KR102658958B1

KR102658958B1 - 출혈의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 혈액 응고 인자 대체품

Info

Publication number: KR102658958B1
Application number: KR1020197018871A
Authority: KR
Inventors: 에바 헤르조그; 제랄드 호흐라이트너; 올리버 그로트케
Original assignee: 체에스엘 베링 게엠베하
Priority date: 2017-02-09
Filing date: 2018-02-09
Publication date: 2024-04-22
Also published as: BR112019012772A2; CN110114074B; AU2018217375A1; CN110114074A; EP3579857B1; AU2018217375B2; JP7227905B2; JP2020506880A; WO2018146235A1; ES2913934T3; SG10201912497WA; KR20190111912A; EP3579857A1; CA3046406C; US20190351028A1; CA3046406A1; WO2018146235A8; US11744880B2; PL3579857T3; DK3579857T3

Abstract

본 발명은 후천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈의 치료 또는 예방, 또는 선천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 혈액 응고 인자 대체품에 관한 것이다. 상기 대체품은 적어도 분리된 프로트롬빈 (인자 II) 및 분리된 항트롬빈 III (ATIII)을 포함하고, 이 경우 ATIII : 인자 II의 몰비가 적어도 1 : 30이며; 상기 대체품의 투여에 의해 혈전색전성 합병증에 대한 환자의 위험이 감소된다.

Description

출혈의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 혈액 응고 인자 대체품

본 발명은 후천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈의 치료 또는 예방, 또는 선천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 혈액 응고 인자 대체품(replacement product)에 관한 것이다.

프로트롬빈 복합 농축물 (PCC)은 비타민 K 길항제의 긴급한 역전을 위한 치료용 혈장과 같은 다른 치료제보다 우선하여 권장된다 (Tazarourte K, et al. (EPAHK study). Crit Care 2014; 18(2):R81). PCC는 유럽에서도 수년간 사용되어 왔는데, 유럽에서 이들의 허가는 비타민 K 길항제 역전에만 국한되지 않았고 - 이들은 후천성 프로트롬빈 복합 응고 인자 결핍증에서의 출혈의 치료 및 예방에서 광범위하게 승인을 받았다. PCC는 3개 또는 4개의 응고 인자 (인자 II, IX 및 X에, 인자 VII 첨가 및 미첨가) 및 제제에 따라, 저용량의 응고 억제제, 예컨대 단백질 C, 단백질 S 및 헤파린을 포함한다.

PCC의 작용 기전은 이들의 치료적 용도를 이해하는데 있어서 중요하다. 비타민 K 길항제, 예컨대 와파린은 혈전색전증을 방지할 목적으로 4개의 응고 인자: II, VII, IX 및 X의 수준을 감소시키는 기능을 한다. 생명을 위협하는 출혈이 있는 환자에게는, 이러한 응고 인자의 신속한 대체가 필요하고, PCC는 상기 요구되는 응고 인자의 농축 공급원으로서 기능한다. 3-인자 및 4-인자로 된 PCC는 비타민 K 길항제 역전에 대하여 조사된 바 있다. 그러나, 인자 VII의 부재로 인해, 국제 표준화 비율 (INR)이 >3.7인 환자에 있어서 3-인자 PCC가 4-인자 PCC보다 덜 적합한 것으로 보인다 (Dentali F, et al. Thromb Haemost 2014; 112: 621-23).

외상 및 수술 전후의 출혈에서, 환자는 다양한 응고병증을 나타낸다. PCC는 중요한 응고 인자, 특히 인자 II (프로트롬빈)의 적절한 수준을 담보함으로써 트롬빈 생성을 증가시키고, 프로트롬빈의 트롬빈으로의 전환은 활성화된 인자 X 및 활성화된 인자 V에 의해 촉진된다. PCC로 치료하면 잠재적으로 외상 및 수술 전후 출혈에서 지혈을 촉진하는데 효과적일 수 있다. 인간에 있어서 FIIa 또는 FXa 직접 억제제 (DOAC)의 항응고 효과를 역전시키기 위한 PCC의 사용에 대한 증거도 존재한다.

DOAC로 유도된 항응고 치료에서, PCC는 특정한 역전제로서 작용하지는 않는다. 대신에, 이들은 비타민 K 의존성 응고 인자의 수준을 상승시킨다.

외상, 수술 전후 출혈에 PCC를 사용하는 경우에는, 혈전색전성 합병증의 잠재적 위험이 있기 때문에 신중한 접근이 요구된다. 이러한 환경에서는 - 비타민 K 길항제 역전과는 달리 - 응고 억제제 뿐만 아니라 응혈제가 감소되는 경우가 많다. 당업계의 목적은 출혈 부위(들)에서만 혈전 형성을 촉진하고, 순환계를 통해 전신적으로 혈전 형성을 일으키지 않기 위해 트롬빈 생성 및/또는 피브린 형성을 강화시키는 것이다. 제제에 따라, PCC는 저용량의 응고 억제제, 예컨대 단백질 C, 단백질 S 및 헤파린을 함유한다. 그러나, 이는 혈전색전성 합병증의 위험을 제거하지는 못한다 (Grottke O, et al. Blood 2011; 118:1943-51; Levy JH, et al. Anesthesiology 2008; 109:918-26; Mitterlechner T, et al. J Thromb Haemost 2011; 9:729-37; Hanker Dusel C, et al. Blood Coagul Fibrinolysis 2004; 15:405-11; Rodgers GM. Am J Hematol 2012; 87:898-902; Dickneite G, et al. Anesth Analg 2008; 106:1070-7; Dickneite G, Pragst I. Br J Anaesth 2009; 102:345-54; Kaspereit F, et al. Br J Anaesth 2010; 105:576-82).

다수의 임상전 연구들이 외상으로 인한 출혈의 치료에 있어서 PCC의 사용을 조사한 바 있다. 상기 연구들은 모두 PCC가 지혈을 복원하는데 효과적일 수 있음을 시사하고는 있으나, PCC가 혈전색전성 합병증 및 동물 모델에서의 파종성 혈관내 응고 (DIC)와 같은 응혈 촉진 효과를 유발할 수 있음을 보여주는 증거도 있기 때문에, 위해성과 유익성을 항상 고려해야 한다 (Grottke O, et al. Blood 2011; 118:1943-51).

PCC는 몇년 전에 임상 시험 및 동물 연구에서 혈전색전성 합병증의 잠재적 위험과 관련이 있는 것으로 알려진 바 있다 (Levy JH, et al. Anesthesiology 2008; 109:918-26; Mitterlechner T, et al. J Thromb Haemost 2011; 9:729-37; Hanker Dusel C, et al. Blood Coagul Fibrinolysis 2004; 15:405-11). 1990년대 후반에, 안전성 향상을 목적으로 대부분의 PCC에서 활성화 인자들을 제거하였다. 인자 II (프로트롬빈)는 오늘날의 PCC에서 혈전생성의 중요한 결정요인으로 확인되어, 이들을 인자 IX 대신에 인자 II의 함량에 따라 표지해야 한다는 제의를 유도하게 되었다 (Hanker Dusel C, et al., Blood Coagul Fibrinolysis 2004; 15:405-11). 항응고제의 혈중 수준도 환자의 혈전색전성 합병증에 대한 위험에 영향을 미칠 수도 있다. PCC는 때로 문헌에서 균형잡힌 것으로 기술되기도 한다 (Kaspereit F, et al. Br J Anaesth 2010; 105:576-82; Josic D, et al. Thromb Res 2000; 100:433-41; Ostermann H, et al. Thromb Haemost 2007; 98:790-7; Pabinger I, et al. J Thromb Haemost 2008; 6:622-31; Riess HB, et al. Thromb Res 2007; 121:9-16; Wiedermann CJ, Stockner I. Thromb Res 2008; 122 Suppl 2:S13-8). 이러한 제품들이 응고 인자 II, VII, IX 및 X의 비율과 관련해서는 균형을 이룰 수도 있지만, 응고촉진제 대 억제제의 수준과 관련해서는 균형이 맞지 않는다는 것을 명확히 하는 것이 중요하다. PCC는 매우 강력한 트롬빈 생성 약물이다: 외상 환자에 대한 연구에 따르면, 이들이 내인성 트롬빈 활성도(endogenous thrombin potential)를 3-4일 동안 유의하게 증가시킨다는 사실이 밝혀졌는데, 이는 인자 II의 60-72시간의 반감기와 일치하는 기간이다.

약물안전성감시체계(Pharmacovigilance) 데이터는 PCC에 대한 혈전색전성 합병증의 위험도는 낮을 수도 있지만, 이러한 데이터가 유도되는 주된 환경이 비타민 K 길항제 역전임을 기억해야 한다.

저용량의 PCC만을 투여해야 하고, 필요에 따라 용량 적정을 위한 진단적 치료 접근법(theragnostic approach)을 사용하는 것이 제안된 바 있다 (Honickel M, et al. Thromb Haemost 2011; 106:724-33). 또한, 현재 임계 수준에 관한 최적의 사례를 뒷받침하는 증거나 결핍증이 있는 환자를 관리하는 방법은 없지만, 항트롬빈 (PCC에 포함된 활성화된 형태의 4개의 응고 인자에 대한 가장 강력한 억제제)의 수준을 측정할 수도 있다. 마지막으로, 혈전색전성 합병증의 위험이 있다고 생각되는 환자들 (예컨대, 혈전색전증 사건의 이력이 있는 대상체)에 대해서, 면밀한 모니터링이 적절할 수 있다. 상기 단계들을 주의 깊게 고려해 보면, 비상시의 비타민 K 길항제 역전에 대한 확립된 사례와 비교하여 상당히 다른 PCC 사용에 대한 접근법을 유도할 수도 있다.

특히 심각한 출혈 또는 응급 수술의 필요성이 있는 경우의 항응고 요법에 있어서, 환자의 효과적인 지혈 제어 및 출혈 예방을 제공하는 안전하고도 효과적인 응고 촉진 약물에 대한 의료계의 필요성이 대두되고 있는 실정이다.

또한, 수술 전후 출혈 상황에서 신속한 지혈 제어를 제공하는 안전하고도 효과적인 응고 촉진 약물에 대한 의료계의 필요성도 대두되고 있다.

이에 대한 각 의료적 개입은 최대한의 유익성과 위해성의 균형을 제공해야 하며, 즉 최소한의 혈전생성 가능성을 유발하는 동시에 최대한의 지혈촉진 특성을 제공해야 한다.

본 발명의 제1 목적은 투여 후 환자의 혈전색전성 합병증에 대한 감소된 위험과 관련된, 즉 개선된 안정성 프로파일을 갖는, 개선된 혈액 응고 인자 대체품을 제공하는 것이다.

제2 목적에 따르면, 상기 치료는 환자에 있어서 효과적인 지혈 제어 및 출혈 예방이 가능하도록 해야 하며, 즉 개선된 안전성 프로파일 이외에 적절한 효능 또는 심지어 개선된 효능을 갖도록 해야 한다.

제3 목적에 따르면, 상기 안전하고도 효과적인 혈액 응고 인자 대체품의 투여는, 특히 심각한 출혈 또는 응급 수술의 필요성이 있는 경우의 항응고 요법에 있어서, 환자의 효과적인 지혈 제어 및 출혈 예방을 제공해야 한다.

추가의 목적에 따르면, 상기 안전하고도 효과적인 혈액 응고 인자 대체품의 투여는 수술 전후 출혈 상황에서 신속한 지혈 제어를 제공해야 한다.

추가의 목적에 따르면, 상기 안전하고도 효과적인 혈액 응고 인자 대체품의 투여는 최대 유익성과 위해성의 균형이 잡히도록 해야 하며, 즉 최소한의 혈전생성 가능성을 유발하는 동시에 최대한의 지혈촉진 특성을 제공해야 한다.

놀랍게도, 환자에 대한 적어도 프로트롬빈 (인자 II) 및 항트롬빈 III (ATIII)을 포함하는 혈액 응고 인자 대체품의 투여, 또는 적어도 프로트롬빈 (인자 II)을 포함하는 혈액 응고 인자 대체품과 항트롬빈 III의 공동 투여는, ATIII : 인자 II의 몰비가 적어도 1 : 30이기만 하면, 적절한 효능 또는 심지어 개선된 효능을 유지하면서 혈액 응고 인자 대체품의 혈전생성 잠재력을 최소화하거나 심지어 억제한다. 따라서, 혈전색전성 합병증에 대한 환자의 위험은 감소된다. 바람직하게는, 혈전유발 효과가 방지된다.

본 발명은 추가의 양태에 따른 상기 ATIII : 인자 II의 몰비가 정상적인/생리학적 수준을 초과하는 과량의 트롬빈 생성을 방지할 수 있음을 추가로 입증하고 있다.

제1 양태에서, 본 발명은

(i) 후천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한, 또는

(ii) 선천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한, 혈액 응고 인자 대체품에 관한 것으로,

상기 대체품은 적어도 분리된 프로트롬빈 (인자 II) 및 분리된 항트롬빈 III (ATIII)을 포함하고, 이 경우 ATIII : 인자 II의 몰비가 적어도 1 : 30이며;

상기 대체품의 투여에 의해 혈전색전성 합병증에 대한 환자의 위험이 감소된다.

제2 양태에서, 본 발명은

(ii) 선천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한, 프로트롬빈 복합 농축물 (PCC) 및 항트롬빈 III (ATIII)의 병용물에 관한 것으로,

상기 PCC가 적어도 프로트롬빈 (인자 II), 인자 IX, 인자 X 및 임의로 인자 VII를 포함하고;

상기 병용물의 투여에 의해 혈전색전성 합병증에 대한 환자의 위험이 감소된다.

제3 양태에서, 본 발명은

(i) 후천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈의 치료 또는 예방을 위한, 또는

(ii) 선천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈의 치료 또는 예방을 위한, 프로트롬빈 복합 농축물 (PCC)의 투여 및 항트롬빈 III (ATIII)의 공동 투여를 포함하는 병용 요법에 관한 것으로,

제4 양태에 따르면, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 사용을 위한 약학적 혈액 응고 인자 대체 키트에 관한 것으로서, 상기 키트가 (i) 적어도 프로트롬빈 (인자 II)을 포함하는 제1 조성물 및 (ii) 항트롬빈 III (ATIII)을 포함하는 제2 조성물을 포함하고, 상기 제1 조성물 및 상기 제2 조성물을, (a) 투여 전 적어도 1 : 30의 ATIII : 인자 II의 몰비를 갖는 혼합물의 제조 및/또는 (b) 상기 혼합물 또는 조성물들의 공동 투여를 가능케 하기 위해 상기 키트 내에 제공하되, 단, 투여된 ATIII : 투여된 인자 II의 몰비가 적어도 1 : 30이며, 상기 조성용물의 투여에 의해 혈전색전성 합병증에 대한 환자의 위험이 감소된다.

제5 양태에서, 본 발명은

(ii) 선천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한, 프로트롬빈 (인자 II) 함유 의약품과의 공동 투여를 위한 항트롬빈 III (ATIII)을 포함하는 의약품에 관한 것으로,

적어도 1 : 30의 ATIII : 인자 II의 몰비를 갖는 상기 프로트롬빈 (인자 II) 및 항트롬빈 III (ATIII)을 공동 투여하고,

상기 의약품의 투여에 의해 혈전색전성 합병증에 대한 환자의 위험이 감소된다.

추가의 양태에 따르면, 본 발명은

(ii) 선천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한, 항트롬빈 III (ATIII) 함유 의약품과의 공동 투여를 위한 프로트롬빈 (인자 II)을 포함하는 의약품에 관한 것으로,

추가의 양태에 따르면, 본 발명은 선행하는 양태들 중 어느 한 양태에 따라 사용하기 위한 혈액 응고 인자 대체품에 관한 것으로서, 상기 대체품이

- 인자 II, IX 및 X을 함유하는 3-인자 복합체, 또는

- 인자 VII를 추가로 함유하는 4-인자 복합체

의 두 유형 중 어느 하나의 프로트롬빈 복합 농축물 (PCC)이고,

상기 대체품은 1 : 30 미만의 ATIII : 인자 II의 몰비로 항트롬빈 III (ATIII)을 포함하거나, 또는 심지어 ATIII을 포함하지 않으며;

상기 PCC는

(ii) 선천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한, ATIII 함유 의약품과의 공동 투여를 위해 제공되고,

공동 투여시, 적어도 1 : 30의 ATIII : 인자 II의 몰비를 갖는 인자 II 및 ATIII을 공동 투여하고;

상기 PCC 대체품과 ATIII의 공동 투여에 의해 혈전색전성 합병증에 대한 환자의 위험이 감소된다.

추가의 양태에서, 본 발명은 혈액 응고 인자 대체품에 관한 것으로서; 상기 대체품은 적어도 분리된 프로트롬빈 (인자 II) 및 분리된 항트롬빈 III (ATIII)을 포함하고, 이 경우 ATIII : 인자 II의 몰비는 적어도 1 : 30이다. 상기 대체품은 바람직하게는 본원에 개시된 임의의 하나 이상의 양태(들) 또는 본원에 개시된 임의의 하나 이상의 실시양태들에 따른 조성물을 함유한다.

추가의 양태에 따르면, 본 발명은 본원에 개시된 치료용 약제의 제조를 위한 본원에 개시된 혈액 응고 인자 대체품의 용도에 관한 것이다.

