FI89506C - Foerfarande foer att frigoera cellkulturer fraon mikrobaerare - Google Patents

Foerfarande foer att frigoera cellkulturer fraon mikrobaerare Download PDF

Info

Publication number
FI89506C
FI89506C FI885435A FI885435A FI89506C FI 89506 C FI89506 C FI 89506C FI 885435 A FI885435 A FI 885435A FI 885435 A FI885435 A FI 885435A FI 89506 C FI89506 C FI 89506C
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
container
microcarriers
trypsin
trypsin solution
cells
Prior art date
Application number
FI885435A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI89506B (fi
FI885435A (fi
FI885435A0 (fi
Inventor
Wolfgang Mundt
Original Assignee
Immuno Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Immuno Ag filed Critical Immuno Ag
Publication of FI885435A0 publication Critical patent/FI885435A0/fi
Publication of FI885435A publication Critical patent/FI885435A/fi
Publication of FI89506B publication Critical patent/FI89506B/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI89506C publication Critical patent/FI89506C/fi

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12MAPPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M47/00Means for after-treatment of the produced biomass or of the fermentation or metabolic products, e.g. storage of biomass
    • C12M47/04Cell isolation or sorting
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12MAPPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M25/00Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
    • C12M25/16Particles; Beads; Granular material; Encapsulation

