FR2555050A1

FR2555050A1 - Compositions pharmaceutiques et procede de preparation de compositions de phosphatidylserine, utilisables au traitement de desordres du systeme nerveux central sans exercer d'effets sur la coagulation du sang

Info

Publication number: FR2555050A1
Application number: FR8417262A
Authority: FR
Inventors: Francesso Della Valle; Aurelio Romeo
Original assignee: Fidia SpA
Current assignee: Fidia SpA
Priority date: 1983-11-17
Filing date: 1984-11-13
Publication date: 1985-05-24
Also published as: FR2555050B1; CH661734A5; IE58130B1; AU3563084A; GR80951B; FI844468A0; LU85639A1; EP0148045A1; NO844585L; ES537575A0; MX160792A; NZ210091A; ZA848776B; NO164275B; JPH0676334B2; AU572228B2; NO164275C; ATE35415T1; IL73420A; DK524884A

Abstract

COMPOSITION DE PHOSPHOLIPIDE CONSTITUEE D'UN MELANGE DE PHOSPHATIDYLSERINE ET DE PHOSPHATIDYLETHANOLAMINE DANS UN RAPPORT SPECIFIE PRESENTANT UNE ACTIVITE CONTRE LES DESORDRES DU SYSTEME NERVEUX CENTRAL MAIS NE PRESENTANT PAS D'EFFETS SECONDAIRES SUR LA COAGULATION DU SANG. DES COMPOSITIONS PARTICULIEREMENT UTILES COMPRENNANT DE 60 A 75 EN POIDS DE PHOSPHATIDYLSERINE ET DE 40 A 25 EN POIDS DE PHOSPHATIDYLETHANOLAMINE.

Description

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COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES ET PROCEDE DE PREPARATION DE COMPOSITIONS

DE PHOSPHATIDYLSERINE UTILISABLES AU TRAITEMENT DE DESORDRES DU SYSTEME

NERVEUX CENTRAL SANS EXERCER D'EFFETS SUR LA COAGULATION DU SANG

La présente invention concerne une composition de phospholipides qui est administrée par diverses voies pour le traitement de désordres du système nerveux central, notamment ceux liés au vieillissement du cerveau. Les phospholipides représentent une classe importante de lipides caractérisée par une portion glycérol qui lie le phosphate et les acides gras. La formule générale des phospholipides est la suivante:

REGION

/r POLAIRE

GROUPE

DE TETE

C c -C > 1 c=o

REGION

HYDROCARBONEE

ou,

2 2555050

X

0 =P O

O -P OTETE

O POLAIRE

1 2

CH2- CH -CH

2 2

O O

1 i

C=O C=O

l QUEUE

1H C= H2 NON POLAIRE'

( /2 dans laquelle: X représente un groupe de tête polaire particulier caractérisant les différentes classes de phospholipides. (voir Lenhinger,

Biochemistry, 2ème édition, page 228).

Il est entendu que le rôle des phospholipides dans la coagulation

du sang est crucial mais qu'il n'est pas encore tout à fait bien éclair-

ci à l'heure actuelle. Certes au niveau moléculaire, l'interaction des phospholipides pendant ce procédé avec les facteurs de la-coagulation

doit encore être expliquée.

Lorsque l'on décrit les voies de la coagulation intrinsèque et extrinsèque, il est possible d'observer que les phospholipides jouent un rôle clé dans la cascade de coagulation. En fait, les phospholipides constituent de 30 à 50% des préparations de thromboplastine brut et leur composition varie selon l'origine de la préparation. La majeure partie est cependant constituée par la phosphatidylcholine (PC) et la phosphatidyléthanolamine (PE) tandis que des phospholipides chargés

négativement tels que la phosphatidylsérine (PS) et le phosphatidylino-

sitol (PI) en représentent une petite partie (Liu D. T. H. et coll.

Thromb. Res. 7 (1975) 213-221). Le groupe polaire du phospholipide joue un rôle essentiel dans la formation des complexes au cours de la coagulation (Otnaes A.B. et coll. Eur. J. Biochem. 27 (1972), 238-243;

Nemerson Y. Adv. Exp. Med. Biol. 63 (1975) 245-253).

