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B D'INVENTION
COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES ET PROCEDE DE PREPARATION DE COMPOSITIONS DE PHOSPHATIDYLSERINE UTILISABLES AU TRAITEMENT DE DESORDRES DU SYSTME NERVEUX CENTRAL SANS EXERCER D'EFFETS
SUR LA COAGULATION DU SANG
Au nom de :
FIDIA SpA
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COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES ET PROCEDE DE PREPARATION DE COMPOSITIONS DE PHOSPHATIDYLSERINE UTILISABLES AU TRAITEMENT DE DESORDRES DU SYSTEME
NERVEUX CENTRAL SANS EXERCER D'EFFETS SUR LA COAGULATION DU SANG
La présente invention concerne une composition de phospholipides qui est administrée par diverses voies pour Ie traitement de désordres du système nerveux central, notamment ceux liés au vieillissement du cerveau.
Les phospholipides représentent une classe importante de lipides caractérisée par une portion glycérol qui lie Ie phosphate et les acides gras. La formule générale des phospholipides est la suivante :
EMI2.1
o N c 0 p (D c POLAIRE GROUPE DE TETTE \I /"-C < C t' Pd c u > 1 l 0 c c- - REGION C=0 - HYDROCARBONEE OU,
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EMI3.1
x 0 o ! TE O POLAIRE 1 2 POLAIRE 1 2 CH.---CH--CH I 2 I 2 0 0 t' C=O C=O () CH NON POLAIRE r z < i dans laquelle :
X représente un groupe de tête polaire particulier caractérisant les différentes classes de phospholipides. (voir Lenhinger,
Biochemistry, 2ème édition, page 228).
11 est entendu que le rôle des phospholipides dans la coagulation du sang est crucial mais qu'il n'est pas encore tout à fait bien éclairci à 1'heure actuelle. Certes au niveau moléculaire, 1'interaction des phospholipides pendant ce procédé avec les facteurs de la coagulation doit encore être expliquée.
Lorsque 1'on décrit les voies de la coagulation intrinsèque et extrinsèque, i1 est possible d'observer que les phospholipides jouent un rôle clé dans la cascade de coagulation. En fait, les phospholipides constituent de 30 à 50% des préparations de thromboplastine brut et leur composition varie selon 1'origine de la préparation. La majeure partie est cependant constituée par la phosphatidylcholine (PC) et la
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phosphatidy1éthanolamine (PE) ta que des phospholipides chargés négativement tels que la phosphatidylsérine (PS) et Ie phosphatidylino-
EMI4.2
sitol (PI) en représentent une petite partie (Liu D. T. H. et coll.
Thromb. Res. 7 (1975) 213-221). Le groupe polaire du phospholipide joue un rôle essentiel dans la formation des complexes au cours de la coagulation (Otnaes A. B. et coll. Eur. J. Biochem. 27 (1972), 238-243 ; Nemerson Y. Adv. Exp. Med. Biol". 63 (1975) 245-253).
En considérant la spécificité de la tête polaire, on a observé qu'en recombinant l'apoprotéine du facteur du tissu avec la PE, l'activité thromboplastique était complètement restaurée (Nemerson Y, supra ; Liu D. T. H. et coll., supra). 11 s'avère que la PC est moins active tandis que d'autres fractions phospholipides et PE n'ont pas d'activité du tout, en dépit du fait qu'ils lient la fraction d'apoprotéine. Selon Wijngaard et coll. (biochem. Biophys. Acta 488 (1977), 161-171), des mélanges de lipides possédant des charges négatives modérées sont nécessaires pour une restauration complète de 1'activité de la thromboplastine.
Le rôle des phospholipides ajoutés de 1'extérieur n'est pas non plus complètement clair. 11 y a certes des indices dans la littérature que les préparations de phospholipide provenant du tissu cérébral, préparées par extraction au chloroforme et séchées dans 1'acétone agissent in vitro comme des coagulants forts (Bell, W. M. et coll., Nature 174 (1954), 880-881), tandis que des mélanges de phospholipides extraits du tissu cérébral avec un mélange chloroforme sur méthanol, ceci étant suivi d'une élimination des parties non lipidiques avec une solution saline, se sont avérés être virtuellement inactifs (Folch, H. et coll., J. Biol.
Chem. 226 (1957), 497-509). 11 est à noter que dans le premier cas, les protéines du tissu cérébral sont présentes tandis que dans le second cas, elles ont été éliminées par le processus de partition.
