FI81806C - Fosforyliseringsfoerfarande och -medel. - Google Patents

Fosforyliseringsfoerfarande och -medel. Download PDF

Info

Publication number
FI81806C
FI81806C FI860905A FI860905A FI81806C FI 81806 C FI81806 C FI 81806C FI 860905 A FI860905 A FI 860905A FI 860905 A FI860905 A FI 860905A FI 81806 C FI81806 C FI 81806C
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
formula
group
denotes
different
see diagramm
Prior art date
Application number
FI860905A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI81806B (fi
FI860905A0 (fi
FI860905A (fi
Inventor
Eugen Uhlmann
Joachim Engels
Original Assignee
Hoechst Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoechst Ag filed Critical Hoechst Ag
Publication of FI860905A0 publication Critical patent/FI860905A0/fi
Publication of FI860905A publication Critical patent/FI860905A/fi
Publication of FI81806B publication Critical patent/FI81806B/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI81806C publication Critical patent/FI81806C/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/22—Amides of acids of phosphorus
    • C07F9/24—Esteramides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
    • C07F9/141—Esters of phosphorous acids
    • C07F9/146—Esters of phosphorous acids containing P-halide groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/22—Amides of acids of phosphorus
    • C07F9/24—Esteramides
    • C07F9/2404—Esteramides the ester moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic
    • C07F9/2408—Esteramides the ester moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic of hydroxyalkyl compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/22—Amides of acids of phosphorus
    • C07F9/24—Esteramides
    • C07F9/2404—Esteramides the ester moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic
    • C07F9/2429—Esteramides the ester moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic of arylalkanols
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/22—Amides of acids of phosphorus
    • C07F9/26—Amides of acids of phosphorus containing P-halide groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Luminescent Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Description

81806
Fosforylointimenetelmä ja -aineita
Keksintö koskee menetelmää fosforihapon, tiofosfo-rihapon ja selenofosforihapon esterien, tioesterien ja 5 amidien valmistamiseksi antamalla asyloituvien hydroksi-, merkapto- ja aminoyhdi s teiden reagoida fosfonihappodieste-ridialkyyliamidien kanssa, hapettamalla vastaavat fosfoni-happoesterit, -tioesterit tai diesteriamidit vastaavaksi viisiarvoista fosforia sisältäväksi yhdisteeksi sekä loh-10 kaisemalla molemmat fosforylointireagenssista peräisin olevat alkoholiset tai fenoliset ryhmät emäksillä.
Keksintö koskee erityisesti menetelmää yhdisteiden valmistamiseksi, joilla on kaava I
-1
15 CP
R--Z-I> 2 KatP 1
x oP
n 20 Tälle menetelmälle on tunnusomaista, että saatetaan
yhdiste, jolla on kaava II
R—hZ-H j II
^ s n 25
reagoimaan heikon hapon läsnäollessa vähintään n moolin kanssa fosforylointireagenssia, jolla on kaava III
Rl-0 ^R3
30 P-N III
r2-o^ Xr4
hapetetaan saatu yhdiste, jolla on kaava IV
81 806 2 R1-0
P-Z--R IV
r2-o// n 5
ja saadusta hapetetusta yhdisteestä, jolla on kaava V
R*-0^ X
\ *
P V
10 R2-0^ Z--R
n vapautetaan kaavan I mukainen yhdiste emäksillä.
