FI93741C - Menetelmä optisesti puhtaitten (2S,3S)- ja (2R,3R)-threo-alkyyli-2-hydroksi-3-(4-metoksifenyyli)-3-(2-X-fenyylitio)propionaattien tai vastaavien asyloitujen yhdisteiden valmistamiseksi - Google Patents
Menetelmä optisesti puhtaitten (2S,3S)- ja (2R,3R)-threo-alkyyli-2-hydroksi-3-(4-metoksifenyyli)-3-(2-X-fenyylitio)propionaattien tai vastaavien asyloitujen yhdisteiden valmistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI93741C FI93741C FI931298A FI931298A FI93741C FI 93741 C FI93741 C FI 93741C FI 931298 A FI931298 A FI 931298A FI 931298 A FI931298 A FI 931298A FI 93741 C FI93741 C FI 93741C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- compound
- methoxyphenyl
- phenylthio
- enzyme
- lipase
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
- C12P41/003—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions
- C12P41/004—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions by esterification of alcohol- or thiol groups in the enantiomers or the inverse reaction
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P11/00—Preparation of sulfur-containing organic compounds
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
, 93741
MENETELMÄ OPTISESTI PUHTAITTEN (2S,3S)- JA (2R,3R)-fAn?o-ALKYYU-2-HYDROKSI-3-(4-METOKSIFENYYLI)“3-(2-X-FENYYLmO)PROPIONAATnEN TAI VASTAAVIEN ASYLOITUJEN YHDISTEIDEN VALMISTAMISEKSI
5 Tämän keksinnön kohteena on uusi menetelmä optisesti puhtaitten (2S,3S)- ja (2R,3R)· /Areo-alkyyli-2-hydroksi-3-(4-metoksifenyyli)-3-(2-X-fenyylitio)propionaattien 1 (Rl - CHj, CHjCHj jne) tai vastaavien asyloitujen yhdisteiden 2 valmistamiseksi.
Näitä yhdisteitä voidaan käyttää arvokkaina välituotteina diltiatseemin 3 synteesissä. Diltiatseemin absoluuttinen konfiguraatio on (2S,3S). Kliinisessä käytössä diltiatseemi 10 on yksi lupaavimmista kalsiumkanavainhibiittoreista.
CH30 ""b.. $/- c: X = NHCOCH3 s^CO.R, 15 1 x * X = NHCOCF3 ΟΓ e: X = NHCO;CH3 f: X = NHCO,C(CH3)3 2
1 g: X = NHCHO
^v^CCHj * OÄ r N(CH3)i 3 25 Patenttijulkaisuissa DE 3,337,176 ja USP 4,908,469 on kuvattu (+)-2-hydroksi-3-(4- • · · ·’ metoksifenyyli-3-(2-aminofenyylitio)propionihapon ja propionaattien sekä julkaisussa
Cheat. Pharm. Bull. 37 (1989) 320-3208 vastaavan (2-nitrofenyyiitio)propionihapon enannomeerien erottaminen perustuen diastereomeeristen suolojen muodostumiseen optisesti aktiivisten aminohappojen (L-lysiinin) tai viinihapon kanssa.
Toistaiseksi ainoa biokatalyyttinen menetelmä (2S,3S)-iAreo-alkyyli-2-hydroksi-3-(4- 30 n 93741 metoksifenyyli)-3-(2-X-fenyylitio)propionaatticn valmistamiseksi kuvaa raseemisen r/ireo-metyyii-2-asyvlioksi-3-(4-mctoksiienyyli)-3-(2-nitrofenyylitio)propionaatin2a lipaasin katalysoiman hydroivysin orgaanisessa liuottimessa, joka on kyllästetty vedellä [Akita et ai. Chem. Pharrrt. Bull. 37 (1989) 2876-2878: JP-tiivistelmä 2190195 5 26.7.1990].
Tämän keksinnön kohteena on raseemisen r/treo-aikyyli-2-hydroksi-3-{4-metoksifenyyii)-3-(2-X-fenyvlitio)propionaattien 1 resoluutio yksinkertaisella entsymaattisella menetelmällä. Menetelmä perustuu yhdisteen I asemassa 2 olevan 1 o sekundäärisen hydroksvyliryhmän biokataivyttiseen asylointireaktioon vedettömissä orgaanisissa liuottimissa. Biokatalvsaattoreina testattiin erilaisia kaupallisia lipaaseja joko sellaisenaan tai immobilisoituina kiinteisiin kantaja-aineisiin (Celite ja Chromosorb). Testatuista iipaaseista (Mucor miehei (Biocatalysts), Candida lypolytica (Biocatalysts), Candida cylindracea (Sigma), Candida cylindracea (AY 30, Amano), Aspergillus niger (AP-6. Amano) ja Pseudomonas cepacia (lipaasi PS, Amano),
Amanon lipaasi PS soveltuu tarkoitukseen parhaiten. Useimmissa tapauksissa se toimii käytännössä enantiospestfisesn. ts. reaktio pysähtyy 50 %:n konversioon ja resoluution tuotteet (raseemisen seoksen reagoimaton enantiomeeri (25.35)-1 ja reaktiotuote (2R.2R)-2) voidaan eristää iähes 100 rc:n saannolla optisesti puhtaina. Entsyymin 20 immobiiisointi kiinteisiin kantajiin usein parantaa entsyymin enantioselektiivisyyttä ja stabiiliutta [Bianchi et ai. J. Org. Chem. 53 (1988) 5531-5534]. Kuvatussa resoluutiossa sekä käsittelemätön että immobilisoitu lipaasi PS toimivat käytännössä enantiospesifisesti. Immobilisoimaila lipaasi PS piimaajohdannaisiin (Celite tai Chromosorb! sen aktiivisuus kasvaa moninkertaisesti verrattuna käsittelemättömän 25 entsyymin aktiivisuuteen, ja entsyymin aktiivisuus kasvaa edelleen sokerin läsnäollessa.
