 de la souche de référence respective, IM2169 ou IM2394, notamment par délétion totale ou partielle d'au moins un domaine de ladite sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou IM2394, à condition que le premier et deuxième domaine ne soient pas simultanément et totalement délétés.

Description

- 1 - 2720408

La présente invention a pour objet des polypeptides dérivés de la sousunité Tbp2 du récepteur transferrine de Neisseria meningitidis, leur utilisation à titre thérapeutique

notamment vaccinal, ainsi que les fragments d'ADN codant pour ces polypeptides.

D'une manière générale, les méningites sont soit d'origine virale, soit d'origine bactérienne. Les bactéries principalement responsables sont: N. meningitidis et Haemophilus influenzae, respectivement impliquées dans environ 40 et 50 % des cas de

méningites bactériennes.

On dénombre en France, environ 600 à 800 cas par an de méningites à N.

meningitidis. Aux Etats-Unis, le nombre de cas s'élève à environ 2 500 à 3 000 par an.

L'espèce N. meningitidis est subdivisée en sérogroupes selon la nature des polysaccharides capsulaires. Bien qu'il existe une douzaine de sérogroupes, 90 % des cas de méningites sont attribuables à 3 sérogroupes: A, B et C. Il existe des vaccins efficaces à base de polysaccharides capsulaires pour prévenir les méningites à N. meningitidis sérogroupes A et C. Ces polysaccharides tels quels ne sont que peu ou pas immunogéniques chez les enfants de moins de 2 ans et ninduisent pas de mémoire immunitaire. Toutefois, ces inconvénients peuvent être surmontés en conjuguant

ces polysaccharides à une protéine porteuse.

Par contre, le polysaccharide de N. meningitidis groupe B n'est pas ou peu immunogène chez l'homme, qu'il soit sous forme conjuguée ou non. Ainsi, il apparait hautement souhaitable de rechercher un vaccin à l'encontre des méningites induites par N.

meningitidis notamment du sérogroupe B autre qu'un vaccin à base de polysaccharide.

A cette fin, différentes protéines de la membrane externe de N. meningitidis ont déjà

été proposées. Il s'agit en particulier du récepteur membranaire de la transferrine humaine.

D'une manière générale, la grande majorité des bactéries ont besoin de fer pour leur croissance et elles ont développé des systèmes spécifiques d'acquisition de ce métal. En ce qui concerne notamment N. meningitidis qui est un pathogène strict de l'homme, le fer ne peut être prélevé qu'à partir de protéines humaines de transport du fer telles que la transferrine et la lactoferrine puisque la quantité de fer sous forme libre est négligeable chez

-2- 2720408

l'homme (de rordre de 10-18 M), en tout cas insuffisante pour permettre la croissance bactérienne. Ainsi, N. meningitidis possède un récepteur de la transferrine humaine et un récepteur de la lactoferrine humaine qui lui permettent de fixer ces protéines chélatrices du

fer et de capter par la suite le fer nécessaire à sa croissance.

Le récepteur de la transferrine de la souche N. meningitidis B16B6 a été purifié par Schryvers et al (WO 90/12591) à partir d'un extrait membranaire. Cette protéine telle que purifiée apparait essentiellement constituée de 2 types de polypeptides: un polypeptide d'un poids moléculaire apparent élevé de 100 kD et un polypeptide d'un poids moléculaire apparent moindre d'environ 70 kD, telles que révélés après électrophorèse sur gel de de

polyacrylamide en présence de SDS.

Le produit de la purification notamment mise en oeuvre par Schryvers est par définition arbitraire et pour les besoins de la présente demande de brevet, appelé récepteur de la transferrine et les polypeptides le constituant, des sous-unités. Dans la suite du texte, les sous-unités de poids moléculaire élevé et de poids moléculaire moindre sont

respectivement appelées Tbp 1 et Tbp2.

D'autre part, depuis les travaux pionniers de Schryvers et aI, on a découvert qu'il existait en fait au moins 2 types de souches qui different par la constitution de leurs récepteurs de la transferrine respectifs. Ceci a été mis en évidence en étudiant des extraits membranaires de plusieurs dizaines de souches de N. meningitidis d'origines variées. Ces extraits membranaires ont tout d'abord été soumis à une électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de SDS, puis électrotransférés sur feuilles de nitrocellulose. Ces feuilles de nitrocellulose ont été incubées: a) en présence d'un antisérum de lapin dirigé contre le récepteur de la transferrine purifié à partir de la souche N. meningitidis B16B6, aussi appelée IM2394; b) en présence d'un antisérum de lapin dirigé contre le récepteur de la transferrine purifié à partir de la souche N. meningitidis M982, aussi appelée IM2169; ou

c) en présence de la transferrine humaine conjuguée à la peroxydase.

-3 -2720408

En ce qui concerne a) et b), la reconnaissance des sous-unités du récepteur de la transferrine est révélée par addition d'un anticorps anti-immunoglobulines de lapin couplé à

la peroxydase, puis par addition du substrat de cette enzyme.

Les tableaux I et II ci-dessous indiquent le profil de certaines souches représentatives tel qu'il apparait sur gel de polyacrylamide à 7,5 % après électrophorèse en présence de SDS; les bandes sont caractérisées par leur poids moléculaires apparents exprimés en Idlodaltons (kD): Souches 2394 (B; 2a; PLI.2:L2,3) 2234 (Y; nd) Tableau I 2228 (B; nd) 2154 (C; nd) 550 (C; 2a:) 2170 (B; 2a:P.1:L3) 2448 (B; nd) 179 (C; 2a:PI.2) Détection avec 93 93 99 l'antisérum anti-récepteur 2394 68 69 69 Détection avec l'antisérum 93 93 99 anti-récepteur 2169 Détection avec la transferrine 68 69 69 peroxydase N.B.: Entre parenthèses sont indiqués dans l'ordre le sérogroupe, le sérotype, le sous-type

et lrnimunotype.

Co N d/ountunM.,l ao dc4-snos ol 'ad4oJPs À1 'odnoJoJsl ospJol sup s9nb!pu luos sasgqipuaed onug asepKxoJad S8 S8 L8 88 6L 18 ú8 S8 LS8 oU!mOJSUau v! OgAi UO.oaCj S8 ú8 Lú 88 6L 18 Eú8 8 Lú 691 z inmdai -puBte tulSIlUe,l t ú6 t6 t6 96 86 86 86 86 96 OaAB Uofl:alQ t,6túZ mandaoa? ú6 t,6 t'6 96 86 86 86 86 96 -BflUe ulJSpuS l AJa UOflM9Q (z'Il:qZ:R) (pu:g) (pu:v) (9'Id:61:g) (6'Id:t,: ) (9l'Id:SI:D) (pu:g) (pu:g) 6'Id:6:g) L98 6CtZ IS61 9L8 1001 Zú1 t,091 0001 691Z nlq saoplnoS Les résultats répertoriés dans les 2 premières lignes des tableaux montrent qu'il existe 2 types de souches: Le premier type (Tableau I) correspond à des souches qui possèdent un récepteur dont les 2 sous-unités dans les conditions expérimentales utilisées, sont reconnues par lantisérum anti-récepteur IM2394 tandis que seule la sous-unité de haut poids moléculaire

est reconnue par rantisérum anti-récepteur IM2169.

Le second type (Tableau H) correspond à des souches qui possèdent un récepteur dont les 2 sous-unités dans les conditions expérimentales utilisées, sont reconnues par l'rantisérum anti-récepteur IM2169 tandis que seule la sous-unité de haut poids moléculaire

est reconnue par rantisérum anti-récepteur IM2394.

En conséquence, il existe une diversité antigénique au niveau de la sousunité de moindre poids moléculaire. Cette diversité est toutefois restreinte puisqu'elle se résout en 2 grands types, contrairement à ce qui est suggéré par Griffiths et aI, FEMS Microbiol. Lett

(1990) 69: 31.

Conformément à cela, il sera fait référence dans la suite du texte à des souches de

type IM2169 ou de type IM2394.

Outre les souches cités dans le tableau IL des souches de type IM2169 sont par exemples les souches S3032 (12, P 1.12.16), 6940 (19, P 1.6), M978 (8, P 1.1, 7), 2223 (B : nd), 1610 (B: nd), C708 (A: 4, P 1.7), M981 (B: 4), aussi appelée 891, et 2996 (B: 2b, P 1.2). Le déposant a reçu, par envoi gracieux, les souches S3032, M978 et M981 du Dr. J. Poolmnan (RIVM, Bilthoven, Pays-Bas), et la souche C708 du Dr. Achtman (Max Plank

Institute, Berlin, Allemagne).

La souche IM2154 (sérogroupe C) est citée à titre d'exemple comme étant de type

IM2394.

En vertu des précédentes constatations, on pouvait supposer qu'un vaccin efficace à rencontre de toutes les infections à N. meningitidis pourrait être constitué de manière suffisante, de la sous-unité de haut poids moléculaire, quelle que soit la souche d'origine du récepteur, puisque cette dernière est reconnue par les 2 types d'antisérums. Toutefois, il semble que cela ne puisse être le cas dans la mesure o la sous-unité de haut poids

- 6 - 2720408

moléculaire ne serait pas capable d'induire la production d'anticorps de type neutralisant.

Seule la plus petite des 2 sous-unités du récepteur (Tbp2) serait capable de remplir cette fonction. Les séquences en acides aminés des sous-unités Tbp2 des souches IM2169 et 1M2394 ont été divulguées dans la demande de brevet EPA 586 266 (publiée le 9 Mars I 1994) ainsi que les fragments d'ADN correspondants. Ces séquences sont reprises dans les

SEQ ID NO 1 à 4 de la présente demande.

Dans les SEQ ID NO 5 à 10 sont présentées les séquences des sous-unités Tbp2 des

souches de type IM2169, soient les souches M978, 6940 et S3032.

On indique de plus que la séquence de la sous-unité Tbp2 IM2154 (type IM2394) différe par deux acides aminés de la séquence de la sous-unité Tbp2 IM2394, en positions

306et510.

On a maintenant trouvé qu'une sous-unité Tbp2 quelque soit la souche d'origine, présentait en termes de structures, trois domaines principaux associés pour au moins run d'entre eux à des propriétés particulières. Par définition, les domaines de Tbp2 IM2169 et Tbp2 M2394 ont été fixés comme le montre le tableau ci-après, en indiquant la position des acides aminés, bornes incluses des différents domaines, et par référence à la numérotation

apparaissant dans les SEQ ID NO I et 3.

Tbp2 IM2169 Tbp2 IM2394 Domaine N-terminal ou premier domaine 1-345 1-325 Domaine charnière ou deuxième domaine 346-543 326-442 Domaine C- terminal ou troisième domaine 544-691 443-579 Cette définition s'applique de même à toutes les Tbp2 de type IM2169 ou IM2394, après alignement d'une séquence type IM2169 ou IM2394 sur la séquence de référence, au maximum d'homologie. Ainsi, à titre d'exemple et par référence à la Figure 1, on indique la

position des domaines de la sous-unité Tbp2 de M978 comme suit: premier domaine (1 -

346), deuxième domaine (347 - 557) et troisième domaine (558 - 705).

-7- 2720408

D'autre part, on a aussi trouvé que le domaine N-terminal ou premier domaine et/ou le domaine charnière ou deuxième domaine pourrait être nécessaire et suffisanmt, en vue d'induire un effet vaccinal chez les humains; en conséquence de quoi, il ne serait pas indispensable d'utiliser une Tbp2 sous une forme complète. On a en particulier trouvé que le premier domaine contenait dans sa quasi intégralité le site de liaison à la transfrrine, se trouvait donc très vraisemblablement exposé vers rextérieur et par conséquent constituait

un élément de choix à des fins vaccinales.

Enfin, on a trouvé que certaines régions du deuxième domaine des Tbp2 de type IM2169 étaient assez généralement variables et immunodominantes. Deux approches sont donc possibles, en vue d'un vaccin: soit on considère que les épitopes immunodominants peuvent masquer d'autres épitopes d'intérêt vaccinal et par conséquent, on les délète, soit on

se sert de cette variabilité, pour ne conserver que ces régions dans un vaccin.

C'est pourquoi rinvention fournit un polypeptide ayant une séquence en acides aminés qui dérive de celle d'une sous-unité Tbp2 du récepteur transferrine d'une souche de N. meningitidis de type IM2169 ou IM2394 dont le premier, deuxième et troisième

domaines sont définis par alignement au maximum d'homologie, sur la séquence de la sous-

unité Tbp2 de la souche de référence respective, IM2169 ou IM2394; notamment par délétion totale ou partielle d'au moins un domaine de ladite sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou IM2394 à condition que le premier et deuxième domaines ne soient pas

simultanément et totalement délétés.

Par 'séquence qui dérive d'une autre séquence' on entend bien évidemment une

séquence issue par processus intellectuel de cette autre séquence.

De manière plus particulière, un polypeptide selon l'invention possède une séquence d'acides aminés qui dérive d'une sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou I1M2394: (i) notamment par délétion totale ou partielle d'au moins un domaine de ladite sous-unité Tbp2 sélectionné parmi les deuxième et troisième domaines; de préférence par délétion totale ou partielle du troisième domaine ou des deuxième et troisième domaines; (ii) notamment par délétion totale des premier et troisième domaines, ou

- 8- '2720408

(iii) notamment par délétion intégrale du troisième domaine et par délétion partielle du premier domaine, optionellement par délétion partielle du

deuxième domaine.

D'une manière avantageuse, un polypeptide selon l'invention présente une délétion partielle, quasi totale ou totale du troisième domaine, de préférence totale. Dans ce cas lài, le premier ainsi que le deuxième domaine peuvent être maintenus dans leur intégralité,

partiellement ou totalement délété; ceci indépandemment l'un de r'autre.

Sont possibles les combinaisons suivantes (sachant que les premier, deuxième et troisième domaines dans leur intégralité sont respectivement représentés par 1, 2 et 3, et que O et A signifient de manière respective, partiellement et totalement délété):

1,2,A3; 1,02,A3;1,A2,A3;

01,2,A3; 01, 02,A3;01,A2,A3;

Ai, 2, A3; Al, 02,A3;

1, 2, 03; 1, 02, 03; 1, A2, 03;

01,2,03;01,02,03;01,A2,03;

AI, 2, 03; Al, 02, 03; Est aussi d'intérêt, un polypeptide selon l'invention dérivé d'une sous-unité Tbp2 de type IM2169 par délétion partielle du deuxième domaine, qui comporte dans leur intégralité ou quasi intégralité le premier et troisième domaines; soit la combinaison 1, 02, 3. (Par domaine maintenu dans sa quasi-intégralité" on entend ici et dans la suite du texte, un domaine modifié en un très faible nombre de positions, environ 5 maximml.) Un polypeptide selon l'invention peut aussi répondre à la combinaison 01, 02, 3, la délétion partielle du premier domaine portant avantageusement sur la région homologue de celle de Tbp2 IM2169 allant de l'acide aminé en position 1 i rl'acide aminé approxmativement en

position 40.

Lorsqu'un polypeptide selon l'invention dérive notamment par délation partielle du deuxième domaine d'une sous-unité Tbp2 de type IM2169, cette délétion partielle porte avantageusement sur une ou des régions du deuxième domaine qui est (sont) r(les) homologue(s) des régions de la séquence IM2169 allant:

- 9- 2720408

(i) de l'acide aminé en position 362 à l'acide aminé en position 379; (ii) de racide aminé en position 418 à l'acide aminé en position 444; (iii) de l'acide aminé en position 465 à l'acide aminé en position 481; et

(iiv) de l'acide aminé en position 46500 à r'acide aminé en position 524810.; et0.

(iv) de l'acide aminé en position 500 t l'acide aminé en position 520.

De préférence, la délétion partielle porte simultanément sur les quatre régions (i) à

(iv) sus-décrites.

Lorsqu'un polypeptide selon l'invention dérive notamment par délétion intégrale du troisième domaine et délétion quasi intégrale du deuxième domaine d'une sou t Tbp2 de type 1M2169 et comporte l'intégralité du premier domaine ou dérive en outre par délétion de la partie N-terminale du premier domaine, la délétion quasi intégrale du deuxième domaine s'étend sur la région qui: - dans le cas d'un polypeptide dérivé d'une sous-unité Tbp2 de type MI2169, est l'homologue de la région du deuxième domaine de la sous-unité Tbp2 !M2169 allant de l'acide aminé dans l'une des positions 346 à 361 ià racide aminé en position 543; - dans le cas d'un polypeptide dérivé d'une sous-unité Tbp2 de type I2394, est l'homologue de la région du deuxième domaine de la sous-unité Tbp2 IM2394 allant de l'acide aminé dans l'une des positions 326 ià 341 à racide

aminé en position 442.

Lorsqu'un polypeptide selon l'invention dérive notamment par délétion partielle du premier domaine d'une sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou IM2394, cette délétion partielle porte avantageusement sur tout ou partie de la région: (i) qui est rhomologue de la région du premier domaine de ladite sousunité Tbp2 de type IM2169 allant de racide aminé en position 1 i racide aminé en position 281; ou

- 10O- 2720408

(ii) qui est l'homologue de la région du premier domaine de ladite sousunité Tbp2 de type IM2394 allant de r'acide aminé en position 1 à l'acide aminé en

position 266.

A titre d'exemple de ce qui précède, on cite une délétion d'intérêt portant sur la région: (i) qui est lhomologue de la région du premier domaine de hladite sous-unité Tbp2 de type IM2169 allant de r'acide aminé en position I à racide aminé approximativement en position 40; ou (ii) qui est l'homologue de la région du premier domaine de ladite sous-unité Tbp2 de type IM2394 allant de l'acide aminé en position 1 à r'acide aminé

approximativement en position 45.

La séquence de type IM2169 ou 1M2394 à partir de laquelle est dérivée celle d'un polypeptide selon rinvention présente un degré d'homologie avec la séquence de référence respective, IM2169 ou IM2394, avantageusement d'au moins 75%/, de préférence d'au

moins 80%., de manière plus particulièrement préférée d'au moins 90 /..

Selon un mode de réalisation tout particulièrement préféré, un polypeptide selon rnvention possède une séquence dérivée de celle de la sous-unité Tbp2 M2169 ou

M2394.

Le degré d'homologie peut être aisément calculé en alignant les séquences de manière à obtenir le degré maximal d'homologie; pour ce faire, il peut être nécessaire d'introduire artificiellement des emplacements vacants, comme cela est illustré dans les Figures 1 à 4. Une fois que l'alignement optimal est réalisé, le degré d'homologie est établi en comptabilisant toutes les positions dans lesquelles les acides aminés des deux séquences

se retrouvent à l'identique, par rapport au nombre total de positions.

Il serait fastidieux de décrire des séquences homologues autrement que de manière générique, en raison du trop grand nombre de combinaisons. L'homme du métier connaît toutefois les règles générales qui permettent de remplacer un acide aminé par un autre sans

abolir la fonction biologique ou immunologique d'une protéine.

- 11 - 2720408

A titre d'exemple préféré, on cite un polypeptide selon l'invention dont la séquence possède au moins 75%, de manière avantageuse au moins 80%, de préférence au moins %!., de manière tout à fait préférée 100% d'homologie avec: (i) la séquence telle que montrée dans lID SEQ NO 1, de l'acide aminé en position I à l'acide aminé en position 345; (i) la séquence telle que montrée dans lID SEQ NO 3, de racide aminé en position 1 à l'acide aminé en position 325 ou 442; (iii) la séquence telle que montrée dans llD SEQ NO 1, de r'acide aminé en

position 1 à racide aminé en position 691 ou 543, délétée des régions 362-

379, 418-444, 465-481 et 500-520; (iv) la séquence telle que montrée dans llD SEQ NO 1, de racide aminé en

position 346 à racide aminé en position 543.

Des polypeptides répondant à la définition donnée au paragraphe précédent sont illustrés comme suit: (i) Un polypeptide selon l'invention dont la séquence est substantiellement telle que montrée dans IID SEQ NO 1, 5, 7 ou 9, de racide aminé en position 1 à racide aminé en position 350, 351, 354 ou 358 respectivement; (ii) Un polypeptide selon rinvention dont la séquence est substantiellement telle que montrée dans l'ID SEQ NO 3 de racide aminé en position I à racide aminé en position 330; (iii) Un polypeptide selon l'invention dont la séquence est substantiellement telle que montrée dans: - llD SEQ NO 1, de l'acide aminé en position I à racide aminé en position 691, délétée des régions 362-379, 418-444, 465-481 et 500-520; - llD SEQ NO 5, de l'acide aminé en position I à l'acide aminé en position 705, délétée des régions 365-382, 421-453, 474-495 et 514-534;

-12- 2720408

- I'D SEQ NO 7, de l'acide aminé en position I à l'acide aminé en position 693, délétée des régions 366-383, 422-448, 469-485 et 504-524; ou - lID SEQ NO 9, de l'acide aminé en position 1 à l'acide aminé en position 699, délétée des régions 372-389, 428454, 475- 491 et 510-529; et Qiv) Un polypeptide selon l'invention dont la séquence est substaniellement telle que montrée dans: - lilD SEQ NO 1, de l'acide aminé en position 346 à l'acide aminé men position 543, - lilD SEQ NO 5, de l'acide aminé en position 347 à l'acide aminé en position 557, - 'IlD SEQ NO 7, de l'acide aminé en position 350 à r'acide aminé en position 557, ou - I'ID SEQ NO 9, de l'acide aminé en position 354 à l'acide aminé en position 551, Des polypeptides particuliers répondant aux définitions données aux points (i) à i(vw)

sont décrits dans les exemples qui suivent.

Un polypeptide selon l'invention possède une séquence d'acide aminés qui comprend au moins 10, avantageusement au moins 20, de préférence au moins 50, de manière tout à

fait préférée au moins 100 acides aminés.

Bien évidemment, un polypeptide selon l'invention peut aussi comprendre de manière additionnelle, une séquence d'acides aminés qui ne présente pas d'homologie avec les séquences des sous-unités Tbp2 des souches IM2169 et IM2394; séquences qui sont montrées dans les ID SEQ NO 1 et 3 de l'acide aminé en position I à racide aminé en

position C-terminale.

