FR2762786A1 - Lysat de bacteries cultivees du genre arthrobacter utile en tant qu'additif hypoglycemiant, procede de preparation dudit produit et compositions le contenant - Google Patents

Lysat de bacteries cultivees du genre arthrobacter utile en tant qu'additif hypoglycemiant, procede de preparation dudit produit et compositions le contenant Download PDF

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Abstract

La présente invention concerne un produit qui comprend la biomasse lysée provenant de la culture d'espèces sélectives du genre Arthrobacter. Ledit produit qui contient tous les composants des cellules cultivées, par exemple lipides, protéines, enzymes, etc. désintégrées s'est avéré utile pour maintenir des taux sériques de glucose physiologiquement acceptables quand il est ingéré en faisant partie d'aliments spécialement dosés, tels que des laitages, des jus de fruits, des boissons non alcoolisées en général, ou dosé cliniquement dans des formulations orales. La présente invention concerne également un procédé pour préparer le lysat en cultivant des bactéries du genre Arthrobacter, telles que A. oxydans et A. pascens suivie de la lyse des cellules cultivées recueillies, en rejetant le surnageant.L'invention concerne également les compositions alimentaires et les formulations pharmaceutiques qui contiennent ledit lysat.

Description

Les Corvnébactéries sont des micro-organismes Gram positifs, généralement en forme de bacille bien qu'il y ait des exceptions importantes, sans mouvement propre, non acido-résistants, qui se multiplient de telle sorte que les cellules filles restent unies par la couche externe de la paroi cellulaire, formant des masses de cellules de forme irrégulière, quelquefois en forme de V.
Ce groupe comprend plusieurs genres; notamment les genres appelés Corinebacterium, Arthrobacter, Cellulomona, Kurthia et
Brevibacterium.
Les micro-organismes du genre Arthrobacter constituent la partie la plus abondante de la population bactérienne dans les courants et dépôts naturels dans les eaux ainsi que dans les sols. Ce sont des microorganismes résistants à la dessication et non pathogènes pour l'homme et les animaux. Ils ont une forme cylindrique (0,5 à 0,8 mm x 1,2 à 1,5 mm) ou sphérique (0,6 à 0,8 mm). Par exemple, en phase de croissance exponentielle des cultures, c'est la forme cylindrique qui domine largement, suivie d'une évolution vers la forme sphérique dans les cultures plus vieilles; ils se caractérisent par une grande diversité nutritionnelle et métabolique; il y a même des espèces appartenant à ce genre capables de métaboliser des herbicides, la caféine, la nicotine et d'autres composés organiques normalement absents des sols.
Généralement, leurs exigences nutritionnelles ne sont pas strictes, en raison de leur capacité à utiliser des substances organiques diverses en tant que source de carbone (et d'azote), telles que l'acide urique, la glycine, la L-lysine, la L-tirosine, divers glucides, comme cela est détaillé ci-après, les lactates ou malates; les sels d'ammoniac ou nitrate en tant que source d'azote et des facteurs de croissance comme la biotine, la thymine, la vitamine B12, L'acide panthothénique (Vitamine B5f), etc, selon les espèces.
Les espèces du genre Arthrobacter se caractérisent par la croissance cyclique des cellules et la composition de la paroi cellulaire (Tableau 17.6, page 620, Bergey, Manual of Systematic Bacteriology 1989 (1), incorporé aux présentes à titre de référence), dont l'alanine et l'acide glutamique sont les principaux composants, la fraction restante comprenant comme composant principal: L'acide diaminopimélique, la lysine, L'acide aspartique, etc., selon les espèces, associés à des glycoprotéines (peptidoglucanes).
Caractéristiques biochimiques générales du genre Arthrobacter
Gram variable
Catalase (+)
N'hydrolysent pas l'amidon.
Aérobies strictes - métabolisme respiratoire.
Température optimale de culture: 25 à 30"C, selon les espèces.
Ne produisent pas d'indol ni d'uréase.