Edellä esitetyissä kaavoissa symboleilla on seuraa-15 vat merkitykset: R on orgaaninen ryhmä, jossa ei ole muita fosforyloituvia vetyätomej a, X on happi, rikki tai seleeni, Z on happi, rikki tai -NH-, 20 Kat on kationiekvivalentti, R1 on kaavan lila tai IIIb mukainen ryhmä HR7 8 1 ' 9 R8—C — C- R -CH, I . Ifi 25 R5 R6
Ula Illb R5, R6 ja R7 ovat samat tai erilaiset ja merkitsevät vety-30 atomia tai metyyliä, R8 on syaani, Ar tai kaavan II Ie, II Id tai II Ie mukainen ryhmä -S-(0),-R“ -SK C6H5) 2~CH3 G y- 35 IIIC Illd Ille
II
3 81 806 R10 on alempi alkyyli tai Ar, radikaalit G ovat samat tai erilaiset ja ovat kukin C tai N, jolloin kuitenkin vähintään yksi G on N,
Ar on fenyyli, joka voi olla substituoitu 1-5 samalla 5 tai erilaisella substituentilla ryhmästä kloori, fluori, nitro ja syaani, tai joka voi olla elektroneja poistavien substituenttien lisäksi substituoitu yhdellä tai kahdella lipofiilisellä ryhmällä, n on 1 tai tätä suurempi luku, 10 Y on 0, 1 tai 2, R9 on kaavan Ulf tai Illg mukainen ryhmä cy> -/y,1 15 Ulf lllg Y merkitsee samoja tai erilaisia substituentteja ryhmästä kloori, bromi ja jodi, R2 voi merkitä samaa kuin R1 ja R1 ja R2 voivat tällöin olla 20 samat tai erilaiset, tai R2 on alempi alkyyli, kaavan Illh mukainen ryhmä -CH2-Ar Illh 25 tai myös Ar, jos Ar lohkeaa emäksisesti helpommin kuin R1, R5 ja R® muodostavat yhdessä kaavan Illi 1111 30 mukaisen ryhmän, ja R1 voi olla myös metyyli, jos R2 on myös metyyli.
Ryhmien R3 ja R4 luonne ei ole kriittinen, jos tähde 35 -NR3R4 lohkeaa reaktiossa kaavan II mukaisen yhdisteen kanssa.
81 806 4 R3 ja R4 voivat olla samat tai erilaiset ja merkitsevät 1-8 hiiliatomia sisältävää alkyyliä, 5-12 hiili-atomia, edullisesti enintään 8 hiiliatomia sisältävää syk-loalkyyliä, bentsyyliä tai fenyyliä, tai ne muodostavat 5 niihin liittyvän typpiatomin kanssa tyydyttyneen tai tyy dy ttymättömän heterosyklisen renkaan, jossa voi valinnaisesti olla muitakin heteroatomeja ja substituentteja.
Edellä mainittujen symbolien edullisia merkityksiä ovat seuraavat: 10 R5, R6 ja R7 ovat vety, R8 on syaani, fenyyli tai nitrattu fenyyli, erityisesti mononitrofenyyli, kuten p-nitrofenyyli, tai dinitrofenyyli, kuten 2,5-nitrofenyyli, kloorattu fenyyli, erityisesti mono-, di- tai trikloorife-nyyli, tai 2-kloori-4-nitrofenyyli sekä nitrofenyyli, joka 15 on substituoitu yhdellä tai kahdella hiilivetyryhmällä, erityisesti aikaanitähteellä, joka sisältää 6 - 24, erityisesti 12 - 18 hiiliatomia.
R9 on edullisesti kaavan Ulf mukainen ryhmä, jolloin Y on mieluiten kloori.
20 R2 on alempi alkyyli, erityisesti metyyli, tai mer kitsee samaa kuin R1 ja on edullisesti identtinen R*:n kanssa.
R3 ja R4 ovat 1-6 hiiliatomia sisältävä alkyyli, erityisesti alempi alkyyli, sykloheksyyli, bentsyyli tai 25 fenyyli, ja typpiatomin kanssa pyrrolidyyli, piperidyyli, morfolyyli, triatsolo, bentsotriatsolo tai tetratsolo, jolloin aromaattisten radikaalien substituenttina voi olla kloori, fluori, nitro tai syaani.
Sanonnalla "alempi alkyyli" tarkoitetaan enintään 4 30 hiiliatomia sisältäviä alkyyliryhmiä.
X ja Z merkitsevät edullisesti happea.
n on 1 - 6, erityisesti 1 tai 2, ja erityisen edullisesti 1.
Il 81 806 5
Kaavan III mukaiset yhdisteet, Joissa R1 on muu kuin metyyli, ovat uusia samoin kuin myös kaavan VI mukaiset yhdisteet. Myös nämä uudet yhdisteet ovat keksinnön kohteena .