-13- 2720408

D'une manière générale, une séquence additionnelle peut être celle de tout autre

polypeptide à l'exclusion de Tbp2.

Par exemple, une séquence additionnelle peut être celle d'un peptide signal localisée en position N-terminale d'un polypeptide selon l'invention. Des exemples de séquence signal sont montrés dans les ID SEQ NO 1 à 4. D'autre part, on indique qu'une séquence signal hétérologue appropriée peut être une séquence signal d'un gêne codant pour une lipoprotéine. L'invention a aussi pour objet: (i) un fragment d'ADN isolé codant pour un polypeptide selon linvention; ( i) une cassette d'expression qui comprend au moins un fragment d'ADN selon l'invention, placé sous le contrôle d'éléments capables d'assurer son expression dans une cellule-hôte appropriée; et (iii) un procédé de production d'un polypeptide selon l'invention, selon lequel on cultive une cellule-hôte comportant une cassette d'expression selon

r'invention.

Par 'fragment d'ADN isolé", on signifie qu'un fragment d'ADN selon lrinvention n'est

pas intégré dans un fragment d'ADN codant pour une sous-unité Tbp2 complète.

Dans la cassette d'expression, le fragment d'ADN selon l'invention peut être ou non associé à un bloc d'ADN codant pour un peptide signal hétérologue ou non, au polypeptide

codé par ledit fragment d'ADN, selon que l'on recherche ou non la sécrétion du polypeptide.

De préférence, cette sécrétion sera recherchée.

Des éléments tels qu'un bloc d'ADN codant pour un peptide signal hétérologue (région signal) ou un promoteur existent déjà en assez grand nombre et sont connus de l'homme du métier. Ses compétences générales lui permettront de choisir une région signal ou un promoteur particulier qui seront adaptés à la cellule-hôte dans laquelle il envisage lexpression.

-14- 2720408

Aux fins du procédé selon l'invention, la cellule-hôte peut être une cellule de mammifère, une bactérie ou une levure; ces deux dernières étant préférées. Là aussi, le

choix d'une lignée particulière est à la portée de l'homme du métier.

L'invention concerne également un anticorps monoclonal: (i) capable de reconnaître un épitope présent dans le premier domaine d'une sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou XM2394; ledit épitope ayant une

séquence homologue à celle présente dans le premier domaine de la sous-

unité Tbp2 de la souche IM2394 et sélectionnée parmi YKGTW (SEQ ID

NO 32), EFEVDFSDKTIKGTL (ID SEQ NO 33), EGGFYGPKGEEL (ID

SEQ NO 34) et AVFGAK (ID SEQ NO 35); et de manière optionnelle, (ii) incapable de reconnaître l'épitope présent dans le troisième domaine de ladite sous-unité Tbp2 de type 1M2169 ou IM2394, dont la séquence est

homologue à celle de l'épitope du premier domaine qui est reconnu.

Afin d'illustrer le point (ii) précédent, on indique à titre d'exemple que les séquences du troisième domaine de la sous-unité Tbp2 IM2394 homologues deux à deux à celles du premier domaine se trouvent respectivement en position 443 - 447, 472 - 485, 537 - 548 et

568 - 573;

De préférence, un monoclonal selon l'invention est: (i) capable de reconnaître la région présente dans le premier domaine d'une sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou IM2394 dont la séquence est homologue à la séquence EGGFYGPKGEEL présente dans le premier domaine de la sous- unité Tbp2 de la souche IM2394; et de manière optionnelle, (ii) incapable de reconnaître l'épitope présent dans le troisième domaine de ladite sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou IM2394, épitope équivalent de celui qui est reconnu, dont la séquence est homologue à la séquence SGGFYGKNAIEM présente dans le troisième domaine de la sous-unité

Tbp2 de la souche IM2394.

-15- 2720408

Un monoclonal préféré est: (i) capable de reconnaître l'épitope GFYGPK, présent dans le premier domaine d'une sous-unité Tbp2 de la souche 1M2394; et (ii) incapable de reconnaître répitope équivalent présent dans le troisième

domaine de ladite sous-unité Tbp2 IM2394.

En effet, un tel monoclonal a été reconnu comme bactéricide et par conséquent on peut envisager de l'utiliser comme principe actif dans une composition pharmaceutique, en

immunothérapie passive pour combattre une infection à N. meningitidis.

Enfin, rinvention concerne également une composition pharmaceutique comprenant

à titre de principe actif au moins un polypeptide selon rinvention.

Une composition pharmaceutique selon l'invention est notamment utile pour induire une réponse immunitaire chez les humains à rencontre de N. meningitidis, entre autre un effet vaccinal de manière à protéger les humains contre des infections à N. meningitidis, en

prévention ou en thérapie.

Une composition selon l'invention comprend avantageusement, à titre de principe actif. au moins deux polypeptides selon l'invention; soit au moins un premier polypeptide dont la séquence dérive de celle d'une sousunité Tbp2 de type M2169 et au moins un deuxième polypeptide dont la séquence dérive de celle d'une sous-unité Tbp2 de type IM2394. De manière alternative, une composition selon l'invention peut aussi contenir au moins un polypeptide dont la séquence dérive de celle d'une sous-unité Tbp2 de type

IM2169 et au moins une sous-unité Tbp2 de type IM2394.

Pour ce qui concerne le polypeptide de type IM2394, élément de la composition pharmaceutique, il est très préférable que celui-ci comporte tout ou partie de la séquence qui est homologue à celle du premier domaine de la sous-unité Tbp2 IM2394 dont il est dérivé. La partie de la séquence qui doit de préférence, être maintenue est l'homologue de la région de la sous-unité Tbp2 1M2394 allant de racide aminé en position 267 i racide aminé en position 325. La séquence d'un tel polypeptide peut dériver de celle dune sous-unité Tbp2 de type IM2394 notamment par délétion totale ou partielle de la région du deuxidmne

ou troisième domaine de la sous-unité Tbp2 de type IM2394.-16- 2720408

Ainsi, en vue d'une composition pharmaceutique à deux types d'éléments (type IM2394 et type IM2169), sont plus particulierement préférés les polypeptides de type IM2394 suivants:

1,2,03;1,2,A3; 1,02,A3; 1,A2,A3

01, 2, 03; 01, 2, A3; 01, 02, A3; 01, A2, A3.

Pour ce qui concerne le polypeptide de type IM2169, élément de la composition pharmaceutique, deux approches préférées sont possibles: (A) Soit associer au polypeptide de type IM2394, un polypeptide qui comporte tout ou partie de la séquence qui est homologue à celle du premier domaine de la sous-unié Tbp2 DM2169 dont il est dérivé. Dans ce cas là, la partie de la séquence qui doit de préférence, être maintenue est l'homologue de la région de la sous-unité Tbp2 IM2169 allant de racide aminé en position 282 à l'acide aminé en position 345. La séquence d'un tel polypeptide peut dériver de celle d'une sous-unité Tbp2 de type IM2169 notamment par délétion totale ou partielle de la région du deuxième ou troisième domaine de la sous-unité

Tbp2 de type IM2169.

Ainsi, selon cette alternative et en vue d'une composition pharmaceutique à deux types d'éléments (type IM2394 et type IM2169), sont plus particulierement préférés les polypeptides de type IM2169 suivants:

1,2,03;1,2,A3;1,02,A3;1, A2,A3

01,2,03;01,2,A3;01, 02,A3;0 1,A2,A3.

1, 02, 3; 01, 02, 3.

Pour ce qui concerne les deux dernières possibilités (1, 02, 3; 01, 02, 3), la délétion partielle du deuxième domaine peut très avantageusement porter sur une ou des régions du deuxième domaine qui est (sont) 1'(les) homologue(s) des régions de la séquence IM2169 allant: (i) de l'acide aminé en position 362 à l'acide aminé en position 379;

-17- 2720408

(ii) de l'acide aminé en position 418 à l'acide aminé en position 444; (iii) de l'acide aminé en position 465 à l'acide aminé en position 481; et (iv) de l'acide aminé en position 500 à r'acide aminé en position 520. De préférence, la délétion partielle porte simultanément sur les quatre régions (i) à

(iv) sus-décrites.

(B) - Soit associer au polypeptide de type IM2394, un polypeptide dont la séquence dérive par délétion partielle du deuxième domaine et par délétion totale ou quasi totale du premier ou troisième domaine de la sous-unité Tbp2 de type IM2169 et comporte le deuxième domaine dans son intégralité (AI, 2, A3). Dans cette alternative, la composition pharmaceutique à deux types d'éléments (type IM2394 et type IM2169), peut avantageusement contenir plusieurs polypeptides (Ai1, 2, A3) de type IM2169; par exemple deux ou plus des polypeptides sélectionnés parmi (AI, 2, A3) IM2169, M978, 6940 et

53032.

Une composition pharmaceutique selon l'invention peut être fabriquée de manière conventionnelle. En particulier on associe le ou les polypeptide(s) selon limvention avec un adjuvant, un diluant ou un support acceptable d'un point de vue pharmaceuique. Une composition selon l'invention peut être administrée par n'imnporte quelle voie conventionnelle en usage dans le domaine des vaccins, en particulier par voie sous-cutanée, par voie intra-musculaire ou par voie intra-veineuse, par exemple sous forme de suspension injectable. L'administration peut avoir lieu en dose unique ou répétée une ou plusieurs fois après un certain délai d'intervalle. Le dosage approprié varie en fonction de divers

paramètres, par exemple, de l'individu traité ou du mode d'administration.

Afin de déterminer l'objet de la présente invention, on précise que les souches de N. meningtidis IM2394 et IM2169 sont publiquement disponibles auprès de la Collection Nationale de Culture des Microorganismes (CNCM), Institut Pasteur, 25 rue du Dr Roux

75015 Paris sous les numéros d'enregistrement respectifs LNP N 1511 et LNP N 1520.

L'invention est décrite plus en détails dans les exemples ci-après et par référence aux

Figures 1 à 7.

-18- 2720408

Les Figures I à 3 présentent respectivement les alignements des séquences Tbp2, M978, 6940 et S3032 avec la séquence Tbp2 IM2169, au maximum d'homologie. Les

degrés d'homologies respectifs sont de 78.9, 81.2 et 79.6%.

La Figure 4 présente les alignements au maximum d'homologie des séquences des domaines charnières (deuxième domaine) de Tbp2 IM2169 (1), 6940 (2), 2223 (3), C708 (4), M978 (5), 1610 (6), 867 (7), S3032 (8) et M981 (9). En italiques est donnée la numérotation de la séquence de Tbp2 IM2169, telle qu'elle apparaît dans ID SEQ NO 1. En gras apparaissent les séquences que l'on peut déléter selon un mode préféré. (C) indique la

séquence consensus.

Lea Figures 5 à 7 illustrent respectivement la construction des plasmides pTG5782,

pTG5755 et pTG5783.

EXEMPLE 1: Polypeptide T/2169 (1, 02, A3; 1-350) dont la séquence telle que montrée dans IHD SEQ NO I (IM2169), de racide aminé en position 1 i

racide aminé en position 350.

1A- Préparation du fragment d'ADN codant pour T2169 (1-350):

Construction du vecteur pTG 5782.

A partir du plasmide pTG3721 décrit dans la demande EPA 586 266, on introduit, par mutagénèse dirigée, un site de restriction Hindif en aval de la séquence

codant pour Tbp2, pour générer le plasmide pTG4704.

A partir du plasmide pTG3721, on amplifie par PCR, à raide des amorces OTG4915 et OTG4651, un fragment comportant la séquence codant pour le signal de sécrétion de RIpB et du début de la séquence codant pour Tbp2 mature jusqu'au site

HaeIl interne.

OTG4915: AAACCCGGATCCGTTGCCAGCGCTGCCGT

HaeII

-19- 2720408

0TG4651:

BspHI

TTTTTTCATG AGA TAT CTG GCA ACA TTG TTG TTA TCT CTG

Met Arg Tyr Leu Ala Thr Leu Leu Leu Ser Leu

GCG GTG TTA ATC ACC GCC GGG TGC CTG GGT GGC

Ala Val Leu Ile Thr Ala Gly Cys Leu Gly...

_clivage du peptide signal

GGC GGC AGT TTC

Le fragment PCR est ensuite digéré par BspHI et HaeH et inséré simultant avec le fragment HaelI-HindII de pTG4704 qui comporte la partie 3' de la région codant pour Tbp2, dans le plasmide pTG3704 décrit dans la demande EPA 586 266,

digéré par NcoI et HindII, pour générer le plasmide pTG5768.

A partir de plasmide pTG3721, on amplifie par PCR, à l'aide des amorces

OTG4928 et OTG5011, un fragment comportant la séquence codant pour la partie N-

terminale de Tbp2.

SphI

OTG4928: GTG TTT TTG TTG AGT GCA TGC CTG GGT GGC

Val Phe Leu Leu Ser Ala Cys Leu Gly Gly Clivage du peptide signal

OTG5011: TGCGCAAGCTTACAGTTTGTCTTTGGTTTTCGCGCTGCCG

HindI II Ce fragment PCR est digéré par SphI et Hindll, puis cloné dans le plasmide pTG4710 décrit dans la demande EPA 586 266; on génère ainsi le plasmide pTG5740. Le fragment HaeII-HindHI de pTG5740 comportant la partie 3' de la séquence codant pour le domaine de liaison à la transferrine humaine (hTf) ( 3' de la région codant pour le premier domaine) est inséré dans le plasmide pTG3704 digéré par

-20- 2720408

BamHI et HindIIH simultanément avec le fragment BamHI-HaeIl de pTG5768 comportant le promoteur araB, la séquence signal rlpB et le début de la séquence codante de Tbp2; on génère ainsi le plasmide pTG5782. Ce vecteur comporte le promoteur araB, la séquence codant pour le signal de sécrétion de RIpB fusionnée i la séquence codant pour le domaine N-terminal de Tbp2 (1 - 350). lB - Production et purification de T/2169 (1-350) Une souche d'E coli (Xac-I) est transformée par pTG5782. Les transformants sont mis en culture à 37 C en milieu M9 + succinate 0,5% + arginine 50pg/ml +

ampicilline100 pg/ml. En phase exponentielle, on ajoute 0,2% d'arabinose (inducteur).

Après une heure d'induction, on prélève des cellules et des extraits sont préparés. Une analyse en Western Blot suivie d'une révélation par la hTF-peroxidase permet de détecter une bande majoritaire dont le P.M. correspond à celui attendu pour cette

forme tronquée de Tbp2.

Dans un test tel décrit dans l'exemple 4 de WO93/6861 (publié: 15. 04. 93) T/2169 purifié se révèle capable d'induire des anticorps bactéricides et par conséquent

devrait être utile à des fins vaccinales.

EXEMPLE 2: Polypeptide T/2394 (1, 02, A3; 1-340) dont la séquence telle que montrée dans lIlD SEQ NO 2 (IM394), de l'acide aminé en position 1 i

l'acide aminé en position 340.

2A- Préparation du fragment d'ADN codant pour T/2394 (1-340): Construction du vecteur pTG 5755 A partir du plasmide pTG4710 décrit dans la demande EPA 586 266, on amplifie par PCR, à l'aide des amorces OTG4873 et OTG4877, un firagment comportant la région codant pour la partie C-terminale du domaine de liaison i la hTf

Ce fragment est ensuite digéré par MluI et HindI1.

OTG4873: AAAAAGCATGCATAAAAACTACGCGTTACACCATTCAAGC

MluI

-21- 2720408

OTG4877:TATATAAGCTTACGTTGCAGGCCCTGCCGCGTTTTCCCC

HindIII

Le plasmide pTG4710 est digéré par M/uI et HindII. Le fragment MluAI-

HindIH comportant la partie 3' de la séquence codant pour Tbp2 est remplacé par le fragment PCR codant pour la partie C-terminale du domaine de liaison à la hTf On génère ainsi le plasmide pTG5707. On remplace ensuite dans le plasmide pTG5707, un fragment BamHI-MluI comportant le promoteur araB et le début de la séquence codant pour Tbp2, par un fragment BamHI-MluI de pTG4764 décrit dans la demande EPA 586 266 qui comporte le promoteur araB, la séquence codant pour le signal de

sécrétion RlpB fusionnée à la séquence codant pour le domaine N-terminal de Tbp2.

On génère ainsi le plasmide pTG5755. Ce vecteur comporte le promoteur araB, la séquence codant pour le signal de sécrétion de RIpB fusionnée à la séquence codant

pour le domaine N-terminal de Tbp2 (1 - 340).

2B - Production et purification de T/2394 (1-340)

T/2394 (1-340) est produit et purifié tel que décrit dans l'Exemple lB.

Dans un test tel décrit dans l'exemple 4 de W093/6861 (publié: 15. 04. 93) T/2394 purifié se révèle capable d'induire des anticorps bactéricides et par conséquent

devrait être utile à des fins vaccinales.

EXEMPLE 3: Polypeptide D4/2169 (1, 02, 3) dont la séquence est identique i celle telle que montrée dans l'ID SEQ NO 1, de l'acide aminé en position 1 à

l'acide aminé en position 691, délétée des régions 362-379, 418-444, 465-

481 et 500-520.

3A - Préparation du fragment d'ADN codant pour D4/2169

1.1. Clonage du fragment d'ADN.

Le fragment d'ADN codant pour la sous-unité Tbp2 de la souche de N. meningilidis 1M2169 est amplifié par PCR (Polymerase chain reaction) ià raide d'amorces spécifiques complémentaires des régions 5' et 3', (respectivement AS'

-22- 2720408

et A3) sur 10 ng d'ADN génomique extrait d'une culture de bactéries de la

souche M2169.

A5': 5' CCCGAATTCTGCCGTCTGAAGCCTTATTC 3'

* A3': 5' CCCGAATTCTGCTATGGTGCTGCCTGTG 3'

Un fragment d'ADN est ainsi obtenu et après digestion par EcoRI, il compte 2150 nt. Ce fragment EcoRI est ensuite ligué aux extrémités EcoRI déphosphorylées du phagemide pBluescriptSK(-) (Stratagene) pour donner le

phagemide recombinant pSK/2169tbp2.

1.2. Mise en oeuvre des délétions.

Le clone pSK/2169tbp2 contenant les séquences tbp2 de la souche M982

est délété par la technique de Kunkel, PNAS (1985) 82: 448.

En bref la forme phagique du phagemide recombinant pSK/2169tbp2 est obtenue après sauvetage par le phage "helper" VCS M13 selon la technique décrite par Stratagene, fournisseur du vecteur de base, et utilisée pour infecter la souche bactérienne CJ236. Les mutations dut et ung portées par la souche CJ236 ont pour conséquence la synthèse de molécules dADN ayant incorporé

le précurseur nucléotidique dUTP.

Les phages sont récoltés et r'ADN simple brin est extrait par un mnélange phénol/chloroforme. Cet ADN est hybridé dans les conditions classiques, aux oligonucléotides suivants: 2169dl: 5' CGCATCCAAAACCGTACCTGTGCTGCCTGA 3' 2169d2: 5' TTTATCACTTTCCGGGGGCAGGAGCGGAAT 3' 2169d3: 5' GTTGGAACAGCAGACAGCGGTTTGCGCCCC 3' 2169d4: 5' GAACATACTTTGTTCGTTTTTGCGCGTCAA 3' La réaction d'hybridation est poursuivie 30 min, en température

décroissante à partir de 70 C jusqu'à 30 C.

-23- 2720408

Le second brin complémentaire est ensuite achevé par synthèse complète en présence des quatre desoxynucléotides, de la T4 DNA polymirase et de la

T4 DNA ligase, selon les conditions classiques.

La souche E. col SURE (Stratagene) est transformée par r'ADN ainsi

obtenu. Dans cette souche, les molécules porteuses de dUTP, c'est-à-dire non-

mutées, sont détruites.

Les phages obtenus sont analysés par les techniques classiques de préparation rapide d'ADN plasmidique et de digestion par les enzymes de restriction appropriées. La présence de la mutation recherchée est ensuite

vérifiée par séquençage nucléotidique.

Le clone pSK2169#7, porteur des quatre mutations A 1203-1256, A

1371-1451, A 1512-1562, et A 1617-1679 est sélectionné.

3B - Construction du vecteur d'expression pTG5783 Le plasmide pTG5768 décrit précédemment est digéré par HpaI et Xcml. On insère simultanément dans ce vecteur un fragment XcmI-XcmI de pTG5768 et le

fragment HpaI-XcmI du plasmide pSK/2169ed#7, pour générer le plasmide pTG5783.

Ce vecteur comporte le promoteur araB, la séquence codant pour le signal de

sécrétion de RIpB fusionnée à la séquence tbp2 modifiée (délétions dl à d4).

3C - Préparation et purification de D4/2169.

D4/2169 est produit et purifié selon lExemple lB.

Dans un test tel décrit dans l'exemple 4 de WO93/6861 (publié: 15. 04. 93) D4/2169 purifié s'est révélé capable d'induire des anticorps bactéricides et par

conséquent devrait être utile à des fins vaccinales.

-24- 2720408

EXEMPLES 4 à 8: Polypeptides 4) C/2223 (1-340), 5) C/M981 (1-340), 6) C11610 (1-

340), 7) C/2996 (1-340) et 8) C/C708(1-340).

Les fragments d'ADN codant pour les Tbp2 des souches de N. meningitdis 2223, M981, 1610, 2996 et C708 ont été clonés par amplification PCR comme décrit dans rexemple 3A, en utilisant les deux même amorces. De même, ces firagments ont

été insérés aux sites EcoRI ou EcoRI/BamHI du phagemide pBluescriptSK(-).

