FI84816C - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt aktiva gem-difluor-1,8-diamino-4-azaoktanderivat. - Google Patents

Description

1 84816

Menetelmä terapeuttisesti aktiivisten gem-difluori-1,8-di-amino-4-atsaoktaanijohdannaisten valmistamiseksi

On hyvin tunnettu havainto, että sellaisten luonnon po-5 lyamiinien, kuten putreskiinin, spermidiinin ja spermiinin biosynteesi lisääntyy nopeasti jaukautuvissa soluissa verrattuna normaaleihin lepotilassa oleviin soluihin. Toisaalta tiedetään myös, että putreskiinin ja spermidiinin poistaminen johtaa solujen jakautumisen vähenemiseen.

10 Ornitiini on aineenvaihdunnassa putreskiinin edeltä jä ja jälkimmäinen on puolestaan spermidiiniä edeltävä aineenvaihduntatuote ja tämä puolestaan on spermiiniä edeltävä aineenvaihduntatuote. Näitä biokemiallisia muutoksia katalysoivat aineenvaihdunnassa vastaavasti entsyymit or-15 nitiinidekarboksylaasi, spermidiinisyntaasi ja spermiini- syntaasi. Lisäksi spermidiini- ja spermiinisyntaasientsyy-mi käyttävät kosubstraattina dekarboksyloitua S-adenosyy-li-L-metioniiniä, joka on S-adenosyyli-L-metioniinidekarb-oksylaasientsyymin reaktiotuote. Näiden entsyymien inhi-20 biittoreiden, mukaan luettuna S-adenosyyli-L-metioniini- dekarboksylaasin inhibiittorit, pitäisi siten toimia putreskiinin ja siitä saatujen korkeampien polyamiinien, nimittäin spermidiinin ja spermiinin, biosynteesin estäjinä ja niiden pitäisi teoreettisesti olla tehokkaita solujen 25 lisääntymistä estävinä ja/tai kasvaimia estävinä aineina.

Kuitenkaan ei ornitiinidekarboksylaasin irreversiibelien inhibiittoreiden tai S-adenosyyli-L-metioniinide-karboksylaasin, spermidiinisyntaasin ja spermiinisyntaasin inhibiittoreiden käyttö ole aikaisemmin osoittautunut 30 täysin tehokkaaksi. Niinpä esimerkiksi putreskiini ja spermidiini eivät ole välttämättömiä solujen elinkykyisyyden säilymiselle niin kauan kuin aikaisempi spermiinivarasto pysyy suuruudeltaan määrätyn kriittisen tason yläpuolella. Lisäksi dekarboksylaasientsyymien täydellinen inhibointi on . 35 in vivo vaikeaa niiden suuren vaihtumisnopeuden vuoksi.

Patentin hakijat ovat löytäneet ryhmän yhdisteitä, jotka poistavat solusta luonnolliset spermiinimäärät. Nämä 2 84816 yhdisteet ovat erittäin tehokkaita solun kasvun estäjiä nopeasti jakautuvissa soluissa. Siten tämän keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet ovat hyödyllisiä solujen lisääntymistä vastustavina ja kasvaimia vastustavina ai-5 neina.

Tämä keksintö koskee menetelmää eräiden selektiivisten spermidiinin gem-dihalogeenijohdannaisten valmistamiseksi. Tarkemmin sanottuna tämä keksintö koskee menetelmää gem-difluori-1,8-diamino-4-atsaoktaanijohdannais-10 ten valmistamiseksi, joilla on kaava

X Y

x / H2N-CH2-C-CH2-NH-CH2-C-C-CH2-NH2 (1)

/ x / X

X Y X Y

15 jossa X ja Y edustavat vetyä tai fluoria sillä ehdolla, että molemmat fluorit ovat kulloinkin substituentteina yhdessä ja vain yhdessä hiiliatomissa, sekä niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi.

20 Kuten yllä olevasta yleisestä kaavasta (1) ilme nee, muodostavat tämän keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet erityisen gem-difluorispermidiinien luokan yhdessä niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen kanssa. Kuitenkin käytetään koko ajan täsmällisempää ni-25 mistöä ja näitä yhdisteitä nimitetään gem-difluori-1,8-diamino-4-atsaoktaanijohdannaisiksi.

Kaikki tähän keksintöön sisältyvät yhdisteet ovat gem-difluorijohdannaisia. Tämä tarkoittaa sitä, että ne rajoittuvat 1,8-diamino-4-atsaoktaanin 2,2-difluori-, 30 6,6-difluori- tai 7,7-difluorijohdannaisiin, kuten ilme nee patenttivaatimuksiin sisältyvästä rajoittavasta ehdosta. Siten tämän keksinnön mukaisesti valmistettuihin yhdisteisiin, jotka sisältyvät patenttivaatimuksen 1 piiriin, kuuluvat: 35 2,2-difluori-1,8-diamino-4-atsaoktaani, 3 84816 6.6- difluori-l,8-diamino-4-atsaoktaani ja 7.7- difluori-l,8-diamino-4-atsaoktaani.

Farmaseuttisesti hyväksyttäviin suoloihin sisältyvät yllä olevan kaavan (1) mukaisten emäsyhdisteiden sel-5 laiset orgaaniset tai epäorgaaniset happoadditiosuolat, jotka eivät ole myrkyllisiä. Esimerkkejä epäorgaanisista hapoista ovat kloorivety-, bromivety-, rikki- ja fosfori-happo, samoin kuin sellaiset metallisuolat, kuten dinat-riumortofosfaatti ja kaliumvetysulfaatti. Esimerkkejä or-10 gaanisista hapoista, jotka muodostavat sopivia suoloja, ovat sellaiset mono-, di- ja trikarboksyylihapot, kuten etikka-, glykoli-, maito-, palorypäle-, maloni-, meripihka-, glutaari-, fumaari-, omena-, viini-, sitruuna-, as-korbiini-, maleiini-, hydroksimaleiini-, bentsoe-, p-hyd-15 roksibentsoe-, fenyylietikka-, kaneli-, salisyyli- ja 2-fenoksibentsoehappo ja sellaiset sulfonihapot, kuten me-taanisulfonihappo ja 2-hydroksietaanisulfonihappo. Tällaiset suolat voivat esiintyä joko hydratoituina tai käytännöllisesti katsoen vedettöminä.

20 Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista se, mitä patenttivaatimuksessa 1 esitetään.

Kaikki tämän keksinnön mukaiset yhdisteet valmistetaan johdonmukaisessa järjestyksessä lähtien vastaavista 2,2-difluori-1,4-butaanidioleista, jotka ovat seuraa-25 van kaavan mukaisia: HO-CH2-C-(CH2),-OH (2) / \

F F

30 Nämä yhdisteet valmistetaan helposti antamalla 2,2-difluorimeripihkahapon reagoida trifluorietikkahapon kanssa, jolloin saadaan vastaavat 2,2-difluorimeripihka-happoanhydridit.

Anhydridien halkaisu metanolin avulla johtaa vas-35 taavien metyyli-2,2-difluorisukkinaattien muodostumiseen.

4 84816

Vastaavan vapaan happoryhmän pelkistäminen boraa-nimetyylisulfidikompleksin avulla johtaa vastaavien alkoholien, so. metyyli-2,2-difluori-4-hydroksibutanoaattien, muodostumiseen.

5 Esteriryhmän pelkistäminen, esimerkiksi käyttäen natriumboorihydridiä, johtaa haluttujen lähtöaineiden, 2,2-difluori-1,4-butaanidiolien (2) muodostumiseen.

6,6-difluori- ja 7,7-difluorijohdannaiset valmistetaan noudattaen seuraavaa synteesitietä, jossa symbolit 10 X ja Y edustavat vetyä tai fluoria.

_¥ BiO-CHj-C-CHjCHjOH

F F X Y

\ / 3a He s-O-CH.-C-C-CH-OBi — -> 2 /\ 2 15 ho-ch2-c-(ch2)2-oh- xy F F 4 2 _.

> HO-CH,-C-CH,CH-OBz 2/\ 2 2

F F

3b 20

V

KN-CH,-C-C-CH^0Bz H„N-CH„-C-C-CH.,0Bz „ PhtN-CH.,-C-C-CH,OBz I 2 /\ 2 < " — 2 2 / \ 2 <—- 2 /\ €.

2^ Tos χ Y X Υ X Y

7 6 5

Br(CH2 )3NPht Ύ 30 5 84816 χγ χ γ

PhtN-(CH, ),-N-CH„-C-C-CH.,OBz . PhtN-(CH-L-N-CH.-C-C-CH.OH

* J | « /V * ..... 2 3 | 2 / \ 2

Tos X Y Tos X Y

8 9 5 > ’

X Y X Y

, \/ w

PhtN-(CH.,),-N-CH.,-C-C-CH„NPht . PhtN-( CH„),-N-CH„-C-C-CH^OKes z J I Z /\ Z <- 2 3 I 2 /\ 2

Tos X Y Tos X Y

11 12 9 IQ jossa Pht = «? i ® X Y Bz -CH2-(5> h2n-(CH2 )3-NH-CH2-C-C-CH2NH2 X Y Tos = -CH,-®-S- 1 i 3

Mes « -CH3-S- 15 °

Alkyloimalla ohjaten 2,2-difluori-1,4-butaanidioli (2) bentsyylihalogenidin, kuten esimerkiksi bentsyylibromidin avulla kalium-tert-butoksidin läsnä ollessa saadaan sopiva primääristen alkoholien suojamuoto. Koska läsnä on kaksi 20 primääristä alkoholia, saadaan seos, jossa on 1-bentsyyli-oksi-2,2-difluori-4-hydroksibutaania (3a) ja 1-bentsyy-lioksi-3,3—difluori-4-hydroksibutaania (3b). Symboli Bz edustaa tässä käytettynä bentsyyliryhmää.

Tämä isomeerien seos voidaan helposti jakaa kroma-25 tografian avulla. Jos jäljellä olevassa reaktiosarjassa käytetään 1-bentsyylioksi-2,2-difluori-4-hydroksibutaa-ni-isomeeriä (3a), saadaan gem-7,7-difluori-1,8-diamino- 4-atsaoktaanit. Jos päinvastoin käytetään 1-bentsyylioksi- 3,3-difluori-4-hydroksibutaani-isomeeriä (3b), saadaan 30 gem-6,6-difluori-l,8-diamino-4-atsaoktaanit. Koska reak-tiosarja on täsmälleen sama, esitetään yleinen reaktiokaa-vio tästä lähtien trifluorisubstituoiduin yhdistein, vaikka itse asiassa ainoastaan yksi hiiliatomeista on kulloinkin disubstituoitu.