·* Myös entsyymin aktiivisuus immobilisoituna säilyy paremmin uudelleenkäytössä.
Liuottimena voidaan käyttää erilaisia orgaanisia liuottimia. Koska entsyymit proteiineina eivät liukene orgaanisiin liuottimiin, on erityisesti huolehdittava siitä, että 33 substraatit ja tuotteet liukenevat valittuun liuottimeen.
Kuvatun menetelmän etuna on yhdisteen 1 pysyvyys jatkorcaktioita silmälläpitäen.
3 93741
Reaktiot tapahtuvat hyvällä saannolla miedoissa olosuhteissa. Kuvatun menetelmän etuna yhdistettä 2a vastaavan raseemisen esterin hydrolyysiin (Akita et ai, Chem.
Pharm. Bull. 37 (1989) 2876-2878; JP-tiivistelmä 2190195 26.7-1990] verrattuna on huomattavasti suurempi reaktionopeus ja enantioseiektiivisvys. Etu on myös se, että 5 tarkasteltavassa menetelmässä alkoholinen HO-ryhmä voidaan biokatalyyttisesti asyloida sellaisenaan ja halutun (25,35)-enantiomeerin eristys reaktioseksesta tapahtuu yksinkertaisesti kiteyttämällä tai kromatokrafisesti; hydrolvysissä alkoholinen HO-ryhmä on asvloitava kemiallisesti ennen biokatalyyttistä resoluutiota, ja haluttu enantiomeeri saadaan öljymäisenä esterinä, jonka eristys on suoritettava 10 kromatografisesti. Kuvatun menetelmän etuna on myös se, että resoluutio perustuu rasemaatin "väärän" enantiomeerin selektiiviseen reaktioon akiraalisen substraatin kanssa eikä diastereomeerien muodostukseen. Diastereomeerien muodostuksen kaltainen kemiallinen resoluutio edellyttää optisesti puhtaan yhdisteen (esim. L-lysiini) saatavuutta, diastercomeerin purkua ja esim. vapautuvan L-lysiinin eristämistä ja 15 kierrätystä resoluutiosta toiseen. Reaktiossa asyloitumatonta yhdisteen 1 (25,35)- enamiomeeria voidaan käyttää (25.35)-ds-diltiatseemin valmistamiseksi jäljempänä kuvatulla tavalla.
Keksinnönmukaiscile menetelmälle on tunnusomaista, että annetaan kaavan 1 mukaisen 20 raseemisen yhdisteen.
·· CH-0 ' S C 0 , R , »: 0" jossa X on NO,. NH:. NHCOCH,. NHCOCF,, NHCOXH,. NHCO:C(CH?)s tai NHCHO ja R, on alkyvli (CH-,, CH:CH, jne), toisen enantiomeerin reagoida sopivan 30 asvlointircagenssin kanssa käsittelemättömän kaupallisen entsyymin tai kiinteään kantajaan immobilisoidun entsyymin läsnäollessa 2U °C:n ja 60 °C:n välisessä 4 93741 lämpötilassa orgaanisessa liuottimcssa. jolloin saadaan kaavan 2 mukaista asyloitua (2fl.3/?)-r/jreo-alkyyii-2-asyyiioksi-3-(4-metoksifenyyii)-3-(2-X-fenyylitio)- propionaattia.
5 ch3o
^3} 0 C 0 R
/-S. „ 2 S C 0 2 R i & 10 joka erotetaan reagoimattomasta enantiomeerista (25.35)-! kromatografisesti tai käyttämällä fraktiokiteytystä dietyyiieettcnstä tai tolueenista.
Enantiomeerista (25,35)-1 saadaan lääkeaineena arvokasta diltiatseemia laktonisoimalla suojarvhmien poiston (ja nitroryhmän pelkistyksen, jos X = NO,) jälkeen saatava 15 (25.35)-happo 4.
C H , 0 Ö ..
S \o,H
20 T vietnamin 5a aminoaikyiointi suontetaan käynämäilä liuottimena esimerkiksi tolueenin ja iV-mervyiipyrroiidin-2-onin seosta ja emäksenä kaliumkarbonaattia. Näin saatu aminoaikylointivälituote 5b asyloidaan etikkahappoanhydridin avulla, jolloin saatava diltiatscemi 3 kiteytetään hydrokloridinaan etanolista.
