FI90826B - Menetelmä kudosliiman valmistamiseksi - Google Patents

Description

90826

Menetelmä kudosliiman valmistamiseksi Tämä keksintö koskee menetelmää kudosliiman valmistamiseksi, joka sisältää fibrinogeenia, tekijää XIII, tro-5 mbiini-inhibiittoria, protrombiinitekijöitä, kalsiumioneja ja mahdollisesti plasmiini-inhibiittoria. Umpeutuvassa haavassa luonnostaan esiintyvien kiihdyttimien vaikutuksesta vapautuu liiman protrombiinista kiinnitykseen välttämätöntä trombiinia.

10 Ihmis- tai eläinkudosten vammojen parantumisen yh teydessä tapahtuvien fysiologisten ilmiöiden seurauksena kertyy haavan alueelle fibriiniä. Tämän ilmiön laukaisee se, että vaurioituneista soluista virtaa tromboplastiinia, joka joutuessaan kosketukseen plasmatekijän VII kanssa 15 muodostaa tekijän X aktivaattoria, joka sitten yhdessä tekijän V sekä fosfolipidien ja kalsiumin kanssa muuttaa protrombiinin trombiiniksi. Trombiinin vaikutuksesta muodostuu puolestaan fibrinogeenista fibrinopeptidien A ja B lohkeamisen kautta fibriinimonomeereja, jotka aggregoitu-20 vat fibriinisäikeiksi, jotka tekijä XHIa, transglutami-naasi, joka aktivoituu samoin trombiinin vaikutuksesta, silloittaa kovalenttisesti isopeptidisidosten muodostumisen kautta. Tekijä XIII sitoo fibriinisäikeisiin inhibiittoria, ts alfa2-antiplasmiinia, joka suojaa säikeitä plas-25 miinin aiheuttamalta hajoamiselta.

Tämä verenvuodon tyrehtyminen ja haavan parantuminen vaatii substraattina toimivan fibrinogeenin lisäksi kahta entsyymiä: trombiinia ja tekijää XIII. Tällöin trombiinin tehtävänä on aktivoida, ts muuttaa reaktiokykyiseen 30 muotoon sekä fibrinogeeni että tekijä XIII. Tämä on f ibrinogeenin ollessa kyseessä fibriinimonomeeri ja tekijän XIII tapauksessa katalyyttisesti vaikuttava transgluta-minaasi (tekijä XHIa).

EP-julkaisussa 0 068 047 kuvataan rikastettua plas-35 mafraktiota, joka soveltuu haavojen sulkemisaineeksi ja 2 sisältää fibrinogeenia, fibrinolyysi-inhibiittoria ja trombiinia tai protombiinia vedettömässä järjestelmässä. Tätä sidonta-ainetta ei voida liuottaa veteen, vaan se voidaan levittää vain jauheena, mikä on käytön kannalta 5 epäkohta. Jos seos liuotetaan veteen, komponentit reagoivat keskenään ja muodostuu hyytelö.

Yksikomponenttiliimojen, joiden liuottimena käytetään vettä, ollessa kyseessä on vaikeaa yhdistää vaikuttavat aineet sillä tavalla ja sellaisissa suhteissa, ettei 10 liiman valmistuksen, uudelleenliuottamisen ja käyttövalmiina pitämisen aikana tapahdu ennenaikaista ja epätoivottavaa aktivoitumista ja että liimauskohtaan levittämisen jälkeen toisaalta saavutetaan tyydyttävä lujuus suhteellisen nopeasti.

15 Yllättävästi on löydetty edellytykset, jotka mah dollistavat fysiologisessa ympäristössä helposti käsiteltävän yksikomponenttiliiman toistettavissa olevan valmistuksen.

