FR2679235A1 - Methode de purification des aminoacides, des acides nucleiques et de leurs derives. - Google Patents
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Abstract
Une méthode de purification d'un aminoacide, d'un acide nucléique ou d'un dérivé de l'un ou l'autre acide, caractérisé en ce qu'elle comprend le traitement d'une bouillie de cristaux contenant au plus 10 % en poids de cellules ayant un diamètre ne dépassant pas 5 mum sur la base du poids sec et 5 à 60 % en poids de cristaux d'un aminoacide, d'un acide nucléique ou d'un dérivé de l'un ou l'autre acide ayant un diamètre de 10 à 2 000 mum, a l'aide d'un cyclone liquide ayant un diamètre représentatif capable d'accroître suffisamment la concentration des cristaux au niveau du côté aval du cyclone liquide et, si nécessaire, l'application d'une contre pression au niveau du côté aval pour récupérer une solution concentrée de cristaux ayant une concentration en cristaux de 30 à 90 % en poids au niveau du côté aval et pour sélectionner au moins 50 % des cellules au niveau du côté amont.
Description
Domaine de l'invention
La présente invention concerne une méthode pour isoler efficacement et purifier les cristaux, spécialement d'aminoacides, d'acides nucléiques et de leurs dérivés, à partir de solutions contenant à la fois les cristaux et les cellules bactériennes.
La présente invention concerne une méthode pour isoler efficacement et purifier les cristaux, spécialement d'aminoacides, d'acides nucléiques et de leurs dérivés, à partir de solutions contenant à la fois les cristaux et les cellules bactériennes.
Art antérieur
Comme méthodes pour séparer les cristaux d'un bouillon de culture ou d'une solution de réaction enzymatique, on a utilisé jusqu'à présent d'une manière générale la filtration ou la précipitation par centrifugation. Lorsque des cellules sont contenues dans la solution à traiter, elles tendent à provoquer Le bouchage du tissu filtrant pendant la filtration qui ne requiert qu'un investissement relativement faible, et en même temps, ta plupart des cellules sont absorbées dans les cristaux de sorte que la filtration ne convient pas pour la séparation des cristaux.En ce qui concerne la précipitation par centrifugation représentée par Le type à dispositif de décantation, il est possible d 'isoler les cristaux mais La sélection des cellules et de La liqueur mère adhérente n'est pas suffisante. It est ainsi nécessaire de conduire une séparation à étapes multiples et des lavages à contre courant, etc. Dans ce cas, ta perte Lors de la séparation des cristaux est inévitable. Comme autre méthode, un acide ou une base est ajouté à la solution à traiter pour dissoudre tes cristaux, et après séparation des cellules de la solution, la recristallisation peut être conduite.
Comme méthodes pour séparer les cristaux d'un bouillon de culture ou d'une solution de réaction enzymatique, on a utilisé jusqu'à présent d'une manière générale la filtration ou la précipitation par centrifugation. Lorsque des cellules sont contenues dans la solution à traiter, elles tendent à provoquer Le bouchage du tissu filtrant pendant la filtration qui ne requiert qu'un investissement relativement faible, et en même temps, ta plupart des cellules sont absorbées dans les cristaux de sorte que la filtration ne convient pas pour la séparation des cristaux.En ce qui concerne la précipitation par centrifugation représentée par Le type à dispositif de décantation, il est possible d 'isoler les cristaux mais La sélection des cellules et de La liqueur mère adhérente n'est pas suffisante. It est ainsi nécessaire de conduire une séparation à étapes multiples et des lavages à contre courant, etc. Dans ce cas, ta perte Lors de la séparation des cristaux est inévitable. Comme autre méthode, un acide ou une base est ajouté à la solution à traiter pour dissoudre tes cristaux, et après séparation des cellules de la solution, la recristallisation peut être conduite.
Un cyclone liquide est bien connu comme machine de classification du type par voie humide qui donne une force centrifuge dans un cylindre fixe par rotation du liquide et a été largement utilisé pour récupérer des matières finement broyées dans une mine, pour séparer des grains de sable d'une pâte, pour classifier divers amidons, etc. Ces applications sont toutes basées sur l'application de la fonction d'un cyclone liquide à la classification des particules ayant un diamètre plus grand que le diamètre critique du côté aval du cyclone. Toutefois, dans ce cas, un cyclone liquide n'est pas susceptible de classifier des particules ayant un diamètre inférieur au diamètre critique mais ces particules sont simplement classifiées par le rapport entre le volume de liquide en amont et celui en aval.
Lorsque t'on applique ce concept, on arrive au mieux à L'idée qu'une bouillie de cristaux, sous la forme d'une solution contenant des cristaux, est concentrée en utilisant un cyclone liquide. Lorsqu'une solution contenant des cellules est alimentée dans le cyclone liquide, les cellules ont un diamètre inférieur au diamètre critique de sorte qu'il n'y a aucune différence de concentration entre L'amont et l'aval du cyclone liquide, ce qui rend la séparation des cellules impossible.
Problèmes à résoudre par l'invention
L'invention a pour but de développer une méthode pour isoler efficacement Les cristaux à partir d'une solution contenant des cristaux et des cellules avec un nombre moindre d'étapes et à un coût inférieur.
L'invention a pour but de développer une méthode pour isoler efficacement Les cristaux à partir d'une solution contenant des cristaux et des cellules avec un nombre moindre d'étapes et à un coût inférieur.
Moyens pour résoudre les problèmes
Comme résultat de recherches intensives pour résoudre tes problèmes mentionnés ci-dessus, Les présents inventeurs ont trouvé que par application d'un cyclone Liquide à une solution contenant à la fois des cristaux et des ceLLules, les cristaux peuvent être efficacement concentrés et isolés par ta capacité de classification du cyclone liquide et en même temps, les cellules ayant un diamètre inférieur à celui des cristaux, ce qui rend difficile t'application du cyclone liquide, peuvent être efficacement sélectionnées à partir d'une solution concentrée de cristaux.
Comme résultat de recherches intensives pour résoudre tes problèmes mentionnés ci-dessus, Les présents inventeurs ont trouvé que par application d'un cyclone Liquide à une solution contenant à la fois des cristaux et des ceLLules, les cristaux peuvent être efficacement concentrés et isolés par ta capacité de classification du cyclone liquide et en même temps, les cellules ayant un diamètre inférieur à celui des cristaux, ce qui rend difficile t'application du cyclone liquide, peuvent être efficacement sélectionnées à partir d'une solution concentrée de cristaux.
Ainsi, la méthode de purification d'un aminoacide, d'un acide nucléique ou d'un dérivé de l'un ou l'autre acide comprend selon l'invention, le traitement d'une bouillie de cristaux contenant au plus 10 X en poids de cellules ayant un diamètre ne dépassant pas 5 pm sur La base du poids sec et 5 à 60 X en poids de cristaux d'un aminoacide, d'un acide nucléique ou d'un dérivé d'un tel acide ayant un diamètre de 10 à 2 000 pm à l'aide d'un cyclone liquide ayant un diamètre représentatif capable dtaccroître suffi samment la concentration des cristaux au niveau du côté aval du cyclone Liquide et, si nécessaire, l'application d'une contre pression au niveau du côté aval pour récupérer une solution concentrée de cristaux ayant une concentration en cristaux de 30 à 90 % en poids au niveau du côté aval et pour sélectionner au moins 50 X des cellules au niveau du côté amont.
Plus particulièrement, la bouillie de cristaux contenant au plus 10 % en poids de cellules ayant un diamètre ne dépassant pas 5 pm sur la base du poids sec et 5 à 60 % en poids de cristaux d'un aminoacide, d'un acide nucléique ou d'un dérivé d'un tel acide ayant un diamètre de 10 à 2 000 um est alimentée en premier lieu dans le cyclone liquide à L'aide d'une pompe. Le cyclone liquide utilisé peut être du type conventionnel comme montré à la figure 1 et a un diamètre représentatif suffisamment petit pour accroitre suffisamment la concentration des cristaux au niveau du côté aval.
Par sélection d'une pression d'alimentation, les cristaux sont transportés vers le côté aval en raison d'un effet de centrifugation à l'intérieur du cyclone liquide, de sorte que la concentration en cristaux au niveau du côté aval peut être accrue. En même temps, les cellules sont moins affectées par l'effet de centrifugation du cyclone liquide et sont transportées principalement au niveau du côté amont, car la concentration des cristaux concentrés au niveau du côté aval devient élevée, bien que les cellules montrent un comportement similaire à celui de ta solution.Par conséquent, Les cristaux et la solution de cellules peuvent être efficacement séparés l'un de l'autre. En prenant en ligne de compte la perte de cristaux au niveau du côté amont, une contre pression est également appliquée au niveau du côté aval, si nécessaire, afin que ta concentration de cristaux au niveau du côté aval augmente et la sélection des celLules est simultanément accélérée.
Comme décrit ci-dessus, les cristaux peuvent être efficacement séparés de la solution en utilisant le cyclone liquide contenant les trois composants cristaux, cellules et ingrédients du milieu.
La solution de cristaux concentrée ainsi obtenue est filtrée ou déshydratée par centrifugation. Il devient ainsi possible d'isoler les bons cristaux ayant une bonne sélection des cellules et une sélection moins bonne de la liqueur mère adhérente, comparativement à la précipitation conventionnelle par centrifugation, etc. La raison en est que dans la soLution concentrée de cristaux après le traitement, les cellules sont sélectivement séparées et les cristaux fins qui provoquent également une vitesse de filtration ou de déshydratation réduite comme pour les ceLlules, sont simultanément et sélectivement séparés, tandis que la solution avant le traitement provoque te bouchage du tissu filtrant en raison de la présence des cellules et ne convient pas pour cet usage.
La bouillie de cristaux à laquelle s'applique ta présente invention est une bouillie dérivée d'une solution de culture ou d'une solution de réaction enzymatique d'un aminoacide, d'un acide nucléique ou d'un dérivé d'un tel acide, solution dans laqueLle les cristaux sont précipités (par exemple solution de fermentation de la guanosine), ou une bouillie contenant des cristaux qui sont précipités par addition d'un acide ou d'une base après achèvement de la fermentation ou de la réaction enzymatique (par exemple solution de fermentation de L'acide gLutamique), ou une bouillie contenant des cristaux qui sont précipités par concentration ou refroidissement après achèvement de la fermentation ou de la réaction enzymatique (par exempLe solution de fermentation du tryptophane), etc. ; toutes ces bouillies contenant des cellules et des cristaux d'un aminoacide, d'un acide nucléique ou d'un dérivé d'un tel acide produits par les cellules.
