FI86859B - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt aktiva difluor-ketonpeptidderivat. - Google Patents

Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt aktiva difluor-ketonpeptidderivat. Download PDF

Info

Publication number
FI86859B
FI86859B FI862434A FI862434A FI86859B FI 86859 B FI86859 B FI 86859B FI 862434 A FI862434 A FI 862434A FI 862434 A FI862434 A FI 862434A FI 86859 B FI86859 B FI 86859B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
formula
product
group
mmol
give
Prior art date
Application number
FI862434A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI862434A (fi
FI862434A0 (fi
FI86859C (fi
Inventor
Mark Morris Stein
Diane Amy Trainor
Original Assignee
Ici America Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GB858514436A external-priority patent/GB8514436D0/en
Priority claimed from GB858514440A external-priority patent/GB8514440D0/en
Priority claimed from GB858514438A external-priority patent/GB8514438D0/en
Application filed by Ici America Inc filed Critical Ici America Inc
Publication of FI862434A0 publication Critical patent/FI862434A0/fi
Publication of FI862434A publication Critical patent/FI862434A/fi
Publication of FI86859B publication Critical patent/FI86859B/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI86859C publication Critical patent/FI86859C/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06191—Dipeptides containing heteroatoms different from O, S, or N
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C271/06—Esters of carbamic acids
    • C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C271/10—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C271/16—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C271/06—Esters of carbamic acids
    • C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C271/10—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C271/18—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by doubly-bound oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/16—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Description