35 Käytettävän 1-bentsyylioksi-gem-difluori-4-hydr- oksibutaanin vapaa hydroksyyliryhmä voidaan suojata käyttäen 6 84816 metaanisulfonyylikloridia vedettömässä, aproottisessa liuot-timessa, kuten esimerkiksi dikloorimetaanissa, jolloin saadaan vastaava 1-bentsyylioksi-gem-difluori-4-metaani-sulfonyylioksibutaani (4). Tässä käytettynä symboli Mes 5 tarkoittaa metaanisulfonyyliryhmää. (4):n reaktio kalium- ftaali-imidin kanssa sellaisessa liuottimessa, kuten dimetyyliformamidissa, johtaa vastaavan N-(4-bentsyylioksi-gem-difluoributyyli)ftaali-imidin (5) muodostumiseen. Hydrat-siinin vaikuttaessa sellaisessa liuottimessa, kuten etanolis-10 sa tähän ftaali-imidiin (5) muodostuu vastaava 4-bents- yylioksi-gem-difluoributyyliamiini (6) , joka mieluimmin otetaan talteen hydrokloridisuolana.

Jotta vältyttäisiin saamasta isomeeriseosta seuraa-vassa alkylointivaiheessa, suojataan primäärinen amiini 15 (6) normaalilla tavalla p-tolueenisulfonyylikloridilla, jolloin saadaan vastaava N-(4-bentsyylioksi-gem-difluoributyyli) -p-tolueenisulfonamidi (7). Alkyloimalla suojattu amiini (7) käyttäen 3-bromipropyyliftaali-imidiä vedettömissä olosuhteissa sopivassa aproottisessa lluot-20 timessa, kuten esimerkiksi dimetyyliformamidissa ja nat- riumjodidin ja kaiium-tert-butoksidin läsnä ollessa saadaan vastaava 1-ftaali-imido-4-p-tolueenisulfonyyli-gem-di-fluori-8-bentsyylioksi-4-atsaoktaani (8) .

Vastaava 1-ftaali-imido-4-p-tolueenisulfonyyli-gem-25 difluori-8-hydroksi-4-atsaoktaani (9) valmistetaan lohkaisemalla bentsyyliryhmä (8):sta trimetyylisilyylijodidin avulla. (9):n reaktio metaanisulfonyylikloridin kanssa py-ridiinin läsnä ollessa vedettömässä liuottimessa, kuten esimerkiksi dikloorimetaanissa/ johtaa vastaavan 1-ftaali-30 imido-4-p-tolueenisulfonyyli-gem-di fluori-8-metaanisul-fonyylioksi-4-atsaoktaanin (10) muodostumiseen.

(10):n reaktio kaliumftaali-imidin kanssa vedettömässä dimetyyliformamidissa johtaa 1,8-diftaali-imido-4-p-tolueenisulfonyyli-gem-difluori-4-atsoktaanin (11) 35 muodostumiseen. Kuumentamalla (11)stä hydratsiinin kanssa sellaisessa liuottimessa, kuten etanolissa saadaan poistettua 1 84816 suojaavat ftaloyyliryhmät, kun taas kuumentamalla näin saatua tuotetta sen jälkeen HBr:n vesiliuoksen kanssa saadaan poistettua suojaava tosyyliryhmä, jolloin saadaan halutut 6,6- tai 7,7-difluori-1,8-diamino-4-atsaoktaanit (1) 5 hydrobromidisuoloinaan.

Vastaavat 2,2-difluorijohdannaiset valmistetaan noudattaen seuraavaa synteesireittiä.

F F F F

10 w H0-CH2-C-( CH2)2-0H _v MesO-CH2-C-iCH2)2-OMes__^ MesC-CH.-C-CH=CH2

F F

2 11 11

„ " I

13 F'F F F F F

\/ \/ \/ HN-CH2-C-CH=CH2 _ H2M-CH2-C-CH=CH2 <_ Pht»-CH2-C-CH-CH2

Tos 15 14 13

Br(CH-J.NPht 20 2 4

I* F P F

PhtN-( CH2 )4-N-CH2-'c-CH=CH2 _^ PhtN-( CH2 )4-N-CH2-C-C00H

Tos Tos 16 17 25 ♦

F F F F

\/ \/

PhtN-(CHnJ^-N-CH^-C-CH^OMes . PhtIM CH„ ),-N-CH„-C-CH„0H

2 n | 2 2 <- 2 q | 2 2

Tos Tos 12 18 30

V

F F F F

\/ \/

PhtN-(CH2 )4-H-CH2-C-CH2MPht _> H2H-(CH2)4-NH-CH2-C-CH2NH2

TOS H

20 li 35 8 84816 2,2-difluori-l,4-butaanidiolia (2) käsitellään kahden ekvivalentin suuruisella määrällä metaanisulfonyy-likloridia pyridiinin läsnä ollessa, jolloin muodostuu vastaava 1 , 4-bis-metaanisulf onyylioksi-2,2-dif luoributaani 5 111). Kun (11):tä kuumennetaan diatsabisykloundekeenin kanssa sellaisessa liuottimessa, kuten dimetyyliformamidissa, saadaan vastaava 1-metaanisulfonyylioksi-2,2-difluo-ri-3-buteeni (12).

(12):n reaktio kaliumftaali-imidin kanssa sellaises-10 sa liuottimessa, kuten dimetyyliformamidissa, johtaa vastaavan 1-ftaali-imido-2,2-di fluori-3-buteenin (13) muodostumiseen. Jakamalla ftaloyylijohdannainen (13) hydratsiinin avulla alkoholiliuottimessa, saadaan vastaava 1-amino-2,2-difluori-3-buteeni (14).

15 Primäärinen amiini (14) suojataan antamalla sen rea goida p-tolueenisulfonyylikloridin kanssa normaalilla tavalla, jolloin saadaan vastaava N-(2,2-difluori-3-bute-nyyli)-p-tolueenisulfonamidi (15). Alkyloimalla suojattu amiini (15) käyttäen 4-bromibutyyliftaali-imidiä kalium-20 tert-butoksidin läsnä ollessa vedettömissä olosuhteissa sopivassa liuottimessa, kuten esimerkiksi dimetyyliformamidissa, saadaan N-(4-ftaali-imidobutyyli)-N-(2,2-difluo-ri-3-butenyyli)-p-tolueenisulfonamidi (16).

Hapettamalla kaksoissidos käyttäen KMnO^ etikkahapon 25 vesiliuoksessa saadaan vastaava (2,2-difluori-8-ftaali- imido-4-p-tolueenisulfonyyli-4-atsaoktaanihappo (17), josta boraanimetyylisulfidikompleksin avulla pelkistettäessä muodostuu vastaava 2,2-difluori-8-ftaali-imido-4-p-to-lueenisulfonyyli-4-atsaoktanoli (18).

30 (18):n reaktio metaanisulfonyylikloridin kanssa py ridiinin läsnä ollessa vedettömässä liuottimessa, kuten esimerkiksi dikloorimetaanissa, johtaa vastaavan 2,2-di-fluori -1-metaanisulfonyylioksi-8-ftaali-imido-4-p-toluee-nisulfonyyli-4-atsaoktaanin (19) muodostumiseen.

35 (19):n reaktio kaliumftaali-imidin kanssa vedettö mässä dimetyyliformamidissa johtaa 2,2-difluori-1,8- 9 84816 diftaali-imido-4-p~tolueenisulfonyyli-4-atsaoktaanin (20) muodostumiseen. Kuumentamalla (20);tä hydratsiinin kanssa sellaisessa liuottimessa, kuten etanolissa, saadaan poistetuksi suojaavat ftaloyyliryhmät, kun taas kuumentamalla näin 5 saatua tuotetta tämän jälkeen HBr:n vesiliuoksen kanssa saadaan poistetuksi suojaava tosyyliryhmä, jolloin saadaan haluttu 2,2-difluori-1,8-diamino-4-atsaoktaani (1) hyd-robromidisuolanaan.

Keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet ovat 10 hyödyllisiä lisääntymistä estävinä ja kasvaimia estävinä aineina. Näiden yhdisteiden vaikutusmekanismia ei tunneta. Kuitenkin tiedetään, että kun näitä yhdisteitä lisätään kasvavien rotan hepatoomakudosviljelmän (HTC) solujen viljelyaineeseen, ne estävät täysin spermii-15 nin de novo -synteesin. Seurauksena spermiinin loppumisesta vähenee solumäärän kasvu huomattavasti. Kun mukana on tunnettuja ornitiinidekarboksylaasin inhibiittoreita, kuten esimerkiksi 2-difluorimetyyli-2,5-diaminopentaanihappo (DFMO) ja /2R, 5R_/-6-heptyyni-2,5-diamiini (R,R-MAP), ha-20 vaitaan nopeampi ja vaikuttavampi spermiinin loppuun kuluminen.

Keksinnän mukaisesti valmistettujen yhdisteiden on myös todettu kykenevän hidastamaan kasvainsolujen jakaantumista, kun niitä on testattu normaalisti käytettävissä eläinten 25 kasvainmalleissa. Eräs suositeltava näiden yhdisteiden käyttötapa on käyttää niitä yhdessä DFMO:n tai /R,R7-MAP:in kanssa tai yhdessä muiden hoitomenetelmien tai -aineiden kanssa, joiden tiedetään vaikuttavan polyamiinien aineenvaihduntaan hoidettaessa eläinten kasvaimia. Kun täs-30 sä käytetään termiä eläimet, tarkoitetaan sillä lämminverisiä eläimiä, kuten esimerkiksi hiiriä, rottia, koiria, kissoja, marsuja, lehmiä, hevosia ja ihmisiä.

Keksinnön mukaisesti valmistettuja yhdisteitä voidaan käyttää sekä ennaltaehkäisyyn että varsinaiseen hoitoon. Hoitotar-35 koituksessa annettavan aktiivisen aineen määrä voi vaihdella 10 8481 6 laajojen rajojen sisällä ja määräytyy sellaisten tekijöiden kuin hoidettavan eläinlajin, sen iän, terveyden, sukupuolen, painon, luonteen ja hoidettavan tilan vakavuuden perusteella. Yleensä annettava, hoidollisesti tehokas mää-5 rä aktiivista ainetta on väliltä noin 0,2 - 5 g ja mieluimmin väliltä 0,5 - 3 g päivässä. Ennaltaehkäisytarkoitukseen voidaan käyttää vastaavia pienempiä annoksia; väliltä 0,05 - 2 g päivässä.