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

1 39506
Menetelmä soluviljelmien irrottamiseksi mikrokantoaineista
Esillä olevan keksinnön kohteena on patenttivaati-5 muksen 1 johdanto-osan mukainen menetelmä.
Tämän menetelmän tarkoituksena on soluviljelmien talteenotto niiden lisääntymisen avulla, mikrokantoaineis-sa. Soluviljelmien suurempien määrien ylläpitämiseksi on välttämätöntä irrottaa nämä viljelmät ajoittain mikrokan-10 toaineista ja siirtää ne vapaisiin mikrokantoaineisiin. Aikaisemmin tämä toimenpide on suoritettu useina erinä (panoksittain). Mikrokantoaineita sisältävään säiliöön johdetaan trypsiiniä, joka irrottaa solut. Soluja, so. soluja sisältävää solulietettä, poistettaessa säiliöstä 15 odotetaan, kunnes pääasiassa kaikki solut on irrotettu mikrokantoaineista. Suuri prosenttimäärä soluja irtoaa sangen nopeasti ja viipyy siten pitkän ajan trypsiini-liuoksessa. Tällöin esiintyy se haitta, että trypsiini vaikuttaa epäedullisesti näihin soluihin. Erityisesti nii-20 den kasvu ja siirtymisreaktio uusiin mikrokantoaineisiin huononevat. Tästä tulee erityisen kriittinen tekijä suurempien solumäärien yhteydessä, joiden muodostamat viljelmät ovat epäyhtenäisiä ja jotka on laskettava sangen erilaisten irrotusnopeuksien mukaisella tavalla.
25 Esillä olevan keksinnön tarkoituksena on tarjota käyttöön kuvatunlainen menetelmä, jonka yhteydessä tryp-siinin vaikutusaika irrotettuihin soluihin tulee rajoitetuksi minimiinsä.
Tämä tehtävä ratkaistaan keksinnön mukaisesti pa-30 tenttivaatimuksen 1 tunnusmerkillisen osan mukaisen menetelmän avulla.
Irrotut solut poistetaan tällöin trypsiiniliuoksen läpivirtausnopeutta vastaavalla nopeudella säiliöstä, jolloin vahingoittavaa vaikutusta ei esiinny. Trypsiiniliuok-35 sen läpivirtausta voidaan jatkaa tarpeen mukaan viimeisten 2 49506 soluviljelmien erottamiseen asti mikrokantoaineista. Tryp-siinin vaikutusaika irrotettuihin soluihin on kussakin vaiheessa suunnilleen yhtä lyhyt.
Trypsiiniliuoksen patenttivaatimuksen 2 mukainen 5 läpivirtaus sisältää sen edun, että mitään irtautuneita soluja ei pääse kerrostumaan säiliön pohja-alueelle, ja ne tulevat johdetuiksi pois virtaussuunnassa myös mikrokanto-aineen alueelta.
Patenttivaatimuksen 3 tunnusmerkilliset ominaisuu-10 det vastaavat erästä edullista menetelmäsovellutusta, jonka yhteydessä mikrokantoaineet tulevat kaikilta puolilta läpivirtaavan liuoksen huuhtelemiksi ja solujen irtautuminen kiihtyy.
Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmäsovellutus 15 sisältää sen edun, että sen yhteydessä trypsiiniliuos jakautuu tasaisesti osuen yhtenäisellä nopeudella mikrokan-toaineisiin ja niiden soluviljelmiin.
Patenttivaatimuksen 5 mukaisesti irrotetut solut johdetaan edullisesti edelleen toiseen tyhjään mikrokan-20 toainetta sisältävään säiliöön, jossa solut voivat heti ruveta lisääntymään.
Keksintö tarjoaa myös käyttöön patenttivaatimuksen 7 mukaisen menetelmän toteuttamista varten tarkoitetun laitteen, jonka avulla trypsiiniluoksen läpivirtaus tulee 25 mahdolliseksi.
Patenttivaatimuksen 8 mukainen edullinen sovellu- tusmuoto mahdollistaa pesupuskurinesteen läpivirtauksen ylhäältä alaspäin säiliön läpi ennen trypsiinin sisään syöttöä .
30 Käytetyn säiliön ja käytettyjen mikrokantoaineiden valmistamista uutta käyttökertaa varten helpottaa edullisesti patenttivaatimuksen 9 tunnusmerkillisen osan mukainen järjestely.
Keksinnön mukaista menetelmää selostetaan seuraa-35 vassa erään kaavamaisesti esitetyn laitesovellutuksen avulla (yksi kuvio).
3 4 9 506
Suljettuun säiliöön 1 on etäisyyden päähän sen pohjasta la asetettu läpäisevä sovite 2, esimerkiksi seula tai huokoinen levy. Tämän sovitteen 2 alapuolella säiliöön avautuu trypsiiniliuoksen syöttämistä varten tarkoitettu 5 syöttöjohto 3. Samoin säiliön seinäalueelle pohjan la ja sovitteen 2 väliin on muodostettu suljettava ulosvirtaus-aukko 4 pesupuskurinesteen poisjohtamista varten. Läpäisevän sovitteen 2 yläpuolella säiliöön 1 avautuu pesupuskurinesteen syöttöjohto 5 ja soluviljelmien lisääntymistä 10 varten tarkoitetun väliaineen syöttöjohto 6. Säiliössä kulkee edelleen ylhäältä irtautuneita soluja sisältävää suspensiota varten tarkoitettu poistojohto 7 sekä poisto-johto 8, viimeksimainitun johdon syöttöaukon ollessa suoraan sovitteen 2 päällä. Poistojohtoon 7 liittyy säiliön 15 ulkopuolella syöttöjohto 9. Poistojohtoon 7 on lisäksi liitetty kuviossa näkymätön imupumppu.
Säiliössä ulottuu edelleen ylhäältä sekoituselin 10, joka on kuviossa näkymättömällä tavalla laakeroitu säiliön ulkopuolelle käyttöä varten.
20 Läpäisevän sovitteen 2 päälle on asetettu pisteillä merkitty korkeudeltaan mielivaltainen mikrokantoaineiden 11 muodostama kerros. Tähän kerrokseen on ennen seuraavas-sa selostetun menetelmän aloittamista siirretty soluviljelmiä ja annettu niiden lisääntyä, kunnes mikrokantoker-25 ros 11 tulee täyteen niitä. Tämä vaihe voidaan todentaa ottamalla näyte haarakohdasta 12. Tämän jälkeen johdetaan läpivirtausmenetelmän yhteydessä ensin pesupuskuriliuos kulkemaan säiliön kautta, jolloin tämä liuos syötetään syöttöjohdon 5 välityksellä ja poistetaan samanaikaisesti 30 avatun poistoaukon 4 kautta. Aukon 4 sulkemisen jälkeen pumpataan säiliöön trypsiiniliuosta syöttöjohdon 3 välityksellä. Tämä liuos jaetaan kulkemaan läpäisevän sovitteen 2 läpi ja suunnataan kevyen ja tasaisen virtauspai-neen vallitessa mikrokantokerrokseen 11, joka kelluu täl-35 löin vapaasti. Trypsiinin vaikutuksesta soluviljelmät ir- 4 '39506 tautuvat mikrokantoaineista. Trypsiiniliuos johdetaan kulkemaan tämän läpivirtausmenetelmän yhteydessä ulos säiliöstä poistojohdon 7 kautta imupumpun välityksellä. Irronneet solut seuraavat välittömästi tätä virtausta ja 5 tulevat poistetuiksi säiliöstä. Syöttöjohdon 9 kautta syötetään samanaikaisesti väliainetta poistojohtoon 8, tämän väliaineen inaktivoidessa ja/tai erottaessa trypsiinin. Siten poisliotetut solut vapautuvat trypsiinin lisävaikutuksesta. Ne voidaan tällöin johtaa suoraan toiseen säili-10 öön, joka sisältää vapaita mikrokantoaineita.
Trypsiiniliuoksen läpivirtausta pidetään yllä niin kauan, että pääasiassa kaikki soluviljelmät tulevat irrotetuiksi ja siirretyiksi pois säiliöstä.
Trypsiiniliuoksen läpivirtausnopeus mitoitetaan si-15 ten, että mikrokantoaineet 11 tulevat kelluvaan tilaan, jolloin trypsiinliuos pääsee tunkeutumaan niihin kaikilta puolilta ja irrotetut solut voidaan siirtää nopeasti pois.
Soluviljelmien poistamisen jälkeen otetaan nyt pääasiassa tyhjät mikrokantoaineet pois säiliöstä poistojoh-20 don 8 välityksellä ja ne esikäsitellään sitten uutta käyttökertaa varten samoin kuin myös säiliö 6.
Sekoituselintä 10 voidaan tarvittaessa käyttää mik-rokantoaineiden nopeampaan sekoittamiseen pesupuskuri-liuoksen kanssa.