5 Julkaisusta F. Himmelsbach et ai.. Tetrahedron Let ters 23 (1982), ss. 4793 - 4796 tunnetaan kaavan V mukaisia yhdisteitä, joissa R1 ja R2 merkitsevät 2-(4-nitrofe-nyyli)etyyliä, X ja Z happea ja R tymidyyliryhmää. Nämä yhdisteet saadaan antamalla tymidiinin reagoida bis-(p-10 nitrofenyylietyyliJfosforomonokloridaatin kanssa, jolloin lähinnä 5'-asemassa oleva hydroksiryhmä asyloituu. Tämä fosforylointireagenssi on melko labiili eikä sitä voitu tislata suurtyhjössä eikä valmistaa kiinteänä aineena. Käytettäessä lähtöaineena fosforitrikloridia kaavan V mu-15 kaisten yhdisteiden valmistus tunnetulla tavalla edellyt tää viittä reaktiovaihetta, mutta näiden yhdisteiden valmistuksessa keksinnön mukaisesti tarvitaan vain neljä vaihetta.
Mainitun kirjallisuusviitteen mukaisesti annetaan 20 kaavan V mukaisten yhdisteiden reagoida edelleen oligonuk-leotideiksi, joista lopuksi lohkaistaan p-nitrofenyyli-etyyliryhmä 1,5-diatsabisyklo[5,4,0]undekeeni-5:llä (DBU).
Kaavan III mukaiset yhdisteet saadaan sinänsä tunnetuin menetelmin fosforitrikloridista antamalla tämän 25 reagoida hydroksiyhdisteiden R1-0H ja R2-0H ja sekundaarisen amiinin H-NR3R4 kanssa. Vapaan sekundaarisen amiinin asemasta voidaan myös käyttää vastaavaa silyyliyhdistettä. Fosforitrikloridin klooriatomien vaihtojärjestys riippuu hydroksi- tai aminoyhdisteiden reaktiivisuudesta. Niinpä 30 esimerkiksi kaavan VI mukainen yhdiste °zNCH2‘CH2‘°\ Y /CIi3 Λ
P-N ( CH j VI
H3c-cr V XCH3 J 2 35 ^ ' voidaan saada seuraavilla tavoilla: 6 81 806 a) annetaan ensin fosforitrikloridin reagoida meta-nolin kanssa emäksen läsnäollessa, reaktiotuotteen annetaan reagoida di-isopropyyliamiinin kanssa ja sen jälkeen 2-(p-nitrofenyyli)etanolin kanssa emäksen läsnäollessa; 5 b) annetaan fosforitrikloridin reagoida ensin 2- (p-nitrofenyyli)etanolin, sitten isopropyyliamiinin ja lopuksi metanolin kanssa; tai c) annetaan ensin fosforitrikloridin reagoida di-isopropyyliamiinin kanssa ja sen jälkeen 2-(p-nitrofenyy-10 li)etanolin ja lopuksi metanolin kanssa.
Kaavan III mukaisen fosforylointireagenssin ja hyd-roksiyhdisteen reaktio tapahtuu joko liuoksessa käyttäen ekvimolaarista määrää tai pientä ylimäärää, esim. enintään 50 paino-%:n, edullisesti enintään 25 paino-%:n ylimäärää 15 fosforylointireagenssia heikon hapon, kuten tetratsolin tai amiinihydrokloridin läsnäollessa; tai kiintofaasisyn-teesinä, jossa käytetään fosforylointireagenssin suurta ylimäärää heikon hapon läsnäollessa. Kun hydroksikomponentti on esimerkiksi sidottu kantajaan, käytetään fosfo-20 rylointireagenssin 10 - 20-kertaista moolista ylimäärää.
Jos reaktio saatetaan tapahtumaan liuoksessa, on liuottimen tietenkin oltava inertti fosforylointireagenssin ja asylointitävän komponentin suhteen. Reaktio tapahtuu lämpötilassa -80 - +80 °C, edullisesti -20 - +50 °C ja erityi-25 sesti 0-25 °C.