Edellytyksenä tällaisen yksikomponenttiliiman val-20 mistukselle ja käyttökelpoisuudelle ovat optimaalisesti toistensa suhteen säädetyt fibrinogeenin, plasmiini-inhi-biittorin, tekijän XIII, protrombiinikonsentraatin, trom-biini-inhibiittorin ja kalsiumionien pitoisuudet. Tämä koskee erityisesti trombiini-inhibiittorina toimivaa an-25 titrombiini-III:a ja kalsiumioneja, sillä kalsiumionit ovat välttämättömiä hyytymistekijöiden aktivoimiseksi. Suuret pitoisuudet nopeuttavat trombiinin muodostusta, pienet hidastavat sitä. Siksi kalsiumionien optimaalinen pitoisuus on välttämätöntä. Koska tällaisilla pitoisuuk-30 silla ei voida estää trombiinin muodostumista, on yhdistäminen trombiini-inhibiittoriin, edullisesti antitrombiini-IIIreen tarkoituksenmukaista. Tähän on syynä se, että liiman valmistuksen yhteydessä täytyy estää trombiinin muodostuminen ja toisaalta liiman tulee muodostaa nopeasti 35 luja hyytelö, kun liiman joutuessa kosketukseen haavan l! 3 90826 pintojen kanssa aiheutetaan hyytyminen, ts fibriinikalvon muodostuminen. Seurauksena on se, ettei voida ajatella trombiinia sisältävän yksikomponenttiliiman valmistusta ja käyttöä vesiliuoksessa, ja myös se, että myös protrombii-5 nia voidaan käyttää vain sellaisissa olosuhteissa, jotka estävät aktivoitumisen trombiiniksi valmistuksen ja käytön esivalmistelujen aikana. Tähän kuuluu tiettyjen trombiini-inhibiittorin ja kalsiumionien pitoisuuksien säätö.

Keksintö koskee siten menetelmää kudosliiman valio mistamiseksi, joka sisältää vesiliuoksessa fibrinogeenia, tekijää XIII, trombiiniinhibiittoria, protrombiinitekijöi-tä, kalsiumioneja ja mahdollisesti plasmiini-inhibiittoria ja menetelmälle on tunnusomaista, että mahdollisesti pastöroituun ja mahdollisesti suodattamalla steriloituun iso-15 toniseen vesiliuokseen, jonka pH on 7,5 ja joka sisältää vähintään 16 g/1 ihmisfibrinogeenia, 2 gramma-atomia kal-siumia/1 mol fibrinogeenia ja 1 - 6 g/1 L-arginiinimono-hydrokloridia, lisätään sen verran mahdollisesti pastöroitua liuosta, joka sisältää ihmisen tekijää XIII, ihmisal-20 bumiinia, protrombiinikonsentraattia, antitrombiini III:a ja aprotiniinia, sekä mahdollisesti Na-glutaminaattia ja isoleusiinia, että kylmäkuivattu liuos sisältää sekoitettuna takaisin 1/4:aan täyttötilavuudesta seuraavia aineita seuraavina pitoisuuksina: 25 65 - 115 mg/ml ihmisfibrinogeenia, 40 - 80 yksikköä/ml tekijää XIII, 4-40 mg/ml ihmisalbumiinia, 1-50 kansainvälistä yksikköä/ml PPSB:tä (protrombiinite-kijöitä) laskettuna tekijän II (protrombiinin) mukaan, 30 0,01 - 50 kansainvälistä yksikköä antitrombiini III:a, ja mahdollisesti 1-10 000 kallikreiini-inaktivaattoriyksikköä/ml aprotiniinia ja 0 - 20 g/1 Na-glutaminaattia ja 35 0-20 g/1 isoleusiinia.

4

Oli yllättävää, että fibrinogeenista yhdessä pro-trombiinin kanssa voidaan valmistaa niin kutsuttu hyperko-aguloituva liuos, joka sisältää lisäksi vielä kalsiumione-ja ja antitrombiini-III:a ja jota voidaan käyttää kudos-5 liimana.

US-patenttijulkaisuissa 4 414 976 ja 4 377 572 on kuvattu kudosliimoja. Näiden julkaisujen patenttivaatimuksissa 1 esitetyn kudosliiman ei kuitenkaan voida odottaa johtavan fibriinin muodostumiseen ja silloittumiseen nolo peudella, joka on tarpeen haavan hoitamiseksi. Tämän saavuttamiseksi täytyy käyttää trombiinia, mieluiten yhdistelmänä CaCl2:n kanssa. Kuten tämä keksintö osoittaa, trom-biinin sijasta sopii käytettäväksi protrombiini. Protrom-biini ei kuitenkaan ole edellä mainituissa patenttijul-15 kaisuissa kuvatun kudosliiman aineosa, eikä sitä myöskään voi muodostua kudosliimaan käytettäessä kylmäsaostettua tuotetta, koska julkaisuissa kuvatulla puskurikäsittelyllä poistetaan kaikki kylmässä liukenevat proteiinit, joihin myös protrombiini kuuluu.