Teneur en cytosine et guanine (CG) (% en moles dans l'ADN): 59 à 70.
Sur agar de levure et peptone, elles forment des colonies de 1,5 à 3,0 mm de couleur blanche à blanche tirant sur le jaune.
Elles utilisent comme source de carbone: D-glucose, Dmannose, D-galactose, D-fructose, DL-lactate, DL-malate, L-tirosine ou Llysine, etc.
II s'agit d'un genre dont on connaît de nombreuses espèces, telles que A. globiformis, A. simplex, A. tumiscens, A. duodecadis, etc, ayant fait l'objet d'études et de recherches à des fins purement scientifiques ainsi qu'à des fins utilitaires.
Sous ce deuxième aspect, il convient de mentionner les travaux liés à la production d'acide citrique, par culture de Arthrobacter paraffinens (2) et l'obtention de glutamate de sodium (3).
Aux Pays-Bas, on a développé et mis en oeuvre l'utilisation de
A. spinosa pour l'hydrolyse de galactobenzoates (4).
En outre, dans une demande de brevet français déposée le même jour que la présente par le Déposant, on décrit des produits et compositions utiles pour réguler la cholestérolémie, des produits obtenus à partir de la culture d'espèces sélectives du genre Arthrobacter.
On a donc découvert qu'il est possible de réguler le métabolisme des glucides, en particulier le glucose et de maintenir des taux de glycémie physiologiquement acceptables chez des patients souffrant de diabète non insulinodépendant (diabètes A), par l'ingestion ou l'administration dosée de lysats de culture d'espèces sélectives d'Arthrobacter.
Résumé de l'invention
La présente invention a pour objet un produit utile pour rétablir et maintenir des taux de glycémie physiologiquement acceptables chez les personnes souffrant d'un diabète non insulinodépendant, qui comprend la biomasse formée par des bactéries du genre Arthrobacter inoculées dans un milieu et des conditions favorables à la prolifération des bactéries du genre Arthrobacter, recueillie pendant la phase stationnaire de la culture en rejetant le surnageant, la biomasse étant ensuite lysée, en retenant dans le lysat les composants intracellulaires et les fragments structurels des cellules lysées.
De préférence, le milieu comprend des pentoses, des hexoses ou du saccharose en tant que source de carbone assimilable, et la biomasse est recueillie par centrifugation de la culture pendant la phase stationnaire de la croissance des bactéries inoculées en rejetant le surnageant.
De préférence, le produit comprend la biomasse thermolysée formée par des cellules de Arthrobacter oxydans ou Arthrobacter pascens, leurs mutants, variants et recombinants, inoculées et cultivées dans un milieu et des conditions favorables à la prolifération des bactéries inoculées, ledit milieu comprenant du glucose selon des concentrations de l'ordre de 5 à 15% en poids en tant que source de carbone assimilable, ladite biomasse étant premièrement séparée et recueillie pendant la phase stationnaire de la culture ledit milieu, la population en cellules viables étant de préférence de l'ordre de 0,5x108 CFU, par centrifugation, en rejetant le surnageant, et en thermolysant la biomasse recueillie en retenant dans le lysat les composants intracellulaires et les fragments structurels de la membrane cellulaire et des organules des cellules cultivées.
Un autre objet de l'invention est un procédé pour préparer un produit utile pour rétablir et maintenir des taux de glycémie physiologiquement acceptables chez des personnes souffrant de diabète non insulinodépendant, qui comprend les étapes consistant à:
a) cultiver dans un milieu et des conditions favorables à leur prolifération des bactéries du genre Arthrobacter inoculées dans ledit milieu;
b) séparer et recueillir la biomasse formée pendant la phase stationnaire de la culture, en rejetant le surnageant, et
c) lyser la biomasse recueillie à l'étape b), en retenant les composants intracellulaires et les fragments structurels des cellules lysées.
