FR2756844A1 - Nouvelle alpha-glucosidase et nouvelle pullulanase thermostables et leurs utilisations industrielles - Google Patents

Nouvelle alpha-glucosidase et nouvelle pullulanase thermostables et leurs utilisations industrielles Download PDF

Info

Publication number
FR2756844A1
FR2756844A1 FR9615204A FR9615204A FR2756844A1 FR 2756844 A1 FR2756844 A1 FR 2756844A1 FR 9615204 A FR9615204 A FR 9615204A FR 9615204 A FR9615204 A FR 9615204A FR 2756844 A1 FR2756844 A1 FR 2756844A1
Authority
FR
France
Prior art keywords
sep
glucosidase
starch
thermococcus
enzyme
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
FR9615204A
Other languages
English (en)
Other versions
FR2756844B1 (fr
Inventor
Legin Estelle Copinet
Francis Duchiron
Hubert Gantelet
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Universite de Reims Champagne Ardenne URCA
Original Assignee
Universite de Reims Champagne Ardenne URCA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Universite de Reims Champagne Ardenne URCA filed Critical Universite de Reims Champagne Ardenne URCA
Priority to FR9615204A priority Critical patent/FR2756844B1/fr
Priority to PCT/FR1997/002271 priority patent/WO1998026058A1/fr
Publication of FR2756844A1 publication Critical patent/FR2756844A1/fr
Application granted granted Critical
Publication of FR2756844B1 publication Critical patent/FR2756844B1/fr
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2411—Amylases
    • C12N9/2414—Alpha-amylase (3.2.1.1.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2411—Amylases
    • C12N9/2428—Glucan 1,4-alpha-glucosidase (3.2.1.3), i.e. glucoamylase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2451—Glucanases acting on alpha-1,6-glucosidic bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2451—Glucanases acting on alpha-1,6-glucosidic bonds
    • C12N9/2457—Pullulanase (3.2.1.41)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/14—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a carbohydrase (EC 3.2.x), e.g. by alpha-amylase, e.g. by cellulase, hemicellulase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/16—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of an alpha-1, 6-glucosidase, e.g. amylose, debranched amylopectin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/20—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of an exo-1,4 alpha-glucosidase, e.g. dextrose
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01041—Pullulanase (3.2.1.41)

Abstract

La présente invention est relative à une nouvelle alpha-glucosidase et une nouvelle pullulanase obtenues à partir d'une souche du genre Thermococcus ainsi qu'à leur utilisation pour transformer un amidon en un sirop de sucre.