EXEMPLE 9: Composition vaccinale (T/2169 - T/2394) destinée à prévenir des infections à N. meningitidis Des solutions stériles de T/2169 et T/2394 tels que purifiés dans les exemples lB et 2B sont décongelées. Afin de préparer un litre de vaccin renfermant 100 pg/ml de chacun des principes actifs, on mélange stérilement les solutions suivantes: - Solution de T/2394 à 1 mg/ml dans du tampon C (tampon phosphate 500 mM, pH8, Sarkosyl 0,05 %/) 100 ml - Solution de T/2169 à lmg/ml dans du tampon C 100 ml Eau physiologique tamponnée (PBS)) pH 6.0 300 ml - Hydroxyde d'aluminium à 10 mg Al+++/ml 50 ml - Merthiolate à 1% (p/v) dans du PBS 10 ml - PBS qsp 1.000 ml EXEMPLE 10: Composition vaccinale (D4/2169 - Tbp2/2394) destinée à prévenir des infections à N. meningitidis Une solution stérile de D4/2169 tel que purifié dans rexemple 3C est décongelée. On fait de même avec une solution stérile de Tbp2/2394 tel que préparé et purifié dans

-25- 2720408

rexemple 3 de EPA 586 266. Afin de préparer un litre de vaccin renfermant 100 pg/ml de chacun des principes actifs, on mélange stérilement les solutions suivantes: - Solution de Tbp2/2394 à 1 mg/ml dans du tampon C 100 mi - Solution de D4/2169 lmg/ml dans du tampon C 100 ml - Eau physiologique tamponnée (PBS)) pH 6.0 300 ml - Hydroxyde d'aluminium à 10 mg Al++ /ml 50 mi - Merthiolate à 1 % (p/v) dans du PBS 10 mi - PBS qsp 1.000 ml EXEMPLE 1 1: Obtention d'un anticorps capable de reconnaître répitope GFYGPKGE du

premier domaine de Tbp2 IM2394.

11A -Immunisation des souris et production des hybridomes Des souris MRL/Lpr-Lpr connues pour produire plus d'IgG2a, IgG2b et IgG3 que les souris Balb/C (J. Immunol. Methods (1991) 144: 165) reçoivent une première injection intrapéritonéale de 50 pg de la fraction membranaire IM2394 en présence d'adjuvant complet de Freund. La fraction membranaire que ron utilise est préparée comme suit: La souche IM2394 conservée sous forme lyophilisée est reprise et cultivée sur

gélose Mueller - Hinton pendant une nuit à 37 C dans une atmosphère contenant 20%/.

de CO2 La nappe est reprise et sert à ensemenser un erlen-meyer contenant du

bouillon Mueller - Hinton additionné de 30 plM EDDA (ethylene diamine di ortho-

hydroxy acetic acid - Sigma). Après 5 heures d'incubation à 37 C sous agitation rotative, la culture est centrifugée. Le culot est repris par du tampon Tris-HCI pH 8 et la suspension est lysée dans un appareil à ultrasons fonctionnant à haute pression (Rannie, modèle 8.30H). La suspension obtenue est centrifugée à basse vitesse pour éliminer les débris cellulaires et les membranes sont recueillies par ultracentrifugation

-26- 2720408

(140 000 xg, 75 min, 4 C). La fraction membranaire est finalement reprise en tampon

Tris-HCI 50 mM pH 8 et sa concentration protéique déterminée.

Cette première injection est suivie de deux injections de rappel 21 et 49 jours plus tard. Les doses de rappel contiennent 25 pg de la protéine Tbp2 telle que purifiée dans lExemple 3 de EPA 586 266, sous la forme d'une émulsion dans radjuvant

incomplet de Freund.

56 jours après, la souris ayant développé le titre en anticorps le plus élevé (contrôle des immunsérums par ELISA) est sélectionnée pour la production d'anticorps monoclonaux spécifiques. Celle-ci reçoit une dernière injection de rappel (78 jours après rinjection initiale) en inoculant 25 pg de la protéine Tbp2 telle que purifiée dans l'Exemple 3 de EPA 586 266 à la fois par voie intraveineuse et par voie intrapéritonéale. 3 jours après, la rate de l'animal est prélevée et les splénocytes sont fusionnés avec les cellules myélomateuses murines P3 x 63 Ag 8653 dans un rapport d'une cellule myélomateuse pour 4 cellules spléniques. Le protocole de fusion utilisé est dérivé de celui décrit initialement par G. Kôhler et C. Milstein, Nature (1975) 256 : 495. Apres fusion, les cellules sont disposées dans des micropuits stériles (Nunc) recouverts d'un "feeder" nourricier à raison de 100 000 cellules par puits dans un volume de 200 pil de milieu sélectif [milieu D.M.E.M contenant 20% de SVF et un

mélange hypoxanthine - azaserine - thymidine i 2% (V/V) (Gibco. Réf 04301060H)].

Le milieu sélectif est remplacé 6 jours après, par un milieu non sélectif [milieu D.ME.M contenant 20 /o de SVF et un mélange hypoxanthine thymidine à 2%/

(V/V) (Gibco. Réf 043-01065H)].

11B -Criblage des hybridomes Les surnageants de culture des hybridomes sont testés par ELISA selon la méthode suivante: Dans des micropuits de plaque ELISA "sensibilisés pendant une nuit à +4 C par 100 pl d'une solution à 5 pg/nml de RT 2394 en tampon carbonate (50 mM pH 9,6), puis saturés pendant 1 heure à 37 C avec 200 pI d'un tampon phosphate 0,1 M contenant 1% de sérum albumine bovine (poids/volume) (PBS-AB), sont déposés 100 pl de surnageant de culture d'hybridomes (ou les dilutions d'immnsérmns effectuées en tampon PBS-AB contenant 0,05% de Tween 20) (PBS-T-AB). Après une nouvelle

-27 - 2720408

incubation de lh30 à 37 C suivie de 5 lavages en PBS-Tween, les puits sont recouverts par 100 pl d'une solution mixte d'anticorps conjugués à la phosphaase alcaline (PA) spécifiques des isotypes IgG2a, IgG2b et IgG3 murins de façon à ne sélectionner que les hybridomes sécrétant des anticorps spécifiques et fonctionnels S dans le test de bactéricidie. La solution mixte d'anticorps conjugués est préparée en diluant les 3 immunsérums de chèvre suivants: chèvre anti IgG2a - PA (Caltag), chèvre anti IgG2b -PA (Caltag), chèvre anti IgG3-PA (Caltag) au 1/1500è en tampon PBS-T-AB. Après incubation de la solution d'anticorps conjugués lh30 à 37C, suivie de 5 lavages, la réaction enzymatique est révélée par 100 pl d'une solution de paranitrophényl phosphate à 5 mg/ml en tampon diéthanolamine 0,1 M, pH 9, 8. Le développement de la réaction est arrêté au bout de 30 min. en rajoutant 50 pi de

soude IN avant analyse au spectrophotomètre à 405 nm.

Les clones positifs après ce premier criblage sont analysés pour leur capacité ià

reconnaître la sous-unité Tbp2 par Western blot.

Pour ce faire, les récepteurs transferrine IM2394 (0,863 mg/ml) et IM2169 (0,782 mg/ml) tels que préparés dans les exemples 1 et 2 de W093/6861, sont dilués au 1/10 dans un tampon Tris 1 M pH 6,8, puis dénaturés en ajoutant 10 / (VV) dune solution de SDS à 25% dans un tampon TE (Tris/HCl 100 mM, EDTA 10 mM) pH 8,0 et 5% (V/V) de]- mercaptoéthanol. Après un traitement de 15 min i 56 C, un aliquot de 110 pl contenant le récepteur transferrine dénaturé IM2394 ou IM2169, est déposé sur un gel de polyacrylamide à 7,5%. Apres migration (1 heure sous 200 volts dans une cuve Biorad), les protéines sont électrotransfSérées sur une membrane de nitrocellulose (100 volts pendant 50 min.). La membrane est saturée pendant I nuit à température ambiante dans un tampon Tris 20 mM, NaCI 137 mM pH 7,6 (TBS) contenant 5% (P/V) de poudre de lait écrémé puis montée sur miniblotter. Les anticorps que r'on teste sont ajustés à la concentration de 25 pg/ml en tampon TBS contenant 1% (P/V) de poudre de lait avant d'être déposés à raison de 50 pl par canaL Après 45 min. d'incubation, suivies de rinçages en tampon TBS/lait 1%o, 50 pl d'un immunsérum de lapin anti IgG. AM de souris (Zymed) conjugué à la phosphatase alcaline préalablement dilué 1000 fois en tampon TBS/lait 1% sont déposés dans

chaque canal.

-28- 2720408

Après une nouvelle incubation de 45 min. suivie de rinçages, la réaction enzymatique est révélée à raide d'un substrat chromogénique (B.C.I.P/NBT (Sigma

Fast R). La réaction est arrêtée au bout de 15 min. par trempage dans reau distillée.

Les clones positifs sont caractérisés par leur capacité à révéler une bande correspondant à une protéine d'environ 69 kD (sous- unité Tbp2) après

électrotransfert du récepteur transferrine IM2394 sur membrane de nitrocellulose.

A l'issue de ce second criblage par Western blot, les clones sont analysés pour leur capacité à produire une immunoglobuline réagissant avec la séquence peptidique GFYGPKGE dans un système ELISA; la méthodologie est identique i celle décrite ci-dessus à rexception de la sensibilisation des plaques qui est réalisée par addition

dans chaque puits de 100 pl d'une solution de peptide GFYGPKE i 2 pg/ml.

Parmi les hybridomes que l'on teste, on en sélectionne un qui se révèle capable de réagir avec le peptide; puis on le stabilise par clonage successifs (au moins 2) i raison de 5 cellules/puits lors du premier dclonage, de une celule/puits lors des suivants. 11C -Production et purification de l'anticorps monoclonal

L'anticorps monoclonal est produit en ascite de souris Nude swiss males.

jours après injection de 500 pl de pristane par voie intrapéritonéale, les souris nudes recçoivent une deuxième injection intrapéritonéale de 7 millions de

cellules provenant de l'hybridome.

Les liquides d'ascites sont prélevés stérilement puis purifiés par chromatographie d'affinité sur une colonne de protéine G. L'ascite diluée au 1/5è dans un tampon phosphate 0,1M pH 7,4 et filtrée sur filtre millipore 0,22 p est passée au travers d'une colonne de protéine G préalablement équilibrée dans le même tampon

phosphate, à raison de 40 ml/heure.

Les anticorps fixés sur la colonne sont élués à raide d'un tampon glycine O,IM pH 2,7. Les fractions éluées sont immédiatement neutralisées à raide d'un tampon Tris

1 M pH 8,0 (à raison de I volume de Tris pour 10 volumes d'éluat).

-29- 2720408

L'éluat est ensuite dialysé une nuit à +4 C dans un tampon phosphate 0, IM pH

7,4, aliquoté et conservé congelé.

La pureté de l'anticorps est contrôlée par électrophorèse sur gel de polyacrylamide à 7,5% et par chromatographie de perméation sur Superose 12. Le

taux de pureté généralement est supérieur à 95%.

En appliquant le protocole décrit ci-dessus et en criblant environ 800 hybridomes, on a notamment sélectionné un monoclonal capable de réagir avec l'répitope GFYGPKGE du premier domaine de Tbp2 IM2394 et incapable de réagir

avec répitope correspondant situé dans le troisième domaine (soit GFYGKNAI).

Ce monoclonal (appelé 475E7) est une IgG2b, de point isoélectrique compris

entre 7,8 et 8,1, et possède un titre bactéricide de 512.

Ce titre a été déterminé comme suit: A partir d'une solution de Mab 475 E7, des dilutions de raison deux sont réalisées et incubées en présence de 50 pl d'une suspension de méningocoques à 1.104 CFU/ml et de 50 pI de complément de lapereau [la suspension bactérienne est obtenue par culture de la souche N. meningitidis B16B6 à 37 C pendant 5 heures dans le bouillon MuelHer-Hinton-Difco contenant 30 pM d'EDDA (éthylène diamine di ortho

hydroxyphenyl acetic acid - Sigma)].

Après une heure d'incubation à 37 C, 25 pl de mélange sont prélevés et cultivés sur gélose Mueller-Hinton supplémentée. Les boîtes de gélose sont incubées une nuit à 37C sous une atmosphère contenant 10 % de C02. Les colonies sont numérées et le titre bactéricide est exprimé comme l'inverse de la dernière dilution en présence de

laquelle on observe 50% ou plus de lyse des bactéries par rapport au contrôle.

Dans ces conditions, il a été déterminé que le Mab 475 E7 possédait un titre

bactéricide de 512.

-30- 2720408

SEQ ID NO Nom du projet Séquence 1,2 IM2169-2 Tbp2 IM2169 complète 3,4 IM2394-2 Tbp2 IM2394 complète , 6 M978 Tbp2 M978 complète 7, 8 6940 Tbp2 6940 complète 9, 10 S3032 Tbp2 S3032 complète 11 2D IM2169 2ième domaine de Tbp2 IM2169 12 2D 6940 2ième domaine de Tbp2 6940 13 2D 2223 2ième domaine de Tbp2 2223 14 2D C708 2ième domaine de Tbp2 C708 2D M978 2ième domaine de Tbp2 M978 16 2D 1610 2ième domaine de Tbp2 1610 17 2D 867 2ième domaine de Tbp2 867 18 2D S3032 2ième domaine de Tbp2 S3032 19 2D 891 2ième domaine de Tbp2 M981

OTG 4915 OTG 4915

21 OTG 4651 OTG 4651

22 OTG 4928 OTG 4928

23 OTG 5011 OTG 5011

24 OTG 4873 OTG 4873

OTG 4877 OTG 4877

26 A 5' A 5'

27 A3' A3'

28 2169 D1 2169D1

29 2169 D2 2169D2

2169 D3 2169D3

31 2169 D4 2169D4

32 MAB1 lère boîte du 1er domaine de Tbp2

IM 2169

33 MAB2 2ième boîte du ler domaine de Tbp2

IM 2169

34 MAB3 3ième boîte du ler domaine de Tbp2

IM 2169

MAB4 4ième boîte du ler domaine de Tbp2

IM 2169

-31- 2720408

LISTE DE SEQUENCES

(1) INFORMATION GENERALE:

(i) DEPOSANT: (A) NOM: Pasteur Merieux serums et vaccins (B) RUE: 58, avenue leclerc (C) VILLE: Lyon (E) PAYS: France

(F) CODE POSTAL: 69007

(A) NOM: Transgene (B) RUE: 11, rue de Molsheim (C) VILLE: Strasbourg (E) PAYS: France

(F) CODE POSTAL: 67000

(ii) TITRE DE L' INVENTION: Fragments Tbp2 de N. meningitidis (iii) NOMBRE DE SEQUENCES: 35 (iv) FORME LISIBLE PAR ORDINATEUR: (A) TYPE DE SUPPORT: Tape (B) ORDINATEUR: IBM PC compatible

(C) SYSTEME D' EXPLOITATION: PC-DOS/MS-DOS

(D) LOGICIEL: PatentIn Release #1.0, Version #1.25 (OEB)

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 1:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 2230 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique) (vi) ORIGINE: (A)ORGANISME: Neisseria meningitidis

(B) SOUCHE: IM2169

(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE: (A) NOM/CLE: sigpeptide

(B) EMPLACEMENT: 60..119

(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE: (A) NOM/CLE: mat_peptide

(B) EMPLACEMENT: 120..2192

(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:

(A) NOM/CLE: CDS

(B) EMPLACEMENT: 60..2192

(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE: (A) NOM/CLE: misc feature

(B) EMPLACEMENT: 120..1154

(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE: (A) NOM/CLE: misc feature

(B) EMPLACEMENT: 1155..1748

-32- 2720408

(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE: (A) NON/CLE: miscfeature

(B) EMPLACEMENT: 1749..2192

(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE: (A) NOM/CLE: misc_binding

(B) EMPLACEMENT: 237..1169

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 1:

ATTTGTTAAA AATAAATAAA ATAATAATCC TTATCATTCT TTAATTGAAT TGGGTTTAT 59

ATG AAC AAT CCA TTG GTA AAT CAG GCT GCT ATG GTG CTG CCT GTG TTT 107

Met Asn Asn Pro Leu Val Asn Gln Ala Ala Met Val Leu Pro Val Phe

-20 -15 -10 -5

TTG TTG AGT GCC TGT CTG GGC GGC GGC GGC AGT TTC GAT CTT GAT TCT 155

Leu Leu Ser Ala Cys Leu Gly Gly Gly Gly Ser Phe Asp Leu Asp Ser

1 5 10

GTC GAT ACC GAA GCC CCG CGT CCC GCG CCA AAG TAT CAA GAT GTT TCT 203

Val Asp Thr Glu Ala Pro Arg Pro Ala Pro Lys Tyr Gln Asp Val Ser

20 25

TCC GAA AAA CCG CAA GCC CAA AAA GAC CAA GGC GGA TAC GGT TTT GCG 251

Ser Glu Lys Pro Gln Ala Gln Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Gly Phe Ala

35 40

ATG AGG TTG AAA CGG AGG AAT TGG TAT CCG GGG GCA GAA GAA AGC GAG 299

Met Arg Leu Lys Arg Arg Asn Trp Tyr Pro Gly Ala Glu Glu Ser Glu

50 55 60

GTT AAA CTG AAC GAG AGT GAT TGG GAG GCG ACG GGA TTG CCG ACA AAA 347

Val Lys Leu Asn Glu Ser Asp Trp Glu Ala Thr Gly Leu Pro Thr Lys

70 75

CCC AAG GAA CTT CCT AAA CGG CAA AAA TCG GTT ATT GAA AAA GTA GAA 395

Pro Lys Glu Leu Pro Lys Arg Gln Lys Ser Val Ile Glu Lys Val Glu

85 90

ACA GAC GGC GAC AGC GAT ATT TAT TCT TCC CCC TAT CTC ACA CCA TCA 443

Thr Asp Gly Asp Ser Asp Ile Tyr Ser Ser Pro Tyr Leu Thr Pro Ser

100 105

AAC CAT CAA AAC GGC AGC GCT GGC AAC GGT GTA AAT CAA CCT AAA AAT 491

Asn His Gln Asn Gly Ser Ala Gly Asn Gly Val Asn Gln Pro Lys Asn

115 120

CAG GCA ACA GGT CAC GAA AAT TTC CAA TAT GTT TAT TCC GGT TGG TTT 539

Gln Ala Thr Gly His Glu Asn Phe Gln Tyr Val Tyr Ser Gly Trp Phe

130 135 140

TAT AAA CAT GCA GCG AGT GAA AAA GAT TTC AGT AAC AAA AAA ATT AAG 587

Tyr Lys His Ala Ala Ser Glu Lys Asp Phe Ser Asn Lys Lys Ile Lys

150 155

TCA GGC GAC GAT GGT TAT ATC TTC TAT CAC GGT GAA AAA CCT TCC CGA 635

Ser Gly Asp Asp Gly Tyr Ile Phe Tyr His Gly Glu Lys Pro Ser Arg

165 170

CAA CTT CCT GCT TCT GGA AAA GTT ATC TAC AAA GGT GTG TGG CAT TTT 683

Gln Leu Pro Ala Ser Gly Lys Val Ile Tyr Lys Gly Val Trp His Phe

180 185

0>, f'f 0ú1 xqL sTH niD aqa A'I 6irv 2q aqa n'I xqiL A15 AIo usy sZi AID sAi IStI 9DY DYD WV 9 YW D9D DDY $.$ W9 VDV Y99D DDD DWV 1W MD YW SZ 0l' úT1, duy el'y uT qj,, usy ATD = s nTD zaS dcV sA o:za na1 nel oia 1IT :0o'T LY9 VDD DVD.DV DV, DDD D9YV VD DD$ LVYD D9 DDD 9DL D$D DDD LLY

011 ú01' 001

ION 'TI ATD dsy TeA TeA ni uTD eU'V ey usv ras aqa usy dvy no' SCI DVY ILYV DDD 9 VD Di!..LLD DiLD VD DDD DD lV DY Dv D DIV DVY DJD

56E 06E 58ú

usv sv'q aI' skI si dsy usy nal Zq. na nT lTeA eT'y dsy nI lTeA LOCI LYVY 1W DL.W Y DIV DVY Dv YVLID YDY D.LL IVD IL DDD.V!)DLL LLD e08ú SLú OLú S9 zq.T.:q& nao sAI jas usv nTgD las aS Zq. ATD eTY e'" ATD AD jaS

6SZT DYV DDY DLD DIV IDV DIV IVD LDL.D. 9DY D99D YDD DDD 99DD D99DD DD

09ú SSE OSE

wy 'wy el' AID 2qL las AID les 'TV 'v 'VT ATD usy nfI! naq skI IIZI VDD VDD DD L YD VDV DDV DDD VDL LD D DDD DD! DDD IV IV 9LD Yw S>ú OiE SEC dsy sAI zq.l sArAI eT s ATD TeA TeA el'Y lTeA sq UT dVy dVy zas ú911 DVY9 YW DDVY W DDD DDY D!)D DiL L.D DDD L, Y1W VD L.VT DVY DDY

OCú SZú OZú

nO, aqa 6x' Qqd ATD nel nTlD nlD ATD UTD o:a ATD aqa aqa A9D ATD

511 DLL. LL DDD DL$ LD D9.. IV D9VD L9D DVD DDD DDD DL. L DDD D99DD

STú OTEú S0ú

1aS no zoaS aSg zaS dsy zas TeA aqa o:a sTH naqf ski rqL nT! usy L901 DDY D9.$ LD.L iDL DDl DVD DDI.LLD LL. DDD LVD VLD 1W DDY IV!) LIV

00ú S6Z 06Z 58Z

nTD s"I si dsv iqL e'v qR. eTy Zq.. ATD usy aqa 6ZV us' AT9 rIML

6101 9YD 1W 1W DVYD DY VDD DDV YVDD DDY DDD DIV D.L. DD DW DDD YVDY

08Z SLZ OLZ

TII UTD eTy dsV naq las zAl AL uT! xqIL iqL STH sA, dsy usy usy

IL6 YVLV IVYD VDD LV!D DDV DVYL DYL IVD DDV DDY LVD 1W DVY9 LIV LIV

S9Z 09Z SSZ

lq. usy usy usy na' zaS el" us'y usy 6.V aTI naq sq ATD:1qL. nat úZ6 LDY L.W LW IVW VLD DDY DDD.IV LIV D9D VLv VL YW LD9 DDY 9D$ s'I s'i usy ATD aqa dsy TeA nTD naq usy 1aS qL a: qa D " A jl AITD

SL8 YW WDW I.VW DDD DLL LYVD D9LD V VY..LL IVW!9DL DDV LL L. Y LVL 9DD

SúZ OúZ SZ -

LZ8 9Y9 DYDID LY9 vv9 YW 9D 9DY DDL W9D DYY WY DW DD J; LYL W9D W9I

OZZ SIZ OIZ SOZ

zaS ATID dsy ATD 1aS qa AI9D aSg zAL 6,V dsy AID UTD sAi s'I zas

6LL DD 9 DDD LV!D LDD LD... VDDDV LYL DDY DVD DDD VD W YD VDL.