Un autre objet de l'invention est un procédé pour préparer un produit utile pour rétablir et maintenir des taux de glycémie physiologiquement acceptables chez les personnes souffrant de diabète non insulinodépendant, qui comprend les étapes consistant à:
a) cultiver dans un milieu et des conditions favorables à leur prolifération des bactéries du genre Arthrobacter oxydans ou Arthrobacter pascens, leurs mutants, variants ou recombinants, inoculées dans ledit milieu, qui comprend des pentoses, des hexoses ou du saccharose, et de préférence du glucose en tant que source de carbone assimilable;
b) séparer par filtrage avec des membranes dont les pores ont un diamètre de l'ordre de 0,5 microns, les cellules cultivées pendant la phase stationnaire de la culture, dans laquelle la concentration en cellules viables est de préférence de 5 x 108 CFU, en rejetant le surnageant;
c) lyser les cellules recueillies par thermolyse, par cycles de chauffage alternés, pendant une durée suffisante pour obtenir un lysat stérile de cellules recueillies.
De préférence, la thermolyse de la biomasse se fait en cycles alternés de refroidissement à -4 C et de chauffage à 25"C.
Plus préférentiellement, la biomasse comprenant les cellules cultivées est séparée pendant la phase stationnaire quand la population de cellules viables est de 0,15x108CFU
La présente invention a également pour objet une composition alimentaire qui comprend la biomasse ou son lysat obtenu par la culture de bactéries du genre Arthrobacter, selon l'invention, en particulier
Arthrobacter oxydans ou Arthrobacter pascens, leurs mutants, variants ou recombinants, en tant qu'agent capable de réduire et de maintenir le taux de glycémie chez les personnes souffrant de diabète non insulinodépendant à des taux physiologiquement acceptables, dans un support acceptable en industrie agro-alimentaire.
De préférence, le support est un produit laitier, tel que le lait, le yaourt, ou la crème.
Un autre objet de la présente invention est une composition pharmaceutique comprenant la biomasse ou son lysat obtenu selon
I'invention, dans un support pharmaceutiquement acceptable, pour le traitement de personnes souffrant de diabète non insulodépendant.
De préférence, la composition se présente sous forme de sirops, de comprimés, de dragées, de poudres à diluer ou de gélules.
La figure 1 illustre l'évolution d'une culture d'Arthrobacter oxydans à 28"C et pH 7,2, exprimée par la densité de cellules (viables) (CFU x 10) en fonction du temps (en heures). Le point (A) correspond à l'instant de la phase stationnaire de la culture de l'espèce d'Arthrobacter choisie dans laquelle a été prélevé un échantillon pour l'incubation inoculée dans l'Exemple.
La figure 2 illustre l'évolution de la glycémie à partir du quatrième jour après le début de l'administration du produit de la présente invention, chez des diabétiques A, dans des échantillons prélevés après la prise d'un régime sélectif pour diabétiques A (courbe 3). La courbe 2 correspond à la glycémie de diabétiques A suivant un régime sélectif avec administration de médicament antidiabétiques; la courbe 1 correspond à l'évolution de la glycémie chez des personnes saines, avec administration du lysat.