Description

La présente invention est relative à une nouvelle a-glucosidase et une nouvelle pullulanase thermostables et à leurs utilisations industrielles.
Dans l'industrie de l'amidonnerie, la transformation de l'amidon en un sirop de glucose nécessite deux étapes enzymatiques. La première étape est actuellement réalisée par action d'une a-amylase thermostable et la seconde par action d'une glucoamylase ou (d'une a-glucosidase) et d'une pullulanase thermosensibles.
Aussi un des buts de la présente invention est-il de foumir une a-glucosidase qui agit dans les mêmes conditions que l'a-amylase actuellement mise en oeuvre: ainsi la transformation de l'amidon en un sirop de glucose pourrait être réalisée dans une seule étape.
Ce but, ainsi que d'autres qui apparattront par la suite, est atteint par une -glucosidase qui est caractérisée, selon la présente invention, par le fait qu'elle est obtenue par culture d'une souche la produisant du genre Thermococcus.
Avantageusement, cette souche produisant de l'a-glucosidase est
Thermococcus hydrothermalis, souche CNCM 11319.
Comme énoncé ci-dessus, la présente invention est également relative à une pullulanase qui est caractérisée par le fait qu'elle est produite simultanément à l'α-glucosidase ci-dessus.
Un exemplaire de la souche du genre Themzcus hydrothermalis a été déposé le 16 juin 1993 à la Collection Nationale des Cultures de Micro organismes sous le numéro CNCM 11319 : elle correspond à la souche référencée
AL 662 dans la collection détenue par l'IFREMER.
Les deux enzymes issues de Thermococcus hydrothermalis peuvent être utilisées simultanément avec une a-amylase commerciale pour produire un sirop de sucre à partir d'amidon.
La présente invention est décrite en référence aux figures annexées, parmi lesquelles: - la figure 1 montre l'influence de la température sur l'activité d'une a-glucosidase selon la présente invention à pH 5,5; - ia figure 2 montre l'influence du pH sur l'activité d'une a-glucosidase selon la présente invention à une température de 80 C; - la figure 3 montre l'effet du pH sur l'activité d'une pullulanase purifiée selon l'invention ; et, - la figure 4 montre l'effet de la température sur l'activité d'une pullulanase purifiée selon l'invention ainsi que l'effet protecteur du calcium à une concentration de 1 mM.
Selon la présente invention, une aglucosidase est obtenue à partir d'une souche du genre Thermococcus, en particulier, Theroccoccus hydrotherna lis, et une pullulanase a partir d'une souche du genre Thermococcus, notamment Theroococcus hydrothermalls.
Une souche de Thermococcus hydrothermalls a été rendue public sous le numéro CNCM 11319 : elle a été déposée le 16 juin 1993.
L'a-glucosidase est une enzyme constitutive chez Thermococcus hydrothermalis. La mise au point de la production de cette enzyme chez cette bactérie a montré que certaines sources carbonées (comme l'amidon soluble, le glycogène et des dextrines) pouvaient induire par trois la production de l'enzyme. L'ajout de 4 gli d'amidon soluble au milieu d'induction a été retenu pour la suite de l'étude.
Le rapport entre la croissance de la souche et la production enzymatique a été abordé. Ainsi, Thermococcus hydrothermalis, cultivé en fermenteur d'un litre et demi sur milieu BHl+soufre+amidon soluble, possède un temps de génération de 34 min. et atteint sa phase stationnaire en 8 heures environ. Le maximum d'activité est atteint en 6-7 heures au niveau du milieu intracellulaire, puis on constate que l'activité intracellulaire diminue progressivement. L'activité extracellulaire qui est faible dans les premières heures de culture, augmente progressivement jusqu'à 24 heures. Ce phénomène peut être expliqué par la l,yse cellulaire de la souche: en effet, I'a-glucosidase qui est assurément une enzyme intracellulaire, est libérée dans le milieu de culture lors de la phase stationnaire et la phase de déclin, provoquant cette augmentation d'activité extracellulaire.