En considérant la spécificité de la tête polaire, on a observé

qu'en recombinant l'apoprotéine du facteur du tissu avec la PE, l'acti-

vité thromboplastique était complètement restaurée (Nemerson Y, supra; Liu D. T. H.. et coll., supra). Il s'avère que la PC est moins active tandis que d'autres fractions phospholipides et PE n'ont pas d'activité du tout, en dépit du fait qu'ils lient la fraction d'apoprotéine. Selon Wijngaards et coll. (biochem. Biophys. Acta 488 (1977), 161-171), des mélanges de lipides possédant des charges négatives modérées sont

nécessaires pour une restauration complète de l'activité de la thrombo-

plastine. Le rôle des phospholipides ajoutés de l'extérieur n'est pas non plus complètement clair. Il y a certes des indices dans la littérature que les préparations de phospholipide provenant du tissu cérébral, préparées par extraction au chloroforme et séchées dans l'acétone agissent in vitro comme des coagulants forts (Bell, W.M. et coll., Nature 174 (1954), 880-881), tandis que des mélanges de phospholipides extraits du tissu cérébral avec un mélange chloroforme sur méthanol, ceci étant suivi d'une élimination des parties non lipidiques avec une solution saline, se sont avérés être virtuellement inactifs (Folch, H. et coll., J. Biol. Chem. 226 (1957), 497-509). Il est à noter que dans le premier cas, les protéines du tissu cérébral sont présentes tandis que dans le second cas, elles ont été éliminées par le processus de

partition.

La composition et la pureté des phospholipides utilisés est encore le facteur fondamental dans la compréhension de leur rôle exact, si l'on considère également le fait que différentes activités ont été indiquées pour les classes particulières individuelles de phospholipides. C'est cependant la corrélation entre la charge négative et l'activité de coagulation qui rend la phosphatidylsérine particulièrement intéressante pour ces phénomènes. L'activité de la PS est contestée par certains auteurs prétendant en fait que la PS a une action catalytique

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(Marcus A. J. Adv. Lip. Res. 4 (1966) 1-37), tandis que d'autres auteurs indiquent une activité inhibitrice de la PS (Turner D. L. et coll.,

J. Lip. Res. 5 (1964) 616-623) due à la formation de complexes inactifs.

Mustard et coll. indiquent également (Nature, 196 (1962) 1063-1065) une activité anticoagulante de la PS lorsqu'on l'injecte in vivo à des chiens dans un intervalle de dosage compris entre 30 et 50 mg par kg. En outre, il a été indiqué que la PE présente une activité coagulante marquée (Rouser et coll., Biochem. Biophys. Acta 28 (1958) 71-80; Turner D. L. et coll., J. Lip. Res. 4 (1963) 52-56). L'activité d'un

mélange d'au moins deux classes de phospholipides est cependant pro-

bablement plus intéressante que celles des classes uniques.

Quelques préparations ayant une activité considérable sont des compositions binaires: PE/PS (65/35 p/p), PC/PS (57/43 p/p), PC/PG (48/52 p/p) et PG/stéaroylamine (85/15 p/p) (Zwaal R. F. A. Biochem.

Biophys. Acta 515 (1978), 162-205).

Le mélange binaire de PS/PC en présence de calcium semble impor-

tant dans la formation des complexes du chemin de la coagulation

(Subbaiah E. V. et coll. Biochem. Biophys. Acta 444 (1976), 131-146).

Lorsque la PS constitue 25% du mélange avec d'autres phospholipides, elle s'avère être critique dans la détermination, dans cet intervalle, de l'activité biologique maximum dans la conversion provoquée par la

prothrombine et la thrombine (M. F. Lecompte et coll. J. Electro. Anal.

Chem. 104 (1979), 537-541).

Il est à noter que cette fraction phospholipidique, à savoir la phosphatidylsérine, est également intéressante pour d'autres activités

biologiques et pharmacologiques.

En fait, toute une série d'implications de la phosphatidylsérine

dans divers processus biologiques ont été indiquées dans la littérature.

En résumé, les implications biologiques de la PS dans les phénomènes physiologiques sont les suivantes: a) La PS restaure l'activité de l'ATPase associée avec des membranes neuronales isolées (Wheeler et Whittam (1970), Nature 225, 449-450; Palatini et coll. (1977) Biochem. Biophys. Acta 466, 1-9). b) La PS stimule l'activité de l'enzyme tyrosine hydroxylase isolé (Lloyd et Kaufman (1974) Biochem. Biophys. Res. Comm. 59, 1262-1269; Raese et coll. (1976) Biochem. Pharmacol. 25,

2245-2250).

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c) Les liposomes de la PS induisent une fusion des cellules (Papahadjopoulos et coll. (1973) Biochem. Biophys. Acta 323,

23-42).

Outre les effets biochimiques observés, plusieurs recherches ont montré que le métabolisme cérébral était influencé par l'administration de PS in vivo; l'activité des systèmes dopaminergique et cholinergique est grandement affectée, probablement par une intervention sur les

mécanismes présynaptiques régulant la libération de neurotransmetteurs.