25 ^^.ociu
5a: Y=H
5b: Y = CH2CH,N(CH3)2 Y7 0 5 93741
Keksinnön mukaisella menetelmällä voidaan valmistaa stereokemiallisesti puhtaat yhdisteet (25,35)-1 käyttämällä lipaasin spesifisyyttä asyloitaessa vastaavat (2R,3R)~ enantiomeent orgaanisissa liuottimissa. Yhdisteen la tapauksessa tiofenolirenkaan asemassa 2 oleva N03-ryhmä on pelkistettävä NH2-rvhmäksi diltiatseemin synteesiä 5 varten. Yhdisteen Ib tapauksessa entsymaattisen asyloinnin rinnalla tapahtuu aina jonkinverran tiofenolirenkaan NH3-ryhmän asyloitumista ei-entsymaattisesti. Siksi lopputulos tuotteen laadun kannalta on yksiselitteisempi, jos ko. NH3-rvhmä suojataan ennen resoluutiota sopivalla suojarvhmällä. Aminorvhmän suojaus (yhdisteitten lc-g valmistus) ja suojarvhmän poisto resoluution jälkeen tapahtuvat tunnettuja menetelmiä 1 o käyttäen.
Keksinnön mukaisessa menetelmässä asvlointireagenssina voidaan käyttää periaatteessa mitä tahansa asvlointireagenssia, joka on riittävän tehokas steerisesti estyneen sekundäärisen alkoholin 1 asylointiin siten, että reaktio tapahtuu kohtuullisessa ajassa.
15 Edellytyksenä on myös. että asylointireagenssin vaikutuksesta transeströintireaktion tasapainoasema on mahdollisimman täydellisesti tuotteitten puolella. Sopivia asvlointireagensseja ovat happoanhvdridit, oksiimiesterit. vinvyliesterit sekä aktivoidut esterit, kuten 2.2.2-trifluorietyyliasetaatti. Joitakin asvlointireagensseja. kuten vinvyliestereitä. voidaan käyttää myös liuottimena. Muita sopivia liuottimia ovat 2ö erityisesti dietyvlieetteri ja tolueeni. koska tällöin reagoimaton (25,35)-1 voidaan seoksen konsentroinnin jälkeen eristää fraktiokiteytvksellä. kun entsyymi on ensin poistettu suodattamalla reaktioseoksesta.
Keksintöä valaistaan seuraavilla esimerkeillä 25
Esimerkki 1.
• —-
Lipaasi PS:n spesifisvvs ia raseemiscn alkoholin la-g asvlointi Menetelmä A
1 ml orgaanista liuotinta, joka on 0.05 M jonkin raseemiscn alkoholin la-g (R, = CH3 30 tai CH2CH,) suhteen ja 0.2 M vinyyli- tai asetonioksiimiasetaatin tai etikkahappo- tai voihappoanhvdridin suhteen, lisätään rcaktioastiaan. jossa on tunnettu määrä kaupallisesti saatavaa lipaasi PS:ää. Entsyymin pitoisuus on esitetty taulukossa 1.
6 93741
Reaktioseosta ravistellaan tehokkaasti ravistelijassa taulukossa esitetyssä lämpötilassa. Reaktion edistymistä seurataan ottamalla reaktioseoksesta näyte sopivin aikavälein, poistamalla entsyymi suodattamalla ja injisoimalla näyte nestekromatografiin (kolonni: C-18, ajoliuos: MeOH/H20 70/30). Reaktiot pysähtyvät n. 50 %:n konversioon.
^ Reagoimattoman (2S,3S)-enantiomeerin enantiomeeriylimäärä määritetään HPLC-menetelmällä (kolonni: chiralcel OG; ajoliuos: heksaani/isopropyylialkoholi 70/30) suoraan reaktioseoksesta otetusta näytteestä: yhdisteiden la, b ja c tapauksissa enantiomeerit eivät eroa täydellisesti HPLC-olosuhteissa. Siksi e.e.-arvot on määritetty myös Eu(hfc)3:n läsnäollessa ‘H NMR-spektroskopiaa käyttäen.
10
Menetelmä B
Käytetty entsyymi immobilisoidaan kiinteään kantajaan ennen käyttöä. Tätä varten 0,4 g lipaasi PS:ää liuotetaan jäähauteella 15 ml:aan 20mM TRIS.HCl-puskuria (pH 8,0).
15 Tähän lisätään 240 mg sakkaroosia ja 4 g piimaapohjaista kantaja-ainetta (Celite (Aldrich) tai Chromosorb 101 (80-100 mesh. Sigma)). Sekoitetaan 10-15 min.
. · Entsyymipreparaatin annetaan kuivua kellonlasilla huoneenlämmössä.
Yhdisteitten 1 a-g (R, = CH3) asylointi vinyyliasetaatilla suoritetaan kuten menetelmässä A paitsi, että entsyymipreparaattia punnitaan sellainen määrä, että sen sisältämä lipaasi 20 PS:n pitoisuus vastaa taulukossa 1 annettuja pitoisuuksia.
: Tulokset menetelmistä A ja B on esitetty Taulukossa 1.
Il 7 93741
TauJukko i.