L'étude des propriétés physico-chimiques de l'aglucosidase, dans le milieu intracellulaire a montré que cette enzyme est active de façon optimale à pH 5,0-5,5 et à 11000 environ. Elle présente encore 50 % de l'activité maximale entre 96"C et 116"C. A 120 C, L'enzyme est dénaturée. L'a-glucosidase de la souche selon l'invention est stable pendant 24 h à 80"C, tandis qu'à 96 C, il ne reste que 50 % de l'activité initiale au bout de 2 h 30. La stabilité thermale de l'enzyme est augmentée en présence d'amidon. Plus le pourcentage d'amidon est accru et plus la protection de l'enzyme envers l'inactivation par la chaleur augmente. Ainsi, à 106 C, en présence de 10 % d'amidon, la demi-vie de l'enzyme est de 2 h, alors que sans amidon, la demi-vie n'est que de 8 min.
La purification de l'enzyme a été abordée afin de pouvoir mettre en évidence ces caractéristiques exactes et afin que l'enzyme puisse être comparée aux autres a-glucosidases déjà décrites. Pour cela, Thermococcus hydrothermalis est cultivé en fermenteur de 200 litres sur milieu BHl+soufre+amidon, en anaérobiose, à 80"C et pH 6,0. Au bout de 6 heures de croissance, les cellules bactériennes sont récupérées par centrifugation du milieu de culture et cassées par passage sur presse de French. Le milieu intracellulaire contenant l'cFglucosidase est dialysé avec une cellule d'ultrafiltration dont le seuil de coupure est de 30 kDa et concentré par précipitation des protéines au sulfate d'ammonium (70 % de saturation). Après centrifugation, le culot protéique est repris dans un faible volume de tampon et dialysé afin d'éliminer le sulfate d'ammonium. L'échantillon protéique est déposé en plusieurs fois sur une cdonne échangeuse d'ions (Hitrap Q sépharose High Performance). Les protéines sont éluées grâce à un gradient discontinu de tampon Tris-HCL contenant 1 M de NaCI. Les fractions possédant l'activité apNPGase sont regroupées et concentrées sur cellule UF. La 3ème étape de purification emploie une chromatographie d'affinité sur gel de sépharose sur lequel sont greffés des résidus glucose. L'enzyme est éluée de la colonne grace à un gradient continu de tampon phosphate contenant 1M de NaCI. La dernière étape consiste à faire passer l'échantillon protéique sur une colonne de tamisage moléculaire (Séphacryl S200 High performance). L'enzyme purifiée est obtenue après toutes ces étapes. La protéine est monomérique et possède une masse molaire d'environ 118000 datons.
Pour la mise en évidence de la production d'une pullulanase, on a utilisé un milieu de culture, appelé BHIS, composé d'infusion de coeur-cervelle (9 g/l), de NaCI (23 g/l), de soufre élémentaire (5 gn), de tampon PIPES (6,05 gn), de résazurine (1 mg/l). Après tyndallisation (40 min à 100 C deux jours successivement), le milieu est réduit par du Na2S (0,5 gn) dans une enceinte anaérobie où la composition en gaz est N2MzlC02 dans les proportions 90 % /5 % /5 %.
L'incubation est réalisée à 80"C.
Après croissance, les milieux sont dégazés à l'azote pour éliminer l'H2S formé par l'isolat, filtrés pour retenir le soufre élémentaire, puis cellules et surnageants sont séparés par centrifugation (10.000 g pendant 40 min).
L'activité pullulanase est déterminée en mesurant les sucres réducteurs libérés, par la méthode à l'acide dinitrosalicylique (Miller 1959), quand l'extrait enzymatique est incubé à 80"C en présence de pullulanase (0,75 %) dans du tampon phosphate de sodium (200 mM, pH 6.0).
Pour l'étude du pH, les conditions sont identiques à celles citées précédemment avec un tampon citrate-phosphate 200 mM pour les pH 3.0-7.0 et un tampon phosphate de sodium 200 mM pour les pH 6.08.0.
Pour l'étude de l'induction de l'activité pullulanase par les sucres, une autre technique a été utilisée. II s'agit de suivre l'hydrolyse du pullulane coloré (bleu brillant de rémazol-pullulane) par la libération du groupement coloré (bleu brillant de rémazol).
La purification de l'enzyme a été abordée afin de pouvoir mettre en évidence ces caractéristiques exactes et afin que l'enzyme puisse être comparée aux autres pullulanases déjà décrites. Pour cela Thermococcus Hydrothermalls a été cultivé dans les conditions précédemment décrites, avec les différences suivantes: le maltrose est utilisé à la place de l'amidon et la culture dure 23 heures les autres conditions sont inchangées.
Les protéines précipitées au sulfate d'ammonium ont été remises en solution dans du tampon phosphate de sodium pH 6,0 et déposées sur une colonne de chromatographie d'interactions hydrophobes. L'élution a été réalisée avec un gradient décroissant de sulfate d'ammonium (de 1 a 0 molaire) dans du tampon phosphate de sodium pH 6,0. Après cette première étape, le rendement de récupération de l'activité pullulanase a été de 31 % et le taux de purification de 10.