Cette activité se reflète par des effets mesurable sur divers corrélats

du comportement neuro-endocrinien et électrophysiologique.

En particulier, Bruni et coll. (Nature 260 (1976) (5549), 331-333) ont indiqué un effet biologique significatif de la PS in vivo sur le métabolisme cérébral des hydrates de carbone, effet détecté par la mesure d'une augmentation de la concentration en glucose dans le sang cérébral. D'autres phospholipides se sont avérés incapables d'induire

cet effet.

Cette activité cérébrale après injection in vivo de la PS est confirmée par Toffano et coll. (Life Sciences 23 (1978), 1093-1102) qui ont montré que dans les systèmes de neurotransmetteurs cérébraux,

l'injection intraveineuse (i.v.) de PS augmente la vitesse de circula-

tion de la norepinéphrine dans l'hypothalamus. Cette effet hypothala-

mique est accompagné par une augmentation de l'affinité de la tyrosine hydroxylase pour son cofacteur stéridine synthétique (Toffano, Battistin, "Neurochemistry and Clinical Neurology" (1980), 205-214) et

par une augmentation de la cAMP.

Ces effets sont liés à une augmentation de la production d'acétyl-

choline (ACh) par le cortex cérébral des rats anesthésiés à l'uréthane (Casamenti et coll. J. Neurochem. 32 (1979), 529-533). Lorsque les niveaux d'ACh dans le cortex cérébral des rats sont mesurés, on trouve que la PS (30 mg/kg 1/p pendant 10 jours) opère une potentiation de l'effet de la scopolamine, drogue antimuscarinique (Mantovani et coll.,

Phospholipids in the Nervous System - Volume 1 (1981), 165-172).

L'effet de la PS sur les systèmes neurotransmetteurs cérébraux est prouvé par des corrélats neuro-endocriniens et électrophysiologiques et par ceux du comportement. Canonico et coll. (Neuroendocrinology 33

(1981), 358-362) décrit les effets de la PS sur la sécrétion de prolac-

tine chez les rats. Par administration aiguë ou répétée, le médicament réduit les niveaux de prolactine dans le plasma pendant les différentes

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phases du rythme circadien et elle inhibe la montée en prolactine dans

le plasma typique du pro-oestrus l'après-midi chez les rats femelles.

D'autre part, une série d'expériences (Mantovani et coll., supra; Toffano et coll., New Trends in Nutrition Lipid Research, and Cardiovascular Diseases (1981), 91-99) a montré que la rupture typique du tracé de l'EEG induite par la scopolamine, drogue anticholinergique, était efficacement contrée par administration préalable ou simultanée de PS. Par la suite, Aporti et coll. (Res. Comm. Psycho. Psych. Behav. 7 (1982) (1), 131-143) ont étendu les études de l'EEG par utilisation d'une analyse à l'ordinateur de l'EEG enregistrée au moyen d'électrodes implantées dans la zone corticale et subcorticale de rats se déplaçant librement. Une administration aiguë de PS produit, au niveau cortical, une inversion des rapports existants avant l'administration de la drogue entre les amplitudes dans les hémisphères droit et gauche. L'effet

devient plus prononcé au bout de 10 jours d'administration chronique.

Cet effet est corrélé avec un comportement typique d'instinct exploratoire, défini comme une alternance, présenté par des rats places dans un environnement de labyrinthe en T. Ce comportement typique est également interrompu par la scopolamine, drogue anticholinergique. Pepeu

et coll. (aging Br. Dementia 13 (1980), 271-274) indiquent que l'admi-

nistration de PS par voie intraparentérale (i.p.) efface complètement l'effet de rupture de la scopolamine sur l'alternance spontanée dans un labyrinthe en T. Plus récemment, Toffano et coll. /International Multidisciplinar Seminar: "Cebral Pathology in Old Age", deuxième édition (sous presse en 1983)1 ont étudié les données pharmacologiques obtenues sur des animaux âgés en vue d'évaluer l'effet protecteur de la PS sur les paramètres qui subissent des changements avec l'âge. L'injection de PS influence favorablement divers paramètres des membranes biochimiques, y compris la stimulation de la (Na+K+)-ATPase, et la lutte contre les altérations liées à l'âge du rapport molaire du cholestérol aux phospholipides. En même temps, la PS empêche la diminution dépendante de l'âge de la dopamine et de ces catabolites dans les zones limbiques et striées du rat. En outre, une série d'études a confirmé un effet favorable de la PS sur les processus d'apprentissage et de mémorisation chez les rats âgés. Des effets positifs de la PS sur les fonctions cognitives des rats âges sont indiqués par Drago et Scapagnini, Neurobiology of Aging 2

(1981), 209-213.