! 86859
Menetelmä terapeuttisesti aktiivisten difluoriketonipepti-dijohdannaisten valmistamiseksi
Esillä oleva keksintö koskee menetelmää tiettyjen 5 difluoriketonipeptidijohdannaisten valmistamiseksi, jotka ovat ihmisen leukosyyttielastaasin (HLE) irreversiibeleitä inhibiittoreita, ja ne ovat myös käyttökelpoisia tutkimusvälineinä farmakologisessa ja sitä lähellä olevissa tutkimuksissa ja hoidettaessa kudoksen rappeutumissairauksia, 10 kuten keuhkolaajentumaa, valtimon haurauskovetustautia, nivelreumaa ja luu-niveltulehdusta lämminverisissä eläimissä .
Proliiniin perustuvia peptidialdehydejä on kuvattu EP-patenttihakemuksessa 84 302 621.2. Hydrolyyttisten ent-15 syymien fluoriketoni-inhibiittoreita ovat kuvanneet Gelb, M. H. et ai. julkaisussa Biochemistry 24 (1985), ss.
1 813 - 1 817 koskien ei-seriiniproteaaseja. Imperiali, B. et ai. ovat julkaisussa Tetra. Letters 27 (2) (1986), ss. 135 - 138 osoittaneet valikoituja fluorimetyyliketoneja. 20 Thaisrivongs, S. et ai. kuvaavat julkaisussa J. Med.,
Chem. 28 (11) (1985), ss. 1 553 - 1 555 valikoituja fluo-riketoneja reniinin inhibiittoreina.
EP-julkaisusta A 130 679 tunnetaan yhdisteitä, jotka ovat joukon kysteiini- ja seriiniproteaaseja (esim. ke-25 tepsiinit, trypsiini, kallikreiinit, plasmiini ja plasmi-nogeeniaktivaattori sekä myös elastaasi) irreversiibeleitä inhibiittoreita. Haiman elastaasin irreversiibeleitä inhibiittoreita tunnetaan puolestaan US-patenttijulkaisusta 4 277 395.
30 FI-patenttihakemuksesta 84 1601 tunnetaan esillä olevan keksinnön mukaisia yhdisteitä rakenteeltaan muistuttavia, fluoria sisältämättömiä yhdisteitä, joissa on terminaalinen aldehydiryhmä.
Keksintö koskee menetelmää terapeuttisesti aktiivi-35 sen yhdisteen valmistamiseksi, jolla on kaava 2 86859 R1 y 1 r3-a-n^ ra (la) 0 5
O R1 F F
li ί ν' r3-a-n-p Ra (lb)
10 I I H O
tai
15 0 O R1 F F
R3-A-N —N rA (Ic> R2 II H 0 20 jolloin R1 on 1 - 5 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä; kaavan -NH.CHR2.C0- mukainen ryhmä on alaniinista, valiinista, norvaliinista, leusiinista, isoleusiinista, 25 norleusiinista, fenyylialaniinista, tyrosiinista, aspara- giinista, glutamiinista, asparagiinihaposta, glutamiiniha-posta, lysiinistä, treoniinista, seriinistä, a-aminovoiha-posta tai fenyyliglysiinistä saatu aminohappotähde; R3 on 1-12 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä, 30 jossa on (1) fenyylikarbonyyliaminoryhmä, jossa mahdollisesti on karboksi-, C1_3-alkoksikarbonyyli-, 5-tetratsolo- tai bentseenisulfonyyliaminokarbonyylisubstituentti, jolloin viimeksi mainittu on mahdollisesti substituoitu fluori-, 35 kloori-, bromi- tai jodiatomilla tai nitroryhmällä; tai i 3 86859 (2) fenyyli, joka on mahdollisesti substituoitu kloori-, bromi-, jodi- tai fluoriatomilla tai hydroksi-, trif luorimetyyli-, C1.6-alkyyli-, C2_6-alkoksi-, C2_6-alka-noyylioksi-, C2.6-alkoksikarbonyyli-, karboksi-, C2_6-amino-5 karbonyylialkyyli-, karbamoyyli-, 5-tetratsolo- tai bent-seenisulfonyyliaminokarbonyyliryhmällä, jolloin viimeksi mainittu on mahdollisesti substituoitu fluori-, kloori-, bromi- tai jodiatomilla tai nitroryhmällä; tai R3 on fenyyli, joka on mahdollisesti substituoitu 10 fluori-, kloori-, bromi- tai jodiatomilla tai trifluori-metyyli-, hydroksi-, C:_6-alkyyli-, C2.6-alkanoyylioksi-,
Cj.g-alkoksi-, C2.6-alkoksikarbonyyli-, karboksi-, C2_7-amino-karbonyylialkyyli-, 5-tetratsolo- tai bentseenisulfonyyli-aminokarbonyyliryhmällä, jolloin viimeksi mainittu on mah-15 dollisesti substituoitu fluori-, kloori-, bromi- tai jodi-atomilla tai nitroryhmällä; R4 on vety;
Ra on ryhmä, jolla on kaava -CH2.RB, -C0.CH2.RB tai -CO.NH.R®, jolloin R8 on Cj_10-alkyyli, C5_l5-sykloalkyyli, 20 C5_15-sykloalkyyli-C1.6-alkyyli, fenyyli tai fenyyli-C1.6-al-kyyli, jonka fenyyliryhmä on mahdollisesti substituoitu kloori-, bromi-, jodi- tai fluoriatomilla tai hydroksi-, trif luorimetyyli-, C1.6-alkyyli-, C1_6-alkoksi-, C2_6-alkoksi-karbonyyli-, karboksi-, 5-tetratsolo- tai bentseenisulfo-25 nyyliaminokarbonyyliryhmällä, jolloin viimeksi mainittu ryhmä on mahdollisesti substituoitu fluori-, kloori-, bromi- tai jodiatomilla tai nitroryhmällä; ja A on karbonyyli tai oksikarbonyyli; tai, kun on sopivaa, sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi. Menetelmälle 30 on tunnusomaista, että (a) yhdiste, jolla on kaava R1 A? t 35 R3-A-N C—C-Rft (Va)
I I I
H OH F
4 86859 O R1
J\ J\7 T
R3-A-N--^ C- C-Ra (Vb) 1 1,1
Il H OH F
5 tai R2 O R1 10 r4 il i. h f R3-A-N^\_^N-f ^N ^C- C-R* (Vc)
it I I II
oli H OH F
15 hapetetaan, (b) happo, jolla on kaava R1 F 0
I I II
R3-A-N-C-C-C-C-OH (XXVIIa) IIN,
20 H H O F
O R1 F O
.C-N-C-C-C-C-OH (XXVIIb) / : ί li ,
25 R3-A-N-r H H 0 F
u tai
O R1 F O
Il I II
30 R4 H 0 C-N-C-C-C-C-OH (XXVIIc)
, I I II / I I II I
R3-A-N—C-C-N -f H H O F
R2 l J
35 kytketään amiiniin, jolla on kaava RB.NH2; 5 86859 (c) yhdisteiden valmistamiseksi, joissa R2 tai R3 sisältää karboksiryhmän, hajotetaan vastaavan kaavan Ia, Ib tai Ie mukaisen yhdisteen esteri; tai (d) yhdisteiden valmistamiseksi, joissa R3 sisältää 5 bentseenisulfonyyliaminokarbonyyliryhmän, joka on mahdollisesti substituoitu fluori-, kloori-, bromi- tai jodiato-milla tai nitroryhmällä, saatetaan vastaava kaavan Ia, Ib tai Ie mukainen yhdiste, jossa R3 sisältää karboksiryhmän, reagoimaan valitun sulfonamidin kanssa dehydratoivan ai- 10 neen läsnä ollessa liuottimessa tai laimentimessa; minkä jälkeen, kun halutaan farmaseuttisesti hyväksyttävä suola, saatetaan saatu kaavan Ia, Ib tai Ie mukainen yhdiste reagoimaan sopivan hapon tai emäksen kanssa, joka tuottaa fysiologisesti hyväksyttävän anionin tai vastaa-15 vasti kationin; jolloin vaihtuvilla substituenteilla voi olla mitkä tahansa edellä mainituista merkityksistä, ellei toisin ole mainittu .
Kaavojen Ia, Ib ja le mukaisten yhdisteiden suolat 20 ovat farmaseuttisesti hyväksyttäviä emäs- tai happoaddi-tiosuoloja, kuten sellaisia, jotka on valmistettu mineraa-lihapon, esimerkiksi kloorivetyhapon, tai orgaanisen hapon, kuten sitruuna-, maleiini-, fumariini- tai etikkaha-pon kanssa, Emäsadditiosuolat ovat sellaisia, jotka on 25 valmistettu alkalimetallihydroksidien, kuten natriumhydr- oksidin, alkalimetallikarbonaattien tai -bikarbonaattien, maa-alkalimetallihydroksidien ja orgaanisten amiinisuolo-jen kanssa. Tällaiset suolat voidaan valmistaa liuottamalla peptidijohdannainen veden ja veteen sekoittuvan orgaa-30 nisen liuottimen seokseen, lisäämällä emäksen vesiliuos ja ottamalla talteen suola vesiliuoksesta.
Keksinnön mukaisesti valmistetuilla edullisilla yhdisteillä on S-konfiguraatio (luonnossa esiintyvien L-aminohappojen konfiguraatio) kiraalikeskuksissa identifi-35 oituna merkillä * jäljempänä esitetyissä kaavoissa lila, mb ja IIIc, ja synteesimenetelmät tuottavat isomeerejä, 6 86859 joilla on S-konfiguraatio kiraalikeskuksissa identifioituna symbolilla #, tai isomeeriseoksia tuloksena R- ja S-konfiguraatioista kiraalikeskuksessa identifioituna symbolilla #. Yleensä on edullista, että yhdisteillä on S-kon-5 figuraatio keskuksessa identifioituna symbolilla #.
R1 F F
R3-A-N # j Ra (lila)
10 HO
0 R1 F F
15 R3-A-N _(IHb) kk " °
O O R1 F F
20 ^ I Jk ^ \><^ R3-A-N V. n _N RÄ T i i o (IIIc) 25
Kuten tällä alalla on tunnettua, yksittäisten isomeerien aktiviteetti ei ole sama ja siten on edullista käyttää hyväksi aktiivisempaa isomeeriä. Esillä olevan keksinnön mukaisesti saadaan yhdisteitä, jotka on tulokse-30 na S- ja/tai R-konfiguraatiosta kiraalikeskuksessa varustettu merkillä #.
Ryhmissä RA, R1, R2 ja R3 voi olla kiraalikeskuksia. Esillä olevalla keksinnöllä saadaan kaavojen Ia, Ib ja Ie mukaisia yhdisteitä, joissa kiraalikeskukset ryhmissä RA, 35 R1, R2 ja R3 ovat S- ja/tai R-konfiguraatioita.
86859
Kuten tällä alalla on tunnettua, difluoriketonijohdannaiset voivat esiintyä solvaatteina, erikoisesti hyd-raatteina, kaavat IVa, IVb ja IVc, ja ne sisältyvät esillä olevan keksinnön mukaisesti valmistettuihin yhdisteisiin.
5
R1 F F
R3-A-N ,^ΟΗ Ra (IVa)
H HO
10
0 R1 F F
r3-a-n -nRa (IVb)
15 H HO
O 0 R1 F F
f JL
20 R3-A-N^/^X'N-f /^'OH Ra Ιι I H0
i2 ^ H
R2 (IVc) 25 Keksinnön mukaisessa menetelmässä käytettäviä väli tuotteita sekä kaavojen Ia, Ib ja Ie mukaisia difluorike-toneja voidaan valmistaa seuraavasti.
Menetelmä A
Avainvälituote tässä menetelmässä kaavan Ia, Ib tai 30 Ie mukaisen difluoriketonin valmistamiseksi on vastaava alkoholi, jolla on kaava R1
I H F
35 R3—A—^ C— C—Ra (Va) I I i
H OH F
e 86859 O R1 , R3-A-N- X N C— C-Ra (Vb) | lii
L J H OH F
5 tai R2 0 R1 10 f J Jj R3-A-N /N--C—C-RA (Vc) ΊΓ i lii
Il H OH F
O
15 Kaavan Ia, Vb tai Vc mukainen alkoholi muutetaan vastaavaksi kaavan Ia, Ib tai Ie mukaiseksi ketoniksi ha-petusmenetelmällä. Käyttökelpoisiin menetelmiin kuuluvat oksalyylikloridin käyttö, DMSO ja tertiäärinen amiini (kts. Marx, M. et ai., J. Org. Chem. 49 (1984), ss. 788 -20 793; jolloin parhaat tulokset saadaan 10 - 20 ekvivalen tilla hapetusainetta), etikkahappoanhydridin ja DMSO;n käyttö, kromitrioksidipyridiinikompleksin käyttö metylee-nikloridissa ja Dess-Martin-perjodinaanin [1,1,1-triaset-oksi-2,1-bentsoksijodol-3(3H)-oni] käyttö [Dess, D. B. et 25 ai.:n menetelmä; J. Org. Chem. 48 (1983), ss. 4 155 -4 156].
Kaavojen Va, Vb tai Vc mukaiset alkoholit voidaan valmistaa seuraavasti: (i) Kun Ra on ryhmä, jolla on kaava -CO.NH.R®, alde-30 hydi, jolla on kaava R1 R3-A-N H (Via) 35 '·
. ° O
g 86859 0 R1 1 1
3 / \ H
R3-A-N--f (VIb) O " o 5 tai R2 O R1 10 'Ά X X .h R3-A-N^ \ N--^ N (VIC)
rij i I
O
15 voidaan saattaa reagoimaan etyyli-2-bromi-2,2-dif luoriase-taatin (saatu SCMrstä; Speciality Chemicals) ja Zn:n kanssa palautusjäähdyttäen kuumennetussa THF:ssa (kts. Halli-nan, E. A. et ai., Tetrahedron Letters 25 (22) (1984), ss. 20 2 301 - 2 302] yhdisteen saamiseksi, jolla on kaava R1
H F
R3-A-N ^C—C-C-0-CH,-CH, (Vila)
i | i H
25 H OH F O
0 R1 X X' 30 R3-A-N-N C—C-C-0-CH2CH3 (Vllb) U i i I ιί H OH F 0 tai 10 86859 0 OR1 v4 II JL ? r R3-A-N. N-^ ^C—C-C-OCH2CH3 I I I ii I II H OH F 0 5 R2 (VIIC) ja joka vuorostaan voidaan saattaa reagoimaan amiinin kanssa, jolla on kaava 10
Rb H-N (Vd)
H
15 etanolissa, jolloin saadaan vastaava alkoholi, jolla on kaava R1
I H F RB
/ \ t ! / 20 R3-A-N C —C-C-N (Villa) i i ' ti \
H OH F 0 H
0 R1 Λ λ? f R3-A-N--^ ^C—C-C-O-N (VHIb) I I I 1 n \
II H OH F 0 H
tai 30 0 OR1 r k X r .r‘
R3-A-N / ^ N--^ ^ N C—C-C-N
I I I i H \
j II H OH F O H
35 R2 (Ville) n 86859
Kaavan Villa, Vlllb tai Ville mukainen yhdiste voidaan muuttaa kaavan Villa, Vlllb tai Ville mukaiseksi uudeksi yhdisteeksi, jossa ryhmä R3-A- on merkitykseltään erilainen, muodostamalla vastaava yhdiste, jolla on kaava 5 R1
Ah f rb i i / n-N C—C-C-N (Xla) I 1 ' M \
10 H OH F 0 H
0 R1 A A1; F /R> 15 H-N -^ A C—C-C-N (Xlb) i ’ i 1 ii
l J H OH F O H
tai 20 0 0 R1 f l AA? r /* H-N A ^N-A A C—C-C-N (XIc) I I I I il \
I II H OH F 0 H
R2 25 ja saattamalla se reagoimaan tarkoituksenmukaisen aktivoidun karbonyyli- tai sulfonyyliyhdisteen kanssa.
Esimerkiksi kaavojen Villa, Vlllb ja Ville mukaiset yhdisteet, joissa R3-A- on bentsyylioksikarbonyyli, voidaan 30 muuttaa katalyyttisellä hydrauksella kaavojen Xla, Xlb ja XIc mukaisiksi aminoamideiksi, jotka vuorostaan voidaan saattaa reagoimaan valikoidun aktivoidun karbonyyli- tai sulfonyyliyhdisteen (esimerkiksi isosyanaatin, happoklori-din, klooriformiaatin tai sulfonyylikloridin) kanssa tai 35 kaavan R3COOH mukaisen hapon kanssa, käyttäen edellä kuvat- 12 86859 tuja normaaleja peptidikytkemismenetelmlä kaavan Villa, Vlllb ja Ville mukaisten uusien yhdisteiden saamiseksi. Kaavojen Villa, Vlllb ja Ville mukaiset yhdisteet ovat kaavojen Va, Vb ja Vc mukaisia valikoituja yhdisteitä, 5 joissa Ra on -CO.NH.R8.
Kaavan Via, VIb tai Vie mukaiset aldehydit voidaan valmistaa hapettamalla vastaava alkoholi, jolla on kaava R1 10 R3-A-N-C-CH,0H (XlVa) i l
H H
0 R1 il '
15 C-N-C-CH,OH
3 X ' I
R-A-N------( H H (XlVb)
O
tai 20 0 0 R1
3 F A
R-A-N X --CH20H
1^ H (XIVc) R2 25 [esimerkiksi Marx, M. et ai.:n kuvaamat hapetusolosuhteet julkaisussa J. Org. Chem. 49 (1984), ss. 788 - 793] tai hydrolysoimalla tai transasetaalisoimalla vastaava asetaa-30 li, jolla on kaava R1 ^ 0-CH2CH3 R3-A-N C-H (XVa) 35 H ^ 0-CH2CH3 i3 86859 O R3 li ^o-ch2ch3 R3-A-N -^ C-H (XVb) H X 0-CH2CH3 5 tai O OR1 R4 li j[ ^,0-CH2CH3
10 R3-A-N ^ C-H
Il H ^ 0-CH2CH3 R2 (XVc) 15 [kts. esimerkiksi tällaisten yhdisteiden valmistus kuvat tuna EP-patenttihakemuksessa 84 302 621.2.]
Kaavan XlVb tai XIVc mukaiset yhdisteet (käytettäviksi kaavan VIb tai Vie mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi) voidaan valmistaa saattamalla aminoalkoholi, jolla 20 on kaava R1 ( H2N-C-CH2OH (XVI)
N
25 reagoimaan sopivan vapaan hapon kanssa, jolla on kaava
O
t
^C-OH
30 R3-A-N-S (XVI Ib) tai 14 86859 O o
H4 | C-OH
R3-A-N N -f (XVIIc)
Y CJ
normaalin peptidikytkemistekniikan mukaan käyttämällä tällä alalla tunnettuja tavanomaisia menetelmiä, kuten niitä, 10 jotka M. Bodanszky on kuvannut julkaisuissa Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Berlin (1984) ja The Peptides, Analysis, Synthesis and Biology (toim. E. Gross ja J. Meinhofer), Nit. 1-5, (Academic Press, New York) 1979 - 1983.
15 Kaavan XVIIb tai XVIIc mukainen yhdiste voidaan valmistaa edellä kuvatuilla tavanomaisilla peptidikytke-mis- ja suojauksenpoistomenetelmillä.
Kaavan XVI mukaiset aminoalkoholit (mikäli niitä ei ole kaupallisesti saatavissa) voidaan valmistaa vastaavis-20 ta a-aminohapoista, joilla on kaava h^NHXHF^COOH, saattamalla reagoimaan pelkistysaineen, kuten diboraanin kanssa (kts. US-patenttijulkaisu 3 935 280). Kaavan XVIa mukainen yhdiste voidaan valmistaa saattamalla kaavan XVI mukainen yhdiste reagoimaan tarkoituksenmukaisen aktivoidun karbo-25 nyyli- tai sulfonyyliyhdisteen (esimerkiksi isosyanaatin, karbonaatin, happokloridin, klooriformiaatin tai sulfonyy-likloridin) kanssa tai saattamalla reagoimaan kaavan R3C00H mukaisen hapon kanssa käyttäen edellä kuvattuja tavanomaisia peptidikytkemismenetelmiä.
30 Vastaavasti kaavan XVb tai XVc mukainen yhdiste voidaan valmistaa saattamalla aminoasetaali, jolla on kaava R1 0-CH-.CH,
i X
35 H2N-C-C-H (XVIIIa) J \ H 0-CH2CH3 15 86859 reagoimaan kaavan XVIIb tai XVHc mukaisen hapon kanssa käyttäen tavanomaisia peptidikytkemismenetelmiä; ja kaavan XVa mukainen yhdiste voidaan valmistaa saattamalla yhdiste, jolla on kaava XVIIIa, reagoimaan aktivoidun karbonyy-5 li- tai sulfonyyliyhdisteen kanssa. Kaavan XVIIIa mukainen asetaali voidaan valmistaa jäljempänä olevissa esimerkeissä la - Id kuvatulla tavalla.
Kaavan XVa, XVb tai XVc mukainen asetaali voidaan valmistaa tarvittaessa kaavan Via, VIb tai VIc mukaisen 10 yhdisteen hapolla katalysoidulla asetaalisoimisella (esimerkiksi trietyyliortoformiaatilla absoluuttisessa etanolissa, joka sisältää p-tolueenisulfonihappoa, huoneen lämpötilassa) ja muuttamalla kaavan XVa, XVb tai XVc mukaiseksi uudeksi yhdisteeksi, jossa R3-A- on merkitykseltään 15 erilainen, muodostamalla vastaava yhdiste, jolla on kaava R1 O-CHXH, 1 / 23 H2N-C-C-H (XVIIIa) ' \ H 0-CH2CH3 20 0 R1 1 ^ o-ch2ch3 H-N-f C-H (XVIIIb) . - 25 H ^ 0-CH2CH3 tai 0 OR1 30 f IL il /OCH2CH3
H-N N-^C-H
. I 1 \ [ I I H OCH2CH3 (XVIIIC) i6 86859 ja sen jälkeen saattamalla reagoimaan sopivan aktivoidun karbonyyli- tai sulfonyyliyhdisteen kanssa.
Esimerkiksi kaavan XVa, XVb ja XVc mukaiset yhdisteet, silloin kun R3-A- on bentsyylikarbonyyli, voidaan 5 muuttaa katalyyttisellä hydrauksella kaavan XVIIIa, XVIIIb ja XVIIIc mukaisiksi aminoasetaaleiksi, jotka vuorostaan voidaan saattaa reagoimaan valikoidun aktivoidun karbonyy li- tai sulfonyyliyhdisteen (esimerkiksi isosyanaatin, happokloridin, klooriformiaatin tai sulfonyylikloridin) 10 kanssa tai saattaa reagoimaan kaavan R3C00H mukaisen hapon kanssa käyttäen edellä kuvattuja tavanomaisia peptidikyt-kemismenetelmiä kaavan XVa, XVb ja XVc mukaisten uusien yhdisteiden saamiseksi.
Vaihtoehtoinen menetelmä kaavan Vlllb tai Ville 15 mukaisen yhdisteen valmistamiseksi kaavan Vllb tai VIIc mukaisesta yhdisteestä käsittää kaavan VIIb tai VIIc mukaisen yhdisteen reaktion noin 1,25 ekvivalentin kanssa 1 N NaOHra CH30H:ssa yhdisteiden saamiseksi, joilla on kaava 20 0 R1 A /Av n R3-A-N-f C—C-C-OH (IXb) I h Ah f 25 tai 0 OR1
R* Ji li ^Αχ^ H F O
30 R3-A-N N -] C—C-C-OH
| L J H OH F (IXC) R2 ja sen jälkeen kaavan IXb tai IXc mukaisen yhdisteen reak-35 tion kaavan Vd mukaisen yhdisteen kanssa käyttäen reagens-seja tl 17 86859 a) HOBT, WSCDI ja THF tai b) tetrametyyliguanidiini ja CHC13 O °C:sta huoneen lämpötilaan yhdisteen saamiseksi, jolla on kaava VHIb tai Ville [kts. Abeles, R. H. et ai., Bioche-5 mistry 24 (1985), s. 1 813].
ii) Kun Ra on -CO.CH2.RB, alkoholi, jolla on kaava R1 I H F 0 , I » Il 10 R3-A-N C-C-C-CH,-Rb (xa) lii
H OH F
0 R1 15 3 ^ R -A-N-f ^ C— C-C-CH2-Rb (Xb) j I » i
Il H OH F
20 tai 0 OR1 R< JL Jl H F 0
25 R3-A~N s' N —C-C-CH2RB
Ί I ' I . 2
I H OH F
R2 (XC) . : 30 voidaan valmistaa saattamalla yhdiste, jolla on kaava R1 I h F o
3 /A ' ' M
R-A-N C—C-C-OH (IXa) |)l '
35 H OH F
18 86859 O R1
Il JL H F O
3 JA \x l i n R-A-N-A C—C-C-OH (IXb)
Il H OH F
5 tai 0 OR1 3 r X Λ f?
10 R3-A-N .A -1 ^ N C- C-C-OH
| L J H OH F (IXC) R2 15 (jolloin yhdiste IXa voidaan valmistaa yhdisteestä Vila edellä yhdisteiden IXb ja IXc yhteydessä kuvatulla tavalla), reagoimaan N,O-dimetyylihydroksiamiinihydrokloridin, WSCDI:n, H0BT:n ja N-metyylimorfoliinin kanssa CH2Cl2:ssa [kts. Int. J. Protein Res. 26 (1985), ss. 236 - 241] yh-20 disteen saamiseksi, jolla on kaava R1 F CH, I 1 1
H I H C N
3 I /\ ' / I \ / X
R3-A-N C f 0CH3 (Xlla) 25 OH 0 0 R1
Ja r 30 R3-A-N -N C—C N (Xllb) H OH XvOCH3
O
tai i9 86 8 59 0 OR1 3 * A AA" f 5 | H OH f V OCH3 R2 0 (XIIc) ja sen jälkeen saattamalla kaavan Xlla, Xllb tai XIIc mu-10 kainen yhdiste reagoimaan Grignard-reagenssin kanssa, jolla on kaava RBCH2MgBr, kaavan Xa, Xb tai vastaavasti Xc mukaisen yhdisteen muodostamiseksi.
iii) Kun RA on -CH2RB, kaavan Va, Vb tai Vc mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa seuraavasti.
15 Kaavan Vc, jossa RA on -CH2RB, mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa seuraavan kaavion 1 mukaan.
Kaavio 1
20 R1 OF R1 H F
< Il 1 I i · o2n-ch2 + h-c-c-ra k2co3 o2n-c—c—c-r
F H OH F
(XIX) (XX) (XXI) 25 H2, Pd/C tai LiAlH4 v
30 R1 H F
! i i (Vc) (XVI Ie) H2NC— C—C-Ra ^- < I l
H OH F
(XXII) 20 8 6 8 5 9