La composition et la pureté des phospholipides utilisés est encore Ie facteur fondamental dans la compréhension de leur rôle exact, si 1 Ion considère également le fait que différentes activités ont été indiquées pour les classes particulières individuelles de phospholipides. C'est cependant la corrélation entre la charge négative et 1'activité de coagulation qui rend la phosphatidylsérine particulièrement intéressante pour ces phénomènes. L'activité de la PS est contestée par certains auteurs prétendant en fait que la PS a une action catalytique
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(Marcus A. J. Adv. Lip. Res. 4 (966) 1-37), tandis que d'autres auteurs indiquent une activité inhibitrice de la PS (Turner D. L. et coll., J. Lip. Res. 5 (1964) 616-623) due à la formation de complexes inactifs.
Mustard et coll. indiquent également (Nature, 196 (1962) 1063-1065) une activité anticoagulante de la PS lorsqu'on 1'injecte in vivo à des chiens dans un intervalle de do sage compris entre 30 et 50 mg par kg. En outre, il a été indiqué que la PE présente une activité coagulante marquée (Rouser et coll., Biochem. Biophys. Acta 28 (1958) 71-80 ; Turner D. L. et coll., J. Lip. Res. 4 (1963) 52-56). L'activité d'un mélange d'au moins deux classes de phospholipides est cependant probablement plus intéressante que celles des classes uniques.
Quelques préparations ayant une activité considérable sont des compositions binaires : PE/PS (65/35 p/p), PC/PS (57/43 p/p), PC/PG (48/52 p/p) et PG/stéaroylamine (85/15 p/p) (Zwaal R. F. A. Biochem.
Biophys. Acta 515 (1978), 162-205).
Le mélange binaire de PS/PC en présence de calcium semble important dans la formation des complexes du chemin de la coagulation (Subbaiah E. V. et coll. Biochem. Biophys. Acta 444 (1976), 131-146).
Lorsque la PS constitue 25% du mélange avec d'autres phospholipides, elle s'avère être critique dans la détermination, dans cet intervalle, de 1'activité biologique maximum dans la conversion provoquée par la prothrombine et la thrombine (M. F. Lecompte et coll. J. Electro. Anal.
Chem. 104 (1979), 537-541).
11 est à noter que cette fraction phospholipidique, à savoir la phosphatidylsérine, est également intéressante pour d'autres activités biologiques et pharmacologiques.
En fait, toute une série d'implications de la phosphatidylsérine dans divers processus biologiques ont été indiquées dans la littérature.
En résumé, les implications biologiques de la PS dans les phénomènes physiologiques sont les suivantes : a) La PS restaure 1'activité de l'ATPase associée avec des membranes neuronales isolées (Wheeler et Whittam (1970), Nature 225,
449-450 ; Palatini et coll. (1977) Biochem. Biophys. Acta 466,
1-9). b) La PS stimule 1'activité de 1'enzyme tyrosine hydroxylase isolé (Lloyd et Kaufman (1974) Biochem. Biophys. Res. Comm. 59,
1262-1269 ; Raese et coll. (1976) Biochem. Pharmacol. 25,
2245-2250).
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c) Les liposomes de la PS induisent une fusion des cellules (Papahadjopoulos et collo, 1973) Biochem. Biophys. Acta 323,
23-42).
Outre les effets biochimiques observés, plusieurs recherches ont montré que le métabolisme cérébral était influencé par l'administration de PS in vivo ; 1'activité des systèmes dopaminergique et cholinergique est grandement affectée, probablement par une intervention sur les mécanismes présynaptiques régulant la libération de neurotransmetteurs.
Cette activité se reflète par des effets mesurable sur divers corrélas du comportement neuro-endocrinien et électrophysiologique.
En particulier, Bruni et collo (Nature 260 (1976) (5549), 331-333) ont indiqué un effet biologique significatif de la PS in vivo sur le métabolisme cérébral des hydrates de carbone, effet détecté par la mesure d'une augmentation de la concentration en glucose dans Ie sang cérébral. D'autres phospholipides se sont avérés incapables d'induire cet effet.
Cette activité cérébrale après injection in vivo de la PS est confirmée par Toffano et coll. (Life Sciences 23 (1978), 1093-1102) qui ont montré que dans les systèmes de neurotransmetteurs cérébraux, 1'injection intraveineuse (i. v. ) de PS augmente la vitesse de circulation de la norepinéphrine dans l'hypothalamus. Cette effet hypothalamique est accompagné par une augmentation de 1'affinité de la tyrosine hydroxylase pour son cofacteur stéridine synthétique (Toffano, Battistin,"Neurochemistry and Clinical Neurology" (1980), 205-214) et par une augmentation de la cAMP.