OOZ ú61 061

o0d UT! e1I aI nT! 6:yV aqc dsy UT! AID ski sAIq qL dsy q.L TeA

TEL LDD DYD DLV.Y LV VYL9D LLL LYV ID LD DI V YD' V.LV.D DDY YVLD

9080ZZ/Z - -

-34- 2720408

CCG GAA AGT GAT AAA AAA GAC GCC CAA GCA GGT ACG CAG ACG AAT GGG 1499

Pro Glu Ser Asp Lys Lys Asp Ala Gin Ala Gly Thr Gln Thr Asn Gly

445 450 455 460

GCG CAA ACC GCT TCA AAT ACG GCA GGT GAT ACC AAT GGC AAA ACA AAA 1547

Ala Gln Thr Ala Ser Asn Thr Ala Gly Asp Thr Asn Gly Lys Thr Lys

465 470 475

ACC TAT GAA GTC GAA GTC TGC TGT TCC AAC CTC AAT TAT CTG AAA TAC 1595

Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Ser Asn Leu Asn Tyr Leu Lys Tyr

480 485 490

GGA ATG TTG ACG CGC AAA AAC AGC AAG TCC GCG ATG CAG GCA GGA GGA 1643

Gly Met Leu Thr Arg Lys Asn Ser Lys Ser Ala Met Gln Ala Gly Gly

495 500 505

AAC AGT AGT CAA GCT GAT GCT AAA ACG GAA CAA GTT GAA CAA AGT ATG 1691

Asn Ser Ser Gln Ala Asp Ala Lys Thr Glu Gln Val Glu Gln Ser Met

510 515 520

TTC CTC CAA GGC GAG CGT ACC GAT GAA AAA GAG ATT CCA ACC GAC CAA 1739

Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro Thr Asp Gln

525 530 535 540

AAC GTC GTT TAT CGG GGG TCT TGG TAC GGG CAT ATT GCC AAC GGC ACA 1787

Asn Val Val Tyr Arg Gly Ser Trp Tyr Gly His Ile Ala Asn Gly Thr

545 550 555

AGC TGG AGC GGC AAT GCT TCT GAT AAA GAG GGC GGC AAC AGG GCG GAA 1835

Ser Trp Ser Gly Asn Ala Ser Asp Lys Glu Gly Gly Asn Arg Ala Glu

560 565 570

TTT ACT GTG AAT TTT GCC GAT AAA AAA ATT ACC GGC AAG TTA ACC GCT 1883

Phe Thr Val Asn Phe Ala Asp Lys Lys Ile Thr Gly Lys Leu Thr Ala

575 580 585

GAA AAC AGG CAG GCG CAA ACC TTT ACC ATT GAG GGA ATG ATT CAG GGC 1931

Glu Asn Arg Gln Ala Gln Thr Phe Thr Ile Glu Gly Met Ile Gln Gly

*590 595 600

AAC GGC TTT GAA GGT ACG GCG AAA ACT GCT GAG TCA GGT TTT GAT CTC 1979

Asn Gly Phe Glu Gly Thr Ala Lys Thr Ala Glu Ser Gly Phe Asp Leu

605 610 615 620

GAT CAA AAA AAT ACC ACC CGC ACG CCT AAG GCA TAT ATC ACA GAT GCC 2027

Asp Gln Lys Asn Thr Thr Arg Thr Pro Lys Ala Tyr Ile Thr Asp Ala

625 630 635

AAG GTA AAG GGC GGT TTT TAC GGG CCT AAA GCC GAA GAG TTG GGC GGA 2075

Lys Val Lys Gly Gly Phe Tyr Gly Pro Lys Ala Glu Glu Leu Gly Gly

640 645 650

TGG TTT GCC TAT CCG GGC GAT AAA CAA ACG GAA AAG GCA ACA GCT ACA 2123

Trp Phe Ala Tyr Pro Gly Asp Lys Gln Thr Glu Lys Ala Thr Ala Thr

655 660 665

TCC AGC GAT GGA AAT TCA GCA AGC AGC GCG ACC GTG GTA TTC GGT GCG 2171

Ser Ser Asp Gly Asn Ser Ala Ser Ser Ala Thr Val Val Phe Gly Ala

670 675 680

AAA CGC CAA CAG CCT GTG CAA TAAGCACGGT TGCCGAACAA TCAAGAATAA 2222

Lys Arg Gln Gln Pro Val Gln

685 690

-35- 2720408

GGCTTCAG 2230

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 2:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 711 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 2:

Met Asn Asn Pro Leu Val Asn Gln Ala Ala Met Val Leu Pro Val Phe

-20 -15 -10 -5

Leu Leu Ser Ala Cys Leu Gly Gly Gly Gly Ser Phe Asp Leu Asp Ser

1 5 10

Val Asp Thr Glu Ala Pro Arg Pro Ala Pro Lys Tyr Gln Asp Val Set

20 25

Ser Glu Lys Pro Gln Ala Gln Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Gly Phe Ala

35 40

Met Arg Leu Lys Arg Arg Asn Trp Tyr Pro Gly Ala Glu Glu Ser Glu

50 55 60

Val Lys Leu Asn Glu Ser Asp Trp Glu Ala Thr Gly Leu Pro Thr Lys

70 75

Pro Lys Glu Leu Pro Lys Arg Gln Lys Ser Val Ile Glu Lys Val Glu

85 90

Thr Asp Gly Asp Ser Asp Ile Tyr Ser Ser Pro Tyr Leu Thr Pro Ser

100 105

Asn His Gln Asn Gly Ser Ala Gly Asn Gly Val Asn Gln Pro Lys Asn

115 120

Gln Ala Thr Gly His Glu Asn Phe Gln Tyr Val Tyr Set Gly Trp Phe

130 135 140

Tyr Lys His Ala Ala Ser Glu Lys Asp Phe Ser Asn Lys Lys Ile Lys

150 155

Set Gly Asp Asp Gly Tyr Ile Phe Tyr His Gly Glu Lys Pro Ser Arg

165 170

Gln Leu Pro Ala Set Gly Lys Val Ile Tyr Lys Gly Val Trp His Phe

180 185

Val Thr Asp Thr Lys Lys Gly Gln Asp Phe Arg Glu Ile Ile Gln Pro

195 200

Ser Lys Lys Gln Gly Asp Arg Tyr Set Gly Phe Ser Gly Asp Gly Set

205 210 215 220

Glu Glu Tyr Set Asn Lys Asn Glu Set Thr Leu Lys Asp Asp His Glu

225 230 235

-36- 2720408

Gly Tyr Gly Phe Thr Ser Asn Leu Glu Val Asp Phe Gly Asn Lys Lys

240 245 250

Leu Thr Gly Lys Leu Ile Arg Asn Asn Ala Set Leu Asn Asn Asn Thr

255 260 265

Asn Asn Asp Lys His Thr Thr Gln Tyr Tyr Set Leu Asp Ala Gln Ile

270 275 280

Thr Gly Asn Arg Phe Asn Gly Thr Ala Thr Ala Thr Asp Lys Lys Glu

285 290 295 300

Asn Glu Thr Lys Leu His Pro Phe Val Ser Asp Set Set Set Leu Set

305 310 315

Gly Gly Phe Phe Gly Pro Gln Gly Glu Glu Leu Gly Phe Arg Phe Leu

320 325 330

Ser Asp Asp Gln Lys Val Ala Val Val Gly Set Ala Lys Thr Lys Asp

335 340 345

Lys Leu Glu Asn Gly Ala Ala Ala Set Gly Set Thr Gly Ala Ala Ala

350 355 360

Ser Gly Gly Ala Ala Gly Thr Set Set Glu Asn Set Lys Leu Thr Thr

365 370 375 380

Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Thr Leu Asn Asp Lys Lys Ile Lys Asn

385 390 395

Leu Asp Asn Phe Set Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Asp Gly Ile Met

400 405 410

Ile Pro Leu Leu Pro Lys Asp Set Glu Set Gly Asn Thr Gln Ala Asp

415 420 425

Lys Gly Lys Asn Gly Gly Thr Glu Phe Thr Arg Lys Phe Glu His Thr

430 435 440

Pro Glu Set Asp Lys Lys Asp Ala Gin Ala Gly Thr Gln Thr Asn Gly

445 450 455 460

Ala Gln Thr Ala Ser Asn Thr Ala Gly Asp Thr Asn Gly Lys Thr Lys

465 470 475

Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Set Asn Leu Asn Tyr Leu Lys Tyr

480 485 490

Gly Met Leu Thr Arg Lys Asn Set Lys Set Ala Met Gln Ala Gly Gly

495 500 505

Asn Set Set Gln Ala Asp Ala Lys Thr Glu Gln Val Glu Gln Set Met

510 515 520

Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro Thr Asp Gln

525 530 535 540

Asn Val Val Tyr Arg Gly Set Trp Tyr Gly His Ile Ala Asn Gly Thr

545 550 555

Set Trp Set Gly Asn Ala Set Asp Lys Glu Gly Gly Asn Arg Ala Glu

560 565 570

-37- 2720408

Phe Thr Val Asn Phe Ala Asp Lys Lys Ile Thr Gly Lys Leu Thr Ala

575 580 585

Glu Asn Arg Gln Ala Gln Thr Phe Thr Ile Glu Gly Met Ile Gln Gly

590 595 600

Asn Gly Phe Glu Gly Thr Ala Lys Thr Ala Glu Ser Gly Phe Asp Leu

605 610 615 620

Asp Gln Lys Asn Thr Thr Arg Thr Pro Lys Ala Tyr Ile Thr Asp Ala

625 630 635

Lys Val Lys Gly Gly Phe Tyr Gly Pro Lys Ala Glu Glu Leu Gly Gly

640 645 650

Trp Phe Ala Tyr Pro Gly Asp Lys Gin Thr Glu Lys Ala Thr Ala Thr

655 660 665

Set Set Asp Gly Asn Set Ala Ser Set Ala Thr Val Val Phe Gly Ala

670 675 680

Lys Arg Gln Gln Pro Val Gln

685 690

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 3:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 1808 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique) (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: N. meningitidis

(B) SOUCHE: IM2394

(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE: (A) NOM/CLE: sig_peptide

(B) EMPLACEMENT: 1..60

(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE: (A) NOM/CLE: mat_peptide

(B) EMPLACEMENT: 61..1797

(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:

(A) NOM/CLE: CDS

(B) EMPLACEMENT: 1..1797

(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE: (A) NOM/CLE: misc feature

(B) EMPLACEMENT: 61..1035

(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE: (A) NOM/CLE: miscfeature

(B) EMPLACEMENT: 1036..1386

(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE: (A) NOM/CLE: misc feature

(B) EMPLACEMENT: 1387..1797

(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:

-38- 2720408

(A) NOM/CLE: miscbinding

(B) EMPLACEMENT: 46..1050

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 3:

ATG AAC AAT CCA TTG GTA AAT CAG GCT GCT ATG GTG CTG CCT GTG TTT 48

Met Asn Asn Pro Leu Val Asn Gln Ala Ala Met Val Leu Pro Val Phe

-20 -15 -10 -5

TTG TTG AGT. GCT TGT CTG GGT GGC GGC GGC AGT TTC GAT TTG GAC AGC 96

Leu Leu Ser Ala Cys Leu Gly Gly Gly Gly Ser Phe Asp Leu Asp Ser

1 5 10

GTG GAA ACC GTG CAA GAT ATG CAC TCC AAA CCT AAG TAT GAG GAT GAA 144

Val Glu Thr Val Gln Asp Met His Ser Lys Pro Lys Tyr Glu Asp Glu

20 25

AAA AGC CAG CCT GAA AGC CAA CAG GAT GTA TCG GAA AAC AGC GGC GCG 192

Lys Ser Gln Pro Glu Ser Gln Gln Asp Val Ser Glu Asn Ser Gly Ala

35 40

GCT TAT GGC TTT GCA GTA AAA CTA CCT CGC CGG AAT GCA CAT TTT AAT 240

Ala Tyr Gly Phe Ala Val Lys Leu Pro Arg Arg Asn Ala His Phe Asn

50 55 60

CCT AAA TAT AAG GAA AAG CAC AAA CCA TTG GGT TCA ATG GAT TGG AAA 288

Pro Lys Tyr Lys Glu Lys His Lys Pro Leu Gly Ser Met Asp Trp Lys

70 75

AAA CTG CAA AGA GGA GAA CCA AAT AGT TTT AGT GAG AGG GAT GAA TTG 336

Lys Leu Gln Arg Gly Glu Pro Asn Ser Phe Ser Glu Arg Asp Glu Leu

85 90

GAA AAA AAA CGG GGT AGT TCT GAA CTT ATT GAA TCA AAA TGG GAA GAT 384

Glu Lys Lys Arg Gly Ser Ser Glu Leu Ile Glu Ser Lys Trp Glu Asp

100 105

GGG CAA AGT CGT GTA GTT GGT TAT ACA AAT TTC ACT TAT GTC CGT TCG 432

Gly Gln Ser Arg Val Val Gly Tyr Thr Asn Phe Thr Tyr Val Arg Ser

115 120

GGA TAT GTT TAC CTT AAT AAA AAT AAT ATT GAT ATT AAG AAT AAT ATA 480

Gly Tyr Val Tyr Leu Asn Lys Asn Asn Ile Asp Ile Lys Asn Asn Ile

130 135 140

GTT CTT TTT GGA CCT GAC GGA TAT CTT TAC TAT AAA GGG AAA GAA CCT 528

Val Leu Phe Gly Pro Asp Gly Tyr Leu Tyr Tyr Lys Gly Lys Glu Pro

150 155

TCC AAG GAG CTG CCA TCG GAA AAG ATA ACT TAT AAA GGT ACT TGG GAT 576

Ser Lys Glu Leu Pro Ser Glu Lys Ile Thr Tyr Lys Gly Thr Trp Asp

165 170

TAT GTT ACT GAT GCT ATG GAA AAA CAA AGG TTT GAA GGA TTG GGT AGT 624

Tyr Val Thr Asp Ala Met Glu Lys Gin Arg Phe Glu Gly Leu Gly Ser

180 185

GCA GCA GGA GGA GAT AAA TCG GGG GCG TTG TCT GCA TTA GAA GAA GGG 672

Ala Ala Gly Gly Asp Lys Ser Gly Ala Leu Ser Ala Leu Glu Glu Gly

195 200

GTA TTG CGT AAT CAG GCA GAG GCA TCA TCC GGT CAT ACC GAT TTT GGT 720

Val Leu Arg Asn Gln Ala Glu Ala Ser Ser Gly His Thr Asp Phe Gly

205 210 215 220

-39- 2720408

ATG ACT AGT GAG TTT GAG GTT GAT TTT TCT GAT AAA ACA ATA AAG GGC 768

Met Thr Set Glu Phe Glu Val Asp Phe Ser Asp Lys Thr Ile Lys Gly

225 230 235

ACA CTT TAT CGT AAC AAC CGT ATT ACT CAA AAT AAT AGT GAA AAC AAA 816

Thr Leu Tyr Arg Asn Asn Arg Ile Thr Gln Asn Asn Set Glu Asn Lys

240 245 250

CAA ATA AAA ACT ACG CGT TAC ACC ATT CAA GCA ACT CTT CAC GGC AAC 864

Gln Ile Lys Thr Thr Arg Tyr Thr Ile Gln Ala Thr Leu His Gly Asn

255 260 265

CGT TTC AAA GGT AAG GCG TTG GCG GCA GAT AAA GGT GCA ACA AAT GGA 912

Arg Phe Lys Gly Lys Ala Leu Ala Ala Asp Lys Gly Ala Thr Asn Gly

270 275 280

AGT CAT CCC TTT ATT TCC GAC TCC GAC AGT TTG GAA GGC GGA TTT TAC 960

Set His Pro Phe Ile Set Asp Set Asp Ser Leu Glu Gly Gly Phe Tyr

285 290 295 300

GGG CCG AAA GGC GAG GAA CTT GCC GGT AAA TTC TTG AGC AAC GAC AAC 1008

Gly Pro Lys Gly Glu Glu Leu Ala Gly Lys Phe Leu Set Asn Asp Asn

305 310 315

AAA GTT GCA GCG GTG TTT GGT GCG AAG CAG AAA GAT AAG AAG GAT GGG 1056

Lys Val Ala Ala Val Phe Gly Ala Lys Gln Lys Asp Lys Lys Asp Gly

320 325 330

GAA AAC GCG GCA GGG CCT GCA ACG GAA ACC GTG ATA GAT GCA TAC CGT 1104

Glu Asn Ala Ala Gly Pro Ala Thr Glu Thr Val Ile Asp Ala Tyr Arg

335 340 345

ATT ACC GGC GAG GAG TTT AAG AAA GAG CAA ATA GAC AGT TTT GGA GAT 1152

Ile Thr Gly Glu Glu Phe Lys Lys Glu Gin Ile Asp Set Phe Gly Asp

350 355 360

GTG AAA AAG CTG CTG GTT GAC GGA GTG GAG CTT TCA CTG CTG CCG TCT 1200

Val Lys Lys Leu Leu Val Asp Gly Val Glu Leu Set Leu Leu Pro Set

365 370 375 380

GAG GGC AAT AAG GCG GCA TTT CAG CAC GAG ATT GAG CAA AAC GGC GTG 1248

Glu Gly Asn Lys Ala Ala Phe Gln His Glu Ile Glu Gln Asn Gly Val

385 390 395

AAG GCA ACG GTG TGT TGT TCC AAC TTG GAT TAC ATG AGT TTT GGG AAG 1296

Lys Ala Thr Val Cys Cys Set Asn Leu Asp Tyr Met Set Phe Gly Lys

400 405 410

CTG TCA AAA GAA AAT AAA GAC GAT ATG TTC CTG CAA GGT GTC CGC ACT 1344

Leu Set Lys Glu Asn Lys Asp Asp Met Phe Leu Gln Gly Val Arg Thr

415 420 425

CCA GTA TCC GAT GTG GCG GCA AGG ACG GAG GCA AAC GCC AAA TAT CGC 1392

Pro Val Set Asp Val Ala Ala Arg Thr Glu Ala Asn Ala Lys Tyr Arg

430 435 440

GGT ACT TGG TAC GGA TAT ATT GCC AAC GGC ACA AGC TGG AGC GGC GAA 1440

Gly Thr Trp Tyr Gly Tyr Ile Ala Asn Gly Thr Set Trp Set Gly Glu

445 450 455 460

GCC TCC AAT CAG GAA GGT GGT AAT AGG GCA GAG TTT GAC GTG GAT TTT 1488

Ala Set Asn Gln Glu Gly Gly Asn Arg Ala Glu Phe Asp Val Asp Phe

465 470 475

-40- 2720408

TCC ACT AAA AAA ATC AGT GGC ACA CTG ACG GCA AAA GAC CGT ACG TCT 1536

Set Thr Lys Lys Ile Set Gly Thr Leu Thr Ala Lys Asp Arg Thr Set

480 485 490

CCT GCG TTT ACT ATT ACT GCC ATG ATT AAG GAC AAC GGT TTT TCA GGT 1584

Pro Ala Phe Thr Ile Thr Ala Met Ile Lys Asp Asn Gly Phe Ser Gly

495 500 505

GTG GCG AAA ACC GGT GAA AAC GGC TTT GCG CTG GAT CCG CAA AAT ACC 1632

Val Ala Lys Thr Gly Glu Asn Gly Phe Ala Leu Asp Pro Gln Asn Thr

510 515 520

GGA AAT TCC CAC TAT ACG CAT ATT GAA GCC ACT GTA TCC GGC GGT TTC 1680

Gly Asn Set His Tyr Thr His Ile Glu Ala Thr Val Set Gly Gly Phe

525 530 535 540

TAC GGC AAA AAC GCC ATC GAG ATG GGC GGA TCG TTC TCA TTT CCG GGA 1728

Tyr Gly Lys Asn Ala Ile Glu Met Gly Gly Set Phe Set Phe Pro Gly

*545 550 555

AAT GCA CCA GAG GGA AAA CAA GAA AAA GCA TCG GTG GTA TTC GGT GCG 1776

Asn Ala Pro Glu Gly Lys Gln Glu Lys Ala Set Val Val Phe Gly Ala

560 565 570

AAA CGC CAA CAG CTT GTG CAA TAAGCACGGC T 1808

Lys Arg Gln Gln Leu Val Gln

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 4:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 599 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 4:

Met Asn Asn Pro Leu Val Asn Gln Ala Ala Met Val Leu Pro Val Phe

-20 -15 -10 -5

Leu Leu Set Ala Cys Leu Gly Gly Gly Gly Set Phe Asp Leu Asp Set

1 5 10

Val Glu Thr Val Gin Asp Met His Set Lys Pro Lys Tyr Glu Asp Glu

20 25

Lys Set Gln Pro Glu Set Gln Gln Asp Val Set Glu Asn Set Gly Ala

35 40

Ala Tyr Gly Phe Ala Val Lys Leu Pro Arg Arg Asn Ala His Phe Asn

50 55 60

Pro Lys Tyr Lys Glu Lys His Lys Pro Leu Gly Set Met Asp Trp Lys

70 75

Lys Leu Gln Arg Gly Glu Pro Asn Set Phe Set Glu Arg Asp Glu Leu

85 90

Glu Lys Lys Arg Gly Set Set Glu Leu Ile Glu Set Lys Trp Glu Asp

100 105

-41- 2720408

Gly Gln Ser Arg Val Val Gly Tyr Thr Asn Phe Thr Tyr Val Arg Ser

115 120

Gly Tyr Val Tyr Leu Asn Lys Asn Asn Ile Asp Ile Lys Asn Asn Ile

130 135 140

Val Leu Phe Gly Pro Asp Gly Tyr Leu Tyr Tyr Lys Gly Lys Glu Pro

150 155

Ser Lys Glu Leu Pro Ser Glu Lys Ile Thr Tyr Lys Gly Thr Trp Asp

165 170

Tyr Val Thr Asp Ala Met Glu Lys Gln Arg Phe Glu Gly Leu Gly Ser

180 185

Ala Ala Gly Gly Asp Lys Ser Gly Ala Leu Ser Ala Leu Glu Glu Gly

195 200

Val Leu Arg Asn Gln Ala Glu Ala Ser Ser Gly His Thr Asp Phe Gly

205 210 215 220

Met Thr Ser Glu Phe Glu Val Asp Phe Ser Asp Lys Thr Ile Lys Gly

225 230 235

Thr Leu Tyr Arg Asn Asn Arg Ile Thr Gln Asn Asn Ser Glu Asn Lys

240 245 250

Gln Ile Lys Thr Thr Arg Tyr Thr Ile Gln Ala Thr Leu His Gly Asn

255 260 265

Arq Phe Lys Gly Lys Ala Leu Ala Ala Asp Lys Gly Ala Thr Asn Gly

270 275 280

Ser His Pro Phe Ile Ser Asp Ser Asp Ser Leu Glu Gly Gly Phe Tyr

285 290 295 300

Gly Pro Lys Gly Glu Glu Leu Ala Gly Lys Phe Leu Ser Asn Asp Asn

305 310 315

Lys Val Ala Ala Val Phe Gly Ala Lys Gln Lys Asp Lys Lys Asp Gly

320 325 330

Glu Asn Ala Ala Gly Pro Ala Thr Glu Thr Val Ile Asp Ala Tyr Arg

335 340 345

Ile Thr Gly Glu Glu Phe Lys Lys Glu Gln Ile Asp Ser Phe Gly Asp

350 355 360

Val Lys Lys Leu Leu Val Asp Gly Val Glu Leu Ser Leu Leu Pro Ser

365 370 375 380

Glu Gly Asn Lys Ala Ala Phe Gln His Glu Ile Glu Gln Asn Gly Val

385 390 395

Lys Ala Thr Val Cys Cys Ser Asn Leu Asp Tyr Met Ser Phe Gly Lys

400 405 410

Leu Ser Lys Glu Asn Lys Asp Asp Met Phe Leu Gln Gly Val Arg Thr

415 420 425

Pro Val Ser Asp Val Ala Ala Arg Thr Glu Ala Asn Ala Lys Tyr Arg

430 435 440

-42- 2720408

Gly Thr Trp Tyr Gly Tyr Ile Ala Asn Gly Thr Ser Trp Ser Gly Glu

445 450 455 460

Ala Ser Asn Gln Glu Gly Gly Asn Arg Ala Glu Phe Asp Val Asp Phe

465 470 475

Ser Thr Lys Lys Ile Ser Gly Thr Leu Thr Ala Lys Asp Arg Thr Ser

480 485 490

Pro Ala Phe-. Thr Ile Thr Ala Met Ile Lys Asp Asn Gly Phe Set Gly

495 500 505

Val Ala Lys Thr Gly Glu Asn Gly Phe Ala Leu Asp Pro Gln Asn Thr

510 515 520

Gly Asn Ser His Tyr Thr His Ile Glu Ala Thr Val Set Gly Gly Phe

525 530 535 540

Tyr Gly Lys Asn Ala Ile Glu Met Gly Gly Ser Phe Ser Phe Pro Gly

545 550 555

Asn Ala Pro Glu Gly Lys Gln Glu Lys Ala Ser Val Val Phe Gly Ala

560 565 570

Lys Arg Gln Gln Leu Val Gln

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 5:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 2255 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique) (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: N. meningitidis

(B) SOUCHE: M978

(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE: (A) NOM/CLE: mat_peptide

(B) EMPLACEMENT: 1..2115

(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:

(A) NOM/CLE: CDS

(B) EMPLACEMENT: 1..2115

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 5:

TGT CTG GGT GGC GGC GGC ACG TTC GAT CTT GAT TCT GTC GAT ACC GAA 48

Cys Leu Gly Gly Gly Gly Thr Phe Asp Leu Asp Set Val Asp Thr Glu

1 5 10 15

GCC CCG CGT CCC GCC CCA AAA TAT CAA GAT GTT TCT TCC GAA AAA CCG 96

Ala Pro Arg Pro Ala Pro Lys Tyr Gln Asp Val Set Set Glu Lys Pro

25 30

CAA GCC CAA AAA GAC CAA GGC GGA TAC GGT TTT GCA ATG CGC CTC AAG 144

Gln Ala Gln Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Gly Phe Ala Met Arg Leu Lys

40 45

-43- 2720408

CGG CGG AAT TGG CAT CCG CAG GCA AAT CCT AAA GAA GAT GAG ATA AAA 192

Arg Arg Asn Trp His Pro Gln Ala Asn Pro Lys Glu Asp Glu Ile Lys

55 60

CTT TCT GAA AAT GAT TGG GAG GCG ACA GGA TTG CCA GGC AAT CCC AAA 240

Leu Ser Glu Asn Asp Trp Glu Ala Thr Gly Leu Pro Gly Asn Pro Lys

70 75 80

AAC TTA CCT GAG CGA CAG AAA TCG GTT ATT GAA AAA GTA AAA ACA GGC 288

Asn Leu Pro. Glu Arg Gln Lys Ser Val Ile Glu Lys Val Lys Thr Gly

90 95

AGC GAC AGC AAT ATT TAT TCT TCC CCC TAT CTC ACG CAA TCA AAC CAT 336

Ser Asp Ser Asn Ile Tyr Ser Ser Pro Tyr Leu Thr Gln Ser Asn His

105 110

CAA AAC GGC AGT GCA AAC CAA CCA AAA AAT GAA GTA AAA GAT TAT AAA 384

Gln Asn Gly Ser Ala Asn Gln Pro Lys Asn Glu Val Lys Asp Tyr Lys

120 125

GAG TTC AAA TAT GTT TAT TCC GGT TGG TTT TAC AAA CAC GCT AAA CTC 432

Glu Phe Lys Tyr Val Tyr Ser Gly Trp Phe Tyr Lys His Ala Lys Leu

135 140

GAA ATC ATA AAA GAA AAC AAC TTA ATT AAG GGT GCA AAG AGC GGC GAC 480

Glu Ile Ile Lys Glu Asn Asn Leu Ile Lys Gly Ala Lys Ser Gly Asp

150 155 160

GAC GGT TAT ATC TTT TAT CAC GGT GAA AAA CCT TCC CGA CAA CTT CCC 528

Asp Gly Tyr Ile Phe Tyr His Gly Glu Lys Pro Ser Arg Gln Leu Pro

170 175

GTT TCT GGA GAA GTT ACC TAC AAA GGC GTA TGG CAT TTT GTA ACC GAT 576

Val Ser Gly Glu Val Thr Tyr Lys Gly Val Trp His Phe Val Thr Asp

185 190

ACG AAA CAG GGA CAA AAA TTT AAC GAT ATT CTT GGA ACC TCA AAA AAA 624

Thr Lys Gln Gly Gln Lys Phe Asn Asp Ile Leu Gly Thr Ser Lys Lys

200 205

CAA GGC GAC AGG TAT AGC GGA TTT CCG GGT GAT GAC GGC GAA GAA TAT 672

Gln Gly Asp Arg Tyr Ser Gly Phe Pro Gly Asp Asp Gly Glu Glu Tyr

210 215 220

TCC AAT AAA AAT GAA GCG ACT TTA CAA GGC AGT CAA GAG GGT TAT GGT 720

Ser Asn Lys Asn Glu Ala Thr Leu Gln Gly Ser Gln Glu Gly Tyr Gly

225 230 235 240

TTT ACC TCA AAT TTA AAA GTG GAT TTC AAT AAG AAA AAA TTG ACG GGT 768

Phe Thr Ser Asn Leu Lys Val Asp Phe Asn Lys Lys Lys Leu Thr Gly

245 250 255

GAA TTG ATA CGC AAT AAT AGA GTT ACA AAC GCT ACT GCT AAC GAT AAA 816

Glu Leu Ile Arg Asn Asn Arg Val Thr Asn Ala Thr Ala Asn Asp Lys

260 265 270

TAC ACC ACC CAA TAT TAC AGC CTT GAG GCT CAA GTA ACA GGC AAC CGC 864

Tyr Thr Thr Gln Tyr Tyr Ser Leu Glu Ala Gin Val Thr Gly Asn Arg

275 280 285

TTC AAC GGC AAG GCA ACG GCA ACC GAC AAA CCT GGC ACT GGA GAA ACC 912

Phe Asn Gly Lys Ala Thr Ala Thr Asp Lys Pro Gly Thr Gly Glu Thr

290 295 300

-44- 2720408

AAA CAA CAT CCC TTT GTT TCC GAC TCG TCT TCT TTG AGC GGC GGC TTT 960

Lys Gin His Pro Phe Val Set Asp Ser Ser Set Leu Set Gly Gly Phe

305 310 315 320

TTC GGC CCG AAG GGT GAG GAA TTG GGT TTC CGC TTT TTG AGC AAC GAT 1008

Phe Gly Pro Lys Gly Glu Glu Leu Gly Phe Arg Phe Leu Ser Asn Asp

325 330 335

CAA AAA GTT GCC GTT GTC GGC AGC GCG AAA ACC CAA GAC AAA GCC GCA 1056

Gln Lys Val Ala Val Val Gly Set Ala Lys Thr Gln Asp Lys Ala Ala

340 345 350

AAT GGC AAT ACT GCG GCG GCT TCA GGC GGC ACA GAT GCG GCA GCA TCA 1104

Asn Gly Asn Thr Ala Ala Ala Ser Gly Gly Thr Asp Ala Ala Ala Set

355 360 365

AAC GGT GCG GCA GGC ACG TCG TCT GAA AAC AGT AAG CTG ACC ACG GTT 1152

Asn Gly Ala Ala Gly Thr Ser Set Glu Asn Ser Lys Leu Thr Thr Val

370 375 380

TTG GAT GCG GTT GAA TTG ACA CTA AAC GAC AAG AAA ATC AAA AAT CTC 1200

Leu Asp Ala Val Glu Leu Thr Leu Asn Asp Lys Lys Ile Lys Asn Leu

385 390 395 400

GAC AAC TTC AGC AAT GCC GCC CAA CTG GTT GTC GAC GGC ATT ATG ATT 1248

Asp Asn Phe Set Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Asp Gly Ile Met Ile

405 410 415

CCG CTC CTG CCC GAG ACT TCC GAA AGT GGG AGC AAT CAG GCA GAT AAA 1296

Pro Leu Leu Pro Glu Thr Set Glu Set Gly Set Asn Gln Ala Asp Lys

420 425 430

GGT AAA AAA GGT AAA AAC GGT AAA AAC GGC GGA ACA GAC TTT ACC TAC 1344

Gly Lys Lys Gly Lys Asn Gly Lys Asn Gly Gly Thr Asp Phe Thr Tyr

435 440 445

AAA ACA ACC TAC ACG CCG AAA AAC GAT GAC AAA GAT ACC AAA GCC CAA 1392

Lys Thr Thr Tyr Thr Pro Lys Asn Asp Asp Lys Asp Thr Lys Ala Gln

450 455 460

ACA GGT GCG GCA GGC TCT AGC GGC GCA CAA ACC GAT TTG GGT AAG GCG 1440

Thr Gly Ala Ala Gly Set Set Gly Ala Gln Thr Asp Leu Gly Lys Ala

465 470 475 480

GAC GTT AAC GGC GGT AAG GCA GAA ACA AAA ACC TAT GAA GTC GAA GTC 1488

Asp Val Asn Gly Gly Lys Ala Glu Thr Lys Thr Tyr Glu Val Glu Val

485 490 495 TGC TGT TCC AAC CTC AAT TAT CTG AAA TAC GGA ATG TTG ACG CGT AAA 1536

Cys Cys Ser Asn Leu Asn Tyr Leu Lys Tyr Gly Met Leu Thr Arg Lys

500 505 510

AAC AGC AAG TCC GCG ATG CAG GCA GGA GGA AAC AGT AGT CAA GCT GAT 1584

Asn Set Lys Set Ala Met Gln Ala Gly Gly Asn Set Set Gln Ala Asp

515 520 525

GCT AAA ACG GAA CAA GTT GAA CAA AGT ATG TTC CTC CAA GGC GAG CGT 1632

Ala Lys Thr Glu Gln Val Glu Gln Set Met Phe Leu Gln Gly Glu Arg

530 535 540

ACC GAT GAA AAA GAG ATT CCA AAC GAC CAA AAC GTC GTT TAT CGG GGG 1680

Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro Asn Asp Gln Asn Val Val Tyr Arg Gly

545 550 555 560

-45- 2720408

TCT TGG TAC GGG CAT ATT GCC AGC AGC ACA AGC TGG AGC GGC AAT GCT 1728

Set Trp Tyr Gly His Ile Ala Ser Set Thr Set Trp Set Gly Asn Ala

565 570 575

TCC AAT GCA ACG AGT GGC AAC AGG GCG GAA TTT ACT GTG AAT TTC GAT 1776

Ser Asn Ala Thr Ser Gly Asn Arg Ala Glu Phe Thr Val Asn Phe Asp

580 585 590

ACG AAA AAA ATT AAC GGC ACG TTA ACC GCT GAA AAC AGG CAG GAG GCA 1824

Thr Lys Lys. Ile Asn Gly Thr Leu Thr Ala Glu Asn Arg Gln Glu Ala

595 600 605

ACC TTT ACC ATT GAT GGT AAG ATT GAG GGC AAC GGT TTT TCC GGT ACG 1872

Thr Phe Thr Ile Asp Gly Lys Ile Glu Gly Asn Gly Phe Set Gly Thr

610 615 620

GCA AAA ACT GCT GAC TTA GGT TTT GAT CTC GAT CAA AGC AAT ACC ACC 1920

Ala Lys Thr Ala Asp Leu Gly Phe Asp Leu Asp Gln Set Asn Thr Thr

625 630 635 640

GGC ACG CCT AAG GCA TAT ATC ACA GAT GCC AAG GTG CAG GGC GGT TTT 1968

Gly Thr Pro Lys Ala Tyr Ile Thr Asp Ala Lys Val Gln Gly Gly Phe

645 650 655

TAC GGG CCT AAA GCC GAA GAG TTG GGC GGA TGG TTT GCC TAT CCG GGC 2016

Tyr Gly Pro Lys Ala Glu Glu Leu Gly Gly Trp Phe Ala Tyr Pro Gly

660 665 670

GAT AAA CAA ACG GAA AAG GCA ACG GTT GCA TCC GGC GAT GGA AAT TCA 2064

Asp Lys Gln Thr Glu Lys Ala Thr Val Ala Set Gly Asp Gly Asn Set

675 680 685

GCA AGC AGC GCG ACC GTG GTA TTC GGT GCG AAA CGC CAA CAG CCT GTG 2112

Ala Set Set Ala Thr Val Val Phe Gly Ala Lys Arg Gln Gln Pro Val

690 695 700

CAA TAACTAAATG AAGTTGTCTG GGTGGCGGCG GCACGTTCGA TCTTGATTCT 2165

Gln

GTCGATACCG AAGCCCCGCG TCCCGCCCCA AAATATCAAG ATGTTTCTTC CGAAAAACCG 2225

CAAGCCCAAA AAGACCAAGG CGGATACGGT 2255

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 6:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 705 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 6:

Cys Leu Gly Gly Gly Gly Thr Phe Asp Leu Asp Set Val Asp Thr Glu

1 5 10 15

Ala Pro Arg Pro Ala Pro Lys Tyr Gln Asp Val Set Set Glu Lys Pro

25 30

Gln Ala Gln Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Gly Phe Ala Met Arg Leu Lys

40 45

-46- 2720408

Arg Arg Asn Trp His Pro Gln Ala Asn Pro Lys Glu Asp Glu Ile Lys

55 60

Leu Ser Glu Asn Asp Trp Glu Ala Thr Gly Leu Pro Gly Asn Pro Lys

*70 75 80

Asn Leu Pro Glu Arg Gln Lys Ser Val Ile Glu Lys Val Lys Thr Gly

90 95

Ser Asp Ser Asn Ile Tyr Ser Ser Pro Tyr Leu Thr Gln Ser Asn His

105 110

Gln Asn Gly Ser Ala Asn Gln Pro Lys Asn Glu Val Lys Asp Tyr Lys

120 125

Glu Phe Lys Tyr Val Tyr Ser Gly Trp Phe Tyr Lys His Ala Lys Leu

135 140

Glu Ile Ile Lys Glu Asn Asn Leu Ile Lys Gly Ala Lys Ser Gly Asp

150 155 160

Asp Gly Tyr Ile Phe Tyr His Gly Glu Lys Pro Ser Arg Gln Leu Pro

170 175

Val Ser Gly Glu Val Thr Tyr Lys Gly Val Trp His Phe Val Thr Asp

185 190

Thr Lys Gln Gly Gln Lys Phe Asn Asp Ile Leu Gly Thr Ser Lys Lys

200 205

Gln Gly Asp Arg Tyr Ser Gly Phe Pro Gly Asp Asp Gly Glu Glu Tyr

210 215 220

Ser Asn Lys Asn Glu Ala Thr Leu Gln Gly Ser Gln Glu Gly Tyr Gly

225 230 235 240

Phe Thr Ser Asn Leu Lys Val Asp Phe Asn Lys Lys Lys Leu Thr Gly

245 250 255

Glu Leu Ile Arg Asn Asn Arg Val Thr Asn Ala Thr Ala Asn Asp Lys

260 265 270

Tyr Thr Thr Gln Tyr Tyr Ser Leu Glu Ala Gln Val Thr Gly Asn Arg

275 280 285

Phe Asn Gly Lys Ala Thr Ala Thr Asp Lys Pro Gly Thr Gly Glu Thr

290 295 300

Lys Gln His Pro Phe Val Ser Asp Ser Ser Ser Leu Ser Gly Gly Phe

305 310 315 320

Phe Gly Pro Lys Gly Glu Glu Leu Gly Phe Arg Phe Leu Ser Asn Asp

325 330 335

Gln Lys Val Ala Val Val Gly Ser Ala Lys Thr Gln Asp Lys Ala Ala

340 345 350

Asn Gly Asn Thr Ala Ala Ala Ser Gly Gly Thr Asp Ala Ala Ala Ser

355 360 365

Asn Gly Ala Ala Gly Thr Ser Ser Glu Asn Ser Lys Leu Thr Thr Val

370 375 380

-47- 2720408

Leu Asp Ala Val Glu Leu Thr Leu Asn Asp Lys Lys Ile Lys Asn Leu

385 390 395 400

Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Asp Gly Ile Met Ile

405 410 415

Pro Leu Leu Pro Glu Thr Ser Glu Ser Gly Ser Asn Gln Ala Asp Lys

420 425 430

Gly Lys Lys Gly Lys Asn Gly Lys Asn Gly Gly Thr Asp Phe Thr Tyr

435 440 445

Lys Thr Thr Tyr Thr Pro Lys Asn Asp Asp Lys Asp Thr Lys Ala Gln

450 455 460

Thr Gly Ala Ala Gly Ser Ser Gly Ala Gin Thr Asp Leu Gly Lys Ala

465 470 475 480

Asp Val Asn Gly Gly Lys Ala Glu Thr Lys Thr Tyr Glu Val Glu Val

485 490 495

Cys Cys Ser Asn Leu Asn Tyr Leu Lys Tyr Gly Met Leu Thr Arg Lys

500 505 510

Asn Ser Lys Ser Ala Met Gin Ala Gly Gly Asn Ser Ser Gln Ala Asp

515 520 525

Ala Lys Thr Glu Gln Val Glu Gln Ser Met Phe Leu Gln Gly Glu Arg

530 535 540

Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro Asn Asp Gin Asn Val Val Tyr Arg Gly

545 550 555 560

Ser Trp Tyr Gly His Ile Ala Ser Ser Thr Ser Trp Ser Gly Asn Ala

565 570 575

Ser Asn Ala Thr Ser Gly Asn Arg Ala Glu Phe Thr Val Asn Phe Asp

580 585 590

Thr Lys Lys Ile Asn Gly Thr Leu Thr Ala Glu Asn Arg Gln Glu Ala

595 600 605

Thr Phe Thr Ile Asp Gly Lys Ile Glu Gly Asn Gly Phe Ser Gly Thr

610 615 620

Ala Lys Thr Ala Asp Leu Gly Phe Asp Leu Asp Gln Ser Asn Thr Thr

625 630 635 640

Gly Thr Pro Lys Ala Tyr Ile Thr Asp Ala Lys Val Gln Gly Gly Phe

645 650 655

Tyr Gly Pro Lys Ala Glu Glu Leu Gly Gly Trp Phe Ala Tyr Pro Gly

660 665 670

Asp Lys Gln Thr Glu Lys Ala Thr Val Ala Ser Gly Asp Gly Asn Ser

675 680 685

Ala Ser Ser Ala Thr Val Val Phe Gly Ala Lys Arg Gln Gln Pro Val

690 695 700

Gln

-48- 2720408

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 7:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 2114 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique) (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: N. meningitidis

