FI87357C - Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara 3',4'-dikvaevesubstituerade glukosidderivat av epipodofyllotoxin - Google Patents

Description

s / o -j 1

Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten 3',4’-dityppi-substituoitujen epipodofyllotoksiiniglukosidijohdannaisten valmistamiseksi 5 Esillä oleva keksintö koskee menetelmää uusien, epipodofyllotoksiiniglukosidien 3',4'-dityppi-substituoi-tujen johdannaisten valmistamiseksi, jotka ovat terapeuttisesti käyttökelpoisia kasvaintenvastaisina aineina. Täsmällisemmin esitettynä esillä oleva keksintö koskee mene- 10 telmää uusien, terapeuttisesti käyttökelpoisten 3',4'-di-typpi-substituoitujen epipodofyllotoksiiniglukosidijoh

dannaisten valmistamiseksi, joilla on kaava IV

Y

(if i| I ) (IV)

Vi 20 ® jossa - . Y on H ja A valitaan ryhmästä, joka koostuu seuraa- vista: (Cj.joJ-alkyyli; (C2.10)-alkenyyli; (C5_6)-sykloalkyyli; ·; 25 2-furyyli; 2-tienyyli; aryyli; aralkyyli ja aralkenyyli, jolloin jokainen aromaattinen rengas voi olla substituoi-maton tai substituoitu yhdellä tai useammalla ryhmällä, joka on valittu seuraavista: halogeeni, (Cj.gJ-alkyyli, (Cj.gJ-alkoksi, hydroksi, nitro ja amino; tai : · 30 A ja Y ovat kummatkin (C1.6)-alkyylejä; tai A ja Y ja hiili, johon ne ovat kiinnittyneet, muodostavat yhdessä (C5.6)-sykloalkyyliryhmän; ja B valitaan ryhmästä, joka koostuu seuraavista: 35 2 »75^7

ΓΤΊ jfS jfS

5 H3CO^^^N0R^H3CCrJ\^^HR\H3C0-JX^\N=CHR5^ NOR1 NHR3 J,

N

li 5 CHR^

f\ jfS fS

H3CO^::5y^\ H3CO^\|^>n. H3ccr^Yi::\ </ ' Lj' kX ' 1 1« Je

Ja J0l h3co>S^\ HN v '

8 / X

20 RO

jolloin R ja R2 valitaan itsenäisesti ryhmästä, joka koostuu seuraavista: (CL.5)-alkyyli, aryyli ja aryyli-(C^.j)-al-kyyli; R3 ja R4 ovat itsenäisesti H, (C1.5)-alkanoyyli tai halogeenisubstituoitu (C2.5)-alkanoyyli; R5 on aryyli; aryy-25 li, joka on substituoitu yhdellä tai useammalla seuraavista ryhmistä: ()-alkoksi ja nitro; tai heteroaryyli; R6 ja R7 ovat kummatkin H tai ()-alkyyli; R8 on (0Χ.5)-alkyyli tai (Cx_s)-alkyyli, joka on substituoitu yhdellä tai useammalla seuraavista ryhmistä: hydroksi, alkoksi, alka-:30 noyylioksi, syaani, amino, alkyyliamino, dialkyyliamino, karboksi, alkyylitio, merkapto, alkanoyyliamino, alkanoyyli, karbamoyyli ja halogeeni; ja X on happi tai rikki.

Etoposidi (VP-16, Ia) ja teniposidi (VM-26, Ib) ovat kliinisesti käyttökelpoisia syövänvastaisia aineita, 35 jotka on johdettu luonnollisesti ilmenevästä lignaanista, podofyllotoksiinista (II). Nimistöllisistä syistä käytet- 3 :- 7 ' 7 ' W* *> f tävä numerointijärjestelmä esitetään kaavassa II. Etoposi-di ja teniposidi oat epipodofyllotoksiinijohdannaisia;

H

5 OH

HO ^ OH = (oXXX, i O I 0

10 JsX jlX

Η300^^γχ^00Η3 H3CO'^\^>^OCH3 OH OCH3

Ia: A = CH3 II

15 Ib: A = 2-tienyyli epipodofyllotoksiinin ollessa podofyllotoksiinin 4-asemas-sa oleva epimeeri. Etoposidi ja teniposidi toimivat aktiivisesti hoidettaessa erilaisia syöpäsairauksia, mukaan 20 lukien keuhkojen pikkusolusyöpä, ei-lymfosyyttinen leukemia sekä ei-itusolukasvaiminen kivessyöpä (AMA Drug Evaluation, 5. painos, American Medical Association, 1983, Chicago, Illinois, s. 1554-5).

Etoposidi ja teniposidi sekä menetelmät niiden val-25 mistamiseksi tuodaan esillä US-patenttijulkaisussa 3 524 844, Keller-Juslen et ai. Etoposidi-31,4'-kinonia (lila) on johdettu etoposidia sähkökemiallisesti hapetta-7 maila (Holthuis J. J. M. et ai., J. Electroanal. Chem.

Interfacial Electrochem., 1985,184(2):3127-29). Kinonin • 30 III valmistaminen kemiallisesti hapettamalla tuodaan esil le US-patenttijulkaisussa 4 609 644, Josef Nemec. Epipodo-fyllotoksiini-34'-kinonijohdannaiset III, joissa A ja Y merkitsevät samaa kuin kaavassa IV, toimivat lähtöaineina valmistettaessa kaavan IV mukaisia typpeä sisältäviä epi-35 podofyllotoksiinijohdannaisia.

4 P 7 V. · η —0

OH I

5 ('if^TjO5 Λ' H3co'7(^\> 10 0

III

Ilia: A = CH3; Y = H.

Julkaisussa Ayres ja Lim, Cancer Chemother Pharma-15 col, 1982, 7:99-101, tuodaan esille podofyllotoksiini, jolla on kaava

OH

/YvS^» : Λ °

H3C0"Y^I

'ό

Rakennekaavojen, jotka kaavat selityksessä ja pa-30 tenttivaatimuksissa esiintyvää B-substituenttia, tarkoite-tuksena on käsittää kaikki diastereomeeriset ja/tai tauto-meeriset muodot, milloin ne ovat mahdollisia.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle uusien kaavan IV mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi on tunnusomaista, 35 että menetelmä käsittää seuraavat vaiheet: 5 .--- ,., f \j \j / (a) annetaan kaavan III mukaisen yhdisteen

Y

0^^^:0Η I

CXXX/ (ΐ111 Λ0 10 ch3o-^y^o ο reagoida ainakin yhden mooliekvivalentin kanssa yhdistettä, jolla on kaava HjNOR1, tai sen happoadditiosuolaa ja ainakin yhden mooliekvivalentin kanssa yhdistettä, jolla 15 on kaava H2NOR2, tai sen happoadditiosuolan, jolloin saadaan kaavan V mukainen yhdiste,

Y

20 OH I

(V)

25 jV

CH3°^Y1J0R2 NOR1 jossa A, Y, R1 ja R2 merkitsevät samaa kuin edellä ja R1 ja 30 R2 voivat olla samoja tai erilaisia; ja (b) haluttaessa hydrogenoidaan kaavan V mukainen yhdiste jalometallikatalysaattorin läsnäollessa, jolloin saadaan kaavan VI mukainen yhdiste, 35 C P 1 ·· 7 6 “ ! J v> /

Y

5 / I /° (VI) ή1 ch3o^X1^%h2 10 NH2 ja (c) haluttaessa annetaan kaavan VI mukaisen yhdisteen reagoida 15 (i) ainakin yhden mooliekvivalentin kanssa kaavan L-R3 mukaista yhdistettä ja ainakin yhden mooliekvivalentin kanssa kaavan L-R4 mukaista yhdistettä, joissa L on poistuva ryhmä ja R3 ja R4 ovat samoja tai erilaisia ja merkitsevät (Cj.5 )-alkyyliä tai halogeenisubstituoitua ( C2.5)-alkyy-20 liä, happoakseptorin läsnäollessa, jolloin saadaan kaavan VII mukainen yhdiste,