Kun antaminen tapahtuu yhdessä muiden ornitiinide-10 karboksylaasin inhibiittoreiden, kuten esimerkiksi DFMO:n tai /R,R7-MAP:in kanssa, annetaan gem-difluori-1,8-di-amino-4-atsaoktaania 0,1 - 4 g ja ornitiinidekarboksylaa-sin inhibiittoria 0,5 - 10 g päivässä.

Keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet voidaan antaa 15 suun kautta. Esimerkiksi sopiva annostustaso on suun kautta annettaessa väliltä 2-50 mg kg kohti ruumiin painoa. Mieluimmin annetaan gem- difluori-1,8-diamino-4-atsaok-taania suun kautta 10-20 mg kg kohti päivässä jaettuina annoksina. Silloin kun lääke annetaan ruoansulatuskanavan 20 ulkopuolisesta, käytetään vastaavia pienempiä annoksia.

Kun antaminen tapahtuu yhdessä ornitiinidekarboksylaasin inhibiittoreiden kanssa, voidaan yhdisteet antaa normaa-. . leissa annostusyksikkömuodoissa, kuten esimerkiksi tab letteina, kapseleina, rakeina, pastilleina, eliksiireinä, 25 emulsioina, suspensioina ja erilaisina laskimon sisään, lihakseen tai ihon sisään tarkoitettuina suspensioina.

Parhaana pidetty annostusmuoto on tabletti tai kapseli. Yhden annostusyksikön sisältämä määrä aktiivista ainetta vaihtelee luonnollisesti, riippuen käytettävästä ni-30 menomaisesta 7,7-difluori-1,8-diamino-4-atsaoktaanista ja kysymyksessä olevasta annostusmuodosta. Yleensä annos-tusyksikkö sisältää 10-500 mg aktiivista aineosaa erilaisten mukana olevien farmaseuttisten kantaja-aineiden lisäksi. Tabletit, jotka sisältävät 100-400 mg aktiivista aine-35 osaa, ovat parhaana pidetty annostusyksikkö, ja voidaan antaa kaksi, kolme tai neljä kertaa päivässä.

n 84816

Valmistettaessa kiinteitä annostusmuotoja, kuten esimerkiksi tabletteja, sekoitetaan aktiivinen aineosa yleensä tavanomaisten farmaseuttisten kantaja- tai täyteaineiden, kuten esimerkiksi gelatiinin, erilaisten tärkke-5 lysten, laktoosin, kalsiumfosfaatin tai jauhemaisen sokerin kanssa. Termillä farmaseuttinen kantaja-aine tarkoitetaan tässä myös liukastavia aineita, joita käytetään parantamaan tablettimäärien solumista ja jotka estävät tablet-timateriaalin tarttumisen tablettimuottien ja lävistimien 10 pintoihin. Sopivia liukastavia aineita ovat esimerkiksi talkki, steariinihappo, kelsiumstearaatti, magnesiumstea-raatti ja sinkkistearaatti. Farmaseuttisen kantaja-aineen määritelmään sisältyvät tässä myös hajottavat aineet, joita lisätään edistämään tablettien rikkoutumista ja liuke-15 nemista antamisen jälkeen, samoin kuin väriaineet ja/tai makua parantavat aineet, joilla pyritään parantamaan tablettien esteettisiä ominaisuuksia ja tekemään ne potilaalle miellyttävämmiksi.

Sopivia nestemäisiä kantaja-aineita valmistettaes-20 sa nestemäisiä annostusyksikkömuotoja ovat vesi ja sellaiset alkoholit kuin etanoli, bentsyylialkoholi ja polyety-leenialkoholit, joko lisäten pinta-aktiivista ainetta tai ilman tällaista. Yleensä ovat parhaina pidettyjä nestemäisiä kantaja-aineita, erityisesti ruiskeiksi tarkoitettuihin 25 valmisteisiin vesi, fysiologinen suolaliuos, dekstroosi- ja glykoliliuokset, kuten esimerkiksi propyleeniglykolin vesi-liuos tai polyetyleeniglykolin vesiliuos. Nestemäiset valmisteet, jotka on tarkoitettu käytettäviksi steriileinä ruiskeliuoksina, sisältävät yleensä noin 0,5 - 25 paino-% 30 ja mieluimmin noin 1-10 paino-% aktiivista aineosaa liuoksessa. Eräissä ulkoisesti käytettävissä ja ruoansulatuskanavan ulkopuolisesta käytettävissä valmisteissa käytetään erilaisia öljyjä kantaja- tai täyteaineina. Esimerkkejä tällaisista öljyistä ovat mineraaliöljyt, glyseridi-35 öljyt, kuten esimerkiksi laardiöljy, turskanmaksaöljy, maapähkinäöljy, seesamiöljy, maissiöljy ja soijaöljy.

12 8481 6

Liukenemattomia yhdisteitä varten voidaan lisätä suspen-doivia aineita samoin kuin aineita, joiden avulla säädetään viskositeettiä, kuten esimerkiksi magnesiumalumiini-silikaattia tai karboksimetyyliselluloosaa. Näiden täyte-5 aineiden lisäksi voidaan myös lisätä puskureita, antiseptisiä aineita ja emulgoivia aineita.

Ruoansulatuskanavan ulkopuolisesta käytettävissä annostusyksikkömuodoissa annetaan aktiivisen aineen osuuden olla väliltä 0,05 - noin 20 paino-%, mieluimmin noin 10 0,1 - 10 paino-% koko nesteen koostumuksesta, jolloin toi nen komponentti tai muut komponentit ovat mitä tahansa yllä mainituista erilaisista farmaseuttisista täyteaineista. Jotta ärsytys ruiskutuskohdassa saataisiin mahdollisimman vähäiseksi tai poistettaisiin, voivat tällaiset valmisteet 15 sisältää ionoitumatonta pinta-aktiivista ainetta, jonka hydrofiili-lipofiilitasapaino (HLB) on noin 12-17. Pinta-aktiivisen aineen määrä on tällaisissa valmisteissa väliltä noin 5-15 paino-%. Pinta-aktiivinen aine voi olla yksi ainoa komponentti, jolla on yllä annettu HLB tai kahden 20 tai useamman sellaisen komponentin seos, joilla on haluttu HLB. Esimerkkejä pinta-aktiivisista aineista, jotka sopivat käytettäviksi ruoansulatuskanavan ulkopuolisesta käytettävissä valmisteissa, ovat rasvahappojen polyoksiety-leeni-sorbitaani-estereiden luokka, esimerkiksi sorbitaa-25 nimono-oleaatti, ja suuren molekyylipainon omaavat etylee-nioksidin adduktit hydrofobisen emäksen kanssa, jotka on valmistettu antamalla propyleenioksidin kondensoitua propyleeniglykolin kanssa.

Tässä kuvattua keksintöä valaisee yksityiskohtai-30 semmin seuraava valmistusesimerkki.

7,7-difluori-1,8-diamino-4-atsaoktaanin valmistus 2.2- difluori-1,4-butaanidioli 2.2- difluorimeripihkahappoa (120 g, 0,87 mol) ja 35 trifluorietikkahappoanhydridiä (540 ml) kuumennetaan palautus jäähdyttäen (hauteen lämpötila 80°C) kahden tunnin 13 8481 6 ajan. Suurin osa trifluorietikkahaposta tislataan pois käyttäen lyhyttä Vigreux-kolonnia, loput siitä poistetaan vakuumissa (12 rrunHg, 50°C) ja lopuksi käsittelemällä kaksi kertaa hiilitetrakloridilla. öljymäinen jäännös jähmet-5 tyy raaputettaessa petrolieetterin kanssa. Suodattamalla ja pesemällä petrolieetterillä saadaan 2,2-difluorimeri-pihkahappoanhydridi heikosti violetteina kiteinä; 98 g (92 %).

2,2-difluorimeripihkahappoanhydridi (98 g, 0,72 10 mol) liuotetaan dikloorimetaaniin ja lisätään hitaasti, sekoittaen metanoliin, joka on jäähdytetty jäähauteessa. Seosta pidetään huoneen lämpötilassa yön yli, haihdutetaan ja puhdistetaan kahdesti hiilitetrakloridilla, jolloin saadaan metyyli-2,2-difluorisukkinaatti heikosti ruskeh-15 tavana öljynä; 121 g (100 %).

4 litran pullossa, joka on varustettu palautus-jäähdyttäjällä ja 1 litran tiputussuppilolla, lisätään hitaasti kahden tunnin aikana liuos, jossa on BH^*Me2S-komp-leksia (10 M, 88 ml) kuivassa dikloorimetaanissa (1 1), 20 sekoitettuun liuokseen, jossa on metyyli-2,2-difluorisuk-kinaattia (120 g, 0,714 mol) kuivassa tetrahydrofuraanissa 20°C:ssa. Kun on kuumennettu (hauteen lämpötila 80°C) palautus jäähdyttäen noin 15 tunnin ajan, annetaan seoksen jäähtyä huoneen lämpötilaan ja lisätään hitaasti metanolia 25 (1 1). Haihdutettaessa saadaan metyyli-2,2-difluori-4- hydroksibutyraatti öljynä, joka pestään metanolilla (1 1) ja lopuksi käyttäen CCl^, jolloin saadaan keltainen öljy; 100 g (92 %).

Kylmään (0°C) liuokseen, jossa on natriumboorihyd-30 ridiä (10,3 g, 0,272 mol) etanolissa, lisätään hitaasti liuos, jossa on metyyli-2,2-difluori-4-hydroksibutyraattia (55 g, 0,36 mol) etanolissa, pitäen reaktioseoksen sisäinen lämpötila välillä -5 - 0°C, Seosta sekoitetaan tunnin ajan 0°C:ssa, minkä jälkeen lisätään varovaisesti suurinpiir-35 tein 4 N HCl-kaasun metalliliuos (200 ml). Natriumkloridi suodatetaan, metanoli poistetaan vakuumissa ja jäännös n 8481 6 liuotetaan etanoliin. Lisää natriumkloridia poistetaan taas suodattamalla (kalvosuodatin), ja haihduttamalla suodos saadaan yhdiste 2,2-difluori-1,4-butaanidioli värittömänä öljynä, kun tislataan Kugelrohr-laitteessa olosuhteissa; 5 150°C/0,05 mmHg; 41 g (90 %).