On a ensuite réalisé une chromatographie par échange d'ions à pH 8,5 après une concentration et une diaflitration des fractions contenant l'activité pullulanase. Les protéines ont été éluées avec un gradient de chlorure de sodium (de O à 1 molaire) dans du tampon Tris-HCI pH 8,5. Par rapport à l'extrait brut de départ, le rendement de récupération était de 15 % et le taux de purification de 30.
La dernière étape a été une chromatographie d'affinité après concentration et diafiltration des fractions récupérées précédemment. Le malotriose a été utilisé comme ligand d'affinité, et a été couplé à du sépharose activé. L'enzyme a été éluée avec un gradient de chlorure de sodium (de O à 0,6 molaire) dans du tampon acétate de sodium pH 5,5. Le rendement de récupération de cette dernière étape était de 8 % et le taux de purification de 97 par rapport à l'extrait brut.
L'enzyme purifiée est obtenue après toutes ces étapes et possède une masse molaire d'environ 128000 daltons.
Les propriétés de l'enzyme purifiée sont illustrées sur les figures 3 et 4.
Les enzymes, selon la présente invention, sont d'une grande utilité notamment dans l'amidonnerie: la conversion de l'amidon en divers sirops de sucre se déroule à hautes températures du fait de la très faible solubilité de l'amidon.
L'utilisation d'une a-glucosidase compatible avec l'a-amylase mise en oeuvre lors du premier stade de transformation permet de réduire le procédé de transformation en une seule étape. De même, I'utilisation d'une pullulanase qui présente une activité maximale dans cette même zone de température, permet de concourir à la conversion de l'amidon en divers sirops de sucre en une seule et même étape.
L'utilisation de ces enzymes est illustrée par les deux exemples sui vants:
ExemIe 1:
Action d'un extrait brut de la souche Thermococcus Hydrothemalis riche en aglucosidase.
2 essais sont réalisés en parallèle avec de l'amidon de blé natif comme substrat essai 1: Amidon natif 90 g
CaC12 60ppm
Termamyl 1201 150 micro-litres tampon phosphate pH 6,0 200 mM en quantité suffisante pour avoir un volume réactionnel de 300 ml. essai 2 identique à l'essai 1 mais avec 30 unité a-glucosidase issue de Thermo coccus hydrothermalis
Pour les deux essais, la température d'incubation est de 90"C.
Les résultats sont présentés dans le tableau suivant:
Figure img00060001
<tb> Temps <SEP> Essal <SEP> 1 <SEP> Essal <SEP> 1 <SEP> Essal <SEP> 2 <SEP> Essal <SEP> 2
<tb> (heures) <SEP> Glucose <SEP> g/l <SEP> DE <SEP> g/l <SEP> Glucose <SEP> g/l <SEP> DE <SEP> g/l
<tb> <SEP> O <SEP> O <SEP> 6 <SEP> o <SEP> 6 <SEP>
<tb> <SEP> 1 <SEP> 3,6 <SEP> 14,7 <SEP> 7,7 <SEP> 17,4
<tb> <SEP> 3 <SEP> 6,5 <SEP> 16,8 <SEP> 14,4 <SEP> 22
<tb> <SEP> 7 <SEP> 7,5 <SEP> 18,75 <SEP> 26 <SEP> 29
<tb>
Les essais n'ont pas été poursuivis au delà de 7 heures, car comme nous avons utilisé un extrait brut comme source d'enzyme, très riche en protéine, cela a entratné la formation de composé de Maillard dans le milieu réactionnel rendant difficile l'analyse des produits de la réaction.
Mais, cet exemple préliminaire montre qu'il est possible de réaliser en
une seule étape la réaction de liquéfaction et la réaction de saccharification.
E-nDte2
Action d'un extrait brut de la souche Thermococcus hydrothermalis riche en pullu
la nase
2 essais sont réalisés en parallèle avec de l'amidon de blé natif comme substrat
essal 1 : Liguéfaction
Amidon 160 g/l
Termamyl 120 1 150 micro-litre
CaCl2 60 ppm
tampon phosphate pH 6,2 200 mM en quantité suffisante pour avoir un
volume réactionnel de 300 ml.
Incubation 2 heures à 90 C.
Saccharification
ajout de 55 Unité amyloglucosidase AMG 300 L commercialisée par la
société Novo Nordisk.
La réaction est suivie pendant 22 heures à 60 C. essai 2
identique à l'essai 1 mais durant l'étape de liquéfaction, diverses quantités de pullulanase de Thermococcus hydrothermalis ont été ajoutées soit: 34 Unités, 68 Unités, 136 Unités.
Les résultats sont présentés sur la figure 5 ci-jointe.
Ils nous montrent clairement que l'ajout de la pullulanase thermostable lors de l'étape de liquéfaction permet de réduire significativement le temps de saccharification.