20 Keksinnön mukaisesti valmistettu liima voidaan saattaa kiinteään muotoon, esimerkiksi kylmäkuivata, ja sekoittaa takaisin veteen. Se voi sisältää kaikki vaikuttavat aineet pastöroidussa muodossa ja on siten vapaa he-patiivin ja HTLV-III:n tartuttamisvaarasta.

25 Vaikuttavien aineiden, fibrinogeenin, plasmiiniin- hibiittorin, tekijän XIII, protrombiinitekijoiden, kal-siumionien ja antitrombiini-III:n, sekoitussuhde on sellainen, ettei tapahdu ennenaikaista aktivoitumista, mutta seos hyytyy spontaanisti ja muodostaa fibriiniä joutues-30 saan kosketukseen haavan pintojen kanssa.

Aika, jonka kuluessa tämä tapahtuu, vastaa kliinisiä vaatimuksia. Keksinnön mukaisesti valmistettu yksikom-ponenttiliima ei eroa vaikutukseltaan tunnetuista kaksi-komponenttijärjestelmistä.

I; 5 90826 Nämä liiman vaikuttavat aineet sekoitetaan sillä tavalla, että käyttöliuoksessa vallitseva fibrinogeenipi-toisuus on 70 - 90 mg/ml ja protrombiinitekijoiden pitoisuus 10 - 30 yksikköä/ml, laskettuna tekijän II mukaan.

5 Kalsiumionien, jotka ovat liimassa osittain sitoutuneina proteiiniin, pitoisuuden tulee olla 0,5-1 mmol/1 käyttö-liuoksessa. Trombiini-inhibiittorina, joka voi olla esimerkiksi antitrombiini-III, hirudiini tai hepariini, käytetään edullisesti antitrombiini-III:a pitoisuutena 0,1 -10 1 yksikköä/ml kudosliimaa; tällaisena pitoisuutena se es tää edellä mainittujen protrombiinitekijä- ja kalsiumioni-pitoisuuksien vallitessa ennenaikaisen fibriinin muodostumisen. Toisaalta tätä voidaan kuitenkin edistää tarpeen vaatiessa. Tällöin kylmäkuivattu liima voidaan liuottaa 15 siten, että kalsiumionien loppupitoisuus on suurempi kuin 0,5 - 1 mmol/1. Tämä vaatii kuitenkin nopeaa käyttöä uu-delleensekoituksen jälkeen.

Liiman valmistamiseksi saatetaan vaikuttavat aineet ensin mahdollisimman aktiiviseen ja mahdollisesti pastö-20 roituun liukenevaan muotoon. Fibrinogeenipitoisuuden tulisi olla mahdollisimman suuri, sillä liiman lujuus paranee pitoisuuden kasvaessa. Fibrinogeeni voidaan valmistaa ja pastöroida esimerkiksi EP-julkaisun 0 103 196 mukaisesti ja tehdä liukoisuudeltaan halutunlaiseksi EP-julkaisun 25 0 085 923 mukaisesti lisäämällä urea- tai guanidiiniryhmiä sisältävää yhdistettä. Tekijä XIII voidaan pastöroida EP-julkaisun 0 018 561 ja protrombiinitekijät EP-julkaisun 0 056 629 mukaisesti.

Keksinnön mukaisesti valmistetun edullisen liiman 30 vaikuttavat aineet koostuvat periaatteessa mahdollisimman suurena pitoisuutena esiintyvästä ihmisfibrinogeenista, johon on lisätty tekijää XII ja protrombiiniryhmän tekijöitä (tekijöitä II, VII, IX ja X) , kalsiumioneja sekä antitrombiiniIII:a. Kudosliima sisältää lisäksi inhibiit-35 toria, joka estää plasminogeeniaktivaattoreita ja/tai 6 plasmiinia ja suojaa siten muodostunutta fibriiniä plas-miinin aiheuttamalta hajoamiselta. Tämä inhibiittori voi esiintyä sitomiseen valitun fibrinogeenin mukana tulevana aineena, mutta lisätään edullisesti liimaan aprotiniinin 5 muodossa. Uudelleenliuottamisen helpottamiseksi kylmäkui-vauksen jälkeen kudosliima voi sisältää albumiinia ja/tai muita aineita, jotka sisältävät urea- tai guanidiiniryh-män, samoin kuin mahdollisesti aminohappoa, jossa on hydrofobinen sivuketju, tai vesiliukoista rasvahappoa sekä 10 lisäksi hepariinia.