1-bentsyylioksi-2,2-difluoributyyliamiini Typpikaasun alla oleva liuos, jossa on 2,2-difluori-1 , 4-butaanidiolia (60 g, 0,476 mmol) ja bentsyylibromidia (81,8 g, 0,476 mol) tetrahydrofuraanissa, jäähdytetään jää-10 suolahauteessa sisäiseen lämpötilaan -5 - 0°C. Lisätään kiinteää kalium-tert-butoksidia (53,5 g, 0,477 mol) annoksittain, pitäen sisäinen lämpötila suurin piirtein 0°C:ssa. Kun on sekoitettu huoneen lämpötilassa yli yön, suodatetaan KBr pois ja liuotin haihdutetaan. Jäännös liuotetaan dikloo-15 rimetaaniin ja pestään 1 N HClrlla (kaksi kertaa) ja vedellä (kaksi kertaa). Kuivaamalla (Na2SO^) ja sen jälkeen haihduttamalla saadaan öljy; 106 g (hiukan enemmän kuin teorian mukaan; vähän CH2C12 jäljellä.)

Saatu materiaali on 1-bentsyylioksi-2,2-difluori-20 4-hydroksibutaanin ja 1-bentsyylioksi-3,3-difluori-4-hydr-oksibutaanin seos. Erottaminen suoritetaan kromatografiän avulla käyttäen piidioksidia (1 kg; eluentti: etyyliase-. . taatti/petrolieetteri 20:80; fraktion koko: 250 ml). Frak tiot 17-19 sisältävät 1-bentsyylioksi-3,3-difluori-4-hydr-25 oksibutaania (12,85 g, 12,5 %), fraktioista 25-40 saadaan 1-bentsyylioksi-2,2-difluori-4-hydroksibutaania (45,85 g) ja fraktioista 20-24 saadaan kummankin isomeerin seos (27,6 g). Tämä seos kromatografoidaan uudelleen (1 kg Si02; sama eluentti kuin yllä), jolloin saadaan vielä 16 g 30 1-bentsyylioksi-2,2-difluori-4-hydroksibutaani-isomeeriä öljynä, kokonaissaannon ollessa siten 62 g (60 %).

Liuokseen, jossa on 1-bentsyylioksi-2,2-difluori- 4-hydroksibutaania (50 g, 0,231 mol) ja kuivaa pyridiiniä (100 ml) dikloorimetaanissa jäähdytettynä jäähauteessa, 35 lisätään hitaasti liuos, jossa on metaanisulfonyyliklori-dia (26,52 g, 0,232 mol) dikloorimetaanissa (100 ml).

15 84816

Kun on sekoitettu huoneen lämpötilassa yli yön, pestään seos 2 N HCl-liuoksella (2x11) ja kaksi kertaa vedellä. Kuivaamalla ja sen jälkeen haihduttamalla liuotin saadaan 1-bentsyylioksi-2,2-difluori-4-metaanisulfonyylioksibutaa-5 ni keltaisena öljynä; 63,44 g (93 %).

Seosta, jossa on 1-bentsyylioksi-2,2-difluori-4-me-taanisulfonyylioksibutaania (63,44 g, 0,216 mol), kalium-ftaali-imidiä (44 g, 0,238 mol) ja kuivaa DMF (500 ml, tislattu Cal^n päältä) , sekoitetaan ja kuumennetaan 10 100°C:ssa. vähän ajan kuluttua seos jähmettyy ja lisä tään vielä kuivaa DMF (500 ml). Sen jälkeen kun on kuumennettu 90-100°C:ssa vielä 20 tuntia, poistetaan suolat suodattamalla ja DMF tislataan pois vakuumissa (öljypumppu). Jäännös liuotetaan dikloorimetaaniin (800 ml) ja pestään käyttäen 1 N KOH (kaksi kertaa) ja 1 N HCl (kaksi kertaa). Kuivaamalla (Na2SO^) ja haihduttamalla saadaan N-(4-bent-syylioksi-3,3-difluoributyyli)ftaali-imidi keltaisena öljynä; 68,5 g (92 %) .

Yhdistettä N-(4-bentsyylioksi-3,3-difluoributyyli)-ftaali-imidi (68,5 g, 198,6 mmol) ja hydratsiinihydraattia (10 g, 200 mmol) sekoitetaan ja kuumennetaan yön ajan etanolissa (200 ml) 90-100°C;ssa. Lisätään seos, jossa on väkevää HCl (94 ml) ja etanolia (1 130 ml) ja kuumentamista (90-100°C) jatketaan 1,5 tunnin ajan. Jäähdyttämisen jäl-^ keen (jäähaude) poistetaan ftaalihydratsidi suodattamalla ja suodos haihdutetaan. Jäännös otetaan veteen ja uutetaan eetterillä (2 x 500 ml). Kun on suodatettu kalvosuodatti-men (Millipore) läpi, saadaan haihduttamalla suodos valkeita kiteitä. Nämä liuotetaan etanoliin, liuos suodate-taan (Millipore orgaaninen) ja suodos haihdutetaan, jolloin saadaan jäännös, joka kiteytyy lisättäessä eetteriä; 34 g (68 %). Haihdutettaessa eetteriuutteet saadaan osittain kiteistä materiaalia (20 g), joka on lähtöainetta. Toistamalla tälle seokselle hydratsiinilla lohkaisu, 16 8481 6 saadaan toinen erä 4-bentsyylioksi-3,3-difluoributyyliamii-nia (9,1 g). Kokonaissaanto: 43,2 g (86,5 %).

1--ftaali-imido-4-p-tolueenisulfonyyli-7,7-difluori- 8-bentsyylioksi-4-atsaoktaani 5 yhdistettä 4-bentsyylioksi-3,3-difluoributyyliamii- ni, trietyyliamiinia (37 g, 0,37 mol) ja p-tolueenisulfo-nyylikloridia (33,8 g, 0,177 mol) sekoitetaan kuivassa di-kloorimetaanissa (600 ml) huoneen lämpötilassa yön ajan. Liuos pestään 1 N HCl-liuoksella (250 ml), vedellä (250 ml), 10 kuivataan (Na2S04) ja haihdutetaan, jolloin saadaan N-(4-bentsyylioksi-3,3-difluoributyyli)-p-tolueenisulfonyyli-amidia kiinteänä aineena 63,17 g (99,5 %).

Liuokseen, jossa on N-(4-bentsyylioksi-3,3-difluoributyyli) -p-tolueenisulfonamidia (63,17 g, 171,2 mmol) ja 15 natriumjodidia (3 g) kuivassa dimetyyliformamidissa (400 ml), lisätään kiinteää kalium-tert-butoksidia (19,2 g, 171 mmol) sekoittaen huoneen lämpötilassa. Lisätään yhdistettä 3-bromipropyyliftaali-imidi (46 g, 171 mmol) ja seosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa yön ajan. Suolat suoda-20 tetaan ja suodos haihdutetaan kuiviin. Jäännös otetaan di-kloorimetaaniin (500 ml), suodatetaan ja haihdutetaan kuiviin. Liuottamalla eetteriin (750 ml), pesemällä natrium-bisulfiitin vesiliuoksella (10 g/250 ml), vedellä (3 x 400 ml), kuivaamalla (Na2SC>4) ja haihduttamalla saadaan 25 1 —ftaali—imido—4—p—tolueenisulfonyyli—7,7—difluori—8—bent— syylioksi—4—atsaoktaania keltaisena öljynä (95,0 g, 99,8 %). Eetterin jäänteet poistetaan käsittelemällä kaksi kertaa kloroformilla ennen materiaalin käyttämistä seuraavaan vaiheeseen.

30 7,7-difluori-1,8-diamino-4-atsaoktaani

Typpikaasun alla lisätään hitaasti kuivaan dikloo-rimetaaniin (100 ml) liuotettua trimetyylisilyylijodidia (26 ml, 182,8 mmol) sekoitettuun liuokseen, jossa on 1-ftaali-imido-4-p-tolueenisulfonyyli-7,7-difluori-8-bent-35 syylioksi-4-atsaoktaania (95,0 g, 170,8 mmol) dikloorime-taanissa huoneen lämpötilassa. Kun on sekoitettu huoneen 17 8481 6 lämpötilassa yön ajan, lisätään hitaasti trietyyliamiinia (25 g, 0,25 mol) ja sekoittamista jatketaan yhden tunnin ajan. Seos pestään 1N HCl-liuoksella (500 ml), 10 % NaHSO^in vesiliuoksella (250 ml) ja vedellä (2 x 250 ml).

5 Kuivaamalla (Na2S04) saadaan ruskea öljy (83,8 g), joka NMR:n perusteella on pääasiallisesti 1-ftaali-imido-4-p-tolueenisulfonyyli-7,7-difluori-8-hydroksi-4-atsaoktaanin O-trimetyylisilyylijohdannaista. Tämä öljy liuotetaan me-tanoliin (100 ml) ja lisätään muutamia pisaroita kylläs-10 tettyä HCl-kaasun eetteriliuosta, jonka jälkeen tapahtuu kiteytyminen. Melkein valkeat 1-ftaali-imido-4-p-tolueeni-sulfonyyli-7,7-difluori-8-hvdroksi-4-atsaoktaanin kiteet kootaan ja pestään petrolieetterillä; 56,0 g (70,4 %).

Liuokseen, jossa on 1-ftaali-imido-4-p-tolueenisul-15 fonyyli-7,7-difluori-8-hydroksi-4-atsaoktaania (56,0 g, 120 mmol) ja kuivaa pyridiiniä (50 ml) kuivassa dikloori-metaanissa (400 ml), lisätään hitaasti huoneen lämpötilassa liuos, jossa on metaanisulfonyylikloridia (14,4 g, 1,05 ekvivalenttia) dikloorimetaanissa. Kun on sekoitettu 20 yön ajan huoneen lämpötilassa, pestään seos 1 N HCl-liuoksella (500 ml), 10 % NaHSO^in vesiliuoksella (250 ml) ja vedellä (250 ml). Kuivaamalla (Na2SC>4) ja haihduttamalla liuotin saadaan öljy, joka jähmettyy öljypumppuvakuumissa. Uuttamalla lämmittäen asetoni/sykloheksaaniseoksella saa-25 daan 1-ftaali-imido-4-p-tolueenisulfonyyli-7,7-difluori-8-metaanisulfonyylioksi-4-atsaoktaanin värittömiä kiteitä.