Ces effets sont liés à une augmentation de la production d'acétylcholine (ACh) par le cortex cérébral des rats anesthésiés à l'urethane (Casamenti et coll. J. Neurochem. 32 (1979), 529-533). Lorsque les niveaux d'ACh dans le cortex cérébral des rats sont mesurés, on trouve que la PS (30 mg/kg lip pendant 10 jours) opère une potentiation de l'effet de la scopolamine, drogue antimuscarinique (Mantovani et coll., Phospholipids in the Nervous System-Volume l (1981), 165-172).
L'effet de la PS sur les systèmes neurotransmetteurs cérébraux est prouvé par des corrélas neuro-endocriniens et électrophysiologiques et par ceux du comportement. Canonico et coll. (Neuroendocrinology 33 (1981), 358-362) décrit les effets de la PS sur la sécrétion de prolactine chez les rats. Par administration aiguë ou répétée, le médicament réduit les niveaux de prolactine dans le plasma pendant les différentes
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phases du rythme circadien et elle inhibe la montée en prolactine dans Ie plasma typique du pro-oestrus l'après-midi chez les rats femelles.
D'autre part, une série d'expériences (Mantovani et coll., supra ; Toffano et coll., New Trends in Nutrition Lipid Research, and Cardiovascular Diseases (1981), 91-99) a montré que la rupture typique du tracé de 1'EEG induite par la scopolamine, drogue anticholinergique, était efficacement contrée par administration préalable ou simultanée de PS.
Par la suite, Aporti et coll. (Res. Comm. Psycho. Psych. Behav. 7 (1982) (1), 131-143) ont étendu les études de 1'EEG par utilisation d'une analyse à 1'ordinateur de 1 lEEG enregistrée au moyen d'électrodes implantées dans la zone corticale et subcorticale de rats se déplaçant librement. Une administration aiguë de PS produit, au niveau cortical, une inversion des rapports existants avant l'administration de la drogue entre les amplitudes dans les hémisphères droit et gauche. L'effet devient plus prononcé au bout de 10 jours d'administration chronique.
Cet effet est corrélé avec un comportement typique d'instinct exploratoire, défini comme une alternance, présenté par des rats placés dans un environnement de labyrinthe en T. Ce comportement typique est également interrompu par la scopolamine, drogue anticholinergique. Pepeu et coll. (aging Br. Dementia 13 (1980), 271-274) indiquent que l'admi- nistration de PS par voie intraparentérale (i. p. ) efface complètement 1'effet de rupture de la scopolamine sur 1'alternance spontanée dans un labyrinthe en T.
Plus récemment, Toffano et coll./1nternational Multidisciplinar Seminar :"Gebral Pathology in 01d Age", deuxième édition (sous presse en 1983) /ont étudié les données pharmacologiques obtenues sur des animaux âgés en vue d'évaluer l'effet protecteur de la PS sur les paramètres qui subissent des changements avec l'âge. L'injection de PS influence favorablement divers paramètres des membranes biochimiques, y compris la stimulation de la (Na+K+)-ATPase, et la lutte contre les altérations liées à 1'âge du rapport molaire du cholestérol aux phospholipides. En même temps, la PS empêche la diminution dépendante de 1'âge de la dopamine et de ces catabolites dans les zones limbiques et striées du rat.
En outre, une série d'études a confirmé un effet favorable de la PS sur les processus d'apprentissage et de mémorisation chez les rats ágés. Des effets positifs de la PS sur les fonctions cognitives des rats
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ages sont indiqués par Drago et Scapagnini, Neurobiology of Aging 2 (1981), 209-213.
En résumé, les données pharmacologiques de la littérature indiquent à 1'évidence que l'administration à 1'homme de compositions pharmaceutiques contenant de la PS d'origine cérébrale et ayant un degré de pureté élevé peut représenter un moyen thérapeutique valable pour le traitement du vieillissement du cerveau lorsque l'on reconnaît une diminution du contrôle dopaminergique. D'autre part, les données indiquant les effets de la PS sur la coagulation du sang suggèrent qu'il y a un risque important d'hémorragies lorsque 1 Ion administre la PS. Ceci est un risque particulièrement désavantageux chez les patients âgés qui souffrent déjà souvent de complications vasculaires.
La présente invention concerne fondamentalement l'identification de nouvelles compositions de phospholipides au moyen desquelles on puisse administrer aux êtres humains, par diverses voies, une phosphatidylsérine de pureté élevée ayant une activité pharmacologique sur le système nerveux sans porter atteinte de façon indésirable à la coagula- tion du sang. Le profil pharmacologique spécifique de ces compositions consiste en une modulation du contrôle dopaminergique.