Kudosliiman valmistuksessa tulee edullisesti kyseeseen puhdistettu fibrinogeeni, joka jo sisältää tekijää XIII. Sen lisäksi soveltuu kuitenkin myös kylmäsaostus-tuote, jossa kokemuksen mukaan esiintyy tekijän XIII li-15 saksi myös alfa2-antiplasmiinia ja ihmisalbumiinia. Vaiku tukseltaan vertailukelpoinen liima voidaan kuitenkin valmistaa myös sekoittamalla yksittäisistä komponenteista, ts ihmisfibrinogeenista, tekijästä XIII (plasmasta tai istukasta) , plasmiini-inhibiittoreista, protrombiinitekijoista 20 (tekijöistä II, VII, IX ja X), albumiinista, antitrombii-ni-III:sta ja kalsiumioneista, urea- tai guanidiiniryhmän sisältävästä yhdisteestä tai hydrofobisen sivuketjun sisältävästä aminohaposta tai vesiliukoisesta rasvahaposta.

Liiman vaikuttavien aineiden seos on edullisesti 25 kiinteässä muodossa, edullisesti kylmäkuivattuna tuottee na.

Edullisesti sisältää kudosliima seuraavat määrät mahdollisesti pastöroituja vaikuttavia aineita millilitraa kohden käyttöliuosta: 70 - 90 mg, hyvin puhdasta ihmisfi-30 brinogeenia; 40 - 80 yksikköä tekijää XIII; 10 - 30 kansainvälistä yksikköä PPSB:tä (protrombiinitekijöitä) laskettuna tekijä II:n (protrombiinin) mukaan; l - 10 000 kallikreiini-inaktivaattori yksikköä aprotiniinia; 0,1-1 kansainvälistä yksikköä antitrombiini-III:a; 0-5 USP-35 yksikköä hepariinia ja 0,1 - 5, edullisesti 0,5-1 mmol/1 kalsiumioneja, edullisesti kalsiumkloridina.

li 7 90826

Liima voi sisältää stabilisaattorina ja liukenemista edistävänä aineena esimerkiksi glutaminaattia, L-iso-leusiinia, L-arginiinia tai ihmisalbumiinia.

Kudosliiman kiinteiden vaikuttavien aineiden seos 5 voidaan liuottaa lyhyessä ajassa lämpötilassa 20 °C veteen tai kalsiumioneja sisältävään liuottimeen. Liima kehittää tyydyttävän lyhyessä ajassa suuren tarttumislujuuden, kun se levitetään yhdistettävälle tai liimattavalle kudokselle, ilman että tarvitaan trombiinia toisena komponenttina.

10 Tästä syystä liima voidaan levittää nestemäisessä muodossa yhdellä suihkutuksella, niin että valmistus ja käyttö on yksinkertaista. Liima on hyvin siedettyä ja re-sorboituu täydellisesti. Tämä yksikomponenttiliima ei eroa liimausajan eikä repäisylujuuden suhteen kaksikomponentti-15 liimasta, kuten havaittiin liimauskokeissa, jotka tehtiin rotannahan pistohaavaa mallina käyttäen, ja kiinnitettäessä pieniä suoliyhdysaukkoja siassa. Valitsemalla kylmäkuivattujen vaikuttavien aineiden liuottimelle optimaalinen kalsiumionipitoisuus voidaan kiinnittymislujuutta pa-20 rantaa edelleen.

Seuraavien esimerkkien tarkoituksena on valaista tätä keksintöä.

Esimerkki 1

Kudosliiman (500 ml) valmistamiseksi liuotettiin 25 580 g pastöroitua, hyvin puhdistettua ihmisfibrinogeenia, joka sisälsi 2 kalsiumionia molekyyliä kohden ja valmistettiin EP-julkaisun 0 103 196 mukaisesti, 580 ml:aan puskuria (pH 7,5, dialyysipuskuri), jonka koostumus oli seu-raava: 30 0,05 mol/1 NaCl, 0,005 mol/1 trinatriumsitraattia ja 0,3 g/100 ml L-arginiinimonohydrokloridia.