Y

f \ iL (vii) Λ" 30 CII3U^S^S)I1R4 NHR3 tai (ii) ainakin kahden mooliekvivalentin kanssa kaavan R5C(0)H mukaista yhdistettä, jossa R5 merkitsee samaa kuin 35 edellä, jolloin saadaan kaavan VIII mukainen yhdiste, I: 7 87 3c';7

HO-^ OH I

( I /° (viii) jS ° 10 CHlO^^^sji^Sir^CHR5 N=CHR5 tal (iii) nitriitin kanssa hapon läsnäollessa, jolloin saadaan kaavan IX mukainen yhdiste,

15 Y

20 COO/ ,ix) ° CH3°"l\r)) . : : ,κ . . h\j—n 25 tai (iv) kaavan R6C(0-alk)3 mukaisen yhdisteen kanssa, jossa R6 merkitsee samaa kuin edellä, hapon läsnäollessa, jolloin saadaan kaavan X mukainen yhdiste, 30

'oh I

Jl o

35 Jl I

<x» s 87557 tai (v) kaavan R6C(0)C(0)R7 mukaisen yhdisteen kanssa, jossa R6 ja R7 merkitsevät samaa kuin edellä, jolloin saadaan kaavan XI mukainen yhdiste, 5 f ° v / II/ (XI) 10 .......( ΟΗ3θΑ^ί5Η 15 ΉΧ7 tai R6

(vi) kaavan L2-P02R8 mukaisen yhdisteen kanssa, jossa L on poistuva ryhmä ja R0 merkitsee samaa kuin edellä, happoakseptorin läsnäollessa, jolloin saadaan kaavan XII

20 mukainen yhdiste,

OH I

: 5 25 / 'l ΐΓ^Γ/° (XII) :Λ' CH3°^Y^S,h

30 HN—P^Y

R»i) tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä happoadditiosuola.

Lähtöaine esillä olevaan keksintöön, 3’,4'-kinoni III, voidaan valmistaa siten, että annetaan hapettavan 35 aineen reagoida 4'-demetyyliepipodofyllotoksiini-S-D-glu- il 9 67557 kosidijohdannaisen I kanssa. Menetelmä on kuvattu US-pa-tenttijulkaisussa 4 609 644.

Erään esillä olevan keksinnön sovellutuksen mukaan esillä olevan keksinnön avulla saadaan kaavan V mukaisia 5 bis-oksiimieettereitä joissa A, Y, R1 ja R2 merkitsevät samaa kuin edellä.

Edullisen suoritusmuodon mukaan saadaan yhdiste, jolla on kaava V, jossa R1 ja R2 valitaan ryhmästä, joka koostuu seruaavista: ()-alkyyli ja aryyli-(C1.5)-alkyyli, 10 ja metyyli ja fenyylimetyyli ovat kaikkein edullisimmat ryhmät.

Kaavan V mukaisia bis-oksiimieettereitä voidaan valmistaa siten, että annetaan kaavan lii mukaisen 3',4'-kinonin reagoida O-substituoidun hydroksyyliamiinin kans-15 sa, jota on ylimäärin, tai sen happoadditiosuolan kanssa, sopivassa orgaanisessa liuottimessa, kuten pyridiinissä. Reaktio suoritetaan edullisesti kohotetussa lämpötilassa niin kauan, että lähtöaine muuttuu bis-oksiimieetteriksi; tavallisesti tällainen reaktioaika on 24 tuntia tai enem-20 män. Näin muodostuneet tuotteet voidaan eristää ja puhdistaa tunnetuilla menetelmillä, esim. flash-kromatografial-: : la; tai vaihtoehtoisesti tuotteet voidaan pelkistää suo raan, ilman että niitä ensin eristetään, vastaavaksi 3',4'-diamino-yhdisteeksi, jolla on kaava VI.

: .-.25 Siten esillä olevan keksinnön erään toisen sovellu tuksen mukaan saadaan kaavan VI mukainen diaminoyhdiste, jossa A ja Y ovat kuten aikaisemmin määritettiin, sekä sen farmaseuttisesti hyväksyttäviä happoadditiosuoloja.

Kaavan VI mukainen diamiini voidaan valmistaa pel-30 kistämällä kaavan V mukainen bis-oksiimieetteri; ja kuten edellä mainittiin, voidaan käyttää joko puhdistettua kaavan V mukaista yhdistettä tai käsittelemätöntä tuotetta. Bis-oksiimieetterin pelkistys voidaan suorittaa tunnetuilla menetelmillä, esim. heikolla kemiallisella pelkisti-35 mellä, tai hydraamalla sopivan katalyytin läsnäollessa.

10 p 7 537 jollaisia ovat Pt, Pd, Ni, Ru tai Rh. Edullisesti käytetään katalyyttistä hydrausta.

Kaavan VI mukaisista diamino-yhdisteistä voidaan edelleen muodostaa johdannaisia, jolloin saadaan esimer-5 kiksi amideja, iminejä ja heterosyklisiä yhdisteitä, jotka on määritelty kaavalla IV. Reaktiot suoritetaan tavallisesti inertissä orgaanisessa liuottimessa, kuten tetrahyd-rofuraanissa, dikloorimetaanissa tai kloroformissa, olosuhteissa jotka ovat sopivia haluttujen tuotteiden saami-10 seksi. Tuotteet voidaan eristää ja puhdistaa käyttäen tunnettuja menetelmiä, kuten uudelleenkoteytystä ja monia kromatograafisia menetelmiä.

Siten esillä olevan keksinnön erään sovellutuksen mukaan saadaan kaavan VII mukaisia amideja, joissa A, Y, R3 15 ja R4 on aikaisemmin määriteltyjä, paitsi että R3 ja R4 eivät molemmat ole vetyjä.

Edullinen suoritusmuodon mukaan esillä olevan keksinnön avulla saadaan kaavan VII mukaisia yhdisteitä, joissa R3 ja R4 ovat kummatkin (C1.5)-alkanoyylejä tai halo-20 geeni-substituoituja (C1.5)-alkanoyylejä.

Amidijohdannaisia voidaan valmistaa tavanomaisilla asylointimenetelmillä, jotka ovat tuttuja synteettisen orgaanisen kemian asiantuntijalle. Sopivia asylointiainei-ta ovat, joskaan luettelo ei ole rajoittava, karboksyyli-25 happo, edullisesti kondensoivan aineen, kuten disyklohek-syylikarbodi-imidin (DCC):n läsnäollessa; happohalogenidi; symmetrinen tai epäsymmetrinen anhydridi; tai reaktiivinen esteri tai amidi. Tavallisesti valmistettaessa amidijoh-dannaisia käyttäen happohalogenidia tai anhydridiä, reak-30 tiot suoritetaan edullisesti lämpötilassa, joka on alhai sempi kuin huoneenlämpötila ja joka on noin -20 °C -10 °C. Bis-asyloidut johdannaiset saadaan edullisesti, kun reaktio suoritetaan emäksen läsnäollessa ja kun asyloivaa ainetta käytetään moolLmääLänä, Joka on vähintään kaksi 35 kertaa kaavan VII mukaisen diamiini-yhdisteen moolimäärä; sopivia emäksiä ovat esim. pyridiini, trietyyliamiini, di- t 11 87ίύ7 isopropyylietyyliamiini ja dimetyyliaminopyridiini. Kun asyloivaa ainetta käytetään ekvivalenttisena määränä di-amiini-yhdisteen kansa ja emästä ei käytetä, saadaan 3'-ja 4'-monoasyloitujen johdannaisten seos.