Yhdistettä 1-ftaali-imido-4-p-tolueenisulfonyyli- 7,7-difluori-8-metaanisulfonyylioksi-4-atsaoktaani (61,18 g, 112,5 mmol), kaliumftaali-imidiä (30,5 g, 165 30 mmol) ja kuivaa dimetyyliformamidia (500 ml) sekoitetaan ja kuumennetaan 120°C:ssa 72 tunnin ajan. Jäähdyttämisen jälkeen poistetaan suolat suodattamalla ja liuotin poistetaan vakuumissa. Jäännös otetaan dikloorimetaaniin (500 ml) ja pestään 2 N NaOH-liuoksella (350 ml, emulsioita) ja ve-35 dellä (2 x 350 ml). Kuivaamalla (Na2S04) ja haihduttamalla saadaan öljy, josta puhdistamalla kloroformi/sykloheksaa- ie 8481 6 nilla saadaan kiinteä vaahto; 58,95 g (88 %), hygroskooppista , 1,8-diftaali-imido-4-p-tolueenisulfonyyli-7,7-di-fluori-4-atsaoktaania.

yhdistettä 1,8-diftaali-imido-4-p-tolueenisulfonyy-5 li-7,7-difluori-4-atsaoktaani (58,95 g, 99,07 mol) ja 1 M hydratsiinihydraatin etanoliliuosta (235 ml, 235 mmol) sekoitetaan ja kuumennetaan 90°C:ssa yön yli. Lisätään väkevää HCl (150 ml) ja kuumentamista (90°C) ja sekoittamista jatketaan 45 minuutin ajan. Sen jälkeen kun on jäähdytetty 10 huoneen lämpötilaan, poistetaan ftaalihydratsidi suodattamalla ja liuotin haihdutetaan. Jäännös liuotetaan veteen, liuos suodatetaan ja haihdutetaan, jolloin saadaan jäännös, joka jähmettyy, kun sitä on puhdistettu asetonilla. Tämä materiaali liuotetaan veteen (300 ml), lisätään NaOH:n ve-15 siliuosta (25 g NaOH/150 ml vettä) ja seos uutetaan dikloo-rimetaanilla (3 x 400 ml). Pesemällä vedellä (200 ml), kuivaamalla (Na2SC>4) ja haihduttamalla liuotin saadaan keltainen öljy, 35,0 g, joka liuotetaan 6 N HCl-liuokseen (300 ml), haihdutetaan ja pestään etanolilla (kaksi kertaa), 20 CCl^lla (kaksi kertaa) ja asetonilla (kaksi kertaa), jolloin saadaan 1,8-diamino-4-p-tolueenisulfonyyli-7,7-di-fluori-4-atsaoktaania valkeana kiinteänä aineena. Tämä yhdiste uudelleenkiteytetään liuottamalla se mahdollisimman pieneen määrään metanolia ja lisäämällä asetoni/eetteriä; 25 31,3 g (78 %).

Näin saatua 1,8-diamino-4-p-tolueenisulfonyyli-7,7-difluori-4-atsaoktaania kuumennetaan palautusjäähdyttäen :: 100 ml:n kanssa 48 % HBr:n vesiliuosta 20 tunnin ajan. Kun on jäähdytetty huoneen lämpötilaan, uutetaan liuos huolel-30 lisesti eetterillä (5 x 300 ml). Sen jälkeen kun liuotin on haihdutettu, poistetaan vapaan HBr:n jäänteet puhdistamalla kaksi kertaa vedellä; puhdistettaessa etanolilla ki-teytyy haluttu 7,7-difluori-1,8-diaminoatsaoktaani trihyd-robromidina. Uuttamalla lämmittäen asetonilla saadaan val-35 keitä kiteitä,jotka pestään asetonilla, pienellä määrällä etanolia ja lopuksi eetterillä; 12,85 g (95 %).

i9 8481 6

Analyysi yhdisteelle :

Laskettu: C 19,83 H 4,75 N 9,91 Saatu: C 19,83 H 4,58 N 9,93 6,6-difluori-1,8-diamino-4-atsaoktaanin valmistus 5 1-bentsyylioksi-3,3-difluoributyyljämiini

Yhdiste 1-bentsyylioksi-3,3-difluori-4-hydroksibu-taani (17 g, 78,7 mM), joka on saatu siten kuin edellisessä esimerkissä on kuvattu 4-bentsyylioksi-3,3-difluoribu-tyyliamiinin valmistuksen yhteydessä, liuotetaan kuivaan 10 pyridiiniin (35 ml) ja dikloorimetaaniin (100 ml) ja lisätään hitaasti, sekoittaen metaanisulfonyylikloridia (9 g, 78,6 mM). Seos pidetään huoneen lämpötilassa yön yli. Sen jälkeen kun on vielä lisätty dikloorimetaania, pestään seos 1 N HCl-liuoksella (kaksi kertaa), vedellä (kaksi kertaa) 15 jakuivataan Na2SO^:n avulla. Liuos haihdutetaan, jolloin saadaan 1-metaanisulfonyylioksi-2,2-difluori-4-bentsyyli-oksibutaania öljynä; 22,8 g (98 %).

Yhdistettä 1-metaanisulfonyylioksi-2,2-difluori-4-bentsyylioksibutaani (21,8 g, 74,1 mM), kuivaa DMF (100 ml) 20 ja kaliumftaali-imidiä (15,26 g, 10 %:n ylimäärä) sekoitetaan ja kuumennetaan 120°C:ssa typpikaasun alla viiden päivän ajan. Sen jälkeen kun on lisätty vettä (500 ml), seos uutetaan eetterillä. Orgaaninen faasi pestään 1 N HCl-liuoksella ja sen jälkeen vedellä (kaksi kertaa), kuivataan 25 (Na2S04) ja konsentroidaan noin 100 ml:n tilavuuteen. Kun on lisätty petrolieetteriä, tapahtuu kiteytyminen. Kun on jäähdytetty kolmen tunnin ajan 5°C:ssa, saadaan yhdisteen N-(4-bentsyylioksi-2,2-difluoributyyli)ftaali-imidi hiekanvärisiä kiteitä, suodatetaan ja pestään petrolieetterillä; 30 18 g (70 %).

Yhdistettä N-(4-bentsyylioksi-2,2-difluoributyyli)-ftaali-imidi (8,97 g, 26 mM) ja 1 M hydratsiinihydraatin etanoliliuosta (26 ml) sekoitetaan ja kuumennetaan palautus jäähdyttäen. Muutaman minuutin kuluttua huomataan run-35 sas saostuma. Sekoittamista ja kuumentamista (hauteen lämpötila: 90-100°C) jatketaan yli yön. Lisätään etanolia 20 8481 6 (220 ml) ja väkevää HC1 (18 ml) ja seosta kuumennetaan palautusjäähdyttäen vielä 1,5 tunnin ajan. Jäähdyttämisen jälkeen (jää) suodatetaan ftaloyylihydratsidi ja suodos haihdutetaan. Jäännös liuotetaan veteen, suodatetaan ja 5 liuos haihdutetaan jälleen. Jäljellä oleva vesi poistetaan puhdistamalla etanolilla (kaksi kertaa) ja CCl^rllä (kaksi kertaa). Jäännös liuotetaan mahdollisimman pieneen määrään etanolia. Kiteytyminen tapahtuu lisättäessä vettä, josta 5°C:seen jäähdyttämisen jälkeen saadaan valkeita 10 4-bentsyylioksi-2,2-difluoributyyliamiinin hydrokloridi-suolan kiteitä; 5,16 g (79 %).

1-ftaali-imido-4-p-tolueenisulfonyyli-6,6-difluori- 8-bentsyylioksi-4-atsaoktaani

Liuokseen, jossa on 4-bentsyylioksi-2,2-difluoribu-15 tyyliamiinia (5,16 g, 20,5 mM) ja trietyyliamiinia (4,4 g, 43,4 mM) kuivassa dikloorimetaanissa, lisätään tolueeni-sulfonyylikloridia (4,14 g, 21,7 mol). Seosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa yön ajan. Lisätään vielä dikloorime-taania ja orgaaninen faasi pestään 1 N HCl-liuoksella ja 20 sen jälkeen vedellä. Kuivaamalla (Na2SO^) ja haihduttamalla liuotin saadaan valkea kiinteä aine, joka liuotetaan pieneen määrään eetteriä. Lisättäessä petrolieetteriä saadaan yhdiste N-(4-bentsyylioksi-2,2-difluoributyyli)-p-tolueenisulfonamidi valkeina kiteinä; 7,0 g (92 %).

25 Liuokseen, jossa on N-(4-bentsyylioksi-2,2-difluori butyyli) -p-tolueenisulfonamidia (7,0 g, 19 mM) kuivassa DMF:ssä (20 ml), lisätään kalium-tert-butoksidia (2,34 g, 21 mmol) ja seosta sekoitetaan 30 minuutin ajan. Tähän seokseen lisätään N-3-bromipropyyliftaali-imidiä (5,1 g, 30 19 mmol) ja natriumjodidia (0,33 g) ja koko seosta sekoi tetaan sitten yön ajan typpikaasun alla huoneen lämpötilassa. Sen jälkeen kun on lisätty suolavettä, seos uutetaan eetterillä, pestään 1 N HCl-liuoksella (kaksi kertaa), sitten suolavedellä (kaksi kertaa) ja kuivataan käyttäen 35 ^28()4. Haihdutettaessa liuotin saadaan 1-ftaali-imido-4- p-tolueenisulfonyyli-6,6-difluori-8-bentsyylioksi-4- 21 8481 6 atsaoktaani öljynä, joka kiteytyy raaputettaessa eetteri/ petrolieetterin kanssa muodostaen valkeita kiteitä; 9,5 g (90 %).

1-ftaali-imido-4-p-tolueenisulfonyyli-6,6-difluori-5 8-metaanisulfonyylioksi-4-atsaoktaani

Liuosta, jossa on 1-ftaali-imido-4-p-tolueenisulfo-nyyli-6,6-difluori-8-bentsyylioksi-4-atsaoktaania (9,5 g, 17,1 mM) ja trimetyylisilyylijodidia (2,7 ml, 10 %:n ylimäärä) kuivassa dikloorimetaanissa, sekoitetaan yli yön 10 huoneen lämpötilassa typpikaasun alla. Lisätään trietyyli-amiinia (3 g) ja sekoittamista jatketaan tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Sen jälkeen kun on vielä lisätty dikloo-rimetaania, pestään reaktioseos 1 N HCl-liuoksella (kaksi kertaa), NaHS03:n vesiliuoksella (kaksi kertaa), suolave-15 dellä (kaksi kertaa) ja kuivataan (^230^). Liuottimet poistetaan haihduttamalla, jolloin saadaan öljy. Tämä öljy liuotetaan metanoliin ja lisätään 1 ml 9 N HCl:n metanoli-liuosta. Seos haihdutetaan ja sitä puhdistetaan kaksi kertaa CCl^:llä, jolloin saadaan Öljy, josta raaputtamalla 20 eetteri/petrolieetterin kanssa saadaan 1-ftaali-imido-4-p-tolueenisulfonyyli-6,6-difluori-8-hydroksi-4-atsaoktaani heikosti violetteina kiteinä; 6,8 g (85 %).