Aux fins de la présente invention, I'expression culture dans un milieu et des conditions permettant la croissance (ou la prolifération) des cellules inoculées est utilisée pour indiquer que le milieu de culture contient les sources de carbone, d'azote, les minéraux, les oligo-éléments et les additifs suffisants pour nourrir la culture de l'espèce d'Arthrobacter inoculée jusqu'à la phase stationnaire;
- les patients souffrant de diabète non insulinodépendant (ou insulino-résistant) sont les patient ayant une réaction normale en insuline, mais dont les tissus ne répondent ni à l'insuline endogène ni à l'insuline exogène. Cette déficience est due apparemment à une mutation de la tirosine kinase des récepteurs tissulaires de l'insuline, de sorte que l'insuline se lie normalement au récepteur muté, mais la tirosine kinase demeure inactive, ce qui fait que les effets dus à l'insuline liée n'apparaissent pas;
- biomasse désigne la masse totale des cellules cultivées sans les fluides extracellulaires (elle peut éventuellement contenir des particules ou des agrégats moléculaires provenant de la désintégration de cellules non viables pendant la culture);
- cellules lysées (ou lysat de cellules) définit le produit stérile provenant de la désintégration de la biomasse (autrement dit des cellules cultivées) séparée du milieu de culture thermiquement (thermolyse) et/ou à l'aide de moyens mécaniques (moulins colloïdaux) ou d'ultrasons; ou bien par traitement avec des agents chimiques, tels que des détergents (benzènedodécyl-sulfonate), des solutions acides tamponnées. II faut bien entendu s'assurer de la stérilité du lysat, par exemple en incubant des cultures Endo ou MPA inoculées avec des échantillons de lysat, techniques qui sont bien connues des hommes du métier;
- recueillir les cellules cultivées signifie, aux fins de la présente invention, séparer la biomasse (ou masse de cellules) formée dans le milieu de culture, principalement par centrifugation, par exemple à 4000 à 6500 tours/minute, avec, le cas échéant, lavage du produit de la centrifugation avec des solutions diluées de chlorure de sodium (sérum physiologique) et enfin avec de l'eau.
Caractéristiques biochimiques des espèces Arthrobacter oxvdans et Arthrobacter pascens
Ces bactéries utilisent le saccharose, le maltose, le galactose, le glucose, la glycérine en tant que source de carbone assimilable; elles n'hydrolysent pas l'amidon, ne produisent pas de SH2, ni d'indol ni d'ammoniac.
Ce sont des bactéries catalase positives et lécitinase négatives, argininedéhydrase négatives, uréase négatives.
Dans de l'agar peptone de viande (MPA), elles forment des colonies de couleur blanc crème, lisses et brillantes.
Les bactéries A. oxydans ne métabolisent pas l'arabinose et ne liquéfient pas la gélatine et les bactéries A. pascens liquéfient la gélatine.
Caractéristioues du Iysat
Le lysat de la présente invention est obtenu en général sous forme d'une masse poreuse de couleur blanche ou blanche tirant sur le jaune, légèrement sucrée, inodore et soluble dans l'eau et dans des solutions isotoniques de chlorure de sodium. Les solutions aqueuses à 0,2% ont un pH de 3,4 à 3,5 et le lysat n'est pas dénaturé (c'est-à-dire qu'il conserve son activité biologique hypoglycémiante en milieu acide et alcalin) à un pH compris entre 5,0 et 8,0, avec une activité optimale à pH 7,0.
Les examens réalisés chez des patients traités avec le lysat de la présente invention n'ont pas révélé de lésions ou d'altérations des muqueuses de l'appareil digestif (muqueuse stomacale et intestinale).
Bien que tous les aspects biologiques liés à l'effet hypoglycémiant du lysat de la présente invention permettant la régulation du métabolisme du glucose chez les personnes souffrant de diabète non insulinodépendant n'aient pas encore été élucidés, on considère, sans que cela constitue une quelconque limitation du sens et de la portée de la présente invention, que la régulation de la glycémie est due à la présence dans le lysat de la présente invention d'un ou de plusieurs facteurs qui se lient au glucose en formant des associations moléculaires qui constituent des substrats sensibles à la tirosine-kinase, normalement inactive vis-à-vis du glucose chez les personnes souffrant de diabète non insulinodépendant.
L'exemple suivant est donné à titre d'illustration du meilleur mode de réalisation de la présente invention, dans lequel on a utilisé une des espèces du genre Arthrobacter appelée A. oxydans.
Exemple 1
Préparation d'un Ivsat avec activité de alucosidase
a) Culture
Dans un flacon Erlenmeyer d'une contenance de 2 litres, on introduit 750 ml d'un milieu de culture ayant la composition suivante:
Dihydrogéno-phosphate d'ammonium (NH4) (H2Po4) 5,0 g/I
Sulfate de potassium (K2S04) 1,0
Sulfate de magnésium (MgS04) 0,6
Extrait sec de levure 5,0
Chlorure de sodium (NaCI) 1,0
Eau déminéralisée qsp 1 litre
pH = 7,2
ainsi que du glucose en quantité suffisante pour obtenir une concentration de 100 g/l de glucose dans ledit milieu.