Asyloinu- Aimo PS Konver* e.e.* 1% -Xflt,»CH.l Liuotin reawrna g/L Aita/d sso/% (25.351 5 -NO, THF (22*0 (CH,C0),0 100 2 50 >95 -NO, THF (22*0 (PtC0),0 100 4 50 >95 -NO, THF (22*0 CH,CO,CH-CH, 100 7 48 >95 -NH, Et.O (22*0 CH,C0,CH-CH, 25 3 50 - -NH, Εί,Ο (20*0 CH,CO,-N-C(CH,l, 25 2 46 TO -NH/ Εί,Ο (22*0 CH,CO,-N-C(CH,l, 5 2 51 >95 -ΝΗΛ Et,0122*0 CH,CO,C(CH,)*CH, 5 2 50 - -NHC0,CH, Εί,Ο (22*0 CH,CO,CH«CH, 5 2 50 >95 •NHCO,CH, Εί,Ο (44*01 CH,CO,CH«CH, 5 1 50 >95 •NHCO,CH, CH,CO,CH-CH, (44*01 CH,CO,CH-CH, 115 2 49 95 15 -NHCO,CH, CH,C0,CH-CH,/ Et,0 CH,CO,CH«CH, 12.5 2 51 98 (l/l) (22*0 -NHC0,CH,· Et,0(22*a CH,CO,CH«CH, 5 l 50 >95 -NHCO.CH,* Εί,0(44*σ CH,CO,CH=CH, : l 50 >95 -NHCOjCH, lolueem |53*C1 CH,CO,CH«CH, 5 3 50 >95 20 -NHCO,CH,· Εί,Ο (22*0 CH,CO,CH=CH, 100 1 50 >95 •NHCO,CH,' i-Pr,0 (44*C1 CH,CO,CH=-CH, 100 ! 49 >95 -NHCOjCH,* tolueem (44*01 CH,CO,CH«CH, 100 4 51 >95 -NHCO,C(CH,l, C1 reumaa icuvatuua olotiunaig -NHCOCH, Εί,Ο (44*C1 CH,C0,CH=CH, 5 2 50 >95 25 -NHCOCH, CH,CO,CH*CH, (44*0 CH,C0,CH-CH, 50 2 49 - -NHCOCH. tolueem (53ΤΓ1 CH,CO,CH»CH, 12.5 3 50 >95 ,., -NHCOCH,* Εί,Ο (44*0 CH,CO,CH*CH, 2 1 46 - -NHCOCH,* Εί,Ο (44*05 CH,CO,CH=CH, 2 1 52 >95 -NHCOCF, Εί,Ο (44*σ CH,CO,CH=CH, 12J 4 50 >95 -NHCHO_CH.CO.CH-CH._CH,CO.CH»CH, 15_2_50_-_ * Enayymi immooiiisoim cluoaiosoroun: * entsyymi immooilisoitu celueen: - R,»CH,CH,; *e.e.> 95%. vain yka enanoomeen 30 havaiiuviua.
t 8 93741
Esimerkki 2.
(2S.35)-la:n ia (21?.3,R)-2a:n valmistus 1,1 g (0,0030 mol) raseemista yhdistettä la (R[ = CH,) ja 0,80 ml (0,0085 mol) etikkahappoanhydridiä liuotettuna 60 ml:aan tetrahydrofuraania lisätään reaktioastiaan, 5 jossa on 6 g entsyymiä (lipaasi PS). Reaktioseosta ravistellaan huoneenlämmössä kaksi vuorokautta, jolloin reaktio on pysähtynyt. Entsyymi suodatetaan erilleen ja tetrahvdrofuraani haihdutetaan pois. Jäännös liuotettuna dikloorimetaaniin pestään kylläisellä NaHC03-liuoksella ja vedellä. (lS.35)-la ja (2P,3P)-2a (R = CH3) erotetaan flash-kromatografisesti käyttäen eluenttina seosta CHXlVheksaani/AcOEt 10 (63/31/6). Tuloksena on 0,56 g (0,0015 moi) reagoimatonta lähtöainetta la, joka esimerkissä 1 esitetyn HPLC-menetelmän mukaan on optisesti puhdas tuote ja 0,63 g (0.0015 mol) yhdistettä 2a (R = CH?). Kumpikin yhdiste on optisesti puhdas (e.e.
»95%) myös !H NMR-spektroskooppisen määrityksen mukaan (la, siirtoreagenssina Eu(hfc)3: C02Me, d. δ =3,84 ja 3,94) 15
Edellä valmistetun optisesti puhtaan yhdisteen la absoluuttisen konfiguraation määrittämiseksi se hydrolysoidaan vastaavaksi hapoksi. 0,39 g edellä eristettyä la:ta liuotetaan 15 ml:aan metanolin ja NaOH-liuoksen (0,5 M) 2/1 seosta. Kun hydrolyysi on mennyt loppuun, muodostunut happo saostetaan tekemällä reaktioseos happamaksi 20 , suolahapolla. Tuloksena olevan hapon sp. on 113-114 °C ja (aJu25 = +112 (c 1, CHC13).
* · .
Vastaavat kiijallisuusarvot hapon (TS.35)-enantiomeerille ovat sp. = 111 °C ja [ajo25 = + 121 (c 1. CHC1,) [Senuma et ai Chem. Pharm. Bull. 37 (1989) 3204].