Kaaviossa 1 käytettävä kaavan XX mukainen lähtöal-dehydi voidaan valmistaa vastaavasta alkyyliesteristä, jolla on kaava
5 OF
l> I
Rx-0-C-C-RA (XXIV)
F
jossa Rx on C1.3-alkyyli (esimerkiksi etyyli), pelkistämällä 10 suoraan (esimerkiksi di-isobutyylialuminiumhydridillä) tai pelkistämällä NaBH4:llä etanolissa huoneen lämpötilassa vastaavaksi alkoholiksi ja sen jälkeen hapettamalla (oksa-lyylikloridi, DMSO) aldehydiksi, kuten Marx ja Tidwell ovat kuvanneet (viite edellä).
15 Kaavan XXIV mukainen difluoriesteri voidaan valmis taa α-ketoesteristä, jolla on kaava 0 0 h 11
Rx-0-C-C-Ra (XXV) 20 saattamalla se reagoimaan dietyyliaminorikkitrifluoridin (DAST) kanssa [kts. Erni, B. ja Khorana, H. G., J. Amer. Chem. Soc., 102 (1980), s. 3 888].
Kaavan XXV mukaiset α-ketoesterit, silloin kun ne 25 eivät ole kaupallisesti saatavissa, voidaan valmistaa vastaavista α-aminohapoista menetelmällä, jonka ovat kuvanneet Weygand, F. et ai., Leibigs. Ann. Chem. Voi. 658 (1962), s. 128, ja esteröimällä sen jälkeen. Vaihtoehtoisesti kaavan XXV mukainen α-ketoesteri voidaan valmistaa 30 yleisen menetelmän mukaan saattamalla alkyyli-1,3-ditiaa-ni-2-karboksylaatti (esimerkiksi etyyliyhdiste) reagoimaan kaavan BrRÄ mukaisen bromidin kanssa, siten kuin Eliel, D. H. et ai. julkaisussa J. Org. Chem. 37 (1972), s. 505.
Kaavan XX mukainen aldehydi voidaan saattaa reagoi-35 maan kaavan XIX mukaisen nitroyhdisteen (OjN-CI^-R1) ja K2C03:n kanssa kaavan XXI mukaisen yhdisteen saamiseksi.
21 86859
Kaavan XXI mukainen yhdiste voidaan pelkistää (esimerkiksi hydraamalla tai LiAlH4) kaavan XXII mukaisen yhdisteen saamiseksi.
Kaavan XXII mukainen yhdiste voidaan saattaa rea-5 goimaan kaavan XVIIle mukaisen yhdisteen kanssa käyttäen tavanomaisia peptidikytkemisolosuhteita avainalkoholiväli-tuotteen, kaavan Vc mukaisen yhdisteen, saamiseksi.
Kaavan Va mukaiset yhdisteet, joissa R* on -CH2RB, voidaan valmistaa kaavan XXII mukaisista yhdisteistä saat-10 tamalla kaavan XII mukaiset yhdisteet reagoimaan sopivan aktivoidun karbonyyli- tai sulfonyyliyhdisteen kanssa.
Kaavan Vb mukaiset yhdisteet, joissa R* on -CH2RB, voidaan valmistaa kaavan XXII mukaisista yhdisteistä saattamalla kaavan XVII mukaiset yhdisteet reagoimaan sopivien 15 kaavan XVIIb mukaisten yhdisteiden kanssa käyttämällä edellä yhdisteiden Vc yhteydessä kuvattuja tavanomaisia peptidikytkemisolosuhteita.
Menetelmä B
Kaavan Ia, Ib tai Ie mukainen yhdiste, jossa RA on 20 ryhmä -CO.NH.R8, voidaan valmistaa esteristä, kuten etyyli-esteristä, jolla on kaava ’ * R1 F 0 3 1 * *· R-A-N-C— C-C-C-OCHXH, (XXVIa) I I il i
25 H H 0 F
0 R1 F 0 H i i il 0 ^ C-N-C—C-C-C-0CH,CH, (XXVIb)
, Il I I II I
- 30 R-A-C-N --f H H OF
; O
tai 22 86859
Or1 F O . Il I I H
H4 H O C-N-C-—C—-C-C-OCH,CH, (XXVIC)
, I I II / 1 I II I
R-A-N—C-C-N-----^ H H O F
R2 I
5 ^ joko suoraan kuumentamalla esteriä sopivan kaavan Vd mukaisen amiinin kanssa etanolissa kaavan Ia, Ib tai Ie mukaisen vastaavan yhdisteen saamiseksi tai keksinnön mukai-10 sesti epäsuorasti ensiksi hydrolysoimalla esteri vastaavaksi hapoksi, jolla on kaava R1 F 0 R3-A-N-C—C-C-C-OH (XXVI Ia)
Il li I
15 H H 0 F
OR1 F 0
H » I II
0 C-N-C —C-C-C-OH (XXVIIb)
, H I I II I
20 R3-A-C-N -f H H O F
O
tai 25 0 R1 F 0
, il i I H
R4 H 0 C-N-C—C—C-C-OH (XXVIIc) , I I II ll»l
R3-A-N—C-C-N--H H 0 F
^ u 30 (käyttäen samanlaista menetelmää kuin edellä on kuvattu hydrolysoitaessa kaavan VIIe mukainen yhdiste kaavan IXc mukaiseksi yhdisteeksi) ja sen jälkeen kytkemällä happo kaavan Vd mukaiseen amiiniin (käyttäen samanlaisia olosuhteita kuin edellä on kuvattu muutettaessa IXc yhdisteeksi 35 Ville) vastaavan kaavan Ia, Ib tai Ie mukaisen yhdisteen saamiseksi.
23 86859
Kaavan XXVla, XXVIb tai XXVIc mukainen lähtöesteri voidaan saada hapettamalla kaavan Vila, Vllb tai VIIe mukainen vastaava alkoholi käyttäen menetelmässä A kuvattuja hapetusmenetelmiä.
5 Menetelmä C
Kaavan Ia, Ib tai Ie, jossa R2 tai R3 sisältää karb-oksiryhmän, mukainen yhdiste valmistetaan hajottamalla kaavan Ia, Ib tai Ie, jossa R2 tai R3 sisältää esteriryh-män, mukaisen vastaavan yhdisteen esteriryhmä.
10 Hajottaminen voidaan suorittaa käyttämällä mitä tahansa erilaista orgaanisen kemian sinänsä hyvin tunnettua menetelmää. Siten se voidaan suorittaa esimerkiksi tavanomaisella hydrolyysillä happamissa tai emäksisissä olosuhteissa, joita tarvittaessa voidaan säätää molekyylin 15 muiden funktionaalisten ryhmien hydrolyyttisen poistumisen minimoimiseksi. Myös kun esteri on aralkoksikarbonyyliryhmä, kuten bentsyylioksikarbonyyli, voi olla mahdollista suorittaa hajottaminen pelkistämällä, esimerkiksi käyttämällä vetyä suunnilleen ilmakehän paineessa sopivan kata-20 lyytin, kuten palladiumin tai platinan ollessa läsnä sopivasti hiilikantajalla.
Edullisessa menetelmässä kaavan Ia, Ib tai Ie mukaisen esterin hajottamisessa saatetaan esteri reagoimaan sopivan emäksen, esimerkiksi alkali- tai maa-alkalimetal-25 lihydroksidin tai -karbonaatin (kuten litiumhydroksidin, kaliumhydroksidin, natriumhydroksidin, kalsiumhydroksidin tai kaliumkarbonaatin) kanssa sopivassa vesipitoisessa liuottimessa tai laimennusaineessa, esimerkiksi vedessä, mahdollisesti yhdessä veteen sekoittuvan orgaanisen liuot-30 timen, kuten metanolin kanssa ja sopivasti ympäristön lämpötilassa tai lähellä sitä. Käytettäessä tällaista menetelmää kaavan Ia, Ib tai Ie mukainen karboksyylihappo, jossa R2 tai R3 sisältää karboksiryhmän, saadaan aluksi hydrolyysiin käytetyn emäksen vastaavana suolana ja se 35 voidaan eristää sellaisenaan tai muuttaa vapaaksi hapoksi tekemällä happameksi tunnetulla tavalla.
24 86859
Menetelmä D
Kaavan Ia, Ib tai Ie mukainen yhdiste, jossa R2 tai R3 sisältää bentseenisulfonyyliaminokarbonyyliryhmän, voidaan valmistaa saattamalla vastaava kaavan Ia, Ib tai Ie 5 mukainen yhdiste, jossa R2 tai R3 sisältää karboksiryhmän, reagoimaan sopivan sulfonamidin kanssa dehydratoivan aineen, esimerkiksi l-(3-dimetyyliaminopropyyli)-3-etyyli-karbodi-imidin tai sen hydrokloridi- tai hydrobromidisuo-lan läsnä ollessa mahdollisesti yhdessä orgaanisen emäk-10 sen, esimerkiksi pyridiinin kanssa sopivan liuottimen tai laimennusaineen, esimerkiksi dikloorimetaanin läsnä ollessa, lämpötila-alueella esimerkiksi 10 - 50 °C, mutta edullisesti ympäristön lämpötilassa tai lähellä sitä.
Voi myös olla toivottua mahdollisesti käyttää suo-15 jaryhmää edellä kuvattujen menetelmien aikana kokonaisuudessaan tai niiden osissa; suojaryhmä voidaan sitten poistaa, kun lopputuote on muodostunut [kts. Greene, T. W., Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley-Interscience, New York (1981)].
20 Inhibitiomittaukset
Keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden kyky toimia elastaasi-inhibiittoreina voidaan aluksi määrittää tutkimalla keksinnön mukaisesti valmistetun yhdisteen kykyä inhiboida ihmisen leukosyyttielastaasin (HLE) 25 vaikutus pienimolekyylipainoisella peptidisubstraatilla.
Inhibiittorin teho arvioidaan määrittämällä kineettisesti inhibiittorin ja HLE:n vuorovaikutuksesta syntyneen kompleksin dissosiaatiovakio K^. Käytetty substraatti oli ani-lidi, metoksisukkinyyli-L-alanyyli-L-alanyyli-L-prolyyli-30 L-valiini-p-nitroanilidi, jonka ovat kuvanneet Nakajima, K. et ai., J. Biol. Chem. 254 (1979), SS. 4 027 - 4 032, ja Teshima, T. et ai., J. Biol. Chem., 257(9) (1982), ss. 5 085 - 5 091. Näissä kokeissa käytettyä HLE-entsyymiä voidaan saada valmistajalta Elastin Products, St. Louis, 35 Missouri, tai entsyymi voidaan puhdistaa menetelmällä, jonka ovat esittäneet Viscarello, B. R. et ai., Preparati- 25 86859 ve Biochemistry 13 (1983), ss. 57 - 67, seuraavasti (kaikki toimenpiteet suoritettiin kylmähuoneessa 4 °C:ssa).
Suolauutto-DNaasikäsittely: lähtömateriaali, mär käinen yskös (193 g), homogenoitiin 200 ml:n kanssa kylmää 5 tislattua vettä ja sentrifugoitiin 30 000 G:ssä 20 minuuttia 4 °C:ssa. Supernatantti hylättiin ja pelletti uutettiin korkealla suolapitoisuudella ja sitä käsiteltiin DNaasilla menetelmällä, jonka ovat kuvanneet Twumasi, D. Y. et ai. julkaisussa J. Biol. Chem. 252 (1977), ss. 1 917 10 - 1 926.
Kromatografia elastiiniagaroosilla: DNaasi-käsit- telystä saatu sakka otettiin kahteen 40 ml:n erään liuosta, joka sisälsi 50 mM Tris:iä ja 1,0 M NaCl:a, pH 8, suspensio sentrifugoitiin ja saatu supernatantti vietiin suo-15 raan kolonniin, joka sisälsi liukoista elastiini-Sepha- rose 4B:tä (2,5 x 20 cm). Kolonni pestiin tasapainotus-puskurilla (50 mM Tris, 50 mM NaCl, pH 8,0), kunnes eluaa-tin optinen tiheys aallonpituudella 280 nm (OD280) palautui perusarvoon. Lisää epäpuhtautena olevaa proteiinia eluoi-20 tiin kahdella kolonnitilavuudella liuosta, joka sisälsi 50 mM asetaattia ja 1,0 M NaCl:a, pH 5,0. Elastaasi ja katep-siini G (HLC-G) eluoitiin lopuksi liuoksella, joka sisälsi 50 mM asetaattia, 1,0 M NaCl:a ja 20 % DMS0:ta, pH 5,0. Kolonni kehitettiin nopeudella 6 ml/min ja 10 ml:n frak-25 tioita kerättiin. Aktiiviset fraktiot yhdistettiin, dialy-soitiin kahta 6 litran erää vastaan liuosta, joka sisälsi 50 mM asetaattia ja 0,1 M NaCl:a, pH 5,5, ja konsentroitiin 40 ml:ksi Amicon®-u]_trasuodatusyksikössä (YM-10-kal-vo). CM-kromatografia: konsentroitu aktiivinen fraktio 30 vietiin CM-Sephadex® c-50 -kolonniin (2,2 x 10 cm), joka oli etukäteen tasapainotettu liuoksella, joka sisälsi 50 mM asetaattia ja 0,1 M NaCl:a, pH 5,5, ja kolonni pestiin tällä puskurilla epäpuhtautena oleva proteiinin poistamiseksi. Eluointia jatkettiin liuoksella, joka sisälsi 50 mM 35 asetaattia ja 0,2 M NaCl:a, pH 5,5, ja tulokseksi saatiin kokeessa Bz-L-Phe-L-Val-L-Arg-pNA:ta vastaan piikkiaktii-visuuden korvautuminen. HLE eluoitiin sitten asetaattipus- 26 86859 kurilla, joka sisälsi 0,45 M NaCl:a, kun taas HLC-G:n eluointi vaati 1,0 M NaCl:n läsnäoloa puskurissa, kuten Martodam, R. et ai., Preparative Biochemistry 9 (1979), ss. 15-31, ovat kuvanneet. Tämä kolonni kehitettiin no-5 peudella 30 ml/h ja 5,5 ml:n fraktioita kerättiin. Näin puhdistettua HLE:tä käytettiin mittaamaan p-nitroanilii-nin standardi tuottamisnopeus; mittaus suoritettiin 25 °C:ssa spektrofotometrisesti näkyvän spektrin alueella aallonpituudella 410 nm käyttäen automaattista tulostusta 10 (käytetty laite: Cary 210 -spektrofotometri, Varian Associates). Reaktiot saatettiin alkuun injektoimalla 10 μΐ HLE-liuosta 3 ml:n kyvettiin, joka sisälsi 2,89 ml puskuria (10 mM natriumfostaatti, 500 mM NaCl, pH 7,6), 50 μΐ substraattiliuosta DMS0:ssa ja 50 μΐ DMS0:ta. Aluksi las-15 kettiin p-nitroaniliinin tuoton steady state -reaktionopeudet sovittamalla koetulokset lineaariseen riippuvuuteen ajasta käyttäen lineaarista pienimmän neliösumman menetelmää. Ilman inhibiittoria määritettyä nopeutta käytettiin standardina laskettaessa inhibiittorin K^arvoja.
20 Poikkeuksetta kaikkien keksinnön mukaisesti saatu jen peptidijohdannaisten todettiin olevan HLE:n "hitaasti-sitovia" inhibiittoreita, ja sen vuoksi tarvittiin erityisiä analyysimenetelmiä, jotta voitaisiin tarkasti määrittää HLE-inhibition Kt-arvot määrittämiseen [katso Williams, 25 J. W. ja Morrison, J. F., Meth. Enz. 63 (1979), s. 437, jossa on kuvattu näitä menetelmiä]. Tyypillisessä kokeessa 3 ml:n kyvettiin lisättiin 2,89 ml puskuria (10 mM nat-riumfosfaatti, 500 mM NaCl-liuos, pH 7,6), 50 μΐ inhibiit-toriliuosta DMS0:ssa ja 50 μΐ substraattiliuosta DMSOrssa. 30 Kyvetti suljettiin, sitä käänneltiin useita kertoja sisällön sekoittamiseksi ja kyvettiä pidettiin spektrofoto-metrissä 25 °C:ssa. Viiden minuutin kuluttua, jona aikana reaktioliuoksen lämpötila oli tasoittunut, kyvettiin lisättiin 10 μΐ entsyymin kantaliuosta reaktion alkuunsaat-35 tamiseksi. Inhibiittoripitoisuudella nolla suoritettiin kaksois- tai kolmoismäärityksiä ja inhibiittorin eri pi- 27 86859 toisuuksilla suoritettiin jokaisella vähintään kolme koetta. Κ,^-arvot laskettiin käyttäen menetelmiä, joita on esitetty edellä mainitussa viitejulkaisussa Williams ja Morrison. K1~arvot valikoiduille kaavan Ia, Ib ja Ie mukai-5 sille yhdisteille olivat luokka 10 M tai alle.
Eläinkokeet
Emfyseeman eläinmallikokeissa eläimille annetaan henkitorvensisäisesti (i.t.) elastolyyttistä proteaasia, joka aiheuttaa hitaasti etenevän, keuhkoja hajottavan vau-10 rion. Nämä vauriot arvioidaan normaalisti joidenkin viikkojen tai kuukausien kuluttua alkuperäisestä käsittelystä. Nämä proteaasit aiheuttavat kuitenkin myös vaurioita, jotka voidaan havaita ensimmäisinä tunteina. Aikaisessa vauriossa esiintyy ensin verenvuotoa ja vaurio kehittyy en-15 simmäisen 24 tunnin kuluessa tulehdukselliseksi vaurioksi, joka häviää ensimmäisen viikon jälkeen. Tämän aikaisen vaurion toteamiseksi käytettiin seuraavaa koemallia.
Hamstereille annettiin ensin kevyt nukutus metohek-sitaalilla (Brevital, valmistaja Eli Lilly). Sen jälkeen 20 annosteltiin suoraan henkitorveen fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (PBS), pH 7,4, joko yksin tai sisältäen 400 pg ihmisen leukosyyttielastaasia (HLE). 24 tunnin kuluttua eläimet tapettiin, keuhkot poistettiin ja keuhkoista poistettiin varovasti ylimääräinen kudos. Keuhkon märkäpaino 25 määritettiin, keuhkot huuhdottiin PBSrllä ja huuhtoutuneiden puna- ja valkosolujen kokonaismäärä määritettiin. Keuhkon märkäpainojen, huuhtoutuneiden punasolujen kokonaismäärä ja huuhtoutuneiden valkosolujen kokonaismäärä ovat HLE-annon jälkeen kohonneita annoksista riippuvalla 30 tavalla. Yhdisteet, jotka ovat tehokkaita elastaasi-inhi-biittoreita, pystyvät estämään tai vähentämään entsyymillä aiheutetun vaurion voimakkuutta, mikä alentaa keuhkon mär-käpainoa ja pienentää huuhtoutuneiden puna- ja valkosolujen kokonaismäärää verrattuna pelkän HLE:n antoon. Yhdis-35 teet voidaan arvioida antamalla niitä yhdessä HLE:n kanssa tai erilaisina ajankohtina ennen HLE-antoa niiden käyttö- 28 86859 kelpoisuuden määrittämiseksi HLE-vaurion estäjinä. Keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet aiheuttivat tilastollisesti merkitsevää alenemista keuhkojen märkäpainossa ja huuhtoutuneiden solujen kokonaismäärässä verrattuna pelk-5 kään HLE:hen.
Kaavojen Ia, Ib ja Ie mukaisilla yhdisteillä oli aktiivisuutta ainakin yhdessä edellä kohdissa "Inhibitio-mittaukset" tai "Eläinkokeet" kuvatussa kokeessa. On todettava, ettei aina saatu suoraa korrelaatiota yhdistei-10 den aktiivisuuksien (mitattuna K^-arvoina inhibitiomit- tauksessa) ja eläinmallikokeissa saatujen huuhtoutuneiden solujen kokonaismäärän ja keuhkon märkäpainon alenemisen (verrattuna pelkästään HLE:n antoon) välille. Uskotaan, että eläinmallikoe ennakoi paremmin tällaisen yhdisteen 15 aktiivisuutta emfyseeman hoidossa.
Farmakokinetiikka:
Urospuolisille Syyrian hamstereille (80 - 120 g) annetaan suonensisäisesti injektiona koeyhdistettä. Ennen injektiota ja eri ajankohtina sen jälkeen eläimet nukute-20 taan kevyesti eetterillä ja sydänpunkiolla otetaan noin 0,2 ml:n verinäytteitä. Veri pannaan 2 ml:n sentrifugiput-kiin ja veren annetaan hyytyä tunnin ajan. Sitten näyte sentrifugoidaan ja seerumi poistetaan.
Lääkepitoisuudet määritetään inaktivoimalla ensin 25 endogeeniset elastaasi-inhibiittorit inkuboimalla 50 μΐ seerumia 5 minuuttia yhtä suuren tilavuuden kanssa puskuria, joka sisältää 5 mg/ml naudan haimatrypsiiniä. Tryp-siinillä inaktivoitu seerumi (10 μΐ) lisätään sitten 0,52 ml:n kyvettiin, joka sisältää puskuria, joka on tehty 20 30 nM:ksi HLE-pitoisuuden suhteen. 30 minuutin lisäinkuboin-nin jälkeen reaktio käynnistetään lisäämällä substraattia (350 μΐ) (MeOSuc-L-Ala-L-Ala-L-Pro-L-Val-pNA, 1,6 mM) ja reaktiota seurataan spektrofotometrisesti aallonpituudella 410 nm. Vertailutarkoituksissa koeyhdisteiden seerumipysy-35 vyys määritetään seuraavalla tavalla: 29 86859
Seeruminäytteiden prosentuaalinen inhibitio laskettiin seuraavasti:
Vo - Vi 5 Inhibitio-% = - x 100
Vo
Keksinnön mukaisesti valmistettuja yhdisteitä voidaan antaa lämminveriselle eläimelle, erityisesti ihmi-10 selle, keuhkoemfyseeman, ateroskleroosin, nivelreuman ja luu-niveltulehduksen hoitoon, erityisesti keuhkoemfyseeman hoitoon. Antotapa voi olla suun kautta, parenteraalinen mukaan lukien ihonalainen anto osmoottisen pumpun avulla tai jauhe- tai nesteaerosoli. Yhdisteet voidaan formuloida 15 tavanomaisella tavalla suun kautta annettaviksi tai paren-teraalisiksi annosmuodoiksi yhdistämällä noin 10 - 250 mg yhdistettä annosyksikköä kohti tavanomaiseen väliaineeseen, täyteaineeseen, sideaineeseen, säilöntäaineeseen, stabilointiaineeseen, makuaineeseen ja vastaaviin ainei-20 siin ym., kuten tavanomainen farmaseuttinen lääkevalmis-tus vaatii, esim. kuten US-patenttijulkaisussa 3 755 340 on kuvattu. Parenteraalisessa annossa potilaalle voidaan antaa yhdistettä 3-4 kertaa päivässä 1 - 10 ml suonensisäisesti, lihaksensisäisesti tai ihonalaisesti injektio-25 na, joka sisältää noin 0,02 - 10 mg yhdistettä/kehonpaino-kg. Injektio voi sisältää yhdistettä vesipitoisessa isotonisessa, steriilissä liuoksessa tai suspensiossa, joka mahdollisesti sisältää säilöntäainetta, kuten fenolia, tai liukenevaksi tekevää ainetta, kuten etyleenidiamiinitetra-30 etikkahappoa (EDTA). Jauheaerosolina yhdisteitä voidaan annostella samalla tavalla kuin cromolyn-natriumia Spinha- i (g) ier -turboinhalaatiolaiteen avulla (valmistaja Fisons Corp., Bedford, Massachusetts) annoksena noin 0,1 - 50 mg/kapseli, jolloin keskikokoisen aikuisen ihmisen annos 35 on 1 - 8 kapselia/vrk. Jokainen Spinhaler®-laitteessa käytetty kapseli sisältää tarvittavan määrän yhdistettä, joi- 30 86859 loin loppuosa 20 mg:n kapselin sisällöstä on farmaseuttisesti hyväksyttävää kantaja-ainetta, kuten laktoosia. Nes-teaerosolina yhdisteitä annostetaan noin 100 - 1 000 pg painallusta kohti eli standarditilavuuden ponnekaasua ak-5 tiivistä vapautumista kohti. Nesteaerosolia voidaan antaa 1-8 annosta päivässä, jolloin annosten vaihtelut riippuvat hoidettavan tilan vakavuudesta, potilaan painosta ja aerosolihiukkasten hiukkaskokojakautumasta, sillä pienemmät hiukkaset tunkeutuvat syvemmälle keuhkoihin. Ponneai-10 neita, esim. fluorattuja hiilivetyjä tai isobutaania, ae-rosolipulloja, -venttiilejä ja -painonappeja ovat Lachman, L. et ai. kuvanneet teoksessa "The Theory and Practice of Industrial Pharmacy", Lea and Febiger, Philadelphia ( 1976).