En résumé, les données pharmacologiques de la littérature indi-

quent à l'évidence que l'administration à l'homme de compositions pharmaceutiques contenant de la PS d'origine cérébrale et ayant un degré de pureté élevé peut représenter un moyen thérapeutique valable pour le traitement du vieillissement du cerveau lorsque l'on reconnaît une

diminution du contrôle dopaminergique. D'autre part, les données indi-

quant les effets de la PS sur la coagulation du sang suggèrent qu'il y a un risque important d'hémorragies lorsque l'on administre la PS. Ceci est un risque particulièrement désavantageux chez les patients âgés qui

souffrent déjà souvent de complications vasculaires.

La présente invention concerne fondamentalement l'identification de nouvelles compositions de phospholipides au moyen desquelles on

puisse administrer aux êtres humains, par diverses voies, une phosphati-

dylsérine de pureté élevée ayant une activité pharmacologique sur le

système nerveux sans porter atteinte de façon indésirable à la coagula-

tion du sang. Le profil pharmacologique spécifique de ces compositions consiste en une modulation du contrôle dopaminergique. Ces compositions sont donc particulièrement utiles pour le traitement de pathologie se caractérisant par une diminution du contrôle dopaminergique; à savoir:

involution des syndromes psycho-moteurs séniles, cérébropathie vascu-

laire, composant psychique prévalent et chronique du vieillard, des démences séniles et syndromes préséniles consécutifs à un traumatisme,

cérebropathie post-anoxique et syndromes extra-pyramidaux.

Dans le traitement de ces diverses pathologies, il est nécessaire

d'éliminer tout effet de coagulation du sang secondaire qui peut appa-

raître lors de l'administration des compositions. Il est en fait bien connu que des complications vasculaires apparaissent souvent chez les personnes âgées de telle sorte que les effets de coagulation du sang doivent être considérés dans le traitement de ces pathologies. Les compositions de phospholipides selon l'invention comprennent de la

phosphatidylsérine extraite du tissu du cerveau des animaux. Ces compo-

sitions particulières ne présentent pas d'effets indésirables sur la

coagulation du sang.

Des études détaillées ont été menées sur l'effet sur la coagula-

tion d'un mélange de phospholipides extraits et purifiés à partir du cortex du cerveau des bovins. Ces études ont également déterminé les

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effets de la phosphatidylsérine purifiée et des mélanges binaires de phosphatidylsérine avec d'autres classes uniques de phospholipides (PE, PC et sphingomyéline). Cette recherche a été conduite avec le but d'obtenir une préparation de phosphatidylsérine pharmacologiquement active présentant des effets secondaires indésirables sur la coagulation du sang. Une évaluation spécifique a été faite des effets sur l'activité

du système nerveux central, de l'administration in vivo de la composi-

tion de phospholipides en même temps que des effets secondaires pouvant

se produire sur la coagulation du sang.

Méthodes: L'activité des divers produits est évaluée in vivo par injection intraveineuse de diverses préparations de phospholipides sur des lapins de Nouvelle Zélande pesant de 1,5 à 2 kg, à des dosages allant de 0,5 mg/kg à 50 mg/kg. Les phospholipides sont placés dans un véhicule de Tris.HCl (50 mM, pH 7,4) et on les traite par voie sonique jusqu'à ce que la suspension devienne claire (toutes traces possibles de titane

provenant de l'appareil de traitement sonique sont éliminées par centri-

fugation). Apres traitement, le sang est prélevé sur les animaux et on teste sa coagulation. Les déterminations sont faites en utilisant des ensembles de coagulation du sang fournis par biochémia (Boheringer, Mannhein) avec un appareil Digiclot Elvi 818 sur du plasma obtenu par centrifugation à une vitesse de 4 200 tr/mn pendant 10 minutes de sang dans du citrate de sodium à 3,8% à un rapport de 1/9. Le paramètre

considéré est le temps de prothrombine selon Quick.

L'activité pharmacologique des compositions individuelles de produits testés est évaluée en mesurant le glucose cérébral de la souris dans le même intervalle de dosage, en considérant ce paramètre comme une indication de l'activation cérébrale. Pour cette expérience, on traite des souris suisses pesant entre 20 et 25 grammes que l'on sacrifie 30 minutes après l'injection. Les niveaux de glucose sont mesurés comme

décrit par Bruni et coll., dans Nature 260 (1976), 331-333.