Ces compositions sont donc particulièrement utiles pour le traitement de pathologie se caractérisant par une diminution du contrôle dopaminergique ; à savoir : involution des syndromes psycho-moteurs séniles, cérébropathie vasculaire, composant psychique prévalent et chronique du vieillard, des démences séniles et syndromes préséniles consécutifs à un traumatisme, cérébropathie post-anoxique et syndromes extra-pyramidaux.
Dans le traitement de ces diverses pathologies, il est nécessaire d'éliminer tout effet de coagulation du sang secondaire qui peut appa- raitre lors de 1'administration des compositions. 11 est en fait bien connu que des complications vasculaires apparaissent souvent chez les personnes âgées de telle sorte que les effets de coagulation du sang doivent être considérés dans le traitement de ces pathologies. Les compositions de phospholipides selon l'invention comprennent de la phosphatidylsérine extraite du tissu du cerveau des animaux. Ces compositions particulières ne présentent pas d'effets indésirables sur la coagulation du sang.
Des études détaillées ont été menées sur l'effet sur la coagulation d'un mélange de phospholipides extraits et purifiés à partir du cortex du cerveau des bovins. Ces études ont également déterminé les
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effets de la phosphatidylsérine purifiée et des mélanges binaires de phosphatidylsérine avec d'autres classes uniques de phospholipides (PE, PC et sphingomyéline). Cette recherche a été conduite avec le but d'obtenir une préparation de phosphatidylsérine pharmacologiquement active présentant des effets secondaires indésirables sur la coagulation du sang. Une évaluation spécifique a été faite des effets sur 1'activité du système nerveux central, de l'administration in vivo de la composition de phospholipides en même temps que des effets secondaires pouvant se produire sur la coagulation du sang.
Méthodes :
L'activité des divers produits est évaluée in vivo par injection intraveineuse de diverses préparations de phospholipides sur des lapins de Nouvelle Zélande pesant de 1,5 à 2 kg, à des dosages allant de 0,5 mg/kg à 50 mg/kg. Les phospholipides sont placés dans un véhicule de Tris. HCl (50 mM, pH 7,4) et on les traite par voie sonique jusqu'a ce que la suspension devienne claire (toutes traces possibles de titane provenant de l'appareil de traitement sonique sont éliminées par centrifugation). Après traitement, le sang est prélevé sur les animaux et on teste sa coagulation.
Les déterminations sont faites en utilisant des ensembles de coagulation du sang fournis par biochémia (Boheringer, Mannhein) avec un appareil Digiclot Elvi 818 sur du plasma obtenu par centrifugation à une vitesse de 4 200 tr/mn pendant 10 minutes de sang dans du citrate de sodium à 3,8% à un rapport de 1/9. Le paramètre considéré est le temps de prothrombine selon Quick.
L'activité pharmacologique des compositions individuelles de produits testés est évaluée en mesurant le glucose cérébral de la souris dans le même intervalle de dosage, en considérant ce paramètre comme une indication de l'activation cérébrale. Pour cette expérience, on traite des souris suisses pesant entre 20 et 25 grammes que t'on sacrifie 30 minutes après l'injection. Les niveaux de glucose sont mesurés comme décrit par Bruni et coll., dans Nature 260 (1976), 331-333.
Les compositions individuelles testées sont les suivantes : (1) phosphatidylsérine (PS) provenant du cortex du cerveau de bovins
EMI9.1
ayant un titre supérieur à 90% ; (2) phosphatidylsérine + phosphatidyléthanolamine (BC-PS) comportant
75% de PS et 25% de PE p/p ; (3) phosphatidylsérine + phosphatidyléthanolamine (BC-PS1) avec 65% de
PS et 35% de PE p/p ;
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(4) phosphatidylsérine + phosphatidyléthanolamine (BC-PS2) avec 60% de
PS et 40% de PE p/p ; (5) phosphatidylsérine + phosphatidyléthanolamine (BC-PS3) avec 50% de
PS et 50% de PE p/p ; (6) phosphatidylsérine + phosphatidyléthanolamine (BC-PS4) avec 40% de
PS et 60% de PE p/p ; (7) phosphatidylsérine + phosphatidyléthanolamine (BC-PS5) avec 25% de
PS et 75% de PE p/p ;
(8) phosphatidylsérine + phosphatidyléthanolamine (BC-PS6) avec 85% de
PS et 15% de PE p/p ; (9) phosphatidylsérine + phosphatidylcholine (BC-PS7) avec 75% de PS et 25% de PC p/p ; (10) phosphatidylsérine + sphingomyeline (BC-PS8) avec 75% de PS et 25% de SF p/p.
Résultats
Les résultats des tests décrits ci-dessus sont résumés ci-dessous dans les tableaux 1 et 2.