Des exemples d'une telle bouillie de cristaux incluent les soLutions contenant divers aminoacides tels que phénylalanine, leucine, isoleucine, glutamine, acide aspartique ou un dérivé dudit acide, etc., en plus de L'acide glutamique et du tryptophane décrit précédemment et des cellules capables de produire ces acides. La présente invention s'applique également à une bouillie de cristaux d'un nucléoside, d'un nucléotide ou d'un dérivé de ce dernier, en plus de la guanosine décrite précédemment, qui est obtenue par fermentation ou par réaction enzymatique.
En outre, la méthode de la présente invention est beaucoup plus efficace Lorsqu'elle est combinée avec L'étape de fermentation ou de réaction enzymatique. Par soutirage des cristaux d'un aminoacide, d'un acide nucléique ou d'un dérivé d'un tel acide, produits par la fermentation ou par la réaction enzymatique à partir d'une cuve de fermentation, la fermentation ou la réaction enzymatique se déroule d'une manière régulière et en même temps,
Les procédés de L'étape de traitement sont simplifiés, de sorte que la productivité de l'aminoacide, de L'acide nucléique ou du dérivé d'un tet acide peut être améliorée et les coûts de production peuvent être réduits.
Les procédés de L'étape de traitement sont simplifiés, de sorte que la productivité de l'aminoacide, de L'acide nucléique ou du dérivé d'un tet acide peut être améliorée et les coûts de production peuvent être réduits.
En vue d'isoler et de récupérer les cristaux de l'amino- acide, de L'acide nucléique ou du dérivé d'un tel acide, formés durant la fermentation ou la réaction enzymatique, le bouillon de culture ou la solution de réaction contenant Les cristaux est soutiré en continu ou par intermittence et tes cristaux sont isolés en utilisant un cyclone liquide. Un exemple de connexion d'une cuve de fermentation ou d'une cuve de réaction avec le cyclone liquide est illustré à la figure 2. Du côté aval, une solution concentrée des cristaux peut être obtenue. Par purification des cristaux, l'aminoacide, l'acide nucléique ou un dérivé d'un tel acide ayant une pureté supérieure peut être obtenu.Dans la solution au niveau du côté amont, sont contenus les composants du milieu et les cellules qui, peuvent être recyclés dans la cuve de fermentation ou dans la cuve de réaction en vue de la culture. Selon une autre méthode, étant donné que cette solution contient également le produit qui n'est pas cristallisé mais qui est à L'état dissous, l'aminoacide, l'acide nucléique ou le dérivé d'un tel acide peut être collecté à partir de la solution d'une manière conventionnelle telle que cristallisation par concentration ou par une méthode à la résine. De même, lorsque la fermentation ou la réaction enzymatique est complète, les cristaux peuvent être isolés et recueillis à partir du bouillon de culture ou de la solution de réaction.Le produit qui est à l'état dissous peut également être recueilli d'une manière conventionnelle telle que cristallisation par concentration ou par la méthode à la résine, soit seule soit en combinaison.
Conformément à la méthode de la présente invention, la solution contenant les cristaux et les cellules est alimentée dans le cyclone liquide, de sorte que les cristaux sont transportés au niveau du côté aval par l'effet centrifuge dans l'intérieur du cyclone liquide et récupérés sous la forme d'une solution concentrée de cristaux ; par ailleurs, Les cellules sont moins affectées par l'effet centrifuge et montrent un comportement similaire à celui de la solution mais la plupart d'entre elles sont soutirées au niveau du côté amont en raison de ta concentration accrue des cristaux concentrés au niveau du côté aval. Par suite, les cristaux peuvent être séparés efficacement de la solution.
La séparation et la purification des cristaux utilisant un cyclone Liquide sont avantageuses par divers aspects comparativement à l'utilisation d'une machine conventionnelle de centrifugation, car L'investissement en appareil est très peu coûteux, l'entretien est facile, le cyclone liquide est compact, possède une grande capacité de traitement sans nécessiter un grand espace, la consommation d'énergie est peu coûteuse car on utilise seulement une pompe, les procédés et les opérations sont simples, le traitement à étapes multiples et le lavage à contre courant sont faciles, etc.
Sur les dessins :
la figure 1 représente un cyclone liquide selon l'invention, sur cette figure : A désigne l'entrée ; B le corps du cyclone liquide ; C la sortie de la solution légère (côté amont) ; et D la sortie de la solution lourde (côté aval) ;
la figure 2 représente un exemple de connexion de ta cuve de fermentation avec le cyclone liquide ; sur cette figure
a désigne la cuve de culture (ou de réaction) ;
b la pompe stérilisée ;
c le cyclone liquide ;
d l'entrée d'alimentation du bouillon de culture ;
e le côté aval ;
f Le côté amont.
la figure 1 représente un cyclone liquide selon l'invention, sur cette figure : A désigne l'entrée ; B le corps du cyclone liquide ; C la sortie de la solution légère (côté amont) ; et D la sortie de la solution lourde (côté aval) ;
la figure 2 représente un exemple de connexion de ta cuve de fermentation avec le cyclone liquide ; sur cette figure
a désigne la cuve de culture (ou de réaction) ;
b la pompe stérilisée ;
c le cyclone liquide ;
d l'entrée d'alimentation du bouillon de culture ;
e le côté aval ;
f Le côté amont.
La figure 3 est le schéma de l'installation utilisé pour le traitement d'une solution de fermentation de l'acide glutamique à l'exemple 1.
Exemples
La présente invention sera décrite c;-après en plus ample détail en référence aux exemples qui suivent.
La présente invention sera décrite c;-après en plus ample détail en référence aux exemples qui suivent.
Exemple 1
Une solution de fermentation de l'acide glutamique contenant 1 X en poids de cellules bactériennes productrices d'acide glutamique, sur la base du poids sec, est chargée dans une cuve (1) de cristallisation montrée à la figure 3. L'acide sulfurique est ajouté à la solution de fermentation et la cristallisation par neutratisation est conduite à pH 3,2. La bouillie de cristaux d'acide glutamique obtenue par la cristallisation contient 10 X en volume de cristaux et le diamètre des cristaux est d'environ 2 à 300 pm. La bouillie contenant les cristaux d'acide glutamique est alimentée dans un cyclone liquide (3) via une pompe (2). Le cyclone
Liquide (3) a la forme ordinaire d'un cyclone, est réalisé en céramique et a un diamètre représentatif de 20 mm dans sa portion cylindrique.La pression d'alimentation est réglée à 5 kg/m2 manométriques (50 Pa) et le volume d'alimentation par cyclone liquide est de 0,72 m3/h. Une compression de 0,5 kg/m2 manométrique (5 Pa) est appliquée à l'orifice aval du cyclone liquide mais aucune contrepression n'est appliquée à l'orifice amont. Par cette opération, des cristaux d'acide glutamique sont obtenus au niveau du côté aval du cyclone liquide, sous la forme d'une solution concentrée contenant 90 X en poids de cristaux, et plus de 90 X de cellules dans la solution d'alimentation sont sélectivement séparés.
Une solution de fermentation de l'acide glutamique contenant 1 X en poids de cellules bactériennes productrices d'acide glutamique, sur la base du poids sec, est chargée dans une cuve (1) de cristallisation montrée à la figure 3. L'acide sulfurique est ajouté à la solution de fermentation et la cristallisation par neutratisation est conduite à pH 3,2. La bouillie de cristaux d'acide glutamique obtenue par la cristallisation contient 10 X en volume de cristaux et le diamètre des cristaux est d'environ 2 à 300 pm. La bouillie contenant les cristaux d'acide glutamique est alimentée dans un cyclone liquide (3) via une pompe (2). Le cyclone
Liquide (3) a la forme ordinaire d'un cyclone, est réalisé en céramique et a un diamètre représentatif de 20 mm dans sa portion cylindrique.La pression d'alimentation est réglée à 5 kg/m2 manométriques (50 Pa) et le volume d'alimentation par cyclone liquide est de 0,72 m3/h. Une compression de 0,5 kg/m2 manométrique (5 Pa) est appliquée à l'orifice aval du cyclone liquide mais aucune contrepression n'est appliquée à l'orifice amont. Par cette opération, des cristaux d'acide glutamique sont obtenus au niveau du côté aval du cyclone liquide, sous la forme d'une solution concentrée contenant 90 X en poids de cristaux, et plus de 90 X de cellules dans la solution d'alimentation sont sélectivement séparés.
Un taux de récupération des cristaux au niveau du côté aval du cyclone liquide est de 80 Z. Ensuite, la solution concentrée de cristaux obtenue est traitée par un filtre à courroie plate (4) de
Pannevis.
Pannevis.
Comme résultat, ta résistance à la filtration spécifique moyenne (unité : n/kg) devient 109 dans une épaisseur de gâteau filtre de 30 mm, indiquant que la propriété de filtration est bonne. De plus, en utilisant 0,5 kg d'eau de lavage par kg de gâteau filtre, on obtient des cristaux d'acide glutamique ayant 2,5 Z de La liqueur mère adhérée au gâteau filtrant et 2 Z des cellules fixées basé sur la solution d'alimentation.
Par ailleurs, la solution du côté amont du cyclone liquide (3) est stockée dans un dispositif de stockage (5) et ensuite alimentée dans le cyclone liquide (7) via une pompe (6). Le cyclone liquide (7) a une forme similaire au cyclone Liquide (3), est réalisé en céramique et a un diamètre représentatif de 9 mm dans la portion cylindrique. La pression d'alimentation est fixée à 5 kg/m2 manométriques (50 Pa) et le volume d'alimentation par 3 cyclone liquide est de 0,24 m /h.