15 Seuraavissa esimerkeissä ja koko selityksessä käy tetään seuraavia lyhenteitä ja merkintöjä: atm (atmosfääri), jolloin 1,013 x 105 Pascalia = 1 atm; kp. (kiehumispiste); °C (celsiusaste); g (gramma); h (tunti); mg (milligramma); min (minuutti); ml (millilitra); mol (mooli); 20 mmol (millimooli); sp. (sulamispiste); N (normaalinen); nm (nanometri); nM (nanomolaarinen); Rf (suhteellinen liikkuvuus TLC:ssä); TLC (ohutlevykromatografia); DCC (disyklo-heksyylikarbodi-imidi); DMF (dimetyyliformamidi); DMSO (dimetyylisulfoksidi); Et20 (dietyylieetteri); EtOAc (etyy-25 liasetaatti); HOAc (etikkahappo); WSCDI (vesiliukoinen
karbodi-imidi:l-etyyli-3-(3-dimetyyliaminopropyyli)karbo-di-imidihydrokloridi); Bz (bentsoyyli); HOBT (1-hydroksi-bentsotriatsoli); MeOH (metyylialkoholi); Pd/C (palla-dium/hiili-katalyytti); pNA (p-nitroanilidi); DMAP (4-di-30 metyyliaminopyridiini); NMM (N-metyylimorfoliini); THF
(tetrahydrofuraani); CBZ (bentsyylioksikarbonyyli); t-BOC (tert-butyylioksikarbonyyli); tR (HPLC-retentioaika minuuteissa); HPLC (korkean suorituskyvyn nestekromatografia); TEA (trietyyliamiini); TFA (trifluorietikkahappo); Ac20 35 (etikkahappoanhydridi); DAST (dietyyliaminorikkitrifluori-
di); Dipal (di-isobutyylialuminiumhydridi); ja Zorbax® ODS
3i 86»59 -analyyttinen kolonni, 4,6 x 25 cm). Lisäksi käytetään tavanomaisia alkuaineiden symboleja C, H, N jne. ja tavanomaisia aminohappojen lyhennyksiä, esimerkiksi proliini (Pro), väliini (Vai) jne. On ymmärrettävä, että yleiset 5 termit, kuten C1.10-alkyyli, käsittävät sekä suoraketjuiset että haarautuneet alkyyliradikaalit, mutta viittaukset yksittäisiin alkyyliradikaaleihin, kuten propyyli, tarkoittavat vain suoraketjuisia ("normaaleja") radikaaleja, jolloin haarautuneisiin isomeereihin, kuten isopropyyli, 10 viitataan spesifisesti. ^-NMR-tiedot annetaan delta-arvoina käyttäen sisäisenä standardina tetrametyylisilaania. Esimerkki 1 [3,3-difluori-l-(1-metyylietyyli)-2,4-diokso-4- [(fenyylimetyyli)-amino]butyyli]karbamiinihappo- 15 fenyylimetyyliesteri a) N-bentsyylioksikarbonyyli-L-valinoli [Kaava XlVa, R3 = 0CH-.OC-, R1 = CH(CH, k]
H
0
Bentsyyliklooriformiaattia (91,0 g, 0,532 mol, 95 20 %:n puhtaus) lisättiin pisaroittain 1 tunnissa L-valinolin (50,0 g, 0,484 mol) ja trietyyliamiinin (60,0 g, 0,6 mol) esi jäähdytettyyn (0 °C) liuokseen CHCl3:ssa (1 500 ml), j ' Reaktioseosta sekoitettiin 1 tunti 0 °C:ssa ja sitten sen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan 2 tunnin aikana.
’ 25 Reaktioseos väkevöitiin tyhjössä. Saatuun jäännökseen lisättiin EtOAc:a (1 500 ml) ja orgaaninen liuos pestiin peräkkäin vesipitoisella 1 N NaOH:lla ja suolaliuoksella. Orgaaninen faasi kuivattiin MgS04:lla ja sitten suodatet-. . tiin ja väkevöitiin tyhjössä. Saatu jäännös puhdistettiin 30 flash-kromatografiällä silikageelikolonnissa (6 x 30 cm) käyttäen Et20/heksaanin (1:5) asteittaista gradienttia ja sen jälkeen puhdasta Et02:a, jolloin saatiin tuote (91,4 g) valkoisena vahamaisena aineena. TLC, Rf = 0,23, silikagee-... li, heksaani/Et20 ( 50 : 50).
32 86859 b) N-bentsyylloksikarbonyyli-L-valinaali [Kaava Via, R3A = 0CH-.OC-, R1 = CH(CH,),]
H
0 DMSO:n (107,2 g, 1,372 mol) liuos CH2Cl2:ssa (150 5 ml) lisättiin pisaroittaan 0,5 tunnissa oksalyylikloridin (87,1 g, 0,686 mol) esijäähdytettyyn (-60 °C) sekoitettuun liuokseen CH2Cl2:ssa (800 ml) typpiatmosfäärissä. Seoksen lämpötila nousi -45 °C:seen. Esimerkin la tuotteen (81,5 g, 0,343 mol) liuos CH2Cl2:ssa (300 ml) lisättiin pisaroittain 10 45 minuutissa -30 °C:ssa. Reaktioseosta sekoitettiin 50 mi nuuttia -25 °C:ssa, jäähdytettiin -40 °C:seen ja lisättiin pisaroittain 45 minuutissa -40 °C:ssa di-isopropyyliamiinin (177,4 g, 1,372 mol) liuos CH2Cl2:ssa (250 ml). Reaktio-seosta sekoitettiin 1 tunti sen lämmetessä huoneen lämpö-15 tilaan. Reaktioseos laimennettiin CH2Cl2:lla (1 500 ml) ja orgaaninen faasi pestiin vesipitoisella 1 N HClilla ja sitten väkevöitiin tyhjössä tuotteen (98 g) saamiseksi vihreänä öljynä, jota käytettiin heti enempää puhdistamatta. TLC, Rf = 0,48, silikageeli, heksaani/Et20 (50:50).
20 c) N-bentsyylioksikarbonyyli-L-valinaali-dietyyli- asetaali [Kaava XVa, R3A = 0CH2OC-, R1 = CH(CH3)2] :V 0 ·:· Trietyyliortoformiaattia (700 g, 4,723 mol), abso- 25 luuttista Et0H:a (800 ml) ja p-tolueenisulfonihappomono-hydraattia (5,0 g, 0,343 mol) lisättiin osaan esimerkin Ib tuotetta (81 g, 0,343 mol). Seosta sekoitettiin 10 minuuttia huoneen lämpötilassa ja väkevöitiin sitten tyhjössä.
. . Saatu jäännös liuotettiin Et20:iin ja pestiin kyllästetyllä ; 30 vesipitoisella NaHC03:lla. Orgaaninen faasi kuivattiin ' Na2S04:lla, suodatettiin ja väkevöitiin tyhjössä raakatuot- : teen saamiseksi. Tämä tuote puhdistettiin flash-kromato- grafiällä silikageelillä käyttäen heksaanin asteettaista gradienttia CH2C12/heksaanin ja EtOAc/CH2Cl2:n (30:70) seok-35 sissa, jolloin tuote saatiin vaaleankeltaisena öljynä.
TLC, Rf = 0,21, silikageeli, CH2Cl2/petrolieetteri (50:50).
33 86859 d) L-valinaalidietyyliasetaali [Kaava XVIIIa, R1 = CH(CH3)2]
Seosta, jossa oli esimerkin le tuotetta (147,8 g, 0,478 mol) ja 10 % Pd/C:tä (10 g) EtOAc:ssa (1 500 ml), 5 sekoitettiin vetyatmosfäärissä (1 atm), kunnes 2 500 ml vetyä oli kulunut. Kahdesti tänä aikana reaktio keskeytettiin ja lisättiin 10 % Pd/C:tä (10 g). Sitten reaktioseos suodatettiin piimaakerroksen lävitse. Lisättiin 10 % Pd/C:tä (10 g) ja reaktioseosta sekoitettiin, kunnes 10,92 10 litraa vetyä oli kulunut. Reaktioseos suodatettiin piimään lävitse ja suodos väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin tuote (78,8 g) vaaleankeltaisena öljynä [a]D25 = +7,8°.
el [Kaava Vila, R3A = 0CH2OC-, R1 = CH(CH3)2] 0 15 Osa esimerkin Ib mukaisesta yhdisteestä (3,0 g, 12.7 mmol), etyyli-2-bromi-2,2-difluoriasetaattia (2,58 g, 12.7 mmol) ja Zn-pölyä (1,22 g) kuumennettiin palautus-jäähdyttäen THFrssa (30 ml) 0,5 tuntia. Lisättiin lisää Zn-pölyä (1,22 g) ja etyyli-2-bromi-2,2-difluoriasetaattia 20 (2,58 g, 12,7 mmol) ja saatua liuosta kuumennettiin palau tus jäähdyttäen vielä 1 tunti. Liuos jäähdytettiin huoneen lämpötilaan ja lisättiin etyyliasetaattia (150 ml). Etyy-liasetaattiliuos pestiin peräkkäin 1 M KHS04:lla ja suola-t' liuoksella. Orgaaninen kerros kuivattiin Na2S04:lla, suoda- 25 tettiin ja liuotin poistettiin alennetussa paineessa raa- - katuotteen (2,4 g) saamiseksi. Tuote puhdistettiin flash- kromatografiällä silikageelillä eluoimalla etyyliasetaat-ti/heksaanilla (35:65), jolloin lopputuote (0,9 g) saatiin . . öljynä. TLC, Rf = 0,55, silikageeli, etyyliasetaatti/hek- 30 saani (35:65).
f) [Kaava Va, R3A = 0CH,OC-, R1 = CH(CH,),, -- Il : · Ra = CONHCH20] 0
Osa esimerkin le tuotteesta (0,5 g, 0,7 mmol), bentsyyliamiinia (240 ml) ja etanolia (20 ml) kuumennet-35 tiin 65 °C:ssa 2 tuntia. Saatu liuos jäähdytettiin huoneen lämpötilaan ja liuotin poistettiin alennetussa paineessa 34 86859 raakatuotteen saamiseksi. Tuote puhdistettiin flash-kroma-tografialla silikageelillä eluoimalla etyyliasetaatti/klo-roformilla (15:85), jolloin saatiin tuote (0,56 g) kirkkaana öljynä. TLC, Rf = 0,5, silikageeli, etyyliasetaatti/-5 kloroformi (15:85).
cQ [Kaava Ia, R3A = 0CH2OC-, R1 = CH(CH3)2, RÄ = CONHCH20] 0
Esimerkin lf tuotetta (0,56 g, 1,34 mmol), etikka-happoanhydridiä (10 ml) ja dimetyylisulfoksidia (10 ml) 10 sekoitettiin huoneen lämpötilassa typpiatmosfäärissä 24 tuntia. Lisättiin jäävettä (100 ml) ja liuosta sekoitettiin 3 tuntia. Kiinteä saostuma (0,3 g) otettiin talteen ja pestiin vedellä ja petrolieetterillä. Kiinteän tuotteen sulamispiste oli 78 - 80 °C.
15 Analyysi yhdisteelle C22H24N204F2:
Laskettu: C 63,1 H 5,78 N 6,69
Saatu: C 62,77, 62,98 H 5,67, 5,71 N 6,34, 6,20
Esimerkki 2 N ~[3,3-difluori-l-(1-metyylietyyli)-2,4-diokso-20 4-[(fenyylimetyyli)amino]butyyli]-1-(l-okso-6- fenyyliheksyyli)-2-pyrrolidiinikarboksiamidi a2 [Kaava XIVb, R3A = 0CH2OC-, R1 = CH(CH3)2]
O
Isobutyyliklooriformiaattia (5,4 g, 0,034 mol) li-25 sättiin N-bentsyylioksikarbonyyli-L-proliinin (9,8 g, 0,039 mol) ja N-metyylimorfoliinin (4,0 g, 0,039 mol) liuokseen kuivassa THF:ssa (150 ml) -20 °C:ssa typpiatmosfäärissä. Reaktioseosta sekoitettiin 10 minuuttia ja jäähdytettiin sitten -40 °C:seen. Lisättiin pisaroittain L-va-30 linolin (4,06 g, 0,039 mol) liuos kuivassa THFrssa (75 ml). Reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan ja sekoitettiin yön yli. Reaktioseos suodatettiin ja liuottimet poistettiin tyhjössä. Jäännös otettiin EtOAc:iin ja pestiin peräkkäin vesipitoisella 1 N HCl:lla, 35 kyllästetyllä vesipitoisella NaHC03:11a ja suolaliuoksella.
Orgaaninen faasi kuivattiin Na2S04:lla, suodatettiin ja vä- li 35 868 59 kevöitiin tuotteen (12,64 g) saamiseksi valkoisena kiinteänä aineena. TLC, Rf = 0,2, silikageeli, MeOH/CHCl3 (5:95).
b_). Kaava VIb, R3a = 0CH2OC-, R1 = CH(CH3)2]
5 O
DMS0:n (10,3 g, 0,132 mol) liuos kuivassa CH2Cl2:ssa (40 ml) lisättiin pisaroittain oksalyylikloridin (8,4 g, 0,006 mol) sekoitettuun liuokseen kuivassa CH2Cl2:ssa (100 ml) jäähdytettynä -60 °C:seen typpiatmosfäärissä. Reaktio-10 seosta lämmitettiin sitten -25 °C:seen ja lisättiin pisaroittain esimerkin 2a tuotteen (11,0 g, 0,033 mol) liuos kuivassa CH2Cl2:ssa (40 ml). Reaktioseosta sekoitettiin 30 minuuttia ja di-isopropyylietyyliamiinin (17,0 g, 0,132 mol) liuos kuivassa CH2Cl2:ssa (25 ml) lisättiin pisaroit-15 tain siten, että lämpötila pysyi alle -25 °C:n. Reaktioseos laimennettiin CH2Cl2:lla (300 ml) ja pestiin vesipitoisella 1 N HClilla ja sitten suolaliuoksella. Orgaaninen faasi kuivattiin Na2S04:lla, suodatettiin ja väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin raakatuote (10,96 g) keltaisena öljy-20 nä, jota käytettiin heti seuraavassa reaktiossa esimerkissä 2c. TLC, Rf = 0,56, silikageeli, MeOH/CHCl3 (5:95).
C2 [Kaava XVb, R3A = 0CH2OC-, R1 = CH(CH3)2]
O
Lisättiin p-tolueenisulfonihappoa (0,475 g, 0,0025 25 mol) esimerkin 2b tuotteen (10,96 g, 0,033 mol) ja tri-etyyliortoformiaatin (48,8 g, 0,330 mol) liuokseen absoluuttisessa etanolissa (75 ml). Reaktioseosta sekoitettiin 15 minuuttia ja väkevöitiin sitten tyhjössä. Jäännös otettiin Et0Ac:iin ja pestiin peräkkäin kyllästetyllä vesipi-30 toisella NaHC03:lla ja suolaliuoksella. Orgaaninen faasi kuivattiin Na2S04:lla, suodatettiin ja väkevöitiin raaka-tuotteen saamiseksi keltaisena öljynä. Tuote puhdistettiin flash-kromatografiällä silikageelillä käyttäen gradienttia alkaen CHC.1-, :sta ja päättyen MeOH/CHCl3:een (2,5:97,5) elu-35 oimisaineena, jolloin tuote (13,18 g) saatiin vaaleankel- 36 86859 täisenä öljynä. TLC, Rf = 0,54, silikageeli, MeOH/CHCl3 (2:98).
d_) [Kaava XVIIIb, R1 = CH(CH3)2]
Liuosta, jossa oli esimerkin 2c menetelmän mukai-5 sesti valmistettua tuotetta (12,0 g, 0,0296 mol), absoluuttista etanolia (125 ml) ja 10 % Pd/C:tä (1,2 g, 0,0296 mol), sekoitettiin vetyatmosfäärissä noin 4 tuntia. Lisättiin lisää Pd/C:tä (1,2 g) ja reaktioseosta sekoitettiin yön yli 1 vetyatmosfäärissä. Lisättiin vielä erä 10 % 10 Pd/C:tä (1,2 g) ja reaktioseosta sekoitettiin 1 vetyatmos-fäärissä 5 tuntia. Sen jälkeen lisättiin vielä 10 % Pd/C:tä (1,2 g) ja reaktioseosta sekoitettiin yön yli 1 vetyatmosfäärissä. Reaktioseos suodatettiin piimään lävitse ja väkevöitiin tyhjössä. Jäännös otettiin absoluutti-15 seen etanoliin (250 ml); lisättiin lisää 10 % Pd/C:tä (2,0 g) ja reaktioseosta sekoitettiin 1 vetyatmosfäärissä 2,5 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja väkevöitiin tyhjössä, jolloin tuote (7,42 g) saatiin keltaisena lasina. TLC, Rf = 0,44, silikageeli, CH30H/CHC13 (10:90).
20 e) [Kaava XVb, R3A = 0(CH7)„C-, R1 = CH(CH.)2] — il o
Fenyyliheksaanihapon (1,27 g, 1,4 mmol), karbonyy-lidi-imidatsolin (CDI) (0,230 g, 1,4 mmol) ja THF:n (20 ml) liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa typpiatmos-25 fäärissä 1 tunti. Osa esimerkin 2d tuotteesta (0,387 g, 1,42 mmol) lisättiin ja saatua liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli. Lisättiin kyllästettyä NaHC03:a ja vettä ja liuosta sekoitettiin 1 tunti. Liuotin poistettiin alennetussa paineessa ja lisättiin etyyliasetaattia 30 (50 ml). Orgaaninen kerros otettiin talteen, kuivattiin
Na2S04:lla, suodatettiin ja liuotin poistettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin raakatuote vaaleankeltaisena öljynä. Tuote puhdistettiin flash-kromatografiällä silikageeli llä eluoiden metanoli/kloroformilla (3:97), jolloin 35 lopputuote saatiin kirkkaana öljynä (0,35 g). TLC, Rf = 0,45, silikageeli, etyyliasetaatti/heksaani (66:33).
86859 37 f± [Kaava XVb, R3A = 0(CH2)5C-, R1 = CH(CH3)2] 0
Esimerkin 2e tuotteen (0,33 g, 0,74 mmol), p-tolu-eenisulfonihapon (0,14 g, 0,75 mmol) ja asetonin (10 ml) 5 liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 3 tuntia. Liuotin poistettiin alennetussa paineessa ja jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin. Etyyliasetaattiliuos pestiin 5-%:isella vesipitoisella NaHC03:lla ja suolaliuoksella ja orgaaninen kerrros kuivattiin MgS04:lla, suodatettiin ja 10 liuotin poistettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin tuote (0,26 g) kirkkaana öljynä. TLC, Rf = 0,28, silikagee-li, EtOAc/heksaani (2:1).
[Kaava Vllb, R3A = 0(CH2)5C-, R1 = CH(CH3)2] 0 15 Esimerkin 2f tuotteen (0,26 g, 0,7 mmol), Zn-pölyn (0,077 g, 0,88 mmol) ja THF:n (10 ml) liuosta sekoitettiin palautuksella 0,5 tuntia. Lisättiin lisää Zn-pölyä (0,077 g, 0,88 mmol) ja etyyli-2-bromi-2,2-difluoriasetaattia (0,18 g, 0,88 mmol) ja liuosta sekoitettiin palautuksella 20 vielä 2 tuntia. Liuos jäähdytettiin huoneen lämpötilaan ja lisättiin etyyliasetaattia (60 ml). Saatu liuos pestiin 1 M KHS04:lla ja suolaliuoksella ja orgaaninen kerros otettiin talteen, kuivattiin Na2S04:lla, suodatettiin ja liuotin poistettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 25 tuote (0,350 g) öljynä. TLC, Rf = 0,6, silikageeli, etyyli-asetaatti/heksaani (2:1).
0 h) [Kaava Vb, R3A = 0(CH2)5C-, R1 = CH(CH3)2,
Ra = CONHCH20] 30 Esimerkin 2g tuotteen (0,35 g, 0,7 mmol), bentsyy- liamiinin (0,3 ml, 2,8 mmol) ja etanolin (10 ml) liuosta sekoitettiin 80 °C:ssa typpiatmosfäärissä 4 tuntia ja sitten sekoitettiin huoneen lämpötilassa yli yön. Etanoli poistettiin alennetussa paineessa, jolloin raakatuote saa-35 tiin keltaisena öljynä. Tuote puhdistettiin flash-kromato-grafiällä silikageelillä käyttäen eluenttina CH3OH/CHCl3:a 38 86859 (3:97), jolloin saatiin lopputuote (0,25 g) vaaleankeltaisena öljynä. TLC, Rf = 0,5, silikageeli, CH30H/CHC13 (3:97).
i) (Kaava Ib, R3A = 0(CH2hC-, R1 = CH(CH3)2,
Ra = CONHCH20] o 5 Liuosta, jossa oli osa esimerkin 2h tuotetta (0,15 g, 0,27 mmol), DMS0:a (2,0 ml) ja etikkahappoanhydridiä (2,0 ml), sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa. Lisättiin jäävettä (30 ml) ja liuosta sekoitettiin vielä 1 tunti. Lisättiin etyyliasetaattia (50 ml) ja orgaaninen 10 kerros otettiin talteen, pestiin NaHC03:n kyllästetyllä vesiliuoksella ja suolaliuoksella. Etyyliasetaattiliuos kuivattiin Na2S04:lla, suodatettiin ja liuotin poistettiin alennetussa paineessa raakatuotteen saamiseksi (0,12 g). Tuote puhdistettiin flash-kromatografiällä silikageelillä, 15 jolloin saatiin lopputuote öljynä (0,05 g). TLC, Rf = 0,66, silikageeli, EtOAc/heksaani (2:1). ^-NMR (DMSO-d6): 0,83 (m, 6H), 1,2 - 2,2 (m, 13H), 2,5 (m, 2H), 3,4 (m, 2H), 4,0 - 4,5 (m, 6H), 4,75 (m, 1H), 7,2 (m, 10H), 8,3 - 8,55 (m, 1H) ja 9,7 (m, 1H).
20 Esimerkki 3 N-[(fenyylimetoksi)karbonyyli]-L-valyyli-N-[3,3- dif luori-1- (l-metyylietyyli-2,4-diokso-4- [ ( fenyyli- metyyli)amino]butyyli]-L-proliiniamidi [Kaava Ie, R3A = 0CH?OC-, R4 = H, R2 = CH(CH3)2,
H
25 R1 = CH(CH3)2, O Ra = CONHCH20] a) N-bentsyylioksikarbonyyli-L-valyyli-L-proliini-t-butyyliesteri N-bentsyylioksikarbonyyli-L-valiinin (56,25 g, 0,244 mol) ja H0BT:n (60,67 g, 0,45 mol) liuos DMF:ssa 30 (565 ml) jäähdytettiin 5 °C:seen. Lisättiin yhdellä kertaa DCC:a (50,89 g, 0,247 mol). Seosta sekoitettiin 15 minuuttia 5 °C:ssa ja sitten lisättiin L-proliini-t-butyylieste-riä (38,36 g, 0,224 mol). Seosta sekoitettiin vielä 2 tuntia 5 °C:ssa ja sitten 48 tuntia huoneen lämpötilassa. Seos 35 suodatettiin ja väkevöitiin tyhjössä. Öljymäinen jäännös liuotettiin EtOAc:iin (1 litra) ja pestiin peräkkäin 39 86859 20-%:isella vesipitoisella sitruunahapolla, kyllästetyllä vesipitoisella NaHC03:lla ja suolaliuoksella. Orgaaninen faasi kuivattiin Na2S04:lla, suodatettiin ja väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin tuote (92 g) valkoisena vaahto-5 na. TLC, Rf = 0,9, silikageeli, CHCl3/EtOAc (85:15).
b) N-bentsyylioksikarbonyyli-L-valyyli-L-proliini [Kaava XVIIC, R3A = 0CH2OC-, R4 = H, R2 = CH(CH3)2] il
O
Trifluorietikkahappoa (70 ml, 0,90 mol) lisättiin 10 osaan esimerkin 3a tuotetta (16,5 g, 39,2 mmol) CH2Cl2:ssa (100 ml) huoneen lämpötilassa ja saatua seosta sekoitettiin 3 tuntia. Liuos laimennettiin tolueenilla (100 ml) ja väkevöitiin tyhjössä. Jäännös otettiin tolueeniin ja väkevöitiin 5 kertaa, jolloin tuote (12,85 g) saatiin nahanvä-15 risenä kiinteänä aineena. TLC, Rf = 0,45, silikageeli, MeOH/CH2Cl2 (5:95).
c) N-bentsyylioksikarbonyyli-L-valyyli-L-prolyyli- L-valinaalidietyyliasetaali 0 20 [Kaava XVc, R3A = 0CH2OC-, R4 = H, R2 = CH(CH3)2, R1 = CH(CH3)2] H0BT:a (4,21 g, 31,1 mmol) lisättiin liuokseen, jossa oli osa esimerkin 3b tuotetta (5,17 g, 15,55 mmol) ja L-valinaalidietyyliasetaalia (saatu esimerkin Id mukai-25 sesti) (2,73 g, 15,55 mmol) kuivassa THF:ssa (75 ml) 0 °C:ssa typpiatmosfäärissä. Tätä liuosta sekoitettiin 15 minuuttia ja lisättiin l-(3-dimetyyliaminopropyyli)-3-etyylikarbodi-imidihydrokloridia (3,28 g, 17,1 mmol) ja sen jälkeen N-metyylimorfoliinia (2,36 g, 23,3 mmol).
30 Seosta sekoitettiin 1 tunti 0 °C:ssa ja 3 päivää huoneen lämpötilassa. Reaktioseos väkevöitiin tyhjössä ja jäännös jaettiin EtOAc:n ja veden kesken. Orgaaninen kerros eristettiin ja pestiin peräkkäin vesipitoisella 1 N HCl:lla, suolaliuoksella, kyllästetyllä NaHC03:lla ja suolaliuoksel-35 la. Kuivattiin sitten MgS04:lla, suodatettiin ja väkevöitiin viskoosiseksi öljyksi. Tuote puhdistettiin flash- 40 8 6 8 5 9 kromatografiällä silikageelillä eluoiden CH2C12/Et20/-MeOHrlla (75:25:0,5), jolloin saatiin väritön öljy (4,4 g). TLC, Rf = 0,55, silikageeli, CH2Cl2/Et20/Me0H (75:25:0,5).
5 d)L-valyyli-L-prolyyli-L-valinaali-dietyyliasetaa- li [Kaava XVIIIc, R4 = H, R2 = CH(CH3)2, R1 = CH(CH3)2]