Kaavan IV mukaisella fosforylointituotteella on ryhmien R1 ja R2 valinnasta riippuen enemmän tai vähemmän lipofiilinen luonne, erityisesti siinä tapauksessa, että R8 on lipofiilisesti substituoitu fenyyli. Nämä lipofiili-30 set yhdisteet voidaan helposti erottaa fosforyloimattomis- ta lähtöaineista esim. kromatografian, kuten suurpainenes-tekromatografian avulla, jossa kolonni on täytetty kään-teisfaasimateriaalilla, esim. kaupallisella, oktadekyyli-silyyliryhmiä sisältävällä silikageelillä.
Il 81 806 7
Substituenttien R1 ja R2 valinta riippuu luonnollisesti ryhmän R kemiallisesta luonteesta, siis yhdisteestä, johon fosfaattiryhmä on liitettävä. Kun R määritellään ryhmäksi, joka ei sisällä muita fosforyloituvia H-Z-ryh-5 miä, tällä tarkoitetaan sitä, että kaavan III mukainen fosforylointireagenssi asyloi suhteellisen epäspesifises-ti eli pyrittäessä halutunlaiseen fosforyloitumiseen on kaikkien muiden mahdollisten fosforyloituvien Z-H-ryhmien vetyatomit korvattava vastaavilla suojaryhmillä.
10 Sanonnalla "fosforyloituva" tarkoitetaan tässä Z-H-ryhmiä, jotka pystyvät reagoimaan asylointiolosuhteis-sa, ts. mukaan ei lueta Z-H-ryhmiä, joilta puuttuu reaktiokyky eteerisen esteen tai inaktivoivien ryhmien vuoksi.
Koska ryhmät R1 ja R2 lohkaistaan fosfaattiryhmän 15 vapauttamiseksi emäksellä, ryhmien R1 ja R2 ja käytetyn emäksen luonne riippuu ryhmän R herkkyydestä. Kun R on asianmukaisesti stabiili, lohkaisu voi siten tapahtua al-kalihydroksidivesiliuoksilla ja ryhmien R1 ja R2 valinta on suhteellisen epäkriittinen. Kun ryhmään R liittyy herkkiä 20 ryhmiä, toimitaan tunnettuun tapaan vastaavasti lievissä olosuhteissa, esim. vedettömässä systeemissä käyttäen sopivaa emästä, esim. edellä mainitun kirjallisuusviitteen mukaisesti käytettyä DBU:ta.
Ryhmät R1 ja R2 lohkaistaan tunnettujen menettelyjen 25 avulla.
Metyylitähteen lohkaisu fosfaattitriesteristä voi tapahtua tiofenolilla tai tiokresolilla emäksen, kuten trietyyliamiinin läsnäollessa. Tämä reaktio tapahtuu sopivasti lämpötilassa -100 - +100 °C, edullisesti -60 - +60 30 °C ja erityisesti -20 - +30 °C.
Ryhmät, jotka voidaan poistaa β-eliminointireak-tiolla (esim. yhdisteet, jotka sisältävät ryhmän Illb), poistetaan metalleilla, kuten sinkillä tai potentiaalisää-töisellä sähköpelkistyksellä. Tämä reaktio tapahtuu sopi-35 vasti lämpötilassa -50 - +80 °C, edullisesti -20 - +50 °C ja erityisesti 0 - 30 °C.
81 806 8
Elektronegatiivisesti substituoidut etyyliryhmät voidaan poistaa ei-nukleofiilisillä emäksillä, jotka voivat olla myös sidottuja polymeerikantajiin. Tämä reaktio tapahtuu sopivasti lämpötilassa -60 - +100 °C, edullisesti 5 -20 - +50 °C ja erityisesti 0 - 30 °C.