Siten saatua fibrinogeeniliuosta dialysoitiin kahdesti 16 tuntia ja kerran 8 tuntia kulloinkin 36 Iraa vas-35 taan koostumukseltaan samanlaista puskuria lämpötilassa 8 4 °C. Fibrinogeeniliuoksen tilavuus oli dialysoinnin jälkeen 1,53 1. Sitten liuosta sentrifugoitiin 20 min kiihdy-vyydellä 8000 x g. Liuoksen optinen tiheys aallonpituudella 280 mm mitattuna oli 47. Tämä liuos laimennettiin edel-5 lä mainitulla puskurilla, -johon oli lisätty liiman muita komponentteja (katso jäljempänä), optiseen tiheyteen (280 nm) 35-37, ts ihmisfibrinogeenipitoisuuteen noin 20 g/1.

Tarkemmin kuvattuna meneteltiin tällöin seuraavasti: Dialysoitu ja sentrifugoitu ihmisfibrinogeeniliuos 10 (1,53 1) suodatettiin lämpötilassa 35 - 37 °C peräkkäin suodattimien läpi, joiden huokoskoko oli 0,65 ja 0,2 /um. Saatuun steriiliin fibrinogeeniliuokseen lisättiin 117,5 ml pastöroitua tekijä XIII-konsentraattia, joka sisälsi 350 yksikköä tekijää XIII/ml fysiologista suolaliuosta, 15 suodattimen läpi, jonka huokoskoko oli 0,2 μιη.

Sitten lisättiin 515 000 KIY (kallikreiini-inakti-vaattori yksikköä) aprotiniinia, 5,13 g Na-glutaminaattia, 33,9 ml liuosta, joka sisälsi 20 g/100 ml ihmisalbumiinia, 6,78 g isoleusiinia ja 10 000 yksikköä pastöroitua PPSB-20 konsentraattia (protrombiinitekijäkonsentraattia, aktii- visuusyksikköjen määrä laskettu tekijän II mukaan), 100 yksikköä antitrombiini-III (pastöroitua) ja 3,1 ml 0,1 M CaCl2-liuosta.

Sen jälkeen säädettiin tilavuus 407,5 ml:ksi dia-25 lyysipuskurilla. Tämä liuos suodatettiin (suodattimen huo koskoko 0,2 μιη) tekijää XIII sisältävään f ibrinogeeni liuokseen. Saatiin noin 2055 ml liuosta, jonka pH oli 7,5 ja koostumus seuraava:

Ihmisfibrinogeenia 2,0 g/100 ml 30 Ihmisalbumiinia 0,33 g/100 ml

Arginiinia 0,3 g/100 ml

Na-glutaminaattia 2,5 g/1

Isoleusiinia 3,3 g/1

Tekijää XIII 20 000 yksikköä/1 35 Aprotiniinia 250 000 KIY/1 l! 9 90826

Protrombiinia 5 000 yksikköä/1 (las kettuna tekijänä II)

Antitroxnbiini III 50 yksikköä/1

NaCl 0,05 mol/1 5 Trinatriumsitraattia 0,005 mol/1

Kalsiumkloridia 0,15 mmol/1

Steriili liuos jaettiin 4 ml:n annoksiksi ja kylmäkuivatuin. Saatiin väritön, nopeasti liukeneva kylmäkuivattu tuote.

10 Kudosliimana käyttöä varten liuotettiin yksi annos 1 ml:aan liuotinta.

Esimerkki 2

Kudosliiman (125 ml) valmistamiseksi liuotettiin 100 g pastöroitua, hyvin puhdistettua ihmisfibrinogeeni-15 fraktiota, joka saatiin EP-julkaisun 0 103 196 mukaisesti, 112 ml:aan dialyysipuskuria ja dialysoitiin kolmesti 10 l:aa vastaa samaa puskuria kuin esimerkissä 1. Konsentroidun fibrinogeeniliuoksen tilavuus oli dialyysin jälkeen 269 ml. Sitä sentrifugoitiin 20 min kiihtyvyydellä 8000 x 20 g. Liuoksen optinen tiheys aallonpituudella 280 nm oli 69,2. Liuos laimennettiin puskurilla, jonka koostumus vastasi dialyysipuskuria ja joka sisälsi kaikki muut liiman aineosat, sillä tavalla, että saavutettiin optinen tiheys (aallonpituudella 280 nm) 35 - 37 fibrinogeenin mukaan mi-25 tattuna.