(B) SOUCHE: 6940

(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE: (A) NOM/CLE: mat_peptide

(B) EMPLACEMENT: 1..2079

(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:

(A) NOM/CLE: CDS

(B) EMPLACEMENT: 1..2079

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 7:

TGT TTG GGT GGC GGC GGC ACG TTC GAT CTT GAT TCT GTC GAT ACC GAA 48

Cys Leu Gly Gly Gly Gly Thr Phe Asp Leu Asp Ser Val Asp Thr Glu

1 5 10 15

GCC CCG CGT CCC GAC CCA AAG TAT CAA GAT GTT TCT TCC GAA AAA CCG 96

Ala Pro Arg Pro Asp Pro Lys Tyr Gln Asp Val Ser Ser Glu Lys Pro

25 30

CAA GCC CAA AAA GAC CAA GGC GGA TAC GGT TTT GCG ATG AGG TTG AAA 144

Gln Ala Gln Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Gly Phe Ala Met Arg Leu Lys

40 45

CGG AGG AAT TGG TAT TCC GCA GCA AAA GAA GAC GAG GTT AAA CTG AAC 192

Arg Arg Asn Trp Tyr Ser Ala Ala Lys Glu Asp Glu Val Lys Leu Asn

55 60

GAG AGT GAT TGG GAG ACG ACA GGA TTG CCG ACA GAA CCC AAG AAA CTG 240

Glu Set Asp Trp Glu Thr Thr Gly Leu Pro Thr Glu Pro Lys Lys Leu

70 75 80

CCA TTA AAA CAA GAA TCC GTC ATT TCA AAA GTA CAA GCA AAC AAT GGC 288

Pro Leu Lys Gln Glu Ser Val Ile Ser Lys Val Gln Ala Asn Asn Gly

90 95

GAC AAC AAT ATT TAC ACT TCC CCC TAT CTC ACG CAA TCA AAC CAT CAA 336

Asp Asn Asn Ile Tyr Thr Ser Pro Tyr Leu Thr Gln Set Asn His Gln

105 110

AAT AGC AGC ATT AAT GGC GGT GCA AAC CTG CCA AAA AAC GAA GTA ACA 384

Asn Set Ser Ile Asn Gly Gly Ala Asn Leu Pro Lys Asn Glu Val Thr

120 125

AAT TAT AAA GAT TTC AAA TAT GTT TAT TCC GGC TGG TTT TAT AAA CAT 432

Asn Tyr Lys Asp Phe Lys Tyr Val Tyr Ser Gly Trp Phe Tyr Lys His

135 140

GCT AAA AAC GAA ATC ATA AGA GAA AAC AGC TCA ATT AAG GGT GCA AAG 480

Ala Lys Asn Glu Ile Ile Arg Glu Asn Ser Ser Ile Lys Gly Ala Lys

150 155 160

-49- 2720408

AAC GGC GAC GAC GGC TAT ATC TTT TAT CAC GGC AAA GAA CCT TCC CGA 528

Asn Gly Asp Asp Gly Tyr Ile Phe Tyr His Gly Lys Glu Pro Ser Arq

170 175

CAA CTT CCC GCT TCT GGA ACA GTT ACC TAT AAA GGT GTG TGG CAT TTT 576

Gln Leu Pro Ala Ser Gly Thr Val Thr Tyr Lys Gly Val Trp His Phe

185 190

GCG ACC GAT GTC AAA AAA TCC CAA AAT TTT CGC GAT ATT ATC CAG CCT 624

Ala Thr Asp. Val Lys Lys Ser Gln Asn Phe Arg Asp Ile Ile Gln Pro

200 205

TCG AAA AAA CAA GGC GAC AGG TAT AGC GGA TTT TCG GGC GAT GAT GAT 672

Ser Lys Lys Gln Gly Asp Arg Tyr Ser Gly Phe Ser Gly Asp Asp Asp

210 215 220

GAA CAA TAT TCT AAT AAA AAC GAA TCC ATG CTG AAA GAT GGT CAA GAG 720

Glu Gln Tyr Ser Asn Lys Asn Glu Ser Met Leu Lys Asp Gly Gln Glu

225 230 235 240

GGT TAT GGT TTT ACC TCG AAT TTA GAA GTG GAT TTC GGC AGT AAA AAA 768

Gly Tyr Gly Phe Thr Ser Asn Leu Glu Val Asp Phe Gly Ser Lys Lys

245 250 255

TTG ACG GGT AAA TTA ATA CGC AAT AAT AGA GTT ACA AAC GCT CCT ACT 816

Leu Thr Gly Lys Leu Ile Arg Asn Asn Arg Val Thr Asn Ala Pro Thr

260 265 270

AAC GAT AAA TAC ACC ACC CAA TAC TAC AGC CTT GAT GCC CAA ATA ACA 864

Asn Asp Lys Tyr Thr Thr Gin Tyr Tyr Set Leu Asp Ala Gln Ile Thr

275 280 285

GGC AAC CGC TTC AAC GGT AAG GCG ATA CGG ACC GAC AAA CCC GAC ACT 912

Gly Asn Arg Phe Asn Gly Lys Ala Ile Arg Thr Asp Lys Pro Asp Thr

290 295 300

GGA GGA ACC AAA CTA CAT CCC TTT GTT TCC GAC TCG TCT TCT TTG AGC 960

Gly Gly Thr Lys Leu His Pro Phe Val Set Asp Set Ser Set Leu Set

305 310 315 320

GGC GGC TTT TTC GGT CCG AAG GGT GAG GAA TTG GGT TTC CGC TTT TTG 1008

Gly Gly Phe Phe Gly Pro Lys Gly Glu Glu Leu Gly Phe Arg Phe Leu

325 330 335

AGC GAC GAT AAA AAA GTT GCG GTT GTC GGC AGC GCG AAA ACC AAA GAC 1056

Set Asp Asp Lys Lys Val Ala Val Val Gly Ser Ala Lys Thr Lys Asp

340 345 350

AAA ACG GAA AAT GGC GCG GTG GCT TCA GGC GGC ACA GAT GCG GCA GCA 1104

Lys Thr Glu Asn Gly Ala Val Ala Set Gly Gly Thr Asp Ala Ala Ala

355 360 365

TCA AAC GGT GCG GCA GGC ACG TCG TCT GAA AAC AGT AAG CTG ACC ACG 1152

Set Asn Gly Ala Ala Gly Thr Set Set Glu Asn Set Lys Leu Thr Thr

370 375 380

GTT TTG GAT GCG GTC GAG CTG AAA TTG GGC GAT AAG GAA GTC CAA AAG 1200

Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Lys Leu Gly Asp Lys Glu Val Gln Lys

385 390 395 400

CTC GAC AAC TTC AGC AAC GCC GCC CAA CTG GTT GTC GAC GGC ATT ATG 1248

Leu Asp Asn Phe Set Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Asp Gly Ile Met

405 410 415

-50- 2720408

ATT CCG CTC TTG CCC GAG GCT TCC GAA AGT GGG AAC AAT CAA GCC AAT 1296

Ile Pro Leu Leu Pro Glu Ala Ser Glu Set Gly Asn Asn Gin Ala Asn

420 425 430

CAA GGT ACA AAT GGC GGA ACA GCC TTT ACC CGC AAA TTT GAC CAC ACG 1344

Gln Gly Thr Asn Gly Gly Thr Ala Phe Thr Arg Lys Phe Asp His Thr

435 440 445

CCG GAA AGT GAT AAA AAA GAC GCC CAA GCA GGT ACG CAG ACG AAT GGG 1392

Pro Glu Ser.Asp Lys Lys Asp Ala Gln Ala Gly Thr Gln Thr Asn Gly

450 455 460

GCG CAA ACC GCT TCA AAT ACG GCA GGT GAT ACC AAT GGC AAA ACA AAA 1440

Ala Gln Thr Ala Set Asn Thr Ala Gly Asp Thr Asn Gly Lys Thr Lys

465 470 475 480

ACC TAT GAA GTC GAA GTC TGC TGT TCC AAC CTC AAT TAT CTG AAA TAC 1488

Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Set Asn Leu Asn Tyr Leu Lys Tyr

485 490 495

GGA ATG TTG ACG CGC AAA AAC AGC AAG TCC GCG ATG CAG GCA GGA GAA 1536

Gly Met Leu Thr Arg Lys Asn Set Lys Set Ala Met Gln Ala Gly Glu

500 505 510

AGC AGT AGT CAA GCT GAT GCT AAA ACG GAA CAA GTT GAA CAA AGT ATG 1584

Set Set Set Gln Ala Asp Ala Lys Thr Glu Gln Val Glu Gln Set Met

515 520 525

TTC CTC CAA GGC GAG CGC ACC GAT GAA AAA GAG ATT CCA AGC GAG CAA 1632

Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro Set Glu Gln

530 535 540

AAC ATC GTT TAT CGG GGG TCT TGG TAC GGA TAT ATT GCC AAC GAC AAA 1680

Asn Ile Val Tyr Arg Gly Set Trp Tyr Gly Tyr Ile Ala Asn Asp Lys

545 550 555 560

AGC ACA AGC TGG AGC GGC AAT GCT TCC AAT GCA ACG AGT GGC AAC AGG 1728

Set Thr Set Trp Set Gly Asn Ala Set Asn Ala Thr Ser Gly Asn Arg

565 570 575

GCG GAA TTT ACT GTG AAT TTT GCC GAT AAA AAA ATT ACT GGT ACG TTA 1776

Ala Glu Phe Thr Val Asn Phe Ala Asp Lys Lys Ile Thr Gly Thr Leu

580 585 590

ACC GCT GAC AAC AGG CAG GAG GCA ACC TTT ACC ATT GAT GGT AAT ATT 1824

Thr Ala Asp Asn Arg Gln Glu Ala Thr Phe Thr Ile Asp Gly Asn Ile

595 600 605

AAG GAC AAC GGC TTT GAA GGT ACG GCG AAA ACT GCT GAG TCA GGT TTT 1872

Lys Asp Asn Gly Phe Glu Gly Thr Ala Lys Thr Ala Glu Set Gly Phe

610 615 620

GAT CTC GAT CAA AGC AAT ACC ACC CGC ACG CCT AAG GCA TAT ATC ACA 1920

Asp Leu Asp Gln Set Asn Thr Thr Arg Thr Pro Lys Ala Tyr Ile Thr

625 630 635 640

GAT GCC AAG GTG CAG GGC GGT TTT TAC GGG CCC AAA GCC GAA GAG TTG 1968

Asp Ala Lys Val Gln Gly Gly Phe Tyr Gly Pro Lys Ala Glu Glu Leu

645 650 655

GGC GGA TGG TTT GCC TAT CCG GGC GAT AAA CAA ACG AAA AAT GCA ACA 2016

Gly Gly Trp Phe Ala Tyr Pro Gly Asp Lys Gln Thr Lys Asn Ala Thr

660 665 670

-51- 2720408

AAT GCA TCC GGC AAT AGC AGT GCA ACT GTC GTA TTC GGT GCG AAA CGC 2064

Asn Ala Ser Gly Asn Ser Ser Ala Thr Val Val Phe Gly Ala Lys Arg

675 680 685

CAA CAG CCT GTG CGA TAACGCAAGC CCAAAAAGAC CAAGGCGGAT ACGGT 2114

Gln Gln Pro Val Arg

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 8:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 693 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 8:

Cys Leu Gly Gly Gly Gly Thr Phe Asp Leu Asp Ser Val Asp Thr Glu

1 5 10 15

Ala Pro Arg Pro Asp Pro Lys Tyr Gln Asp Val Ser Set Glu Lys Pro

25 30

Gln Ala Gln Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Gly Phe Ala Met Arg Leu Lys

40 45

Arg Arg Asn Trp Tyr Ser Ala Ala Lys Glu Asp Glu Val Lys Leu Asn

55 60

Glu Ser Asp Trp Glu Thr Thr Gly Leu Pro Thr Glu Pro Lys Lys Leu

70 75 80

Pro Leu Lys Gln Glu Ser Val Ile Set Lys Val Gln Ala Asn Asn Gly

90 95

Asp Asn Asn Ile Tyr Thr Set Pro Tyr Leu Thr Gln Ser Asn His Gln

105 110

Asn Ser Ser Ile Asn Gly Gly Ala Asn Leu Pro Lys Asn Glu Val Thr

120 125

Asn Tyr Lys Asp Phe Lys Tyr Val Tyr Set Gly Trp Phe Tyr Lys His

135 140

* Ala Lys Asn Glu Ile Ile Arg Glu Asn Set Set Ile Lys Gly Ala Lys

150 155 160

Asn Gly Asp Asp Gly Tyr Ile Phe Tyr His Gly Lys Glu Pro Set Arg

170 175

Gln Leu Pro Ala Set Gly Thr Val Thr Tyr Lys Gly Val Trp His Phe

185 190

Ala Thr Asp Val Lys Lys Set Gln Asn Phe Arg Asp Ile Ile Gln Pro

200 205

Set Lys Lys Gln Gly Asp Arg Tyr Ser Gly Phe Set Gly Asp Asp Asp

210 215 220

Glu Gln Tyr Ser Asn Lys Asn Glu Set Met Leu Lys Asp Gly Gln Glu

225 230 235 240

-52- 2720408

Gly Tyr Gly Phe Thr Ser Asn Leu Glu Val Asp Phe Gly Ser Lys Lys

245 250 255

Leu Thr Gly Lys Leu Ile Arg Asn Asn Arg Val Thr Asn Ala Pro Thr

260 265 270

Asn Asp Lys Tyr Thr Thr Gln Tyr Tyr Ser Leu Asp Ala Gln Ile Thr

275 280 285

Gly Asn Arg Phe Asn Gly Lys Ala Ile Arg Thr Asp Lys Pro Asp Thr

290 295 300

Gly Gly Thr Lys Leu His Pro Phe Val Ser Asp Ser Ser Ser Leu Ser

305 310 315 320

Gly Gly Phe Phe Gly Pro Lys Gly Glu Glu Leu Gly Phe Arg Phe Leu

325 330 335

Ser Asp Asp Lys Lys Val Ala Val Val Gly Ser Ala Lys Thr Lys Asp

340 345 350

Lys Thr Glu Asn Gly Ala Val Ala Ser Gly Gly Thr Asp Ala Ala Ala

355 360 365

Ser Asn Gly Ala Ala Gly Thr Ser Ser Glu Asn Ser Lys Leu Thr Thr

370 375 380

Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Lys Leu Gly Asp Lys Glu Val Gln Lys

385 390 395 400

Leu Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Asp Gly Ile Met

405 410 415

Ile Pro Leu Leu Pro Glu Ala Ser Glu Ser Gly Asn Asn Gln Ala Asn

420 425 430

Gln Gly Thr Asn Gly Gly Thr Ala Phe Thr Arg Lys Phe Asp His Thr

435 440 445

Pro Glu Ser Asp Lys Lys Asp Ala Gln Ala Gly Thr Gln Thr Asn Gly

450 455 460

Ala Gln Thr Ala Ser Asn Thr Ala Gly Asp Thr Asn Gly Lys Thr Lys

465 470 475 480

Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Ser Asn Leu Asn Tyr Leu Lys Tyr

485 490 495

Gly Met Leu Thr Arg Lys Asn Ser Lys Ser Ala Met Gln Ala Gly Glu

500 505 510

Ser Ser Ser Gln Ala Asp Ala Lys Thr Glu Gln Val Glu Gln Ser Met

515 520 525

Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro Ser Glu Gln

530 535 540

Asn Ile Val Tyr Arg Gly Ser Trp Tyr Gly Tyr Ile Ala Asn Asp Lys

545 550 555 560

Ser Thr Ser Trp Ser Gly Asn Ala Ser Asn Ala Thr Ser Gly Asn Arg

565 570 575

-53- 2720408

Ala Glu Phe Thr Val Asn Phe Ala Asp Lys Lys Ile Thr Gly Thr Leu

580 585 590

Thr Ala Asp Asn Arg Gln Glu Ala Thr Phe Thr Ile Asp Gly Asn Ile

595 600 605

Lys Asp Asn Gly Phe Glu Gly Thr Ala Lys Thr Ala Glu Ser Gly Phe

610 615 620

Asp Leu Asp Gln Ser Asn Thr Thr Arg Thr Pro Lys Ala Tyr Ile Thr

625 630 635 640

Asp Ala Lys Val Gin Gly Gly Phe Tyr Gly Pro Lys Ala Glu Glu Leu

645 650 655

Gly Gly Trp Phe Ala Tyr Pro Gly Asp Lys Gln Thr Lys Asn Ala Thr

660 665 670

Asn Ala Ser Gly Asn Ser Ser Ala Thr Val Val Phe Gly Ala Lys Arg

675 680 685

Gln Gln Pro Val Arg

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 9:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 2114 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique) (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: N. meningitidis

(B) SOUCHE: S3032

<ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE: (A) NOM/CLE: matpeptide

(B) EMPLACEMENT: 1..2097

(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:

(A) NOM/CLE: CDS

(B) EMPLACEMENT: 1..2097

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 9:

TGT TTG GGC GGA GGC GGC GGC AGT TTC GAT CTT GAT TCT GTC GAT ACC 48

Cys Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser Phe Asp Leu Asp Ser Val Asp Thr

1 5 10 15

GAA GCC CCG CGT CCC GCG CCA AAG TAT CAA GAT GTT TCT TCC GAA AAA 96

Glu Ala Pro Arg Pro Ala Pro Lys Tyr Gln Asp Val Ser Ser Glu Lys

25 30

CCG CAA GCC CAA AAA GAC CAA GGC GGA TAC GGT TTT GCG ATG AGG TTG 144

Pro Gln Ala Gln Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Gly Phe Ala Met Arg Leu

40 45

AAA CGG AGG AAT TGG TAT CCG TCG GCA AAA GAA AAC GAG GTT AAA CTG 192

Lys Arg Arg Asn Trp Tyr Pro Ser Ala Lys Glu Asn Glu Val Lys Leu

55 60

-54- 2720408

AAT GAG AGT GAT TGG GAG ACG ACA GGA TTG CCA AGC AAT CCC AAA AAC 240

Asn Glu Ser Asp Trp Glu Thr Thr Gly Leu Pro Set Asn Pro Lys Asn

70 75 80

TTA CCT GAG CGA CAG AAA TCG GTT ATT GAT CAA GTA GAA ACA GAT GGC 288

Leu Pro Glu Arg Gln Lys Set Val Ile Asp Gin Val Glu Thr Asp Gly

90 95

GAC AGC AAT AAC AGC AAT ATT TAT TCT TCC CCC TAT CTC ACG CAA TCA 336

Asp Set Asn Asn Set Asn Ile Tyr Set Set Pro Tyr Leu Thr Gln Set

105 110

AAC CAT CAA AAC GGC AAC ACT GGC AAC GGT GTA AAC CAA CCA AAA AAC 384

Asn His Gln Asn Gly Asn Thr Gly Asn Gly Val Asn Gln Pro Lys Asn

120 125

GAA GTA ACA GAT TAC AAA AAT TTT AAA TAT GTT TAT TCC GGC TGG TTT 432

Glu Val Thr Asp Tyr Lys Asn Phe Lys Tyr Val Tyr Set Gly Trp Phe

135 140

TAC AAA CAC GCC AAA CGA GAG GTT AAC TTA GCG GTG GAA CCT AAA ATT 480

Tyr Lys His Ala Lys Arg Glu Val Asn Leu Ala Val Glu Pro Lys Ile

150 155 160

GCA AAA AAC GGC GAC GAC GGT TAT ATC TTC TAT CAC GGT AAA GAC CCT 528

Ala Lys Asn Gly Asp Asp Gly Tyr Ile Phe Tyr His Gly Lys Asp Pro

170 175

TCC CGA CAA CTT CCC GCT TCT GGA AAA ATT ACC TAT AAA GGT GTG TGG 576

Set Arg Gln Leu Pro Ala Set Gly Lys Ile Thr Tyr Lys Gly Val Trp

185 190

CAT TTT GCG ACC GAT ACA AAA AGG GGT CAA AAA TTT CGT GAA ATT ATC 624

His Phe Ala Thr Asp Thr Lys Arg Gly Gin Lys Phe Arg Glu Ile Ile

200 205

CAA CCT TCA AAA AAT CAA GGC GAC AGA TAT AGC GGA TTT TCG GGT GAT 672

Gln Pro Set Lys Asn Gln Gly Asp Arg Tyr Set Gly Phe Set Gly Asp

210 215 220

GAT GAT GAA CAA TAT TCT AAT AAA AAC GAA TCC ATG CTG AAA GAT GGT 720

Asp Asp Glu Gln Tyr Set Asn Lys Asn Glu Set Met Leu Lys Asp Gly

225 230 235 240

CAT GAA GGT TAT GGT TTT GCC TCG AAT TTA GAA GTG GAT TTC GAC AAT 768

His Glu Gly Tyr Gly Phe Ala Set Asn Leu Glu Val Asp Phe Asp Asn

245 250 255

AAA AAA TTG ACG GGT AAA TTA ATA CGC AAT AAT GCG AAC CAA AAT AAT 816

Lys Lys Leu Thr Gly Lys Leu Ile Arg Asn Asn Ala Asn Gln Asn Asn

260 265 270

AAT ACT AAT AAT GAC AAA CAC ACC ACC CAA TAC TAC AGC CTT GAT GCG 864

Asn Thr Asn Asn Asp Lys His Thr Thr Gln Tyr Tyr Set Leu Asp Ala

275 280 285

ACG CTT AAG GGA AAC CGC TTC AGC GGA AAA GCG GAA GCA ACC GAC AAA 912

Thr Leu Lys Gly Asn Arg Phe Set Gly Lys Ala Glu Ala Thr Asp Lys

290 295 300

CCC AAA AAC GAC GGC GAA ACC AAG GAA CAT CCC TTT GTT TCC GAC TCG 960

Pro Lys Asn Asp Gly Glu Thr Lys Glu His Pro Phe Val Set Asp Ser

305 310 315 320

-55- 2720408

TCT TCT TTG AGC GGC GGC TTT TTC GGC CCG CAG GGT GAG GAA TTG GGT 1008

Ser Ser Leu Ser Gly Gly Phe Phe Gly Pro Gln Gly Glu Glu Leu Gly

325 330 335

TTC CGC TTT TTG AGC AAC GAT CAA AAA GTT GCC GTT GTC GGC AGC GCG 1056

Phe Arg Phe Leu Ser Asn Asp Gin Lys Val Ala Val Val Gly Ser Ala

340 345 350

AAA ACC AAA GAC AAA CCC GCA AAT GGC AAT ACT GCG GAG GCT TCA GGC 1104

Lys Thr Lys Asp Lys Pro Ala Asn Gly Asn Thr Ala Glu Ala Ser Gly

355 360 365

GGC ACA GAT GCG GCA GCA TCG GGC GGT GCG GCA GGC ACG TCG TCT GAA 1152

Gly Thr Asp Ala Ala Ala Set Gly Gly Ala Ala Gly Thr Ser Ser Glu

370 375 380

AAC AGT AAG CTG ACC ACG GTT TTG GAT GCG GTC GAG CTG ACG CAC GGC 1200

Asn Set Lys Leu Thr Thr Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Thr His Gly