Aucune contre pression n'est appliquée ni à l'orifice aval ni à l'orifice amont du cyclone liquide. Les cristaux échappés dans le côté amont du cyclone liquide (3) sont récupérés du côté aval et peuvent être recyclés dans la cuve (1) pour la cristallisation. La solution du côté amont du cyclone Liquide (7) est envoyée à un traitement additionnel de purification.
En concevant le système comme décrit précédemment, les cristaux d'acide glutamique peuvent être efficacement isolés et purifiés à partir de la solution contenant des cristaux d'acide glutamique et des cellules bactériennes productrices d'acide glutamique.
Exemple-2
Du fait de la très faible solubilité de la guanosine, les cristaux de guanosine précipitent déjà dans une solution de fermentation de guanosine ayant une concentration de guanosine de 2,5 g/ dl après l'achèvement des étapes de fermentation. Le diamètre de particule des cristaux de guanosine est d'environ 2 à 200 um. La solution de fermentation de guanosine contenant des cellules bactériennes productrices de guanosine est alimentée dans un cyclone liquide similaire au cyclone liquide (7) utilisé dans
2
L'exemple 1. La pression d'alimentation est réglée à 5 kg/m2 mano- métriques (50 Pa) et le volume d'alimentation par cyclone liquide est de 0,24 m3/h. Une contre pression de 0,5 kg/m2 manométrique (5 Pa) est appliquée à l'orifice aval du cyclone liquide mais aucune contre pression n'est appliquée à l'orifice amont.Par cette opération, on récupère 70 Z de cristaux de guanosine du côté aval du cyclone liquide, et 80 X des cellules dans la solution d'alimentation sont sélectivement séparés. En conduisant à deux reprises une étape dénommée lavage à l'eau par addition d'environ 3 volumes d'eau à la solution concentrée ainsi obtenue de cristaux et en appliquant le mélange au cyclone liquide, la solution concentrée de cristaux de guanosine ayant une sélectivité cellulaire accrue de 99 Z ou plus, à partir de laquelle les impuretés dans la solution d'alimentation incluant Les matières colorantes ont été séparées sélectivement et suffisamment, peut être obtenue avec un taux de récupération de 50 Z. Etant donné que la fixation des impuretés dans les cristaux précipités durant ta fermentation de la guanosine est faible, la solution concentrée obtenue par les procédés a un degré suffisant de purification pour donner un produit qui, après la séparation et le séchage qui suivent, peut être utilisé tel quel. De plus, en conduisant un procédé à cyclone liquide multiple, on peut accroitre le taux de récupération des cristaux en conduisant un lavage à contre courant multiple.
Du fait de la très faible solubilité de la guanosine, les cristaux de guanosine précipitent déjà dans une solution de fermentation de guanosine ayant une concentration de guanosine de 2,5 g/ dl après l'achèvement des étapes de fermentation. Le diamètre de particule des cristaux de guanosine est d'environ 2 à 200 um. La solution de fermentation de guanosine contenant des cellules bactériennes productrices de guanosine est alimentée dans un cyclone liquide similaire au cyclone liquide (7) utilisé dans
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L'exemple 1. La pression d'alimentation est réglée à 5 kg/m2 mano- métriques (50 Pa) et le volume d'alimentation par cyclone liquide est de 0,24 m3/h. Une contre pression de 0,5 kg/m2 manométrique (5 Pa) est appliquée à l'orifice aval du cyclone liquide mais aucune contre pression n'est appliquée à l'orifice amont.Par cette opération, on récupère 70 Z de cristaux de guanosine du côté aval du cyclone liquide, et 80 X des cellules dans la solution d'alimentation sont sélectivement séparés. En conduisant à deux reprises une étape dénommée lavage à l'eau par addition d'environ 3 volumes d'eau à la solution concentrée ainsi obtenue de cristaux et en appliquant le mélange au cyclone liquide, la solution concentrée de cristaux de guanosine ayant une sélectivité cellulaire accrue de 99 Z ou plus, à partir de laquelle les impuretés dans la solution d'alimentation incluant Les matières colorantes ont été séparées sélectivement et suffisamment, peut être obtenue avec un taux de récupération de 50 Z. Etant donné que la fixation des impuretés dans les cristaux précipités durant ta fermentation de la guanosine est faible, la solution concentrée obtenue par les procédés a un degré suffisant de purification pour donner un produit qui, après la séparation et le séchage qui suivent, peut être utilisé tel quel. De plus, en conduisant un procédé à cyclone liquide multiple, on peut accroitre le taux de récupération des cristaux en conduisant un lavage à contre courant multiple.
Comme décrit ci-dessus, les cristaux de guanosine peuvent être efficacement isolés et purifiés à partir de la solution de fermentation contenant les cellules bactériennes productrices de guanosine et tes cristaux de guanosine précipités.
Exemple 3
Une solution de fermentation du tryptophane ayant une o concentration en tryptophane de 2 g/dl est refroidie à 15 C pour effectuer la cristallisation. Le diamètre de particule des cristaux de tryptophane est d'environ 2 à 150 pm. La solution de fermentation du tryptophane contenant les cellules bactériennes productrices de tryptophane est alimentée dans un cyclone Liquide similaire au cyclone liquide (7) utilisé dans l'exemple 1. La pression d'alimentation est réglée à 5 kg/m2 monométriques (50 Pa) et le volume d'alimentation par cyclone liquide est de 0,24 m3/h. Une contre pression de 1,0 kg/m2 manométriques (10 Pa) est appliquée à l'orifice aval du cyclone liquide mais aucune contre pression n'est appliquée à l'orifice amont.Par cette opération, environ 60 Z de cristaux de tryptophane sont récupérés du côté aval du cyclone liquide et environ 80 % des cellules dans la solution d'alimentation sont sélectivement séparés. En conduisant deux étapes du même lavage comme dans L'exemple 2 sur la solution de cristaux concentrée ainsi obtenue, la solution concentrée de cristaux de tryptophane ayant une sélectivité cellulaire accrue de 99 X ou plus, à partir de laquelle les impuretés dans la solution d'alimentation incluant les matières colorantes ont été sélectivement et suffisamment séparées, est obtenue avec un taux de récupération de 45 Z. Etant donné que la fixation des impuretés dans les cristaux précipités par refroidissement de la solution de fermentation est aussi faible que dans les cristaux de guanosine de l'exemple 2, la solution concentrée obtenue par les procédés a un degré de purification suffisant pour donner un produit adéquat après la séparation et Le séchage suivant.
Une solution de fermentation du tryptophane ayant une o concentration en tryptophane de 2 g/dl est refroidie à 15 C pour effectuer la cristallisation. Le diamètre de particule des cristaux de tryptophane est d'environ 2 à 150 pm. La solution de fermentation du tryptophane contenant les cellules bactériennes productrices de tryptophane est alimentée dans un cyclone Liquide similaire au cyclone liquide (7) utilisé dans l'exemple 1. La pression d'alimentation est réglée à 5 kg/m2 monométriques (50 Pa) et le volume d'alimentation par cyclone liquide est de 0,24 m3/h. Une contre pression de 1,0 kg/m2 manométriques (10 Pa) est appliquée à l'orifice aval du cyclone liquide mais aucune contre pression n'est appliquée à l'orifice amont.Par cette opération, environ 60 Z de cristaux de tryptophane sont récupérés du côté aval du cyclone liquide et environ 80 % des cellules dans la solution d'alimentation sont sélectivement séparés. En conduisant deux étapes du même lavage comme dans L'exemple 2 sur la solution de cristaux concentrée ainsi obtenue, la solution concentrée de cristaux de tryptophane ayant une sélectivité cellulaire accrue de 99 X ou plus, à partir de laquelle les impuretés dans la solution d'alimentation incluant les matières colorantes ont été sélectivement et suffisamment séparées, est obtenue avec un taux de récupération de 45 Z. Etant donné que la fixation des impuretés dans les cristaux précipités par refroidissement de la solution de fermentation est aussi faible que dans les cristaux de guanosine de l'exemple 2, la solution concentrée obtenue par les procédés a un degré de purification suffisant pour donner un produit adéquat après la séparation et Le séchage suivant.
Comme décrit ci-dessus, les cristaux de tryptophane peuvent être isolés efficacement et purifiés à partir de La solution contenant les cristaux de tryptophane précipités par refroidissement et les cellules bactériennes productrices de tryopto phase
Exemple 4
On inocule le Brevibacterium flavum AJ 3409 (FERM-BP 662) sur une plaque de gélose contenant 1 X d'extrait de levure, 1 Z de peptone, 0,5 X de chlorure de sodium et 0,5 X de glucose et on procède à ta culture à 31 0C pendant 24 h. Dans 30 récipients de
Sakaguchi, ayant un volume de 500 ml chacun, on charge dans chaque récipient 25 ml de milieu (pH 7,0) composé de 4 X de glucose, 0,1 Z de phosphate de potassium, 0,04 X de sulfate de magnésium, 0,001 Z de sulfate de fer, 0,2 X de sulfate d'ammonium, 0,4 X d'urée, 4 pg/ t de biotine, 100 tug/l de vitamine B1 et 0,035 Z (calculé en azote total) d'hydrolysat de protéine de graines de soja.Après stérilisation par chauffage à 121 0C pendant 15 min, on abaisse la tempéra ture à la température ambiante et on inocule sur le milieu stérilisé une boucle de platine de cellules de Brevibacterium flavum
AJ 3409 cultivées préalablement sur plaque de gélose. En procédant o à la culture sous secoueuse, à 31 C pendant 24 h, on prépare un bouillon de culture d'ensemencement.Dans une cuve de fermentation d'un volume de 20 l, on charge 10 l de milieu (pH 7,0) composé de 10 X de glucose, 0,4 Z de phosphate de potassium, 0,06 Z de sulfate de magnésium, 0,002 Z de sulfate de fer, 5 X de sulfate d'ammonium, 8 pg/l de biotine, 500 pm/l de vitamine B1 et 0,056 Z (calculé en azote total d'hydrolysat de protéine de graines de soja).Après o stérilisation par chauffage à 121 C pendant 20 min, on abaisse la température à la température ambiante et le bouillon de culture d'ensemencement préalablement cultivé dans le récipient est ajouté au milieu puis cultivé dans les conditions suivantes : température
o de culture à 30 C, pH contrôlé de 6,5, quantité d'aération de 1/2 vvm (v/v/min), vitesse d'agitation de 600 tr/min et pression interne de 0,2 kg/cm2 (20 kPa). Immédiatement avant que le glucose dans le bouillon de culture soit consommé, une solution (stérilisée) contenant 45 g/l de glucose est remplie dans la cuve de culture pour contrôler la concentration de glucose dans le bouillon de culture et La maintenir toujours à 0,1 à 1,5 %.Au moment où et à partir du moment où la quantité de glutamine accumulée dépasse sa solubilité et les cristaux de glutamine commencent à se cristalliser dans le bouillon de culture, une partie du bouillon de culture est prélevée de façon aseptique du système, envoyée dans un cyclone liquide de petite taille pour isoler les cristaux. Ensuite, le bouillon de culture est retourné dans la cuve de culture. Une culture pendant 100 h par cette méthode donne 1,1 kg (teneur en humidité de 16,6 %) de bouillie de cristaux de glutamine et 15 l de bouillon de culture contenant 5,2 X de glutamine. Le bouillon de culture obtenu est cristallisé par concentration. Les cristaux sont isolés et combinés avec la bouillie de cristaux obtenue durant la culture.En répétant la dissolution et la cristallisation à trois reprises, on obtient 1,36 kg de cristaux de glutamine avec une pureté élevée.