Claims (10)

1. Menetelmä soluviljelmien irrottamiseksi mikro-kantoaineista, jonka menetelmän yhteydessä soluja sisältä- 5 viä mikrokantoaineita sisältävään säiliöön syötetään tryp-siiniliuosta ja irrotetut solut johdetaan pois säiliöstä, tunnettu siitä, että trypsiiniliuos johdetaan lä-pivirtausmenetelmän avulla kulkemaan säiliön ja siten myös sen sisältämien mikrokantoaineiden kautta, jolloin irron- 10 neet solut voidaan siten samalla huuhtoa pois säiliöstä ja jolloin trypsiiniliuos inaktivoidaan ja/tai erotetaan lähdettyään säiliöstä.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että trypsiiniliuos pumpataan al- 15 haalta ylöspäin säiliön läpi.
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että trypsiiniliuoksen läpivir-tausnopeus mitoitetaan sellaiseksi, että mikrokantoaineet pysyvät kelluvassa tilassa.
4. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 1-3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että trypsiiniliuos syötetään mikrokantoaineita sisältävälle säiliöalueelle alhaaltapäin läpäisevän sovitteen läpi.
5. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 1-4 mukainen 25 menetelmä, tunnettu siitä, että irrotetut soluviljelmät syötetään edelleen tyhjiä mikrokantoaineita sisältävään säiliöön.
5 'J 9 506
6 It 9506 jossa säiliössä on sen pohjasta (la) välimatkan päässä läpäisevä sovite (2) ja jossa trypsiiniliuoksen syöttöjoh-to (3) tulee säiliöön sovitteen (2) alapuolelta ja irtautuneita soluja sisältävän suspension poistojohto (7) läh-5 tee säiliöstä sovitteen (2) yläpuolelta, jolloin säiliön (1) ulkopuolella poistojohtoon (7) yhtyy syöttöjohto (9) trypsiiniliuosta inaktivoivaa väliainetta varten ja/tai trypsiinin erottamiseksi.
6. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 1-5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että soluja sisältäviä 30 mikrokantoaineita sisältävän säiliön kautta johdetaan lä-pivirtausmenetelmän avulla kulkemaan pesupuskurinestettä ennen trypsiiniliuoksen syöttämistä.
7. Laite jonkin patenttivaatimuksen 1-6 mukaisen menetelmän suorittamiseksi, tunnettu siitä, että • 35 siihen kuuluu säiliö (1) mikrokantoaineita (11) varten,
8. Patenttivaatimuksen 7 mukainen laite, t u n -10 n e t t u siitä, että pesupuskurinestettä varten tarkoitettu syöttöjohto (5) avautuu ylemmälle säiliöalueelle ja että säiliön pohja-alueelle läpäisevän sovitteen (2) alapuolelle on muodostettu suljettava poistoaukko (4).
9. Patenttivaatimuksen 7 tai 8 mukainen laite, 15 tunnettu siitä, että mikrokantoaineiden (11) säiliöstä (1) poistamista varten tarkoitettu poistojohto (8) ulottuu tiiviisti sovitteen (2) päältä ylöspäin ja säiliöstä (1) ulos.
10. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 7-9 mukai-20 nen laite, tunnettu siitä, että säiliö (1) on varustettu läpäisevän sovitteen (2) yläpuolella olevalla haarakohdalla (12) näytteenottoa varten mikrokantoaineis-ta. 7 <9506
FI885435A 1987-11-23 1988-11-23 Foerfarande foer att frigoera cellkulturer fraon mikrobaerare FI89506C (fi)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE3739649 1987-11-23
DE19873739649 DE3739649A1 (de) 1987-11-23 1987-11-23 Verfahren zum abloesen von zellkulturen von mikrotraegern