추가의 양태에 따르면, 본 발명은 후천성 또는 선천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자에게 혈액 응고 인자 대체품을 투여함으로써,

(i) 후천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈의 치료 또는 예방, 또는

(ii) 선천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈의 치료 또는 예방 방법에 관한 것으로,

따라서, 본 발명은 또한 특히 하기의 실시양태 [1] 내지 [48] 또는 이들의 조합에 관한 것이다:

[1] (i) 후천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한, 또는

(ii) 선천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한, 혈액 응고 인자 대체품으로서,

상기 대체품의 투여에 의해 혈전색전성 합병증에 대한 환자의 위험이 감소되는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[2] 실시양태 [1]에 있어서, 상기 대체품의 투여에 의해 혈전색전성 합병증에 대한 환자의 위험이 표준 치료에 비해 감소되고, 상기 표준 치료는 해당 표준 치료에 사용된 대체품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 30 미만인 것을 제외하고는 상기 본 치료와 동일한 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[3] 실시양태 [1] 또는 실시양태 [2]에 있어서, 상기 대체품이 인자 IX, 인자 X 및 인자 VII로 이루어진 군으로부터 선택되는 분리된 응고 인자들 중 적어도 하나를 추가로 포함하는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[4] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 혈액 손실량이 위약 치료 후 또는 치료하지 않은 경우의 혈액 손실량에 비해 감소되고, 상기 혈액 손실량은 바람직하게는 위약 치료 후 또는 치료하지 않은 경우의 혈액 손실량의 75% 미만, 70% 미만, 60% 미만, 55% 미만, 50% 미만, 45% 미만, 40% 미만 또는 35% 미만의 양으로 감소되는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[5] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 혈액 손실량이 표준 치료와 비교하여 본질적으로 동일하거나 약간만 증가되거나, 또는 상기 대체품으로 치료 후 환자의 혈액 손실량이 표준 치료에 비해 감소되며, 바람직하게는, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 혈액 손실량은 표준 치료에 비해 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15% 또는 적어도 20% 감소되고, 상기 표준 치료는 해당 표준 치료에 사용된 대체품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 30 미만인 것을 제외하고는 상기 본 치료와 동일한 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[6] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 혈액 손실량이 표준 치료의 혈액 손실량에 비해 약간만 증가된 경우, 상기 약간의 증가는 60% 이하, 50% 이하, 40% 이하, 30% 이하, 20% 이하, 15% 이하, 10% 이하 또는 5% 이하이고, 상기 표준 치료는 해당 표준 치료에 사용된 대체품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 30 미만인 것을 제외하고는 상기 본 치료와 동일한 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[7] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 지혈까지 걸린 시간 값은 위약 치료 후 또는 치료하지 않은 경우의 지혈까지 걸린 시간 값에 비해 감소되고, 상기 대체품으로 치료 후 지혈까지 걸린 시간 값은 바람직하게는 위약 치료 후 또는 치료하지 않은 경우의 지혈까지 걸린 시간 값에 비해 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 또는 적어도 60% 감소되는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[8] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 지혈까지 걸린 시간 값은 표준 치료와 비교하여 본질적으로 동일하거나 약간만 증가되거나, 또는 상기 대체품으로 치료 후 환자의 지혈까지 걸린 시간 값은 표준 치료에 비해 감소되며, 바람직하게는, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 지혈까지 걸린 시간 값은 표준 치료 후 지혈까지 걸린 시간 값에 비해 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15% 또는 적어도 20% 감소되고, 상기 표준 치료는 해당 표준 치료에 사용된 대체품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 30 미만인 것을 제외하고는 상기 본 치료와 동일한 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[9] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 지혈까지 걸린 시간 값이 표준 치료에 비해 약간만 증가된 경우, 상기 값의 약간의 증가는 80% 이하, 70% 이하, 60% 이하, 50% 이하, 40% 이하, 30% 이하, 20% 이하 또는 10% 이하이고, 상기 표준 치료는 해당 표준 치료에 사용된 대체품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 30 미만인 것을 제외하고는 상기 본 치료와 동일한 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[10] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 프로트롬빈 시간 (PT) 값 및/또는 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 (aPTT) 값은, 표준 치료의 프로트롬빈 시간 (PT) 값 및/또는 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 (aPTT) 값에 비해 적어도 1.5, 적어도 2.0, 적어도 2.5, 적어도 3.0, 적어도 3.5, 적어도 4.0, 적어도 4.5, 적어도 5.0, 적어도 7배 또는 적어도 10배 만큼 (특히, 상기 대체품의 투여 후 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간 및/또는 약 4시간째에) 감소되고, 상기 표준 치료는 해당 표준 치료에 사용된 대체품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 30 미만인 것을 제외하고는 상기 본 치료와 동일한 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[11] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 프로트롬빈 시간 (PT) 값 및/또는 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 (aPTT) 값은, 위약 치료 후 또는 치료하지 않은 경우의 프로트롬빈 시간 (PT)의 각각의 값 및/또는 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 (aPTT)의 각각의 값과 비교하여 본질적으로 동일하고/동일하거나 상기 값에 대한 최대 편차를 가지나, 단, 상기 최대 편차는 상기 대체품의 투여 후 특히 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간 및/또는 약 4시간째에 5.0, 4.0, 3.0, 2.5, 2.0배 또는 1.5배를 초과하지 않는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[12] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 트롬빈 생성, 특히 내인성 트롬빈 활성도 (Endogenous Thrombin Potential, ETP)의 값은 상기 대체품의 투여 후 특히 1시간, 2시간 및/또는 약 3시간째에 표준 치료의 트롬빈 생성, 특히 내인성 트롬빈 활성도 (ETP)의 값에 비해 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45% 또는 적어도 50% 감소되고, 상기 표준 치료는 해당 표준 치료에 사용된 대체품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 30 미만인 것을 제외하고는 상기 본 치료와 동일한 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[13] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 혈액 중 D-이량체 농도 (DD) 값은 상기 대체품의 투여 후 특히 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간 및/또는 약 4시간째에 표준 치료의 D-이량체 농도 (DD)의 값에 비해 적어도 1.5, 적어도 2, 적어도 2.5, 적어도 3, 적어도 3.5, 적어도 4, 적어도 4.5, 적어도 5, 적어도 5.5, 적어도 6, 적어도 6.5, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9배 또는 적어도 10배 감소되고, 상기 표준 치료는 해당 표준 치료에 사용된 대체품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 30 미만인 것을 제외하고는 상기 본 치료와 동일한 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[14] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 대체품이 단백질 S, 단백질 C 및 단백질　Z으로 이루어진 군으로부터 선택되는 분리된 응고 억제제 중 적어도 하나를 추가로 포함하는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[15] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 대체품이 헤파린을 추가로 포함하는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[16] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 대체품이 알부민을 추가로 포함하는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[17] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 인자 II는 비활성 상태이고, 응고 인자인 인자 IX, 인자 X 및 인자　VII이 응고 인자 대체품 내에 존재하는 경우 이들은 독립적으로 비활성 또는 활성 상태이며, 바람직하게는 상기 인자들 모두가 비활성 상태인 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[18] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 대체품을 환자에게 정맥내, 국소 또는 골내 투여하는 것인, 혈액 응고 인자 대체품. 상기 대체품이 정맥내로 제공되는 경우, 정맥내 주입 또는 정맥내 볼루스 용량에 의해 투여될 수 있다.

[19] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 인자 II는 10 - 80 IU/mL, 15 - 60 IU/mL, 바람직하게는 20 - 48 IU/mL의 활성 수준으로 상기 대체품 내에 제공되는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[20] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 응고 인자인 인자 IX, 인자 X 및 인자 VII가 응고 인자 대체품 내에 존재하는 경우, 이들은 하기와 같은 활성 수준으로 독립적으로 상기 대체품 내에 제공되는 것인, 혈액 응고 인자 대체품:

- 인자 IX 10 - 50 IU/mL, 15 - 40 IU/mL, 바람직하게는 20 - 31 IU/mL,

- 인자 X 10 - 100 IU/mL, 15 - 80 IU/mL, 바람직하게는 22 - 60 IU/mL, 및

- 인자 VII 5 - 50 IU/mL, 5 - 40 IU/mL, 바람직하게는 10 - 25 IU/mL.

[21] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 억제제인 단백질 S, 단백질 C 및 단백질 Z가 응고 인자 대체품 내에 존재하는 경우, 이들은 하기와 같은 활성 수준으로 독립적으로 상기 대체품 내에 제공되는 것인, 혈액 응고 인자 대체품:

- 단백질 S 5 - 50 IU/mL, 10 - 45 IU/mL, 바람직하게는 12 - 38 IU/mL,

- 단백질 C 10 - 60 IU/mL, 10 - 50 IU/mL 바람직하게는 15 - 45 IU/mL, 및

- 단백질 Z 5 - 60 IU/mL, 5 - 50 IU/mL, 바람직하게는 10 - 45 IU/mL.

[22] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 투여된 대체품의 활성 용량의 범위는 약 5 IU/kg 내지 약 100 IU/kg, 약 10 IU/kg 내지 약 75 IU/kg 또는 약 10 IU/kg 내지 약 50 IU/kg이나, 단 상기 활성은 인자 II 또는, 존재하는 경우, 인자 IX의 활성에 대한 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[23] 실시양태 [3] 내지 [22] 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 응고 인자 II 및 인자 IX의 활성 수준이 균형 잡힌 비율로 존재하나, 단, 두 인자들 중 한 인자의 활성 수준의 상기 대체품 내의 다른 한 인자의 활성 수준에 대한 차이가 3, 2.5, 2.0, 1.5배 또는 1.2배를 초과하지 않는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[24] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 0.5보다 크지 않은 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[25] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 30 내지 1 : 0.5 범위 내, 바람직하게는 1 : 28 내지 1 : 0.5 범위, 1 : 25 내지 1 : 0.5, 1 : 24 내지 1 : 0.5, 1 : 23 내지 1 : 0.5, 1 : 22 내지 1 : 0.5, 1 : 21 내지 1 : 0.5, 1 : 20 내지 1 : 0.5, 1 : 18 내지 1 : 0.5, 1 : 15 내지 1 : 0.5, 1 : 12 내지 1 : 0.5, 또는 1 : 10 내지 1 : 0.5인 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[26] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 30 내지 1 : 1 범위 내, 바람직하게는 1 : 28 내지 1 : 1 범위, 1 : 25 내지 1 : 1, 1 : 24 내지 1 : 1, 1 : 23 내지 1 : 1, 1 : 22 내지 1 : 1, 1 : 21 내지 1 : 1, 1 : 20 내지 1 : 1, 1 : 18 내지 1 : 1, 1 : 15 내지 1 : 1, 1 : 12 내지 1 : 1, 또는 1 : 10 내지 1 : 1인 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[27] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 30 내지 1 : 2 범위 내, 바람직하게는 1 : 28 내지 1 : 2 범위, 1 : 25 내지 1 : 2, 1 : 24 내지 1 : 2, 1 : 23 내지 1 : 2, 1 : 22 내지 1 : 2, 1 : 21 내지 1 : 2, 1 : 20 내지 1 : 2, 1 : 18 내지 1 : 2, 1 : 15 내지 1 : 2, 1 : 12 내지 1 : 2, 또는 1 : 10 내지 1 : 2인 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[28] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 ATIII가 혈장 유래의 단백질 또는 재조합 단백질인 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[29] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 인자 II 및/또는, 존재하는 경우, 인자 IX, 인자 X 및 인자 VII로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 추가의 응고 인자는 재조합 단백질 또는 혈장 유래의 단백질인 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[30] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 트라넥사민산 (TXA)을 바람직하게는 체중 1 kg당 10 내지 20 mg 범위의 양으로 공동 투여하는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[31] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 치료 또는 예방은, 프로트롬빈 복합 응고 인자의 후천성 결핍증, 특히 비타민 K 길항제를 사용한 치료로 야기된 결핍증, 또는 결핍증에 대한 신속한 교정이 필요한 때인, 비타민 K 길항제의 과다복용의 경우에서의 출혈의 치료 및 수술 전후(perioperative)의 예방을 포함하고; 또는 상기 치료 또는 예방은, 특히, 정제된 특정 응고 인자 제품을 이용할 수 없는 경우에는, 임의의 비타민 K 의존성 응고 인자의 선천성 결핍증에서의 출혈의 치료 및 수술 전후의 예방을 포함하는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[32] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 환자가 수술 전후 출혈 관련 응고병증을 비롯한 임의의 종류의 외상 관련 응고병증으로 고생하고 있는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[33] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 환자가 심각한 출혈로 고생하고 있고, 비타민 K 의존성 응고 인자의 결핍증이 있으며, 특히 후천성 응고 장애, 예컨대 간질환 등이 있거나, 또는 B형 혈우병, 특히 억제제가 있는 B형 혈우병이 있는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[34] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 환자가 비타민 K 길항제, 특히 경구용 비타민 K 길항제, 또는 직접 작용성 경구용 항응고제 (DOAC/NOAC), 바람직하게는 FIIa 또는 FXa 직접 억제제로 이전에 치료받았던 적이 있고, 비타민 K 길항제 또는 DOAC/NOAC의 항응고성 효과의 신속한 역전을 필요로 하는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[35] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 대체품으로 치료 하기 전에 상기 환자는 건강한 대상체와 비교하여 응고병증의 하기의 상태들 중 적어도 하나를 지니는 것인, 혈액 응고 인자 대체품:

- 1.5배 이상 연장된 프로트롬빈 시간 (PT),

- 1.5배 이상 연장된 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 (aPTT),

- 1.5배 이상 연장된 전혈 응고시간 (WBCT),

- FIBTEM-MCF에서의 감소와 함께, 회전형 혈전탄성묘사법(thromboelastography) 파라미터 EXTEM-CT 또는 EXTEM-CFT, 또는

- 프로트롬빈 복합체의 응고 인자의 손상 또는 실질적인 감소.

[36] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 대체품을 이용한 치료 이외에, 상기 환자를 상기 치료에 앞서, 상기 치료와 동시에 또는 상기 치료 후에 하기의 옵션들 중 적어도 하나를 이용하여 치료하는 것인, 혈액 응고 인자 대체품:

- 혈액량 확장제 또는 소생액의 투여, 특히 링거 락테이트 용액, 식염수 및/또는 하이드록시에틸 전분 (HES/HAES)의 투여,

- 농축 적혈구 (PRBC)의 투여,

- 신선 동결 혈장 (FFP)의 투여,

- 혈소판의 투여, 또는

- 신선 전혈의 투여.

[37] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 제품을 이용한 치료 이외에, 상기 환자를 상기 치료에 앞서, 상기 치료와 동시에 또는 상기 치료 후에 대체품, 예컨대 저온침전물, 또는 피브리노겐 농축물을 이용하여 치료하며, 바람직하게는 상기 대체품 또는 상기 피브리노겐 농축물은 5 mg/kg 내지 150 mg/kg 체중, 10 mg/kg 내지 100 mg/kg, 20 mg/kg 내지 80 mg/kg 및 바람직하게는 25 mg/kg 내지 60 mg/kg 범위의 피브리노겐의 양으로 투여하는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[38] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 대체품을 바람직하게는 현저한 출혈의 치료, 특히 수술 전후 또는 외상 후의 현저한 출혈의 치료, 바람직하게는 비타민 K 의존성 응고 인자의 결핍증과 관련된, 더 바람직하게는 비타민 K 항응고 이외의 출혈의 치료에서 제1선의 단일성분물질 치료로 사용하는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[39] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 치료 전 환자가 >16의 손상 중증도 점수 (ISS) 및/또는 극심한 충격을 갖는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[40] 실시양태 [3] 내지 [39] 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 대체품이

- 인자 II, IX 및 X을 함유하는 3-인자 복합체; 또는

- 인자 VII를 추가로 함유하는 4-인자 복합체

상기 대체품은 추가로 항트롬빈 III (ATIII)을 포함하고, 이 경우 ATIII : 인자 II의 몰비가 적어도 1 : 30인 것인, 혈액 응고 인자 대체품. 일반적으로, 본 발명에 따른 프로트롬빈 복합 농축물 (PCC)은, 선행 기술에 공지된 PCC에 비해 증가된 ATIII 함량을 강조하기 위해 본원에서 변형된 PCC로도 지칭한다.

[41] 선행하는 실시양태들 중 어느 한 실시양태에 있어서, 혈전색전성 합병증에 대한 감소된 위험은 동맥 또는 정맥 혈전증, 심근경색증 및/또는 파종성 혈관내 응고 (DIC)의 감소로 나타나는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[42] (i) 후천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한, 또는

(ii) 선천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한, 프로트롬빈 복합 농축물 (PCC) 및 항트롬빈 III (ATIII)의 병용물로서,

상기 PCC는 적어도 프로트롬빈 (인자 II), 인자 IX, 인자 X 및 임의로 인자 VII를 포함하고, 단, 투여된 ATIII : 인자 II의 몰비는 적어도 1　: 30이며;

상기 병용물의 투여에 의해 혈전색전성 합병증에 대한 환자의 위험이 감소되는 것인, 병용물.

[43] (i) 후천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈의 치료 또는 예방을 위한, 또는

(ii) 선천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈의 치료 또는 예방을 위한, 프로트롬빈 복합 농축물 (PCC)의 투여 및 항트롬빈 III (ATIII)의 공동 투여를 포함하는 병용 요법으로서,

상기 PCC는 적어도 프로트롬빈 (인자 II), 인자 IX, 인자 X 및 임의로 인자 VII를 포함하고, 단, 투여된 ATIII : 투여된 인자 II의 몰비는 적어도 1　: 30이며;

상기 병용물의 투여에 의해 혈전색전성 합병증에 대한 환자의 위험이 감소되는 것인, 병용 요법.

[44] 실시양태 [1] 내지 [41] 중 어느 한 실시양태에 따라 사용하기 위한 약학적 혈액 응고 인자 대체 키트로서, 상기 키트가 (i) 적어도 프로트롬빈 (인자 II)을 포함하는 제1 조성물 및 (ii) 항트롬빈 III (ATIII)을 포함하는 제2 조성물을 포함하고, 상기 제1 조성물 및 상기 제2 조성물을, (a) 투여 전 적어도 1 : 30의 ATIII : 인자 II의 몰비를 갖는 혼합물의 제조 및/또는 (b) 상기 혼합물 또는 조성물들의 공동 투여를 가능케 하기 위해 상기 키트 내에 제공하되, 단, 투여된 ATIII : 투여된 인자 II의 몰비가 적어도 1 : 30이며, 상기 조성용물의 투여에 의해 혈전색전성 합병증에 대한 환자의 위험이 감소되는 것인, 키트.

[45] (i) 후천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한, 또는

(ii) 선천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한, 프로트롬빈 (인자 II) 함유 의약품과의 공동 투여를 위한 항트롬빈 III (ATIII)을 포함하는 의약품으로서,

상기 의약품의 투여에 의해 혈전색전성 합병증에 대한 환자의 위험이 감소되는 것인, 의약품.