5 Erään esillä olevan keksinnön sovellutuksen mukaan keksinnön avulla saadaan kaavan Vili mukaisia bis-iminoyh-disteitä, joissa A, Y ja H5 on aikaisemmin määriteltyjä.

Kaavan VIII mukaisia bis-imino-yhdisteitä voidaan valmistaa, kun saatetaan kaavan VI mukaisia diaminoyhdis-10 teitä reagoimaan ylimäärän kanssa aldehydiä huoneenlämpö-tilassa, edullisesti happokatalyytin, uten p-tolueenisul-fonihapon läsnäollessa, ja niitä voidaan valmistaa edullisesti myös käyttämällä menetelmää veden poistamiseksi; sopivia tällaisia menetelmiin kuuluu dehydratoivan aineen 15 käyttö, kuten molekyyliseulojen käyttö, tai atseotrooppi-nen tislaus. Kaavan VIII mukaiset yhdisteet ovat usein labiileja, ja edullisesti niiden eristäminen käy kromato-grafian avulla käyttäen neutraalia aluminiumoksidia.

Eräiden sovellutusten mukaan esillä olevan keksin-20 nön avulla saadan kaavojen IX - XII mukaisia yhdisteitä.

Siten diatsotiosoimalla kaavan VI mukaisia 4',5'-diamino-yhdisteitä saadaan vastaavia triatsolijohdannaisia (kaava IX). Imidatsolijohdannaisia (kaava X) voidaan valmistaa antamalla diamino-yhdisteiden reagoida trialkyyli-25 ortoestereiden kanssa. Diamino-yhdisteiden ja 1,2-diokso-alkaanien reaktiosta saadaan pyratsiinijohdannaisia (kaavan XI). Diamino-yhdisteiden ja dihalogeenialkyylifosfaat-tien tai dihalogeenialkyylitiofosfaattien reaktiosta saadaan vastaavia syklisiä fosfamidi- tai tiofosfamidijohdan-30 naisia (kaava XII), tässä järjestyksessä.

Biologinen vaikutus

Kaavan IV mukaisista edustavista yhdisteistä arvioitiin niiden kasvainten vastainen vaikutus in vitro solumyrkyllisyyskokeessa ihmisen ja hiiren syöpäsoluja 35 vastaan, kuin myös istutettavaa hiiren P388 -leukemiaa vastaan.

12 b 7.:,7 P388 -leukemia

Naaraspuolisiin CDF^hiiriin istutettiin vatsakalvon sisäpuolelle kasvainistute, joka käsitti ΙΟ6 P388 -hiiri-leukemian vesivatsasoluja, ja niille annettiin useita an-5 noksia koeyhdistettä; kutakin annostasoa varten käytettiin neljää hiirtä ja suolaliuoksella käsiteltäviä seurantahii-riä oli kymmenen. Yhdisteet annettiin vatsakalvonsisäisenä injektiona 5. ja 8. päivänä (1. päivä oli kasvainistutteen antamispäivä). Kasvaintenvastainen vaikutus ilmaistiin ar-10 volla % T/C, joka on lääkeaineella käsitellyn ryhmän eloonjäämisajan mediaanin (MST) suhde suolaliuoksella käsitellyn ryhmän vastaavaan arvoon. Yhdisteellä, jonka % T/C -arvo on 125 tai sitä suurempi, katsotaan tavallisesti olevan merkittävää kasvaintenvastaista vaikutusta P388-15 kokeessa. Tutkimus kesti 31 päivää, tutkimuksen loputtua merkittiin ylös eloonjääneiden lukumäärä. Taulukossa I esitetään tulokset edellä kuvatusta arvioinnista; ainoastaan % T/C:n maksimiarvo sekä maksimitehokkuuden osoittava annos selostetaan.

20 TAULUKKO I

Kasvaintenvastainen vaikutus P388 -leukemiaa vastaan

Yhdiste Annos esimerkistä_(mg/kg/inj )_Maks. % T/C_ 1 100 126 : : 25 2 >200 175 (270) 3 >100 216 : 4 >160 105 (270) 10 >180 145 (270) 17 >180 125 (>370) 30 18 >140 115 (270) 20 >180 110 (270) 21 >120 145 (270) * Suluissa olevat arvot saaliin, kun käytettiin varsinai-35 sena seurantana etoposidia samassa tutkimuksessa.

i i3 8 7 557

Solumyrkyllisyyskoe

In vitro -solumyrkyllisyyskoe käsitti useiden erilaisten nisäkkään kasvainsolujen, ihmisen kasvainsolut mukaan lukien, kasvattamisen mikrotiitterilevyillä tun-5 nettuja kudoksenviljelymenetelmiä käyttäen. Kunkin yhdisteen väkevyys, joka tarvittiin inhiboimaan solun kasvua 50 %:lla (IC50), määritettiin sitten nelinkertaisen sarjalai-mennuksen menetelmällä. Kokeen pätevyyttä tukee julkaisussa "Proceedings of the American Association for Cancer 10 Research", 1984, 25:1891 (Abst. nro. 328) julkaistu ra portti. Kutakin testattavaa yhdistettä varten käytettiin seuraavan tyyppisiä kasvainsoluja: B16-F10 hiirimelanoo-ma-; KB ihmisen nenä-nielu-; Moser ihmisen paksunsuolen; SV900 ihmisen keuhko-; M109 hiiren keuhkokasvainsoluja; 15 sekä kolmenlaisia ihmisen paksunsuolen kasvainsoluja, nimittäin HCT-116, HCT-VM ja HCT-VP, joista kaksi viimeksi mainittua oli resistenttejä teniposidille (VM) ja etoposi-dille (VP), tässä järjestyksessä. IC60-arvot, jotka ovat suuruudeltaan vähemmän kuin 500 pg/ml, ovat kasvaintenvas-20 täisen vaikutuksen varsinaisia indikaattoreita. Taulukossa II esitetään erilaisten kaavan IV mukaisten yhdisteiden IC50-arvot edellämainittuja solulinjoja vastaan.

i4 8 7 3 5 7

TAULUKKO II

In vitro-solumyrkyllisyyskokeen IC50-arvot (g/ml)* 3-16-F10 HCT-116 HCT/VM4 6 HCT/VP35 MOSER SW900 5

Esimerkki 17 .

45 53 64 84 91 78 55 62 88 82 88 89 3-16-F10 HCT-116 MOSER SW900 10--

Esimerkki 2 29 84 54 >250 51 91 40 >250

Esimerkki 4 116 >250 106 >250 98 >250. 123 >250

Esimerkki 10 59 81 31 >250 100 103 65 >250 20

Esimerkki 18 82 >250 116 >250 55 >250 115 >250

Esimerkki 20 118 10 3 113 >25 0 25 113 99 90 >250

Esimerkki 21 23 20 21 >250 17; 9 26 23 >250 30 3-16-F10_HCT-116_KB_MOSER_M10 9

Esimerkki 1 14,5 7,4 37 43 83 14, 1 17, 4 28 11 59

Esimerkki 3 59 108 290 87 104 146 102 91 91 87 I· i5 8 7ο.,/

Edellä esitetyistä tiedoista voidaan havaita, että vaikkakaan joissakin testattavista analogeista ei ollut havaittavissa vaikutusta in vivo P388 -leukemiaa vastaan, niiden voidaan kaikkien katsoa vaikuttavat moniin erili-5 siin kiinteisiin kasvaimiin in vitro -solumyrkyllisyys-kokeissa.

Siten tämän keksinnön avulla saatuja kaavan IV mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää kasvainsolujen kasvun estämiseen antamalla tehokas kasvainta inhiboiva annos 10 kaavan IV mukaista antitumoorista yhdistettä potilaalle, jolla on kasvain.