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI885435A0 FI885435A0 (fi) 1988-11-23
FI885435A FI885435A (fi) 1989-05-24
FI89506B FI89506B (fi) 1993-06-30
FI89506C true FI89506C (fi) 1993-10-11

Family

ID=6341058

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI885435A FI89506C (fi) 1987-11-23 1988-11-23 Foerfarande foer att frigoera cellkulturer fraon mikrobaerare

Country Status (9)

Country Link
US (1) US5100799A (fi)
EP (1) EP0317810B1 (fi)
JP (1) JPH0740929B2 (fi)
AT (1) ATE110411T1 (fi)
CA (1) CA1322541C (fi)
DE (2) DE3739649A1 (fi)
DK (1) DK174998B1 (fi)
ES (1) ES2063016T3 (fi)
FI (1) FI89506C (fi)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1994017178A1 (en) * 1993-01-29 1994-08-04 New Brunswick Scientific Co., Inc. Method and apparatus for anchorage and suspension cell culture
US6378527B1 (en) 1998-04-08 2002-04-30 Chondros, Inc. Cell-culture and polymer constructs
WO2003036265A2 (en) * 2001-10-26 2003-05-01 Virtual Arrays, Inc. Assay systems with adjustable fluid communication
US20080187949A1 (en) * 2001-10-26 2008-08-07 Millipore Corporation Multiplexed assays of cell migration
US20040126773A1 (en) * 2002-05-23 2004-07-01 Beske Oren E. Assays with coded sensor particles to sense assay conditions
CN1300297C (zh) * 2002-09-20 2007-02-14 华东理工大学 一种用于动物细胞扩大接种的消化反应器
US20080207465A1 (en) * 2002-10-28 2008-08-28 Millipore Corporation Assay systems with adjustable fluid communication
US20090137018A1 (en) * 2003-06-30 2009-05-28 University Of South Florida Magnetic three-dimensional cell culture apparatus and method
WO2005010162A2 (en) * 2003-07-17 2005-02-03 Global Cell Solutions, Llc. Automated cell culture system and process
WO2005010139A2 (en) 2003-07-23 2005-02-03 University Of South Florida Ferromagnetic cell and tissue culture microcarriers
US8691565B2 (en) 2008-03-05 2014-04-08 Terumo Bct, Inc. Method of reseeding adherent cells grown in a hollow fiber bioreactor system
WO2011047900A2 (en) 2009-10-22 2011-04-28 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Novel process
CN101775364A (zh) * 2010-03-05 2010-07-14 广州齐志生物工程设备有限公司 一种动物细胞的分离方法及分离装置
EP3013940B1 (en) 2013-06-24 2017-04-12 Corning Incorporated Cell culture article and methods thereof
EP3207119B1 (en) 2014-10-17 2020-02-19 Sani-tech West, Inc. Mixing and filtering system
EP3303549B1 (en) 2015-05-29 2019-10-02 Mesoblast International Sàrl Methods and apparatus for separating cells from microcarriers
CN105238689A (zh) * 2015-09-29 2016-01-13 中牧实业股份有限公司 一种吹打细胞的装置及基于其的细胞传代培养方法
US20220073868A1 (en) 2019-01-16 2022-03-10 Corning Incorporated Systems and methods for culturing cells in suspension