Les compositions individuelles testées sont les suivantes: (1) phosphatidylsérine (PS) provenant du cortex du cerveau de bovins ayant un titre supérieur à 90%; (2) phosphatidylsérine + phosphatidyléthanolamine (BC-PS) comportant % de PS et 25% de PE p/p; (3) phosphatidylsérine + phosphatidyléthanolamine (BC-PS1) avec 65% de PS et 35% de PE p/p; (4) phosphatidylsérine + phosphatidyléthanolamine (BC-PS2) avec 60% de PS et 40% de PE p/p; (5) phosphatidylsérine + phosphatidyléthanolamine (BC-PS3) avec 50% de PS et 50% de PE p/p; (6) phosphatidylsérine + phosphatidyléthanolamine (BC-PS4) avec 40% de PS et 60% de PE p/p; (7) phosphatidylsérine + phosphatidyléthanolamine (BC-PS5) avec 25% de PS et 75% de PE p/p; (8) phosphatidylsérine + phosphatidyléthanolamine (BC-PS6) avec 85% de PS et 15% de PE p/p; (9) phosphatidylsérine + phosphatidylcholine (BC-PS7) avec 75% de PS et 25% de PC p/p; (10) phosphatidylsérine + sphingomyéline (BC-PS8) avec 75% de PS et 25%

de SF p/p.

Résultats Les résultats des tests décrits ci-dessus sont résumés cidessous

dans les tableaux 1 et 2.

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TABLEAU 1

Activité de diverses compositions de phospholipides sur la coagulation du sang et sur le glucose du cerveau enregistrée 30 minutes après

traitement in vivo à une dose de 20 mg/kg i.v. de différents mélanges.

_ _ _ _ _ _ _ _ _

Pourcentage de phospho- Dosage (mg/kg)a lipides dans Dose totale Dose de Temps de Glucose le mélange du mélange PS dans le prothrombine cérébral de composi- de composi- composé selon Quick (umole/ tions tions (sec.) g) Contrôles - - 7,43 + 0,07 1,3

PS 20 20 12,34 + 0,8 4,1

BC-PS (PS 75

PE 25) 20 15 7,36 + 0,14 3,7

BC-PS1 (PS 65

PE 35) 20 13 7,5 + 0,3 3,5

BC-PS2 (PS 60

PE 40) 20 12 7,8 + 0,5 3,2

BC-PS3 (PS 50

PE 50) 20 10 8,5 + 0,2 3,0

BC-PS4 (PS 40

PE 60) 20 8 6,7 + 0,9 2,5

BC-PS5 (PS 25

PE 75) 20 5 6,5 + 0,2 1,9

BC-PS6 (PS 85

PE 15) 20 17 11,3 + 1,2 2,9

BC-PS7 (PS 75

PC 25) 20 15 9,3 + 0,7 3,0

BC-PS8 (PS 75

SF 25) 20 15 14,7 + 0,9 3,1

a. a le dosage du mélange de composition est maintenu au taux constant de 20 mg/kg. De ce fait, la dose de PS varie selon le pourcentage

correspondant de PS dans chaque mélange.

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TABLEAU 2

traitement in vivo à une dose de 20 mg/kg i.v. de PS.

Dosage (mg/kg)a Dose de Dose totale Temps de Glucose PS dans le du mélange prothrombine cérébral composé des composi- (sec.) (umole/ tions g) Contrôle - - 7,43 + 0,07 1,3

PS 20 20 12,34 + 0,8 4,1

BC-PS 20 27 7,5 + 0,20 4,3

BC-PS1 20 30,7 8,0 + 0,2 4,1

BC-PS2 20 33,3 8,2 + 0,7 3,8

BC-PS3 20 40 9,5 + 0,3 3,8

BC-PS4 20 50 4,2 + 9,3 4,0

BC-PS5 20 80 3,5 + 0,4 3,3

BC-PS6 20 23,5 13,3 + 0,2 3,6

BC-PS7 20 27 11,5 + 0,3 3,8

BC-PS8 20 27 12,3 + 0,5 3,9

a La dose de PS est maintenue au taux constant de 20 mg/kg. En vue d'obtenir ce taux de dosage constant de PS, le taux de dosage du

mélange de compositions totales varie selon le pourcentage corres-

pondant de PS dans chaque mélange.

A partir des résultats mesurant les paramètres de coagulation, il

est possible d'observer une activité anticoagulante nette après adminis-

tration de phosphatidylsérine pure in vivo, ce qui confirme les observa-

tions préalables de Mustard et coll. /Nature 196, pages 1063-1065

(1965)/.