Esimerkki 3.
25 :· Ib:n resoluutio • 1
Entsyymi immobilisoidaan Celitcen. kuten esimerkissä 1 on esitetty. 1,33 g (0,0040 mol) yhdistettä Ib (R( = CH?) ja 0,92 mi (0,0080 mol) asetonioksiimiasetaattia liuotettuna 40 mhaan dietyylicettcriä lisätään reaktioastiaan. jossa on 1,25 g Celiteen immobilisoitua entsyymiä (lipaasi PS:n osuus 0.2 g). Reaktio pysäytetään kahden 30 vuorokauden kuluttua 52 %:n konversiossa. Entsyymi suodatetaan erilleen ja reagoimaton lähtöaine Ib sekä reaktiotuote 2b (R = CH?) erotetaan flash- 9 93741 kromatografisesti käyttäen eluenttina seosta CH2Cl:/tolueeni/AcOEt (1/1/1). Tuloksena on 0,59 g (0,0018 mol) lb:n valkoisia kiteitä, joiden [ajo20 = +294 (c 0,5, MeOH) ja sp. 107-109 °C. Ominaiskierron perusteella yhdiste on optisesti puhdas (25,35)-Ib (US patentissa 4,908,469 yhdisteen ominaiskierroksi lämpötilassa 22 °C on ilmoitettu +294 5 (c 0,5, MeOH) ja sp. 108-109 °C).
Tuloksena on myös 0,68 g (0,0018 mol) kellertävää amorfista yhdistettä (2Ä,3Ä)-2b (R = CH?), jonka [ajo20 = -258 (c 0,5, MeOH).
Esimerkki 4.
•j- o lc:n resoluutio ia (25,351- ia (2R,3R)-lb:n valmistus 6,0 g (0,016 mol) raseemista yhdistettä le (R, = CH3) ja 5,5 g (0,064 mol) vinvyliasetaattia liuotettuna 320 ml:aan dietyvlieetteriä lisätään reaktioastiaan. jossa on 1,6 g entsyymiä (lipaasi PS). Reaktioseosta ravistellaan tai sekoitetaan reaktiolämpötilassa (44 °C), kunnes reaktio pysähtyy 50 %:n konversiossa (48 h).
15 Reaktion edistymistä seurataan HPLC-menetelmää (kolonni: C-18; ajoliuos:
Me0H/H20 70/30) käyttäen. Entsyymi suodatetaan ja pestään dietyylieetterillä. jonka jälkeen entsyymi voidaan käyttää uudelleen. Eetteriliuokset yhdistetään ja konsentroidaan. (25.35)-le kiteytyy reaktioseoksesta -4 °C:ssa. Raakatuote uudelleenkitevtetään diisopropyylieetteristä. jolloin saadaan 2,61 g (0,0070 mol. 87 % 20 teoreettisesta saannosta) valkeita kiteitä, joiden [a^25 = +159 (c 1, CHiClj) ja sp. 128- # . 129 °C. Käyttämällä flash-kromatografiaa (25.35)-lc:n saanto on 50 % ts. 100 % resoluution teoreettisesta saannosta.
Jäljelle jääneestä reaktioseoksesta erotetaan flash-kromatografisesti 3,41 g (0,0080 mol.
25 100 % teoreettisesta saannosta) asetyioitua reaktiotuotetta (2R,3J?)-2c käyttämällä eluenttina tolueeni/AcOEt/CH:CL (1/1/1). Tuote on kellertävä öljy, jonka [a^25 = -175 (c 1, CH2C1>).
0.5 g (0,0013 mol) optisesti puhdasta (+)-(25,35)-lc:tä refluksoidaan 18 h metanolissa 30 (30 ml) rikkihapon (0,0052 mol) läsnäollessa. Reaktioseos neutraloidaan natriumvetykarbonaatilla ja metanoii haihdutetaan. Tuote uudelleenkitevtetään dietyyliccttcristä. Tuotteeksi saadaan 0.42 g (0,0013 moi. 98 %) (25,35)-lb. jonka 10 93741 [a]D20 = +296 (c 0,5, MeOH) ja sp. 108-110 °C. US patentissa 4,908,469 saman esterin ominaiskierroksi lämpötilassa 22 °C on ilmoitettu +294 (c 0,5, MeOH). Vastaavasti refluksoitaessa 1,1 g (0,0026 mol) (-)-(2R,3R)-2c (R = CH3) metanolissa (50 ml) saadaan 0,811 g (0,0024 mol, 94 %) yhdistettä (2R,3Ä)-lb, jonka [aJu20 = -306 (c 0,5, 5 MeOH) ja sp. 108-109 °C. Ominaiskiertojen perusteella resoluutiotuotteet ovat optisesti puhtaita.
Esimerkki 5.