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TABLEAU 1 Activité de diverses compositions de phospholipides sur la coagulation du sang et sur le glucose du cerveau enregistrée 30 minutes après traitement in vivo à une dose de 20 mg/kg i. v. de différents melanges.
EMI11.1
<tb>
<tb>
Pourcentage
<tb> de <SEP> phospho-Dosage <SEP> (mg/kg) <SEP> a <SEP>
<tb> lipides <SEP> dans <SEP> Dose <SEP> totale <SEP> Dose <SEP> de <SEP> Temps <SEP> de <SEP> Glucose
<tb> Ie <SEP> mélange <SEP> du <SEP> mélange <SEP> PS <SEP> dans <SEP> le <SEP> prothrombine <SEP> cérébral
<tb> de <SEP> composi-de <SEP> composi-composé <SEP> selon <SEP> Quick <SEP> (umole/
<tb> tions <SEP> tions <SEP> (sec.) <SEP> g)
<tb> Contrôles <SEP> - <SEP> - <SEP> 7, <SEP> 43 <SEP> + <SEP> 0, <SEP> 07 <SEP> 1,3
<tb> PS <SEP> 20 <SEP> 20 <SEP> 12, <SEP> 34 <SEP> + <SEP> 0, <SEP> 8 <SEP> 4,1
<tb> BC-PS <SEP> (PS <SEP> 75
<tb> PE <SEP> 25) <SEP> 20 <SEP> 15 <SEP> 7, <SEP> 36 <SEP> + <SEP> 0, <SEP> 14 <SEP> 3,7
<tb> BC-PS1 <SEP> (PS <SEP> 65
<tb> PE <SEP> 35) <SEP> 20 <SEP> 13 <SEP> 7,5 <SEP> + <SEP> 0, <SEP> 3 <SEP> 3,5
<tb> BC-PS2 <SEP> (PS <SEP> 60
<tb> PE <SEP> 40) <SEP> 20 <SEP> 12 <SEP> 7,
8 <SEP> + <SEP> 0, <SEP> 5 <SEP> 3,2
<tb> BC-PS3 <SEP> (PS <SEP> 50
<tb> PE <SEP> 50) <SEP> 20 <SEP> 10 <SEP> 8,5 <SEP> + <SEP> 0, <SEP> 2 <SEP> 3,0
<tb> BC-PS4 <SEP> (PS <SEP> 40
<tb> PE <SEP> 60) <SEP> 20 <SEP> 8 <SEP> 6,7 <SEP> + <SEP> 0, <SEP> 9 <SEP> 2,5
<tb> BC-PS5 <SEP> (PS <SEP> 25
<tb> PE <SEP> 75) <SEP> 20 <SEP> 5 <SEP> 6,5 <SEP> 0, <SEP> 2 <SEP> 1,9
<tb> BC-PS6 <SEP> (PS <SEP> 85
<tb> PE <SEP> 15) <SEP> 20 <SEP> 17 <SEP> 11,3 <SEP> ¯ <SEP> 1, <SEP> 2 <SEP> 2,9
<tb> BC-PS7 <SEP> (PS <SEP> 75
<tb> PC <SEP> 25) <SEP> 20 <SEP> 15 <SEP> 9,3 <SEP> ¯ <SEP> 0, <SEP> 7 <SEP> 3,0
<tb> BC-PS8 <SEP> (PS <SEP> 75
<tb> SF <SEP> 25) <SEP> 20 <SEP> 15 <SEP> 14,7 <SEP> ¯ <SEP> 0, <SEP> 9 <SEP> 3, <SEP> 1
<tb>
a le dosage du melange de composition est maintenu au taux constant de 20 mg/kg.
De ce fait, la dose de PS varie selon le pourcentage correspondant de PS dans chaque mélange.
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TABLEAU 2 Activité de diverses compositions de phospholipides sur la coagulation du sang et sur le glucose du cerveau enregistrée 30 minutes après traitement in vivo à une dose de 20 mg/kg i. v. de PS.