On inocule Arthrobacter oxydans dans ledit milieu et on incube les cellules inoculées dans des conditions d'aérobies, avec injection permanente d'oxygène à raison de 10 litres/minute à 28"C. Le pH est maintenu par addition contrôlée de HCI à 0,1 N.
Sur la figure 1, est illustrée l'évolution de la culture de
Arthrobacter oxydans, dans les conditions indiquées. Le point A sur ledit graphique indique l'arrêt de la culture au bout d'environ six heures, quand la concentration de cellules viables atteint 0,5x10 CFU, ce qui est vérifié par culture d'échantillons extraits cultivés sur un milieu solide MPA.
Le milieu de culture extrait de l'étuve est soumis à une centrifugation à 6000 tours/minute pendant 28 minutes. La masse de cellules déposées est désintégrée thermiquement en un cycle de trois opérations alternées, suffisantes pour stériliser et former le lysat des cellules, en vérifiant la stérilité du matériau traité avec des cultures sur milieu MPA et Endo.
Le lysat, une fois séché, se présente sous forme d'une poudre fine de couleur blanc tirant sur le jaune, inodore, soluble dans l'eau, qui conserve son activité biologique jusqu'à 2 ans s'il est stocké au sec, et environ 6 mois en solution ou à l'état humide, avec conservation à 4"C.
b) Vérification de l'activité de qlucosidase du Ivsat prbparé en fia
Cette activité est évaluée in vitro par spectrophotométrie (avec un instrument Metrolab modèle M1600) en indiquant la concentration de glucose dans un milieu formulé avec 100 ml de solution physiologique glucosée (500 mg de glucose/100 ml), à laquelle on a ajouté 0,3 g du lysat (0,3 g de lysat/100 ml) stérile obtenu à l'étape a), après quoi la solution est incubée à 36"C. Au bout de deux heures et un jour d'incubation dans ces conditions, la concentration de glucose s'est réduite à 0,15 9/100 ml, ce qui équivaut à 150 mg de glucose restant.
Ces données démontrent qu'en 150 minutes 350 mg de glucose sont dégradés, soit une réduction de la concentration de glucose dans le milieu incubé de 500mg/100 ml à 150 mg/100 ml, ce qui correspond à une dégradation enzymatique du glucose de 140 mg/heure, due à l'activité de glucosidase du lysat de la présente invention.
Exemple 2
Vérification des oroDriétés de régulation de la glycémie du Ivsat (obtenu à l'Exemple 1)
On forme deux groupes de patients souffrant de diabète non insulinodépendant composés de personnes de 36 à 75 ans souffrant de diabète A depuis 1 à 15 ans. Les patients sont alimentés avant le début du traitement et pendant le traitement avec le même régime. La glycémie dans chaque groupe varie entre 130 et 300% en mg (valeur moyenne 168,2 + 11,5% en mg, P inférieur à 0,05).
A partir du début de l'étude, les patients sont alimentés avec le même régime qui inclut le lysat obtenu à l'Exemple 1. Après chaque prise, la glycémie après 30, 60, 90, 120 et 150 minutes est mesurée, avec une détermination supplémentaire de la glycémie pendant les phases de jeûne.
En général, on observe des symptômes de faiblesse généralisée, irritabilité, douleurs musculaires, polyurie nocturne, troubles de la microcirculation avec tendance à la prise de poids. Par ailleurs,
I'étude réalisée démontre que, dans les quatre jours après le début du traitement avec prise du lysat de l'Exemple 1, la glycémie chez les patients souffrant de diabète non insulinodépendant tend à se normaliser dans les 150 minutes suivant la prise du lysat. Les mêmes patients sont soumis à une autre étude similaire, mais dans laquelle le lysat est remplacé par un médicament classique et les patients sont alimentés avec un régime spécial pour diabétiques, avec application du même programme de détermination de la glycémie; on n'observe aucun changement du métabolisme des hydrates de carbone et de l'évolution de la glycémie différent de ce qui est habituel chez ce type de patients.