(25.35) -le:n ja (2R,3R)-2e:n valmistus ^ 0 Menetelmä A. 4,0 g (0,010 mol) raseemista yhdistettä le (Rj = CH3) ja 3,5 g (0,0041 mol) vinyvliasetaattia liuotettuna 205 ml:aan dietyylieetteriä lisätään reaktioastiaan, jossa on 1,03 g entsyymiä (lipaasi PS). Reaktioseosta sekoitetaan tehokkaasti ravistelemalla huoneenlämpötilassa. Nestekromatografiaa käyttäen (kolonni: C-18; ajoliuos: MeOH/H20 80/20) voidaan havaita reaktion menneen loppuun (50 % 15 konversiossa) kahdessa vuorokaudessa, jolloin HPLC-määrityksen mukaan (kolonni: Chiralcel OG; ajoliuos: heksaani/isopropyylialkoholi 70/30) reagoimaton enantiomeeri (25.35) -le on optisesti puhdas (e.e. 100%). Entsyymi suodatetaan pois ja pestään uudelleenkäyttöä varten. Saadut eetteriliuokset yhdistetään, konsentroidaan ja (25,35)-le:n annetaan kiteytyä lämpötilassa 20 -4 °C. Raakatuote uudelleenkitevtetään di-isopropvylieetteristä. Saanto on 1,39 g (70 % teoreettisesta saannosta) valkoisia kiteitä, joiden [aju25 = +207 (c 1, CH^Cl-,) ja sp. 119- « 121 °C. HPLC-määrityksen mukaan tuote oli optisesti puhdas.
Jäljelle jääneestä reaktioseoksesta erotetaan flash-kromatografisesti 2,15 g (0,005 mol,
25 100 %) öljymäistä tuotetta (2R.3R)-2t (R = CH3) käyttämällä eluenttina tolueeni/ELO
. (2/1). Tuotteen [aJjj25 = -193 (c 1, CH2CL).
Reaktioseoksesta suodatetun entsyymin uudelleenkäytön vaikutus reaktioajassa 2 vrk on esitetty taulukossa 2. Kussakin tapauksessa reaktio ctenee 50 %:n konversioon ja 30 (25,35)-le saadaan optisesti puhtaana, kun reaktioaikaa lisätään.
11 93741
Taulukko 2.
Käyttökerta_Konversio/%_t.t.(2S3S)/%_ 1 50 »95 5 2 41 94 3_40_80_
Menetelmä B. Entsyymi immobilisoidaan Celiteen, kuten esimerkissä 1 on esitetty.
4,64 g (0,0119 mol) raseemista yhdistettä le (Rj = CH?) ja 4,1 g (0,047 mol) 10 vinyyliasetaattia liuotettuna 240 ml:aan dietyylieetteriä lisätään reaktioastiaan, jossa on 5,51 g edellä valmistettua Celiteen immobilisoitua entsyymiä (lipaasi PS:n osuus 0,475 g). Reaktio pysähtyy 50 %:n konversioon vuorokaudessa. Reaktioseos työstetään kuten kohdassa A. (2S,35)-le:n saanto on 1,90 g (82 %) valkoisia kiteitä, joiden [a^25 = +212 (c 1, CHXUJ ja sp. 118-119 °C. (2R,3i?)-2e:n (R = CH3) saanto on 2,46 g (93 15 %) ja [a]/ = -199 (c 1, CHXk).
Reaktioseoksesta suodatetun entsvymipreparaatin uudelleenkäytön vaikutus reaktioajassa 1 vrk on esitetty taulukossa 3.
20 Taulukko 3.
Käyttökerta_Konversio/%_e.e.(25.35)/%_ 1 48 98 2 51 »95 25 3_50_»95_
Claims (6)
1. Menetelmä kaavojen 1 ja 2 mukaisten (2S,3S)-/Areo-alkyyli-2- hydroksi-3- (4-metoksi-fenyyli)-3-(2-X-fenyylitio)propionaattien ja (2R,3R)-i/ireo-alkyyli-2-asyylioksi-3-(4-metoksifenyyli)-3-(2-X-fenyylitio)propionaattien valmistamiseksi,
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lipaasi on Pseudomonas cepacian lipaasi. 20
3. Jonkin patenttivaatimuksen 1-2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että entsyymi käytetään eristettynä pulverina tai se on immobilisoitu piimaapohjaiseen kantaja- * aineeseen.
4. Jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että asylointireagenssina käytetään happoanhydridejä, vinyyliestereitä tai asetonioksiimi-asetaattia. 93741
5. Jonkin patenttivaatimuksen 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että liuottimena käytetään dietyylieetteriä, tolueenia, tetrahydrofuraania, di-isopropyylieetteriä tai vinyyliasetaattia.
5 CHjO CH30 CH,0 o,. TL k,*· . ^ r· SC02Rj S COjR, S COjR, σ' σ' σ 10 raseeminen 1 1 2 (2S,3S) (2R,3R) tunnettu siitä, että asyloidaan kaavan 1 mukaisen raseemisen yhdisteen (2R,3R)-enantiomeeri, jossa X on N02, NH;, NHCOCH3, NHCOCF3, NHCO,CH3, NHC02(CH3)3 tai NHCHO ja R, on alkyyliiyhmä, lipaasin katalysoimana vedettömässä orgaanisessa 15 liuottimessa ja asyloinnin jälkeen kaavan 1 mukainen yhdiste erotetaan kaavan 2 mukaisesta yhdisteestä.