Lohkaistaessa elektronegatiivisesti substituoituja etyyliryhmiä kaavan V mukaisista yhdisteistä käytetään edullisesti seuraavia emäksiä, jotka luetellaan pienenevässä reaktiivisuusjärj estyksessä: 10 a) sykliset fosforihappotriamidi-imidit, joilla on
kaava VII
R11 R12 l i / N N "v ' \ / λ
15 A P A' VII
V/ jossa R11, R12 ja R13 ovat samat tai erilaiset ja merkitsevät 20 alempaa alkyyliryhmää, edullisesti metyyliä tai etyyliä, ja A ja A' ovat alempia alkyleeniryhmiä, joiden ketjussa on 2 - 4 hiiliatomia, edullisesti 1,3-propyleeniä; b) 1,5,7-triatsabisyklo[4,4,0]dek-5-eeni (TBD) sekä 7-metyyli-l,5,7-triatsabisyklo[4,4,0]dek-5-eeni;
25 c) 1,5-diatsabisyklo[4,3,0]non-5-eeni (DBN), DBU
sekä alemmat alkalimetallialkoholaatit, erityisesti nat-rium-ja kaliumalkanolaatit, kuten natriummetylaatti, nat-riumetylaatti tai kalium-tert-butylaatti; ja d) 1,1,3,3-tetrametyyliguanidiini.
30 Yhdisteet, joissa R1 ja mahdollisesti myös R2 on β-syaanietyyli, voidaan pilkkoa ammoniakilla ja siksi niitä käytetään edullisesti tapauksissa, joissa muut suoja-ryhmät lohkaistaan ammoniakilla.
Keksinnön mukaisen menetelmän suurena etuna on se, 35 että voidaan fosforyloida herkkiä yhdisteitä. Kuten edellä osoitettiin ryhmien R1 ja R2 emäksillä tapahtuvan lohkaisun
II
9 81 806 yhteydessä, keksinnön mukainen menetelmä on toteutettavissa monilla tavoilla siten, että yksittäiset reaktiovaiheet voidaan sovittaa yhteen muiden ryhmässä R tapahtuvien reaktioiden kanssa. Tämä näkökohta ei koske vain ryhmien R1 5 ja R2 lohkaisemista, vaan yhtälailla hapetusreaktiota ja haluttaessa myös useamman kuin yhden fosfaattiryhmän liittämistä.
Keksinnön huomattavana lisäetuna on, että itse fosfaattiryhmän lisäksi voidaan liittää tio- ja selenofos-10 faattiryhmä. Tällä tavoin saadaan helposti luonnonaineiden analogeja, joita ei saada esim. menetelmällä, jonka ovat esittäneet Himmelsbach et ai.
Kaavan IV mukaisten yhdisteiden hapetus kaavan V (X 0) mukaisiksi fosfaateiksi tapahtuu kuten on tunnet-15 tua analogisille yhdisteille. Hapettimina voidaan käyttää esim. dityppitetroksidia tai jodia ja erityisesti peroksi-deja ja ennen kaikkea vedetöntä tert-butyylihydroperoksi-dia. Reaktio suoritetaan edullisesti kohtalaisen poolises-sa liuottimessa, esim. nitriileissä, kuten asetonitriilis-20 sä, tai halogenoiduissa, erityisesti klooratuissa alemmissa hiilivedyissä, kuten kloroformissa. Tämä reaktio tapahtuu sopivasti lämpötilassa -100 - +100 °C, edullisesti -50 - +60 °C ja erityisesti -20 - +30 °C.
Kaavan V mukaiset yhdisteet, joissa X on rikki tai 25 seleeni, voidaan valmistaa antamalla kaavan IV mukaisten yhdisteiden reagoida suoraan alkuainerikin tai -seleenin kanssa. Sekoittaminen poolisessa liuottimessa, kuten tet-rahydrofuraanissa, stoikiometrisen rikki- tai seleenimää-rän kanssa johtaa hyvillä saannoilla vastaaviin kaavan V 30 mukaisiin tio- tai selenofosfaatteihin. Tämä reaktio tapahtuu sopivasti lämpötilassa -100 - +100 °C, edullisesti -50 - +60 °C ja erityisesti -20 - +30 °C.
Kuten jo edellä tähdennettiin, keksintö mahdollistaa sen, että voidaan suuressa määrin ottaa huomioon ryh-35 män R kemiallinen luonne ja että tässä ryhmässä voi olla myös herkkiä ryhmiä tai molekyylin osia.