Esillä olevan keksinnön avulla saadusta kaavan IV mukaisesta yhdisteestä voidaan valmistaa farmaseuttinen koostumus, joka käsittää tehokkaan kasvainta inhiboivan 15 määrän kasvaintenvastaista kaavan IV mukaista yhdistettä sekä farmaseuttisesti hyväksyttävää kantaja-ainetta. Tällainen koostumus voidaan saattaa mihin tahansa halutulle antamistavalle sopivaan muotoon. Esimerkkeinä tällaisista koostumuksista ovat suun kautta annettavat kiinteät koos-20 tumukset, kuten tabletit, kapselit, pillerit, jauheet ja rakeet, suun kautta annettavat nestemäiset koostumukset, kuten liuokset, suspensiot, siirapit tai eliksiirit sekä ruoansulatuskanavan ulkopuolelle annettavat valmisteet, kuten steriilit liuokset, suspensiot ja emulsiot. Koostu-25 mukset voidaan valmistaa myös steriilien kiinteiden koos-tumusten muotoon, jolloin ne voidaan liuottaa steriiliin veteen, fysiologiseen suolaliuokseen tai johonkin muuhun steriiliin injektoitavaan väliaineeseen välittömästi juuri ennen käyttöä.

30 Parhaimmat mahdolliset annostukset ja menetelmät kulloinkin kysessä olevalle nisäkäspotilaalle asiantuntijat voivat helposti määrittää. On kuitenkin toivottavaa, että käytettävä todellinen annos vaihtelee tietyn formuloidun koostumuksen, tietyn käytettäviin yhdisteen, anta-35 mistavan sekä tietyn hoidettavan kasvaimen sijainnin, po- ie 87557 tilaan ja sairauden mukaan. Tulee ottaa huomioon monia lääkeaineen toimintaa muuntelevia tekijöitä, kuten ikä, paino, sukupuoli, ruokavalio, antamisaika, antamistapa, eritysmäärä, potilaan kunto, lääkeaineyhdistelmät, reak-5 tioherkkyydet sekä sairauden vakavuus.

Seuraavat esimerkit on tarkoitettu valaisemaan keksintöä, eikä niiden tarkoituksena ole rajoittaa keksinnön suojapiiriä.

Seuraavissa esimerkeissä kaikki lämpötilat annetaan 10 celsius-asteina. Sulamispisteet mitattiin Thomas-Hoover- kapillaari-sulamispistelaitteella ja ne ovat korjaamattomia. 1H NMR -spektrit tallennettiin joko Bruker WM 360 tai Varian VX2 200 -spektrometrillä (käyttäen CDCl3:a sisäisenä vertailuaineena). Kemialliset siirtymät tallennetaan 6-15 yksikköinä ja kytkentäkertoimet hertseinä. Jakomallit merkitään seuraavasti: s, singletti; d, dupletti; t, triplet-ti; q, kvartetti; m, multipletti; bp, leveä piikki ja dd, dupletin dupletti. Infrapunaspektrit määritettiin joko Beckman Model 4240 tai Perkin-Elmer 1800 Fourier Transform 20 -infrapunaspektrometrillä ja ne annetaan senttimetrien käänteislukuna (cm"1). Ohutkerroskromatografia (TLC) suoritettiin esipäällystetyillä silikageelilevyillä (60F-254) käyttäen UV-valoa ja/tai jodihöyryjä tulosten näkemiseksi. Korkea ja matala-resoluutiomassaspektrit tallennettiin 25 KRATOS MS 50 ja KRAT0S MS 25RFA -spektrometrillä, tässä järjestyksessä. "Flash-kromatografia" viittaa menetelmään, jonka Still on kuvannut (julkaisussa Still, W. C. et ai., J. Org. Chem., 1978, 43:2923), ja se suoritettiin käyttäen joko E. Merck -silikageeliä (200-400 huokoskoko) tai 30 Woelm-silikageeliä (32-6e pm). Kaikkien liuottimien haihduttaminen suoritettiin alennetussa paineessa. Termillä "ETOP" tarkoitetaan seuraavaa rakenteellista osaa 17 87ϊ;>7

H

Η0-^ OH V

f_^ O

Esimerkki 1 10 4 1 -dehydroksi-3 ’ -demetoksi-etoposidi-3 1,4 ' -bis-O- bentsyylioksiimi "ETOP" 15 jfl, H3CO^V>SNOCH2Ph N0CH2Ph

Kiinteää O-bentsyylihydroksyyliamiinihydrokloridia 20 (2,80 g, 17,5 mmol) lisättiin liuokseen, jossa oli etopo- sidi-3',4'-kinonia (2,50 g, 4,37 mmol) pyridiinissä (75 ml). Seosta sekoitettiin 54 °C:ssa 43 tuntia ja sitten 60-70 °C:ssa vielä 15 minuuttia. Pyridiini poistettiin alennetussa paineessa ja jäännös liuotettiin CH2Cl2:een (250 ml) 25 ja uutettiin seoksella, jossa oli vettä (200 ml) ja IN HCl:a (70 ml). Vesikerros uutettiin edelleen CH2Cl2:lla (2 x 15 ml) ja yhdistetyt uutteet pestiin vedellä (100 ml) ja suolaliuoskella (150 ml) ja kuivattiin Na2S04:n päällä. Liuottimen haihduttamisen jälkeen saatiin 3,70 g keltai-30 sen oranssia kiinteää ainetta, joka puhdistettiin flash-kromatografiällä silikageelillä. Eluoimalla 1 % CH2Cl2:ssa olevalla CH30H:lla, muodostui 2,10 g (61,4 %) puhdasta otsikon yhdistettä keltaisen oranssina kiinteänä aineena, s.p. 152-156 °C.

35 XH NMR (CDC13) δ 7,38-7,11 (m,10H), 6,76 (s,lH), 6,53 (s,1H), 6,02 (d,1H), 5,96 (d,2H), 5,90 (d,lH), 5,46 18 Β7^7 (s,2H), 5,13 (s,2H), 4,82 (d,1H,J = 3,5Hz ), 4,73 (q,lH, J=5Hz), 4,61 (d,lH,J=7,6Hz), 4,42 (dd,lH), 4,30-4,24 (m,2H), 4,14 (dd,lH,J=3,9 ja 10,4Hz), 379 (s,3H), 3,74- 3,69 (m,1H), 3,57-3,51 (m,lH), 3,43-3,37 (m,lH), 3,32- 5 3,29 (m,2H), 3,23 (dd,lH,J=5,5 ja 14,1Hz), 2,89-2,82 (m,1H), 2,64 (d,1H,J=2Hz,OH), 2,30 (d,1H,J=2,3Hz,OH), 1,27 (d,3H,J=5Hz).

Esimerkki 2 4' -dehydroksi-3 1 -demetoksi-etoposidi-3 1,4 ' -bis-O- 10 metyylioksiimi "ETOP"

A

15 H3CO'^\^/^NOCH3 noch3

Kiinteää metoksyyliamiinihydrokloridia (3,0 g, 35 mmol) lisättiin liuokseen, jossa oli etoposidi-o-kinonia 20 (5,0 g, 8,73 mmol) pyridiinissä (50 ml) sekoittaen huo neen lämpötilassa, N2:n läsnäollessa. Tummanpunainen liuos muuttui välittömästi tumman oranssiksi liuokseksi lisäyksen jälkeen. Reaktioseosta kuumennettiin 24 tuntia 60 °C:s-sa ja sitten vielä 24 tuntia 75 °C:ssa. Pyridiini poistet-. 25 tiin haihduttamalla tyhjössä. Flash-kromatografroimalla silikageelillä, käyttäen eluenttina 4 % MeOHrn liuosta, joka oli CH2Cl2:ssa, saatiin 4,73 g keltaisen oranssia kiinteää ainetta (86 %), sp. 205-210 °C.

IR (Kbr )3480 (b), 2920, 1780, 1495 cm'1.