EMI12.1
<tb>
<tb>
Dosage <SEP> (mg/kg) <SEP> a
<tb> Dose <SEP> de <SEP> Dose <SEP> totale <SEP> Temps <SEP> de <SEP> Glucose
<tb> PS <SEP> dans <SEP> le <SEP> du <SEP> mélange <SEP> prothrombine <SEP> cérébral <SEP>
<tb> composé <SEP> des <SEP> composi- <SEP> (sec. <SEP> ) <SEP> (umole/
<tb> tions <SEP> g) <SEP>
<tb> Contrôle <SEP> - <SEP> - <SEP> 7, <SEP> 432 <SEP> :
<SEP> 0,07 <SEP> 1,3
<tb> PS <SEP> 20 <SEP> 20 <SEP> 12, <SEP> 34 <SEP> + <SEP> 0, <SEP> 8 <SEP> 4,1
<tb> BC-PS <SEP> 20 <SEP> 27 <SEP> 7,5 <SEP> ¯ <SEP> 0, <SEP> 20 <SEP> 4,3
<tb> BC-PS1 <SEP> 20 <SEP> 30,7 <SEP> 8,0 <SEP> ¯ <SEP> 0, <SEP> 2 <SEP> 4,1
<tb> BC-PS2 <SEP> 20 <SEP> 33,3 <SEP> 8,2 <SEP> + <SEP> 0, <SEP> 7 <SEP> 3,8
<tb> BC-PS3 <SEP> 20 <SEP> 40 <SEP> 9,5 <SEP> ¯ <SEP> 0, <SEP> 3 <SEP> 3,8
<tb> BC-PS4 <SEP> 20 <SEP> 50 <SEP> 4,2 <SEP> ¯ <SEP> 9, <SEP> 3 <SEP> 4,0
<tb> BC-PS5 <SEP> 20 <SEP> 80 <SEP> 3,5 <SEP> + <SEP> 0, <SEP> 4 <SEP> 3,3
<tb> BC-PS6 <SEP> 20 <SEP> 23,5 <SEP> 13,3 <SEP> ¯ <SEP> 0, <SEP> 2 <SEP> 3,6
<tb> BC-PSy <SEP> 20 <SEP> 27 <SEP> 11,5 <SEP> + <SEP> 0, <SEP> 3 <SEP> 3,8
<tb> BC-PS8 <SEP> 20 <SEP> 27 <SEP> 12,3 <SEP> + <SEP> 0, <SEP> 5 <SEP> 3,
9
<tb>
a La dose de PS est maintenue au taux constant de 20 mg/kg. En vue d'obtenir ce taux de dosage constant de PS, le taux de dosage du mélange de compositions totales varie selon le pourcentage corres- pondant de PS dans chaque mélange.
A partir des résultats mesurant les paramètres de coagulation, il est possible d'observer une activité anticoagulante nette après administration de phosphatidylsérine pure in vivo, ce qui confirme les observations préalables de Mustard et coll./Nature 196, pages 1063-1065 (1965) /.
Dans le cas de mélanges binaires de PS et d'autres phospholipides, 1'activité anticoagulante varie avec les taux divers selon le type particulier de phospholipide associé à la PS. Mais dans le cas de BC-PS, le temps de prothrombine mesure est sensiblement le même que celui des contrôles, ceci indiquant que cette composition n'a pas d'effets indé- sirables sur la coagulation du sang.
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Une analyse supplémentaire des résultats indiqués sur les tableaux 1 et 2 montre que la phosphatidylsérine est la fraction la plus active dans 1'augmentation des niveaux de glucose dans le cerveau. Cet effet peut également être observé dans Ie cas des mélanges binaires de PS avec d'autres phospholipides de facon semblable à celle de la PS pure. En considérant les données du tableau 2 avec des doses constantes de 20 mg/kg i. v. de PS pure, on peut voir que l'activité cérébrale est favorisée pour tous les mélanges binaires de phospholipides par comparaison avec les contrôles. Cependant, l'activiste sur la coagulation du sang est extrêmement diverse en fonction de la composition binaire particuliere, certaines compositions raccourcissant et d'autres allongeant les temps mesurés par comparaison avec les contrôles.
11 est donc particulièrement important de noter que l'utilisation d'un mélange binaire de PS et de PE (notamment 75% de PS + 25% de PE) ne présente pas d'activités indésirables sur la coagulation tandis qu'elle a une bonne activité sur le système nerveux central (CNS). C'est-a-dire que la composition de PS comprenant un mélange de phospholipides présente une bonne activité CNS telle qu'on la mesure à partir du niveau de glucose dans le cerveau mais cette composition présente également des effets secondaires indésirables de coagulation du sang comme le montre le temps de prothrombine allongé.
D'autre part, les compositions BC-PS4 et BC-PSr administrées à des niveaux de doses constantes du mélange binaire, présentent des temps de prothrombine diminués dans un inter- valle plus acceptable comme 1'indique le tableau 1. Cependant, ces compositions (notamment BC-PS5) ne présentent pas une activité CNS suffisamment désirable comme le montrent les faibles niveaux de glucose dans le cerveau.