Exemple 4
On inocule le Brevibacterium flavum AJ 3409 (FERM-BP 662) sur une plaque de gélose contenant 1 X d'extrait de levure, 1 Z de peptone, 0,5 X de chlorure de sodium et 0,5 X de glucose et on procède à ta culture à 31 0C pendant 24 h. Dans 30 récipients de
Sakaguchi, ayant un volume de 500 ml chacun, on charge dans chaque récipient 25 ml de milieu (pH 7,0) composé de 4 X de glucose, 0,1 Z de phosphate de potassium, 0,04 X de sulfate de magnésium, 0,001 Z de sulfate de fer, 0,2 X de sulfate d'ammonium, 0,4 X d'urée, 4 pg/ t de biotine, 100 tug/l de vitamine B1 et 0,035 Z (calculé en azote total) d'hydrolysat de protéine de graines de soja.Après stérilisation par chauffage à 121 0C pendant 15 min, on abaisse la tempéra ture à la température ambiante et on inocule sur le milieu stérilisé une boucle de platine de cellules de Brevibacterium flavum
AJ 3409 cultivées préalablement sur plaque de gélose. En procédant o à la culture sous secoueuse, à 31 C pendant 24 h, on prépare un bouillon de culture d'ensemencement.Dans une cuve de fermentation d'un volume de 20 l, on charge 10 l de milieu (pH 7,0) composé de 10 X de glucose, 0,4 Z de phosphate de potassium, 0,06 Z de sulfate de magnésium, 0,002 Z de sulfate de fer, 5 X de sulfate d'ammonium, 8 pg/l de biotine, 500 pm/l de vitamine B1 et 0,056 Z (calculé en azote total d'hydrolysat de protéine de graines de soja).Après o stérilisation par chauffage à 121 C pendant 20 min, on abaisse la température à la température ambiante et le bouillon de culture d'ensemencement préalablement cultivé dans le récipient est ajouté au milieu puis cultivé dans les conditions suivantes : température
o de culture à 30 C, pH contrôlé de 6,5, quantité d'aération de 1/2 vvm (v/v/min), vitesse d'agitation de 600 tr/min et pression interne de 0,2 kg/cm2 (20 kPa). Immédiatement avant que le glucose dans le bouillon de culture soit consommé, une solution (stérilisée) contenant 45 g/l de glucose est remplie dans la cuve de culture pour contrôler la concentration de glucose dans le bouillon de culture et La maintenir toujours à 0,1 à 1,5 %.Au moment où et à partir du moment où la quantité de glutamine accumulée dépasse sa solubilité et les cristaux de glutamine commencent à se cristalliser dans le bouillon de culture, une partie du bouillon de culture est prélevée de façon aseptique du système, envoyée dans un cyclone liquide de petite taille pour isoler les cristaux. Ensuite, le bouillon de culture est retourné dans la cuve de culture. Une culture pendant 100 h par cette méthode donne 1,1 kg (teneur en humidité de 16,6 %) de bouillie de cristaux de glutamine et 15 l de bouillon de culture contenant 5,2 X de glutamine. Le bouillon de culture obtenu est cristallisé par concentration. Les cristaux sont isolés et combinés avec la bouillie de cristaux obtenue durant la culture.En répétant la dissolution et la cristallisation à trois reprises, on obtient 1,36 kg de cristaux de glutamine avec une pureté élevée.
Par ailleurs, la culture est conduite pendant 100 h dans les mêmes conditions sauf que le bouillon de culture n'est pas recyclé vers le cyclone liquide et que les cristaux formés durant la culture ne sont pas isolés. Comme résultat, 14,4 l de bouillon de culture contenant 9,7 Z de glutamine sont obtenus. Par dissolution et cristallisation répétées des cristaux obtenus par concentration et cristallisation, la glutamine est purifiée. Toutefois, it est nécessaire de répéter la dissolution et la cristallisation à quatre reprises en vue d'obtenir des cristaux de glutamine ayant la même pureté que celle obtenue dans la méthode montrée précédemment.
Comme résultat, 0,98 g de cristaux de glutamine de haute pureté sont obtenus.
En ce qui concerne les deux méthodes de préparation de la glutamine, les résultats et les caractéristiques sont montrés dans le tableau 1.
Tableau 1
Culture avec isolement Culture sans isolement
des cristaux (présente des cristaux (art
invention) antérieur)
Fermentation :
Productivité 1,13 g/l.h 0,97 g/l.h
Rendement 52 X 47 Z
Traitement :
Nombre d'étapes 3 étapes 4 étapes
Rendement * 81 Z 70 Z
Exemple 5
On inocule le Brevibacterium lactofermentum ATCC 21420 sur une plaque de gélose contenant 1 X d'extrait de levure, 1 Z de peptone, 0,5 Z de chlorure de sodium et 0,5 X de glucose puis on procède à la culture à 31 0C pendant 24 h.Dans 30 récipients de
Sakaguchi, ayant chacun un volume de 500 ml, on charge dans chaque récipient 25 ml de milieu (pH 7,0) composé de 2 Z de saccharose, 0,1 Z de phosphate de potassium, 0,04 X de sulfate de magnésium, 0,001 Z de sulfate de fer, 0,001 Z de sulfate de manganèse, 0,4 Z d'acétate d'ammonium, 0,04 X de tyrosine, 100 ,ug/l de biotine, 100 ,ug/l de vitamine B1 et 0,02 Z (calculé en azote total) d'hydrolysat de protéine de graines de soja.Après stérilisation par chauffage à 1210C pendant 15 min, on abaisse la température à la température ambiante et on inocule sur le milieu stérilisé une boucle de platine de cellules de Brevibacterium lactofermentum
ATCC 21420 préalablement cultivées sur plaque de gélose. Par cul
o ture sous secousse, à 31 C pendant 24 h, on prépare un bouillon de culture d'ensemencement. Dans une cuve de fermentation d'un volume de 20 l, on charge 10 I de milieu (pH 7,0) composé de 10 Z de glucose, 0,15 % de phosphate de potassium, 0,1 Z de sulfate de magnésium, 0,001 Z de sulfate de fer, 50 ug/l de biotine, 2 000 ,ug/
I de vitamine B1 et 0,08 X (calculé en azote total) d'hydrolysat de protéine de graines de soja).Après stérilisation par chauffage à 121 0C pendant 20 min, on abaisse la température à la température ambiante et Le bouillon de culture d'ensemencement préalablement cultivé dans un récipient est ajouté au milieu suivi par la culture dans les conditions suivantes : température de culture à 310C, pH contrôlé de 7, quantité d'aération de 1/3 vvm, vitesse d'agitation de 400 tr/min et pression interne de 0,2 kg/cm2 (20 kPa). Immédiatement avant que le glucose dans le bouillon de culture soit consommé, une solution (stérilisée) contenant 45 g/l de glucose est remplie dans la cuve de culture pour contrôler la concentration de glucose dans le bouillon de culture pour la maintenir toujours à 1,0 à 2,5 %. A ce moment et à partir de ce moment lorsque la quantité de phénylalanine accumulée a atteint sa solubilité, une faible quantité de cristaux d'ensemencement de phénylalanine est ajoutée au bouillon de culture en vue de faciliter la cristallisation de ta phénylalanine et une partie du bouillon de culture est prélevée de façon aseptique du système, envoyée à travers un cyclone liquide de petite taille pour isoler les cristaux. Ensuite, le bouillon de culture est retourné à la cuve de culture. Une culture pendant 80 h par cette méthode donne 0,21 kg (teneur en humidité de 20 %) de bouillie de cristaux de phénylalanine et 15 l de bouillon de culture contenant 2,8 Z de phénylalanine. Le bouillon de culture obtenu est cristallisé par concentration.Les cristaux sont isolés et combinés avec la bouillie de cristaux obtenue durant la culture.