Osa esimerkin 3c mukaista tuotetta (3,63 g, 7,18 mmol) ja 10 % Pd/C:tä (0,5 g ) EtOH:ssa (75 ml) hydrattiin 10 Parr-ravistimessa (3 atm H2). Kun teoreettinen määrä vetyä oli kulunut, seos suodatettiin piimään lävitse ja vä-kevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin tuote (2,5 g). TLC, Rf = 0,3, silikageeli, MeOH/CH2Cl2 (1:9).
e) N-bentsyylioksikarbonyyli-L-valyyli-L-prolyyli- 15 L-valinaali 0 [Kaava Vic, R3A = 0CH2OC-, R4 = H, R2 = CH(CH3)2, R1 = CH(CH3)2]
Seosta, jossa oli p-tolueenisulfonihappoa (150 mg) 20 ja osa esimerkin 3c tuotetta (500 mg, 0,988 mmol) asetonissa (70 ml), sekoitettiin huoneen lämpötilassa 3 tuntia. Seos väkevöitiin tyhjössä ja jäännös liuotettiin EtOAc:iin. Tämä liuos pestiin 5-%:isella vesipitoisella NaHC03:lla ja suolaliuoksella, kuivattiin MgS04:lla, suoda-25 tettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin lasimainen tuote (410 mg). TLC, Rf = 0,60, silikageeli, CH2Cl2/MeOH (95:5).
f) [Kaava VIIc, R3A = 0CH-.OC-, R4 = H, R2 = CH(CH3)2,
II
R1 = CH(CH3)2 O
Esimerkin 3e mukaisella menetelmällä valmistettua 30 tuotetta (0,62 g, 1,5 mmol), Zn-pölyä (0,13 g), etyyli-2-bromi-2,2-difluoriasetaattia (0,336 g, 1,65 mmol) ja THF:a (9,0 ml) kuumennettiin palautuksella 0,5 tuntia. Lisättiin vielä Zn-pölyä (0,13 g) ja etyyli-2-bromi-2,2-difluoriasetaattia (0,33 g, 1,65 mmol) ja annettiin palautua vielä 1 35 tunti. Liuos jäähdytettiin huoneen lämpötilaan ja lisättiin etyyliasetaattia (70 ml). Saatu liuos pestiin 1 M
41 86859 KHS04:lla ja suolaliuoksella ja orgaaninen kerros otettiin talteen, kuivattiin Na2S04:lla, suodatettiin ja liuotin poistettiin alennetussa paineessa raakatuotteen saamiseksi, joka puhdistettiin flash-kromatografiällä silikagee-5 Iillä eluoimalla heksaani/etyyliasetaatilla (30:70), jolloin saatiin lopputuote (0,66 g) öljynä. TLC, Rf = 0,7, silikageeli, heksaani/etyyliasetaatti (30:70).
cQ [Kaava Vc, R3A = 0CH2OC-, R4 = H, R2 = CH(CH3)2, R1 = CH(CH3)2 , O Ra = CONHCH20] 10 Osa esimerkin 3f tuotetta (0,41 g, 0,74 mmol), bentsyyliamiinia (0,16 ml, 1,48 mmol) ja etanolia (5 ml) sekoitettiin 65 °C:ssa 5 tuntia. Saatu liuos jäähdytettiin huoneen lämpötilaan ja liuotin poistettiin alennetussa paineessa raakatuotteen saamiseksi. Tuote puhdistettiin 15 flash-kromatografialla, jolloin saatiin lopputuote (0,3 g) kirkkaana öljynä. TLC, Rf = 0,6, silikageeli, heksaani/-etyyliasetaatti (30:70).
h) [Kaava Ie, R3A = 0CH,OC-, R4 = H, R2 = CH(CH,)2, __ n R1 «= CH(CH3)2, 0 Ra = CONHR®, RB = CH20] 20 Esimerkin 3g tuotetta (0,30 g, 0,46 mmol), DMSO:a (4,0 ml) ja etikkahappoanhydridiä (4,0 ml) sekoitettiin yhdessä huoneen lämpötilassa typpiatmosfäärissä 24 tuntia. Lisättiin jäävettä (80 ml) ja saatua liuosta sekoitettiin 3 tuntia. Lisättiin etyyliasetaattia (100 ml) ja orgaani-25 nen kerros otettiin talteen ja pestiin NaHC03:n kyllästetyllä vesiliuoksella. Orgaaninen kerros otettiin talteen, kuivattiin Na2S04:lla, suodatettiin ja liuotin poistettiin alennetussa paineessa raakatuotteen (0,26 g) saamiseksi. Tuote puhdistettiin flash-kromatografialla silikageelillä, 30 jolloin saatiin lopputuote (0,2 g) valkoisena vaahtona. TLC, R{ = 0,5, silikageeli, etyyliasetaatti/heksaani (50:50).
Analyysi yhdisteelle C3206N4 H40F2 · ½ H20:
Laskettu: C 61,62 H 6,62 N 8,98 35 Saatu: C 61,88, 61,57 H 6,52, 6,46 N 8,64, 8,73 42 86859
Esimerkki 4 2- [ [ [3,3-difluori-l- (1-metyylietyyli )-2,4-diokso- 4-[ ( 2-fenyylietyyli )amino]butyyli]amino]karbonyy-li]-1-pyrrolidiinikarbonyylihappofenyylimetyylies-5 teri [Kaava Ib, R* = CONHR6, RB = CH2CH20, R3A = 0CH2OC-, R1 = CH(CH3)2] 0 a± [Kaava VIb, R1 = CH(CH3)2, R3 = 0CH2OC-] 0 10 Esimerkin 2c mukaisella menetelmällä saadun tuot teen (24 g, 60 mmol), p-tolueenisulfonihapon (2,4 g) ja asetonin (1 600 ml) liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 5 tuntia. Asetoni poistettiin vesi-imutyhjössä, jolloin jäljelle jäi öljymäinen jäännös. Se otettiin kloro-15 formiin ja kloroformiliuos pestiin kyllästetyllä NaHC03:lla ja sitten suolaliuoksella ja kuivattiin MgS04:lla. MgS04 suodatettiin pois ja suodos väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin tuote (17,67 g, 91 %:n saanto) meripihkan värisenä öljynä. TLC, Rf = 0,46, silikageeli, CHCl3/MeOH (95:5).
20 0 b| [Kaava Vllb, R1 = CH(CH3)2, R3A = 0CH2OC-] Seosta, jossa oli osa esimerkin 4a mukaisella menetelmällä saatua tuotetta (2,5 g, 7,75 mmol), etyyli-2-bro-mi-2,2-difluoriasetaattia (1,57 g, 7,75 mmol), aktivoitua 25 sinkkiä (0,505 g, 7,75 mmol) ja kuivaa THF:a (125 ml), kuumennettiin lievällä palautuksella typpiatmosfäärissä 1 tunti. Sitten seoksen annettiin jäähtyä juuri palautus-jäähdytyslämpötilan alapuolelle ja lisättiin lisää etyyli-2-bromi-2,2-difluoriasetaattia (1,57 g, 7,75 mmol) ja ak-30 tivoitua sinkkiä (0,505 g, 7,75 mmol). Reaktioseosta kuumennettiin uudelleen lievällä palautuksella ja pidettiin palautuvana 3 tuntia. Seos jäähdytettiin ja lisättiin etyyliasetaattia (400 ml). Etyyliasetaattiliuos pestiin 1 M KHS04-liuoksella ja suolaliuoksella ja kuivattiin 35 MgS04:lla. MgS04 suodatettiin pois ja suodos väkevöitiin vesi-imutyhjössä raakatuotteen (3,7 g) saamiseksi. Se puh- « 86859 distettiin flash-kromatografiällä (EtOAc/heksaani, 1:1, silika), jolloin saatiin 1,53 g (45 %:n saanto) haluttua tuotetta vaaleankeltaisena vahamaisena aineena. TLC, Rf = 0,45, silikageeli, petrolieetteri/EtOAc (33:66).
5 c) [Kaava VHIb, R3A = 0CH,OC-, R1 = CH(CH.),,
Rb = CH2CH20] o
Seosta, jossa oli osa esimerkin 4b tuotetta (0,5 g, 1,09 mmol), 2-fenyyliamiinia (0,26 g, 2,18 mmol) ja absoluuttista etanolia (20 ml), kuumennettiin lievällä palau-10 tuksella samalla sekoittaen typpiatmosfäärissä 4 tuntia. Sitten seoksen annettiin jäähtyä huoneen lämpötilaan ja sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa. Seos väkevöi-tiin tyhjössä ja saatu jäännös liuotettiin CH2Cl2:iin. CH2Cl2-liuos pestiin 1 N HCl:lla ja suolaliuoksella, kui-15 vattiin MgSQ,:11a, suodatettiin ja suodos väkevöitiin tyhjössä, jolloin puhdistamisen jälkeen flash-kromatografiällä [CH3Cl/Me0H (98:2)] saatiin tuote (0,35 g, 60 %) valkoisena kiinteänä aineena. TLC, Rf = 0,2, silikageeli, CHCI3/CH3OH (95:5).
20 cO [Kaava Ib, R* = C0NHR8, RB = CH2CH20, R3A = 0CH2OC-, R1 = CH(CH3)2]
O
Dess-Martin-perjodinaanin (2,42 g, 5,72 mmmol) ja kuivan CH2Cl2:n (5 ml) liuos lisättiin esimerkin 4c tuot-25 teen (0,3 g, 0,57 mmol) ja kuivan CH2Cl2:n (20 ml) sekoitettuun liuokseen huoneen lämpötilassa typpiatmosfäärissä. Lisättiin TFA:a (0,65 g, 5,72 mmol) ja saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli. Etyyliasetaattia (25 ml) lisättiin reaktioseokseen ja seos uutettiin kyl-30 lästetyllä Na2S203:lla, kyllästetyllä NaHC03:lla ja suola liuoksella. Kuivattiin MgS04:lla, suodatettiin ja suodos väkevöitiin tyhjössä, jolloin puhdistamisen jälkeen flash-kromatografiällä [Me0H/CHCl3 (3:97)] saatiin tuote (0,1 g, 33 %). TLC, Rf = 0,74, silikageeli, CHC13/CH30H 35 (95:5).
44 86859
Analyysi yhdisteelle C2eH33F2N306 · 1,5 H20:
Laskettu: C 60,42 H 6,50 N 7,55
Saatu: C 60,46 H 6,00 N 7,54
Esimerkki 5 5 2-[[[3,3-difluori-l-(1-metyylietyyli)-2,4-diokso- 4-[(fenyylimetyyli)amino]butyyli]amino]karbonyy-li]-1-pyrrolidiinikarboksyylihappofenyylimetyyli-esteri [Kaava Ib, RÄ = CONHR®, RB = CH20, R1 = CH(CH3)2, 10 R3A = 0CH?OC- ] 8 ° Ϊ a2 [Kaava VIIIb, R3A = 0CH2OC-, R1 = CH(CH3)2,
Rb = CH20 Käyttäen esimerkin 4c mukaista menetelmää saatet-15 tiin esimerkin 4b mukaisella menetelmällä valmistettu tuote reagoimaan bentsyyliamiinin kanssa raakatuotteen saamiseksi, joka puhdistettiin flash-kromatografiällä silika-geelillä eluoiden MeOH/CHCl3:lla (2:98), jolloin saatiin otsikoitu tuote (53 %). TLC, Rf = 0,66, silikageeli, 20 MeOH/CHC13 (5:95).
bl [Kaava Ib, RA = CONHR®, R® = CH20, R1 = CH(CH3)2, R3A = 0CH7OC-]
II
O
Käyttäen esimerkin 4d menetelmää hapetettiin esi-25 merkin 5a tuote, jolloin puhdistamisen jälkeen flash-kro-matografiällä [MeOH/CHCl3 (2:98)] saatiin otsikoitu tuote. TLC, Rf = 0,68, silikageeli, MeOH/CHCl3 (5:95).
Analyysi yhdisteelle C27H31F2N305:
Laskettu: C 62,90 H 6,06 N 8,15 30 Saatu: C 62,71 H 6,15 N 7,98
Esimerkki 6 2-[[[3,3-difluori-1-(metyylietyyli)-2,4-diokso-4 - [ [ (1-trisyklo- [3.3.1. l3'7]dekyyli )metyyli]amino] -butyyli]amino]karbonyyli]-1-pyrrolidiinikarboksyy-35 lihappofenyylimetyyliesteri 45 86859 [Kaava Ib, R* = CONHR®, RB = CH2-adamantyyli, R1 = CH(CH3)2/ R3A = 0CH2OC~] 0 a± [Kaava XXVIb, R3A = 0CH2OC-, R1 = CH(CH3)2] 5 0
Esimerkin 4b mukaisella menetelmällä valmistetun tuotteen (3,0 g, 6,57 mmol) ja kuivan CH2Cl2:n (10 ml) liuos lisättiin Dess-Martin-perjodinaanin (13,92 g, 32,85 mmol) ja kuivan CH2Cl2:n (140 ml) sekoitettuun seokseen 10 huoneen lämpötilassa typpiatmosfäärissä. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli. Reaktioseokseen lisättiin etyyliasetaattia (200 ml) ja saatu seos uutettiin kyllästetyllä Na2S203:lla, kyllästetyllä NaHC03:lla ja suolaliuoksella. Kuivattiin sitten MgS04:lla, suodatettiin ja 15 suodos väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin tuote (2,96 g, 98 %:n saanto). TLC, Rf = 0,8, silikageeli, CHC13/CH30H (95:5).
b) [Kaava XXVIIIb, R3A = 0CH,OC-, R1 = CH(CH,)?]
— H
0 20 IN natriumhydroksidiliuos (0,55 g, 0,55 mmol) li sättiin sekoitettuun liuokseen, jossa oli osa esimerkin 6a tuotetta (1,0 g, 2,19 mmol) ja metanolia (3 ml) huoneen lämpötilassa. Saatua liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 3 tuntia, sitten käsiteltiin vedellä (20 ml) ja saa-25 tu liuos uutettiin EtOAc:lla. Vesikerros tehtiin happamaksi (pH 2) 1 N HCl:lla ja sitten uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros pestiin suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). MgS04 suodatettiin pois ja suodos väkevöitiin tyhjössä öljymäiseksi jäännökseksi, joka kuivattiin 30 suurtyhjössä, jolloin saatiin tuote (0,17 g, 91 %). TLC, Rf = 0,15, silikageeli, CHCl3/Me0H/H0Ac (95:5:0,5).
c) [Kaava Ib, RÄ = CONHR®, RB = CH2-adamantyyli, R3A = 0CH2OC-, R1 = CH(CH3)2]
K
o 35 WSCDIra (0,123 g, 0,645 mmol) lisättiin sekoitet tuun liuokseen, jossa oli esimerkin 6b mukaisella menetel- 46 8 6 8 5 9 mällä valmistettua tuotetta (0,25 g, 0,586 mmol), 1-ada-mantyylimetyyliamiinia (0,586 mmol), HOBT:a (87 g, 0,645 mmol) ja kuivaa THF:a (10 ml) typpiatmosfäärissä huoneen lämpötilassa. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön 5 yli. THF poistettiin tyhjössä, jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin ja etyyliasetaattiliuos pestiin peräkkäin 1 N HClrlla, kyllästetyllä NaHC03:lla ja suolaliuoksella. Orgaaninen liuos kuivattiin MgS04:lla, suodatettiin ja suodos väkevöitiin tyhjössä raakatuotteen (0,49 g) saamiseksi.
10 Puhdistamalla flash-kromatografiällä (CHC13) saatiin lopputuote (0,21 g, 63 %). TLC, Rf = 0,52, silikageeli, CHCI3/CH3OH (99:1).
Analyysi yhdisteelle C31H41F2H305 · 0,25 H20:
Laskettu: C 64,39 H 7,23 N 7,26 15 Saatu: C 64,20 H 7,22 N 7,20
Esimerkki 7 2-[[[3,3-difluori-1-(1-metyylietyyli)-4-[[4-(l- metyylietyyli)fenyyli]amino]-2,4-dioksobutyyli]- aminojkarbonyyli]-1-pyrrolidiinikarboksyylihappo- 20 fenyylimetyyliesteri [Kaava Ib, R* = CONHR®, RB = 4-[CH( CH3 )2]0, R3A = 0CH2OC-, R1 = CH(CH3)2]
II
O
Käyttäen esimerkin 6c mukaista menetelmää saatet-25 tiin esimerkin 6b mukaisesti valmistettu tuote reagoimaan 4-isopropyylianiliinin kanssa, jolloin puhdistamisen jälkeen flash-kromatografiällä [MeOH/CHCl3 (2:98)] saatiin tuote (48 %). TLC, Rf = 0,48, silikageeli, MeOH/CHCl3 (2:98).
' : 30 Analyysi yhdisteelle C29H35F2N305 · 0,25 H20:
Laskettu: C 63,54 H 6,53 N 7,66
Saatu: C 63,41 H 6,49 N 7,57
Esimerkki 8 N-[4-metoksikarbonyyli]bentsoyyli]-B-alanyyli-N-3 5 [3,3-difluori-l-(1-metyylietyyli)-2,4-diokso-4- [(2-fenyylietyy1i)amino]butyyli]-L-prolilnlamldl 47 86859 [Kaava Ib, R* = CONHR8, RB = CH2CH20, R1 = CH(CH3)2,
0 0 O
„ II II II
R3A = 4 - [ ( CHjO-C )0] CNH( CH2 ) 2C- ] a± [Kaava Xlb, RB = CH2CH20, Rc = H, R1 = CH(CH3)2] 5 Seos, jossa oli esimerkin 4c mukaisella menetelmäl lä valmistettua tuotetta, etanolia (100 ml) ja 10 % Pd/C:tä (0,2 g), pantiin vetyatmosfääriin (1 atm) 2 tunniksi. Reaktioseos suodatettiin piimään lävitse pesten etanolilla. Suodos väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin 10 tuote (0,64 g, 96 %). TLC, Rf = 0,05, silikageeli, CHClj/MeOH (95:5).
b) [Kaava VHIb, R3A = 0CH?OC-NH( CH, ),C0-, — Il
Rb = CH2CH20, R1 = CH(CH3)2] 0 Käyttäen esimerkin 6c menetelmää saatettiin esimer-15 kin 8a tuote reagoimaan N-karbobentseenioksi-8-alaniinin kanssa (CBZ-B-alaniini), jolloin puhdistamisen jälkeen flash-kromatografialla [Me0H/CHCl3 (3:97)] saatiin tuote (68,9 %). TLC, Rf = 0,40, silikageeli, CHCl3/MeOH (95:5).
c) [Kaava VHIb, R3A = H,N(CH, ),-C-, — Il
20 Rb = CH2CH20, R1 = CH(CH3)2] O
Seosta, jossa oli esimerkin 8b tuotetta, etanolia (25 ml) ja 10 % Pd/C:tä (0,1 g), sekoitettiin huoneen lämpötilassa vetyatmosfäärissä noin 1,013 x 105 Pascalia (15 naulaa/neliötuuma) yön yli. Seos suodatettiin piimään lä-25 vitse ja piimää pestiin etanolilla. Yhdistetyt suodokset väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin tuote (0,32 g, 82 %). m/e = 469; 1H-NMR (DMS0-d6): 0,84 (m, 6H), 1,98 - 2,5 (m, 9H), 2,74 (m, 4H), 3,3 (m, 4H), 3,3 (m, 4H), 4,2 (m, 2H), 6,0 (m, 1H), 7,23 (m, 5H), 7,5 (m, 1H) ja 8,74 30 (m, 1H).
0 0 O
Il II » d) [Kaava VHIb, R3A = [4-( CH30C)0]CNH( CH2)2C-,
Rb = CH2CH20, R1 = CH(CH3)2] WSCDl:a (0,114 g, 0,59 mmol) lisättiin sekoitettuun 35 liuokseen, jossa oli 1,4-bentseenidikarboksyylihappo-mono- metyyliesteriä (valmistettu esimerkin 11a mukaisesti) 48 8 6 8 5 9 (97,4 mg, 0,54 mmol), esimerkin 8c tuotetta (0,254 g, 0,54 mmol), H0BT:a (0,146 g, 1,08 mmol) ja kuivaa THF:a (20 ml) 0 °C:ssa typpiatmosfäärissä. Reaktioseosta sekoitettiin 0 °C:ssa 1 tunti; sitten sen annettiin tulla huoneen lämpö-5 tilaan ja sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli. THF poistettiin tyhjössä. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin. Liuos pestiin peräkkäin 1 N HCl:lla, kyllästetyllä NaHC03:lla ja suolaliuoksella ja kuivattiin sitten MgS04:lla. Suodatettiin ja suodos väkevöitiin tyhjössä, 10 jolloin puhdistamisen jälkeen flash-kromatografiällä [CHCl3/MeOH (97:3)] saatiin tuote (0,219 g, 64 %). TLC, Rf = 0,42, silikageeli, CHC13/CH30H (95:5).
e| [Kaava Ib, RA = C0NHRB, RB = CH2CH20,
0 0 O
, Il II II
15 R3A = [ 4 - ( CH30C )0] CNH( CH2 )2C- ] Käyttäen esimerkin 6a menetelmää, mutta käyttäen 10 ekvivalenttia Dess-Martin-perjodinaania, hapetettiin esimerkin 8d tuote, jolloin puhdistamisen jälkeen flash-kro-matografiällä [CHCl3/Me0H (97:3)] saatiin tuote (77 %).
20 TLC, Rf = 0,46, silikageeli, CHCl3/MeOH (95:5).
Analyysi yhdisteelle C32H38F2n407 · 2 H20:
Laskettu: C 57,82 H 6,30 N 8,42
Saatu: C 57,90 H 5,86 N 8,36
Esimerkki 9 25 N-(4-karboksibentsoyyli)-3-alanyyli-N-[3,3-di- fluori-l-(1-metyylietyyli)-2,4-diokso-4-[(2-fe-nyylietyyli)amino]butyyli]-L-proliiniamidi [Kaava Ib, R* * C0NHR®, RB = CH2CH20,
0 0 O
8 II # H
30 R3A = [4-(CH3OC)0]CNH(CH2)2C-, R1 = CH(CH3)2]
Liuosta, jossa oli esimerkin 8e tuotetta (0,105 g, 0,167 mmol), CH30H:a (1,0 ml), vettä (1,0 ml) ja 1 N NaOH:a (0,33 ml), sekoitettiin huoneen lämpötilassa 3 tuntia. Lisättiin vettä (3,0 ml) ja seos uutettiin Et0Ac:lla. Vesi-35 pitoinen kerros saatettiin pH-arvoon 2,0 1 N HCl:lla ja uutettiin EtOAc:lla. EtOAc-kerros kuivattiin (MgS04), suo- 49 86 8 59 elätettiin ja väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin tuote (0,080 g, 78,8 %). TLC, Rf = 0,33, silikageeli, MeOH/CHCl3-/HOAc (95:5:0,5).
Analyysi yhdisteelle C30H34N407F2 · 0,75 H20: 5 Laskettu: C 59,27 H 6,02 N 8,91 Saatu: C 59,18 H 5,96 N 8,63
Esimerkki 10 N-[(fenyylimetoksi)karbonyyli]-L-valyyli-N-[3,3-difluori-1-(1-metyylietyyli)-2,4-diokso-4-[(fe-10 nyylimetyyli)amino]butyylij-L-proliiniamidi 0 [Kaava Ie, RA = CONHR8, RB = CH20, R3A = 0CH2OC-, R4 = H, R2 = CH(CH3)2, R1 = CH(CH3)2] a) N-bentsyylioksikarbonyyli-L-valyyli-L-prolii- 15 ni-t-butyyliesteri N-bentsyylioksikarbonyyli-L-valiinin (56,25 g, 0,244 mol) ja H0BT:n (60,67 g, 0,45 mol) liuos DMF:ssa (565 ml) jäähdytettiin 5 °C:seen. Lisättiin yhtenä eränä DCC:a (50,89 g, 0,247 mol). Seosta sekoitettiin vielä 15 20 minuuttia 5 °C:ssa ja sitten lisättiin L-proliini-t-butyy- liesteriä (38,36 g, 0,224 mol). Seosta sekoitettiin edelleen 2 tuntia 5 °C:ssa ja sitten 48 tuntia huoneen lämpötilassa. Seos suodatettiin ja väkevöitiin tyhjössä. Öljymäi-nen jäännös liuotettiin EtOAc:iin (1 litra) ja liuos pes-25 tiin peräkkäin 20-%:isella vesipitoisella sitruunahapolla, kyllästetyllä vesipitoisella NaHC03:lla ja suolaliuoksella. Orgaaninen faasi kuivattiin Na2S04:lla, suodatettiin ja väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin tuote (92 g) valkoisena vaahtona. TLC, Rf = 0,9, silikageeli, CHCl3/EtOAc 30 (85:15).
b) N-bentsyylioksikarbonyyli-L-valyyli-L-proliini [Kaava XVIIC, R3A = 0-CH2-O-C-, R4 = H, R2 = CH(CH3)2] 0
Trifluorietikkahappoa (70 ml, 0,90 mol) lisättiin 35 liuokseen, jossa oli osa esimerkin 10a tuotetta (16,5 g, 39,2 mmol) CH2Cl2:ssa (100 ml), huoneen lämpötilassa ja 50 86859 saatua seosta sekoitettiin 3 tuntia. Liuos laimennettiin tolueenilla (100 ml) ja väkevöitiin tyhjössä. Jäännös otettiin tolueeniin ja väkevöitiin uudelleen viisi kertaa, jolloin saatiin tuote (12,85 g) nahanvärisenä kiinteänä 5 aineena. TLC, Rf = 0,45, silikageeli, MeOH/CH2Cl2 (5:95).
c) L-valinaali-dietyyliasetaali [Kaava XVIHa, R1 = CH(CH3)2]
Seosta, jossa oli esimerkin le tuotetta (147,8 g, 0,478 mol) ja 10 % Pd/C:tä (10 g) EtOAc:ssa (1 500 ml), 10 sekoitettiin vetyatmosfäärissä (1 atm), kunnes 2 500 ml H2:ä oli kulunut. Kahdesti tänä aikana reaktio keskeytettiin ja lisättiin 10 % Pd/C:tä (10 g). Sitten reaktioseos suodatettiin piimaakerroksen lävitse. Lisättiin 10 % Pd/C:tä (10 g) ja reaktioseosta sekoitettiin, kunnes 10,92 15 litraa H2:ä oli kulunut. Reaktioseos suodatettiin piimään lävitse ja suodos väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin tuote (78,8 g) vaaleankeltaisena öljynä. [a)D25 = +7,8°.