Dans le cas de mélanges binaires de PS et d'autres phospholipides, l'activité anticoagulante varie avec les taux divers selon le type particulier de phospholipide associé à la PS. Mais dans le cas de BC-PS, le temps de prothrombine mesuré est sensiblement le même que celui des

contrôles, ceci indiquant que cette composition n'a pas d'effets indé-

sirables sur la coagulation du sang.

Une analyse supplémentaire des résultats indiqués sur les ta-

bleaux 1 et 2 montre que la phosphatidylsérine est la fraction la plus active dans l'augmentation des niveaux de glucose dans le cerveau. Cet effet peut également être observé dans le cas des mélanges binaires de PS avec d'autres phospholipides de façon semblable à celle de la PS pure. En considérant les données du tableau 2 avec des doses constantes de 20 mg/kg i.v. de PS pure, on peut voir que l'activité cérébrale est

favorisée pour tous les mélanges binaires de phospholipides par compa-

raison avec les contrôles. Cependant, l'activité sur la coagulation du sang est extrêmement diverse en fonction de la composition binaire

particulière, certaines compositions raccourcissant et d'autres allon-

geant les temps mesurés par comparaison avec les contrôles.

Il est donc particulièrement important de noter que l'utilisation d'un mélange binaire de PS et de PE (notamment 75% de PS + 25% de PE) ne présente pas d'activités indésirables sur la coagulation tandis qu'elle a une bonne activité sur le système nerveux central (CNS). C'est-à-dire

que la composition de PS comprenant un mélange de phospholipides pré-

sente une bonne activité CNS telle qu'on la mesure à partir du niveau de glucose dans le cerveau mais cette composition présente également des effets secondaires indésirables de coagulation du sang comme le montre le temps de prothrombine allongé. D'autre part, les compositions BC-PS4 et BC-PS5 administrées à des niveaux de doses constantes du mélange

binaire, présentent des temps de prothrombine diminués dans un inter-

valle plus acceptable comme l'indique le tableau 1. Cependant, ces compositions (notamment BC-PS5) ne présentent pas une activité CNS suffisamment désirable comme le montrent les faibles niveaux de glucose dans le cerveau. En outre, en administrant des doses constantes de PS dans un mélange binaire, les compositions de BC-PS4 et BC-PS5 présentent aussi des temps de prothrombine notablement diminués de telle sorte que les temps de prothrombine faibles de la composition BC-PS5 représentent en fait un effet secondaire indésirable en occasionnant une coagulation du sang à un taux qui est trop rapide. Cet effet peut conduire a un

risque de thrombose chez des patients traités avec ces mélanges.

Les fractions de PS avec PC, et PS avec SF sont également indé-

sirables dans la mesure o ils présentent de prothrombine augmentés.

Il a cependant été déterminé par la demanderesse que les composi-

tions de BC-PS, BC-PS1 et BC-PS2 représentent des compositions pharma-

ceutiques utiles. Ces trois compositions présentent toutes un taux de

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prothrombine acceptable sensiblement réduit par rapport au temps de

prothrombine de la PS et comparable à ceux des contrôles tout en présen-

tant en même temps une bonne activité CNS, ce que montrent les niveaux

de glucose dans le cerveau.

On a cependant déterminé en accord avec la présente invention qu'une composition de phospholipide préférée présentant une bonne

activité CNS et ne présentant pas d'effets indésirables de la coagula-

tion du sang était obtenue en préparant un mélange de 60 à 75% de PS avec 40 à 25% de PE. De préférence, la composition contient environ 75% de PS et 25% de PE. Les exemples suivants décrivent des compositions pharmaceutiques spécifiques préparées selon la présente invention, utilisables pour le traitement de divers désordres du système nerveux

central par modulation du contrôle dopaminergique.

EXEMPLE 1

Préparation de la composition de phospholipide BC-PS 1.000 g de phosphatidylsérine (PS) extraite du tissu nerveux de bovins ayant un titre supérieur à 95% sont dissous dans 5 litres d'un mélange méthanol/chloroforme (2/1). 333 g de phosphatidyléthanolamine

(PE) ayant un titre supérieure à 80% sont ajoutés à la solution.

La solution est maintenue sous agitation pendant 15 minutes, filtrée à travers un filtre à membrane stérilisante et précipitée dans volumes d'acétone avec une agitation convenable.

Le précipité est séparé et séché sous vide à faible température.

On obtient de cette façon environ 1.250 g d'une composition BC-PS.

EXEMPLE 2

Préparation de la composition de phospholipide BC-PS1 De la même manière que dans l'exemple 1, 1.000 g de PS ayant un

titre supérieur à 95% sont dissous dans 5 litres d'un mélange métha-

nol/chloroforme (2/1) et 538 g de PE ayant un titre supérieur à 80% sont

ajoutés à la solution.