[46] (i) 후천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한, 또는

(ii) 선천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한, 항트롬빈 III (ATIII) 함유 의약품과의 공동 투여를 위한 프로트롬빈 (인자 II)을 포함하는 의약품으로서,

[47] 실시양태 [1] 내지 [41] 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 대체품이

- 인자 II, IX 및 X을 함유하는 3-인자 복합체; 또는

- 인자 VII를 추가로 함유하는 4-인자 복합체

상기 PCC가

공동 투여시, 적어도 1 : 30의 ATIII : 인자 II의 몰비를 갖는 인자 II 및 ATIII을 공동 투여하며;

상기 PCC 대체품과 ATIII의 공동 투여에 의해 혈전색전성 합병증에 대한 환자의 위험이 감소되는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.

[48] 후천성 또는 선천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자에게 혈액 응고 인자 대체품을 투여함으로써,

(i) 후천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈을 치료 또는 예방, 또는

(ii) 선천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈을 치료 또는 예방하는 방법으로서,

상기 대체품의 투여에 의해 혈전색전성 합병증에 대한 환자의 위험이 감소되는 것인, 방법.

상기 실시양태 [1] 내지 [48]은 본원에 개시된 다른 실시양태 또는 측면들의 임의의 하나 이상의 특징들과 조합될 수 있다.

도 1은 혈액희석, 치료, 실험적 신장 외상 및 지혈 효과의 평가에 대한 연구 절차를 나타낸 것이다. 약어: HES, 하이드록시에틸 전분; PCC (프로트롬빈 복합 농축물), ATIII (항트롬빈 III);
도 2는 식염수 (위약), PCC, ATIII 또는 PCC와 ATIII의 조합으로 치료 후, 혈액희석된 토끼에서 표준형 신장 손상을 가한 후의 총 혈액 손실량을 나타낸 것이다. 나타낸 데이터는 범위가 있는 중앙값이다. 약어: PCC (프로트롬빈 복합 농축물), ATIII (항트롬빈 III);
도 3는 식염수 (위약), PCC, ATIII 또는 PCC와 ATIII의 조합으로 치료 후, 혈액희석된 토끼에서 표준형 신장 손상을 가한 후의 지혈까지 걸린 시간을 나타낸 것이다. 나타낸 데이터는 범위가 있는 중앙값이다. 약어: PCC (프로트롬빈 복합 농축물), ATIII (항트롬빈 III);
도 4a는 식염수 (위약), PCC 또는 PCC와 ATIII의 조합을 이용한 치료 하에 토끼에서 정맥 혈전증 이후 혈전 점수를 나타낸 것이다. 나타낸 데이터는 범위가 있는 중앙값이다. 약어: PCC (프로트롬빈 복합 농축물), ATIII (항트롬빈 III);
도 4b는 식염수 (위약), PCC 또는 PCC와 ATIII의 조합을 이용한 치료 하에 토끼에서 정맥 혈전증 이후 혈전 습윤 중량을 나타낸 것이다. 나타낸 데이터는 범위가 있는 중앙값이다. 약어: PCC (프로트롬빈 복합 농축물), ATIII (항트롬빈 III);
도 5는 돼지에 있어서 2차 간손상 후 총 혈액 손실량을 나타낸 것이다. PCC와 ATIII의 조합은 대조군 및 단일요법인 PCC50 치료군에 비해 혈액 손실량을 감소시켰다;
도 6은 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 곡선으로 나타낸 돼지의 생존 데이터를 나타낸 것이다.
도 7은 돼지의 평균 폐압 데이터 (MPAP)를 나타낸 것이다 (평균 ± 표준 편차).
도 8은 돼지에 있어서 외상 및 출혈성 쇼크 후 시간의 경과에 따른 항트롬빈 농도를 나타낸 것이다 (평균 ± 표준 편차).
도 9는 돼지에 있어서 외상 및 출혈성 쇼크 후 시간의 경과에 따른 피브리노겐 농도를 나타낸 것이다 (평균 ± 표준 편차).
도 10은 돼지에 있어서 외상 및 출혈성 쇼크 후 시간의 경과에 따른 D-이량체를 나타낸 것이다 (평균 ± 표준 편차);
도 11은 돼지에 있어서 외상 및 출혈성 쇼크 후 시간의 경과에 따른 트롬빈 생성을 나타낸 것이다 (평균 ± 표준 편차).
도 12는 돼지에 있어서 외상 및 출혈성 쇼크 후 시간의 경과에 따른 프로트롬빈 시간 (PT)을 나타낸 것이다 (평균 ± 표준 편차).
도 13은 돼지에 있어서 외상 및 출혈성 쇼크 후 시간의 경과에 따른 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 (aPTT)을 나타낸 것이다 (평균 ± 표준 편차).

정의

달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야의 통상적인 숙련가에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 균등한 임의의 방법과 재료들을 본 발명의 실시 또는 시험에 사용할 수 있으나, 바람직한 방법과 재료들을 기술할 것이다. 본 발명의 목적을 위해, 하기 용어들을 아래에 정의한다.

단수형 관사 ("a" 및 "an")는 본원에서 하나 또는 하나 이상 (즉, 적어도 하나)의 해당 관사의 문법적 대상을 지칭하는데 사용된다. 예로서, "구성요소"는 하나의 구성요소 또는 하나 이상의 구성요소를 의미한다.

"약"이라는 것은 기준이 되는 양, 수준, 값, 수, 빈도, 비율, 치수, 크기, 양, 중량, 길이, 또는 본원에 기술된 다른 단위에 대하여 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1% 가량 변화하는 양, 수준, 값, 수, 빈도, 비율, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이를 의미한다.

본 발명에 따른 "항트롬빈 III (ATIII)"은 기능성 혈장 단백질가수분해효소 억제제 ATIII, 특히 분리된, 즉 정제된, 기능성 ATIII이다. ATIII은 바람직하게는 인간 ATIII이다.

본 발명에 따른 "응고 인자"는 기능성 응고 인자, 특히 분리된, 즉 정제된, 기능성 응고 인자이다. 상기 응고 인자는 바람직하게는 인간 응고 인자이다.

본 명세서 전반에 걸쳐, 문맥상 달리 해석해야 할 경우가 아니라면, "포함하다", "포함하는" 및 "포함하고"와 단어는 언급된 단계 또는 구성요소, 또는 상기 단계들 또는 구성요소들의 그룹을 포함하며, 임의의 다른 단계 또는 구성요소, 또는 상기 단계들 또는 구성요소들의 그룹을 포함하는 것으로 이해해야 한다.

"~로 이루어지는"이라는 것은 해당 "~로 이루어지는"이라는 말에 뒤따르는 것들을 포함하면서 그들에 한정됨을 의미한다. 따라서, "~로 이루어지는"이라는 말은 열거된 구성요소들이 필요하거나 필수적이며, 다른 구성요소들은 존재할 수 없다는 것을 의미한다. "본질적으로 ~로 이루어지는"이라는 말은 해당 어구 뒤에 열거되는 임의의 구성요소들을 포함하면서, 상기 열거된 구성요소들에 대하여 본 발명에 구체화된 활성 또는 작용에 기여하거나 이를 방해하지 않는 다른 구성요소들에 한정됨을 의미한다. 따라서, "본질적으로 ~로 이루어지는"이라는 말은, 열거된 구성요소들은 필요하거나 필수적이고, 다른 성분들은 선택적인 것들이어서 이들이 열거된 구성요소들의 활성 또는 작용에 실질적으로 영향을 미치는 지의 여부에 따라서 존재하거나 존재하지 않을 수도 있음을 의미한다.

본 발명에서 말하는 소위 "분리된"이라는 것은, 각각의 응고인자, 또는 응고인자들 또는 ATIII의 혼합물이 인간 혈장으로부터 정제 (혈장 유래)되었거나, 또는 재조합적으로 제조되는 경우에는, 배양 배지로부터 정제되었음을 의미한다. 본 발명에서 말하는 소위 "정제된"이라는 것은, 각각의 응고인자, 또는 응고인자들 또는 ATIII의 혼합물이 얻어진 본래의 용액에 비해, 전체 단백질 함량 1 ㎎당 상기 응고인자, 또는 응고인자들 또는 ATIII의 혼합물의 보다 높은 생물학적 활성을 유도하거나, 또는 환자에게 최종적으로로 투여되는 액체 1 ㎖당 상기 응고인자 또는 응고인자들 또는 ATIII의 혼합물의 보다 높은 생물학적 활성을 유도하는 임의의 정제 유형을 의미한다.

1 국제 단위 ("IU")의 응고 인자 또는 ATIII의 활성은 정상적인 인간 혈장 1 mL 중의 각각의 응고 인자 또는 ATIII의 양에 해당한다.

본 발명의 혈액 응고 인자 대체품은 변형된 프로트롬빈 복합 농축물 (PCC)로 제공되어 그와 같이 지칭할 수도 있다. 본 발명에서 변형된 프로트롬빈 복합 농축물 (PCC)은 적어도 분리된 응고 인자 FII, FIX, FX (본원에서 3-인자 복합체로도 지칭함) 또는 분리된 응고 인자 FII, FIX, FX 및 FVII (본원에서 4-인자 복합체로도 지칭한)의 병용물을 포함한다. 본 발명에 따른 변형된 PCC는 - 선행 기술에 공지된 PCC, 즉 종래의 PCC와는 대조적으로 - 추가로 적어도 항트롬빈 III (ATIII)을 포함하, 이 경우 ATIII : 인자 II의 몰비는 적어도 1 : 30이다. 변형된 PCC의 분리된 응고 인자 FII, FIX, FX 및 FVII는 인간 혈액으로부터 유래될 수 있거나, 또는 이러한 PCC는 재조합적으로 발현된 응고 인자들로부터 재구성될 수 있으며, 여기서 항원의 비율 및 상기 재조합적으로 발현된 응고 인자 FVII, FIX, FX 및 FVII의 활성은 혈액에서 유래된 PCC와 상응하나, 단, 변형된 PCC는 적어도 항트롬빈 III (ATIII)을 추가로 포함하고, 이 경우 ATIII : 인자 II의 몰비는 적어도 1　:　30이다.

본 발명의 혈액 응고 인자 대체품은, 액체 내에 존재하는 각 개별 응고 인자, 또는 냉동건조로 저장하는 경우, 주사 전 재구성 후 상기 액체 내에 존재하는 각 개별 응고 인자를 망라한다. 달리 언급하지 않는 한, 본 발명의 대체품과 함께 제공된 응고 인자의 농도 (특히 IU/mL)는, 액체 내에 존재하는 응고 인자의 농도, 또는 냉동건조로 저장하는 경우, 주사 전 재구성 후 상기 액체 내에 존재하는 응고 인자의 농도를 지칭한다.

본 발명의 대체품이 투여되는 "환자" 또는 "대상체"는 동물 또는 인간, 바람직하게는 인간이다. 특정 양태에서, 상기 인간은 소아 환자이다. 다른 양태에서, 상기 인간은 성인 환자이다.

"실질적으로" 또는 "본질적으로"이라는 것은 거의 모두가 또는 완전히, 예를 들어, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 일부 주어진 양을 의미한다.

응고 인자

기능성 응고 인자 II (FII)는 트롬빈의 비활성 효소전구체 (FIIa)인 프로트롬빈의 생물학적 활성을 나타낸다. 응고 캐스케이드의 활성화 후에, 프로트롬빈의 트롬빈으로의 전환이 일어나며, 응고 시스템에서 후자의 다중 활성화 작용은 특히 피브리노겐의 피브린으로의 전환, 응고 인자 XIII (FXIII)의 활성화된 응고 인자 XIII (XIIIa)으로의 활성화, FV 및 FVIII의 FVa 및 FVIIIa로의 활성화, 트롬빈 수용체의 부분 단백질가수분해 후의 혈소판 활성화를 포함한다.

기능성 응고 인자 IX (FIX)는 응고 활성화시 활성 FIXa로 전환되는 비활성 FIX의 생물학적 활성을 나타낸다. FIXa는 이의 보조효소인 FVIIIa와 복합체를 형성하고, 이것이 테나제 복합체이며, 이는 비활성 FX를 이의 활성 형태인 FXa로 분해시킨다.

기능성 응고 인자 X (FX)는 응고 활성화 후, 활성 FXa로 전환되는 비활성 FX의 생물학적 활성을 나타낸다. FXa는 이의 보조효소인 FVa와 프로트롬비나제 복합체를 형성하고, 이 복합체는 비활성 프로트롬빈 (FII)을 활성 트롬빈 (FIIa)으로 분해시킨다.

기능성 응고 인자 FVII (FVII)는 응고 활성화 동안 활성 FVIIa로 전환되는 비활성 FVII의 생물학적 활성을 나타낸다. FVIIa는 조직 인자와 함께 비활성 FX를 활성 FXa로 전환시킨다. 추가로, FVIIa는 비활성 FIX를 활성 FIXa로 전환시킬 수 있다.

상기 논의한 응고 인자의 활성은 문헌 [L. Thomas: Clinical Laboratory Diagnostics, TH-Books, Frankfurt, 1998, Chapter 17]에 따라 측정할 수 있다.

본원에 사용된 응고 인자들은 인간 혈장 또는 혈청에서 수득할 수 있거나, 재조합적으로 얻을 수도 있다.

본 발명에 사용된 바와 같은 응고 인자들은 본래의 인간의 응고 인자의 아미노산 서열을 함유하는 단백질을 포함한다. 또한, 해당 단백질이 응고 인자의 활성을 실질적으로 보유하는 한, 아미노산 서열이 약간 변형된 응고 인자, 예를 들어, N-말단 아미노산 결실 또는 부가를 비롯한 변형된 N-말단 종단부를 갖는 응고 인자도 포함된다. 상기 정의 내에서 응고 인자는, 한 개체에서 존재하여 또 다른 개체로 발생할 수 있는 천연 대립유전자 변이체들도 포함한다. 상기 정의 내에서 응고 인자는 이러한 응고 인자들의 변이체를 추가로 포함한다. 이러한 변이체들은 야생형 서열과 하나 이상의 아미노산 잔기들에 있어서 서로 다르다. 이러한 차이의 예로는, N- 및/또는 C-말단에서 하나 이상의 아미노산 잔기 (예컨대, 1개 내지 10개 아미노산 잔기)의 절단, 또는 N- 및/또는 C-말단에서 하나 이상의 추가의 잔기의 부가, 예컨대, N-말단에서 메티오닌 잔기의 부가, 및 보존적인 아미노산 치환, 즉 유사한 특성들을 지니는 아미노산의 그룹, 예컨대, (1) 작은 아미노산, (2) 산성 아미노산, (3) 극성 아미노산, (4) 염기성 아미노산, (5) 소수성 아미노산, (6) 방향족 아미노산의 그룹 내에서 수행되는 치환을 포함할 수 있다. 이러한 보존적 치환의 예를 하기 표에 나타내었다.

본 발명에 사용된 기능성 응고 인자는 상기 기술한 바와 같이 용액 내 및/또는 세포 표면 상에서 생물학적 활성을 나타내는 응고 인자 분자를 포함한다.

용어 "재조합"은, 예를 들어, 상기 응고 인자 또는 응고 인자 변이체를 유전공학 기법에 의해 숙주 유기체에서 제조하였다는 것을 의미한다.

본 발명의 숙주 세포는 인간의 응고 인자의 제조 방법에 사용할 수 있다. 상기 방법은 하기 단계를 포함한다:

(a) 하나 이상의 인간 응고 인자가 발현되도록 하는 조건 하에 본 발명의 숙주 세포를 배양하는 단계; 및

(b) 임의로, 상기 숙주 세포 또는 배양 배지로부터 하나 이상의 인간 응고 인자를 회수하는 단계.

글리코실화 또는 기타 번역후 변형의 정도와 위치는 선택된 숙주 세포 및 해당 숙주 세포 환경의 특성에 따라 달라질 수 있다. 구체적인 아미노산 서열을 언급하는 경우, 이러한 서열의 번역후 변형도 본 출원에 포함된다.

적당한 숙주 세포 내에서 재조합 단백질들을 높은 수준으로 제조하는데 있어서는, 당업계의 숙련자들에게 공지된 방법에 따른 다양한 발현 시스템에서 증식될 수 있는 재조합 발현 벡터 내에서 적당한 조절 요소들과 함께, 상기 언급한 변형된 cDNA를 효과적인 전사 유닛으로 조립할 필요가 있다. 효과적인 전사 조절 요소들은 그들의 천연 숙주로서 동물 세포를 갖는 바이러스로부터, 또는 동물 세포의 염색체 DNA로부터 유도될 수 있다. 바람직하게는, 시미안(Simian) 바이러스 40, 아데노바이러스, BK 폴리오마 바이러스, 인간 사이토메갈로바이러스, 또는 로우스(Rous) 사코마 바이러스의 긴 말단 반복으로부터 유도된 프로모터-인핸서 조합, 또는 베타-액틴 또는 GRP78과 같이 동물 세포 내에서 구성적으로 강하게 전사된 유전자들을 포함하는 프로모터-인핸서 조합이 사용될 수 있다. cDNA로부터 전사된 안정적인 높은 수준의 mRNA를 얻기 위해서는, 상기 전사 유닛은 전사 종결-폴리아데닐화 서열을 암호화하는 DNA 영역을 그의 3'-근위부에 함유하여야 한다. 바람직하게는, 이 서열은 시미안 바이러스 40 초기 전사영역, 토끼 베타-글로빈 유전자, 또는 인간 조직 플라스미노겐 활성화제 유전자로부터 유도된다.

이후, 상기 cDNA는 응고 인자의 발현을 위한 적절한 숙주 세포주의 유전체로 통합시킨다. 바람직하게는, 상기 세포주는 배양 배지로의 분비 뿐만 아니라 정확한 폴딩, Gla-도메인 합성, 이황화 결합 형성, 아스파라긴 결합된 글리코실화, O-결합된 글리코실화 및 기타 번역후 변형을 담보하기 위해서 척추동물 기원의 동물 세포주이어야 한다. 기타 번역후 변형들에 대한 예로는 초기 폴리펩타이드 사슬의 수산화 및 단백질 가수분해 처리를 들 수 있다. 사용될 수 있는 세포주의 예로는 원숭이 COS-세포, 마우스 L-세포, 마우스 C127-세포, 햄스터 BHK-21 세포, 인간 배아 신장 293 세포를 들 수 있으며, 바람직하게는 햄스터 CHO-세포를 사용할 수 있다. 상기 복잡한 번역후 변형으로 인하여, 재조합 응고 인자는 바람직하게는 인간의 세포주에서 발현시킨다.