Culture avec isolement Culture sans isolement
des cristaux (présente des cristaux (art
invention) antérieur)
Fermentation :
Productivité 1,13 g/l.h 0,97 g/l.h
Rendement 52 X 47 Z
Traitement :
Nombre d'étapes 3 étapes 4 étapes
Rendement * 81 Z 70 Z
Exemple 5
On inocule le Brevibacterium lactofermentum ATCC 21420 sur une plaque de gélose contenant 1 X d'extrait de levure, 1 Z de peptone, 0,5 Z de chlorure de sodium et 0,5 X de glucose puis on procède à la culture à 31 0C pendant 24 h.Dans 30 récipients de
Sakaguchi, ayant chacun un volume de 500 ml, on charge dans chaque récipient 25 ml de milieu (pH 7,0) composé de 2 Z de saccharose, 0,1 Z de phosphate de potassium, 0,04 X de sulfate de magnésium, 0,001 Z de sulfate de fer, 0,001 Z de sulfate de manganèse, 0,4 Z d'acétate d'ammonium, 0,04 X de tyrosine, 100 ,ug/l de biotine, 100 ,ug/l de vitamine B1 et 0,02 Z (calculé en azote total) d'hydrolysat de protéine de graines de soja.Après stérilisation par chauffage à 1210C pendant 15 min, on abaisse la température à la température ambiante et on inocule sur le milieu stérilisé une boucle de platine de cellules de Brevibacterium lactofermentum
ATCC 21420 préalablement cultivées sur plaque de gélose. Par cul
o ture sous secousse, à 31 C pendant 24 h, on prépare un bouillon de culture d'ensemencement. Dans une cuve de fermentation d'un volume de 20 l, on charge 10 I de milieu (pH 7,0) composé de 10 Z de glucose, 0,15 % de phosphate de potassium, 0,1 Z de sulfate de magnésium, 0,001 Z de sulfate de fer, 50 ug/l de biotine, 2 000 ,ug/
I de vitamine B1 et 0,08 X (calculé en azote total) d'hydrolysat de protéine de graines de soja).Après stérilisation par chauffage à 121 0C pendant 20 min, on abaisse la température à la température ambiante et Le bouillon de culture d'ensemencement préalablement cultivé dans un récipient est ajouté au milieu suivi par la culture dans les conditions suivantes : température de culture à 310C, pH contrôlé de 7, quantité d'aération de 1/3 vvm, vitesse d'agitation de 400 tr/min et pression interne de 0,2 kg/cm2 (20 kPa). Immédiatement avant que le glucose dans le bouillon de culture soit consommé, une solution (stérilisée) contenant 45 g/l de glucose est remplie dans la cuve de culture pour contrôler la concentration de glucose dans le bouillon de culture pour la maintenir toujours à 1,0 à 2,5 %. A ce moment et à partir de ce moment lorsque la quantité de phénylalanine accumulée a atteint sa solubilité, une faible quantité de cristaux d'ensemencement de phénylalanine est ajoutée au bouillon de culture en vue de faciliter la cristallisation de ta phénylalanine et une partie du bouillon de culture est prélevée de façon aseptique du système, envoyée à travers un cyclone liquide de petite taille pour isoler les cristaux. Ensuite, le bouillon de culture est retourné à la cuve de culture. Une culture pendant 80 h par cette méthode donne 0,21 kg (teneur en humidité de 20 %) de bouillie de cristaux de phénylalanine et 15 l de bouillon de culture contenant 2,8 Z de phénylalanine. Le bouillon de culture obtenu est cristallisé par concentration.Les cristaux sont isolés et combinés avec la bouillie de cristaux obtenue durant la culture.
Par dissolution et cristallisation répétées à trois reprises, on obtient 0,41 kg de cristaux de phénylalanine avec une pureté élevée.
Par ailleurs, on conduit la culture pendant 80 h dans les mêmes conditions sauf que le bouillon de culture n'est pas recyclé dans le cyclone liquide et que tes cristaux formés durant la culture ne sont pas isolés. Comme résultat, on obtient 15 l de bouillon de culture contenant 3,5 X de phénylalanine. Par dissolution et cristallisation répétées des cristaux obtenus par concentration et cristallisation, la phénylalanine est purifiée. Toutefois, il est nécessaire de répéter la dissolution et la cristallisation à quatre reprises en vue d'obtenir des cristaux de phénylalanine ayant la même pureté que celle obtenue dans la méthode montrée précédemment. Comme résultat, 0,34 kg de cristaux de phénylalanine de pureté élevée sont obtenus.
En ce qui concerne les deux méthodes de préparation de la phénylalanine, les résultats et les caractéristiques sont montrés dans le tableau 2.
Tableau 2
Culture avec isolement Culture sans isolement
des cristaux (présente des cristaux (art
invention) antérieur)
Fermentation :
Productivité 0,49 g/l.h 0,44 g/l.h
Rendement 18,1 X 16,2 X
Traitement =
Nombre d'étapes 3 étapes 4 étapes
Rendement 69,7 X 64,8 X
Exemple 6
On inocule le Bacillus subtilis AJ 11713 (FERM-BP 208) sur plaque de gélose contenant 3 X d'amidon soluble, 0,5 X d'extrait de levure et 0,5 Z de peptone, puis on procède à la culture à 31 0C pendant 24 h.Dans une petite cuve de fermentation d'un volume de 2 l, on charge 1 I de milieu (pH 6,7) composé de 3 Z de glucose, 0,1 X de phosphate de potassium, 0,04 Z de sulfate de magnésium, 0,001 X de sulfate de fer, 0,001 X de sulfate de manganèse, 0,3 Z de sulfate d'ammonium, 0,5 Z de glutamate de sodium et 0,065 X (calculé en azote total) d'hydrolysat de protéine de graines de soja. Après stérilisation par chauffage à 121 0C pendant 15 min, on abaisse la température à la température ambiante et on inocule sur le milieu stérilisé une boucle de platine de cellules de Bacillus subtilis AJ 11713 préalablement cultivées sur
o plaque de gélose.Par culture sous secouage à 31 C pendant 30 h, on prépare un bouillon de culture d'ensemencement. Dans une cuve de fermentation d'un volume de 20 l, on charge 10 l de milieu (pH 7,0) composé de 20 X de glucose, 0,2 Z de phosphate de potassium, 0,4 X de sulfate de magnésium, 0,001 X de sulfate de fer, 0,001 Z de sulfate de manganèse et 0,05 X (calculé en azote total) d'hydrolysat de protéine de soja).Après stérilisation par chauffage à 1210 pendant 20 min, on abaisse la température à la température ambiante et le bouillon de culture d'ensemencement préalablement cultivé dans la petite cuve de fermentation est ajouté au milieu puis cultivé dans Les conditions suivantes : température de culture à 31 C, pH contrôlé de 6,7, quantité d'aération de 3/4 vvm, vitesse d'agitation de 600 tr/min et pression interne de 0,2 kg/cm2 (20 kPa).
Culture avec isolement Culture sans isolement
des cristaux (présente des cristaux (art
invention) antérieur)
Fermentation :
Productivité 0,49 g/l.h 0,44 g/l.h
Rendement 18,1 X 16,2 X
Traitement =
Nombre d'étapes 3 étapes 4 étapes
Rendement 69,7 X 64,8 X
Exemple 6
On inocule le Bacillus subtilis AJ 11713 (FERM-BP 208) sur plaque de gélose contenant 3 X d'amidon soluble, 0,5 X d'extrait de levure et 0,5 Z de peptone, puis on procède à la culture à 31 0C pendant 24 h.Dans une petite cuve de fermentation d'un volume de 2 l, on charge 1 I de milieu (pH 6,7) composé de 3 Z de glucose, 0,1 X de phosphate de potassium, 0,04 Z de sulfate de magnésium, 0,001 X de sulfate de fer, 0,001 X de sulfate de manganèse, 0,3 Z de sulfate d'ammonium, 0,5 Z de glutamate de sodium et 0,065 X (calculé en azote total) d'hydrolysat de protéine de graines de soja. Après stérilisation par chauffage à 121 0C pendant 15 min, on abaisse la température à la température ambiante et on inocule sur le milieu stérilisé une boucle de platine de cellules de Bacillus subtilis AJ 11713 préalablement cultivées sur
o plaque de gélose.Par culture sous secouage à 31 C pendant 30 h, on prépare un bouillon de culture d'ensemencement. Dans une cuve de fermentation d'un volume de 20 l, on charge 10 l de milieu (pH 7,0) composé de 20 X de glucose, 0,2 Z de phosphate de potassium, 0,4 X de sulfate de magnésium, 0,001 X de sulfate de fer, 0,001 Z de sulfate de manganèse et 0,05 X (calculé en azote total) d'hydrolysat de protéine de soja).Après stérilisation par chauffage à 1210 pendant 20 min, on abaisse la température à la température ambiante et le bouillon de culture d'ensemencement préalablement cultivé dans la petite cuve de fermentation est ajouté au milieu puis cultivé dans Les conditions suivantes : température de culture à 31 C, pH contrôlé de 6,7, quantité d'aération de 3/4 vvm, vitesse d'agitation de 600 tr/min et pression interne de 0,2 kg/cm2 (20 kPa).
Immédiatement avant que le glucose dans le bouillon de culture soit consommé, une solution (stérilisée) contenant 45 g/l de glucose est remplie dans la cuve de culture pour contrôler la concentration de glucose dans le bouillon de culture et la maintenir toujours à 0,1 à 1,5 Z. A partir du moment où la quantité de tryptophane accumulée dépasse sa solubilité, et que les cristaux de tryptophane commencent à se cristalliser dans le bouillon de culture, un détergent est ajouté au bouillon de culture en vue de faciliter la cristallisation du tryptophane et une partie du bouillon de culture est prélevée aseptiquement du système, passée à travers un cyclone liquide de petite taille pour isoler les cristaux. Puis Le bouillon de culture est retourné dans la cuve de culture.La culture pendant 100 h par cette méthode donne 0,28 kg (teneur en humidité de 20 Z) de la bouillie de cristaux de tryptophane et 13 l de bouillon de culture contenant 1,4 Z de tryptophane. Le bouillon de culture obtenu est cristallisé par concentration. Les cristaux sont isolés et combinés avec la bouillie de cristaux obtenue durant la culture.
Par dissolution et cristallisation répétées à deux reprises, on obtient-0,245 kg de cristaux de tryptophane avec une grande pureté.
Par ailleurs, ta culture est conduite pendant 100 h dans les mêmes conditions sauf que le bouillon de culture n'est pas recyclé dans le cyclone liquide et les cristaux formés durant la culture ne sont pasz isolés. Comme résultat, 13 l de bouillon de culture contenant 2,88 X de tryptophane sont obtenus. Par dissolution et cristallisation répétées des cristaux obtenus par concentration et cristallisation, le tryptophane est purifié. Toutefois, il est nécessaire de répéter la dissolution et la cristallisation à trois reprises en vue d'obtenir Les cristaux de tryptophane ayant la même pureté que celle obtenue dans la méthode mentionnée précé demment. Comme résultat, 0,21 kg de cristaux de tryptophane de pureté élevée est obtenu.
En ce qui concerne les deux méthodes de préparation du tryptophane, les résultats et les caractéristiques sont montrés dans le tableau 3.