Seokseen, jossa on 1-ftaali-imido-4-p-tolueenisul-fonyyli-6,6-difluori-8-hydroksi-4-atsaoktaania (6,75 g, 25 14,5 mM), kuivaa dikloorimetaania (25 ml) ja kuivaa pyri- diiniä (10 ml), lisätään hitaasti sekoittaen liuos, jossa on metaanisulfonyylikloridia (1,7 g) dikloorimetaanissa (25 ml). Reaktioseos pidetään huoneen lämpötilassa yli yön, lisätään vielä dikloorimetaania ja reaktioseos pestään 1 N 30 HCl-liuoksella (kaksi kertaa) ja sitten suolavedellä (kaksi kertaa). Saatu liuos kuivataan (Na2SO^) ja liuotin haihdutetaan, jolloin saadaan öljy. Raaputettaessa tätä öljyä eetteri/petrolieetterin kanssa, saadaan yhdiste 1-ftaali-imido-4-p-tolueenisulfonyyli-6,6-difluori-8-metaanisulfo-35 nyylioksi-4-atsaoktaani valkeina kiteinä; 7,64 g (97 %).

22 8481 6 6,6-difluori-1,8-diamino-4-atsaoktaani

Typpi-ilmakehän alla olevaa seosta, jossa on 1-ftaa-li-imido-4-p-tolueenisulfonyyli-6,6-difluori-8-metaanisul-fonyylioksi-4-atsaoktaania (7,6 g, 14 mM), kaliumftaali-5 imidiä (2,85 g, 10 %:n ylimäärä) ja kuivaa DMF (20 ml), sekoitetaan ja kuumennetaan 90°C:ssa 20 tunnin ajan. Sen jälkeen kun on lisätty vettä (noin 100 ml), reaktioseos uutetaan dikloorimetaanilla, pestään 1 N KOH-liuoksella (kaksi kertaa) ja kuivataan (Na2SO^), Liuottimet poistetaan haih-10 duttamalla, jolloin saadaan öljy (8,7 g), joka pikakromato-grafoidaan käyttäen piidioksidia (300 g, eluentti: etyyli-asetaatti/petrolieetteri, 50: 50) keräten 100 ml:n fraktioita. Fraktiot 15-29 yhdistetään ja liuotin haihdutetaan, jolloin saadaan 1,8-diftaali-imido-4-p-tolueenisulfonyyli-15 6,6-difluori-4-atsaoktaani, joka kiteytyy seisotettaessa; 6,62 g (80 %).

Näin saatua 1,8-diftaali-imido-4-p-tolueenisulfonyy-li-6,6-difluori-4-atsaoktaania (6,62 g, 11,1 mM) yhdessä 1 N hydratsiinihydraatin etanoliliuoksen kanssa (22,5 ml) 20 sekoitetaan yön ajan typpikaasun alla 100°C:ssa. Liuotin poistetaan alennetussa paineessa ja jäännöstä kuumennetaan palautusjäähdyttäen etanolin (30 ml) ja väkevän HCl:n (30 ml) kanssa 1,5 tunnin ajan. Jäähdyttämisen jälkeen (jää) suodatetaan ftalyylihydratsidi ja suodos haihdute-25 taan. Jäännös otetaan veteen (20 ml) ja suodatetaan käyttäen kalvosuodatinta (Millipore). Suodos pestään vedellä, liuottimet haihdutetaan ja jäännöstä puhdistetaan etanolilla (kaksi kertaa) ja CCl^:llä (kaksi kertaa). Kun on lisätty asetonia, alkaa tuotteen 1,8-diamino-4-p-tolueenisulfonyy-30 li-6,6-difluori-4-atsaoktaani kiteytyminen, joka tapahtuu loppuun lisättäessä eetteriä, jolloin saadaan heikosti hiekanvärisiä kiteitä; 4,6 g (kvantitatiivinen saanto).

Näin saatua 1,8-diamino-4-p-tolueenisulfonyyli-6,6-difluori-4-atsaoktaania (4,6 g) kuumennetaan 47 % HBr:n 35 vesiliuoksen kanssa (100 ml) 100°C:ssa (hauteen lämpötila) 20 tunnin ajan. Kun on jäähdytetty jään avulla, uutetaan 23 8481 6 liuos kolme kertaa eetterillä. Vesiliuos haihdutetaan ja jäännöstä puhdistetaan vedellä (kaksi kertaa), CCl^rllä (kaksi kertaa) ja etanolilla (kaksi kertaa). Jäännöstä uutetaan lämmittäen pienellä määrällä etanolia ja asetonia 5 kiteytymisen aikaansaamiseksi. Näin saadut kiteet pestään etanolilla, asetonilla ja eetterillä, jolloin saadaan haluttu 1,8-diamino-6,6-difluori-4-atsaoktaani valkeina kiteinä, 4,2 g (88 %).

Analyysi yhdisteelle C7H20Br3F2N3: 10 Laskettu: C 19,83 H 4,75 N 9,91

Saatu: C 19,70 H 4,50 N 9,83 2,2-difluori-1,8-diamino-4-atsaoktaanin valmistus 1-ftaali-imido-2,2-difluori-3-buteeni Sekoitettuun seokseen, jossa on 2,2-difluori-1,4-15 butaanidiolia (12,97 g, 103 mM), kuivaa pyridiiniä (65 ml) ja dikloorimetaania (200 ml), lisätään hitaasti liuos, jossa on metaanisulfonyylikloridia (23,6 g) dikloorimetaa-nissa (50 ml). Sekoittamista jatketaan yli yön. Reaktio-seos pestään 2 N HCl-liuoksella (kaksi kertaa) ja sen jäl-20 keen 10 % NaHCO^n vesiliuoksella, kunnes se on neutraali ja sitten vedellä. Orgaaninen kerros kuivataan (MgSO^) ja haihduttamalla liuottimet saadaan kellertävä öljy. Kitey-. . tyminen saadaan aikaan raaputtamalla öljyä kuivan eette rin kanssa, jolloin saadaan yhdiste 1,4-bis-metaanisulfo-25 nyylioksi-2,2-difluoributaani valkeina kiteinä; 22,3 g (77 %) .

Yhdistettä 1,4-bis-metaanisulfonyylioksi-2,2-di-fluoributaani (20 g, 71 mM) ja diatsabisykloundekeeniä (21,6 g, 142 mM) sekoitetaan kuivan tetrahydrofuraanin 30 (150 ml) kanssa ja kuumennetaan 80°C:ssa typpikaasun alla yli yön. Liuottimet poistetaan vakuumissa ja jäljelle jäänyt öljy liuotetaan dikloorimetaaniin, pestään 1 N HCl-liuoksella (kaksi kertaa), suolavedellä (kaksi kertaa) ja kuivataan (Na2S04). Haihduttamalla liuottimet saadaan yh-35 diste 1-metaanisulfonyyli-2,2-difluori-3-buteeni öljynä; 11,2 g (85 %).

2* 84816

Yhdistettä 1-metaanisulfonyyli-2,2-difluori-3-bu-teeni (11,2 g, 60,2 mM), kaliumftalidia (12,3 g, 66,4 mM) ja kuivaa dimetyyliformamidia (30 ml) sekoitetaan ja kuumennetaan (hauteen lämpötila 110°C) typpikaasun alla 120 5 tunnin ajan. Kun on jäähdytetty huoneen lämpötilaan, saos-tetaan raaka reaktiotuote lisäämällä vettä (noin 300 ml), suodatetaan ja liuotetaan se dikloorimetaaniin. Dikloori-metaaniliuos pestään 1 N kaliumhydroksidiliuoksella (kaksi kertaa), vedellä (kaksi kertaa), kuivataan (Na2SO^) ja 10 haihdutetaan, jolloin saadaan 1-ftaali-imido-2,2-difluori- 3-buteeni hiekanvärisinä kiteinä; 11,9 g (83 %).

1-p-tolueenisulfonamino-2,2-difluori-3-buteeni |||« * — — * — — ' "* " *" *~~

Yhdistettä 1-ftaali-imido-2,2-difluori-3-buteeni (11,4 g, 48,1 mM) kuumennetaan 20 tunnin ajan. Jäähautees-15 sa jäähdyttämisen jälkeen poistetaan ftaalihappo suodattamalla ja suodos haihdutetaan. Näin saatu jäännös liuotetaan veteen, uutetaan eetterillä (kaksi kertaa), haihdutetaan kuivaksi ja puhdistetaan isopropanolin avulla. Hiertämällä eetterin kanssa saadaan 1-amino-2,2-difluori-3-bu-20 teenin hydrokloridisuola hygroskooppisina kiteinä; 6,12 g (88 %).

Sekoitettuun seokseen, jossa on 1-amino-2,2-difluo-ri-3-buteenihydrokloridia (6,1 g, 42,5 mM), 50 ml kuivaa dikloorimetaania ja trietyyliamiinia (8,74 g, 2 ekvivalent-25 tia), kaikki jäähauteessa jäähdytettyinä, lisätään hitaasti liuos, jossa on tosyylikloridia (8,1 g, 1 ekvivalentti) 50 ml:ssa dikloorimetaania. Sekoittamista jatketaan huoneen lämpötilassa yli yön, reaktioseokseen lisätään vielä dikloorimetaania ja saatu orgaaninen kerros pestään 1 N 30 HCl-liuoksella (kaksi kertaa), vedellä (kaksi kertaa) ja kuivataan (Na^O^). Haihduttamalla liuotin saadaan ruskea puolijähmeä aine (9,66 g), joka puhdistetaan pikakromato-grafian avulla käyttäen piidioksidia (300 g, eluentti: etyyliasetaatti/petrolieetteri, 20 *80; fraktion koko 100 ml). 35 Fraktiot 17-25 yhdistetään ja haihdutetaan, jolloin saadaan 1-p-tolueenisulfonamino-2,2-difluori-3-buteeni 25 8481 6 valkeina kiteinä; 4,8 g (43 %). Haluttu yhdiste voidaan uudelleenkiteyttää eetteri/petrolieetteristä, jolloin saadaan hyvin ohuita puuvillaraaisia neulasia.