Apres agitation, filtration, précipitation et séchage, on obtient

environ 1.442 g d'une composition de BC-PS1.

EXEMPLE 3

Préparation de la composition de phospholipide BC-PS2 De la même façon que dans l'exemple 1, 1.000 g de PS ayant un

titre supérieur à 95% sont dissous dans 5 litres d'un mélange de métha-

nol/chloroforme (2/1) et 666 g de PE ayant un titre supérieur à 80% sont

ajoutés à la solution.

14 2 2555050

Apres agitation, filtration, précipitation et séchage, on obtient

environ 1.562 g d'une composition de BC-PS2.

EXEMPLE 4

Exemples de compositions pharmaceutiques injectables a) une fiole de 2 ml contient: liposomes de composition de phospholipides BC-PS.. 66,5 mg phosphate de sodium monobasique................... 2,4 mg phosphate de sodium dibasique..................... 2,26 mg eau bi-distillée apyrogène..

.....................qs 2 ml b) une fiole de 5 ml contient: liposomes de composition de phospholipides BC-PS.. 332,5 mg phosphate de sodium monobasique................... 5,35 mg phosphate de sodium dibasique........DTD: ............. 6,65 mg eau bi-distillée apyrogène........................ qs 5 ml c) une fiole de 3 ml contient: liposomes de composition de phospholipides BC-PS.. 199,5 mg phosphate de sodium monobasique.............DTD: ...... 3,21 mg phosphate de sodium dibasique..................... 3,39 mg mannitol.......................................... 30 mg Les produits décrits ci-dessus dans l'exemple 4 peuvent être utilisés dans une thérapie d'urgence contre les pathologies du système nerveux central. Plus spécifiquement, on peut utiliser ces formulations de façon aiguë dans la cérébropathie anoxique et dans les syndromes traumatiques extrapyramidaux, la démence présénile et sénile aussi bien..DTD: que dans l'encéphalopathie métabolique.

EXEMPLE 5

Exemples de compositions pharmaceutiques orales a) Chaque cachet de gélatine contient: composition de phospholipides BC-PS............... 133 mg 30. huile végétale.................................... 270 mg cire d'abeille.................................... 1 mg b) Chaque capsule de gélatine contient: composition de phospholipides BC-PS............ 332,5 mg huile végétale.................................... mg 35. cire d'abeille.................................... mg c) Chaque pillule contient: À composition de phospholipides BC-PS............ 66,5 mgmannitol.......................................... 100 mg

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cellulose microcristalline........................ 25 mg amidon...........

............................... 5 mg saccharose...........................DTD: ............. 30 mg laque............................................. 5 mg d) Chaque opercule contient: composition de phospholipides BC-PS.......DTD: ........ 199,5 mg mannitol.......................................... 100 mg lactose........................................... 100 mg Les produits décrits ci-dessus dans l'exemple 5 peuvent être utilisés dans des thérapies chroniques. Spécifiquement, ces formulations..DTD: peuvent être utilisées pour traiter l'involution des syndromes spycho-

moteurs séniles, la cérébropathie vasculaire chronique, l'encéphalo-

pathie métabolique des personnes &gés, la démence sénile et les syn-

dromes préséniles consécutifs à un traumatisme, la cérébropathie post-

anoxique et les syndromes extrapyramidaux.

Bien que les compositions pharmaceutiques ci-dessus ait été décrites sous des formes physiques particulières avec des véhicules particuliers, il est évident que les compositions pharmaceutiques selon l'invention peuvent être formulées sous d'autres formes physiques

standards avec d'autres véhicules, excipients et diluants connus pharma-

*ceutiquement acceptables.

D'après ce qui est exposé ci-dessus, on peut voir que la présente

invention procure une composition pharmaceutique utile pour le traite-

ment des désordres du système nerveux central qui sont spécifiquement liés au vieillissement du cerveau. Les compositions selon l'invention présentent une bonne activité sur le système nerveux central tout en ne présentant pas en même temps d'effets secondaires indésirables en ce qui concerne la coagulation du sang. Cette découverte est particulièrement importante pour procurer un moyen de traitement des désordres du système nerveux central avec des compositions de phospholipides puisque des compositions ne contenant que de la phosphatidylsérine présente cet effet indésirable sur la coagulation du sang au point de n'être pas utilisable comme composition pharmaceutique. La demanderesse a cependant

surmonté ce problème en découvrant qu'une composition binaire particu-

lière de phosphatidylsérine avec la phosphatidyléthanolamine pouvait procurer une composition pharmaceutique active et utilisable sans présenter les effets secondaires indésirables que l'on rencontre par

l'administration de la phosphatidylsérine seule.