상응하는 cDNA를 암호화하는 재조합 발현 벡터는 여러가지 다른 방식으로 동물 세포주에 도입될 수 있다. 예를 들어, 재조합 발현 벡터는 서로 다른 동물 바이러스들을 기반으로 한 벡터들로부터 생성될 수 있다. 이러한 것의 예로는 배큘로바이러스, 백시니아 바이러스, 아데노바이러스 및 바람직하게는 소 유두종 바이러스를 기반으로 한 벡터들이다.

상응하는 DNA를 암호화하는 전사 유닛도, 유전체에 재조합 DNA를 포함시킨 특정 세포 클론들의 분리를 용이하게 하기 위해, 상기 세포들 내에서 우성 선택성 마커로서 작용할 수 있는 또 다른 재조합 유전자와 함께 동물 세포 내로 도입시킬 수 있다. 상기 유형의 우성 선택성 마커 유전자의 예로는 게네티신(G418)에 대한 내성을 부여하는 Tn5 아미노 글리코시드 포스포트랜스퍼라제, 하이그로마이신에 대한 내성을 부여하는 하이그로마이신 포스포트랜스퍼라제, 및 퓨로마이신에 대한 내성을 부여하는 퓨로마이신 아세틸 트랜스퍼라제를 들 수 있다. 이러한 선택성 마커를 암호화하는 재조합 발현 벡터는 원하는 단백질의 cDNA를 암호화하는 벡터와 동일한 벡터 상에 존재할 수 있거나, 또는 이는 숙주 세포의 유전체에 동시에 도입 및 통합되는 별도의 벡터 상에서 암호화될 수 있어, 서로 다른 전사 유닛들 간에 치밀한 물리적 결합을 생성하는 경우가 많다.

원하는 단백질의 cDNA와 함께 사용될 수 있는 다른 유형의 선택성 마커 유전자들은 디하이드로폴레이트 리덕타아제(dhfr)를 암호화하는 다양한 전사 유닛들을 기반으로 한다. 이러한 유형의 유전자를 내인성 dhfr 활성이 결여된 세포, 바람직하게는 CHO 세포 (DUKX-B11, DG-44)에 도입한 후에는, 뉴클레오시드가 결여된 배지 중에서 이들을 증식시킬 수 있을 것이다. 이러한 배지의 예로는 하이폭산틴, 티미딘 및 글리신이 없는 햄(Ham's) F12를 들 수 있다. 이러한 dhfr 유전자들은 동일한 벡터 상에서, 또는 서로 다른 벡터 상에서 결합된, 상기 유형의 CHO 세포 내로 응고 인자의 cDNA 전사 유닛과 함께 도입될 수 있어서, 재조합 단백질을 생성하는 dhfr-양성 세포주를 형성하게 된다.

상기 세포주들이 세포독성 dhfr-억제제 메토트렉세이트의 존재 하에 성장하는 경우, 메토트렉세이트에 대한 내성이 있는 새로운 세포주들이 출현할 것이다. 이러한 세포주들은 증폭된 수의 결합된 dhfr 및 원하는 단백질의 전사 유닛들로 인해 재조합 단백질을 증가된 비율로 생성할 수 있다. 증가하는 농도의 메토트렉세이트(1-10000nM)에서 이러한 세포주들을 증식시키는 경우, 원하는 단백질을 매우 높은 비율로 생성하는 새로운 세포주들이 수득될 수 있다.

목적하는 단백질을 생성하는 상기 세포주들은 현탁액 배양물 내에서 또는 다양한 고체 지지체 상에서 대규모로 증식될 수 있다. 이러한 지지체들의 예로는 덱스트란 또는 콜라겐 매트릭스에 기초한 미세담체, 또는 중공 섬유 또는 다양한 세라믹 재료 형태의 고체 지지체들을 들 수 있다. 세포 현탁액 배양물 내에서, 또는 미세담체 상에서 증식되는 경우, 상기 세포주들의 배양은 장시간에 걸쳐 컨디셔닝된 배지를 연속적으로 제조하면서 욕조(bath) 배양으로 또는 관류 배양으로 수행될 수 있다. 따라서, 본 발명에 따르면, 상기 세포주들은 원하는 재조합 단백질들을 제조하기 위한 산업적 방법을 개발하는데 매우 적합하다.

상기 유형의 분비성 세포들의 배지 내에 축적하게 되는 재조합 단백질은 세포 배양 배지 내에서 원하는 단백질과 다른 물질들 간의 크기, 전하, 소수성, 용해도, 특이적 친화도 등의 차이를 이용하는 방법을 비롯한 다양한 생화학적 방법 및 크로마토그래피 방법들에 의해 농축 및 정제될 수 있다.

이러한 정제의 예로는 고체 지지체 상에 고정되는, 단일클론 항체에 대한 재조합 단백질의 흡착을 들 수 있다. 탈착 후, 상기 단백질은 상기 특성들에 기초한 다양한 크로마토그래피 기법들에 의해 추가로 정제될 수 있다.

재조합 방법에 의해 제조되거나, 인간 혈장으로부터 수득되는지와 무관하게, 본 발명의 응고 인자를 ≥60% 순도, 보다 바람직하게는 ≥80% 순도로 정제하는 것이 바람직하며, 오염성 거대 분자, 특히 다른 단백질과 핵산과 관련하여 95% 초과의 순도이고, 감염원 및 발열원이 없는 약학적으로 순수한 상태가 특히 바람직하다.

본 발명에 기술된 바와 같은 응고 인자는 치료적 용도를 위한 약학적 제제로 제조될 수 있다. 정제된 단백질은 임의로 약제학적 부형제가 첨가될 수 있는 생리학적으로 적합한 통상의 완충 수용액에 용해시켜 약제학적 제제를 제공할 수 있다.

이러한 약학적 담체와 부형제 및 적절한 약학적 제제들은 당업계에 널리 알려져 있다 (예를 들어, 문헌 ["Pharmaceutical Formulation Development of Peptides and Proteins", Frokjaer et al., Taylor & Francis (2000)] 또는 ["Handbook of Pharmaceutical Excipients", 3^rd edition, Kibbe et al., Pharmaceutical Press (2000)] 참조). 특히, 본 발명의 폴리펩타이드 변이체를 포함하는 약학적 조성물은 냉동건조된 형태 또는 안정한 가용성 형태로 제제화될 수 있다. 상기 폴리펩타이드 변이체는 당업계에 공지된 다양한 과정들에 의해 냉동건조될 수 있다. 동결건조된 제제들은 주사용 멸균수 또는 멸균 생리식염용액과 같은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 희석제들을 첨가하여 사용하기 전에 재구성된다.

조성물의 제제는 임의의 약학적으로 적합한 투여 수단에 의해 개체에게 전달된다. 다양한 전달 시스템들이 공지되어 있어, 임의의 편리한 경로에 의해 상기 조성물을 투여하는데 사용될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 조성물은 전신 투여된다. 전신적 사용을 위해, 본 발명의 응고 인자는 종래 방법에 따른 비경구적 (예컨대, 정맥내, 피하, 근육내, 복강내, 뇌내, 폐내, 비강내, 경피 또는 질내) 또는 장내 (예컨대, 경구 또는 직장내) 전달을 위해 제형화된다. 가장 우선적인 투여 경로는 정맥내 및 피하 투여이다. 제제는 주입 또는 볼루스 주사에 의해 연속적으로 투여될 수 있다. 일부 제제들은 서방형 시스템을 포함한다.

본 발명의 응고 인자는 허용되지 않는 유해 부작용을 일으키는 용량에 도달하지 않으면서, 치료 중인 병태 또는 증상의 중증도 또는 확산을 예방하거나 경감시키고, 목적하는 효과를 달성하기에 충분한 용량을 의미하는 치료학적 유효 용량으로 환자에게 투여된다. 정확한 용량은 여러가지 요인들, 예컨대 증상, 제제 및 투여 방법에 따라 달라서, 각 개별 증상에 대한 임상전 및 임상 실험에서 측정되어야 한다.

항트롬빈 III (ATIII)

기능성 항트롬빈 III (ATIII)은 혈장 단백질가수분해효소 억제제 항트롬빈 III의 생물학적 활성을 나타낸다. 인간 ATIII은 432개의 아미노산을 갖는 분자량이 약 58　kDa인 당단백질이다. 상기 혈장 단백질가수분해효소 억제제 ATIII은 트롬빈 및 트롬빈의 생성을 담당하는 효소를 비활성화시킨다. ATIII은 세르핀 유전자계의 구성원에 대한 구조적 및 기능적 상동성의 서열을 나타낸다. 세르핀은 자멸 기질 억제 기전을 통해 이들의 표적 효소를 억제한다. ATIII은 특히 트롬빈, 활성화된 인자 X (FXa) 및 활성화된 인자 IX (FIXa)를 억제한다.

본 발명에 사용된 바와 같은 항트롬빈 III (ATIII)은 바람직하게는 본래의 인간 ATIII의 아미노산 서열을 함유하는 단백질을 포함한다. 또한, 해당 단백질이 ATIII의 활성을 실질적으로 보유하는 한, 아미노산 서열이 약간 변형된 ATIII, 예를 들어, N-말단 아미노산 결실 또는 부가를 비롯한 변형된 N-말단 종단부를 갖는 ATIII도 포함된다. 상기 정의 내에서 ATIII는, 한 개체에서 존재하여 또 다른 개체로 발생할 수 있는 천연 대립유전자 변이체들도 포함한다. 상기 정의 내에서 ATIII는 이러한 ATIII의 변이체를 추가로 포함한다. 이러한 변이체들은 야생형 서열과 하나 이상의 아미노산 잔기들에 있어서 서로 다르다. 이러한 차이에 대한 예로는 상기 응고 인자에 대하여 제시되어 있다. 본 발명에 사용된 기능성 ATIII는 상기 기술한 바와 같이 용액 내 및/또는 세포 표면 상에서 생물학적 활성을 나타내는 ATIII 분자를 포함한다. 용어 "재조합"은, 예를 들어, 이미 위에서 기술한 바와 같이, 상기 ATIII 또는 ATIII 변이체를 유전공학 기법에 의해 숙주 유기체에서 제조하였다는 것을 의미한다.

몰비

본 발명에 따르면, 프로트롬빈 (인자 II) 및 항트롬빈 III (ATIII)은 이를 필요로 하는 환자의 치료에 적어도 약 1 : 30의 투여된 ATIII : 투여된 인자 II의 몰비로 사용된다. 따라서, 본 발명에 따른 적어도 약 1 : 30의 ATIII : 인자 II의 몰비는 특히 본원에서는 ATIII의 하한치로 이해한다.

본 발명의 대체품은 적어도 프로트롬빈 (인자 II) 및 항트롬빈 III (ATIII)을 포함하고, 이 경우 ATIII : 인자 II의 몰비는 적어도 1 : 30이다. 임의의 이론에 구속되고자 하는 것은 아니지만, 프로트롬빈에 대한 상기 ATIII의 최소한의 몰 수준은 특히 프로트롬빈의 활성화시, 충분한 ATIII 분자들이 과량의 트롬빈 또는 인자 Xa와 결합할 수 있어서, 과량의 트롬빈 생성 및/또는 피브린 형성을 제한하기 때문에, 따라서 혈전색전증 사건, 즉 혈전색전성 합병증의 위험을 최소화하거나 억제하는 것으로 생각된다. 따라서, 상기 ATIII 수준은 결과적으로 치료제 또는 제품의 개선된 안전성을 담보할 수 있도록 해 준다. 추가의 바람직한 실시양태에 따른 ATIII : 인자 II의 몰비는 적어도 1 : 29, 적어도 1 : 28, 적어도 1 : 27, 적어도 1 : 26, 적어도 1 : 25, 적어도 1 : 24, 적어도 1 : 23, 적어도 1 : 22, 적어도 1 : 21, 적어도 1 : 20, 적어도 1 : 19, 적어도 1 : 18, 적어도 1 : 17, 적어도 1 : 16, 적어도 1 : 15, 적어도 1 : 14, 적어도 1 : 13, 적어도 1 : 12, 적어도 1 : 11, 또는 심지어 적어도 1 : 10이다.

바람직한 실시양태에 따른 ATIII : 인자 II의 몰비는 약 1 : 0.5보다 크지 않다. 임의의 이론에 구속되고자 하는 것은 아니지만, 프로트롬빈에 대한 상기 ATIII의 몰 수준의 상한치는 특히 프로트롬빈의 활성화시, 충분히 많은 트롬빈이 있어서 피브리노겐의 피브린으로의 반응을 촉진하는 것으로 생각된다. 따라서, 상기 ATIII 수준은 적절한 트롬빈 생성, 피브린 형성을 담보함으로써 결과적으로는 적절한 효능을 제공한다. 추가의 바람직한 실시양태에 따른 ATIII : 인자 II의 몰비는 약 1 : 1보다 크지 않다. 추가의 바람직한 실시양태에 따른 ATIII : 인자 II의 몰비는 약 1 : 2보다 크지 않다.

ATIII의 상기 임의의 하한치는 ATIII의 상기 임의의 상한치와 조합될 수 있다.

더 바람직하게는, ATIII : 인자 II의 몰비는 1 : 30 내지 1 0.5 범위 내, 바람직하게는 1 : 10 내지 1 : 0.5이다. 더 바람직하게는, ATIII : 인자 II의 몰비는 1 : 30 내지 1 : 1 범위, 바람직하게는 1 : 10 내지 1 : 1이다. 추가의 바람직한 실시양태에 따르면, ATIII : 인자 II의 몰비는 1 : 10 내지 1 : 2 범위이다.

본 발명에 따른 임의의 몰비는 각 단백질의 몰 농도의 비율을 가리킨다.

본 발명에서의 몰비는 투여될 단백질의 투여 전, 특히 혈액 응고 인자 대체품 내에서의 몰 농도에 대하여 형성된다. 환자는 이미 투여될 하나 이상의 단백질의 특정한 내인성 수준을 보유하고 있는 상황이기 때문에, 생체 내에서 생성되는 몰비는 본 발명에 따른 단백질의 몰비와는 다를 수 있다.

더 바람직하게는, ATIII : 인자 II의 몰비는 1 : 30 내지 1 0.5 범위 내, 바람직하게는 1 : 28 내지 1 : 0.5 범위, 1 : 25 내지 1 : 0.5, 1　:　24 내지 1 : 0.5 범위, 1 : 23 내지 1 : 0.5 범위, 1 : 22 내지 1 : 0.5 범위, 1 : 21 내지 1 : 0.5 범위, 1 : 20 내지 1 : 0.5 범위, 1 : 18 내지 1 : 0.5 범위, 1 : 15 내지 1 : 0.5 범위, 1 : 12 내지 1 0.5 범위, 또는 1 : 10 내지 1 : 0.5 범위이다.

더 바람직하게는, ATIII : 인자 II의 몰비는 1 : 30 내지 1 1 범위 내, 바람직하게는 1 : 28 내지 1 : 1 범위, 1 : 25 내지 1 : 1 범위, 1 : 24 내지 1 : 1 범위, 1 : 23 내지 1 : 1 범위, 1 : 22 내지 1 : 1 범위, 1 : 21 내지 1 : 1 범위, 1 : 20 내지 1 1 범위, 1 : 18 내지 1 : 1 범위, 1 : 15 내지 1 : 1 범위, 1 : 12 내지 1 : 1 범위, 또는 1 : 10 내지 1 : 1 범위이다.

더 바람직하게는, ATIII : 인자 II의 몰비는 1 : 30 내지 1 2 범위 내, 바람직하게는 1 : 28 내지 1 : 2 범위, 1 : 25 내지 1 : 2 범위, 1 : 24 내지 1 : 2 범위, 1 : 23 내지 1 : 2 범위, 1 : 22 내지 1 : 2 범위, 1 : 21 내지 1 : 2 범위, 1 : 20 내지 1 2 범위, 1 : 18 내지 1 : 2 범위, 1 : 15 내지 1 : 2 범위, 1 : 12 내지 1 : 2 범위, 또는 1 : 10 내지 1 : 2 범위이다.

본 발명에 따른 치료에 대한 추가의 상세한 설명을 하기에 더 설명한다.

ATIII : FII의 몰비는 본원에서 바람직하게는 하기의 가정을 기초로 계산한다:

- ATIII의 분자량 = 58,000 Da

- FII의 분자량 = 72,000 Da

- ATIII의 혈장 농도 = 2.4 μmol/L (건강한 대상체)

- FII의 혈장 농도 = 1.4 μmol/L (건강한 대상체)

- 1 IU/kg ATIII = 140 μg/kg = 2.4 nmoles/kg ATIII

- 1 IU/kg FII = 90 μg/kg FII = 1.25 nmoles/kg FII

- 1 IU ATIII : 1 IU FII은 1.92몰의 ATIII : 1몰의 FII와 같으므로, 약 2몰의 ATIII : 1몰의 FII와 같다.

헤파린

본 발명에 따른 "헤파린"은 기능성 헤파린, 특히 분리된, 즉 정제된, 기능성 헤파린이다. 기능성 헤파린은 ATIII에 대한 보조인자의 생물학적 활성을 나타낸다. 헤파린과 HSPG (헤파린 설페이트 프로테오글리칸)는 ATIII에 대하여 각각 약학적 보조인자 및 생리학적 보조인자로서 작용한다. 본 발명의 기능성 헤파린은 ATIII의 활성화에 적절한 당업계에 널리 공지된 특별한 5당류 서열을 포함한다. 트롬빈, 활성화된 인자 X (FXa) 및 활성화된 인자 IX (FIXa)에 대한 ATIII의 억제율은 헤파린에 의해 가속화된다.

기능성 헤파린은 미분획 헤파린 (UFH), 저분자량 헤파린 (LMWH) 및 합성 5당류 인자 Xa 억제제 또는 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. UFH가 본원에 기술한 용도를 위해 바람직한 유형의 헤파린이다. FXa의 억제를 위한 ATIII의 헤파린 매개형 활성화를 위해서는, 상기 특별한 5당류 서열이면 충분하다. 그러나, ATIII에 의해 가속화된 트롬빈 억제를 위해서는, 적어도 18개의 당류 단위의 헤파린이 필요하다. UFH는, 특히, 헤파린에 의한 ATIII 트롬빈 억제의 증폭을 의도한 경우에, 본원에 기술한 용도를 위해 바람직한 유형의 헤파린이다.