30 rH NMR (CDC13) δ 6,79 (s,lH), 6,53 (s,lH), 6,00 (m,3H), 5,83 (s,1H), 4,88 (d, J=3,2Hz,lH), 4,75 (m,lH), 4,64 (d, J=7,0Hz,lH), 4,50-4,05 (m,4H), 4,20 (s,3H), 3,95 (s,3H), 3,79 (s,3H), 3,75-3,20 (m,6H), 2,94 (m,lH), 1,38 (d, J=5,0Hz,3H ) .

35 MS (FAB) m/e = 631 (M+H) + l.

19 87 057

Esimerkki 3 41-dehydroksi-3'-demetoksi-31,4'-diaminoetoposidi "ETOP" H 3 c°2 nh2 10 Liuosta, jossaoli4'-dehydroksi-3'-demetoksietopo- sidi-3',4’-bis-O-bentsyylioksiimia (2,00 g, 2,55 mmol) reagenssialkoholissa (100 ml) ja etyyliasetaatissa (65 ml), käsiteltiin 20 % palladiumhydroksidi-hiilellä ja sitä hydrattiin 450 kPa:ssa 1,5 tuntia. Seos suodatettiin se-15 liittisuodattimen läpi ja pestiin etyyliasetaatilla. Suo-dos väkevöitiin ja puhdistettiin flash-kromatografiällä silikageelillä. Eluoimalla 2 % CH30H:n liuoksella, joka oli CH2Cl2:ssa, sen jälkeen 5 % CH30H:lla, joka oli CH2Cl2:ssa, saatiin 1,12 g (76,7 %) puhdasta otsikon yhdistettä har-20 mahtavan valkoisena kiinteänä aineena, sp. 235-240 °C (hajoaa, tummenee 200 °C:ssa). Jauhamalla kuivaksi eetterissä, saatiin analyyttinen näyte.

IR (KBr) 3420, 1775, 1505, 1485, 1230, 1165, 1095, 1075, 1040, 1005, 930 cm*1.

• 25 lH NMR (CDC13) δ 6,78 (s,lH), 6,54 (s,lH), 6,35 (d,lH,J= 1,3Hz), 5,95 (d,2H), 5,70 (d,1H,J=1,3Hz), 4,86 (d,lH,J= 3,3Hz ), 4,73 (q,1H,J=5Hz), 4,63 (d,1H,J=7,6Hz), 4,52 (d, 1H,J=5,1Hz), 4,38 (dd,lH), 4,20-4,13 (m,2H), 3,79-3,73 (m,1H), 3,75 (s,3H), 3,59-3,53 (m,lH), 3,41 (dd,lH), 3,35-30 3,31 (m,2H), 3,20 (dd,lH,J=5,l ja 14,1Hz), 2,98-2,88 (m, 1H), 1,38 (d,3H,J=5Hz).

Analyysi yhdisteelle ^28^32^2^11 *

Laskettu: C 58,73, H 5,63, N 4,89

Saadut arvot: C 57,37, H 5,77, N 4,78 35 20 η'θϊ/f

Esimerkki 4 4 ' -dehydroksi-3 1 -demetoksi-3 ', 4 1 -bis-asetyyliamino-etoposidi "ETOP" Λ H3CoA^-nhcch3 NH(jjCH3 0 10 Etikka-anhydridiä (68 μΐ, 0,71 mmol) lisättiin ti- poittain magneettisesti sekoitettuun liuokseen, jossa oli diaminoetoposidia (esimerkin 3 tuote, 0,200 g, 0,35 mmol) ja pyridiiniä (60 μΐ, 0,74 mmol) CH2Cl2:ssa (5 ml), 2 °C:s-sa, typpiatmosfäärissä. Sekoittamista jatkettiin 4 tuntia, 15 minkä jälkeen TLC-analyysi (5 % MeOH CH2Cl2:ssa) osoitti, että läsnä oli uutta vähemmän polaarista tuotetta, eikä lähtöainetta ollut. Reaktioseos kaadettiin veteen, uutettiin kolmesti CH2Cl2:lla, kuivattiin MgS04:llä ja puhdistettiin flash-kromatografiällä, käyttäen 4 % MeOH-liuosta, 20 joka oli CH2Cl2:ssa, eluenttina silikageelillä, ja näin saatiin 0,111 g (76 %) harmahtavan valkoista kiinteää ainetta, sp. (hajosi hitaasti vaahdoksi lämpötilassa, joka oli yli 217 °C).

IR (KBr) 3440 (b), 2930, 1780, 1679, 1490 cm'1.

25 XH NMR (CDC13) δ 8,84 (s,lH), 7,01 (s,lH), 6,80 (s,lH), 6,48 (s,1H), 6,47 (s,lH), 5,95 (d,J=5,8Hz,2H), 4,94 (d, J=3,3Hz,1H), 4,72 (m,lH), 4,64 (d,J=7,7Hz,1H), 4,39 (t, J=9,3Hz,1H), 4,24 (t,J=9,2Hz,1H), 4,15 (m,lH), 3,88 (s, 3H), 3,73 (t,J=8,7Hz,1H), 3,53 (t,J=9,6Hz,1H), 3,40 (t, 30 J=8,2Hz,1H), 3,40-3,10 (m,3H), 2,71 (bs,lH, [sokeri-OH]), 2,42 (bs,1H, [sokeri-OH]), 2,24 (s,3H), 2,02 (s,3H), 1,37 (d,J=5,1Hz,3H).

MS (FAB) m/e = 657 (M+H) +

Seurattaessa esimerkin 4 yleistä menetelmää ja käy-35 tettäessä alla lueteltuja asyloivia aineita etikka-anhyd-ridin sijaan, saadaan vastaavat bis-asyloidut yhdisteet.

21 87557 "ETOP"

5 NHR

Esimerkki Asyloiva aine Tuote 5 etikka-muurahaishappo- R=formyyli 10 anhydridi 6 trifluorietikka-anhydridi R=trifluori- asetyyli

Toistettaessa esimerkin 4 yleinen menetelmä käyt-15 täen alla lueteltuja asyloivia aineita ekvivalentteina moolimääriä 3',4'-diaminoetoposidin kanssa ja ilman pyri-diiniä, saadaan vastaavien 4'- ja 3'-monoasyloitujen johdannaisten seos.

"ETOP" "ETOP" 20 i 1

η300>\^λ^νη2 H3C0"^y^SjHR

NHR nh2 25

Esimerkki Asyloiva aine Tuote 7 etikka-anhydridi R=asetyyli 8 etikka-muurahais- R=formyyli happoanhydridi 30 9 trifluorietikka- R=trifluori- anhydridi asetyyli

Esimerkki 10 41-dehydroksj-3'-demetoksi-3',4'-bis-(4-pyridyyli- metyleeni )amino-etopos\ rf·; 99 5- 7 ' : 7 ZZ < 5 "ETOP" /=\ H3Co4j-N^CH-ii N=CH— 10