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Claims

REVENDICATIONS

1.- Procédé de préparation d'une composition de phospholipides consistant à: - extraire la phosphatidylsérine du tissus du cerveau des animaux; extraire la phosphatidyléthanolamine du tissu du cerveaux des animaux; associer une quantité spécifiée de l'extrait de phosphatidylsérine

avec une quantité spécifiée de l'extrait de phosphatidyléthanola-

mine dans un solvant approprié; - agiter la solution qui en résulte; filtrer la solution agitée; et - précipiter la solution filtrée pour obtenir ainsi une composition de phospholipides comprenant de la phosphatidylsérine et de la phosphatidyléthanolamine.

2.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que ce

solvant approprié est un mélange 2/1 de méthanol/chloroforme.

3.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que cette

précipitation est conduite dans l'acétone.

4.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'environ 3 parties de phosphatidylsérine sont associées à environ 1 partie de

phosphatidyléthanolamine pour obtenir ainsi une composition de phospho-

lipides comprenant environ 75% en poids de phosphatidylsérine et environ

% en poids de phosphatidyléthanolamine.

5.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'environ 65% en poids de phosphatidylsérine sont associés à environ 35% en poids de phosphatidyléthanolamine pour obtenir ainsi une composition de phospholipides comprenant environ 65% en poids de phosphatidylsérine et

environ 35% en poids de phosphatidyléthanolamine.

6.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'environ -60% en poids de phosphatidylsérine sont associés à environ 40% en poids de phosphatidyléthanolamine pour obtenir ainsi une composition de phospholipides comprenant environ 60% en poids de phosphatidylsérine et

environ 40% en poids de phosphatidyléthanolamine.

7.- Procédé de préparation d'une composition de phospholipides consistant à: - extraire de la phosphatidylsérine du tissu du cerveau des animaux; extraite de la phosphatidyléthanolamine du tissu du cerveau des animaux;

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- combiner environ 3 parties d'extrait de phosphatidylsérine avec environ 1 partie d'extrait de phosphatidyléthanolamine dans un mélange de méthanol/chloroforme (2/1); - agiter la solution qui en résulte; - filtrer la solution agitée; et - précipiter la solution filtrée dans l'acétone pour obtenir ainsi une composition de phospholipides comprenant environ 75% en poids

de phosphatidylsérine et environ 25% en poids de phosphatidylétha-

nolamine.

8.- Procédé de préparation d'une composition de phospholipides consistant a: - extraire la phosphatidylsérine du tissu du cerveau des animaux; - extraire la phosphatidyléthanolamine du tissu du cerveau des animaux; - combiner environ 65% en poids d'extrait de phosphatidylsêrine avec environ 35% en poids d'extrait de phosphatidyléthanolamine dans un mélange méthanol/chloroforme (2/1); - agiter la solution qui en résulte; filtrer la solution agitée; et - précipiter la solution filtrée dans l'acétone pour obtenir ainsi une composition de phospholipides comprenant environ 65% en poids

de phosphatidylsérine et environ 35% en poids de phosphatidylétha-

nolamine.

9.- Procédé de préparation d'une composition de phospholipides consistant à: - extraire la phosphatidylsérine du tissu du cerveau des animaux; - extraire la phosphatidyléthanolamine du tissu du cerveau des animaux; - combiner environ 3 parties d'extrait de phosphatidylsérine avec environ 2 parties d'extrait de phosphatidyléthanolamine dans un solvant approprié; - agiter la solution qui en résulte; - filtrer la solution agitée; et - précipiter la solution filtrée dans l'acétone pour obtenir ainsi une composition de phospholipides comprenant environ 60% en poids

de phosphatidylsérine et environ 40% en poids de phosphatidylétha-

nolamine.

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10.- Composition pharmaceutique comprenant de la phosphatidylsérine

et de la phosphatidyléthanolamine en même temps qu'un véhicule pharma-

ceutiquement acceptable, un diluant ou un excipient, dans laquelle la phosphatidylsérine est présente en quantité d'environ 60 à 75% en poids et la phosphatidyléthanolamine est présente en quantité d'environ 40 à

% en poids.

11.- Composition pharmaceutique selon la revendication 10, caracté-

risée en ce que la phosphatidylsérine est présente en quantité d'environ

% en poids, 65% en poids ou 60% en poids, et la phosphatidyléthanola-

mine est présente en quantité d'environ 25% en poids, 35% en poids ou

% en poids respectivement.