Analyysi yhdisteelle C^H^2F2N02S: 5 Laskettu: C 50,56 H 5,02 N 5,36

Saatu; C 50,93 H 5,02 N 5,45 Noudattamalla pääosiltaan samanlaista menetelmää valmistettaessa 7,7-difluori-1,8-diamino-4-atsaoktaani ja 6,6-difluori-1,8-diamino-4-atsaoktaani, nimittäin alkyloi-10 maila 1--metaanisulfonyyli-2,2-dif luoributeeni 4-bromibu-tyyliftaali-imidillä; hapettamalla kaksoissidos karboksyy-lihapoksi; pelkistämällä karboksyylihappo primääriseksi alkoholiksi boraanimetyylisulfidikompleksin avulla; mesyloi-malla primäärinen alkoholi; antamalla mesyylijohdannaisen 15 reagoida kaliumftaali-imidin kanssa, jotta saataisiin vastaava 1,8-diftaali-imidojohdannainen; ja poistamalla suo-jaavat ftaloyyli- ja tosyyliryhmät; saadaan haluttu yhdiste, 2,2-difluori-1,8-diamino-4-atsaoktaani.

7,7-difluori-1,8-diamino-4-atsaoktaanin solujen li-20 sääntymistä vastustavan vaikutuksen osoittaminen

Morris-rotan hepatooma 7288C (HTC) -soluja kasvatetaan rutiininomaisesti suspensioviljelmänä Swim'in 77 -elatusaineessa, johon on lisätty 10 % (tilavuus/tilavuus) dialysoitua hevosen seerumia, 11,0 mM glukoosia, 2 mM glu-25 tamiinia, 0,057 mM kystiiniä, 5,9 mM NaHCO^ ja 50 mM

N-tris(hydroksimetyyli)metyyliglysiiniä. HTC-soluviljelmiä inkuboidaan siten, että läsnä on 10 ^um yhdistettä 7,7-di-fluori-1,8-diamino-4-atsaoktaani tai ilman tätä yhdistettä ja havainnoidaan 11 päivän ajan.

30 Soluviljelmän elatusaine vaihdetaan päivinä 2, 4, 7 ja 9, jotta solut saataisiin pidettyä logaritmisen kasvun vaiheessa. Solujen lukumäärä määritetään kulloinkin laskemalla solut ja suhteellinen solusaalis lasketaan ottaen huomioon käytetyt laimennuskertoimet. Solujen lisääntymisen 35 inhiboitumisprosentti lasketaan seuraavan lausekkeen mukaan: 26 8481 6

100 - 100 Ntn-NtO

N n-N O c c jossa 5 NO on kontrolliviljelmien suhteellinen kasvu, kun aika = 0 N n on kontrolliviljelmien suhteellinen kasvu, kun ai- v ka = n N^O on testiviljelmien suhteellinen kasvu, kun aika = 10 O, ja N^n on testiviljelmien suhteellinen kasvu, kun aika = n

Kloonien muodostustehokkuus on elinkykyisyyden mitta, jota käytetään määrittämään, toimiiko testattava yhdiste solun kasvua ehkäisevänä aineena vai solumyrkkynä. Kloo-15 nien muodostustehokkuus määritetään kylvämällä 0,25 - 1,25 x 3 10 solua 60 mm:n muovisiin petrimaljoihin, jotka kukin sisältävät 5 ml seuraavaa kloonin muodostuselatusainetta: Swim'in 77 -elatusainetta, johon on lisätty 10 % (tilavuus/ tilavuus) hevosen seerumia, 11 mM glukoosia, 2 mM glutamii-20 nia, 0,057 mM kystiiniä, 1,8 mM CaCl2, 17,5 mM NaHCO^ ja 1 mM N-tris(hydroksimetyyli)metyyliglysiiniä. Petrimaljoja inkuboidaan 37°C:ssa kosteutetussa viljelykaapissa C02/ ilma-ilmakehässä (5 %, tilavuus/tilavuus) 12 päivän ajan ja elinkykyiset solupesäkkeet lasketaan tuona ajankohtana ja 25 niitä verrataan kontrolliin. Tulokset ilmaistaan elinkykyisten solupesäkkeiden inhiboitumisprosenttina.

Taulukko 1 osoittaa, että lisättäessä viljely-alustaan 10 yuM 7,7-difluori-1,8-diamino-4-atsaoktaania on solujen lisääntyminen estynyt 97 %:lla kun on kulunut 11 30 päivää.

Lisäksi neljä päivää testattavan yhdisteen lisäämisen jälkeen on solujen elinkykyisyys vähentynyt 72 %.

27 8481 6 d :rt

jj G

rH (U #

.« d T3 I

Ή +JQJ-H I »— I I CM I CM tilli •H !ft M B w ^ Γ- > ·Η Λί d

g >1 :rO -M

^ λ: tn -H

o >i Cl) O

“ .y a, x> Λ d d -h y -h h x K H O d

►E pj UI -H

4j — — — — — — — — —--------— 0)

CO

d -H

+J G I

d >i w> d +j -h “i es

□ ;<C D

Π3 :ιΌ jj > m·^ ouoaor-cMicor^T-mr-^t-·' mo 'r cm « w e-* co (Ti eri eri <T» d ^ 5 C Λ d φ e

Π3 -n -H

d e o -n a n O G) r* (Λ 11)

O

en d

Jj Ι>Ί * ------------------ -A >1 5

| Γ* M

° G £ jj il -g o vo cm c^ ch g 'J ^ o^rcrvmm m t m h r cm

- . ? > r r (M 1Λ IA CM OO OO O MO O

O S £3 . . I -ro d o - - co d m <ö «ti 10) S g U ' .5 2 3* ·“< O en t>- Ch

π <-l -M o CO MO CM r- CO

Q)f—I ~ ~ ~ ~ | *v ’IS 0) Ti r- T- ro d- n o (J> cm r' en fl H +i 2 ^ in o o MO -i n 7 £ ·§ ΰ »- cm ro r» T- t- 2 co O *" 'rt ^ r- X. _ — _ _ ____ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _

i_, :O

M M

: ; O -M

M :<0 V) ft »3 — Or-CMCO'J-mvOr'OOCTlOr- • - S T— T— rH n3 d x : : rt τ| EH < 28 8 4 8 1 6

Taulukossa II on esitetty vaikutukset, jotka yhdisteellä 7,7-difluori-1,8-diamino-4-atsaoktaani (yhdiste A) on yhdessä L-ornitiinidekarboksylaasin irreversiibelin inhibiittorin /2R,5R/-6-heptyyni-2,5-diamiinin (yhdisteen 5 B) kanssa. Tämä koe osoittaa, että solujen lisääntymistä vastustavat vaikutukset, jotka on saatu lisäämällä viljelyalueeseen 100 ^uM /2R,5R/-6-heptyyni-2,5-diamiinia, ovat suurentuneet, kun läsnä on ollut 10 ^uM 7,7-difluori-1,8-diamino-4-atsaoktaania. Siten esimerkiksi solujen elin-10 kyky oli yhdistelmää käytettäessä vähentynyt 44 % kun oli kulunut yksi päivä.

29 8481 6 m + < O f Λ NOl C +9 VO 00

' « S

-n 4J

CS1 d tn

LO rH i *H

« w e £ (Ml m ~

G <t> OP

fö ω Td I

:m Λ je -jJ “ e

rn tfi d) *lH

to G ’i ^ § OJ Ov-CVmOJ

$3 M rt -P .2 ,-··-> S>1 01 ·ιΗ Ό m M <u o J= ^ £ g α λ x +J 3 -H d -h m Ή Ή Λ

Sc M g .S

λ; :rd 10 H

d E m-------- -P -H + da) «i Λί-Γ-ι O«-iVVO00 •H rH tl fH VO r- 00 nj -H c & > > ai +j 3 tn tn

_,—_ i ·ιΗ -H

c o l 2 — w jj £ I C t*> c u ;2 i c x «-H n

Sd ^3 3 ° ° ® ° £ 4Jcn c -h w ^rvor'-

,ν CO 0) O -H

0 c ^ IS 5 Hi ? to ϋ o c

p CO -H

td —

1 OQ

Ό· _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 0 G ffl G -H + •H G **· onoocvjo £ -H 4J O VO O IA C" td-H ai ~

•H S 0) r- .- CM CM CM

Ό <d *» • ·.: i -H 2 «? 3 -a

; - - “ 1 c -C

- - - T— LT) >> i” 1 ‘ “ : - ‘ -h cm fö M I _, - - O ·Η β d rj >1 G _ . ,Α

d Γ1 Ss, λ\ m Or-C^r-O

rlr*1? c m o σν <r ia cm MH >1 5 ω _ ^ ^ ^ _ •d -P pt1 'H, r r OI tn vf

Tl a -¾ -j tn

I <u g Ή -H

r- r -h a> ό

«. I r-1 dl -G

r~~ vo 0) -P ^

nC

M d

- - -.: h w -H

zj O N N ΙΛ O

O o o cv oo m vo - - · ,y £

y£ 4J r- r- Cl (s. V

3 § d *________ td . ' - En '<0

•H

>

•H

.:. wc S O r- OI (O ^ 10 - - - Π4

•H

< 3o 8481 6

Taulukossa III on esitetty vaikutukset, jotka on saatu käytettäessä yhdistelmänä 10 ^,uM yhdistettä 7,7-di-fluori-1,8-diamino-4-atsaoktaani (yhdiste A) ja 5 mM L-ornitiinidekarboksylaasin irreversiibeliä inhibiittoria 5 DL-OC-difluorimetyyliornitiinia (yhdistettä C) . Tämä koe osoittaa, että solujen lisääntymistä vastustavat vaikutukset olivat yhdisteiden A ja C yhdistelmää käytettäessä suuremmat kuin solujen lisääntymistä vastustavat vaikutukset, jotka saatiin käytettäessä yhdistettä A tai yhdistettä C 10 yksin.

31 8481 6 v < •h m o r>- ιο in σ» S n U) N ®

I CP

f I - .3 d S3 Q (o tn •n -m

:rtJ S

tn C £ mc c dl 3 :¾ 'd > kö jC oi m >i (0 £ f υ •P ^ c -H 5 O O «3- *- Q) C α)Π® ^vot^ tn :π3 ·η 3 ·Η * s Η 2

Hm o o $ -P CU co Λ C -n

Ai Ή

•H *H

(0 > > d

r~H

— o ____--------- 5 ? u u <

(H C-J

•H 22 4-5 O CO r— CO

£ V O IA Ok VO

ss s - - - ~« 4-) m h

Ai C 'O

° (0 g rt A! * (Λ -M -

(0 U

- ~ g

°5 I

cc S

•H -P ^ CJ

m Ti C O <\l CO r- (Ti 2 .H C S 5 10 *ί *.