En outre, en administrant des doses constantes de PS dans un mélange binaire, les compositions de BC-PS4 et BC-PS5 présentent aussi des temps de prothrombine notablement diminués de telle sorte que les temps de prothrombine faibles de la composition BC-PSr reprêsentent en fait un effet secondaire indésirable en occasionnant une coagulation du sang à un taux qui est trop rapide. Cet effet peut conduire à un risque de thrombose chez des patients traités avec ces melanges.
Les fractions de PS avec PC, et PS avec SF sont également indésirables dans la mesure oü ils présentent de prothrombine augmentés.
11 a cependant été déterminé par la demanderesse que les compositions de BC-PS, BC-PS. et BC-PS2 représentent des compositions pharmaceutiques utiles. Ces trois compositions présentent toutes un taux de
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prothrombine acceptable sensiblement réduit par rapport au temps de prothrombine de la PS et comparable à ceux des contrôles tout en présentant en même temps une bonne activité CNS, ce que montrent les niveaux de glucose dans Ie cerveau.
On a cependant déterminé en accord avec la présente invention qu'une composition de phospholipide préférée présentant une bonne activité CNS et ne présentant pas d'effets indésirables de la coagulation du sang était obtenue en préparant un mélange de 60 à 75% de PS avec 40 à 25% de PE. De préférence, la composition contient environ 75% de PS et 25% de PE. Les exemples suivants décrivent des compositions pharmaceutiques spécifiques préparées selon la présente invention, utilisables pour Ie traitement de divers désordres du système nerveux central par modulation du contrôle dopaminergique.
EXEMPLE 1 Préparation de la composition de phospholipide BC-PS
1.000 g de phosphatidylsérine (PS) extraite du tissu nerveux de bovins ayant un titre supérieur à 95% sont dissous dans 5 litres d'un mélange méthanol/chloroforme (2/1). 333 9 de phosphatidyléthanolamine (PE) ayant un titre supérieure à 80% sont ajoutés à la solution.
La solution est maintenue sous agitation pendant 15 minutes, filtrée à travers un filtre à membrane stérilisante et précipitée dans 5 volumes d'acétone avec une agitation convenable.
Le précipité est séparé et séché sous vide à faible température.
On obtient de cette façon environ 1.250 g d'une composition BC-PS.
EXEMPLE 2 Préparation de la composition de phospholipide BC-PS1
De la même manière que dans t'exemple l, 1.000 g de PS ayant un titre supérieur à 95% sont dissous dans 5 litres d'un mélange méthanol/chloroforme (2/1) et 538 9 de PE ayant un titre supérieur à 80% sont ajoutés à la solution.
Après agitation, filtration, précipitation et séchage, on obtient environ 1.442 9 d'une composition de BC-PS1.
EXEMPLE 3 Préparation de la composition de phospholipide BC-PS2
De la même façon que dans 1'exemple 1, 1.000 g de PS ayant un titre supérieur à 95% sont dissous dans 5 litres d'un mélange de méthanol/chloroforme (2/1) et 666 g de PE ayant un titre supérieur à 80% sont ajoutés à la solution.
<Desc/Clms Page number 15>
Après agitation, filtration, précipitation et séchage, on obtient environ 1.562 9 d'une composition de BC-PS2.
EXEMPLE 4 Exemples de compositions pharmaceutiques injectables a) une fiole de 2 ml contient :
EMI15.1
<tb>
<tb> . <SEP> liposoms <SEP> de <SEP> composition <SEP> de <SEP> phospholipides <SEP> BC-PS.. <SEP> 66,5 <SEP> mg
<tb> . <SEP> phosphate <SEP> de <SEP> sodium <SEP> monobasique <SEP> 2,4 <SEP> mg
<tb> . <SEP> phosphate <SEP> de <SEP> sodium <SEP> dibasique <SEP> 2,26 <SEP> mg
<tb> . <SEP> eau <SEP> bi-distillée <SEP> apyrogène <SEP> qs <SEP> 2 <SEP> ml
<tb>
b) une fiole de 5 ml contient :
EMI15.2
<tb>
<tb> . <SEP> liposoms <SEP> de <SEP> composition <SEP> de <SEP> phospholipides <SEP> BC-PS.. <SEP> 332,5 <SEP> mg
<tb> . <SEP> phosphate <SEP> de <SEP> sodium <SEP> monobasique <SEP> 5,35 <SEP> mg
<tb> . <SEP> phosphate <SEP> de <SEP> sodium <SEP> dibasique <SEP> 6,65 <SEP> mg
<tb> . <SEP> eau <SEP> bi-distillée <SEP> apyrogène <SEP> qs <SEP> 5 <SEP> ml
<tb>
c) une fiole de 3 ml contient :
EMI15.3
<tb>
<tb> . <SEP> liposoms <SEP> de <SEP> composition <SEP> de <SEP> phospholipides <SEP> BC-PS.. <SEP> 199,5 <SEP> mg
<tb> . <SEP> phosphate <SEP> de <SEP> sodium <SEP> monobasique <SEP> 3,21 <SEP> mg
<tb> . <SEP> phosphate <SEP> de <SEP> sodium <SEP> dibasique <SEP> 3,39 <SEP> mg
<tb> . <SEP> mannitol <SEP> 30 <SEP> mg
<tb>
Les produits décrits ci-dessus dans 1'exemple 4 peuvent être utilisés dans une thérapie d'urgence contre les pathologies du système nerveux central. Plus spécifiquement, on peut utiliser ces formulations de façon aiguë dans la cérébropathie anoxique et dans les syndromes traumatiques extrapyramidaux, la démence présénile et sénile aussi bien que dans l'encéphalopathie métabolique.