Tableau 3
Culture avec isolement Culture sans isolement
des cristaux (présente des cristaux (art
invention) antérieur) Fermentation
Productivité 0,31 g/l.h 0,29 g/l.h
Rendement 12 Z 11 X Traitement
Nombre d'étapes 2 étapes 3 étapes
Rendement 60 X 55 X
Exemple 7
On inocule le Brevibacterium flavum AJ 3686 (FERM-BP 755) sur plaque de gelose contenant 1 X d'extrait de levure, 1 Z de peptone, 0,5 X de chlorure de sodium et 0,5 X de glucose puis on procède à la culture à 31 OC pendant 24 h. Dans 30 récipients de
Sakaguchi, ayant chacun un volume de 500 ml, on charge dans chaque récipient 25 ml de milieu (pH 7,0) composé de 3 Z de glucose, 0,1 X de phosphate de potassium, 0,04 X de sulfate de magnésium, 0,001 X de sulfate de fer, 0,001 Z de sulfate de manganèse, 0,3 X d'urée, 10 ,ug/l de biotine, 200 ,ug/l de vitamine B1 et 0,085 X (calculé en azote total) d'hydrolysat de protéine de graines de soja.Après stérilisation par chauffage à 121 0C pendant 15 min, on abaisse la température à la température ambiante et on inocule sur le milieu stérilisé une boucle de platine de cellules de Brevibacterium flavum AJ 3686 cultivées préalablement sur plaque de gélose. Par culture avec secouage à 31 0C pendant 24 h, on prépare un bouillon de culture d'ensemencement.Dans une cuve de fermentation d'un volume de 20 l, on charge 10 l de milieu (pH 7,0) composé de 15 % de glucose, 0,1 X de phosphate de potassium, 0,04 X de sulfate de magnésium, 0,001 Z de sulfate de fer, 1 X de sulfate d'ammonium, 50 ,ug/l de biotine, 300 ug/l de vitamine B1 et 0,01 Z (calculé en isoleucine) d'hydrolysat de protéine de graines de soja.Après stérilisation par chauffage à 121 0C pendant 20 min, on abaisse la température à la température ambiante et le bouillon de culture d'ensemencement préalablement cultivé dans le récipient est ajouté au milieu puis on procède à La culture dans Les conditions suivantes : température de culture à 31 0C, pH contrôlé de 7, quantité d'aération de 1/2 vvm, vitesse d'agitation de 600 tr/min et pres
kg/cm2 (20 sion interne de 0,2 kg/cm2 (20 kPa). Immédiatement avant que le glucose dans le bouillon de culture soit consommé, une solution (stérilisée) contenant 45 g/l de glucose est remplie dans la cuve de culture pour contrôler la concentration en glucose dans le bouillon de culture et la maintenir toujours à 0,1 à 1,5 Z.Au moment et à partir du moment où la quantité de leucine accumulée dépasse sa solubilité, et où les cristaux de leucine commencent à se cristalliser dans le bouillon de culture, une partie du bouillon de culture est prélevée aseptiquement du système, passée à travers un cyclone liquide de petite taille pour isoler les cristaux.
Culture avec isolement Culture sans isolement
des cristaux (présente des cristaux (art
invention) antérieur) Fermentation
Productivité 0,31 g/l.h 0,29 g/l.h
Rendement 12 Z 11 X Traitement
Nombre d'étapes 2 étapes 3 étapes
Rendement 60 X 55 X
Exemple 7
On inocule le Brevibacterium flavum AJ 3686 (FERM-BP 755) sur plaque de gelose contenant 1 X d'extrait de levure, 1 Z de peptone, 0,5 X de chlorure de sodium et 0,5 X de glucose puis on procède à la culture à 31 OC pendant 24 h. Dans 30 récipients de
Sakaguchi, ayant chacun un volume de 500 ml, on charge dans chaque récipient 25 ml de milieu (pH 7,0) composé de 3 Z de glucose, 0,1 X de phosphate de potassium, 0,04 X de sulfate de magnésium, 0,001 X de sulfate de fer, 0,001 Z de sulfate de manganèse, 0,3 X d'urée, 10 ,ug/l de biotine, 200 ,ug/l de vitamine B1 et 0,085 X (calculé en azote total) d'hydrolysat de protéine de graines de soja.Après stérilisation par chauffage à 121 0C pendant 15 min, on abaisse la température à la température ambiante et on inocule sur le milieu stérilisé une boucle de platine de cellules de Brevibacterium flavum AJ 3686 cultivées préalablement sur plaque de gélose. Par culture avec secouage à 31 0C pendant 24 h, on prépare un bouillon de culture d'ensemencement.Dans une cuve de fermentation d'un volume de 20 l, on charge 10 l de milieu (pH 7,0) composé de 15 % de glucose, 0,1 X de phosphate de potassium, 0,04 X de sulfate de magnésium, 0,001 Z de sulfate de fer, 1 X de sulfate d'ammonium, 50 ,ug/l de biotine, 300 ug/l de vitamine B1 et 0,01 Z (calculé en isoleucine) d'hydrolysat de protéine de graines de soja.Après stérilisation par chauffage à 121 0C pendant 20 min, on abaisse la température à la température ambiante et le bouillon de culture d'ensemencement préalablement cultivé dans le récipient est ajouté au milieu puis on procède à La culture dans Les conditions suivantes : température de culture à 31 0C, pH contrôlé de 7, quantité d'aération de 1/2 vvm, vitesse d'agitation de 600 tr/min et pres
kg/cm2 (20 sion interne de 0,2 kg/cm2 (20 kPa). Immédiatement avant que le glucose dans le bouillon de culture soit consommé, une solution (stérilisée) contenant 45 g/l de glucose est remplie dans la cuve de culture pour contrôler la concentration en glucose dans le bouillon de culture et la maintenir toujours à 0,1 à 1,5 Z.Au moment et à partir du moment où la quantité de leucine accumulée dépasse sa solubilité, et où les cristaux de leucine commencent à se cristalliser dans le bouillon de culture, une partie du bouillon de culture est prélevée aseptiquement du système, passée à travers un cyclone liquide de petite taille pour isoler les cristaux.
Ensuite, le bouillon de culture est retourné dans la cuve de culture. La culture pendant 60 h par cette méthode donne 0,24 kg (teneur en humidité de 16,6 X) de bouillie de cristaux de leucine et 14 l de bouillon de culture contenant 2,6 Z de leucine. Le bouillon de culture obtenu est cristallisé par concentration. Les cristaux sont isolés et combinés avec la bouillie de cristaux obtenue durant la culture. Par dissolution et cristallisation répétées à trois reprises, on obtient 0,42 kg de cristaux de leucine avec une pureté élevée.
Par ailleurs, la culture est conduite pendant 60 h dans les memes conditions sauf que le bouillon de culture n'est pas recyclé dans le cyclone liquide et que les cristaux formés durant la culture ne sont pas isolés. Comme résultat, 13,7 l de bouillon de culture contenant 3,3 Z de leucine sont obtenus. Par dissolution et cristallisation répétées des cristaux obtenus par concentration et cristallisation, la leucine est purifiée. Toutefois, il est nécessaire de répéter la dissolution et la cristallisation à quatre reprises en vue d'obtenir des cristaux de leucine ayant la même pureté que celle obtenue dans la méthode décrite ci-dessus. Comme résultat, 0,29 kg de cristaux de leucine de pureté élevée est obtenu.
En ce qui concerne les deux méthodes de préparation de la leucine, les résultats et les caractéristiques sont montrés dans le tableau 4.
Tableau 4
Culture avec isolement Culture sans isolement
des cristaux (présente des cristaux (art
invention) antérieur)
Fermentation
Productivité 0,67 g/l.h 0,55 g/l.h
Rendement 17 X 14,3 X
Traitement :
Nombre d'étapes 3 étapes 4 étapes
Rendement 75 X 65 X
Exemple 8
On inocule le Bacillus subtilis AJ 11312 (FERM-P 4823) sur plaque de gélose contenant 3 Z d'amidon soluble,O,5 Z d'extrait de levure et 0,5 Z de peptone puis on procède à la culture à 340C pendant 24 h.Dans une petite cuve de fermentation d'un volume de 2 l on charge 1 I de milieu (pH 6,4) composé de 3 Z de glucose, 0,3 Z de chlorure d'ammonium, 0,1 Z de phosphate de potassium, 0,04 % de sulfate de magnésium, 0,001 X de sulfate de manganèse, 0,05 Z d'extrait de levure, 0,5 Z de ARN et 0,12 X (calculé en azote total), d'hydrolysat de protéine de graines de soja. Après stérilisation par chauffage à 121 0C pendant 15 min, on abaisse la température à la température ambiante et on inocule sur le milieu stérilisé une boucle de platine de cellules de Bacillus subtilis
AJ 11312 préalablement cultivées sur plaque de gélose.Par culture sous secouage à 340C pendant 30 h, on prépare un bouillon de culture d'ensemencement. Dans une cuve de fermentation d'un volume de 20 l, on charge 10 L de milieu (pH 6,5) composé de 15 Z de glucose, 0,2 Z de phosphate de potassium, 0,15 Z de sulfate de magnésium, 0,001 Z de sulfate de fer, 0,001 X de sulfate de manganèse, 0,13 Z (calculé en azote total) d'hydrolysat de protéine de soja et 0,5 Z de chlorure d'ammonium.Après stérilisation par chauffage à 121 0C pendant 20 min, on abaisse la température à la température ambiante et le bouillon de culture d'ensemencement préalablement cultivé dans la petite cuve de fermentation est ajouté au milieu puis cultivé dans Les conditions suivantes : température de culture à 350C, pH contrôlé de 6,4, quantité d'aération de 1/2 vvm, vitesse d'agitation de 600 tr/min et pression intérieure de 0,2 kg/cm2 (20 kPa). Immédiatement avant que le glucose dans le bouillon de culture soit consommé, une solution (stérilisée) contenant 45 g/l de glucose est remplie dans la cuve de culture pour contrôler la concentration du glucose dans Le bouillon de culture et la maintenir toujours à 0,1 à 1,5 Z. Au moment et à partir du moment où la quantité de guanosine accumulée dépasse sa solubilité, et où les cristaux de guanosine commencent à se former dans le bouillon de culture, une partie du bouillon de culture est prélevée aseptiquement du système, passée à travers un cyclone liquide de petite taille pour isoler les cristaux. Ensuite, le bouillon de culture est retourné dans la cuve de culture. La culture pendant 100 h par cette méthode donne 0,65 kg (teneur en humidité de 20 > de bouillie de cristaux de guanosine et 13,5 l de bouillon de culture contenant 0,4 Z de guanosine. Le bouillon de culture obtenu est cristallisé par concentration. Les cristaux sont isolés et combinés avec la bouillie de cristaux obtenue durant la culture. Par disso lution et cristallisation répétées à deux reprises, on obtient 0,43 kg de cristaux de guanosine avec une grande pureté.