Liuosta, jossa oli 3 ' ,4'-diaminoetoposidia (esimerkin 3 tuote, 181 mg, 0,316 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (35 ml) typpiatmosfäärissä, käsiteltiin aktivoiduilla 4A mole-15 kyyliseuloilla (2,25 g) ja 4-pyridiinikarboksaldehydillä (4,56 g 42,6 mmol). Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 26 päivää ja sitten se kaadettiin suoraan 2 cm:n pylvään yläpäähän, ja pylväs oli täytetty 16,5 cm:llä neutraalia aluminiumoksidia. Eluoimalla peräkkäin 200 20 ml:11a 50 % ja 75 EtOAcrn liuoksella, joka oli CH2Cl2:ssa, ja sitten Et0Ac:lla ja 10-15 % CH3OH-liuoksella, joka oli EtOAc:ssa, poistettiin ylimääräiset aldehydi- tai ketoni-epäpuhtaudet. Lopulta otiskon yhdiste eluoitiin 130 ml:11a CH30H:a. Tyhjössä haihduttamisen jälkeen kiinteät aineet . 25 liuotettiin EtOAc:iin (75 ml) ja CH30H:hon (2 mol), suodatettiin ja haihdutettiin. Syntynyt keltainen kiinteä aine liuotettiin 2-3 % CH30H:hon, joka oli CH2Cl2:ssa ja suodatettiin 0,45:n mikrofiltterin läpi, jolloin saatiin kirkasta keltaista liuosta. Haihduttamalla pyörivässä haih-30 duttimessa ja kuivaamalla 0,1 torrissa, saatiin 145 mg (61 %) puhdasta otsikon yhdistettä keltaisen oranssina kiinteänä aineena. 360 MHz:n lH NMR-spektri osoitti, että kysymyksessä oli noin 65:35 suhteessa oleva isomeerien seos, joka määritettiin varauksin koostumukseltaan seuraavaksi: 35 3'-Z, 4'-E ja 3'-E, 4'-E, määrityksen perustuessa puhtaas ti steerisiin näkökohtiin.

li 23 8 7 ύ ό 7

Osittainen *Η NMR (CDC13) δ 8,73-8,66 (m,4H), 8,40 (s,lH), 8,28 (s,1H), 7,65-7,57 (m,4H), 6,96 (s,lH), 6,82 (s,lH), 6,57 (s,1H), 6,28 (d,lH), 6,01-5,94 (m,2H), 4,17 (s,3H), 1,24 (d,3H), 1,23 (d,3H).

5 Toistettaessa esimerkin 10 yleinen menetelmä käyt täen alla lueteltuja aldehydejä 4-pyridiinikarboksaldehy-din sijaan, saadaan vastaavat bis-iminoyhdisteet.

"ETOP" 10 |A) h3c°-^\x^—n=CHr N .

^CHR

15 Esimerkki Aldehydi Tuote (R=) 11 bentsaldehydi fenyyli 12 4-metoksibentsaldehydi 4-metoksifenyyli 13 3,4,5-trimetoksibents- 3,4,5-trimetoksi- aldehydi fenyyli 20 14 3-tiofeenikarboksalde- 3-tienyyli hydi 15 2-furankarboksaldehydi 2-furyyli 16 3-nitrobentsaldehydi 3-nitrofenyyli 25 Esimerkki 17 4' -dehydroksi-3 1 -demetoksi-etoposidi-3', 41 -triatso-li "ETOP" hn-js

Natriumnitriittiä (26,8 mg, 0,388 mmol) lisättiin 35 liuokseen, jossa oli 3',4'-diaminoetoposidia (esimerkin 3 tuote, 169,1 mg, 0,2953 mmol) kuivassa THFrssa (4 ml) ja 24 Η7~6 ί 7 jääetikkahapossa (0,75 ml). Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 3 tuntia, kaadettiin kylmään kylläiseen natriumbikarbonaatin vesiliuokseen (100 ml) ja uutettiin CH2Cl2:lla (2 x 50 ml). Yhdistetyt uutteet pestiin suola-5 liuoksella (50 ml) ja kuivattiin Na2S04:lla. Haihduttamalla pyörivässä haihduttimessa, sen jälkeen kiteyttämällä CH2Cl2:sta (3-5 ml), saatiin 128,1 mg (74,3 %) puhdasta otsikon yhdistettä värittömänä kiinteänä aineena, sp. 245-250 eC.

10 IR (KBr) 3445, 1775, 1625, 1605, 1507, 1488, 1455, 1400, 1345, 1240, 1165, 1100, 1085, 1045, 1010, 945, 880, 772, 705 cm'1.

UV (CHjOH) Xmaks. 287 nm (logε = 3,909).

lH NMR (CDCIj) δ 7,25 (d,lH), 6,84 (s,lH), 6,66 (d,lH), 15 6,51 (s,1H), 5,98 (s,2H), 4,91 (d,1H,J=3,3Hz), 478 (d, 1H,J=5,3Hz ), 4,73 (q,1H,J = 4,9Hz ), 4,65 (d,1H,J=7,5Hz), 4,42 (dd,1H), 4,20-4,14 (m,2H), 4,04 (s,3H), 3,73 (m,lH), 3,56 (m,1H), 3,44 (m,lH), 3,40-3,32 (m,3H), 2,94 (m,lH), 1,38 (d,3H,J=4,9Hz).

20 MS (FAB) m/e = 584 (M+H)\ 378 (M-sokeri)*.

Analyysi yhdisteelle CjgHjgNjOi!:

Laskettu: C 57,63, H 5,01, N 7,20

Saadut arvot: C 57,81, H 4,90, N 7,11 Esimerkki 18 25 4 1 -dehydroksi-3 ' -demetoksietoposidi-3 1,4 ' -lmidatso- li "ETOP" Λ

Liuosta, jossa oli 3',4'-diaminoetoposidia (esimer-35 kin 3 tuote, 182 mg, 0,318 mmol) CH2Cl2:ssa (10 ml), käsiteltiin trimetyyliortoformiaatilla (500 mg, 4,7 mmol) ja 25 B7oo7 g-tolueenisulfonihappomonohydraatilla (1,3 mg ), ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 6 päivää. Syntynyt otsikon tuote otettiin talteen suodattamalla harmahtavan valkoisena kiinteänä aineena (28,7 mg, 15,5 %). Jäljelle jää-5 nyttä suodosta käsiteltiin trimetyyliortoformiaatilla (2 ml) ja g-tolueenisulfonihappomonohydraatilla (8 mg) ja sekoitettiin huoneen lämpötilassa 12 päivää. Kun seosta oli käsitelty etyyliasetaatilla ja natriumkarbonaatin vesiliuoksella, syntynyt käsittelemätön materiaali flash-10 kromatografioitiin käyttäen 5 %, sitten 10 % CH30H:n liuosta, joka oli CH2Cl2:ssa, ja näin saatiin 53,6 mg (28,9 %) lisää puhdasta otsikon yhdistettä.

IR (KBr) 3435, 1775, 1633, 1603, 1490, 1390, 1340, 1240, 1165, 1100, 1080, 1040, 1010, 940, 703 cm'1.

15 *H NMR (d6-DMS0) δ 8,08 (leveä s,lH), 7,02 (s,lH), 6,61 (m,1H), 6,54 (s,lH), 6,48 (d,lH), 6,02 (s,2H), 5,24 (m, 2H), 4,95 (d,1H), 4,72-4,68 (m,2H), 4,56 (d,lH), 4,29- 4,22 (m,2H), 4,08 (dd,lH), 3,86 (s,3H), 3,50 (dd,lH), 3,38-3,03 (m,4H), 2,95-2,85 (m,lH), 1,23 (d,3H,J=5Hz).

20 UV (CH30H) λ maks. 243 (sh) ja 282 (logε = 3,765) nm.

MS (FAB) m/e = 583 (M+H)', 378 (m-sokeri)*.

Esimerkki 19 41 -dehydroksi-3 1 -demetoksietoposidi-3 ', 4' - (2-metyyli-im idät soli ) 25 "ETOP"

jS

N_{/ 30 —ί ch3

Toistettaessa esimerkin 18 menetelmä käyttäen tri-metyyliortoasetaattia ortoformiaatin sijaan, saadaan otsikon yhdiste.

26 *75δ7

Esimerkki 20 4 * -dehydroksi-3 1 -demetoksietoposidi-3 1,41 -(2,3-dimetyylipyratsiini) 5 "ETOP"

h3CO"C^N

10 CH3

Liuosta, jossa oli 3',4'-diaminoetoposidia (esimerkin 3 tuote, 225 mg, 0,393 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (15 15 ml), käsiteltiin tipoittain minuutin ajan sekoittamattomalla 2,3-butaanidionilla (56 mg, 0,65 mmol). Oltuaan 5-10 minuuttia huoneen lämpötilassa, reaktioseos jäähdytettiin 0 °C:seen ja tuote otettiin talteen suodattamalla, pestiin kylmällä CH2Cl2:lla ja kuivattiin, jolloin saatiin 20 163 mg (66,7 %) analyyttisesti puhdasta otsikon yhdistettä valkoisena kiinteänä aineena.