EXEMPLE 5 Exemples de compositions pharmaceutiques orales a) Chaque cachet de gélatine contient :
EMI15.4
<tb>
<tb> . <SEP> composition <SEP> de <SEP> phospholipides <SEP> BC-PS............... <SEP> 133 <SEP> mg
<tb> . <SEP> huile <SEP> végétale <SEP> 270 <SEP> mg
<tb> . <SEP> cire <SEP> d'abeille <SEP> 1 <SEP> mg
<tb>
b) Chaque capsule de gélatine contient :
EMI15.5
<tb>
<tb> . <SEP> composition <SEP> de <SEP> phospholipides <SEP> BC-PS............... <SEP> 332,5 <SEP> mg
<tb> . <SEP> huile <SEP> végétale <SEP> mg
<tb> . <SEP> cire <SEP> d'abeille <SEP> mg
<tb>
c) Chaque pillule contient :
EMI15.6
<tb>
<tb> . <SEP> composition <SEP> de <SEP> phospholipides <SEP> BC-PS............... <SEP> 66,5 <SEP> mg
<tb> . <SEP> mannitol <SEP> 100 <SEP> mg
<tb>
<Desc/Clms Page number 16>
EMI16.1
<tb>
<tb> . <SEP> cellulose <SEP> microcristalline <SEP> 25 <SEP> mg
<tb> . <SEP> amidon <SEP> 5 <SEP> mg
<tb> . <SEP> saccharose <SEP> 30 <SEP> mg
<tb> . <SEP> laque <SEP> 5 <SEP> mg
<tb>
d) Chaque opercule contient :
EMI16.2
<tb>
<tb> . <SEP> composition <SEP> de <SEP> phospholipides <SEP> BC-PS............... <SEP> 199,5 <SEP> mg
<tb> . <SEP> mannitol <SEP> 100 <SEP> mg
<tb> . <SEP> lactose <SEP> 100 <SEP> mg
<tb>
Les produits décrits ci-dessus dans l'exemple 5 peuvent être utilisés dans des thérapies chroniques.
Spécifiquement, ces formulations peuvent être utilisées pour traiter 1'involution des syndromes spychomoteurs séniles, la cérébropathie vasculaire chronique, l'encéphalopathie métabolique des personnes âgés, la démence sénile et les syndromes préséniles consécutifs à un traumatisme, la cérébropathie postanoxique et les syndromes extrapyramidaux.
Bien que les compositions pharmaceutiques ci-dessus ait été décrites sous des formes physiques particulières avec des véhicules particuliers, il est évident que les compositions pharmaceutiques selon 1'invention peuvent être formulées sous d'autres formes physiques standards avec d'autres véhicules, excipients et diluants connus pharmaceutiquement acceptables.
D'après ce qui est exposé ci-dessus, on peut voir que la présente invention procure une composition pharmaceutique utile pour le traitement des désordres du système nerveux central qui sont spécifiquement liés au vieillissement du cerveau. Les compositions selon l'invention présentent une bonne activité sur le système nerveux central tout en ne présentant pas en même temps d'effets secondaires indésirables en ce qui concerne la coagulation du sang. Cette découverte est particulièrement importante pour procurer un moyen de traitement des désordres du système nerveux central avec des compositions de phospholipides puisque des compositions ne contenant que de la phosphatidylsérine présente cet effet indésirable sur la coagulation du sang au point de n'être pas utilisable comme composition pharmaceutique.
La demanderesse a cependant surmonté ce problème en découvrant qu'une composition binaire particu- lière de phosphatidylsérine avec la phosphatidyléthanolamine pouvait procurer une composition pharmaceutique active et utilisable sans présenter les effets secondaires indésirables que 1 Ion rencontre par l'administration de la phosphatidylsérine seule.