Culture avec isolement Culture sans isolement
des cristaux (présente des cristaux (art
invention) antérieur)
Fermentation
Productivité 0,67 g/l.h 0,55 g/l.h
Rendement 17 X 14,3 X
Traitement :
Nombre d'étapes 3 étapes 4 étapes
Rendement 75 X 65 X
Exemple 8
On inocule le Bacillus subtilis AJ 11312 (FERM-P 4823) sur plaque de gélose contenant 3 Z d'amidon soluble,O,5 Z d'extrait de levure et 0,5 Z de peptone puis on procède à la culture à 340C pendant 24 h.Dans une petite cuve de fermentation d'un volume de 2 l on charge 1 I de milieu (pH 6,4) composé de 3 Z de glucose, 0,3 Z de chlorure d'ammonium, 0,1 Z de phosphate de potassium, 0,04 % de sulfate de magnésium, 0,001 X de sulfate de manganèse, 0,05 Z d'extrait de levure, 0,5 Z de ARN et 0,12 X (calculé en azote total), d'hydrolysat de protéine de graines de soja. Après stérilisation par chauffage à 121 0C pendant 15 min, on abaisse la température à la température ambiante et on inocule sur le milieu stérilisé une boucle de platine de cellules de Bacillus subtilis
AJ 11312 préalablement cultivées sur plaque de gélose.Par culture sous secouage à 340C pendant 30 h, on prépare un bouillon de culture d'ensemencement. Dans une cuve de fermentation d'un volume de 20 l, on charge 10 L de milieu (pH 6,5) composé de 15 Z de glucose, 0,2 Z de phosphate de potassium, 0,15 Z de sulfate de magnésium, 0,001 Z de sulfate de fer, 0,001 X de sulfate de manganèse, 0,13 Z (calculé en azote total) d'hydrolysat de protéine de soja et 0,5 Z de chlorure d'ammonium.Après stérilisation par chauffage à 121 0C pendant 20 min, on abaisse la température à la température ambiante et le bouillon de culture d'ensemencement préalablement cultivé dans la petite cuve de fermentation est ajouté au milieu puis cultivé dans Les conditions suivantes : température de culture à 350C, pH contrôlé de 6,4, quantité d'aération de 1/2 vvm, vitesse d'agitation de 600 tr/min et pression intérieure de 0,2 kg/cm2 (20 kPa). Immédiatement avant que le glucose dans le bouillon de culture soit consommé, une solution (stérilisée) contenant 45 g/l de glucose est remplie dans la cuve de culture pour contrôler la concentration du glucose dans Le bouillon de culture et la maintenir toujours à 0,1 à 1,5 Z. Au moment et à partir du moment où la quantité de guanosine accumulée dépasse sa solubilité, et où les cristaux de guanosine commencent à se former dans le bouillon de culture, une partie du bouillon de culture est prélevée aseptiquement du système, passée à travers un cyclone liquide de petite taille pour isoler les cristaux. Ensuite, le bouillon de culture est retourné dans la cuve de culture. La culture pendant 100 h par cette méthode donne 0,65 kg (teneur en humidité de 20 > de bouillie de cristaux de guanosine et 13,5 l de bouillon de culture contenant 0,4 Z de guanosine. Le bouillon de culture obtenu est cristallisé par concentration. Les cristaux sont isolés et combinés avec la bouillie de cristaux obtenue durant la culture. Par disso lution et cristallisation répétées à deux reprises, on obtient 0,43 kg de cristaux de guanosine avec une grande pureté.
Par ailleurs, la culture est conduite pendant 100 h dans les mêmes conditions sauf que Le bouillon de culture n'est pas recyclé dans le cyclone liquide et que les cristaux formés durant la culture ne sont pas isolés. Comme résultat, 12,5 l de bouillon de culture contenant 3,5 X de guanosine sont obtenus. Par dissolution et cristallisation répétées des cristaux obtenus par concentration et cristallisation, la guanosine est purifiée. Toutefois, il est nécessaire de répéter la dissolution et la cristallisation à trois reprises en vue d'obtenir des cristaux de guanosine ayant la même pureté que celle obtenue dans la méthode montrée précédemment.
Comme résultat, 0,28 kg de cristaux de guanosine de grande pureté est obtenu.
En ce qui concerne les deux méthodes de préparation de la guanosine, les résultats et les caractéristiques sont montrés dans le tableau 5.
Tableau 5
Culture avec isolement Culture sans isolement
des cristaux (présente des cristaux (art
invention) antérieur) Fermentation
Productivité 0,42 g/l.h 0,35 g/l.h
Rendement 16 X 14 X
Traitement :
Nombre d'étapes 2 étapes 3 étapes
Rendement 75 Z 65 X
Exemple 9
On inocule le Pseudomonas sp. ATCC 19121 sur plaque de gélose contenant 1 Z d'extrait de viande, 1 Z de peptone et 0,5 X de chlorure de sodium puis on procède à la culture à 30 0C pendant 24 h.Dans une petite cuve de fermentation d'un volume de 1 l, on charge 0,3 l de milieu (pH 7) composé de 0,5 d'acide oléique, 0,5 Z d'huile de soja, 0,1 Z de phosphate de potassium, 0,1 Z de sulfate de magnésium et 0,1 X (calculé en azote total) d'hydrolysat de protéine de soja. Après stérilisation par chauffage à 121 0C pendant 15 min, on abaisse la température à La température ambiante et on inocule sur le milieu stérilisé une boucle de platine de cellules de Pseudomonas sp. ATCC 19121 préalablement cultivées sur plaque de gélose. Par culture sous secouage à 31 0C pendant 20 h, on prépare un bouillon de culture d'ensemencement.Dans une cuve de fermentation d'un volume de 10 l, on charge 5 l de milieu (pH 7) composé de 0,5 X d'acide fumarique, 0,5 Z d'acide oléique, 0,5 Z d'huile de soja, 0,1 X de phosphate de potassium, 0,1 x de sulfate de magnésium, 0,13 X (calculé en azote total) d'hydrolysat de protéine de soja.Après stérilisation par chauffage à 1210C pendant 20 min, on abaisse la température à la température ambiante et le bouillon de culture d'ensemencement préalablement cultivé dans la petite cuve de fermentation est ajouté au milieu puis cultivé dans les conditions suivantes : température de culture à 31 0C, quantité d'aéra tion de 1/2 vvm, vitesse d'agitation de 600 tr/min et pression intérieure de 0,2 kg/cmZ (20 kPa). Vingt heures après le commencement de la culture, 1,5 kg d'acide aspartique en poudre est ajouté séquentiellement. Tout en maintenant Le pH à 5, la température de culture est maintenue à 400C.Au moment et à partir du moment où la quantité d'alanine accumulée dépasse sa solubilité, et où les cristaux d'alanine commencent à se former dans le bouillon de culture, une partie du bouillon de culture est prélevée aseptiquement du système, passée à travers un cyclone liquide de petite taille pour isoler les cristaux. Ensuite, le bouillon de culture est retourné à la cuve de culture. La culture pendant 35 h au total incluant tes 20 h initiales par cette méthode donne 6,3 kg (teneur en humidité de 20 X) de bouillie de cristaux d'alanine et 5 l de bouillon de culture contenant 18 Z d'alanine. Le bouillon de culture obtenu est cristallisé par concentration. Les cristaux sont isolés et combinés avec la bouillie de cristaux obtenue durant la culture.Par dissolution et cristallisation répétées à deux reprises, on obtient 1,2 kg de cristaux d'alanine avec une pureté élevée.
Culture avec isolement Culture sans isolement
des cristaux (présente des cristaux (art
invention) antérieur) Fermentation
Productivité 0,42 g/l.h 0,35 g/l.h
Rendement 16 X 14 X
Traitement :
Nombre d'étapes 2 étapes 3 étapes
Rendement 75 Z 65 X
Exemple 9
On inocule le Pseudomonas sp. ATCC 19121 sur plaque de gélose contenant 1 Z d'extrait de viande, 1 Z de peptone et 0,5 X de chlorure de sodium puis on procède à la culture à 30 0C pendant 24 h.Dans une petite cuve de fermentation d'un volume de 1 l, on charge 0,3 l de milieu (pH 7) composé de 0,5 d'acide oléique, 0,5 Z d'huile de soja, 0,1 Z de phosphate de potassium, 0,1 Z de sulfate de magnésium et 0,1 X (calculé en azote total) d'hydrolysat de protéine de soja. Après stérilisation par chauffage à 121 0C pendant 15 min, on abaisse la température à La température ambiante et on inocule sur le milieu stérilisé une boucle de platine de cellules de Pseudomonas sp. ATCC 19121 préalablement cultivées sur plaque de gélose. Par culture sous secouage à 31 0C pendant 20 h, on prépare un bouillon de culture d'ensemencement.Dans une cuve de fermentation d'un volume de 10 l, on charge 5 l de milieu (pH 7) composé de 0,5 X d'acide fumarique, 0,5 Z d'acide oléique, 0,5 Z d'huile de soja, 0,1 X de phosphate de potassium, 0,1 x de sulfate de magnésium, 0,13 X (calculé en azote total) d'hydrolysat de protéine de soja.Après stérilisation par chauffage à 1210C pendant 20 min, on abaisse la température à la température ambiante et le bouillon de culture d'ensemencement préalablement cultivé dans la petite cuve de fermentation est ajouté au milieu puis cultivé dans les conditions suivantes : température de culture à 31 0C, quantité d'aéra tion de 1/2 vvm, vitesse d'agitation de 600 tr/min et pression intérieure de 0,2 kg/cmZ (20 kPa). Vingt heures après le commencement de la culture, 1,5 kg d'acide aspartique en poudre est ajouté séquentiellement. Tout en maintenant Le pH à 5, la température de culture est maintenue à 400C.Au moment et à partir du moment où la quantité d'alanine accumulée dépasse sa solubilité, et où les cristaux d'alanine commencent à se former dans le bouillon de culture, une partie du bouillon de culture est prélevée aseptiquement du système, passée à travers un cyclone liquide de petite taille pour isoler les cristaux. Ensuite, le bouillon de culture est retourné à la cuve de culture. La culture pendant 35 h au total incluant tes 20 h initiales par cette méthode donne 6,3 kg (teneur en humidité de 20 X) de bouillie de cristaux d'alanine et 5 l de bouillon de culture contenant 18 Z d'alanine. Le bouillon de culture obtenu est cristallisé par concentration. Les cristaux sont isolés et combinés avec la bouillie de cristaux obtenue durant la culture.Par dissolution et cristallisation répétées à deux reprises, on obtient 1,2 kg de cristaux d'alanine avec une pureté élevée.