Sur le graphique de la figure 2, est enregistrée l'évolution de la glycémie (exprimée en mg de glucose/litre de sang) en fonction du temps après une alimentation riche en hydrates de carbone chez des personnes non diabétiques (courbe 1); chez des patients souffrant de diabète non insulinodépendant (diabète A) avec alimentation spécifique (courbe 2) et chez les mêmes patients avec la même alimentation que les patients normaux incluant le lysat de la présente invention, quatre jours après le début du traitement.
De l'analyse de ces graphiques ainsi que d'autres similaires, se détache une amélioration notable du métabolisme des hydrates de carbone chez les patients souffrant de diabète non insulinodépendant quand ils sont traitées avec le lysat de la présente invention, comparés aux patients et même à ces mêmes patients spécifiques avec prise d'hydrates de carbone choisis et dosés avec attention. On observe, avec la prise du lysat de la présente invention, la disparition totale des symptômes diabétiques, avec rétablissement des patients traités pour le travail et l'étude, en fonction de la disparition de la faiblesse et des douleurs musculaires. On observe en ce qui concerne le rétablissement du poids corporel des effets qui se prolongent chez certains patients jusqu'à 7 à 15 jours après l'arrêt du traitement avec le lysat de la présente invention.
Le lysat de la présente invention peut être administré en combinaison avec certains des composants de l'alimentation quotidienne, en tant qu'additif dans la formulation de divers produits laitiers: lait, yaourt, desserts tels que les flans, les mousses et les glaces.
Le lysat peut également être administré en tant que formulation pharmaceutique, sous forme de sirops, gélules, comprimés, dragées et poudres à diluer.
En général, on sait que des quantités de l'ordre de 500 mg/jour sont suffisantes pour rétablir et maintenir la glycémie dans des limites physiologiquement acceptables en une ou deux prises.
Les effets thérapeutiques se manifestent de 4 à 7 jours après le début du traitement et se maintiennent en régulant les doses en fonction de l'état du patient. Par ailleurs, I'administration du lysat apporte des résultats favorables d'un autre ordre, chez les patients atteints de troubles hépatiques, biliaires et digestifs en général, ainsi que dans certains états d'immunodéficience (allergies), et semble être indiquée également dans le traitement de l'obésité et de l'athérosclérose.
De ce point de vue, il convient de souligner que le lysat de la présente invention inclut tous les composants structurels fonctionnels des cellules cultivées à l'état brut (c'est-à-dire non dénaturées): vitamines, acides aminés, enzymes, etc., ce qui permet de comprendre la multiplicité des effets biologiques observés.
Le produit de la présente invention peut être utilisé aux fins mentionnées principalement pour réguler la glycémie chez des patients non insulinodépendants, seul ou en combinaison, par exemple, avec un régime spécial et/ou des médicaments classiques.
BIBLIOGRAPHIE
1. Bergey - Manual of Systematic Bacteriology, pages 622 à 625 - (1989).
2. Microbiologia Industrial, L. I. Vorobiosa, Université de
Moscou (1989), page 198.
3. Ibidem page 256
4. Biosynthesis of hydroxylated aromatic compounds - Van der Twell et al., Eur. Congress (on boolth) (1987) volume 2, page 172.
5. T. A. Freiar et al., International Journal of Systematic
Bacteriology (1994).
6. D. Brook, M. T. Madigan, Microbiologia Prentice Hall
Hispano-Americana, pages 847 à 849, 6ème Ed.

Claims (11)

REVENDICATIONS
1. Produit utile pour rétablir et maintenir des taux de glycémie physiologiquement acceptables chez des personnes souffrant de diabète non insulinodépendant, caractérisé en ce qu'il comprend la biomasse formée par des bactéries du genre Arthrobacter inoculées dans un milieu et des conditions favorables à la prolifération des bactéries du genre
Arthrobacter, ladite biomasse étant recueillie pendant la phase stationnaire de la culture en rejetant le surnageant puis lysée, en retenant dans le lysat les composants intracellulaires et les fragments structurels des cellules lysées.