6. Jokin patenttivaatimuksen 1-5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että yhdiste (2S,3S)-rAreo-alkyyli-2-hydroksi-3-(4-metoksifenyyli)-3-(2-X-fenyylitio)propionaat-ti erotetaan yhdisteestä (2R,3R)-fAreo-alkyyli-2-asyylioksi-3-(4-metoksifenyyli)-3-(2-X-fenyylitio)propionaatin fraktiokiteytyksellä tai kromatografisesti. « >4 93741
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI931298A FI93741C (fi) | 1993-03-24 | 1993-03-24 | Menetelmä optisesti puhtaitten (2S,3S)- ja (2R,3R)-threo-alkyyli-2-hydroksi-3-(4-metoksifenyyli)-3-(2-X-fenyylitio)propionaattien tai vastaavien asyloitujen yhdisteiden valmistamiseksi |
| HU9400762A HU216797B (hu) | 1993-03-24 | 1994-03-12 | Eljárás a (2S, 3S)-treo-2-hidroxi-3-(4-metoxi-fenil)-3-(fenil-tio)- és (2R, 3R)-treo-2-alkanoil-oxi-3-(4-metoxi-fenil)-3-(fenil-tio)-propionát-származékok előállítására |
| IL109041A IL109041A (en) | 1993-03-24 | 1994-03-18 | Method for the production of S3, S2 (thio-alkyl-2-hydroxy-3-) 4-methoxyphenyl (-3-phenylthiopropionates and) R3, R2 (-thrio-alkyl |
| US08/215,529 US5514589A (en) | 1993-03-24 | 1994-03-22 | Chiral resolution of an intermediate in diltiazem synthesis using lipase PS immobilized with sucrose |
| EP94104620A EP0617130A3 (en) | 1993-03-24 | 1994-03-23 | Method for solving racemic mixtures. |
| CA002119670A CA2119670A1 (en) | 1993-03-24 | 1994-03-23 | Chiral resolution of an intermediate in diltiazem synthesis using lipase |
| JP6054169A JP2612671B2 (ja) | 1993-03-24 | 1994-03-24 | 光学活性なプロピオン酸エステルの製造法 |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI931298 | 1993-03-24 | ||
| FI931298A FI93741C (fi) | 1993-03-24 | 1993-03-24 | Menetelmä optisesti puhtaitten (2S,3S)- ja (2R,3R)-threo-alkyyli-2-hydroksi-3-(4-metoksifenyyli)-3-(2-X-fenyylitio)propionaattien tai vastaavien asyloitujen yhdisteiden valmistamiseksi |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI931298A0 FI931298A0 (fi) | 1993-03-24 |
| FI931298A FI931298A (fi) | 1994-09-25 |
| FI93741B FI93741B (fi) | 1995-02-15 |
| FI93741C true FI93741C (fi) | 1995-05-26 |
Family
ID=8537616
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI931298A FI93741C (fi) | 1993-03-24 | 1993-03-24 | Menetelmä optisesti puhtaitten (2S,3S)- ja (2R,3R)-threo-alkyyli-2-hydroksi-3-(4-metoksifenyyli)-3-(2-X-fenyylitio)propionaattien tai vastaavien asyloitujen yhdisteiden valmistamiseksi |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5514589A (fi) |
| EP (1) | EP0617130A3 (fi) |
| JP (1) | JP2612671B2 (fi) |
| CA (1) | CA2119670A1 (fi) |
| FI (1) | FI93741C (fi) |
| HU (1) | HU216797B (fi) |
| IL (1) | IL109041A (fi) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FI97725C (fi) * | 1995-02-17 | 1997-02-10 | Orion Yhtymae Oy | Menetelmä diltiatseemin valmistamiseksi |
| IT1295376B1 (it) * | 1997-10-22 | 1999-05-12 | Zambon Spa | Processo per il riciclo di un sottoprodotto della sintesi del diltiazem |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1152721B (it) * | 1982-10-15 | 1987-01-07 | Luso Farmaco Inst | Risoluzione ottica dell'acido dl-alfa-2-idrossi-3-(4-metossifenil)-3-(2-amminofeniltio)propionico |
| JPS6032775A (ja) * | 1983-07-30 | 1985-02-19 | Daikin Ind Ltd | 含フッ素ベンゾジアゼピン類 |
| US4908469A (en) * | 1988-05-18 | 1990-03-13 | Marion Laboratories, Inc. | 2-Hydroxy-propanoic acid acyclic alkyl esters for benzothiazepines |
| EP0342904A3 (en) * | 1988-05-18 | 1991-01-30 | MARION LABORATORIES, INC. (a Delaware corporation) | 2-hydroxy-3-(4-methoxyphenyl)-3-(2-aminophenylthio)propionic acid, 8'-phenylmenthyl ester, especially for diltiazem |
| IT1226300B (it) * | 1988-07-26 | 1990-12-27 | Zambon Spa | Processo per la preparazione di intermedi per la sintesi del diltiazem. |
| JPH02190195A (ja) * | 1989-01-19 | 1990-07-26 | Rikagaku Kenkyusho | 光学活性プロピオン酸エステル類化合物の製法 |
| IT1232306B (it) * | 1989-07-27 | 1992-01-28 | Zambon Spa | Processo di risoluzione di intermedi utili per la preparazione del diltiazem |
| US5210030A (en) * | 1990-06-25 | 1993-05-11 | Merck & Co., Inc. | Process for selectively acylating immunomycin |