Par tailleurs, la culture est conduite pendant 35 h dans les mêmes conditions sauf que le bouillon de culture n'est pas recyclé dans le cyclone liquide et que les cristaux formés durant la culture ne sont pas isolés. Comme résultat, 5 l de bouillon de culture contenant 28 Z d'alanine sont obtenus. Par dissolution et cristallisation répétées des cristaux obtenus par concentration et cristallisation, l'alanine est purifiée. Toutefois, il est nécessaire de répéter la dissolution et la cristallisation à trois reprises en vue d'obtenir des cristaux d'alanine ayant la même pureté que celle obtenue dans la méthode montrée précédemment.
Comme résultat, 1,1 kg de cristaux d'alanine de pureté élevée est obtenu.
En ce qui concerne les deux méthodes de préparation de l'alanine, les résultats et Les caractéristiques sont montrés dans le tableau 6.
Tableau 6
Culture avec isolement Culture sans isolement
des cristaux (présente des cristaux (art
invention) antérieur)
Fermentation =
Productivité 8,2 g/l.h 8,0 g/l.h
Rendement 93 X 89 X
Traitement =
Nombre d'étapes 2 étapes 3 étapes
Rendement 87 X 80 X
Effets de l'invention
Comme mentionné prédédemment, conformément à la présente invention, des cristaux d'un aminoacide, d'un acide nucléique ou d'un dérivé dudit acide peuvent être isolés efficacement et purifiés à bas prix à partir d'une solution contenant les cristaux, les cellules et les composants du milieu.
Culture avec isolement Culture sans isolement
des cristaux (présente des cristaux (art
invention) antérieur)
Fermentation =
Productivité 8,2 g/l.h 8,0 g/l.h
Rendement 93 X 89 X
Traitement =
Nombre d'étapes 2 étapes 3 étapes
Rendement 87 X 80 X
Effets de l'invention
Comme mentionné prédédemment, conformément à la présente invention, des cristaux d'un aminoacide, d'un acide nucléique ou d'un dérivé dudit acide peuvent être isolés efficacement et purifiés à bas prix à partir d'une solution contenant les cristaux, les cellules et les composants du milieu.
Claims (9)
1. Une méthode de purification d'un aminoacide, d'un acide nucléique ou d'un dérivé de l'un ou l'autre acide, caractérisé en ce qu'elle comprend le traitement d'une bouillie de cristaux contenant au plus 10 Z en poids de cellules ayant un diamètre ne dépassant pas 5 pm sur la base du poids sec et 5 à 60 Z en poids de cristaux d'un aminoacide, d'un acide nucléique ou d'un dérivé de L'un ou L'autre acide ayant un diamètre de 10 à 2 000 pu, à l'aide d'un cyclone liquide ayant un diamètre représentatif capable d'accroitre suffisamment la concentration des cristaux au niveau du côté aval du cyclone liquide et, si nécessaire, l'application d'une contre pression au niveau du côté aval pour récupérer une solution concentrée de cristaux ayant une concentration en cristaux de 30 à 90 % en poids au niveau du côté aval et pour sélectionner au moins 50 Z des cellules au niveau du côté amont.
2. Une méthode de purification selon la revendication 1, caractérisée en ce que La concentration en cristaux de la solution concentrée de cristaux au niveau du côté aval est de 60 à 80 Z en poids.
3. Une méthode de purification selon la revendication 1, caractérisée en ce que ladite bouillie de cristaux provient d'un bouillon de culture ou d'une solution de réaction enzymatique et les cristaux sont formés dans Le bouillon de culture ou dans La solution de réaction enzymatique.
4. Une méthode de purification selon la revendication 1, caractérisée en ce que ladite bouillie de cristaux provient d'un bouillon de culture ou d'une solution de réaction enzymatique et les cristaux sont cristallisés par addition d'un acide ou d'une base après achèvement de la fermentation ou de la réaction enzymatique.
5. Une méthode de purification selon la revendication 1, caractérisée en ce que ladite bouillie de cristaux provient d'un bouillon de culture ou d'une solution de réaction enzymatique et les cristaux sont formés par concentration ou refroidissement, après achèvement de la fermentation ou de la réaction enzymatique.
6. Une méthode de purification d'un aminoacide, d'un acide nucléique ou d'un dérivé de l'un ou l'autre acide, caractérisée en ce qu'elle comprend le traitement d'une bouillie de cristaux contenant au plus 10 Z en poids de cellules ayant un diamètre ne dépassant pas 5 jjm sur une base du poids sec et 5 à 60 X de cristaux d'un aminoacide, d'un acide nucléique ou d'un dérivé de l'un ou L'autre acide ayant un diamètre de 10 à 2 000 pm à L'aide d'un cyclone liquide ayant un diamètre représentatif capable d'accroitre suffisamment la concentration des cristaux au niveau du côté aval dudit cyclone, si nécessaire, l'application d'une contre-pression au niveau du côté aval pour récupérer une solution concentrée de cristaux ayant une concentration en cristaux de 30 à 90 X en poids au niveau du côté aval et pour sélectionner au moins 50 Z des cellules au niveau du côté amont, et La filtration ou la déshydratation par centrifugation de la solution concentrée récupérée de cristaux pour obtenir des cristaux avec moins de liqueur mère adhérée à ces cristaux.
7. Une méthode de purification selon la revendication 6, caractérisée en ce que ladite bouillie de cristaux provient d'un bouillon de culture ou d'une solution de réaction enzymatique et les cristaux sont formés dans te bouillon de culture ou dans la solution de réaction enzymatique.
8. Une méthode de purification selon la revendication 6, caractérisée en ce que ladite bouillie de cristaux provient d'un bouillon de culture ou d'une solution de réaction enzymatique et les cristaux sont cristallisés par addition d'un acide ou d'une base après l'achèvement de la fermentation ou de la réaction enzymatique.
9. Une méthode de purification selon la revendication 6, caractérisée en ce que ladite bouillie de cristaux provient d'un bouillon de culture ou d'une solution de réaction enzymatique et les cristaux sont formés par concentration ou refroidissement, après L'achèvement de la fermentation ou de la réaction enzymatique.
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Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001088175A1 (fr) * | 2000-05-17 | 2001-11-22 | Instituto Superior Técnico | Procede de production continue de cristaux dipeptidiques dans une membrane et un reacteur hydrocyclone a peptidase |
WO2003050274A3 (fr) * | 2001-12-11 | 2003-12-11 | Novozymes As | Production de cristaux a partir de bouillon de fermentation |
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Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE10022635A1 (de) * | 2000-05-11 | 2001-11-15 | Biotechnolog Forschung Gmbh | Verfahren zur Abtrennung von lebensfähigen Zellen aus Zellsuspensionen |
TWI361834B (en) * | 2005-04-12 | 2012-04-11 | Kyowa Hakko Bio Co Ltd | A method for producing amino acids |
JP2010110216A (ja) * | 2007-02-20 | 2010-05-20 | Ajinomoto Co Inc | L−アミノ酸または核酸の製造方法 |
CN101809159B (zh) * | 2007-10-01 | 2014-11-26 | 三井化学株式会社 | β-氨基酸的制造方法 |
US9644218B2 (en) | 2012-04-25 | 2017-05-09 | Purac Biochem Bv | Fermentation process |
CN110523091A (zh) * | 2019-08-22 | 2019-12-03 | 临沂市博士爱文具有限公司 | 一种具有抗菌功能的儿童安全水晶泥制备工艺 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3842751A1 (de) * | 1988-12-19 | 1990-07-05 | Gea Wiegand Gmbh | Zucker und verfahren zu seiner herstellung |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US1708940A (en) * | 1924-08-15 | 1929-04-16 | American Maize Prod Co | Process of producing dextrose |
US3503803A (en) * | 1968-03-22 | 1970-03-31 | Whiting Corp | Continuous production of crystalline sucrose |
US3883365A (en) * | 1972-01-04 | 1975-05-13 | Suomen Sokeri Oy | PH adjustment in fructose crystallization for increased yield |
-
1990
- 1990-01-22 JP JP2012338A patent/JP2958789B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1991
- 1991-07-10 AU AU80303/91A patent/AU639809B2/en not_active Expired - Fee Related
- 1991-07-16 FR FR9108989A patent/FR2679235B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-07-11 US US08/272,655 patent/US5547858A/en not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3842751A1 (de) * | 1988-12-19 | 1990-07-05 | Gea Wiegand Gmbh | Zucker und verfahren zu seiner herstellung |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001088175A1 (fr) * | 2000-05-17 | 2001-11-22 | Instituto Superior Técnico | Procede de production continue de cristaux dipeptidiques dans une membrane et un reacteur hydrocyclone a peptidase |
WO2003050274A3 (fr) * | 2001-12-11 | 2003-12-11 | Novozymes As | Production de cristaux a partir de bouillon de fermentation |
US7118891B2 (en) | 2001-12-11 | 2006-10-10 | Novozymes A/S | Crystal harvest from fermentation broth |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
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US5547858A (en) | 1996-08-20 |
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JPH03216195A (ja) | 1991-09-24 |
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