Claims (6)

REVENDICATIONS
1. a-glucosidase caractérisée par le fait qu'elle est obtenue par culture d'une souche la produisant du genre Thermococcus.
2. a-glucosidase, selon la revendication 1, caractérisée par le fait, que la souche la produisant est Thermococcus hydrothermalis.
3. a-glucosidase, selon la revendication 1, caractérisée par le fait que la souche la produisant est Thermococcus hydrothermalis, CNCM 1 1319.
4. a-glucosidase, selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée par le fait qu'elle présente une activité à un pH compris entre 5,0 et 5,5 à une température comprise entre 96 et 116"C, le substrat étant de l'amidon.
5. a-glucosidase, selon la revendication 4, caractérisée par le fait qu'elle présente une activité maximale à une température de 110 C à un pH de 5,5, le substrat étant de l'amidon.
6. Procédé pour produire un sirop de sucre à partir d'amidon, caractérisé par le fait que l'on utilise simultanément une a-amylase commerciale, une aglucosidase et une pullulanase issues de Thermococcus hydrothermalis.
FR9615204A 1996-12-11 1996-12-11 Nouvelle alpha-glucosidase et nouvelle pullulanase thermostables et leurs utilisations industrielles Expired - Fee Related FR2756844B1 (fr)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9615204A FR2756844B1 (fr) 1996-12-11 1996-12-11 Nouvelle alpha-glucosidase et nouvelle pullulanase thermostables et leurs utilisations industrielles
PCT/FR1997/002271 WO1998026058A1 (fr) 1996-12-11 1997-12-11 Alpha-glucosidase et pullulanase thermostables et leurs utilisations

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9615204A FR2756844B1 (fr) 1996-12-11 1996-12-11 Nouvelle alpha-glucosidase et nouvelle pullulanase thermostables et leurs utilisations industrielles

Publications (2)

Publication Number Publication Date
FR2756844A1 true FR2756844A1 (fr) 1998-06-12
FR2756844B1 FR2756844B1 (fr) 1999-02-12

Family

ID=9498540

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FR9615204A Expired - Fee Related FR2756844B1 (fr) 1996-12-11 1996-12-11 Nouvelle alpha-glucosidase et nouvelle pullulanase thermostables et leurs utilisations industrielles

Country Status (1)

Country Link
FR (1) FR2756844B1 (fr)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2706906A1 (en) * 1993-06-21 1994-12-30 Ifremer Alcohol dehydrogenase, microorganism producing it and its uses
WO1995023852A1 (fr) * 1994-03-04 1995-09-08 Novo Nordisk A/S AMYLASE ET PULLULANASE DE $i(THERMOCOCCUS)

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2706906A1 (en) * 1993-06-21 1994-12-30 Ifremer Alcohol dehydrogenase, microorganism producing it and its uses
WO1995023852A1 (fr) * 1994-03-04 1995-09-08 Novo Nordisk A/S AMYLASE ET PULLULANASE DE $i(THERMOCOCCUS)