d) N-bentsyylioksikarbonyyli-L-valyyli-L-prolyyli- L-valinaali-dietyyliasetaali 20 [Kaava XVc, R3A = 0CH2O-C-, R4 = H, R2 = CH(CH3)2, R1 = CH(CH3)2] 0 H0BT:a (4,21 g, 31,1 mmol) lisättiin liuokseen, jossa oli esimerkin 10b tuotetta (5,17 g, 15,55 mmol) ja esimerkin 10c tuotetta (2,73 g, 15,55 mmol) kuivassa 25 THF:ssa (75 ml) 0 °C:ssa typpiatmosfäärissä. Tätä liuosta sekoitettiin 15 minuuttia ja lisättiin 1-(3-dimetyyliami-nopropyyli)-3-etyylikarbodi-imidihydrokloridia (3,28 g, 17,1 mmol) ja sen jälkeen N-metyylimorfoliinia (2,36 g, 23,3 mmol). Seosta sekoitettiin 1 tunti 0 °C:ssa ja 3 päi-30 vää huoneen lämpötilassa. Reaktioseos väkevöitiin tyhjössä ja jäännös jaettiin Et0Ac:n ja veden kesken. Orgaaninen kerros eristettiin ja sen jälkeen pestiin peräkkäin vesipitoisella 1 N HClrlla, suolaliuoksella, kyllästetyllä vesipitoisella NaHCOjilla ja suolaliuoksella. Kuivattiin sit-35 ten MgS04:lla, suodatettiin ja väkevöitiin viskoosiseksi öljyksi. Tuote puhdistettiin flash-kromatografiällä sili- 86859 51 kageelillä eluoimalla CH2Cl2/Et20/Me0H: 11a (75:25:0,5), jolloin saatiin väritön öljy (4,4 g). TLC, Rf = 0,55, silika-geeli, CH2Cl2/Et20/Me0H (75:25:1).
e) L-valyyli-L-prolyyli-L-valinaalidietyyliasetaali 5 [Kaava Ville, R4 = H, R2 = CH(CH3)2, R1 = CH(CH3)2]
Seos, jossa oli esimerkin lOd tuotetta (43,63 g, 7,18 mmol), 10 % PdC:tä (0,5 g) ja EtOH:a (75 ml), hydrat-tiin käyttäen Parr-ravistinta (3 atm H2). Kun teoreettinen määrä H2:ä oli kulunut, seos poistettiin Parr-ravistimesta, 10 suodatettiin piimään lävitse ja väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin tuote (2,5 g). TLC, Rf = 0,3, silikageeli, MeOH/CH2Cl2 (1:9).
f) N-bentsyylioksikarbonyyli-L-valyyli-L-prolyyli- L-valinaali 15 Seosta, jossa oli p-tolueenisulfonihappoa (150 mg) ja osa esimerkin lOd tuotetta (500 mg, 0,988 mmol) asetonissa (70 ml), sekoitettiin huoneen lämpötilassa 3 tuntia. Seos väkevöitiin tyhjössä ja jäännös liuotettiin Et0Ac:iin. EtOAc-liuos pestiin 5-%:isella vesipitoisella 20 NaHC03:lla ja suolaliuoksella, kuivattiin MgS04:11a, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin tuote saatiin lasimaisena aineena (0,410 g). TLC, Rf = 0,60, silikageeli, CH2Cl2/MeOH (95:5).
gi [Kaava VIIc, R3A = 0CH2O-C-, R4 = H, R2 = CH(CH3)2, 25 R1 = CH(CH3)2] O
Esimerkin lOf tuotetta (0,62 g, 1,5 mmol), Zn-pölyä (0,13 g), etyyli-2-bromi-2,2-difluoriasetaattia (0,336 g, 1,65 mmol) ja THF:a (9,0 ml) kuumennettiin palautusjäähdyttäen 30 minuuttia typpiatmosfäärissä. Lisättiin lisää 30 Zn-pölyä (0,13 g) ja etyyli-2-bromi-2,2-difluoriasetaattia (0,33 g, 1,65 mmol) ja seoksen annettiin palautua vielä 1 tunti. Liuos jäähdytettiin huoneen lämpötilaan ja lisättiin etyyliasetaattia (70 ml). Saatu seos pestiin 1 M KHS04:lla ja suolaliuoksella ja orgaaninen kerros otettiin 35 talteen. Kuivattiin Na2S04:lla, suodatettiin ja liuotin poistettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin raaka- 52 86859 tuote. Tuote puhdistettiin flash-kromatografiällä silikageelillä eluoiden heksaani/etyyliasetaatilla (30:70), jolloin saatiin lopputuote (0,66 g) öljynä. TLC, Rf = 0,7, silikageeli, heksaani/etyyliasetaatti (30:70).
5 h) [Kaava Vc, R3A = 0CH2O-C-, R4 = H, R2 = CH(CH,)2, ~ il R1 = CH(CH3)2, 0 Ra = CONHCH20]
Osa esimerkin lOg tuotetta (0,41 g, 0,74 mmol), bentsyyliamiinia (0,16 ml, 1,48 mmol) ja etanolia (5 ml) sekoitettiin 65 °C:ssa 5 tuntia. Saatu liuos jäähdytettiin 10 huoneen lämpötilaan ja liuotin poistettiin alennetussa paineessa raakatuotteen saamiseksi. Tuote puhdistettiin flash-kromatografiällä silikageelillä, jolloin saatiin lopputuote (0,3 g). TLC, Rf = 0,6, silikageeli, heksaani/-etyyliasetaatti (30:70).
15 il [Kaava Ie, R3A = 0CH2O-C-, R4 = H, R2 = CH(CH3)2, R1 = CH(CH3)2, 0 Ra = CONHCH20]
Esimerkin lOh tuotetta (0,30 g, 0,46 mmol), DMS0:a (4,0 ml) ja etikkahappoanhydridiä (4,0 ml) sekoitettiin huoneen lämpötilassa typpiatmosfäärissä 24 tuntia. Lisät-20 tiin jäävettä (80 ml) ja saatua liuosta sekoitettiin 3 tuntia. Lisättiin etyyliasetaattia (100 ml) ja orgaaninen kerros otettiin talteen ja pestiin NaHC03:n kyllästetyllä vesiliuoksella. Orgaaninen kerros otettiin talteen, kuivattiin Na2S04:lla, suodatettiin ja liuotin poistettiin 25 alennetussa paineessa raakatuotteen (0,26 g) saamiseksi.
Tuote puhdistettiin flash-kromatografiällä silikageelillä, jolloin saatiin lopputuote (0,2 g) valkoisena vaahtona. TLC, Rf = 0,5, silikageeli, etyyliasetaatti/heksaani (50:50).
30 Analyysi yhdisteelle C3206N4H40F2 · ½ H20:
Laskettu: C 61,62 H 6,62 N 8,98
Saatu: C 61,72 H 6,49 N 8,68
Esimerkki 11 N-[4-(metoksikarbonyyli)bentsoyyli]-L-valyyli-N-35 [3,3-difluori-l-(1-metyylietyyli)-2,4-diokso-4- [(2-fenyylietyyli)amino]butyyli]-L-prolliniamidi 53 86859 [Kaava Ie, R* = -CONHR8, RB = CH2CH20, R1 = CH(CH3)2, R2 = CH(CH3)2, R4 = H, R3A = [4 - (CH3-OC )0] C- ]
Il II O O
a) 4-metoksikarbonyylibentseenikarboksyylihappo-5 tai 1,4-bentseenidikarboksyylihappomonometyyliesteri Väkevöityä rikkihappoa (277,5 ml, 5,2 mol) lisättiin pisaroittain ½ tunnin aikana kromi(VI)oksidin (299,25 g, 2,99 mol) ja veden (925 ml) sekoitettuun liuokseen 10 0 °C:ssa. Saatu liuos lisättiin pisaroittain 1 tunnin aika na metyyli-4-(hydroksimetyyli)bentsoaatin (92,5 g, 0,564 mol) ja asetonin (4,6 1) sekoitettuun liuokseen 0 °C:ssa. Reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan ja sekoitettiin yön yli. Päällä oleva neste dekantoitiin pois 15 ennen kuin musta tervamainen jäännös uutettiin asetonilla. Päällä ollut dekantoitu neste ja asetoniuutteet yhdistettiin ja väkevöitiin tyhjössä tummanruskeaksi jäännökseksi, joka trituroitiin kylmän veden (4 1) kanssa. Muodostunut sakka otettiin talteen, pestiin kolmesti vedellä (1 1) ja 20 kuivattiin, jolloin saatiin 94,6 g (94 %) otsikoitua yhdistettä valkoisina kiteinä; sp. 218 - 221 °C.
b| [Kaava XVc, R1 = CH(CH3)2, R3 = CH(CH3)2, R4 = H, R3A = [ 4 - (CH30C ) 0 ] C - ]
Il II
o o 25 Käyttäen esimerkin 6c menetelmää saatettiin esimer kin 11a mukaisesti valmistettu tuote reagoimaan esimerkin 3d mukaisesti valmistetun tuotteen kanssa, jolloin saatiin lopputuote (83 %). TLC, R{ = 0,45, silikageeli, CHCl3/MeOH (95:5).
30 c_) [Kaava Vic, R1 = CH(CH3)2, R3 = CH(CH3)2, R4 = H, R3A = [ 4 - ( CH,0C )0] C- ]
Il II
o o Käyttäen esimerkin 4a menetelmää esimerkin 11b menetelmän mukaisesti valmistettu tuote muutettiin loppu-35 tuotteeksi (94 %). TLC, Rf = 0,29, silikageeli, CHCl3/Me0H (95:5 ).
54 86859 dj. [Kaava Vile, R1 = CH(CH3)2, R2 = CH(CH3)2, R4 = H, R3A = CH3OC-]
II
0 Käyttäen esimerkin 4b menetelmää esimerkin 11c me-5 netelmän mukaisesti valmistettu tuote muutettiin loppu tuotteeksi (23 %). TLC, Rf = 0,58, silikageeli, CHCl3/MeOH (95:5).
ej [Kaava Vc, RA 0 -CONHR8, RB = CH2CH20, R1 = CH(CH3)2, R2 = CH(CH3)2, R4 = H, 10 R3A = [ 4 - ( CH30C )0] C- ]
il II O O
Käyttäen esimerkin 4c menetelmää saatettiin esimerkin lld tuote reagoimaan 2-fenetyyliamiinin kanssa, jolloin saatiin lopputuote (64 %). TLC, Rf = 0,52, silikagee-15 li, CHCl3/MeOH (95:5).
12 [Kaava Ie, RA 0 -CONHR8, R8 = CH2CH20, R1 = CH(CH3)2, R2 = CH(CH3)2, R4 = H, R3A = [4-(CH3OC)0]C-]
K H
0 o 20 Käyttäen esimerkin 4d menetelmää esimerkin lie me netelmän mukaisesti valmistettu tuote muutettiin lopputuotteeksi (66 %). TLC, Rf = 0,6, silikageeli, CHCl3/MeOH (95:5) .
Analyysi yhdisteelle C34H42F2N40 · h H20: 25 Laskettu: C 61,34 H 6,51 N 8,41 Saatu: C 61,48 H 6,39 N 8,06
Esimerkki 12 N- ( 4-karboksibentsoyyli )-L-valyyli-N- [3,3-difluori- 1- (1-metyylietyyli ) -2,4-diokso-4- [ ( 2-fenyylietyy-30 li)amino]butyyli]-L-proliiniamidi [Kaava Ie, R3A = [4-(CH3OC)0]C-] , RA = -CONHR8, i| li R8 = CH2CH20 , 0 0 R1 = CH(CH3)2, R2 = CH(CH3)2, R4 = H]
Vettä (1,5 ml) lisättiin esimerkin llf mukaisella 35 menetelmällä valmistetun tuotteen (0,2 g, 0,3 mmol) ja CH3OH:n (2,0 ml) sekoitettuun liuokseen huoneen lämpötilas- 55 86859 sa. Lisättiin 1 N NaOH:n (0,68 ml, 0,68 mmol) liuos ja saatua liuosta sekoitettiin 5 tuntia huoneen lämpötilassa. Lisättiin vettä (25 ml) ja vesipitoinen liuos uutettiin EtOAcrlla. Vesipitoinen kerros tehtiin happamaksi 1 N 5 HClrlla pH-arvoon 2 ja liuos uutettiin kahdesti EtOAcrlla. EtOAc-uutteet yhdistettiin ja pestiin 1 N HClrlla ja suolaliuoksella, kuivattiin MgS04:lla, suodatettiin ja väke-vöitiin tyhjössä, jolloin saatiin tuote (0,141 g, 73 %). TLC, Rf = 0,52, silikageeli, CHCl3/MeOH/HOAc (95:5,0:0,5). 10 Analyysi yhdisteelle C33H40F2N407 · H20:
Laskettu: C 59,99 H 6,40 N 8,48
Saatu: C 60,09 H 6,29 N 8,13
Esimerkki 13 2-[[[3,3-difluori-5-metyyli-l-(1-metyylietyyli)- 15 2-oksoheksyyli]amino]karbonyyli]-1-pyrrolidiini- karboksyylihappofenyylimetyyliesteri [Kaava Ib, R* = CH2CH(CH3)2, R1 = CH(CH3)2, R3A = 0CH2OC-] il 0 20 a_) [Kaava XXV, R* = CH2CH(CH3)2, Rx = CH3] 4-metyyli-2-oksopentaanihapon natriumsuolan (24,81 g, 0,163 mol) sekoitettuun liuokseen DMF/H20:ssa (3:1, 160 ml) lisättiin metyylijodidia (34,72 g, 0,245 mol). Reak-tioseosta sekoitettiin 72 tuntia ja lisättiin vettä (800 25 ml). Vesipitoinen liuos uutettiin Et20:lla. Yhdistetyt uutteet pestiin vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja väkevöitiin tyhjössä raakatuot-teen saamiseksi. Tuote puhdistettiin tyhjötislauksella (vesi-imu), jolloin saatiin vaaleankeltainen neste (19,95 30 g); kp. 58 - 59 °C. 1H-NMR (CDC13): 0,98 [d, (J = 6,5), 6H], 2,19 (m, 1H), 2,71 [d, (J = 6,4), 2H] ja 3,85 (s, 3H). b) [Kaava XXIV, RA = CH2CH(CH3)2, Rx = CH3] Dietyyliaminorikkitrifluoridia (33,79 g, 0210 mol) lisättiin esimerkin 13a tuotteen (19,95 g, 0,139 mol) 35 jäähdytettyyn (0 °C) liuokseen CH2Cl2:ssa (125 ml). Reaktio-seoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan ja sekoitet- 56 86859 tiin 72 tuntia. Reaktioseos kaadettiin varovaisesti jääve-teen (1 1), neutraloitiin kiinteällä NaHC03:lla ja uutettiin CH2Cl2:lla. Yhdistetyt uutteet pestiin vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin (MgS04), suodatettiin ja väkevöi-5 tiin tyhjössä raakatuotteen saamiseksi. Tuote puhdistettiin tyhjötislauksella (vesi-imu), jolloin saatiin lopputuote (16,93 g) kirkkaana nesteenä; kp. 39 - 40 °C. ^-NMR (CDC13): 0,99 [d, (J = 6,3), 6H], 1,97 (m, 3H) ja 3,87 (s, 3H).
10 [Kaava XX, RA = CH2CH(CH3)2]
Di-isobutyylialuminiumhydridiä (1 M liuos heksaa-nissa, 7,2 ml, 7,2 mmol) lisättiin hitaasti sekoitettuun, jäähdytettyyn (-78 °C) liuokseen, jossa oli osa esimerkin 13b tuotetta (1,0 g, 6,0 mmol) kuivassa Et20:ssa (25 ml) 15 kuivassa typpiatmosfäärissä. Reaktioseosta sekoitettiin 2 tuntia -78 °C:ssa ja lisättiin 1 M vesipitoista H2S04:a (35 ml). Saatua seosta sekoitettiin 10 minuuttia, kerrokset erotettiin ja vesipitoinen kerros uutettiin Et20:lla. Yhdistetyt uutteet pestiin kyllästetyllä vesipitoisella 20 NaHC03:lla ja suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja väkevöitiin tyhjössä raakatuotteen saamiseksi kirkkaana öljynä (1,03 g), jota käytettiin puhdistamatta edelleen. 1H-NMR (CDC13): 1,0 [d, J = 6,4), 6H] , 1,85 (m, 3H), 2,72 [d, (J = 10,45), 1H], 3,51 (s, 3H) ja 4,50 (m, 25 1H).
d| [Kaava XXI, R1 = CH(CH3)2, R* = CH2CH(CH3)2] Kaliumkarbonaattia (1,5 g, 0,011 mol) lisättiin sekoitettuun seokseen, jossa oli nitroisobutaania (0,87 g, 0,0085 mol) ja esimerkin 13c tuotetta (1,85 g, 0,011 mol), 30 ja reaktioseosta sekoitettiin yön yli. Lisättiin vettä (10 ml) ja seos tehtiin happamaksi 1 N vesipitoisella HClrlla. Seos uutettiin Et20:lla ja yhdistetyt uutteet pestiin vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin ( Na2S04), suodatettiin ja väkevöitiin raakatuotteen saamiseksi, joka puhdistet-35 tiin flash-kromatografiällä silikageelillä käyttäen 57 86859 CH2Cl2:a eluenttina, jolloin saatiin tuote (1,2 g). TLC,
Rf = 0,6, silikageeli, CH2C12.
[Kaava XXII, R1 = CH(CH3)2, RA = CH2CH(CH3)2] Esimerkin 13d tuotteen (0,72 g, 3,44 mmol) liuos 5 kuivassa Et20:ssa (5 ml) lisättiin pisaroittain sekoitettuun suspensioon, jossa oli LiAlH4:a (0,39 g, 10,3 mmol) kuivassa Et20:ssa (10 ml) kuivassa typpiatmosfäärissä. Reaktioseosta sekoitettiin 1 tunti huoneen lämpötilassa ja lisättiin varovasti vettä (1 ml) ja sen jälkeen 20-%:ista 10 vesipitoista natriumkaliumtartraattia (20 ml). Seos uutettiin Et20:lla. Yhdistetyt uutteet pestiin suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja väkevöitiin tuotteen (0,49 g) saamiseksi, jota käytettiin puhdistamatta edelleen. TLC, Rf = 0,42, silikageeli, CH2C12.
15 fj. [Kaava Vb, R3A = 0CH2OC-, R1 = CH(CH3)2,
Ra = CH2CH(CH3)2] o
Isobutyyliklooriformiaattia (0,097 ml, 0,75 mmol) lisättiin esijäähdytettyyn (-15 °C) liuokseen, jossa oli CBZ-proliinia (80,185 g, 0,75 mmol), N-metyylimorfoliinia 20 (0,062 ml, 0,75 mmol) ja THF:a (5,0 ml), typpiatmosfääris- sä ja seoksen annettiin sekoittua k tuntia -15 °C:ssa. Sitten seos jäähdytettiin -40 °C:seen ja lisättiin hitaasti liuos, jossa oli esimerkin 13e tuotetta ja THF:a (2,0 ml). Saadun seoksen annettiin lämmetä hitaasti huoneen lämpöti-25 laan yön aikana. Seos suodatettiin ja THF poistettiin tyhjössä. Lisättiin EtOAcia ja orgaaninen liuos uutettiin peräkkäin 1 N HCl:lla, kyllästetyllä NaHC03:lla ja suolaliuoksella ja kuivattiin sitten Na2S04:lla, suodatettiin ja EtOAc poistettiin tyhjössä, jolloin saatiin tuote. TLC, Rf 30 = 0,45, silikageeli, MeOH/CHCl3 (5:95).
0 cQ [Kaava Ib, R3A = 0CH2C-, R1 = CH(CH3)2, RA = CH2CH(CH3)2] Käyttäen esimerkin lg menetelmää hapetettiin esi-35 merkin 13f tuote, jolloin saatiin puhdistamisen jälkeen flash-kromatografiällä [MeOH/CHCl3 (2:98)] tuote (40 %).
58 86859 TLC, Rf = 0,75, silikageeli, MeOH/CHCl3 (5:95). :H-NMR (d6-DMSO): 0,87 (m, 12H), 1,9 (m, 8H), 3,4 (m, 2H), 4,4 (m, 1H), 4,65 (m, 1H), 5,0 (m, 2H), 7,3 (m, 5H) ja 8,39 (m, 1H) .
5 Esimerkki 14 N-[4-[[[(4-kloorifenyyli)sulfonyyli]amino]karbo-nyyli]bentsoyyli]-L-valyyli-N-[3,3-difluori-1-(1-metyylietyyli)-2,4-diokso-4-[(2-fenyylietyyli)-amino]butyyli]-1-proliiniamidi 10 [Kaava Ic, R* = -CONHR8, RB = CH2CH20, R1 = CH(CH3)2, R2 = CH(CH3)2, R4 = H, R3A = [4-[4-C10S( 02 )NHC]0]C-] II II 0 0 DMAP: a (9,8 mg, 0,08 mmol) lisättiin sekoitettuun 15 liuokseen, jossa oli p-klooribentseenisulfonamidia (14 mg, 0,073 mmol) ja kuivaa CH2Cl2:a (2,0 ml) huoneen lämpötilassa typpiatmosfäärissä. Saatuun liuokseen lisättiin WSCDI:a (15,34 mg, 0,08 mmol) ja sen jälkeen osa esimerkin 12 tuotteesta (47 mg, 0,073 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin 20 yön yli huoneen lämpötilassa. Lisättiin lisää CH2Cl2:a (20 ml) ja liuos pestiin 1 N HCl-liuoksella ja suolaliuoksella ja kuivattiin MgS04:lla. Liuos suodatettiin ja suodos väke-vöitiin tyhjössä, jolloin jäljelle jäi 40 mg jäännöstä. Tämä jäännös puhdistettiin flash-kromatografiällä [alhai-25 nen pH silika, CHC13/CH30H (99:1)], jolloin saatiin tuote (20,6 mg, 35 %) valkoisena jauheena. TLC, Rf = 0,32, silikageeli, CHC13/CH3OH/HOAc (98:2:0,1). HPLC: tR = 21,01 min; H20/CH30H/THF/TFA (55:35:15:0,1) 2 ml/min (PhenomeneJp Zor-baa£y C-8 analyyttinen kolonni, 4,6 mm x 35 cm). ^-NMR 30 (DMS0-d6): 0,90 (m, 12H), 1,68 - 2,13 (m, 6H), 2,73 (m, 2H), 3,87 (m, Ih), 4,44 (m, 2H), 4,72 (m, 1H), 7,2 (m, 5H), 7,7 (m, 2H), 7,92 (m, 6H), 8,29 [d, J = 8,57), 1H], 8,73 [d, (J = 7,75), 1H] ja 9,19 )m, 1H).
59 8 6 8 5 9
Esimerkki 15 2-[[[3,3-difluori-1-(1-metyylietyyli)-2,4-diokso-oktyyli]amino]karbonyyli3-1-pyrrolidiinikarboksyy-lihappofenyylimetyyliesteri 5 0 0 il il [Kaava Ib, R3A = 0CH2OC-, R* = -C-CH2-RB,
Rb = ( CH2 )2CH3] 0 a) [Kaava IXb, R3A = 0CH2OC-, R‘ = CH(CH3)2] 10 IN NaOH:a (2,75 ml, 2,75 mmol) lisättiin sekoitet tuun liuokseen, jossa oli esimerkin 4b tuotetta (1,0 g, 2,19 mmol) ja metanolia (15 ml) huoneen lämpötilassa. Saatua liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 4 tuntia. Reaktioseosta käsiteltiin vedellä (7,5 ml) ja saatu liuos 15 uutettiin EtOAc:lla. Vesipitoinen kerros tehtiin happamaksi (pH 2) IN HCl:lla. Tämä hapan vesipitoinen seos uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros pestiin suolaliuoksella, kuivattiin (MgS04), suodatettiin ja suodos vakevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin tuote (0,883 g, 94,1 20 %:n saanto) valkoisena kuivana vaahtona. TCL, Rf = 0,1, silikageeli, CHC13/CH3OH/HOAc (95:5:0,5).
b) [Kaava Xllb, R3A = 0CH2OC-, R1 = CH(CH3)2] — Il 0 1- (3-dimetyyliaminopropyyli )-3-etyylikarbodi-imidi-25 hydrokloridi (0,24 g, 1,23 mmol) lisättiin suspensioon, jossa oli osa esimerkin 15a tuotetta (0,48 g, 1,12 mmol), 0,N-dimetyylihydroksyyliamiinihydrokloridia (0,11 g, 1,12 mmol), 1-hydroksibentsotriatsolia (0,3 g, 2,24 mmol) ja N-metyylimorfoliinia (0,11 g, 1,12 mmol) CH2Cl2:ssa (10 30 ml). Reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli ja väkevöitiin tyhjössä. Jäännös otettiin Et0Ac:iin, pestiin kyllästetyllä vesipitoisella HCl:lla ja suolaliuoksella ja kuivattiin sitten (Na2S04), suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin tuote (0,42 g). TLC, R{ = 35 0,38, silikageeli, MeOH/CHCl3 (5:95).
6o 86 8 59 o . 11 c) [Kaava Vb, R3A = 0CH2OC-, R1 = CH(CH3)2],
O
l|
Ra = -C-CH2Rb, Rb = (CH2)2CH3] 5 n-butyylimagnesiumkloridia (0,65 ml, 2,6 M THF:ssa, 1,68 mmol) lisättiin pisaroittain liuokseen, jossa oli osa esimerkin 15B tuotteesta (0,2 g, 0,42 mmol) kuivassa THF:ssa 0 °C:ssa. Reaktioseosta sekoitettiin 1 tunti 0 °C:ssa. Lisättiin 1 N vesipitoista HCl:a (10 ml) ja liuos 10 uutettiin EtOAc:lla. Yhdistetyt uutteet pestiin suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja väkevöi-tiin raakatuotteen saamiseksi. Tuote puhdistettiin flash-kromatografiällä käyttäen EtOAc/heksaania (2:3) eluentti-na, jolloin tuote saatiin valkoisena kiinteänä aineena 15 (0,138 g). TLC, Rf = 0,53, silikageeli, EtOAc/heksaani (1:1).
d) [Kaava Ib, R3A = 0CH2OC-, R1 = CH(CH3)2], — Il
Ra = -C-CH2R8, 0 Rb = (CH2)2CH3] l| o 20 Trifluorietikkahappoa (30 mg, 0,28 mmol) ja Dess-
Martin-perjodinaania (0,24 g, 0,56 mmol) lisättiin liuokseen, jossa oli esimerkin 15c tuotetta (0,13 g, 0,28 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (2 ml). Reaktioseosta sekoitettiin yön yli, laimennettiin EtOAc:lla, pestiin kyllästetyllä vesi-25 pitoisella NaHC03:lla ja suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja väkevöitiin raakatuotteen saamiseksi. Tuote puhdistettiin flash-kromatografiällä käyttäen eluenttina EtOAc/heksaania (30:70), jolloin saatiin tuote (0,125 g, 100 %) kirkkaana öljynä. TLC, Rf = 0,3, silika-30 geeli, EtOAc/heksaani (30:70).
Analyysi yhdisteelle C24H32F2N205 · h H20:
Laskettu: C 60,62 H 6,99 N 5,89
Saatu: C 60,51 H 6,80 N 5,82 I: ei 86859
Esimerkki 16 Käyttäen esimerkissä 14 kuvattua menetelmää, mutta käyttäen bentseenisulfonamidia p-klooribentseenisulfon-amidin asemasta saatiin N-(4-{[(fenyylisulfonyyli)amino]-5 karbonyl}bentsoyyli )-L-valyyli-N-{3,3-difluori-1-(1-metyy- lietyyli )-2,4-diokso-4- [ (2-fenyylietyyli )amino]butyyli}-L-proliiniamidi kiinteänä aineena; sp. 216 -217,5 °C. [Kaava Ie, R* = CONHR8, RB = CH2CH2C6H5, R1 = CH(CH3)2, R2 = CH(CH3)2, R4 = H, R3A = [4- (0SO2NHCO )0) -CO- ]