385 390 395 400

GGC ACA GCA ATC AAA AAT CTC GAC AAC TTC AGC AAT GCC GCC CAA CTG 1248

Gly Thr Ala Ile Lys Asn Leu Asp Asn Phe Set Asn Ala Ala Gln Leu

405 410 415

GTT GTC GAC GGC ATT ATG ATT CCG CTC CTG CCT CAA AAT TCA ACA GGC 1296

Val Val Asp Gly Ile Met Ile Pro Leu Leu Pro Gln Asn Ser Thr Gly

420 425 430

AAA AAT AAT CAG CCC GAT CAA GGT AAA AAC GGC GGA ACA GCC TTT ATC 1344

Lys Asn Asn Gln Pro Asp Gln Gly Lys Asn Gly Gly Thr Ala Phe Ile

435 440 445

TAT AAA ACG ACC TAC ACG CCG AAA AAC GAT GAC AAA GAT ACC AAA GCC 1392

Tyr Lys Thr Thr Tyr Thr Pro Lys Asn Asp Asp Lys Asp Thr Lys Ala

450 455 460

CAA ACA GTC ACG GGC GGC ACG CAA ACC GCT TCA AAT ACG GCA GGT GAT 1440

Gln Thr Val Thr Gly Gly Thr Gln Thr Ala Set Asn Thr Ala Gly Asp

465 470 475 480

GCC AAT GGC AAA ACA AAA ACC TAT GAA GTC GAA GTC TGC TGT TCC AAC 1488

Ala Asn Gly Lys Thr Lys Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Set Asn

485 490 495

CTC AAT TAT CTG AAA TAC GGG TTG CTG ACG CGC AAA ACT GCC GGC AAC 1536

Leu Asn Tyr Leu Lys Tyr Gly Leu Leu Thr Arg Lys Thr Ala Gly Asn

500 505 510

ACG GTG GGA AGC GGC AAC AGC AGC CCA ACC GCC GCC GCC CAA ACG GAC 1584

Thr Val Gly Set Gly Asn Set Set Pro Thr Ala Ala Ala Gln Thr Asp

515 520 525

GCG CAG AGT ATG TTC CTC CAA GGC GAG CGC ACC GAT GAA AAC AAG ATT 1632

Ala Gin Set Met Phe Leu Gin Gly Glu Arg Thr Asp Glu Asn Lys Ile

530 535 540

CCA AGC GAG CAA AAC GTC GTT TAT CGG GGG TCT TGG TAC GGG CAT ATT 1680

Pro Set Glu Gln Asn Val Val Tyr Arg Gly Set Trp Tyr Gly Ris Ile

545 550 555 560

GCC AGC AGC ACA AGC TGG AGC GGC AAT GCT TCT GAT AAA GAG GGC GGC 1728

Ala Set Set Thr Set Trp Set Gly Asn Ala Set Asp Lys Glu Gly Gly

565 570 575

-56- 2720408

AAC AGG GCG GAA TTT ACT GTG AAT TTT GGC GAG AAA AAA ATT ACC GGC 1776

Asn Arg Ala Glu Phe Thr Val Asn Phe Gly Glu Lys Lys Ile Thr Gly

580 585 590

ACG TTA ACC GCT GAA AAC AGG CAG GAG GCA ACC TTT ACC ATT GAT GGT 1824

Thr Leu Thr Ala Glu Asn Arg Gln Glu Ala Thr Phe Thr Ile Asp Gly

595 600 605

AAG ATT GAG GGC AAC GGT TTT TCC GGT ACG GCA AAA ACT GCT GAA TTA 1872

Lys Ile Glu Gly Asn Gly Phe Ser Gly Thr Ala Lys Thr Ala Glu Leu

610 615 620

GGT TTT GAT CTC GAT CAA AAA AAT ACC ACC CGC ACG CCT AAG GCA TAT 1920

Gly Phe Asp Leu Asp Gln Lys Asn Thr Thr Arg Thr Pro Lys Ala Tyr

625 630 635 640

ATC ACA GAT GCC AAG GTA AAG GGC GGT TTT TAC GGG CCC AAA GCC GAA 1968

Ile Thr Asp Ala Lys Val Lys Gly Gly Phe Tyr Giy Pro Lys Ala Glu

645 650 655

GAG TTG GGC GGA TGG TTT GCC TAT TCG GAC GAT AAA CAA ACG AAA AAT 2016

Glu Leu Gly Gly Trp Phe Ala Tyr Ser Asp Asp Lys Gln Thr Lys Asn

660 665 670

GCA ACA GAT GCA TCC GGC AAT GGA AAT TCA GCA AGC AGT GCA ACT GTC 2064

Ala Thr Asp Ala Set Gly Asn Gly Asn Set Ala Set Set Ala Thr Val

675 680 685

GTA TTC GGT GCG AAA CGC CAA CAG CCT GTG CAA TAAACCAAGG CGGATAC 2114

Val Phe Gly Ala Lys Arg Gln Gln Pro Val Gln

690 695

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 10:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 699 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 10:

Cys Leu Gly Gly Gly Gly Gly Set Phe Asp Leu Asp Ser Val Asp Thr

1 5 10 15

Glu Ala Pro Arg Pro Ala Pro Lys Tyr Gln Asp Val Set Set Glu Lys

25 30

Pro Gln Ala Gln Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Gly Phe Ala Met Arg Leu

40 45

Lys Arg Arg Asn Trp Tyr Pro Set Ala Lys Glu Asn Glu Val Lys Leu

55 60

Asn Glu Set Asp Trp Glu Thr Thr Gly Leu Pro Set Asn Pro Lys Asn

70 75 80

Leu Pro Glu Arg Gln Lys Ser Val Ile Asp Gln Val Glu Thr Asp Gly

90 95

-57- 2720408

Asp Ser Asn Asn Ser Asn Ile Tyr Set Ser Pro Tyr Leu Thr Gln Set

105 110

Asn His Gln Asn Gly Asn Thr Gly Asn Gly Val Asn Gln Pro Lys Asn

120 125

Glu Val Thr Asp Tyr Lys Asn Phe Lys Tyr Val Tyr Ser Gly Trp Phe

135 140

Tyr Lys His Ala Lys Arg Glu Val Asn Leu Ala Val Glu Pro Lys Ile

150 155 160

Ala Lys Asn Gly Asp Asp Gly Tyr Ile Phe Tyr His Gly Lys Asp Pro

170 175

Ser Arg Gln Leu Pro Ala Set Gly Lys Ile Thr Tyr Lys Gly Val Trp

185 190

His Phe Ala Thr Asp Thr Lys Arg Gly Gln Lys Phe Arg Glu Ile Ile

200 205

Gln Pro Set Lys Asn Gln Gly Asp Arg Tyr Set Gly Phe Set Gly Asp

*210 215 220

Asp Asp Glu Gln Tyr Set Asn Lys Asn Glu Set Met Leu Lys Asp Gly

225 230 235 240

His Glu Gly Tyr Gly Phe Ala Set Asn Leu Glu Val Asp Phe Asp Asn

245 250 255

Lys Lys Leu Thr Gly Lys Leu Ile Arg Asn Asn Ala Asn Gln Asn Asn

260 265 270

Asn Thr Asn Asn Asp Lys His Thr Thr Gln Tyr Tyr Set Leu Asp Ala

275 280 285

Thr Leu Lys Gly Asn Arg Phe Set Gly Lys Ala Glu Ala Thr Asp Lys

290 295 300

Pro Lys Asn Asp Gly Glu Thr Lys Glu His Pro Phe Val Set Asp Set

305 310 315 320

Set Set Leu Set Gly Gly Phe Phe Gly Pro Gln Gly Glu Glu Leu Gly

325 330 335

Phe Arg Phe Leu Set Asn Asp Gln Lys Val Ala Val Val Gly Set Ala

340 345 350

Lys Thr Lys Asp Lys Pro Ala Asn Gly Asn Thr Ala Glu Ala Set Gly

355 360 365

Gly Thr Asp Ala Ala Ala Set Gly Gly Ala Ala Gly Thr Set Set Glu

370 375 380

Asn Set Lys Leu Thr Thr Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Thr His Gly

385 390 395 400

Gly Thr Ala Ile Lys Asn Leu Asp Asn Phe Set Asn Ala Ala Gln Leu

405 410 415

Val Val Asp Gly Ile Met Ile Pro Leu Leu Pro Gln Asn Set Thr Gly420 425 430

-58- 2720408

Lys Asn Asn Gln Pro Asp Gln Gly Lys Asn Gly Gly Thr Ala Phe Ile

435 440 445

Tyr Lys Thr Thr Tyr Thr Pro Lys Asn Asp Asp Lys Asp Thr Lys Ala

450 455 460

Gln Thr Val Thr Gly Gly Thr Gln Thr Ala Ser Asn Thr Ala Gly Asp

465 470 475 480

Ala Asn Gly Lys Thr Lys Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Set Asn

485 490 495

Leu Asn Tyr Leu Lys Tyr Gly Leu Leu Thr Arg Lys Thr Ala Gly Asn

500 505 510

Thr Val Gly Ser Gly Asn Ser Set Pro Thr Ala Ala Ala Gin Thr Asp

515 520 525

Ala Gln Ser Met Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Asn Lys Ile

530 535 540

Pro Set Glu Gln Asn Val Val Tyr Arg Gly Set Trp Tyr Gly His lie

545 550 555 560

Ala Set Set Thr Set Trp Ser Gly Asn Ala Set Asp Lys Glu Gly Gly

565 570 575

Asn Arg Ala Glu Phe Thr Val Asn Phe Gly Glu Lys Lys Ile Thr Gly

580 585 590

Thr Leu Thr Ala Glu Asn Arg Gln Glu Ala Thr Phe Thr Ile Asp Gly

595 600 605

Lys Ile Glu Gly Asn Gly Phe Set Gly Thr Ala Lys Thr Ala Glu Leu

610 615 620

Gly Phe Asp Leu Asp Gin Lys Asn Thr Thr Arg Thr Pro Lys Ala Tyr

625 630 635 640

Ile Thr Asp Ala Lys Val Lys Gly Gly Phe Tyr Gly Pro Lys Ala Glu

645 650 655

Glu Leu Gly Gly Trp Phe Ala Tyr Set Asp Asp Lys Gln Thr Lys Asn

660 665 670

Ala Thr Asp Ala Set Gly Asn Gly Asn Set Ala Set Set Ala Thr Val

675 680 685

Val Phe Gly Ala Lys Arg Gln Gln Pro Val Gln

690 695

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 11:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 198 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: N. meningitidis

(B) SOUCHE: IM2169

-59- 2720408

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 11:

Thr Lys Asp Lys Leu Glu Asn Gly Ala Ala Ala Ser Gly Ser Thr Gly

1 5 10 15

Ala Ala Ala Ser Gly Gly Ala Ala Gly Thr Set Set Glu Asn Set Lys

25 30

Leu Thr Thr Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Thr Leu Asn Asp Lys Lys

40 45

Ile Lys Asn Leu Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Asp

55 60

Gly Ile Met Ile Pro Leu Leu Pro Lys Asp Set Glu Set Gly Asn Thr

70 75 80

Gln Ala Asp Lys Gly Lys Asn Gly Gly Thr Glu Phe Thr Arg Lys Phe

90 95

Glu His Thr Pro Glu Set Asp Lys Lys Asp Ala Gln Ala Gly Thr Gln

105 110

Thr Asn Gly Ala Gln Thr Ala Set Asn Thr Ala Gly Asp Thr Asn Gly

120 125

Lys Thr Lys Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Set Asn Leu Asn Tyr

135 140

Leu Lys Tyr Gly Met Leu Thr Arg Lys Asn Set Lys Set Ala Met Gln

150 155 160

Ala Gly Gly Asn Set Set Gln Ala Asp Ala Lys Thr Glu Gln Val Glu

170 175

Gln Set Met Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro

185 190

Thr Asp Gln Asn Val Val

<2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 12:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 198 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: N. meningitidis

(B) SOUCHE: 6940

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 12:

Thr Lys Asp Lys Thr Glu Asn Gly Ala Val Ala Set Gly Gly Thr Asp

1 5 10 15

Ala Ala Ala Set Asn Gly Ala Ala Gly Thr Set Set Glu Asn Set Lys

25 30

-60- 2720408

Leu Thr Thr Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Lys Leu Gly Asp Lys Glu

40 45

Val Gln Lys Leu Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Asp

55 60

Gly lie Met Ile Pro Leu Leu Pro Glu Ala Ser Glu Ser Gly Asn Asn

70 75 80

Gln Ala Asn Gln Gly Thr Asn Gly Gly Thr Ala Phe Thr Arg Lys Phe

90 95

Asp His Thr Pro Glu Ser Asp Lys Lys Asp Ala Gln Ala Gly Thr Gln

105 110

Thr Asn Gly Ala Gln Thr Ala Ser Asn Thr Ala Gly Asp Thr Asn Gly

120 125

Lys Thr Lys Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Ser Asn Leu Asn Tyr

135 140

Leu Lys Tyr Gly Met Leu Thr Arg Lys Asn Ser Lys Ser Ala Met Gln

150 155 160

Ala Gly Glu Ser Ser Ser Gln Ala Asp Ala Lys Thr Glu Gln Val Glu

170 175

Gln Ser Met Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro

185 190

Ser Glu Gln Asn Ile Val

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 13:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 198 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: N. meningitidis

(B) SOUCHE: 2223

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 13:

Thr Lys Asp Lys Thr Glu Asn Gly Ala Val Ala Ser Gly Gly Thr Asp

1 5 10 15

Ala Ala Ala Ser Asn Gly Ala Ala Gly Thr Ser Ser Glu Asn Ser Lys

25 30

Leu Thr Thr Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Lys Leu Gly Asp Lys Glu

40 45

Val Gln Lys Leu Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Asp

55 60

Gly Ile Met Ile Pro Leu Leu Pro Glu Ala Ser Glu Ser Gly Asn Asn

70 75 80

-61- 2720408

Gln Ala Asn Gln Gly Thr Asn Gly Gly Thr Ala Phe Thr Arg Lys Phe

90 95

Asp His Thr Pro Glu Set Asp Lys Lys Asp Ala Gln Ala Gly Thr Gln

105 110

Ala Asn Gly Ala Gln Thr Ala Set Asn Thr Ala Gly Asp Thr Asn Gly

120 125

Lys Thr Lys Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Ser Asn Leu Asn Tyr

135 140

Leu Lys Tyr Gly Met Leu Thr Arg Lys Asn Set Lys Set Ala Met Gln

150 155 160

Ala Gly Glu Set Set Set Gln Ala Asp Ala Lys Thr Glu Gln Val Gly

170 175

Gln Set Met Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro

185 190

Set Glu Gln Asn Ile Val

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 14:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 198 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: N. meningitidis

(B) SOUCHE: C708

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 14:

Thr Gln Asp Lys Pro Arg Asn Gly Ala Val Ala Set Gly Gly Thr Gly

1 5 10 15

Ala Ala Arg Set Asn Gly Ala Ala Gly Gln Set Set Glu Asn Set Lys

25 30

Leu Thr Thr Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Thr Leu Asn Asp Lys Lys

40 45

Ile Lys Asn Leu Asp Asn Phe Set Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Asp

55 60

Gly Ile Met Ile Pro Leu Leu Pro Glu Ala Set Glu Set Gly Lys Asn

70 75 80

Gln Ala Asn Gln Gly Thr Asn Gly Gly Thr Ala Phe Thr Arg Lys Phe

90 95

Asn His Thr Pro Lys Ser Asp Glu Lys Asp Thr Gln Ala Gly Thr Ala

105 110

Glu Asn Gly Asn Pro Ala Ala Set Asn Thr Ala Gly Asp Ala Asn Gly

120 125

-62- 2720408

Lys Thr Lys Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Ser Asn Leu Asn Tyr

135 140

Leu Lys Tyr Gly Met Leu Thr Arg Lys Asn Ser Lys Ser Ala Met Gln

150 155 160

Ala Gly Glu Ser Ser Ser Gin Ala Asp Ala Lys Thr Glu Gln Val Gly

170 175

Gln S.er Met Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro

185 190

Asn Asp Gln Asn Val Val

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 15:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 211 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: N. meningitidis

(B) SOUCHE: M978

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 15:

Thr Gln Asp Lys Ala a A Asn Gly Asn Thr Ala Ala Ala Ser Gly Gly

1 5 10 15

Thr Asp Ala Ala Ala Ser Asn Gly Ala Ala Gly Thr Ser Ser Glu Asn

25 30

Ser Lys Leu Thr Thr Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Thr Leu Asn Asp

40 45

Lys Lys Ile Lys Asn Leu Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gln Leu Val

55 60

Val Asp Gly Ile Met Ile Pro Leu Leu Pro Glu Thr Ser Glu Ser Gly

70 75 80

Ser Asn Gln Ala Asp Lys Gly Lys Lys Gly Lys Asn Gly Lys Asn Gly

90 95

Gly Thr Asp Phe Thr Tyr Lys Thr Thr Tyr Thr Pro Lys Asn Asp Asp

105 110

Lys Asp Thr Lys Ala Gln Thr Gly Ala Ala Gly Ser Ser Gly Ala Gln

120 125

Thr Asp Leu Gly Lys Ala Asp Val Asn Gly Gly Lys Ala Glu Thr Lys

135 140

Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Ser Asn Leu Asn Tyr Leu Lys Tyr

150 155 160

Gly Met Leu Thr Arg Lys Asn Ser Lys Ser Ala Met Gln Ala Gly Gly

170 175

-63- 2720408

Asn Ser Set Gln Ala Asp Ala Lys Thr Glu Gln Val Glu Gln Set Met

185 190

Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro Asn Asp Gln

200 205

Asn Val Val

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 16:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 200 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: N. meningitidis

(B) SOUCHE: 1610

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 16:

Lys Arg Asp Lys Ala Glu Set Gly Gly Gly Asn Gly Ala Set Gly Gly i 5 10 15 Thr Asp Ala Ala Ala Set Asn Gly Ala Ala Gly Thr Ser Set Glu Asn

25 30

Ser Lys Leu Thr Thr Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Lys Set Gly Gly

40 45

Lys Glu Val Lys Asn Leu Asp Asn Phe Set Asn Ala Ala Gln Leu Val

55 60

Val Asp Gly Ile Met Ile Pro Leu Leu Pro Lys Asp Set Glu Set Gly

70 75 80

Asn Thr Gln Ala Asp Lys Gly Lys Asn Gly Gly Thr Lys Phe Thr Arg

90 95

Lys Phe Glu His Thr Pro Glu Set Asp Lys Lys Asp Ala Gln Ala Gly

105 110

Thr Gln Thr Asn Gly Ala Gln Thr Ala Set Asn Thr Ala Gly Asp Thr

120 125

Asn Gly Lys Thr Lys Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Set Asn Leu

135 140

Asn Tyr Leu Lys Tyr Gly Leu Leu Thr Arg Lys Thr Ala Gly Asn Thr

150 155 160

Gly Glu Gly Gly Asn Gly Set Gln Thr Ala Ala Ala Gln Thr Ala Gln

170 175

Gly Ala Gln Set Met Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu

185 190

Ile Pro Set Glu Gln Asn Val Val

200

-64- 2720408

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 17:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 200 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: N. meningitidis

(B) SOUCHE: 867

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 17:

* Thr Lys Asp Lys Pro Arg Asn Gly Ala Val Ala Ser Gly Gly Thr Asp

1 5 10 15

Ala Ala Ala Set Asn Gly Ala Ala Gly Thr Ser Set Glu Asn Gly Lys

25 30

Leu Thr Thr Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Thr Leu Asn Asp Lys Lys

40 45

Ile Lys Asn Leu Asp Asn Phe Set Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Ser

55 60

Gly Ile Met Ile Pro Leu Met Pro Glu Thr Set Glu Ser Gly Asn Asn

70 75 80

Gin Ala Asp Lys Gly Lys Asn Gly Gly Thr Ala Phe Thr Arg Lys Phe

90 95

Asp His Thr Pro Lys Ser Asp Glu Lys Asp Thr Gln Ala Gly Thr Pro

105 110

Thr Asn Gly Ala Gln Thr Ala Ser Gly Thr Ala Gly Val Thr Gly Gly

120 125

Gln Ala Gly Lys Thr Tyr Ala Val Glu Val Cys Cys Ser Asn Leu Asn

135 140

Tyr Leu Lys Tyr Gly Leu Leu Thr Arg Lys Thr Ala Asp Asn Thr Val

150 155 160

Gly Ser Gly Asn Gly Ser Ser Thr Ala Ala Ala Gln Thr Ala Gln Gly

170 175

Ala Gln Ser Met Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu Ile

185 190

Pro Lys Glu Gln Gln Asp Ile Val

200

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 18:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 198 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide

-65- 2720408

(vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: N. meningitidis

(B) SOUCHE: S3032

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 18:

Thr Lys Asp Lys Pro Ala Asn Gly Asn Thr Ala Glu Ala Set Gly Gly i 5 10 15 Thr Asp Ala Ala Ala Ser Gly Gly Ala Ala Gly Thr Set Set Glu Asn

25 30

Set Lys Leu Thr Thr Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Thr His Gly Gly

40 45

Thr Ala Ile Lys Asn Leu Asp Asn Phe Set Asn Ala Ala Gln Leu Val

55 60

Val Asp Gly Ile Met Ile Pro Leu Leu Pro Gln Asn Set Thr Gly Lys

70 75 80

Asn Asn Gln Pro Asp Gln Gly Lys Asn Gly Gly Thr Ala Phe Ile Tyr

90 95

Lys Thr Thr Tyr Thr Pro Lys Asn Asp Asp Lys Asp Thr Lys Ala Gln

105 110

Thr Val Thr Gly Gly Thr Gln Thr Ala Set Asn Thr Ala Gly Asp Ala

120 125

Asn Gly Lys Thr Lys Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Set Asn Leu

135 140

Asn Tyr Leu Lys Tyr Gly Leu Leu Thr Arg Lys Thr Ala Gly Asn Thr

150 155 160

Val Gly Set Gly Asn Set Set Pro Thr Ala Ala Ala Gln Thr Asp Ala

170 175

Gln Set Met Phe Leu Gin Gly Glu Arg Thr Asp Glu Asn Lys Ile Pro

185 190

Set Glu Gln Asn Val Val

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 19:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 195 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: N. meningitidis

(B) SOUCHE: 891

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 19:

Thr Lys Asp Lys Pro Gly Asn Gly Ala Arg Leu Gln Ala Ala Arg Cys

1 5 10 15

-66- 2720408

Gly Thr Ser Asn Gly Ala Ala Gly Gln Ser Set Glu Asn Ser Lys Leu

25 30

Thr Thr Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Lys Leu Gly Asp Lys Glu Val

40 45

Gin Lys Leu Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gin Leu Val Val Asp Gly

55 60

Ile Met Ile Pro Leu Leu Pro Lys Asp Ser Glu Ser Gly Lys Asn Gin

70 75 80

Ala Asp Lys Gly Lys Asn Gly Glu Thr Glu Phe Thr Arg Lys Phe Glu

90 95

His Thr Pro Glu Set Asp Glu Lys Asp Ala Gln Ala Gly Thr Pro Set

105 110

Asn Gly Ala Gln Thr Ala Set Asn Thr Ala Gly Asp Thr Asn Gly Lys

120 125

Thr Lys Thr Tyr Glu Val Asn Leu Cys Set Asn Leu Asn Tyr Leu Lys

135 140

Tyr Gly Leu Leu Thr Arg Lys Thr Ala Gly Asn Thr Gly Glu Gly Gly

150 155 160

Asn Set Set Pro Thr Ala Ala Gln Thr Ala Gln Gly Ala Gln Set Met

170 175

Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro Asn Asp Gln

185 190

Asn Val Val

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 20:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 29 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 20:

AAACCCGGAT CCGTTGCCAG CGCTGCCGT 29

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 21:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 85 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 21:

-67- 2720408

TTTTTTCATG AGATATCTGG CAACATTGTT GTTATCTCTG GCGGTGTTAA TCACCGCCGG 60

GTGCCTGGGT GGCGGCGGCA GTTTC 85

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 22:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 30 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 22:

GTGTTTTTGT TGAGTGCATG CCTGGGTGGC 30

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 23:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 40 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire {ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 23:

TGCGCAAGCT TACAGTTTGT CTTTGGTTTT CGCGCTGCCG 40

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 24:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 40 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 24:

AAAAAGCATG CATAAAAACT ACGCGTTACA CCATTCAAGC 40

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 25:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 39 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 25:

TATATAAGCT TACGTTGCAG GCCCTGCCGC GTTTTCCCC 39

-68- 2720408

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 26:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 29 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 26:

CCCGAATTCT GCCGTCTGAA GCCTTATTC 29

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 27:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 28 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 27:

CCCGAATTCT GCTATGGTGC TGCCTGTG 28

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 28:

(i> CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 30 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 28:

CGCATCCAAA ACCGTACCTG TGCTGCCTGA 30

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 29:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 30 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 29:

TTTATCACTT TCCGGGGGCA GGAGCGGAAT 30

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 30:

-69- 2720408

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 30 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 30:

GTTGGAACAG CAGACAGCGG TTTGCGCCCC 30

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 31:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 30 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 31:

GAACATACTT TGTTCGTTTT TGCGCGTCAA 30

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 32:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 5 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: N. meningitidis

(B) SOUCHE: IM2394

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 32:

Tyr Lys Gly Thr Trp

1 5

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 33:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 15 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: N. meningitidis

(B) SOUCHE: IM2394

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 33:

Glu Phe Glu Val Asp Phe Ser Asp Lys Thr Ile Lys Gly Thr Leu i 5 10 15

-70- 2720408

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 34:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 12 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: N. meningitidis

(B) SOUCHE: IM2394

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 34:

Glu Gly Gly Phe Tyr Gly Pro Lys Gly Glu Glu Leu

1 5 10

(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 35:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 6 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: N. meningitidis

(B) SOUCHE: IM2394

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 35:

Ala Val Phe Gly Ala Lys

1 5

-71- 2720408

Claims (53)

Revendications

1. Un polypeptide ayant une séquence d'acides aminés qui dérive de celle de la sous unité Tbp2 du récepteur transferrine d'une souche de Neisseria meningilidis de type IM2169 ou IM2394 dont les premier, deuxième et troisième domaines sont définis par alignement au maximum d'homologie, sur la séquence de la sous-uni Tbp2 de la souche de référence respective, IM2169 ou 1M2394, telle que montrée dans lID SEQ NO 1 ou 3, notamment par délétion totale ou partielle d'au moins un domaine de ladite sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou IM2394, à condition que le premier et

deuxième domaine ne soient pas simultanément et totalement délétés.

2. Un polypeptide selon la revendication 1, ayant une séquence d'acides aminés qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou IM2394 dont les premier, deuxième et troisième domaines sont définis par alignement an muxiu d'homologie, sur la séquence de la sous-unité Tbp2 de la souche de référence respective, IM2169 ou IM2394; notamment par délétion partielle du troisième

domaine de ladite sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou IM2394.

3. Un polypeptide selon la revendication 1, ayant une séquence d'acides aminés qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou IM2394 dont les premier, deuxième et troisième domaines sont définis par alignement au maximum d'homologie, sur la séquence de la sous-unité Tbp2 de la souche de référence respective, IM2169 ou IM2394; notamment par délétion totale du troisième domaine

de ladite sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou IM2394.

4. Un polypeptide selon la revendication 2 ou 3, ayant une séquence d'acides aminés qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou IM2394 dont les premier, deuxième et troisième domaines sont définis par alignement au maxim d'homologie, sur la séquence de la sous-unité Tbp2 de la souche de référence respective, IM2169 ou IM2394; et qui comporte dans son intégralité, le deuxième

domaine de la séquence dont elle est dérivée.

5. Un polypeptide selon la revendication 2 ou 3, ayant une séquence d'acides aminés qui en outre dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou IM2394 dont les premier, deuxième et troisième domaines sont définis par alignement au maximm

-72- 2720408

d'homologie, sur la séquence de la sous-unité Tbp2 de la souche de référence respective, IM2169 ou IM2394; notamment par délétion partielle du deuxième

domaine de ladite sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou IM2394.

6. Un polypeptide selon la revendication 2 ou 3, ayant une séquence d'acides aminés qui en outre dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou M2394 dont les premier, deuxième et troisième domaines sont définis par alignement au maximum d'homologie, sur la séquence de la sous-unité Tbp2 de la souche de référence respective, IM2169 ou IM2394; notamment par délétion totale du deuxième domaine

de ladite sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou IM2394.

7. Un polypeptide selon la revendication 4, 5 ou 6, ayant une séquence d'acides aminés qui dérive de ceile de la sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou 1M2394 dont les premier, deuxième et troisième domaines sont définis par alignement au maximum d'homologie, sur la séquence de la sous-unité Tbp2 de la souche de référence respective, IM2169 ou IM2394; et qui comporte dans son intégralité, le premier

domaine de la séquence dont elle est dérivée.

8. Un polypeptide selon la revendication 4, 5 ou 6, ayant une séquence d'acides aminés qui en outre dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou IM2394 dont les premier, deuxième et troisième domaines sont définis par alignement au maximum d'homologie, sur la séquence de la sous-unité Tbp2 de la souche de référence respective, iM2169 ou IM2394; par délétion partielle du premier domaine de ladite

sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou IM2394.

9. Un polypeptide selon la revendication 4 ou 5, ayant une séquence d'acides aminés qui en outre dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou I1M2394 dont les premier, deuxième et troisième domaines sont définis par alignement au maximum d'homologie, sur la séquence de la sous-unité Tbp2 de la souche de réference respective, IM2169 ou IM2394; par délétion totale du premier domaine de ladite

sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou 1M2394.

10. Un polypeptide selon les revendications 2 ou 3, 4 et 7, ayant une séquence d'acides

aminés qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type I1M2169.

- 73 - 2720408

11. Un polypeptide selon les revendications 2 ou 3, 4 et 7, ayant une séquence d'acides

aminés qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2394.

12. Un polypeptide selon les revendications 2 ou 3, 4 et 8, ayant une séquence d'acides

aminés qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2169.

13. Un polypeptide selon les revendications 2 ou 3, 4 et 8, ayant une séquence d'acides

aminés qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2394.

14. Un polypeptide selon les revendication 12, ayant une séquence d'acides aminés qui en outre dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2169 dont les premier, deuxième et troisième domaines sont définis par alignement au maximum dhomologie, sur la séquence de la sous- unité Tbp2 de la souche de référence IM2169 par délétion de tout ou partie de la région qui est l'homologue de la région du premier domaine de ladite sous-unité Tbp2 de type IM2169 allant de l'acide aminé en position

1 à l'acide aminé en position 281.

15. Un polypeptide selon la revendication 13, ayant une séquence d'acides aminés qui en outre dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2394 dont les premier, deuxième et troisième domaines sont définis par alignement au maxinum d'homologie, sur la séquence de la sous-unité Tbp2 de la souche de référence IM2394 par délétion de tout ou partie de la région qui est l'homologue de la région du premier domaine de ladite sous-unité Tbp2 de type IM2394 allant de l'acide aminé en position

1 à l'acide aminé en position 266.

16. Un polypeptide selon les revendications 2 ou 3, 4 et 9, ayant une séquence d'acides

aminés qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2169.

17. Un polypeptide selon les revendications 2 ou 3, 4 et 9, ayant une séquence d'acides

aminés qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2394.

18. Un polypeptide selon la revendications 2 ou 3, 5 et 7, ayant une séquence d'acides

aminés qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2169.

19. Un polypeptide selon les revendications 2 ou 3, 5 et 7, ayant une séquence d'acides

aminés qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2394.

-74 -

20. Un polypeptide selon les revendications 2 ou 3, 5 et 8, ayant une séquence d'acides

-aminés qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type M2169..

21. Un polypeptide selon les revendications 2 ou 3, 5 et 8, ayant une séquence d'acides

aminés qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2394.

22. Un polypeptide selon la revendication i8 ou 20, ayant une séquence d'acides aminés qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2169 dont les premier, deuxième et troisième domaines sont définis par alignement, au maximum d'homologie, sur ia séquence de la sous-unité Tbp2 de la souche de référence IM2169, par délétion de la région du deuxième domaine de ladite sous-unité Tbp2 de type M2169 qui est l'homologue de la région du deuxième domaine de la sous-unité Tbp2 IM2169 allant

de l'acide aminé dans l'une des positions 346 à 361 à l'acide aminé en position 543.

23. Un polypeptide selon la revendication 19 ou 21, ayant une séquence d'acides aminés qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2394 dont les premier, deuxième et troisième domaines sont définis par alignement, au maximum d'homologie, sur la séquence de la sous-unité Tbp2 de la souche-de référence 1N2394, par délétion de la région du deuxième domaine de ladite sous-unité Tbp2 de type IM2394 qui est I'homologue de la région du deuxième domaine de la sous-unité Tbp2 M2394 allant

de l'acide aminé dans l'une des positions 326 à 341 à l'acide aminé en position 442.

24. Un polypeptide selon la revendication 18 ou 20, ayant une séquence d'acides aminés qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type 1M2169 dont les premier, deuxième et troisième domaines sont définis par alignement au maximum d'homologie, sur la séquence dç la sous-unité Tbp2 IM2169, par délétion d'au moins une des régions du deuxième domaine de ladite sous-unité Tbp2 de type 1I2169 qui sont les homologues des régions de la sous-unité Tbp2 1M2169 allant: (i) de l'acide aminé en position 362 à l'acide aminé en position 379; (hii) de l'acide aminé en position 418 à l'acide aminé en position 444; (iii) de l'acide aminé en position 465 à l'acide aminé en position 481; et

-75- 2720408

(iv) de racide aminé en position 500 à racide aminé en position 520.

25..Un polypeptide selon la revendication 24, ayant une séquence d'acides aminés qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2169 dont les premier, deuxnième et troisième domaines sont définis par alignement au maximum d'homologie, sur la séquence de la sous-unité Tbp2 IM2169, par délétion des régions du deuxième domaine de ladite sous- unité Tbp2 de type IM2169 qui sont les homologues desdites

régions (i) à (iv) de la sous-unité Tbp2 IM2169.

26. Un polypeptide selon les revendications 20 et 24 ou 25, ayant une séquence d'acides

aminés qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2169 dont les premier, deuxième et troisième domaines sont définis par alignement au maximum d'homologie, sur la séquence de la sous-unité Tbp2 IM2169, par délétion de tout ou partie de la région qui est l'homologue de la région du premier domaine de ladite sous-unité Tbp2 de type IM2169 allant de racide aminé en position 1 à racide aminé

en position 281.

27. Un polypeptide selon les revendications 3, 6 et 7, ayant une séquence d'acides aminés

qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2169.

28. Un polypeptide selon les revendications 3, 6 et 7, ayant une séquence d'acides aminés

qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2394.

29. Un polypeptide selon les revendications 3, 6 et 8, ayant une séquence d'acides aminés

qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2169.

30. Un polypeptide selon les revendications 3, 6 et 8, ayant une séquence d'acides aminés

qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2394.

31. Un polypeptide selon la revendication 1, ayant une séquence d'acides aminés qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2169 dont les premier, deuxième et troisième domaines sont définis par alignement au maximum d'homologie, sur la séquence de la sous-unité Tbp2 de la souche de référence IM2169; par délétion partielle du deuxième domaine de ladite sous-unité Tbp2 de type IM2169, notamment par délétion d'au moins une des régions du deuxième domaine de ladite sous-unité

-76- 2720408

Tbp2 de type IM2169 qui sont les homologues des régions de la sous-unité Tbp2 IM2169 allant: (i) de l'acide aminé en position 362 à l'acide aminé en position 379, (ii) de l'acide aminé en position 418 à l'acide aminé en position 444, ('ii) de r'acide aminé en position 465 à l'acide aminé en position 481, et (iv) de l'acide aminé en position 500 à l'acide aminé en position 520; et qui comporte dans leur intégralité, le premier et troisième domaine de la séquence

dont elle est dérivée.

32. Un polypeptide selon la revendication 1, ayant une séquence d'acides aminés qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2169 dont les premier, deuxitme et troisième domaines sont définis par alignement au maximum d'homologie, sur la séquence de la sous-unité Tbp2 de la souche de référence IM2169; par délétion partielle du deuxième domaine de ladite sous-unité Tbp2 de type IM2169, notamment par délétion partielle du premier domaine et par délétion d'au moins une des régions du deuxième domaine de ladite sous-unité Tbp2 de type IM2169 qui sont les homologues des régions de la sous-unité Tbp2 IM2169 allant: (i) de l'acide aminé en position 362 à l'acide aminé en position 379, (ii) de l'acide aminé en position 418 à l'acide aminé en position 444, (iii) de l'acide aminé en position 465 à racide aminé en position 481, et (iv) de l'acide aminé en position 500 i I'acide aminé en position 520; et qui comporte dans son intégralité, le troisième domaine de la séquence dont elle est dérivée.

33. Un polypeptide selon la revendication 32, ayant une séquence d'acides aminés qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2169 dont les premier, deuxième et

-77- 2720408

troisième domaines sont définis par alignement au maximum dUomologie, sur la séquence de la sous-unité Tbp2 IM2169, par délétion de tout ou partie de la région qui est l'homologue de la région du premier domaine de ladite sous-unité Tbp2 de

type IM2169 allant de l'acide aminé en position I à l'acide aminé en position 281.

34. Un polypeptide selon l'une des revendication 31 à 33, ayant une séquence d'acides aminés qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 de type IM2169 dont les premier, deuxième et troisième domaines sont définis par alignement au maxiu d'homologie, sur la séquence de la sous- unité Tbp2 IM2169, telle que montrée dans lID SEQ NO 1, par délétion des régions du deuxième domaine de ladite sous-unité

Tbp2 de type IM2169 qui sont les homologues desdites régions (i) à (iv) de la sous-

unité Tbp2 IM2169.

35. Un polypeptide selon l'une des revendications 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 ià 27, 29,

et 31 à 33, ayant une séquence d'acides aminés qui dérive de celle de la sous-unité

Tbp2 IM2169.

36. Un polypeptide selon l'une des revendications 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 28 et 30,

ayant une séquence d'acides aminés qui dérive de celle de la sous-unité Tbp2 IM2394.

37. Un polypeptide selon l'une des revendications I à 36, ayant une séquence qui

comprend au moins 50 acides aminés.

38. Un fragment d'ADN isolé codant pour un polypeptide selon l'une des revendications

I à 37.

39. Une composition pharmaceutique pour induire une réponse immunitaire à rencontre de N. meningitidis, comprenant à titre de principe actif; au moins un polypeptide

selon l'une des revendications 1 à 37.

40. Une composition pharmaceutique selon la revendication 39, qui comprend à titre de principe actif; au moins un premier et au moins un deuxième polypeptides selon l'une

des revendications I à 37; ledit premier polypeptide ayant une séquence qui dérive de

celle d'une sous-unité Tbp2 de type IM2169 et ledit deuxième polypeptide ayant une

séquence qui dérive de celle d'une sous-unité Tbp2 de type IM2394.

- 78 - 2720408

41. Une composition pharmaceutique selon la revendication 40, dans laquelle ledit au

moins un deuxième polypeptide est selon l'une des revendications 11, 13, 15, 19, 21,

23, 28 et 30.

42. Une composition pharmaceutique selon la revendication 41, dans laquelle ledit au

moins un deuxième polypeptide est selon l'une des revendications 11, 19, 23 et 28.

43. Une composition pharmaceutique selon la revendication 40, 41 ou 42, dans laqudelle ledit au moins un deuxième polypeptide a une séquence d'acides aminés qui dérive de

celle de la sous-unité Tbp2 1M2394.

44. Une composition pharmaceutique selon l'une des revendications 40 à 43, dans laqudelle

ledit au moins un premier polypeptide est selon l'une des revendications 10, 12, 14,

18, 20, 22, 27 et 29.

45. Une composition pharmaceutique selon la revendication 44, dans laquelle ledit au

moins un premier polypeptide est selon l'une des revendications 10, 18, 22 et 27.

46. Une composition pharmaceutique selon l'une des revendications 40 à 43, dans laquelle

ledit au moins un premier polypeptide est selon l'une des revendications 31 à 34.

47. Une composition pharmaceutique selon l'une des revendications 40 à 43, dans laquelle

ledit au moins un un premier polypeptide est selon la revendication 16.

48. Une composition pharmaceutique selon l'une des revendications 44 à 47, dans laqudelle

ledit au moins un premier polypeptide a une séquence d'acides aminés qui dérive de

celle de la sous-unité Tbp2 IM2169.

49. Une composition pharmaceutique selon la revendication 47, qui comprend au moins

un troisième polypeptide qui est selon la revendication 16.

50. Un anticorps monoclonal:

(i) capable de reconnaître un épitope présent dans le premier domaine d'une sous-

unité Tbp2 de type 1M2169 ou IM2394; ledit épitope ayant une séquence homologue à celle présente dans le premier domaine de la sous-unité Tbp2 de

-79- 2720408

la souche IM2394 et sélectionnée parmi YKGTW, EFEVDFSDKTIKGTL, EGGFYGPKGEEL et AVFGAK; et de manière optionnelle, (ii) incapable de reconnaître l'épitope présent dans le troisième domaine de ladite sousunité Tbp2 de type IM2169 ou IM2394, dont la séquence est homologue

à celle de l'épitope du premier domaine qui est reconnu.

51. Un anticorps monoclonal selon la revendication 50,

(i) capable de reconnaître la région présente dans le premier domaine dune sous-

unité Tbp2 de type IM2169 ou IM2394 dont la séquence est homologue i la

séquence EGGFYGPKGEEL présente dans le premier domaine de la sous-

unité Tbp2 de la souche IM2394; et de manière optionnelle, (ii) incapable de reconnaître l'épitope présent dans le troisième domaine de ladite sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou IM2394, épitope équivalent de celui qui est reconnu, dont la séquence est homologue à la séquence SGGFYGKNAJEM présente dans le troisième domaine de la sous-unité Tbp2

de la souche IM2394.

52. Un anticorps monoclonal selon la revendication 51, (i) capable de reconnaître l'épitope GFYGPK, présent dans le premier domaine d'une sousunité Tbp2 de la souche IM2394; et (ii) incapable de reconnaître l'épitope équivalent présent dans le troisième

domaine de ladite sous-unité Tbp2 IM2394.

53. Une composition pharmaceutique pour traiter par immunothérapie passive une infection à N. meningitidis, qui comprend à titre de principe actif un anticorps

monoclonal selon l'une des revendications 50 à 52.