본 발명에 따른 혈액 응고 인자 대체품은 헤파린을 포함할 수 있으며, 이 경우 상기 헤파린은 바람직하게는 0.1 - 10 IU/mL, 0.2 - 5.0 IU/mL, 0.2 - 3.0 IU/mL, 바람직하게는 0.4 - 2.0 IU/mL의 활성 수준으로 상기 대체품 내에 제공된다.

알부민

본 발명에 따른 혈액 응고 인자 대체품은, 추가로 알부민을 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 알부민은 특히 분리된, 즉 정제된, 알부민 단백질이다. 상기 알부민은 바람직하게는 인간 알부민이다. 상기 알부민은 바람직하게는 혈장 유래의 단백질이다.

혈액 손실량

본원에 사용된 혈액 손실량은 관찰 기간 동안 수집된 조직 손상으로 발생한 혈액의 총 부피이다.

혈전 점수

본원에 사용된 혈전 점수는 정맥 울혈이 발생하고 30분 후 절개한 정맥 분절에서 나온 혈전/혈전들의 크기와 양을 나타낸다. 혈전 점수는 혈전색전증 사건의 위험에 대한 대용 마커로 사용된다.

0점 - 혈전 없음

1점 - 습윤 중량을 측정할 수 없는 하나 또는 수개의 작은 혈전

2점 - 습윤 중량을 측정할 수 있는 하나 또는 수개의 혈전

3점 - 완전 폐색성 혈전

혈전 습윤 중량

혈전 습윤 중량은 정맥 울혈이 발생하고 30분 후 절개한 정맥 분절에서 나온 혈전의 습윤 중량으로서, 감지된 혈전에 대해 추가로 특성을 부여한다.

D-이량체

D-이량체 (또는 D 이량체)는 혈액이 피브린용해로 분해된 후 혈액 중에 존재하는 작은 단백질 단편인 피브린 분해 생성물 (또는 FDP)이다. D-이량체는, 예를 들어 혈전증 또는 파종성 혈관내 응고 (DIC)의 존재로 인해 응고 시스템이 활성화되었을 경우를 제외하고는 인간 혈액 혈장 중에는 통상 존재하지 않는다.

지혈까지의 시간

지혈까지의 시간은 적용된 관찰 기간 내에 조직 손상을 가한때부터 출혈의 완전한 중지까지 시간을 나타내며, 시험된 본 발명의 개입의 지혈 효능에 대한 직접적인 지표로서 사용된다.

후천성 응고 인자 결핍증

본 발명에 따른 후천성 응고 인자 결핍증은 특히 후천성 프로트롬빈 복합 인자 결핍증, 바람직하게는 비타민 K 결핍증에 의해 야기되거나 경구용 항응고제의 과다복용에 의해 초래된 후천성 프로트롬빈 복합 인자 결핍증이다. 프로트롬빈 복합 인자의 합성과정에 문제가 생기면 간 기능장애 또는 간이식의 결과를 초래할 수 있다. 본원에 기술된 치료는 환자가 출혈이 있거나 수술이 예정되어 있는 경우에 특히 유리하다. 이러한 모든 상황들에서, 본 발명의 혈액 응고 인자 대체품의 투여는 유용할 수 있다. 경구용 항응고제를 복용하는 환자들은 혈전색전증에 대한 증가된 소인을 나타내므로, 본 발명의 혈액 응고 인자 대체품을 이용한 치료는 본원에 기술한 혈전색전성 합병증에 대한 환자의 위험이 감소되기 때문에 특히 유리하다. 본 발명에서 말하는 경구용 항응고제는 특히 경구용 비타민 K 길항제 또는 직접 작용성 경구용 항응고제 (DOAC/NOAC)를 포함한다.

본 발명에 따른 후천성 응고 인자 결핍증은, 추가의 양태에 따르면 소모성 응고병증으로도 알려진 파종성 혈관내 응고병증 (DIC)의 결과를 초래할 수 있다. DIC는 신체 전반에 걸쳐 소혈관에서의 혈전 형성 및 피브린의 생성과 침착을 유발하는 응고 캐스케이드의 광범위한 활성화를 특징으로 하는 병리학적 진행과정이다. 이는 다양한 장기에서 미세혈관 혈전을 초래할 수 있으며, 장기 기능장애 증후군 및 다발성 장기 부전의 원인이 된다. 또한, 응고 과정이 응고 인자와 혈소판을 소비함에 따라, 정상적인 응혈이 문제가 생겨 다양한 부위에서 확산성 출혈이 발생할 수 있다. 피브린용해 시스템의 교란은 추가로 혈관내 혈전 형성의 원인이 되고, 어떤 경우에는, 가속화된 피브린용해로 인해 심각한 출혈이 초래될 수도 있다. 국제혈전지혈 학회의 DIC에 대한 분과위원회는 DIC에 대하여 하기의 정의를 제안한 바 있다: "서로 다른 원인들로 발생한, 국소화 특성이 상실된 혈관내 응고 활성화를 특징으로 하는 후천성 증후군. 이는 미세혈관계로부터 발생하여 그에 손상을 유발할 수 있으며, 매우 심각한 경우에는 장기 기능장애를 일으킬 수도 있다."

DIC는 스스로 발생하지 않고 통상적으로 중병이 있는 환자에 있어서 또 다른 기저 질환으로부터 복합적인 요인으로 인해서만 발생한다. 광범위한 조직 혈류량의 손실과 동시에 출혈이 복합적으로 작용하게 되면, 기저 질환에 의해 나타나는 것들 이외에 사망의 위험도 증가하게 된다. 그러나, 현재 선행 기술에 공지된 응고 인자 농축물은 이러한 임상적 상황에서는 권장되지 않는다. 또 다른 측면에 따르면, 당업계에 공지된 종래의 혈액 응고 인자 대체품 투여시 - 적어도 고용량으로 투여된 경우에 관찰된 - 환자의 DIC의 발병에 대한 위험 또는 DIC 유사 증상의 발병에 대한 환자의 위험은, 본 발명에 따른 혈액 응고 인자 대체품, 즉 ATIII : 인자 II의 몰비가 적어도 1 : 30인 본 발명에 따른 혈액 응고 인자 대체품의 사용에 의해 감소될 수 있다.

선천성 응고 인자 결핍증

본 발명에서 말하는 선천성 응고 인자 결핍증은 임의의 환자의 프로트롬빈 복합체 인자 결핍증, 특히 선천성 프로트롬빈 결핍증 또는 선천성 인자 X 결핍증일 수 있다. 또한, 본 발명에서 말하는 선천성 응고 인자 결핍증은, 다른 치료 방법들을 권고할 수 없거나 예상된 치료 효과를 유도하지 못하는 임상적 상황에 있어서 임의의 환자의 프로트롬빈 복합 인자 결핍증일 수 있다. 비제한적인 한 예는 특정 응고 인자 또는 억제제 농축물을 이용할 수 없는 응급 상황일 수 있다. 선천성 결핍증의 예로는 B형 혈우병, 선천성 인자 VII 결핍증 또는 선천성 단백질 C 결핍증을 들 수 있다. 이러한 환자들에서 출혈의 중지 또는 방지가 상기 상황 하에서 필요할 수 있다. 본 발명에서 말하는 출혈은 현저한 출혈 또는 수술 전후나 외상 사건 후 발생하는 출혈일 수 있다. 이러한 모든 상황들에서, 본 발명의 혈액 응고 인자 대체품의 투여가 권고될 수 있다.

혈전색전성 합병증

혈전색전증은 동일한 범위의 일부로서 밀접하게 연관된 두 질환인 심부 정맥 혈전증 (DVT) 및 폐색전 (PE)을 포함한다. 질병의 범위는 임상적으로 예상치못한 것에서부터 임상적으로 중요하지 않은 것을 거쳐 사망을 초래하는 거대 색전증까지 아우른다. 비르코프의 3대 징후 (Virchow trias)에 따르면, 3개의 요인들이 혈전증의 발달에 있어서 중요하다: (1) 혈류의 손상 (정체), (2) 혈관 손상 및 (3) 혈액의 변화 (과다응고상태). 혈액의 변화는 약물로 유발될 수도 있다. 본 발명의 혈액 응고 인자 대체품은 상기 임의의 한 질환의 치료에 사용될 수 있다. 본 발명의 제품의 투여에 의해 혈전색전성 합병증에 대한 환자의 위험이 감소된다.

외상/다발성 외상

본 발명에서 말하는 외상은 바람직하게는 여러 군데 (>1)의 신체 부위 또는 장기 시스템에 대한 손상, 특히 적어도 하나의 손상 또는 여러 군데 손상의 조합이 생명을 위협하는 것인 상기 손상, 특히 손상 중증도가 손상 중증도 점수 (Injury Severity Score, ISS)의 척도 상에서 >16인 손상인 것을 특징으로 한다. 의미상 다발성 외상은 생명을 위협할 정도가 아닌 다발성 손상과는 구분되어야 한다. 본 발명의 혈액 응고 인자 대체품은 바람직하게는 상기 임의의 한 질환의 치료에 사용될 수 있다.

외상으로 유발된 응고병증

혈액 손실로 인한 출혈성 쇼크는 중상을 입은 환자에 있어서 사망률의 중요한 원인이다. 생명을 위협하는 출혈의 근본적인 병태생리학 과정은 통상적으로 외상성 손상과 응고병증이 복합적으로 작용하여 유발된다. 응고병증의 원인들은 다인성으로 서로 밀접하게 연관되어 있고; 상기 원인으로는 응고 인자와 혈소판의 소모 및 저하, 혈소판 및 응고 시스템의 기능장애, 증가된 피브린용해, 용액 주입에 의한 응고 시스템의 교란 (결정질 및 교질) 및 저칼슘혈증을 포함한다.

이외에도, 중상을 입은 외상 환자에서 발생하는 급성 내재성 응고병증은 외상으로 유발된 응고병증 (TIC)이라고 하며, 혈액 손실의 원인이 되는 관류저하와 복합된 조직 손상에서 나타나는 창발적인 특성(emergent property)이다. TIC의 원인이 되는 기전으로는 항응고, 소모, 혈소판 기능장애 및 피브린과다용해를 포함한다. 본 발명의 혈액 응고 인자 대체품은 바람직하게는 상기 임의의 한 질환의 치료에 사용될 수 있다.

심각한 출혈/분명한 출혈

본 발명의 제품이 적절한 치료제가 될 수 있는 대상 질환은 임의의 종류의 출혈일 수 있다. 출혈은 미국 외과의협회의 전문 외상 소생술 (ATLS)에 의거하여 4개의 등급으로 층화된다 (Manning, JE "Fluid and 혈액 Resuscitation" in Emergency Medicine: A Comprehensive Study Guide. JE Tintinalli Ed. McGraw-Hill: New York 2004. p227). 출혈은 외상성 손상, 기저 질환, 또는 이들의 조합으로 인해 발생한다. 본 발명의 혈액 응고 인자 대체품은 바람직하게는 상기 임의의 한 질환의 치료에 사용될 수 있다. 출혈의 특성 분석에 있어서 심각한, 분명한, 중증 및 현저한이라는 용어들은 본원에서 동의어로 사용된다.

이런 이유로, 본 발명의 혈액 응고 인자 대체품은 바람직하게는 후천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈의 치료 또는 예방 및/또는 선천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈의 치료 또는 예방에 사용할 수 있다.

보다 구체적으로, 본 발명의 혈액 응고 인자 대체품은 바람직하게는 외상; 다발성 외상; 외상으로 유발된 응고병증; 심각하거나 분명하거나 중증 또는 현저한 출혈; 임의의 종류의 외상 관련 응고병증; 수술 전후 출혈 관련 응고병증; 비타민 K 의존성 응고 인자의 결핍증; 후천성 응고 장애, 예컨대 간질환 등; B형 혈우병; 억제제가 있는 B형 혈우병; 경구용 비타민 K 길항제 또는 직접 작용성 경구용 항응고제 (DOAC/NOAC)로 이전에 치료받았던 적이 있고, 비타민 K 길항제 또는 DOAC/NOAC의 항응고성 효과의 신속한 역전을 필요로 하는 환자의 질환; 현저한 출혈, 예컨대 비타민 K 의존성 응고 인자의 결핍증과 관련된 수술 전후, 외상 후 등의 출혈, 특히 비타민 K 항응고 이외의 출혈; 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 질환의 치료 또는 예방에 사용할 수 있다.

효능

본 발명의 혈액 응고 인자 대체품은 적절한 효능을 나타내는 것을 특징으로 한다. 본 제품의 효능은 바람직하게는 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 30 미만인 표준 혈액 응고 인자 대체품의 효능에 필적한다. 바람직하게는, "~에 필적하다"라는 말은, 본 명세서에서 해당 효능이 상기 표준 제품과 동일하거나 그보다 양호하거나, 또는 상기 표준 제품에 비해 약간만 감소됨을 의미한다. 표준 치료 또는 표준 제품의 1 : 30 미만의 ATIII : 인자 II의 몰비는 ATIII를 전혀 함유하지 않은 치료 또는 제품을 포함한다.

본 발명에서 말하는 효능은, 특히 혈액 손실량, 바람직하게는 혈액 손실에 대한 어느 정도의 감소량에 의해 정량화되거나 나타낼 수 있다.

추가의 양태에 따른 본 발명에서 말하는 효능은 지혈까지의 시간, 바람직하게는 지혈까지의 시간에 대한 어느 정도의 감소값에 의해 정량화되거나 나타낼 수 있다.

추가의 양태에 따른 본 발명에서 말하는 효능은 손상 후 생존 가능성에 대한 값에 의해 정량화되거나 나타낼 수 있다.

상기 대체품으로 치료 후 환자의 혈액 손실량은, 위약 치료 후 또는 치료하지 않은 경우의 혈액 손실량에 비해 감소되고, 상기 혈액 손실량은 바람직하게는 위약 치료 후 또는 치료하지 않은 경우의 혈액 손실량의 75% 미만, 70% 미만, 60% 미만, 55% 미만, 50% 미만, 45% 미만, 40% 미만 또는 35% 미만의 양으로 감소된다. 따라서, 본 발명의 제품의 효능은 상기 표준에 비해 적절하거나 또는 심지어 개선된다.

상기 대체품으로 치료 후 환자의 혈액 손실량은, 표준 치료와 비교하여 본질적으로 동일하거나 약간만 증가되거나, 또는 상기 대체품으로 치료 후 환자의 혈액 손실량은 표준 치료에 비해 감소되며, 바람직하게는, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 혈액 손실량은 표준 치료에 비해 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15% 또는 적어도 20% 감소된다. 상기 표준 치료는, 상기 표준 치료에 사용된 제품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 30미만인 것을 제외하고는, 상기 본 치료와 동일하다. 따라서, 본 발명의 제품의 효능은 상기 표준에 비해 적절하거나 또는 심지어 개선된다.

상기 대체품으로 치료 후 환자의 혈액 손실량이 표준 치료의 혈액 손실량에 비해 약간만 증가된 경우, 상기 약간의 증가는 60% 이하, 50% 이하, 40% 이하, 30% 이하, 20% 이하, 15% 이하, 10% 이하 또는 5% 이하이고, 상기 표준 치료는 해당 표준 치료에 사용된 대체품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 30 미만인 것을 제외하고는 상기 본 치료와 동일하다.

바람직하게는, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 지혈까지 걸린 시간 값은 위약 치료 후 또는 치료하지 않은 경우의 지혈까지 걸린 시간 값에 비해 감소되고, 상기 대체품으로 치료 후 지혈까지 걸린 시간 값은 바람직하게는 위약 치료 후 또는 치료하지 않은 경우의 지혈까지 걸린 시간 값에 비해 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 또는 적어도 60% 감소된다. 따라서, 본 발명의 제품의 효능은 상기 표준에 비해 적어도 적절하거나 또는 심지어 개선된다.

더 바람직하게는, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 지혈까지 걸린 시간 값은 표준 치료와 비교하여 본질적으로 동일하거나 약간만 증가되거나, 또는 상기 대체품으로 치료 후 환자의 지혈까지 걸린 시간 값은 표준 치료에 비해 감소되며, 바람직하게는, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 지혈까지 걸린 시간 값은 표준 치료 후 지혈까지 걸린 시간 값에 비해 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15% 또는 적어도 20% 감소되고, 상기 표준 치료는 해당 표준 치료에 사용된 대체품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 30 미만인 것을 제외하고는 상기 본 치료와 동일하다. 따라서, 본 발명의 제품의 효능은 상기 표준에 비해 적어도 적절하거나 또는 심지어 개선된다.

상기 대체품으로 치료 후 환자의 지혈까지 걸린 시간 값이 표준 치료에 비해 약간만 증가된 경우, 상기 값의 약간의 증가는 80% 이하, 70% 이하, 60% 이하, 50% 이하, 40% 이하, 30% 이하, 20% 이하 또는 10% 이하이고, 상기 표준 치료는 해당 표준 치료에 사용된 대체품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 30 미만인 것을 제외하고는 상기 본 치료와 동일하다.

본 발명의 제품으로 치료 후 환자의 생존 가능성은 바람직하게는 표준 치료 후 생존 가능성과 실질적으로 동일하다. 상기 표준 치료는, 상기 표준 치료에 사용된 제품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 30 미만인 것을 제외하고는, 상기 본 치료와 동일하다. 바람직하게는, 본 발명의 제품으로 치료 후 환자의 생존 가능성은 실질적으로 100%이다.

안전성

본 발명의 혈액 응고 인자 대체품 또는 본 발명에 따른 치료 방법은 개선된 안전성을 나타내는 것, 즉 혈전색전성 합병증에 대한 환자의 위험이 감소되는 것을 을 특징으로 한다.

본 발명의 제품 및 치료의 안전성은 표준 제품 또는 표준 치료와 비교하여 특히 개선되며, 상기 표준 제품 또는 표준 치료는 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 30 미만인 것을 제외하고는, 상기 대체품 또는 치료와 동일하다.

본 발명에서 말하는 안전성은 특히 트롬빈 생성의 값, 바람직하게는 트롬빈 생성에 대한 어느 정도의 감소, 특히 내인성 트롬빈 활성도 (ETP) 값에 대한 어느 정도의 감소에 의해 정량화되거나 나타낼 수 있다.

본 발명에서 말하는 안전성은, 특히 D-이량체 농도(DD) 값, 바람직하게는 D-이량체 농도에 대한 어느 정도의 감소에 의해 정량화되거나 나타낼 수 있다.