Claims (2)

62 86859
1. Menetelmä terapeuttisesti aktiivisen difluorike-tonipeptidijohdannaisen valmistamiseksi, jolla on kaava 5 r’-a-n^y^^R' <Ia> 0 10 o R1 F F jl 1 V" r3_A_N-N R* (Ib) 15 ___J H O tai
20. O Rl F F R2 H O 25 jolloin R on 1 - 5 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä; kaavan -NH.CHR2.CO- mukainen ryhmä on alaniinista, valiinista, norvaliinista, leusiinista, isoleusiinista, 30 norleusiinista, fenyylialaniinista, tyrosiinista, aspara- giinista, glutamiinista, asparagiinihaposta, glutamiiniha-posta, lysiinistä, treoniinista, seriinistä, a-aminovoiha-posta tai fenyyliglysiinistä saatu aminohappotähde; R3 on 1 - 12 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä, 35 jossa on 63 86859 (1) fenyylikarbonyyliaminoryhmä, jossa mahdollisesti on karboksi-, C1.3-alkoksikarbonyyli-, 5-tetratsolo- tai bentseenisulfonyyliaminokarbonyylisubstituentti, jolloin viimeksi mainittu on mahdollisesti substituoitu fluori-, 5 kloori-, bromi- tai jodiatomilla tai nitroryhmällä; tai (2) fenyyli, joka on mahdollisesti substituoitu kloori-, bromi-, jodi- tai fluoriatomilla tai hydroksi-, trifluor ime tyyli-, C1.6-alkyyli-, C1.6-alkoksi-, C2_6-alkano-yylioksi-, C2_6-alkoksikarbonyyli-, karboksi-, C2_6-amino- 10 karbonyylialkyyli-, karbamoyyli-, 5-tetratsolo- tai bent-seenisulfonyyliaminokarbonyyliryhmällä, jolloin viimeksi mainittu on mahdollisesti substituoitu fluori-, kloori-, bromi- tai jodiatomilla tai nitroryhmällä; tai R3 on fenyyli, joka on mahdollisesti substituoitu 15 fluori-, kloori-, bromi- tai jodiatomilla tai trifluori-metyyli-, hydroksi-, C^g-alkyyli-, C2.6-alkanoyylioksi-, C1_6-alkoksi-, C2.6-alkoksikarbonyyli-, karboksi-, C2_7-aminokarbonyylialkyyli-, 5-tetratsolo- tai bentseenisulfo-nyyliaminokarbonyyliryhmällä, jolloin viimeksi mainittu on 20 mahdollisesti substituoitu fluori-, kloori-, bromi- tai jodiatomilla tai nitroryhmällä; R4 on vety; Ra on ryhmä, jolla on kaava -CH2.RB, -C0.CH2.RB tai -CO.NH.R®, jolloin RB on C^^-alkyyli, C5.15-sykloalkyyli, 25 C5.15-sykloalkyyli-C1.6-alkyyli, fenyyli tai fenyyli-C^-al-kyyli, jonka fenyyliryhmä on mahdollisesti substituoitu kloori-, bromi-, jodi- tai fluoriatomilla tai hydroksi-, trif luorimetyyli-, C^-alkyyli-, C^-alkoksi-, C2_6-al-koksikarbonyyli-, karboksi-, 5-tetratsolo- tai bentseeni-30 sulfonyyliaminokarbonyyliryhmällä, jolloin viimeksi mai nittu ryhmä on mahdollisesti substituoitu fluori-, kloori-, bromi- tai jodiatomilla tai nitroryhmällä; ja A on karbonyyli tai oksikarbonyyli; tai, kun on sopivaa, sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi, 35 tunnettu siitä, että 64 86859 (a) yhdiste, jolla on kaava R1 f
5 R3-A-N C—C-Ra (Va) * i I H OH F
0 R1 I) J. H F
10 R3-A-N--f C- C-RA I H OH F <Vb) tai 15 R2 0 R1 R4 Jj H F R3-A-N-^^\^n-s' ^ N ^C- C-Ra oi H OH F (Vc) 20 ^s' hapetetaan, (b) happo, jolla on kaava 25 R1 F O R3-A-N-C-C-C-C-OH (XXVIIa) I I il I H H 0 F 30 O R1 F O C-N-C-C-C-C-OH (XXVIIb) R3-A-N -f H H O F o 35 tai 65 86859 O R1 F O , li ' il R HO . C-N-C-C-C-C-OH (XXVIIe) ItH / | i || i R3-A-N—C-C-N-( H H O F * O 5 kytketään amiiniin, jolla on kaava RB.NH2; (e) yhdisteiden valmistamiseksi, joissa R2 tai R3 sisältää karboksiryhmän, hajotetaan vastaavan kaavan Ia, 10 Ib tai Ie mukaisen yhdisteen esteri; tai (d) yhdisteiden valmistamiseksi, joissa R3 sisältää bentseenisulfonyyliaminokarbonyyliryhmän, joka on mahdollisesti substituoitu fluori-, kloori-, bromi- tai jodiato-milla tai nitroryhmällä, saatetaan vastaava kaavan Ia, Ib 15 tai Ie mukainen yhdiste, jossa R3 sisältää karboksiryhmän, reagoimaan valitun sulfonamidin kanssa dehydratoivan aineen läsnä ollessa liuottimessa tai laimentimessa; minkä jälkeen, kun halutaan farmaseuttisesti hyväksyttävä suola, saatetaan saatu kaavan Ia, Ib tai Ie mukainen yh-20 diste reagoimaan sopivan hapon tai emäksen kanssa, joka tuottaa fysiologisesti hyväksyttävän anionin tai vastaavasti kationin; jolloin vaihtuvilla substituenteilla voi olla mitkä tahansa edellä mainituista merkityksistä, ellei toisin ole mai-25 nittu.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan N-[4-({[(4-kloo-rifenyyli )sulfonyyli]amino}karbonyyli)bentsoyyli]-L-va-lyyli-N-{3,3-difluori-1-(1-metyylietyyli)-2,4-diokso-4-30 [(2-fenyylietyyli)amino]butyl}-L-proliiniamidi tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola. 66 86859
FI862434A 1985-06-07 1986-06-06 Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt aktiva difluor-ketonpeptidderivat FI86859C (fi)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB8514436 1985-06-07
GB8514438 1985-06-07
GB858514436A GB8514436D0 (en) 1985-06-07 1985-06-07 Selected difluoro derivatives
GB858514440A GB8514440D0 (en) 1985-06-07 1985-06-07 Difluoro ketone tripeptide derivatives
GB8514440 1985-06-07
GB858514438A GB8514438D0 (en) 1985-06-07 1985-06-07 Selected difluoro ketone dipeptide derivatives