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2300567A1 (de) * 1973-01-08 1974-07-11 Eberhard Dr Med Passarge Verfahren und einrichtung zum zuechten diploider fibroblasten oder aehnlicher zellen
US4144126A (en) * 1975-05-21 1979-03-13 Beecham Group Limited Cell culture method
US4201845A (en) * 1976-04-12 1980-05-06 Monsanto Company Cell culture reactor
GB2006181B (en) * 1977-10-20 1982-05-19 Hartley Simon Ltd Growth of biological material
US4237218A (en) * 1979-02-09 1980-12-02 Bio-Rad Laboratories, Inc. Micro-carrier cell culture
SE445116B (sv) * 1979-09-12 1986-06-02 Pharmacia Fine Chemicals Ab Sett att odla celler pa mikroberare med fibronektinytskikt
JPS60259179A (ja) * 1984-06-05 1985-12-21 Teijin Ltd 細胞培養槽及び細胞培養方法
JPS62500351A (ja) * 1984-08-28 1987-02-19 マサチュ−セッツ・インステチュ−ト・オブ・テクノロジ− 微粒子担体からの足場依存性細胞の分離

Also Published As

Publication number Publication date
DE3739649A1 (de) 1989-06-22
FI89506B (fi) 1993-06-30
EP0317810B1 (de) 1994-08-24
EP0317810A3 (de) 1991-02-06
DK615288D0 (da) 1988-11-03
DK615288A (da) 1989-05-24
CA1322541C (en) 1993-09-28
EP0317810A2 (de) 1989-05-31
ATE110411T1 (de) 1994-09-15
JPH01168273A (ja) 1989-07-03
ES2063016T3 (es) 1995-01-01
DE3739649C2 (fi) 1989-11-02
JPH0740929B2 (ja) 1995-05-10
FI885435A (fi) 1989-05-24
DE3851206D1 (de) 1994-09-29
DK174998B1 (da) 2004-04-13
US5100799A (en) 1992-03-31
FI885435A0 (fi) 1988-11-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI89506C (fi) Foerfarande foer att frigoera cellkulturer fraon mikrobaerare
US5766949A (en) Method and apparatus for cultivating anchorage dependent monolayer cells
CA1213200A (en) Method of cytodiagnostic investigation of epithelial cells and centrifugal chamber for working the same
US4358470A (en) Process and apparatus for the treatment of samples with a succession of liquids
US5707868A (en) Variable-volume reactor-type device and process for culturing cellular material
DE3689903T2 (de) Verfahren und vorrichtung zum trennen und isolieren von blut- oder knochenmarkskomonenten.
JP4649224B2 (ja) 付着性細胞の培養方法および培養装置
DE1064070T1 (de) Verbesserungen in vorrichtungen zur fest-flüssigkeittrennung, insbesondere zur biologischen reinigung von abwasser
JP2980867B2 (ja) 細胞の培養方法及び培養装置
GB2190603A (en) Method and apparatus for clarifying beer
EP1268742B1 (en) Perfusion incubator
JPS5564795A (en) Method and apparatus for culturing living tissue or cell
CN102649600A (zh) 一种可在线清洗mbr膜组器装置
JP5828823B2 (ja) 細胞培養モジュール及び細胞培養方法
JP3412364B2 (ja) 細胞培養装置及び細胞培養方法
JP5519994B2 (ja) 細胞培養装置及び細胞培養方法
JP6303497B2 (ja) 細胞剥離回収装置及び細胞剥離回収方法及び細胞培養システム
JPH04126068A (ja) 細胞の培養方法及びその装置
JPS61108371A (ja) 微小担体上またはカプセル内で細胞を培養するための容器
US20140245842A1 (en) Method and apparatus for detaching and/or isolating a histological sample
JPS5921388A (ja) 細胞培養方法
JPS6147184A (ja) 体細胞集積浮遊培養法及びそれに使用する培養器
RU2000106527A (ru) Способ и устройство для отделения шламоподобного материала
JPH0352954B2 (fi)
KR20230037659A (ko) 생물반응기-기반 청정 육류 생성을 위한 공정 시스템

Legal Events

Date Code Title Description
BB Publication of examined application
FG Patent granted

Owner name: IMMUNO AKTIENGESELLSCHAFT

MA Patent expired