2. Produit selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit milieu de culture comprend des pentoses, des hexoses ou du saccharose en tant que source de carbone assimilable, et en ce que la biomasse est recueillie par centrifugation de la culture pendant la phase stationnaire de la croissance des bactéries inoculées, en rejetant le surnageant.
3. Produit selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend la biomasse thermolysée formée par des cellules d'Arthrobacter oxydans ou Arthrobacter pascens, leurs mutants, variants et recombinants, inoculées et cultivées dans un milieu et des conditions favorables à la prolifération des bactéries inoculées, ledit milieu comprenant du glucose selon des concentrations de l'ordre de 5 à 15% en poids en tant que source de carbone assimilable, ladite biomasse étant premièrement séparée et recueillie pendant la phase stationnaire de la culture par centrifugation, en rejetant le surnageant, puis thermolysée, en retenant dans le lysat les composants intracellulaires et les fragments structurels de la membrane cellulaire et des organules des cellules cultivées.
4. Procédé pour préparer un produit utile pour rétablir et maintenir des taux de glycémie physiologiquement acceptables chez des personnes souffrant de diabète non insulinodépendant selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes consistant à:
a) cultiver dans un milieu et des conditions favorables à leur prolifération des bactéries du genre Arthrobacter inoculées dans ledit milieu;
b) séparer et recueillir la biomasse formée pendant la phase stationnaire de la culture, en rejetant le surnageant, et
c) lyser la biomasse recueillie à l'étape b), en retenant les composants intracellulaires et les fragments structurels des cellules lysées.
5. Procédé pour obtenir un produit utile pour rétablir et maintenir des taux de glycémie physiologiquement acceptables chez des personnes souffrant de diabète non insulinodépendant, selon la revendication 4, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes consistant à:
a) cultiver dans un milieu et des conditions favorables à leur prolifération des bactéries du genre Arthrobacter pascens ou Arthrobacter oxydans, leurs mutants, variants et recombinants, inoculées dans ledit milieu, qui comprend du glucose en tant que source de carbone assimilable;
b) séparer, par filtrage avec des membranes dont les pores ont un diamètre de l'ordre de 0,5 microns, les cellules cultivées, pendant la phase stationnaire de la culture, en rejetant le surnageant;
c) lyser les cellules recueillies par thermolyse, en cycles alternés de chauffage pendant une durée suffisante pour obtenir un lysat stérile de cellules recueillies.
6. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que la thermolyse de la biomasse recueillie se fait en cycles alternés de refroidissement à -4 C et de chauffage à 25"C.
7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 6, caractérisé en ce que la biomasse comprenant les cellules cultivées est séparée pendant la phase stationnaire quand la population de cellules viables est de 0,15x108 CFU.
8. Composition alimentaire, caractérisée en ce qu'elle comprend la biomasse ou son lysat obtenu par culture des bactéries du genre
Arthrobacter, selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, en tant qu'agent capable de maintenir le taux de glycémie chez des personnes souffrant de diabète non insulinodépendant dans des limites physiologiquement acceptables, dans un support acceptable en industrie agro-alimentaire, lesdites bactéries étant A. pascens ou A. oxydans.
9. Composition selon la revendication 8, caractérisée en ce que le support est un produit laitier, tel que le lait, le yaourt, la crème.
10. Composition pharmaceutique pour le traitement de personnes souffrant de diabète non insulinodépendant, caractérisée en ce qu'elle comprend la biomasse ou son lysat obtenu par culture de bactéries du genre Arthrobacter selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans un support pharmaceutiquement acceptable.
11. Compositions pharmaceutiques selon la revendication 10, caractérisée en ce qu'elle est formulée sous forme de sirops, de comprimés, de dragées, de poudres à diluer ou de gélules.
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