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BROWN S H ET AL: "CHARACTERIZATION OF AMYLOLYTIC ENZYMES, HAVING BOTH ALPHA-1,4 AND ALPHA-1,6 HYDROLYTIC ACTIVITY, FROM THE THERMOPHILIC ARCHAEA PYROCOCCUS FURIOSUS AND THERMOCOCCUS LITORALIS", APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, vol. 59, no. 8, August 1993 (1993-08-01), WASHINGTON US, pages 2614 - 2621, XP000604490 *
COSTANTINO H R ET AL.: "PURIFICATION AND CHARACTERIZATION OF AN ALPHA GLUCOSIDASE FROM A HYPERTHERMOPHILIC ARCHEABACTERIUM PYROCOCCUS FURIOSUS EXHIBITING A TEMPERATURE OPTIMUM OF 105 TO 115 C", JOURNAL OF BACTERIOLOGY, vol. 172, no. 7, 1990, WASHINGTON US, pages 3654 - 3660, XP002040765 *
DATABASE DERWENT BIOTECHNOL. ABS. DERWENT PUBL. LTD.; 1993, G. ANTRANIKIAN: "The biotechnological significance of extreme thermophilic microorganisms and their extracellular enzymes", XP002040767 *
DECHEMA BIOTECHNOL. CONF., vol. 5, 1992, DE, pages 13-16 *
GODFROY A ET AL.: "THERMOCOCCUS HYDROTHERMALIS SP. NOV., A NEW HYPERTHERMOPHILIC ARCHAEON ISOLATED FROM A DEEP-SEA HYDROTHERMAL VENT", INTERNATIONAL JOURNAL OF SYSTEMATIC BACTERIOLOGY, vol. 47, no. 3, 1997, WASHINGTON US, pages 622 - 626, XP002040766 *
PILLER K ET AL.: "PROPERTIES AND STABILIZATION OF AN EXTRACELLULAR ALPHA-GLUCOSIDASE FROM THE EXTREMELY THERMOPHILIC ARCHAEBACTERIA THERMOCOCCUS STRAIN AN1: ENZYME ACTIVITY AT 130 DEGREE C", BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA, vol. 1292, no. 1, 1996, AMSTRDAM NL, pages 197 - 205, XP002040764 *

Also Published As

Publication number Publication date
FR2756844B1 (fr) 1999-02-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI79345B (fi) Enzymprodukt innehaollande en -1,6-glukosidas och foerfarande foer framstaellning av denna.
CA1282724C (fr) Hydrolyse enzymatique de l&#39;amydon granulaire directement en glucose
JPH04503757A (ja) 新規超熱安定性α―アミラーゼ
EP0541676A1 (fr) Nouvelles pullulanases thermostables
EP0319372B1 (fr) Procédé de production de polysaccharides
US4318927A (en) Method of producing low calorie alcoholic beverage with starch-degrading enzymes derived from Cladosporium resinae
JPH0330672A (ja) 新規耐熱性および耐酸性プルラナーゼ酵素およびその製造方法
US4318989A (en) Starch-degrading enzymes from Cladosporium resinae
JPS62201577A (ja) β−アミラ−ゼ酵素
CN101415722A (zh) 制备κ-角叉菜聚糖酶的方法
WO1998026058A1 (fr) Alpha-glucosidase et pullulanase thermostables et leurs utilisations
US4234686A (en) Starch-degrading enzymes derived from cladosporium resinae
FR2756844A1 (fr) Nouvelle alpha-glucosidase et nouvelle pullulanase thermostables et leurs utilisations industrielles
Gantelet et al. Characteristics of pullulanases from extremely thermophilic archaea isolated from deep-sea hydrothermal vents
FR2763598A1 (fr) Nouvelle pullalanase thermostable et son utilisation industrielle
JPH05292962A (ja) 新規な枝切り酵素及びその製造法
EP0318543B1 (fr) Procede de production de cellulose bacterienne a partir de matiere d&#39;origine vegetale
JPS61162181A (ja) 耐熱性キシラナ−ゼの製造法
JP2003093090A (ja) イヌリンの製造方法
DK164600B (da) Termostabil pullulanase og fremgangsmaade til fremstilling deraf samt anvendelse deraf i en fremgangsmaade til forsukring af stivelse eller i en fremgangsmaade til fremstilling af maltose med hoej renhed
FR2817264A1 (fr) Pullulan alpha-1,4-isomaltohydrolase
BE1006483A3 (fr) Pullulanase, microorganismes la produisant, procedes de preparation de cette pullulanase, utilisations et compositions comprenant celle-ci.
WO1996004366A1 (fr) Procede de culture de bacteries thermophiles et de bacteries hyperthermophiles anaerobies strictes non sulfato-reductrices
JPH062071B2 (ja) 糖類の製造法
JP3747083B2 (ja) 新規なアミラーゼ、その製造法および用途

Legal Events

Date Code Title Description
ST Notification of lapse

Effective date: 20160831