IR (KBr) 3450, 1776, 1620, 1575, 1508, 1490, 1387, 1342, 1236, 1203, 1165, 1117, 1095, 1080, 1040, 1007, 936, 892, 878, 700 cm'1.

25 *H NMR (d6-DMS0) δ 7,14 (d,1H,J = 1,2Hz), 7,05 (s,lH), 6,68 (d,1H,J=1,2Hz), 6,58 (s,lH), 6,04 (s,2H), 4,97 (S,1H,J= 3,4Hz), 4,80 (d,1H,J=5,6Hz), 4,71 (q,1H,J=5Hz), 4,55 (d, 1H,J=7,8Hz), 4,31-4,21 (m,2H), 4,08 (dd,lH), 3,91 (s,3H), 3,53-3,46 (m,2H), 3,40-3,05 (m,4H), 2,92-2,83 (m,lH), 2,61 30 (s,3H), 2,56 (s,3H), 1,23 (d,3H,J=5Hz).

UV (CHjOH) λ maks.(log ε ) 259 (4,661), 292 (3,778), 326 (3,681).

Analyysi yhdisteelle C32H34N2Ou:

Laskettu: C 61,73, H 5,50, N 4,50 35 Saadut arvot: C 61,33, H 5,24; N 4,45

Esimerkki 21 4 ' -dehydroksi-3 1 -demetoksietoposidi-3 1,4 1 -etyyli- tlofosfamidi 27 0 n - : r7 8 7 o j 1 "ETOP" 5 Jl h3C0'^V%h HN / 10 CH3CH2°

Etyylidiklooritiofosfaattia (49 μΐ, 0,37 mmol) lisättiin liuokseen, jossa oli 3',4'-diaminoetoposidia (esimerkin 3 tuote, 0,20 g, 0,35 mmol) ja pyridiiniä (0,12 ml, 1,4 mmol) CH2Cl2:ssa (4 ml) huoneen lämpötilassa. Reaktiota 15 kuumennettiin palautusjäähdytyslämpötilassa 2,5 tuntia ja sitä säilytettiin sitten -10 °C:ssa yön yli. Flash-kroma-tografioimalla silikageelillä, käyttäen 3 % MeOH-liuosta, joka oli CH2Cl2:ssa, saatiin 0,030 g (13 %) harmahtavan valkoista kiinteää ainetta (TLC Rf-arvo hiukan suurempi 20 kuin lähtöaine-diamiinietoposidin vastaava arvo) diaste-reomeerien seoksena.

r IR (KBr) 3420, 2922, 1780, 1640, 1601, 1490 cm*1.

XH NMR (CDC13) δ 8,61 (m, 1H), 7,7 (m,lH), 7,31 (m,lH), 6,79, 6,78 (s, 1H), 6,50, 6,49 (s,lH), 5,97 (m,2H), 5,86, 25 5,83 (s,1H), 5,59-5,42 (m,2H), 4,88 (m,lH), 4,73 (m,lH), 4,54 (m,2H), 4,40 (m,lH), 4,17 (m,2H), 3,97 (m,2H), 3,73, 3,72 (m,2H), 3,44 (m,lH), 3,31 (m,lH), 3,27 (m,3H), 2,87 (m,1H), 1,36 (d,J=2,4Hz,3H), 1,22 (m,3H).

MS (FAB) m/e 678 M*.

Esimerkki 22 4' -dehydroksi-3 ' -demetoksietoposidi-3 1,4 1 -etyyli- fosfamidi 28 H7 öZ7 5 "ETOP"

HtL / io ch3ch2c/

Esimerkin 21 menetelmässä toistettiin käyttäen etyylidikloorifosfaattia etyylidiklooritiofosfaatin sijaan, ja näin saatiin otsikon yhdiste.

I.

Claims (13)