TJ C >i C tn "" —Τ' _ i

VC^ -H -H r- .- CU O

ώ o X Tl S

: - - « ·Η >ι ή c

,— H Ai CU

I >i c <1)

•H >, -H -P

M -P Ή -C

0 0) <D d d e w

rH -H c -H

tln-π H o oj cu in o IJdL’ o ocTioocnvo V «“* r-* Vp «M, ^ 1 ^ ^ p r-^-OOP"^ P~ U-l O G _ - -H in O *“ f'· Ό I ^ H _ — _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _

----: M

H

- : O _

Ai »o .;. a< p : : d > τ! MU o r- OJ <n Mf 3 a

:· H

M

•H

< 32 8 4 81 6

Keksinnön mukaisesti valmistettuja fluorattuja yhdisteitä voidaan käyttää idinmagneettisen resonanssin (NMR:n) kuvausaineina, jotka ovat hyödyllisiä kas- 19 vainkudoksen löytämisessä ja diagnosoinnissa F -NMR in 5 vivo -spektroskopian avulla ja kasvaimen kuvaamisessa 19 F -NMR-kerroskuvauksen avulla. Vaikka kaikkia tässä esitettyjä fluorattuja yhdisteitä voidaan käyttää tällaisina NMR-aineina minkä tahansa imettäväisessä olevan kasvaimen löytämiseen ja sen tarkan sijainnin täsmälliseen 10 määrittämiseen, jotta se voitaisiin diagnosoida ja/tai sitä hoitaa, ovat ne yhdisteet, jotka ovat aktiivisimpia solujen lisääntymistä ja kasvaimia vastustavina aineina, parhaina pidettyjä kasvainten NMR-kuvausaineina. Toinen hyvänä pidetty NMR-kuvausaineiden ryhmä, joka on hyödylli-15 nen minkä tahansa imettäväisten kasvainten havaitsemisessa ja paikallistamisessa, ovat kaavan I mukaisten fluorattu-jen yhdisteiden valmistuksessa käytettävät difluoriväli-tuotteet, erityisesti 2,2-difluori-1,4-butaanidiamiini.

Tätä käyttötarkoitusta varten yhdisteitä voidaan antaa 20 määrä, joka on väliltä 0,2 - 5 g.

Claims (3)

33 8481 6

1. Menetelmä terapeuttisesti aktiivisten gem-di-fluori-1,8-diamino-4-atsaoktaanijohdannaisten valmistami-5 seksi, joilla on kaava (1) X Y \ ^ H2N-CH2-C-CH2-NH-CH2-C-C-CH2-NH2 (1) / \ / \ X Y X Y 10 jossa X ja Y edustavat vetyä tai fluoria sillä ehdolla, että molemmat fluorit ovat kulloinkin substituentteina yhdessä ja vain yhdessä hiiliatomissa, sekä niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, 15 tunnettu siitä, että (1) kun on kysymys 6,6-difluori- tai 7,7-difluori-johdannaisista, (a) 2,2-difluori-l,4-butaanidioli, jolla on kaava

20 HO-CH2-C-(CH2)2-OH / V F F saatetaan reagoimaan bentsyylibromidin kanssa, jolloin muodostuu vastaavan l-bentsyylioksi-2,2-difluori-4-hydrok-25 sibutaanin ja l-bentsyylioksi-3,3-difluori-4-hydroksibu- taanin seos, joita yhdisteitä esittää kaava X Y \ κ HO-CH2-C-C-CH2OBz / \

30. Y jossa X ja Y ovat yllä määritellyn mukaisia ja Bz edustaa bentsyyliryhmää; (b) erotetaan mainitut isomeerit, saatetaan vapaa 35 hydroksyyliryhmä reagoimaan metaanisulfonyylikloridin 34 8481 6 kanssa ja saatetaan näin saatu 1-bentsyylioksi-gem-difluo-ri-4-metaanisulfonyylibutaani reagoimaan kaliumftaali-imi-din kanssa, jolloin saadaan vastaava N-(4-bentsyylioksi-gem-difluoributyyli)ftaali-imidijohdannainen, jolla on 5 kaava X Y \ / PhtN-CH,-C-C-CH,OBz / \ X Y 10 jossa Pht edustaa ftaloyyliryhmää; (c) mainittu ftaali-imidi saatetaan reagoimaan hydratsiinin kanssa, jolloin muodostuu vastaava 4-bentsyy-lioksi-gem-difluoributyyliamiini, suojataan vapaa amiini 15 p-tolueenisulfonyylikloridilla, jolloin muodostuu vastaava N-(4-bentsyylioksi-gem-difluoributyyli )-p-tolueenisulfoni-amidijohdannainen, jolla on kaava X Y

20 HN-CH7-C^C-CH,OBz Tos X Y jossa Tos edustaa p-tolueenisulfonyyliryhmää; (d) alkyloidaan mainittu p-tolueenisulfoniamidijoh- 25 dannainen 3-bromiftaali-imidillä, jolloin muodostuu vas taava l-ftaali-imido-4-p-tolueenisulfonyyli-gem-difluori- 8-bentsyylioksi-4-atsaoktaanijohdannainen, jolla on kaava X Y \ /

30 PhtN- (CH, )3-N-CH,-C-C-CH2Bz

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetut yhdisteet ovat 6,6-difluori- tai 7,7-difluori-l,8-diamino-4-atsaoktaani-johdannaisia.

2. I /s 2 Tos X Y (e) lohkaistaan mainittu bentsyylioksiryhmä, jolloin muodostuu primäärinen alkoholi, saatetaan primäärinen 35 alkoholi reagoimaan metaanisulfonyylikloridin kanssa ja 35 8 4 81 6 saatetaan näin saatu l-ftaali-imido-4-p-tolueenisulfonyy-li-gem-difluori-8-metaanisulfonyylioksi-4-atsaoktaani reagoimaan kaliumftaali-imidin kanssa, jolloin saadaan vastaava 1,8-diftaali-imido-4-p-tolueenisulfonyyli-gem-5 di-fluori-4-atsaoktaanijohdannainen, jolla on kaava X Y \ / PhtN- (CH, )3-N-CH,-C-C-CH,-NPht i / V Tos X Y 10 f) kuumennetaan mainittua 1,8-diftaali-imido-4-p-tolueenisulfonyyli-gem-difluori-4-atsaoktaania hydratsii-nin kanssa etanolissa suojaavien ftaloyyliryhmien poistamiseksi, minkä jälkeen kuumennetaan HBr:n vesiliuoksen 15 kanssa suojaavan tosyyliryhmän poistamiseksi, jolloin saadaan haluttuja 6,6- tai 7,7-difluori-l,8-diamino-4-atsaok-taanijohdannaisia, joilla on kaava X Y \ ^

20 H2N-(CH2)3-NH-CH2-C-C-CH2-NH2 X Y ja (2) kun on kysymys 2,2-difluorijohdannaisista 25 (a) mainittu 2,2-difluori-l,4-butaanidioli saate taan reagoimaan kahden ekvivalentin kanssa metaanisulfo-nyylikloridia, jolloin muodostuu vastaava 1,4-bis-metaani-sulfonyylioksi-2,2-difluoributyyli, kuumennetaan diatsa-bissykloundekeenin kanssa, jolloin saadaan vastaava 1-me-30 taanisulfonyylioksi-2,2-difluori-3-buteeni, jolla on kaava MesO-CH,-C-CH=CH, / \ F F 35 jossa Mes merkitsee metaanisulfonyyliryhmää; 36 8 4 81 6 (b) saatetaan mainittu 1-metaanisulfonyylioksijohdannainen reagoimaan kaliumftaali-imidin kanssa ja lohkaistaan saatu ftaloyyliryhmä, jolloin saadaan vastaava 2,2-difluori-3-butenyyliamiini, jolla on kaava 5 H,N-CH,-C-CH=CH2 V \ F F (c) suojataan mainittu amiini p-tolueenisulfonyyli- 10 kloridilla ja alkyloidaan suojattu johdannainen 4-bromibu- tyyliftaali-imidillä, jolloin saadaan vastaava N-(4-ftaa-li-imidobutyyli)-N-(2,2-difluori-3-butenyyli)-p-tolueeni-sulfoniamidi, jolla on kaava

15 PhtN- ( CH, )4-N-CH,-C-CH=CH2 i / \ Tos F F (d) hapetetaan mainitun N-(4-ftaali-imidobutyyli)-johdannaisen kaksoissidos, minkä jälkeen pelkistetään bo- 20 raanimetyylisulfidikompleksilla, jolloin muodostuu vastaa va 8-ftaali-imido-4-p-tolueenisulfonyyli-2,2-difluori-4-atsaoktanoni, jolla on kaava PhtN-(CH, ),-N-CH2-C-CH2OH i / \ . 25 Tos F F (e) saatetaan mainittu 2,2-difluori-4-atsaoktanoli-johdannainen reagoimaan metaanisulfonyylikloridin kanssa, jolloin muodostuu vastaava l-metaanisulfonyylioksi-8-ftaa- 30 li-imido-4-p-tolueenisulfonyyli-4-atsaoktaani ja saatetaan reagoimaan kaliumftaali-imidin kanssa, jolloin saadaan vastaava 2,2-difluori-l,8-diftaali-imido-4-p-tolueenisul-fonyyli-4-atsaoktaani, jolla on kaava : . 35 37 8481 6 PhtN-(CH2 ).-N-CH2-C-CH7NPht

4 I 2 / \ 2 Tos F F (f) kuumennetaan hydratsiinin kassa etanolissa suo-5 jäävien ftaloyyliryhmien poistamiseksi, minkä jälkeen kuumennetaan HBr:n vesiliuoksen kanssa suojaavan tosyyliryh-män poistamiseksi, jolloin saadaan haluttuja 2,2-difluori- 1,8-diamino-4-atsaoktaanijohdannaisia, joilla on kaava

10 H2N-(CH2)4-NH-CH2-C-CH2NH2 F F ja haluttaessa saatu kaavan (1) mukainen yhdiste muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolakseen.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 20 tunnettu siitä, että valmistetut yhdisteet ovat 2,2-difluori-1,8-diamino-4-atsaoktaanijohdannaisia. 38 848 1 6