Tällöin meneteltiin seuraavasti: 127 ml:aan puskuria lisättiin 8,2 ml ihmisalbu-miiniliuosta, joka sisälsi 20 g ihmisalbumiinia/100 ml liuosta, 6 ml aprotiniiniliuosta (125 000 KIY) ja 50 ml 30 protrombiinikonsentraattia, joka sisälsi 2 500 yksikköä tekijää II ja 25 yksikköä antitrombiini III. Tähän liuokseen liuotettiin 1,65 g L-isoleusiinia ja 1,25 g Na-glu-taminaattia, ja lisättiin sitten 40 ml tekijä XIII-kon-sentraattia, joka sisälsi 10 000 yksikköä tekijää XIII, 35 sekoitettiin homogeeniseksi ja säädettiin liuoksen pH ar voon 7,5.

10

Sen jälkeen tämä liuos sekoitettiin homogeeniseksi seokseksi yllä kuvatun fibrinogeeniliuoksen ja 0,1 M CaCl2-liuoksen (0,75 ml) kanssa, ja steriloitiin suodattamalla lämpötilassa 35 - 37 °C suodattimen läpi, jonka huokoskoko 5 oli 0,2 Mm. Saatiin noin 500 ml steriiliä liuosta, jonka koostumus oli esimerkin l mukainen. Tämä liuos jaettiin 4 ml:n annoksiksi ja kylmäkuivattuin. Saatiin väritön, nopeasti liukeneva kylmäkuivattu tuote.

Kudosliimana käyttöä varten annos sekoitetaan 1 10 ml:aan liuotinta.

Il

Claims (1)

1. 90826 Patentt ivaat imus Menetelmä kudosliiman valmistamiseksi, tunnettu siitä, että mahdollisesti pastöroituun ja mah-5 dollisesti suodattamalla steriloituun isotoniseen vesiliuokseen, jonka pH on 7,5 ja joka sisältää vähintään 16 g/1 ihmisfibrinogeenia, 2 gramma-atomia kalsiumia/1 mol fib-rinogeenia ja 1 - 6 g/1 L-arginiinimonohydrokloridia, lisätään sen verran mahdollisesti pastöroitua liuosta, joka 10 sisältää ihmisen tekijää XIII, ihmisalbumiinia, protrom-biinikonsentraattia, antitrombiini III:a ja aprotiniinia, sekä mahdollisesti Na-glutaminaattia ja isoleusiinia, että kylmäkuivattu liuos sisältää sekoitettuna takaisin 1/4:aan täyttötilavuudesta seuraavia aineita seuraavina pitoisuuk-15 sinä: 65 - 115 mg/ml ihmisfibrinogeenia, 40 - 80 yksikköä/ml tekijää XIII, 4-40 mg/ml ihmisalbumiinia, 1-50 kansainvälistä yksikköä/ml PPSB:tä (protrombiinite-20 kijöitä) laskettuna tekijän II (protrombiinin) mukaan, 0,01 - 50 kansainvälistä yksikköä antitrombiini III:a, ja mahdollisesti 1-10 000 kallikreiini-inaktivaattoriyksikköä/ml aprotiniinia ja 25 0 - 20 g/1 Na-glutaminaattia ja 0-20 g/1 isoleusiinia. Förfarande för framställning av ett vävnadslim, kännetecknat därav, att tili en eventuellt 5 pastörisedad och eventuellt genom filtrering steriliserad isotonisk vattenlösning med pH 7,5 och innehällande ät-minstone 16 g/1 humanfibrinogen, 2 grammatom kalcium / 1 mol fibrinogen och 1 - 6 g/1 L-argininmonohydroklorid, tillsätts en eventuellt pastöriserad lösning, som innehäl-10 ler human faktor XIII, humanalbumin, protrombinkoncentrat, antitrombin III och aprotinin, samt eventuellt Na-glutami-nat och isoleucin i en sädan mängd, att den lyofiliserade lösningen efter rekonstitution tili 1/4 av päfyllningsvo-lymen innehäller följande ämnen i följande koncentratio-15 ner: 65 - 115 mg/ml humanfibrinogen, 40 - 80 enheter/ml faktor XIII, 4-40 mg/ml humanalbumin, 1-50 internationella enheter/ml PPSB (protrombinfak-20 torer) beräknat pä faktor II (protrombin), 0,01 - 50 internationella enheter antitrombin III, och eventuellt 1-10 000 kallikreininaktivatorenheter/ml aprotinin och 0 - 20 g/1 Na-glutaminat och 25 0-20 g/1 isoleucin. i.