| FR2672600B1 (fr) * | 1991-02-08 | 1994-10-14 | Synthelabo | Procede de preparation du (-)-(2r,3s)-2,3-epoxy-3-(4-methoxyphenyl) propionate de methyle. |
-
1993
- 1993-03-24 FI FI931298A patent/FI93741C/fi active
-
1994
- 1994-03-12 HU HU9400762A patent/HU216797B/hu not_active IP Right Cessation
- 1994-03-18 IL IL109041A patent/IL109041A/en not_active IP Right Cessation
- 1994-03-22 US US08/215,529 patent/US5514589A/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-03-23 CA CA002119670A patent/CA2119670A1/en not_active Abandoned
- 1994-03-23 EP EP94104620A patent/EP0617130A3/en not_active Ceased
- 1994-03-24 JP JP6054169A patent/JP2612671B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5514589A (en) | 1996-05-07 |
| FI931298A (fi) | 1994-09-25 |
| HUT70752A (en) | 1995-10-30 |
| FI931298A0 (fi) | 1993-03-24 |
| HU9400762D0 (en) | 1994-06-28 |
| HU216797B (hu) | 1999-08-30 |
| JP2612671B2 (ja) | 1997-05-21 |
| FI93741B (fi) | 1995-02-15 |
| CA2119670A1 (en) | 1994-09-25 |
| JPH07303495A (ja) | 1995-11-21 |
| EP0617130A3 (en) | 1995-03-08 |
| IL109041A0 (en) | 1994-08-26 |
| IL109041A (en) | 1998-02-08 |
| EP0617130A2 (en) | 1994-09-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kanerva et al. | Enzymatic acylation in the resolution of methyl threo-2-hydroxy-3-(4-methoxyphenyl)-3-(2-X-phenylthio) propionates in organic solvents | |
| FI93741C (fi) | Menetelmä optisesti puhtaitten (2S,3S)- ja (2R,3R)-threo-alkyyli-2-hydroksi-3-(4-metoksifenyyli)-3-(2-X-fenyylitio)propionaattien tai vastaavien asyloitujen yhdisteiden valmistamiseksi | |
| EP0274277B1 (en) | A process for the enzymatic separation of the optical isomers of racemic oxazolidinonic derivatives | |
| SK140198A3 (en) | Enzymatic process for stereoselective preparation of therapeutic amides | |
| IT9020348A1 (it) | Processo per la preparazione di intermedi per la sintesi del diltiazem | |
| Jacobsen et al. | Lipase catalysed kinetic resolution of stiripentol | |
| AU2001230192B2 (en) | Method for the enzymatic resolution of the racemates of aminomethyl-aryl-cyclohexanol derivatives | |
| US20060148046A1 (en) | Enzymatic process for the preparation of an intermediate compound and use thereof for the synthesis of tamsulosin hydrochloride | |
| WO2004055195A1 (en) | Method for preparing a (r)- or (s)- form of n-(2,6-dimethyl phenyl) alanine and a counter enantiomeric form of n-(2,6-dimethyl phenyl) alanine ester thereto using enzyme | |
| ES2278305T3 (es) | Proceso para preparar las formas enantiomeras de derivados de 1,3-ciclohexanodiol en configuracion cis. | |
| WO2004003001A1 (en) | Process for the enzymatic resolution of 1,3-dioxolane-4-carboxylates | |
| US6387692B1 (en) | Process for the preparation of optically active amines | |
| IL174219A (en) | Process for the preparation of enantiopure intermediates using yeast cholesterase | |
| US4863859A (en) | Process for preparing optically active glycerol derivatives | |
| FI102974B (fi) | Menetelmä optisesti aktiivisten trans-3-fenyyliglysidihappoestereiden entsymaattiseksi valmistamiseksi | |
| US5332674A (en) | Process for preparing (R) and (S)-1,2-isopropylideneglycerol by crystallizing racemic benzoyl ester | |
| US6153414A (en) | Method for racemic biochemical resolution of CIS-and trans-pyprolopiperidine | |
| EP0239122B1 (en) | Process for the enzymatic resolution of racemic 2-amino-1-alkanols | |
| EP1427840B1 (fr) | Procede enzymatique pour la resolution enantiomerique d'acides amines | |
| SK69793A3 (en) | Enzymatic process of separation of racemic delta-valerolactones mixtures | |
| CZ291547B6 (cs) | Způsob výroby opticky aktivních aminů | |
| JPH0568588A (ja) | 光学活性３−フエニルグリシツド酸エステル類化合物の製法 | |
| WO2001074795A1 (fr) | Procede de fabrication d'esters d'acide amique | |
| CA2209228A1 (en) | Novel carbamate compounds containing thiocarbamoyl group and process forpreparing the same | |
| JP3010382B2 (ja) | （ｒ）−２−プロポキシベンゼン誘導体の製造法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application |