본 발명에서 말하는 안전성은 환자의 혈액 피브리노겐 농도값에 의해 추가로 정량화되거나 나타낼 수 있다.

바람직하게는, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 트롬빈 생성에 대한 값은, 상기 대체품의 투여 후 특히 1시간, 2시간 및/또는 약 3시간째에 표준 치료의 트롬빈 생성에 대한 값에 비해 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45% 또는 적어도 50% 감소되고, 상기 표준 치료는 해당 표준 치료에 사용된 대체품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 30 미만인 것을 제외하고는 상기 본 치료와 동일하다. 트롬빈 생성은 특히 내인성 트롬빈 활성도 (ETP) 값으로 나타낸다.

바람직하게는, 본 발명의 대체품으로 치료 후 환자의 D-이량체 농도 (DD) 값은 표준 치료에 비해 적어도 1.5, 적어도 2, 적어도 2.5, 적어도 3, 적어도 3.5, 적어도 4, 적어도 4.5, 적어도 5, 적어도 5.5, 적어도 6, 적어도 6.5, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9배 또는 적어도 10배 감소되고, 상기 표준 치료는 해당 표준 치료에 사용된 대체품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 30 미만인 것을 제외하고는 상기 본 치료와 동일하다. 상기 DD 감소는 바람직하게는 본 발명의 제품의 투여 후 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간 및/또는 약 4시간 후에 달성된다.

바람직하게는, 본 발명의 대체품으로 치료 후 환자의 혈액 피브리노겐 농도값은 표준 치료 후 혈액 피브리노겐 농도에 비해 적어도 1.5, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 7.5배 또는 적어도 10배 감소되고, 상기 표준 치료는 해당 표준 치료에 사용된 대체품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 30 미만인 것을 제외하고는 상기 본 치료와 동일하다. 더 바람직하게는, 본 발명의 대체품으로 치료 후 환자의 혈액 피브리노겐 농도는 위약 치료 후 또는 치료없는 혈액 피브리노겐 농도와 본질적으로 동일하다.

본 발명의 추가의 양태에 따르면, 본 발명의 대체품을 이용한 치료 이외에, 상기 환자를 상기 제품, 예컨대 저온침전물, 또는 피브리노겐 농축물을 사용하여 상기 치료에 앞서, 상기 치료와 동시에 또는 상기 치료 후에 치료하며, 바람직하게는 상기 대체품 또는 피브리노겐 농축물은 5 mg/kg 내지 150 mg/kg 체중, 10 mg/kg 내지 100 mg/kg, 바람직하게는 20 mg/kg 내지 80 mg/kg 체중 범위의 피브리노겐의 양으로 투여한다.

추가의 바람직한 측면에 따르면, 피브리노겐과 함께 본 발명의 제품으로 공동 치료 후 환자의 생존 가능성은 표준 공동 치료 후 생존 가능성보다 높다. 상기 표준 공동 치료는, 상기 표준 공동 치료에 사용된 제품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 30 미만인 것을 제외하고는, 상기 본 치료와 동일하다. 바람직하게는, 피브리노겐과 함께 본 발명의 제품으로 공동 치료 후 환자의 생존 가능성은 실질적으로 100%이다.

추가의 바람직한 측면에 따르면, 피브리노겐과 함께 본 발명의 제품으로 공동 치료 후 환자의 폐동맥압은 표준 공동 치료 후 환자의 폐동맥압보다 높다. 상기 표준 공동 치료는, 상기 표준 공동 치료에 사용된 제품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 30 미만인 것을 제외하고는, 상기 본 치료와 동일하다. 특히, 피브리노겐과 함께 본 발명의 제품으로 공동 치료 후 환자의 폐동맥압은 본질적으로 증가되지 않는다.

추가의 바람직한 측면에 따르면, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 프로트롬빈 시간 (PT) 값 및/또는 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 (aPTT) 값은, 표준 치료의 프로트롬빈 시간 (PT) 값 및/또는 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 (aPTT) 값에 비해 적어도 1.5, 적어도 2.0, 적어도 2.5, 적어도 3.0, 적어도 3.5, 적어도 4.0, 적어도 4.5, 적어도 5.0, 적어도 7배 또는 적어도 10배 만큼 감소되고, 상기 표준 치료는 해당 표준 치료에 사용된 대체품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 30 미만인 것을 제외하고는 상기 본 치료와 동일하다. PT 또는 aPTT의 상기 개별 값들은 특히 투여 후 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간 및/또는 약 4시간 후에 나타난다.

추가의 바람직한 측면에 따르면, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 프로트롬빈 시간 (PT) 값 및/또는 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 (aPTT) 값은, 위약 치료 후 또는 치료하지 않은 경우의 개별 프로트롬빈 시간 (PT) 값 및/또는 개별 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 (aPTT) 값과 비교하여 본질적으로 동일하고/동일하거나 상기 값에 대한 최대 편차를 가지나, 단, 상기 최대 편차는 5.0, 3.0, 2.5, 2.0배 또는 1.5배를 초과하지 않는다. PT 또는 aPTT의 상기 개별 값들은 특히 투여 후 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간 및/또는 약 4시간 후에 나타난다.

추가의 바람직한 측면에 따르면, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 프로트롬빈 시간 (PT) 값 및/또는 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 (aPTT) 값은 본질적으로 일정하게 유지되며, 바람직하게는 투여 후 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간 및/또는 약 4시간 동안 일정하게 유지된다. 추가의 바람직한 측면에 따르면, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 프로트롬빈 시간 (PT) 값 및/또는 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 (aPTT) 값은 바람직하게는 투여 후 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간 및/또는 약 4시간 동안 10배, 8배, 6배, 5배, 4배, 3배, 2.5배, 2배 또는 1.5배 이상 변동이 있지는 않다.

본 발명의 제품의 PT 및 aPTT와 관련하여 놀라운 결과는 본 제품의 안전성과 효능 모두에 관한 것이고, 특히 제품의 개선된 안전성과 효능에 대한 것이다.

추가의 양태에 따르면, 본 발명에서 말하는 안전성은 혈전색전증 사건의 위험에 대한 대용 마커로서 혈전 점수의 값, 바람직하게는 혈전 점수의 어느 정도의 감소에 의해 정량화되거나 나타낼 수 있다. 바람직하게는, 대용 마커로 사용되는 경우 상기 제품으로 치료 후 혈전 점수의 값은, 표준 치료의 혈전 점수의 값에 비해 적어도 0.5점, 적어도 1점, 적어도 1.5점 또는 2점 감소되고, 상기 표준 치료는 해당 표준 치료에 사용된 대체품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 30 미만인 것을 제외하고는 상기 본 치료와 동일하다.

약학 조성물

본원에 기술된 방법에 적절한 본 발명의 응고 인자 및 ATIII의 치료적 제제, 즉 본 발명의 제품은, 상기 응고 인자 및, 공동 제제화하는 경우 목적하는 정도의 순도를 갖는 ATIII를, 당해 분야에서 통상적으로 사용되는 임의의 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제 (이들은 모두 본원에서 "담체"로 지칭함), 즉, 완충제, 안정화제, 보존제, 등장화제, 비이온성 계면활성제, 항산화제 및 기타 다양한 첨가제들과 혼합함으로써 보관을 위해 냉동건조된 제제 또는 수용액으로서 제조될 수 있다. 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition (Osol, ed. 1980)]을 참조한다. 이러한 첨가제는 사용되는 용량 및 농도에서 수여자에 대해 비독성이어야만 한다. 이런 이유로, 본 발명의 제품은 특히 냉동건조된 제품 또는 저장 안정성 액체로 제공된다. 상기 임의의 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제가 바람직하게 제공될 수 있지만, 단, 이들은 동물 또는 인간의 치료, 바람직하게는 인간의 치료에 사용할 수 있도록 승인된 것이다.

완충제는 pH를 생리학적 조건과 유사한 범위 내로 유지하는 것을 도와준다. 이들은 약 2 mM 내지 약 50 mM의 범위의 농도로 존재할 수 있다. 적절한 완충제로는 유기산 및 무기산 모두 및 이들의 염, 예컨대, 시트르산염 완충제(예를 들면, 시트르산일나트륨-시트르산이나트륨염 혼합물, 시트르산-시트르산삼나트륨 혼합물, 시트르산-시트르산일나트륨 혼합물 등), 석신산염 완충제(예를 들면, 석신산-석신산일나트륨 혼합물, 석신산-수산화나트륨 혼합물, 석신산-석신산이나트륨 혼합물 등), 타르타르산염 완충제(예를 들면, 타르타르산-타르타르산나트륨 혼합물, 타르타르산-타르타르산칼륨 혼합물, 타르타르산-수산화나트륨 혼합물 등), 푸마르산염 완충제(예를 들면, 푸마르산-푸마르산나트륨 혼합물, 푸마르산-푸마르산이나트륨 혼합물, 푸마르산나트륨-푸마르산이나트륨 혼합물 등), 글루콘산염 완충제(예를 들면, 글루콘산-글루콘산나트륨 혼합물, 글루콘산-수산화나트륨 혼합물, 글루콘산-글루콘산칼륨 혼합물 등), 옥살산염 완충제(예를 들면, 옥살산-옥살산나트륨 혼합물, 옥살산-수산화나트륨 혼합물, 옥살산-옥살산칼륨 혼합물 등), 락트산염 완충제(예를 들면, 락트산-락트산나트륨 혼합물, 락트산-수산화나트륨 혼합물, 락트산-락트산칼륨 혼합물 등) 및 아세트산염 완충제(예를 들면, 아세트산-아세트산나트륨 혼합물, 아세트산-수산화나트륨 혼합물 등)를 포함한다. 추가로, 포스페이트 완충제, 히스티딘 완충제 및 트리메틸아민 염, 예컨대, Tris가 사용될 수 있다.

보존제는 미생물 성장을 저지하기 위해 첨가될 수 있고, 0.2% 내지 1%(w/v) 범위의 양으로 첨가될 수 있다. 적절한 보존제로는 페놀, 벤질 알콜, 메타-크레졸, 메틸 파라벤, 프로필 파라벤, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드, 벤잘코늄 할라이드(예를 들면, 클로라이드, 브로마이드 및 아이오다이드), 헥사메토늄 클로라이드 및 알킬 파라벤, 예컨대, 메틸 또는 프로필 파라벤, 카테콜, 레조르시놀, 사이클로헥사놀 및 3-펜타놀을 포함한다. 때로 "안정화제"로서 알려져 있는 등장화제는 액체 조성물의 등장성을 확보하기 위해 첨가될 수 있으며, 이의 예로는 다가 당알콜, 바람직하게는 3가 또는 그 이상의 당알콜, 예컨대, 글리세린, 에리트리톨, 아라비톨, 크실리톨, 소르비톨 및 만니톨을 포함한다. 안정화제는 증량제(bulking agnet)에서부터 치료제를 가용화시키거나 변성을 방지하거나 또는 용기 벽에 대한 부착을 예방하는 것을 도와주는 첨가제까지 기능상 다양할 수 있는 광범위한 범주의 부형제들을 지칭한다. 통상적인 안정화제는 다가 당알콜(상기 열거됨); 아미노산, 예를 들면, 아르기닌, 리신, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 알라닌, 오르니틴, L-류신, 2-페닐알라닌, 글루탐산, 트레오닌 등, 유기 당 또는 당알콜, 예를 들면, 락토스, 트레할로스, 스타키오스, 만니톨, 소르비톨, 크실리톨, 리비톨, 미오이니시톨, 갈락티톨, 글리세롤 등(이노시톨과 같은 사이클리톨을 포함함); 폴리에틸렌 글리콜; 아미노산 중합체; 황함유 환원제, 예를 들면, 우레아, 글루타티온, 티옥트산, 티오글리콜산나트륨, 티오글리세롤, α-모노티오글리세롤 및 티오황산나트륨; 저분자량 폴리펩타이드(예를 들면, 10개 이하의 잔기의 펩타이드); 단백질, 예를 들면, 사람 혈청 알부민, 소 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예를 들면, 폴리비닐피롤리돈 모노사카라이드, 예컨대, 크실로스, 만노스, 프럭토스, 글루코스; 디사카라이드, 예를 들면, 락토스, 말토스, 슈크로스 및 트리사카라이드, 예를 들면, 라피노스; 및 폴리사카라이드, 예를 들면, 엑스트란일 수 있다. 안정화제는 활성 단백질 1중량부당 0.1 내지 10,000 중량 범위 내로 존재할 수 있다.

비이온성 계면활성제 또는 세제("습윤제"로도 알려져 있음)는, 치료제를 가용화시키는 것을 돕기 위해서 뿐만 아니라 교반으로 유도된 응집에 대해 치료학적 단백질을 보호하기 위해서도 첨가될 수 있으며, 또한 제제가 단백질의 변성을 야기하지 않으면서 응력을 받는 전단 표면에 노출되도록 한다. 적절한 비이온성 계면활성제로는 폴리소르베이트(20, 80 등), 폴리옥사머(184, 188 등), 플루로닉 폴리올, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노에테르(TWEEN®-20, TWEEN®-80 등)를 포함한다. 비이온성 계면활성제는 약 0.05 mg/ml 내지 약 1.0 mg/ml의 범위, 또는 약 0.07 mg/ml 내지 약 0.2 mg/ml의 범위로 존재할 수 있다.

추가의 다양한 임의의 부형제로는 증량제 (예컨대, 전분), 킬레이트제 (예컨대, EDTA), 산화방지제 (예컨대, 아스코르브산, 메티오닌, 비타민 E) 및 공용매를 포함한다.

약학 조성물은 바람직하게는 정맥내 투여를 위해 제형화된다.

본원에 기술된 프로트롬빈 (인자 II) 함유 의약품과의 공동 투여를 위한 항트롬빈 III (ATIII)을 포함하는 의약품은 본 발명의 한 양태이다. 또 다른 양태에 따르면, 항트롬빈 III (ATIII) 함유 의약품과의 공동 투여를 위한 프로트롬빈 (인자 II)을 포함하는 의약품이 본원에 제공된다. 본 발명의 추가의 양태는, 상기 기술된 혈액 응고 인자 대체품을 상기 환자에게 투여함으로써, (i) 후천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈을 치료 또는 예방하는 방법 또는 (ii) 선천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다. 특히 본 발명의 후자의 3가지 양태의 경우, ATIII 및 인자 II는 동시 사용, 별도 사용 또는 순차적 사용을 위해 준비 및/또는 제공될 수 있다.

본 발명에서 말하는 "동시 사용"이란, 적어도 본원에 정의된 바와 같은 분리된 응고인자 FII를 포함하는 조성물 및 분리된 ATIII을 포함하는 조성물을 혼합한 후, 혼합물로서 환자에게 투여하는 것을 의미한다.

본 발명에서 말하는 "별도 사용"이란, 적어도 본원에 정의된 바와 같은 분리된 응고인자 FII를 포함하는 조성물 및 분리된 ATIII을 포함하는 조성물을 모두 동시에 또는 개별적으로 교대로 번갈아 투여하는 것을 의미하므로, 상기 투여의 순서는 무관하다.

본 발명에서 말하는 "순차적 사용"이란, 적어도 본원에 정의된 바와 같은 분리된 응고인자 FII를 포함하는 조성물 및 분리된 ATIII을 포함하는 조성물을 개별적으로 투여하는 것을 의미하므로, 상기 투여의 순서는 무관하고, 양 투여의 시간 간격은 2일 이하, 바람직하게는 1일 이하, 보다 바람직하게는 4시간 이하 및 가장 바람직하게는 1시간 이하이다.

상기 조성물은 보통 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 멸균 약학 조성물의 일부로서 제공된다. 이러한 조성물은 (환자에게 이를 투여하는 소정의 방법에 따라) 임의 적절한 형태로 존재할 수 있다.

본 발명의 조성물에 대한 투약의 총 횟수와 치료 기간의 결정은 당업계의 숙련자의 재량으로 충분히 할 수 있다. 투여될 본 발명의 제품의 용량은 체중 및/또는 항응고의 정도 또는 존재하는 응고병증에 따라 다르다.

또한, 질환 중증도의 정도도 본 발명의 제품 또는 조성물의 적절한 용량을 결정하는데 고려될 수 있다.

당업자라면 본 명세서가 구체적으로 기재된 것들 이외의 변형 및 변경의 여지가 있다는 점을 알 수 있을 것이다. 본 발명은 본 발명의 개념과 범위 내에 속하는 이러한 모든 변형 및 변경을 포함하는 것으로 이해해야 한다. 또한, 본 발명은 본 명세서 내에 개별적으로 또는 총괄적으로 언급되거나 나타낸 모든 특징, 조성물, 단계 및 화합물과, 상기 특징, 조성물, 단계 및 화합물 중 임의의 2종 이상의 임의의 모든 조합 역시도 포함한다.

본 발명의 특정 실시양태들을 이제 하기의 실시예들과 관련하여 기술할 것이지만, 이러한 실시예들은 예시할 목적일 뿐이지 상기 기술한 본 발명의 일반론의 범위를 한정하려는 것은 아니다.

실시예 - 토끼 모델

혈액희석 매개된 출혈 및 조직 손상의 토끼 모델에서 PCC의 지혈 효능

재료 및 방법

동물:

2.8-4.0 kg 중량의 3-4월령 암컷 CHB 토끼 [독일 노이엔슈타인-로헤 소재의 맨프레드 바우어(Manfred Bauer)]들을 12h/12h 주-야 사이클 하에서 21-23℃ 및 50% 상대 습도로 강철 와이어로 된 우리(wire-steel cage) 중에서 우리당 1마리씩 수용하였다. 상기 동물들에게 수돗물을 무제한으로 자유롭게 제공하였고, 토끼 사료 [Deukanin®, 독일 뒤셀도르프 소재의 도이취 티어나흐룽 크레버 게엠베하 앤 코. 카게(Deutsche Tiernahrung Cremer GmbH & Co. KG)]를 공급하였다. 모든 토끼들을 유럽 동물 관리 협약(European Convention on Animal Care)을 준수하여 관리하였고, 연구는 조직 윤리 위원회(organizational Ethics Committee)에 의해 승인되었다.