1. 29 87Ϊ57 Patenttivaatimus Menetelmä uusien, terapeuttisesti käyttökelpoisten 3',4'-dityppi-substituoitujen epipodofyllotoksiinigluko-5 sidijohdannaisten valmistamiseksi, joilla on kaava IV ---0 HO^"^ OH V \ jT |Γ/* (IV) 15 jossa Y on H ja A valitaan ryhmästä, joka koostuu seuraa-vista: (Cj.^J-alkyyli; (C2.10)-alkenyyli; ( C5_6 )-sykloalkyyli; 2-furyyli; 2-tienyyli; aryyli; aralkyyli ja aralkenyyli, jolloin jokainen aromaattinen rengas voi olla substituoi-20 maton tai substituoitu yhdellä tai useammalla ryhmällä, joka on valittu seuraavista: halogeeni, (C^gJ-alkyyli, (Ci.gJ-alkoksi, hydroksi, nitro ja amino; tai A ja Y ovat kummatkin (C1.8)-alkyylejä; tai A ja Y ja hiili, johon ne ovat kiinnittyneet, muo-25 dostavat yhdessä (C5_6)-sykloalkyyliryhmän; ja B valitaan ryhmästä, joka koostuu seuraavista: H3C°^X°r2' H3C<rfiNHR^, H3CoX^lN=CHFt5i JU NOR1 NHRJ I N 11 5 CHR3 Λ Λ jfS H3CoA^A^ H3C0-V^Vn H HN^/ ^γΛϊ7 R6 R6 30 87 557 rS h3co"^\^\ ja I y 5 ™V r8o7 n jolloin R1 ja R2 valitaan itsenäisesti ryhmästä, joka koostuu seuraavista: (C1.5 )-alkyyli, aryyli ja aryyli-( )-al-10 kyyli; R3 ja R4 ovat itsenäisesti H, (Cj.sJ-alkanoyyli tai halogeenisubstituoitu (C2_5)-alkanoyyli; R5 on aryyli; aryyli, joka on substituoitu yhdellä tai useammalla seuraavista ryhmistä: (C^J-alkoksi ja nitro; tai heteroaryyli; R6 ja R7 ovat kummatkin H tai (C1.5)-alkyyli; R8 on (C^J-alkyy-15 li tai (C^J-alkyyli, joka on substituoitu yhdellä tai useammalla seuraavista ryhmistä: hydroksi, alkoksi, alka-noyylioksi, syaani, amino, alkyyliamino, dialkyyliamino, karboksi, alkyylitio, merkapto, alkanoyyliamino, alkanoyy-li, karbamoyyli ja halogeeni; ja X on happi tai rikki, 20 tunnettu siitä, että menetelmä käsittää seuraavat vaiheet: (a) annetaan kaavan III mukaisen yhdisteen 7; 25 OH V ( i 77 ? mi» ......i Λ' o 35 reagoida ainakin yhden mooliekvivalentin kanssa yhdistet- i 31 87557 tä, jolla on kaava H2NORa, tai sen happoadditiosuolaa ja ainakin yhden mooliekvivalentin kanssa yhdistettä, jolla on kaava H2NOR2, tai sen happoadditiosuolan, jolloin saadaan kaavan V mukainen yhdiste, 5 Y 10 ( "liTl^/0 ......( (v) j6 0 CH3°r''\^'n,JOR2
2. 15 NOR1 jossa A, Y, R1 ja R2 merkitsevät samaa kuin edellä ja R1 ja R2 voivat olla samoja tai erilaisia; ja (b) haluttaessa hydrogenoidaan kaavan V mukainen 20 yhdiste jalometallikatalysaattorin läsnäollessa, jolloin saadaan kaavan VI mukainen yhdiste, HO-"^ OH I 25 ( II l^/0 (VI) ... ' o jfS . - 30 ch3°^^Nu2 nh2 ja (c) haluttaessa annetaan kaavan VI mukaisen yhdisteen reagoida ’35 (i) ainakin yhden mooliekvivalentin kanssa kaavan L-R3 mukaista yhdistettä ja ainakin yhden mooliekvivalentin 32 87557 kanssa kaavan L-R4 mukaista yhdistettä, joissa L on poistuva ryhmä ja R3 ja R4 ovat samoja tai erilaisia ja merkitsevät ()-alkyyliä tai halogeenisubstituoitua (C2_5 )-alkyy-liä, happoakseptorin läsnäollessa, jolloin saadaan kaavan 5 VII mukainen yhdiste, OH I CXXX/ rv ch3°^N^\hr4
3. 15 I NHRJ tai (ii) ainakin kahden mooliekvivalentin kanssa kaavan R5C(0)H mukaista yhdistettä, jossa R5 merkitsee samaa kuin edellä, jolloin saadaan kaavan VIII mukainen yhdiste,
4. 20 Y A ---o H0 OH V ( Il iTi5 (VIII) : ; 25 .......( S- jS 0 • : N=CHR5 30 tai (iii) nitriitin kanssa hapon läsnäollessa, jolloin saadaan kaavan IX mukainen yhdiste, 35 li 33 8 7 557 OH V CXXX/ ,ιχ) cv tai (iv) kaavan R6C(0-alk)3 mukaisen yhdisteen kanssa, jossa R6 merkitsee samaa kuin edellä, hapon läsnäollessa, 15 jolloin saadaan kaavan X mukainen yhdiste, Y H0 OH I 20 ( 'T||rY-*s3 <x) 1 o • 25 \ fj hYi-Ar6 tai R (v) kaavan R6C(0)C(0)R7 mukaisen yhdisteen kanssa, jossa R6 ja R7 merkitsevät samaa kuin edellä, jolloin saadaan kaavan XI mukainen yhdiste, 34 8 7 S b 7 γ
5. 5. I I /° (XI) .....i χ; v,. I6 tai 15 (vi) kaavan L2-P02R8 mukaisen yhdisteen kanssa, jos sa L on poistuva ryhmä ja R8 merkitsee samaa kuin edellä, happoakseptorin läsnäollessa, jolloin saadaan kaavan XII mukainen yhdiste, ho^^oh V / TYVo (XII) ' . ......{
6. 25. O CH3°^N^\h ™—P^sv • ' 30 r8^ tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä happoadditiosuola. 35 8 7 557 Förfarande för framställning av nya, terapeutiskt användbara 3',4'-dikvävesubstituerade glukosidderivat av 5 epipodofyllotoxin med formeln IV Y / YYl) (IV) - Ό B 15 väri Y är H och A väljs ur gruppen som bestär av följan-de: (Cj.jo)-alkyl; (C2.10)-alkenyl; (C5_6)-cykloalkyl; 2-furyl; 2-tienyl; aryl; aralkyl och aralkenyl, varvid varje aroma-20 tisk ring kan vara osubstituerad eller substituerad med ett eller flera grupper som valts bland följande: halogen, (C1.8)-alkyl, (C^g)-alkoxi, hydroxi, nitro och amino; eller A och Y betecknar vardera (Cj_8)-alkyl; eller A och Y och kolatomen, vid vilken de är bundna, 25 bildar tillsainmans en (Cs_6)-cykloalkylgrupp; och B väljs ur gruppen som bestär av följande: riS fS /S
7. 30 T 1 H3ccr , 3 XN=CHR'>, nor1 Lr3 i 11 5 CHR3 A rS /S h3co'^^X\ h3co^\<;^\ UN jf \ // ' ' li \NX/ hn^/ R6 r6 36 0 0 7 r r7 O / 00/ och I / 5 8Xx R°0 x varvid R1 och R2 väljs självständigt ur gruppen som bestär av följande: ( )-alkyl, aryl och aryl- ( 0:_5 )-alkyl; R3 och
8. 10 R4 är självständigt H, ()-alkanoyl eller med halogen substituerad (C2_5)-alkanoyl; R5 är aryl; aryl som substi-tuerats med ett eller flera av följande grupper; (C^.^-al-koxi och nitro; eller heteroaryl; R6 och R7 är vardera H eller ()-alkyl; R8 är (C1.5)-alkyl eller (Cj.gJ-alkyl som 15 substituerats med ett eller flera av följande grupper: hydroxi, alkoxi, alkanoyloxi, cyano, amino, alkylamino, dialkylamino, karboxi, alkyltio, merkapto, alkanoylamino, alkanoyl, karbamoyl och halogen; och X är syre eller sva-vel, kännetecknat därav, att förfarandet om-20 fattar följande steg: (a) en förening med formeln III Y
9. 25 H0 0H I ( (III) ........( fS ° ce3o^^y^o 0 omsätts med ätminstone ett molekvivalent av en förening med formeln I^NOR1 eller ett syraadditionssalt därav och 35 med ätminstone ett molekvivalent av en förening med for- i 37 8 7 6 b 7 meln HjNOR2 eller ett syraadditionssalt därav, varvid er-hälls en förening med formeln V y
10. 5 A ——'0 HO ^ OH I CXXX/ <v) 10 fS ch30^\^%jor2 NOR1 väri A, Y, R1 och R2 betecknar samma som ovan och R1 och R2 15 kan vara lika eller olika; och (b) ifali önskvärt, hydrogenolyseras en förening med formeln V i närvaro av en ädelmetallskatalysator, varvid erhälls en förening med formeln VI HO OH V 25 (VI1 ry nh2 30 och (c) ifali önskvärt, omsätts en förening med formeln VI (i) med ätminstone ett molekvivalent av en förening med formeln L-R3 och med ätminstone ett molekvivalent av en 35 förening med formeln L-R4, i vilka L är en avgäende grupp 38 8 7 3 5 7 och R3 och R4 är lika eller olika och betecknar (C^)-alkyl eller med halogen substituerad (C2.5)-alkyl, i närvaro av en syraacceptor, varvid erhälls en förening med formeln VII
11. 5 Y A ---Ό HO OH I
12. 10. I tl J/° (VII) rS ’ εΗ3°^Ν^ΗΗ4 NHR3 15 eller (ii) med ätminstone tvä molekvivalenter av en förening med formeln R5C(0)H, väri R5 betecknar samma som ovan, varvid erhälls en förening med formeln VIII 20 y H0"~^ OH I / II 0 (VIII) : “ VAAJ-V Λ' CH ^0 l\^Ti=CHR5 '.iso K=CHr5 eller (iii) med ett nitrit i närvaro av en syra, varvid erhälls en förening med formeln IX 35 39 87557 o OK V 5 \ X. jf X / (IX) '0 """'jf X* o “,JO eller (iv) med en förening med formeln R6C(0-alk)3, väri 15 R6 betecknar samma som ovan, i närvaro av en syra, varvid erhälls en förening med formeln X aA;0^^° o ™ V 20 ? / T n ° \0AAJ.......{ <X* 0 :::25 jQ eller (v) med en förening med formeln R6C( 0 )C( 0 )R7, väri 30 R6 och R7 betecknar samma som ovan, varvid erhälls en förening med formeln XI 40 87 ί 57 γ s ^°ΎιΓΐ/0 (χη .......( i Ο χχ CH30-^\^VH
13. 10 VAr? R6 eller (vi) med en förening med formeln L2-po2R8, väri L är 15 en avlägsnande grupp och R® betecknar saroina som ovan, i närvaro av en syraacceptor, varvid erhälls en förening med formeln XII 20 --o H0-^ OH I / ifi^y (χιι> o 25 il εΗ3°^γΛΐΗ· R8i) 30 eller ett farmaceutiskt godtagbart syraadditionssalt där-av.