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI862434A0 FI862434A0 (fi) 1986-06-06
FI862434A FI862434A (fi) 1986-12-08
FI86859B true FI86859B (fi) 1992-07-15
FI86859C FI86859C (fi) 1992-10-26

Family

ID=27262698

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI862434A FI86859C (fi) 1985-06-07 1986-06-06 Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt aktiva difluor-ketonpeptidderivat

Country Status (16)

Country Link
US (1) US4880780A (fi)
EP (1) EP0204571B1 (fi)
JP (1) JPH07116159B2 (fi)
AT (1) ATE71934T1 (fi)
AU (1) AU594683B2 (fi)
DE (1) DE3683541D1 (fi)
DK (1) DK267686A (fi)
ES (4) ES8801305A1 (fi)
FI (1) FI86859C (fi)
GR (1) GR861488B (fi)
HU (1) HU208438B (fi)
IE (1) IE59146B1 (fi)
IL (1) IL79049A0 (fi)
NO (1) NO170585C (fi)
NZ (1) NZ216437A (fi)
PT (1) PT82724B (fi)

Families Citing this family (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8600263D0 (en) * 1985-01-22 1986-02-12 Ici America Inc Peptide derivatives
US5496927A (en) * 1985-02-04 1996-03-05 Merrell Pharmaceuticals Inc. Peptidase inhibitors
ES2052560T3 (es) * 1986-06-05 1994-07-16 Ici America Inc Compuestos difluorcetonicos.
GB8613703D0 (en) * 1986-06-05 1986-07-09 Ici America Inc Difluoro peptide compounds
GB8809316D0 (en) * 1987-05-11 1988-05-25 Ici America Inc Heterocyclic ketones
EP0371179A1 (en) * 1988-10-28 1990-06-06 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Novel analogs of peptidase substrates
EP0369391A3 (en) * 1988-11-15 1991-09-25 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc. N-substituted amides
GB8910547D0 (en) * 1989-05-08 1989-06-21 Ici America Inc Substituted ketones
US5221665A (en) * 1989-10-27 1993-06-22 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. N-substituted amides
US5391705A (en) * 1991-03-15 1995-02-21 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Polyfluorinated tripeptide thrombin inhibitors
HU217612B (hu) * 1991-05-23 2000-03-28 Merrel Dow Pharmaceuticals Inc. Eljárás elasztáz és katepszin G inhibitor hatású peptidek előállítására
US5478811A (en) * 1991-08-22 1995-12-26 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Orally-active elastase inhibitors
US5714470A (en) * 1991-08-22 1998-02-03 Merrell Pharmaceuticals, Inc. Orally-active elastase inhibitors
US5486529A (en) * 1992-04-16 1996-01-23 Zeneca Limited Certain pyridyl ketones for treating diseases involving leukocyte elastase
IL108031A0 (en) * 1992-12-22 1994-04-12 Procter & Gamble Difluoro pentapeptide derivatives and pharmaceutical compositions containing them
JP4221059B2 (ja) * 1994-06-02 2009-02-12 アベンティス・インコーポレイテッド エラスターゼインヒビターのプロドラッグとしてのアシル化エノール誘導体
US6008196A (en) * 1994-06-02 1999-12-28 Hoechst Marion Roussel, Inc. Perfluoroalkyl ketone inhibitors of elastase and processes for making the same
AU689589B2 (en) * 1994-06-02 1998-04-02 Hoechst Marion Roussel, Inc. Novel elastase inhibitors
US6069232A (en) * 1995-10-02 2000-05-30 Hoechst Marion Roussel, Inc. Polyfluoroalkyl tryptophan tripeptide thrombin inhibitors
US6172044B1 (en) 1995-12-01 2001-01-09 Aventis Pharmaceuticals Inc. Acylated enol derivative of α-ketoesters and α-ketoamides
US5948886A (en) * 1996-11-20 1999-09-07 Hoechst Marion Roussel, Inc. Acylated enol derivatives of α-ketoesters and α-ketoamides
US6673784B1 (en) 1996-03-19 2004-01-06 G. D. Searle & Co. Electrophilic ketones for the treatment of herpesvirus infections
US5739354A (en) * 1996-03-26 1998-04-14 Hoechst Marion Roussel, Inc. Process for the preparation of N-methyl-D-phenylalanyl-N- 1- 3- (aminoiminomethyl)amino!propyl!-3,3-difluoro-2-oxohexyl!-L-prolinamide
EP2409985A3 (en) 1996-10-18 2013-05-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors de serine proteases, especially of the NS3 protease of the hepatitis C virus
SV2003000617A (es) * 2000-08-31 2003-01-13 Lilly Co Eli Inhibidores de la proteasa peptidomimetica ref. x-14912m
MY148123A (en) 2003-09-05 2013-02-28 Vertex Pharma Inhibitors of serine proteases, particularly hcv ns3-ns4a protease
AR055395A1 (es) 2005-08-26 2007-08-22 Vertex Pharma Compuestos inhibidores de la actividad de la serina proteasa ns3-ns4a del virus de la hepatitis c
US7964624B1 (en) 2005-08-26 2011-06-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases
CN102614490A (zh) 2006-02-27 2012-08-01 弗特克斯药品有限公司 包含vx-950的共晶体和包含所述共晶体的药物组合物
WO2007109080A2 (en) * 2006-03-16 2007-09-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Deuterated hepatitis c protease inhibitors
WO2008060621A2 (en) * 2006-11-17 2008-05-22 Abbott Laboratories Aminopyrrolidines as chemokine receptor antagonists
ATE542815T1 (de) 2007-02-27 2012-02-15 Vertex Pharma Kokristalle und pharmazeutische zusammensetzungen damit
CA2679426A1 (en) 2007-02-27 2008-09-04 Luc Farmer Inhibitors of serine proteases
JP5443360B2 (ja) 2007-08-30 2014-03-19 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 共結晶体およびそれを含む医薬組成物
EP3029070A1 (en) 2009-08-29 2016-06-08 AbbVie Inc. Therapeutic dll4 binding proteins
EP3680253A3 (en) 2010-03-02 2020-09-30 AbbVie Inc. Therapeutic dll4 binding proteins
JP2013537415A (ja) 2010-08-03 2013-10-03 アッヴィ・インコーポレイテッド 二重可変ドメイン免疫グロブリンおよびその使用
NZ707641A (en) 2012-11-01 2016-09-30 Abbvie Inc Anti-vegf/dll4 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
WO2016094881A2 (en) 2014-12-11 2016-06-16 Abbvie Inc. Lrp-8 binding proteins
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
CN114008068A (zh) * 2019-07-01 2022-02-01 巴斯夫欧洲公司 稳定酶的肽缩醛

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BE787249A (fr) 1971-08-05 1973-02-05 Squibb & Sons Inc Derives amino d'acides pyrazolopyridine carboxyliques, leurs esters et les sels de ces composes, ainsi que leurs procedes de preparation
US3935280A (en) 1975-01-10 1976-01-27 Aldrich-Boranes, Inc. Reduction of amino acids in the presence of boron trifluoride
US4277395A (en) * 1980-06-16 1981-07-07 Richardson-Merrell Inc. Novel enzyme inhibitors
DE3481913D1 (de) 1983-04-27 1990-05-17 Ici America Inc Prolin-derivate.
US4518528A (en) * 1983-05-19 1985-05-21 Rasnick David W α Amino fluoro ketones
GB8600263D0 (en) * 1985-01-22 1986-02-12 Ici America Inc Peptide derivatives

Also Published As

Publication number Publication date
HUT40811A (en) 1987-02-27
NZ216437A (en) 1990-06-26
IL79049A0 (en) 1986-09-30
GR861488B (en) 1986-09-05
DK267686A (da) 1986-12-08
EP0204571A2 (en) 1986-12-10
FI862434A (fi) 1986-12-08
NO862269L (no) 1986-12-08
DK267686D0 (da) 1986-06-06
NO170585C (no) 1992-11-04
US4880780A (en) 1989-11-14
AU5845486A (en) 1986-12-18
ES555826A0 (es) 1987-12-16
IE59146B1 (en) 1994-01-12
JPS6253951A (ja) 1987-03-09
ES557734A0 (es) 1988-11-16
EP0204571B1 (en) 1992-01-22
ES8802619A1 (es) 1988-09-01
ES557733A0 (es) 1988-09-01
PT82724B (pt) 1988-12-15
FI862434A0 (fi) 1986-06-06
ES557735A0 (es) 1988-05-01
ATE71934T1 (de) 1992-02-15
ES8802321A1 (es) 1988-05-01
ES8801305A1 (es) 1987-12-16
AU594683B2 (en) 1990-03-15
PT82724A (en) 1986-07-01
IE861513L (en) 1986-12-07
ES8900051A1 (es) 1988-11-16
NO862269D0 (no) 1986-06-06
DE3683541D1 (de) 1992-03-05
NO170585B (no) 1992-07-27
FI86859C (fi) 1992-10-26
JPH07116159B2 (ja) 1995-12-13
EP0204571A3 (en) 1988-09-21
HU208438B (en) 1993-10-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI86859B (fi) Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt aktiva difluor-ketonpeptidderivat.
JP3273515B2 (ja) 抗血栓剤としてのペプチドアルデヒド類
US4977277A (en) Functionalized peptidyl aminodiols and -triols 4-amino-5-cyclohexyl-3-hydroxy-1,2-oxopentane and derivatives thereof
EP0529568B1 (en) Novel orally-active elastase inhibitors
KR910002694B1 (ko) 작용화 펩티딜 아미노디올 및 트리올
JPH05246984A (ja) トリフルオロメチルケトン置換されたペプチド誘導体、その製法及びこれを含有するエラスターゼ介在組織変性疾病の治療剤
EP0124317A2 (en) Proline derivatives
JP2000505437A (ja) セリンプロテアーゼ阻害剤
EP0249349B1 (en) Difluoroketo compounds
CZ246697A3 (en) Proline derivatives, process of their preparation and pharmaceutical composition containing thereof
US4873221A (en) Difluoro peptide compounds
CA2224076A1 (en) Inhibitors of factor xa
US4816466A (en) Piperidine derivatives
US4837204A (en) Functionalized peptidyl aminodiols and -triols
EP0863916B1 (en) Polyfluoroalkyl tryptophan tripeptide thrombin inhibitors
HU221197B1 (en) Elastase inhibitor tripeptides and pharmaceutical compositions comprising thereof
US4923890A (en) Difluoro keto compounds and their use as HLE inhibitors
WO1993000359A1 (en) Modified peptides transportable into the central nervous system
US5478811A (en) Orally-active elastase inhibitors
EP0762887B1 (en) Acylated enol derivatives as prodrugs of elastase inhibitors
EP0248562B1 (en) Difluoro peptide compounds
US6172044B1 (en) Acylated enol derivative of α-ketoesters and α-ketoamides
JPS63258450A (ja) ジフルオロケト化合物、その製法及び該化合物を含有するヒト白血球エラスタ−ゼ阻害剤

Legal Events

Date Code Title Description
MM Patent lapsed
MM Patent lapsed

Owner name: ICI AMERICAS INC