혈액희석

모든 치료는 마취된 동물에서 수행하였다. 마취는 케타민 및 자일라진의 조합물로 유도하였고, 이소플루란 흡입 마취를 통해 유지하였다. 이후, 동물들을 기관내로 삽관하고, 산소호흡기[독일 바트 엠스 소재의 헤이어 액세스 헤이어 메디컬 아게 (Heyer Access, Heyer Medical AG)]를 달았다.

동물들에게, 경동맥에서 30 mL·kg^-1의 혈액 채혈 및 37℃로 미리 가온시킨 30 mL·kg^-1의 하이드록시에틸 전분(HES) 200/0.5 [Infukoll 6%, 독일 만하임 소재의 슈바르츠 파르마 아게(Schwarz Pharma AG)]의 주입에 의한 단계로 혈액희석을 수행하였다 (도 1). 해당 절차를 45분에 반복하였다. 혈액 채혈 및 HES 주입의 2회 사이클 사이의 구간 동안인 30분에, 800xg에서 10분간 원심분리에 의해 채혈된 토끼 전혈로부터 준비한 15 mL·kg^-1의 회수된 적혈구를, 통상의 식염수로 세척하여 링거 락테이트 용액에 재현탁시켜, 동물들의 외경정맥에 투여하였다.

신장 손상

혈액희석의 개시 후 60분에, 측면 신장 끝에서 15 mm 길이 및 5 mm 깊이의 메스 절개의 형태로 표준형 신장 손상을 가하였다 (도 1).

치료

동물들은 무작위로 할당되어 신장 절개 손상 직전에 등장성 식염수 (위약), 25 IU/kg 용량의 PCC [Beriplex®/Kcentra®, 독일 마르부르크 소재의 시에스엘 베링 게엠베하(CSL Behring GmbH)], 11.5 IU/kg 용량의 ATIII (Kybernin®, 독일 마르부르크 소재의 시에스엘 베링 게엠베하) 또는 PCC 25 IU/kg + 11.5 또는 23 IU/kg의 ATIII의 조합 치료제를 i.v. 투여받았다 (도 1). 실험군들은 각각 6-7마리의 토끼로 이루어졌다. 모든 실시예 내에서 사용된 PCC는, 달리 언급하지 않는 한, 낮은 수준의 ATIII, 즉 1 : 30 미만의 ATIII : 인자 II의 몰비를 나타내는 ATIII를 포함한다. 참고로, "종래의 PCC" 또는 단지 "PCC"로도 지칭하는, 실시예 내에서 사용된 PCC는 1 : 30 미만의 ATIII : 인자 II의 몰비를 포함한다. 본 발명에 따른 ATIII의 증가된 수준, 즉 적어도 1 : 30의 ATIII : 인자 II의 몰비는, ATIII의 각각의 추가량의 공동 투여에 의해 달성되는데, 이것이 본 발명의 "변형된 PCC"를 나타내는 것이다.

투여를 위한 PCC의 IU에 제공된 활성 수준은 PCC의 명목 인자 IX 함량을 나타내고 있다. 1 국제 단위 (IU)의 활성은 정상적인 인간 혈장 1 mL 중의 각각의 응고 인자의 양에 해당한다. 실시예 내에서 사용된 PCC는, 종래의 것과 변형된 것 모두, IU에 제공된 활성 수준을 기준으로 한 인자 IX 함량과 실질적으로 동일한 인자 II 함량을 나타낸다. 따라서, 예를 들어, 50 IU/kg의 종래의 PCC와 함께 25 IU/kg의 ATIII의 조합 치료는 약 1　: 1의 투여된 ATIII : 인자 II의 몰비를 유도할 것이다. 여기에 사용된 종래의 PCC 내에 제공된 낮은 수준의 ATIII은 변형된 PCC 내의 ATIII : 인자 II의 몰비의 계산에서는 무시할 수 있다.

실시예 내에서 사용된 PCC는, 종래의 것과 변형된 것 모두, 약 1 IU/ml의 헤파린 함량을 나타낸다.

평가변수

혈액희석, 치료, 실험적 신장 외상 및 지혈 효과의 평가에 대한 연구 절차를 도 1에 나타내었다.(약어: HES, 하이드록시에틸 전분; PCC (프로트롬빈 복합 농축물), ATIII (항트롬빈 III)). 본 연구의 1차 평가변수는 표준형 신장 절개 손상 후 30분까지 관찰한 지혈까지 걸린 시간 및 혈액 손실량이었다 (도 1). 지혈까지 걸린 시간은 신장 절개로부터 관찰가능한 출혈 또는 삼출의 중지까지의 구간으로 정의하였다. 혈액 손실량은 흡입에 의해 절개 부위로부터 수집한 혈액의 부피였다. 혈액 손실량과 지혈까지의 시간에 대한 상기 30분의 관찰 시간은 절개 직후 시작되었다.

결과

식염수 (위약), PCC, ATIII 또는 PCC와 ATIII의 조합으로 치료 후, 혈액희석된 토끼에서 표준형 신장 손상을 가한 후의 총 혈액 손실량을 도 2에 나타내었다. 나타낸 데이터는 범위가 있는 중앙값이다. 사용된 약어는 PCC (프로트롬빈 복합 농축물) 및 ATIII (항트롬빈 III)이다. 도 2에 나타낸 바와 같이, 25 IU/kg 용량의 PCC는 표준형 신장 손상 후 94 mL의 중앙값 (등장성 식염수 치료; 위약)에서 34 mL로 총 혈액 손실량을 감소시킬 수 있었다. PCC (25 IU/kg) 및 ATIII (11.5 또는 23 IU/kg, 각각 약 1 : 1 및 약 2:1의 ATIII : 인자 II의 몰비에 해당함)의 조합도 총 혈액 손실량을 55 및 38 mL의 중앙값으로 각각 감소시킬 수 있었다. ATIII (11.5 IU/kg)만으로는 혈액 손실에 대한 임의의 관련 효과를 나타내지 못했다.

식염수 (위약), PCC, ATIII 또는 PCC와 ATIII의 조합으로 치료 후, 혈액희석된 토끼에서 표준형 신장 손상을 가한 후의 지혈까지 걸린 시간을 도 3에 나타내었다. 나타낸 데이터는 범위가 있는 중앙값이다. 사용된 약어는 PCC (프로트롬빈 복합 농축물) 및 ATIII (항트롬빈 III)이다. 25 IU/kg 용량의 PCC는 표준형 신장 손상 후 최대 30분의 관찰 시간 (등장성 식염수 치료; 위약)으로부터 10분까지 지혈을 달성하는데 걸린 시간을 감소시킬 수 있었다. PCC (25 IU/kg) 및 ATIII (11.5 또는 23 IU/kg, 각각 약 1 : 1 및 약 2:1의 ATIII : 인자 II의 몰비에 해당함)의 조합도 지혈까지 걸린 시간을 16분 및 17분의 중앙값으로 각각 감소시킬 수 있었다. ATIII (11.5 IU/kg)만으로는 지혈까지 걸린 시간에 대한 임의의 관련 효과를 나타내지 못했다 (도 3).

정맥 울혈의 토끼 모델 [변형된 베슬러(Wessler) 모델]에서 PCC의 혈전생성에 대한 ATIII 공동 투여의 효과

재료 및 방법

동물:

2.2-3.2 kg 중량의 3-4월령 암컷 뉴질랜드 화이트(New Zealand White) 토끼 (독일 노이엔슈타인-로헤 소재의 맨프레드 바우어)들을 유럽 동물 관리 협약을 준수하여 관리하였고, 연구는 지방 정부 당국에 의해 승인되었다. 상기 동물들을 12h/12h 주-야 사이클 하에서 21-23℃ 및 50% 상대 습도로 강철 와이어로 된 우리 중에서 우리당 1마리씩 수용하였다. 상기 동물들을 수돗물에 자유롭게 접근하게 하였고, 토끼 사료 (Deukanin®, 독일 뒤셀도르프 소재의 도이취 티어나흐룽 크레버 게엠베하 앤 코. 카게)를 무제한으로 공급하였다. 모든 토끼들을 유럽 동물 관리 협약을 준수하여 관리하였고, 연구는 조직 윤리 위원회에 의해 승인되었다.

치료

동물들은 무작위로 할당되어 300 IU/kg 용량의 PCC (Beriplex®/Kcentra®, 독일 마르부르크 소재의 시에스엘 베링 게엠베하)와 7-138 IU/kg의 ATIII (Kybernin®, 독일 마르부르크 소재의 시에스엘 베링 게엠베하)를 조합하여 i.v. 투여받았다. 실험군들은 각각 3마리의 토끼로 이루어졌다. 등장성 식염수만 (위약) 또는 300 IU/kg의 PCC만으로 치료한 동물들을 대조군으로 하였다.

변형된 베슬러 검정

깊은 마취(케타민/자일라진) 하에 수술을 수행하였다. 주입 종료 후 10분 후에 정맥 울혈을 유발시켰다. 대측성 경정맥을 노출시키고 약 2 cm의 분절을 분리시켜, 분리된 분절에서의 완전한 정체를 유발시켜 응혈 효과를 측정하였다. 정체를 유발시키고 30분 후, 정맥 분절을 절개하여 시트르산나트륨 용액 중에서 세밀히 조사하였다. 관찰된 임의의 혈전들을 0 내지 3의 점수화 체계에 따라 등급을 매기고, 이들의 습윤 중량을 측정하였다. 혈전 점수를 아래와 같이 정의하였다: 0 (혈전 없음), 1 (하나 또는 소수의 작은 혈전, 너무 작아서 중량 측정 불가), 2 (완전 폐색성 혈전은 아님, 중량 측정 가능) 또는 3 (완전 폐색성 혈전).

결과

식염수 (위약), PCC 또는 PCC와 ATIII의 조합을 이용한 치료 하에 토끼에서 정맥 혈전증 이후 혈전 점수를 도 4a에 나타내었다. 나타낸 데이터는 범위가 있는 중앙값이다. 사용된 약어는 PCC (프로트롬빈 복합 농축물) 및 ATIII (항트롬빈 III)이다. 도 4a에 나타낸 바와 같이, 300 IU/kg 용량의 PCC는 30분의 정맥 울혈 후 혈전 점수 2점을 유도하였는데, 이는 각각 약 1 : 5, 약 1 : 2 및 약 1 : 1의 ATIII : 인자 II의 몰비에 해당하는 28 IU/kg, 69 IU/kg 및 138 IU/kg 용량의 ATIII의 공동 투여에 의해 완전히 억제되었다. 약 1 : 20의 ATIII : 인자 II의 몰비에 해당하는 7 IU/kg의 ATIII의 공동 투여는 혈전 점수 1-2점의 혈전 형성의 부분적 감소를 유도하였다.

이와 유사하게, 혈전 습윤 중량도 ATIII의 공동 투여에 의해 감소되었다. 식염수 (위약), PCC 또는 PCC와 ATIII의 조합을 이용한 치료 하에 토끼에서 정맥 혈전증 이후 혈전 점수를 도 4b에 나타내었다. 나타낸 데이터는 범위가 있는 중앙값이다. 사용된 약어는 PCC (프로트롬빈 복합 농축물) 및 ATIII (항트롬빈 III)이다. 도 4b에 나타낸 바와 같이, 300 IU/kg 용량의 PCC는 30분의 정맥 울혈 후 약 18 mg의 혈전 습윤 중량을 유도하였는데, 이는 각각 약 1 : 5, 약 1 : 2 및 약 1 : 1의 ATIII : 인자 II의 몰비에 해당하는 28 IU/kg, 69 IU/kg 및 138 IU/kg 용량의 ATIII의 공동 투여에 의해 완전히 역전되었다. 약 1 : 20의 ATIII : 인자 II의 몰비에 해당하는 7 IU/kg의 ATIII의 공동 투여는 혈전 습윤 중량의 부분적 감소를 유도하였다.

실시예 - 돼지 모델

재료 및 방법

동물 및 수술 준비

본 연구는 실험 동물 관리 준칙에 근거한 독일 법령에 따라 수행되었다. 공식적인 허가는 동물 관리 및 사용을 관장하는 적절한 정부 관서로부터 승인받았다. 질병이 없는 사육 시설로부터 얻은 독일의 랜드레이스종(land race) 돼지들을 환기가 되는 공간에 적어도 5일간 수용하였다. 이들을 수술 전에 밤새 절식시키되, 물은 무제한으로 공급하였다.

첫 약물은 근육내 주사로 투여하였다: 아자페론 (4　mg　kg^-1) 및 아트로핀 (0.1　mg　kg^-1). 다음으로, 프로포폴 (3　mg　kg^-1)을 18-G 캐뉼라를 통해 오른쪽 귀 정맥에 정맥내 주사로 투여하여 마취시켰다. 동물들에게 8　mL　kg^-1의 일호흡량을 갖는 20-22회의 분당 호흡수의 압력 조절 모드로 산소를 공급하여, 외상 전 0.21의 산소 분율과 함께 36 내지 40 mmHg의 p_aCO₂를 유지하였다 [독일 뤼벡 소재의 카토 드래거(Cato, Draeger)]. 1.2-1.4%의 호흡종기 농도의 이소플루란 및 펜타닐의 일정한 주입 (2　μg　kg^-1h^-1)으로 마취를 유지하였다.

첫 수액 요법은 결정질 용액으로 이루어졌다 (2　mL　kg^-1　h^-1). 혈액 온도; 동맥, 중심 정맥 및 폐동맥압; 꼬리의 맥박 산소포화도 및 심전도를 표준 마취 모니터 [핀란드 헬싱키 소재의 다텍스 오메다(Datex Ohmeda), AS/3]를 이용하여 계속 모니터링하였다.

2개의 8.5-Fr 카테터를 부피 치환을 위해 우측 및 좌측 경정맥에 수술로 이식하고, 페동맥 카테터는 우측 8.5-Fr 카테터를 통해 지 포지션 (wedge-position)에 위치시켰다. 혈역학적 변수는 우측 총경동맥 내의 18-G 카테터를 통해 기록하였다. 모든 혈액 샘플들은 동맥 계통으로부터 채혈하였다.

손상 및 혈액희석

제1 손상 단계는 1) 양측 폐쇄성 대퇴골 골절, 2) 단측 흉곽 타박상 (두 경우 모두 캡티브 볼트(captive bolt)형 총으로 유발시킴), 및 3) 100 mL/분의 속도로 동물의 추정 혈액 부피 중 약 60% (65 ml/kg 체중)의 조절된 채혈로 이루어졌다. 30 mmHg 초과의 평균 동맥압 (MAP)을 유지하는데 필요한 만큼 결정질 용액을 주입하였다. 대략 20분의 출혈성 쇼크 단계 이후, 부피 손실량을 결정질 용액 주입으로 보충하고, 흡기 산소 분율을 1.0로 증가시켰다. 제2 손상 단계는 표준형 둔상성 간에 의해 유도하였다. 제2 손상 단계 후, 지혈 개입을 수행하기 바로 직전에 제2 쇼크 기간을 두었다 (10분).

치료

제2 외상이 있은지 10분 후에, 밀봉한 봉투를 사용한 1:1:1:1 포맷으로 컴퓨터로 생성한 목록을 이용하여 하기의 치료군들 중 하나에 전향적으로 무작위배정하였다:

1. 1군: 대조군 (위약)

2. 2군: PCC50 IU/kg

3. 3군: PCC50 IU/kg + 항트롬빈 50 IU/kg (PCC+AT50 군)

4. 4군: PCC50 IU/kg + 항트롬빈 25 IU/kg (PCC+AT25 군)

5. 5군: PCC50 IU/kg + 항트롬빈 12.5 IU/kg (PCC+AT12.5 군)

6. 6군: PCC50 IU/kg + 피브리노겐 80 mg/kg p (PCC+Fib 군)

7. 7군: PCC50 IU/kg + 피브리노겐 80 mg/kg + 항트롬빈 50 IU/kg (PCC+Fib+AT50 군)

따라서, ATIII : 인자 II의 하기의 몰비를 시험하였다: 2군 (PCC50 IU/kg)에서, ATIII : 인자 II의 몰비는 1 : 30 미만이었는데, 그 이유는 종래의 PCC만을 투여했기 때문이다. 2군 (PCC50 IU/kg)도 이하에서 PCC 단일요법으로 지칭한다. 군 3 (PCC+AT50 군), 군 4 (PCC+AT25 군) 및 군 5 (PCC+AT12.5 군)에서, ATIII : 인자 II의 몰비는 각각 약 1 : 0.5, 약 1 : 1 및 약 1 : 2이었다. 군 6 (PCC+Fib 군)에서, ATIII : 인자 II의 몰비 1 : 30 미만이었다. 군 7 (PCC+Fib+AT50 군)에서, ATIII : 인자 II의 몰비는 약 1 : 0.5였다. ATIII, AT 및 항트롬빈은 동의어로 사용된다.

PCC 변화를 위해, 4-인자 PCC (Beriplex® PN, 독일 소재의 시에스엘 베링) 및 항트롬빈 (Kybernin®, 독일 소재의 시에스엘 베링)을 사용하였다. 관찰 기간은 제2 손상 후 240분 후에 종료하였다. 상기 전 기간 동안 생존한 동물들을 펜토바르비탈로 안락사시켰다. 사망 직후, 복부를 다시 열고, 대정맥을 간 앞으로 클램핑하고 복강내 혈액을 수집하여 손상 후 총 혈액 손실량을 측정하였다. 여러 장기들을 사후 제거하여 조직 검사를 준비하였다.

실험실 분석

제2 손상 단계 이후 혈액을 수집하고, 동맥 혈액 가스 분석을 여러 시점에 수행하였다. 손상 후 240분 전에 죽은 동물에 있어서, 마지막 평가는 사망 직후 수행하였다. pH와 산소 및 이산화탄소의 분압, 염기과잉 및 락테이트를 혈액 가스 분석기 [독일 빌리히 소재의 라디오미터 게엠베하(Radiometer GmbH), ABL825]를 이용하여 측정하였다. 표준 혈구 분석기 [일본 도쿄 소재의 니혼 코덴(Nihon Kohden), MEK-6108]를 사용하여 혈소판수와 헤모글로빈 농도를 평가하였다. 프로트롬빈 시간 (PT), 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 (aPTT) 및 피브리노겐 농도는, 강구(steel-ball) 혈액응고측정기 [독일 렘고 소재의 멀린 메디컬(Merlin Medical), MC 4 plus] 상에서 다데 베링 (Dade Behring, 독일 마르부르크 소재)의 적절한 검정을 이용하는 표준 실험실 방법에 의해 측정하였다. D-이량체는 다데 베링 (독일 마르부르크 소재)의 적절한 검정을 이용하여 평가하였다.

혈전탄성묘사법 및 트롬빈 생성

파라미터인 내인성 트롬빈 활성도 (ETP)를 포함하는 트롬빈 생성에 대해서는, 보정된 자동화 트롬보그램[Calibrated Automated Thrombogram, CAT, 네덜란드 마스트리히트 소재의 트롬비노스코프 BV (Thrombinoscope BV)]을 이용하여 혈장에서 측정하였다 (Spronk HM, et al. Thromb Haemost. 2008; 100:362-364). 80　μL의 혈장 샘플 중에서 20　μL의 형광성 기질 및 20　μL의 시발성 시약(trigger reagent)을 이용하여 평가를 수행하였다. 상기 시발성 시약은 4　μM의 인지질을 함유한 1　pM의 조직 인자였다. 각 트롬빈 생성 분석은 고정량의 보정물질 [네덜란드 마스트리히트 소재의 트롬비노스코프 BV, 트롬빈 보정물질(Thrombin Calibrator)]을 이용하여 동일한 혈장 내에서 수득한 형광 곡선에 대하여 보정하였다. 형광강도는 Ascent Reader [핀란드 헬싱키 소재의 써모랩시스템즈 OY(Thermolabsystems OY)]를 사용하여 측정하였고, 트롬빈 생성 곡선은 트롬비노스코프 버전 4 소프트웨어 (네덜란드 마스트리히트 소재의 트롬비노스코프 BV)를 이용하여 산출하였다.

병리적 검사

사망 후, 내부 장기들 (심장, 폐, 간 및 신장)을 즉시 제거하여 10% 완충된 포르말린 중에서 고정시켰다. 간에서 손상된 부분들을 3 mm 두께의 박편으로 잘라서 요법에 대해 알지 못하는 병리학자가 육안 및 현미경으로 검사하여 손상의 정도를 평가하였다. 또한, 혈전색전증 사건의 발생률을 측정하기 위해 네 장기 모두의 대표적인 조직 절편을 가공처리하였다. 모든 샘플들을 광학 현미경 하의 조직 검사를 위해, H&E 및 표준 엘라스티카 반 기손(elastica van Gieson) 프로토콜에 의해 파라핀 중에 매립시키고 염색하였다. 두 염색 방법 모두 모든 조직들의 절편에 적용하였다.

조직 검사를 통해 본원에 기술한 추가의 ATIII 투여의 유익한 효과를 확인하였다 (데이터는 나타내지 않음).

평가변수

본 연구의 1차 연구 평가변수는 손상 후 총 혈액 손실량의 감소 (효능) 및 지혈 개입의 안전성이었다. 2차 평가변수로는 응고 파라미터에 대한 영향을 포함하였다.

결과

도 5에 2차 간손상 후 총 혈액 손실량을 나타내었다. PCC와 ATIII의 조합은 대조군 및 단일요법인 PCC50 치료군에 비해 혈액 손실량을 감소시켰다.

도 5에 나타낸 것과 같이, 본 연구의 1차 평가변수인 제2 손상 단계 후 총 혈액 손실량은, 단일요법 PCC 50 군 (907 ± 132 mL)에서보다 PCC + 항트롬빈 군 (PCC+AT50 군 653 ± 42 mL; PCC+AT25 군 552 ± 31 mL; PCC+AT12.5 군 548 ± 68 mL)에서 더 적었다. PCC+Fib 군에서의 총 혈액 손실량 (719 ± 115 mL)은 PCC+Fib+AT50 군 (613 ± 34 mL)에서보다 많았다. 총 혈액 손실량은 대조군에서 가장 많았다 (1671 ± 409 mL; P <0.001 vs. 모든 치료군).

도 6에 생존 데이터를 카플란-마이어 곡선으로 나타내었다. PCC 단일요법 및 PCC + 항트롬빈 군에서의 동물들은 전체 관찰 기간 동안 모두 생존하였던 반면 (100%), 대조군의 7마리 중 2마리 (29%) (평균 생존 시간 210분)는 제2 외상 후 사망하였다 (도 6).

도 6에 제시된 데이터에 따르면, PCC+Fib 군의 7마리의 동물 중 5마리의 동물 (71%)은 일찍 사망하였던 반면 (평균 생존 시간 160분), PCC+Fib+AT50 치료군의 동물은 모두 생존하였다 (100%). 상기 PCC+Fib 군의 동물의 조기 사망은 폐동맥 고혈압의 증가로 인한 것이었다 (제2 외상 후 120분되는 시점에 26 ± 7 mmHg). 도 7에 평균 폐압 데이터 (MPAP) (평균 ± 표준 편차)가 나타나 있다. PCC+Fib+AT50 군에서 폐동맥압의 증가는 관찰되지 않았다 (예컨대, 제2 외상 후 120분되는 시점에 16 ± 1 mmHg; 도 7).

도 8에 시간의 경과에 따른 항트롬빈 농도 (평균 ± 표준 편차)를 나타내었다. 외상 및 출혈성 쇼크 후, 모든 동물에서 항트롬빈이 48 ± 9% 감소하였다. 군 할당에 따르면, 항트롬빈 대체는 항트롬빈 농도의 용량 의존성 증가를 유도하였다 (30분 제2 외상 후: PCC+AT50 군 145 ± 12%; PCC+AT25 군 94 ± 10%; PCC+AT12.5 군 70 ± 5%; PCC+Fib+AT50 136 ± 17%) (도 8). 이러한 동물들에서 항트롬빈 수준은 시간의 경과에 따라 증가된 상태로 유지되었다. 항트롬빈이 아닌 것으로 치료된 동물에서, 항트롬빈은 제2 외상 후 30분에 41 ± 8%의 수준으로 유지되었고, 제2 외상 후 240분에 37 ± 11%로 유지되었다.

도 9에 시간의 경과에 따른 피브리노겐 농도 (평균 ± 표준 편차)를 나타내었다. 외상 및 출혈성 쇼크 후, 모든 동물에서 피브리노겐 농도가 60 ± 9 mg/dL 감소하였다. 군 할당에 따르면, 피브리노겐 대체는 피브리노겐 농도의 용량 의존성 증가를 유도하였다 (PCC+Fib 군 198 ± 16 mg/dL; PCC+Fib+AT50 군 202 ± 15 mg/dL) (도 9). PCC+Fib+AT50에서의 피브리노겐 농도는 시간이 경과함에 따라 안정하게 유지되었다. PCC50로 치료한 동물에서, 피브리노겐의 농도는 시간이 경과함에 따라 4 ± 8 mg/dL로 감소하였고, PCC+Fib로 치료한 동물에서, 피브리노겐의 농도는 시간이 경과함에 따라 심각한 DIC로 인한 제2 손상 후 240분에 114 ± 42 mg/dL로 감소하였다. 상기 피브리노겐의 소모는 D-이량체에서의 현저한 증가와 관련이 있었다. 도 10에 시간의 경과에 따른 D-이량체의 농도 (평균 ± 표준 편차)를 나타내었다. PCC 주입 직후, D-이량체는 PCC50 및 PCC+Fib 군에서 증가되었으며, 이러한 수준은 관찰 기간 내내 계속 증가되었다 (제2 손상 후 240분: PCC50 군 249 ± 176 mg/L; PCC+Fib 군 193 ± 180 mg/L). AT 대체된 군에서, D-이량체는 증가 정도가 훨씬 덜하였다 (제2 외상 후 240분: PCC+AT50 군 27±20 mg/L; PCC+AT25 군 10±7mg/L; PCC+AT12.5 군 14±7mg/L; PCC+Fib+AT50 군 68±79 mg/L).

도 11은 시간의 경과에 따른 트롬빈 생성에 관한 데이터를 나타내고 있다 (평균 ± 표준 편차). 트롬빈 생성은 PCC를 투여받은 모든 동물에서 PCC 투여 직후 증가하였다 (PCC50 군 1448 ± 569 nM x분; PCC50+Fib 군 1601 ± 972 nM x분). 상기 PCC+Fib+AT50 (645 ± 286 nM x분) 및 상기 PCC + 항트롬빈 군 (PCC+AT50 군 769 ± 84 nM x분; PCC+AT25 군 1084 ± 123 nM x분; PCC+AT12.5 군 1266 ± 126 nM x분)의 동물에서 항트롬빈의 첨가는 트롬빈 생성 수준을 저하시켰다. 이러한 동물들에서 트롬빈 생성은 대조군에서보다 많았다 (예컨대, 제2 외상 후 30분: 275 ± 25 nM x분). 관찰 기간 동안 트롬빈 생성은 PCC 대체된 동물에서 시간이 경과함에 따라 점진적으로 감소하였으나, 제2 외상 후 240분 시점에서 트롬빈 생성은 기저치보다 높게 유지되었다.

도 12는 시간의 경과에 따른 프로트롬빈 시간 (PT)에 관한 데이터를 나타내고 있다 (평균 ± 표준 편차). 제2 손상 후, 혈액 손실로 인한 PT는 시간이 경과함에 따라 9.6 ± 0.8초에서 12.3 ± 2.0초로 연장되었다. PCC 50을 투여받은 동물들은 제2 손상 후 60분 후부터 연장되어 240분에는 149 ± 87초까지 크게 연장되었다. 모든 개입 군에서 PT는 시간이 경과함에 따라 안정하게 유지되었다. 이와 유사한 결과들이 aPTT를 측정하는데에도 나타났다.

도 13은 시간의 경과에 따른 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 (aPTT)에 관한 데이터를 나타내고 있다 (평균 ± 표준 편차).

Claims

(i) 후천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한, 또는
(ii) 선천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한 혈액 응고 인자 대체품으로서,
상기 대체품이 적어도 분리된 프로트롬빈 (인자 II) 및 분리된 항트롬빈 III (ATIII)을 포함하고, 이 경우 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 15 내지 1 : 0.5 범위 내이며;
상기 대체품의 투여에 의해 혈전색전성 합병증에 대한 환자의 위험이 감소되는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.
제1항에 있어서, 상기 대체품으로 치료 후 혈전색전성 합병증에 대한 환자의 위험이 표준 치료에 비해 감소되고, 상기 표준 치료가, 해당 표준 치료에 사용된 대체품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 15 미만인 것을 제외하고는, 상기 대체품으로 치료와 동일한 것인, 혈액 응고 인자 대체품.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 대체품이 인자 IX, 인자 X 및 인자 VII로 이루어진 군으로부터 선택되는 분리된 응고 인자들 중 적어도 하나를 추가로 포함하는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 혈액 손실량이 위약 치료 후 또는 치료하지 않은 경우의 혈액 손실량에 비해 감소되는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 혈액 손실량이 표준 치료와 비교하여 본질적으로 동일하거나 약간만 증가되거나, 또는 상기 대체품으로 치료 후 환자의 혈액 손실량이 표준 치료에 비해 감소되며, 상기 표준 치료는, 해당 표준 치료에 사용된 대체품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 15 미만인 것을 제외하고는 상기 대체품으로 치료와 동일한 것인, 혈액 응고 인자 대체품.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 혈액 손실량이 표준 치료의 혈액 손실량에 비해 약간만 증가된 경우, 상기 약간의 증가는 60% 이하, 50% 이하, 40% 이하, 30% 이하, 20% 이하, 15% 이하, 10% 이하 또는 5% 이하이고, 상기 표준 치료는, 해당 표준 치료에 사용된 대체품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 15 미만인 것을 제외하고는 상기 대체품으로 치료와 동일한 것인, 혈액 응고 인자 대체품.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 지혈까지 걸린 시간 값은 위약 치료 후 또는 치료하지 않은 경우의 지혈까지 걸린 시간 값에 비해 감소되는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 지혈까지 걸린 시간 값은 표준 치료와 비교하여 본질적으로 동일하거나 약간만 증가되거나, 또는 상기 대체품으로 치료 후 환자의 지혈까지 걸린 시간 값은 표준 치료에 비해 감소되며, 상기 표준 치료는 해당 표준 치료에 사용된 대체품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 15 미만인 것을 제외하고는 상기 대체품으로 치료와 동일한 것인, 혈액 응고 인자 대체품.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 지혈까지 걸린 시간 값이 표준 치료에 비해 약간만 증가된 경우, 상기 값의 약간의 증가는 80% 이하, 70% 이하, 60% 이하, 50% 이하, 40% 이하, 30% 이하, 20% 이하 또는 10% 이하이고, 상기 표준 치료는 해당 표준 치료에 사용된 대체품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 15 미만인 것을 제외하고는 상기 대체품으로 치료와 동일한 것인, 혈액 응고 인자 대체품.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 프로트롬빈 시간 (PT) 값 및/또는 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 (aPTT) 값은, 표준 치료의 프로트롬빈 시간 (PT) 값 및/또는 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 (aPTT) 값에 비해 적어도 1.5배, 적어도 2.0배, 적어도 2.5배, 적어도 3.0배, 적어도 3.5배, 적어도 4.0배, 적어도 4.5배, 적어도 5.0배, 적어도 7배 또는 적어도 10배 만큼 감소되고, 상기 표준 치료는 해당 표준 치료에 사용된 대체품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 15 미만인 것을 제외하고는 상기 대체품으로 치료와 동일한 것인, 혈액 응고 인자 대체품.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 프로트롬빈 시간 (PT) 값 및/또는 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 (aPTT) 값은, 위약 치료 후 또는 치료하지 않은 경우의 프로트롬빈 시간 (PT)의 각각의 값 및/또는 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 (aPTT)의 각각의 값과 비교하여 본질적으로 동일하고/동일하거나 상기 값에 대한 최대 편차를 가지나, 단, 상기 최대 편차는 5.0배, 3.0배, 2.5배, 2.0배 또는 1.5배를 초과하지 않는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 트롬빈 생성의 값은 표준 치료의 트롬빈 생성의 값에 비해 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45% 또는 적어도 50% 감소되고, 상기 표준 치료는 해당 표준 치료에 사용된 대체품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 15 미만인 것을 제외하고는 상기 대체품으로 치료와 동일한 것인, 혈액 응고 인자 대체품.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 대체품으로 치료 후 환자의 혈액 중 D-이량체 농도 (DD) 값이 표준 치료에 비해 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 7배 또는 적어도 10배 감소되고, 상기 표준 치료는 해당 표준 치료에 사용된 대체품의 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 15 미만인 것을 제외하고는 상기 대체품으로 치료와 동일한 것인, 혈액 응고 인자 대체품.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 대체품이 헤파린 및/또는 알부민을 추가로 포함하는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 인자 II는 10 - 80 IU/mL의 활성 수준으로 상기 대체품 내에 제공되는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.
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제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 치료 또는 예방은, 프로트롬빈 복합 응고 인자의 후천성 결핍증, 또는 결핍증에 대한 신속한 교정이 필요한 때인, 비타민 K 길항제의 과다복용의 경우에서의 출혈의 치료 및 수술 전후(perioperative)의 예방을 포함하거나; 또는 상기 치료 또는 예방은 임의의 비타민 K 의존성 응고 인자의 선천성 결핍증에서의 출혈의 치료 및 수술 전후의 예방을 포함하는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 대체품을 이용한 치료 이외에, 상기 환자를 상기 치료에 앞서, 상기 치료와 동시에 또는 상기 치료 후에 저온침전물과 같은 대체품 또는 피브리노겐 농축물을 이용하여 치료하는 것인, 혈액 응고 인자 대체품.
제3항에 있어서, 상기 대체품이
- 인자 II, IX 및 X을 함유하는 3-인자 복합체; 또는
- 인자 VII를 추가로 함유하는 4-인자 복합체
의 두 유형 중 어느 하나의 프로트롬빈 복합 농축물 (PCC)이고;
상기 대체품이 추가로 항트롬빈 III (ATIII)을 포함하며, 이 경우 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 15 내지 1 : 0.5 범위 내인 것인, 혈액 응고 인자 대체품.
(i) 후천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈의 치료 또는 예방을 위한, 또는
(ii) 선천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈의 치료 또는 예방을 위한, 프로트롬빈 복합 농축물 (PCC) 및 항트롬빈 III (ATIII)을 포함하는 약학적 조성물로서,
상기 PCC 및 ATIII는 공동-투여되고,
상기 PCC는 적어도 프로트롬빈 (인자 II), 인자 IX, 인자 X 및 임의로 인자 VII를 포함하고, 단, 상기 투여된 ATIII : 투여된 인자 II의 몰비가 1 : 15 내지 1 : 0.5 범위 내이며;
상기 조성물의 투여에 의해 혈전색전성 합병증에 대한 환자의 위험이 감소되는 것인, 약학적 조성물.
제1항 또는 제2항에 따라 사용하기 위한 약학적 혈액 응고 인자 대체 키트로서, 상기 키트가
(i) 적어도 프로트롬빈 (인자 II)을 포함하는 제1 조성물, 및
(ii) 항트롬빈 III (ATIII)을 포함하는 제2 조성물을 포함하고;
상기 제1 조성물 및 상기 제2 조성물을
(a) 투여 전 ATIII : 인자 II의 몰비가 1 : 15 내지 1 : 0.5 범위 내인 혼합물의 제조, 및/또는
(b) 상기 혼합물 또는 조성물들의 공동 투여 중 어느 하나가 가능하도록 상기 키트 내에 제공하나, 단, 투여된 ATIII : 투여된 인자 II의 몰비가 1 : 15 내지 1 : 0.5 범위 내이며,
상기 조성물의 투여에 의해 혈전색전성 합병증에 대한 환자의 위험이 감소되는 것인, 키트.
(i) 후천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한, 또는
(ii) 선천성 응고 인자 결핍증이 있는 환자의 출혈을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한, 프로트롬빈 (인자 II) 함유 의약품과의 공동 투여를 위한 항트롬빈 III (ATIII)을 포함하는 의약품으로서,
1 : 15 내지 1 : 0.5 범위 내의 ATIII : 인자 II의 몰비를 갖는 상기 프로트롬빈 (인자 II) 및 항트롬빈 III (ATIII)은 공동 투여되고,
상기 의약품의 공동 투여에 의해 혈전색전성 합병증에 대한 환자의 위험이 감소되는 것인, 의약품.
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