81 806 ίο
Kaavan II mukaisina lähtöaineina tulevat siten kysymykseen alifaattiset ja aromaattiset hydroksi-, merkap-to- ja aminoyhdisteet, siis alkoholit, fenolit, merkaptaa-nit, tiofenolit sekä alifaattiset ja aromaattiset amiinit.
5 Erityisen edullisesti voidaan fosforyloida luonnon aineita tai niiden yhdisteanalogeja, kuten steroidijohdannaisia, fosfolipidejä ja ennen kaikkea sokereita ja sokeri johdannaisia, kuten nukleosideja, nukleotideja, oligo-nukleotideja ja polynukleotideja.
10 Suojaamattoman fosfaattipäätefunktion omaavien nuk leotidien valmistus nykyään käytetyn fosfaattisuojaryhmien yhdistelmän avulla fosfiittimenetelmän mukaisesti on mahdotonta tai mahdollista vain erittäin hankalasti. Pääte-fosfaattia ei myöskään saada triesterisynteesissä usein 15 käytetyllä o-kloorifenyyli-B-syaanietyylifosfaatin suoja- ryhmäyhdistelmällä, koska ei ole mahdollista hydrolysoida o-kloorifenyyliryhmää siten, että β-syaanietyyliryhmä säilyy.
Tästä syystä 5'-päätehydroksiryhmä on tähän saakka 20 tunnettujen menetelmien mukaan fosforyloitu nukleosiditri- fosfaatin, tavallisesti adenosiinitrifosfaatin, ja kinaa-sin, kuten (T4)-polynukleotidikinaasin avulla. Tämä menetelmä on melko työläs.
5'-hydroksiryhmä voidaan nyt keksinnön mukaisesti 25 fosforyloida kemiallista tietä ja tämä voi tapahtua ei vain eristetyllä oligonukleotidilla, vaan myös kantajaan sidotulla yhdisteellä. Keksinnön mukainen menetelmä voidaan toteuttaa niin lievissä olosuhteissa, että nukleosi-di, nukleotidi tai oligo- tai polynukleotidi eivät vauri-30 oidu.
Keksintö mahdollistaa kuitenkin myös fosfaattiryh-mien liittämisen nukleosidien tai monomeeristen, oligomee-risten tai polymeeristen nukleotidien muuhun kohtaan, esim. fosforyloimalla 3'-hydroksiryhmä tai -ryhmät, tai 35 ribonukleosidien tai ribonukleotidien ollessa kyseessä, liittämisen 2'-asemaan.
Il 11 81 806
Seuraavat esimerkit selventävät keksinnön käyttöä tunnetusti vaikeassa nukleotidikemiassa. Esimerkkejä ei kuitenkaan saa missään tapauksessa pitää rajoittavina, koska nukleotidien fosforylointi edustaa aivan yleisesti 5 fosfaattiryhmien liittämistä.
Kaavan III mukaisten fosforylointireagensslen valmistus Esimerkki 1
Fosfonlhappometyyliesteridl-isopropyyliamidlklorldi 10 Seokseen, jossa oli 250 ml absoluuttista eetteriä ja 250 ml absoluuttista pentaania, lisättiin 127 g (0,96 mol) fosfonihappometyyliesteridikloridia, ja tähän seokseen lisättiin tipoittain 2 tunnin aikana voimakkaasti sekoittaen typpisuojassa ja -15 °C:ssa liuos, jossa oli 270 15 ml (1,92 mol) di-isopropyyliamiinia 100 ml:ssa absoluut tista eetteriä ja 100 ml:ssa absoluuttista pentaania. Reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan samalla kun sitä sekoitettiin, ja sekoitusta jatkettiin 2 tuntia. Sitten jäähdytettiin uudelleen -15 °C:seen ja hyd-20 rokloridi erotettiin suodattamalla inerttikaasukehässä reaktioliuoksesta. Suodoskakku pestiin vielä 750 ml:11a kylmää seosta, jossa oli yhtä suuret tilavuudet absoluuttista eetteriä ja absoluuttista pentaania. Suodokset yhdistettiin ja liuotin poistettiin vesisuihkupumpun tyhjös-25 sä. Jäännös tislattiin kahdesti suurtyhjössä 80 cm:n Vig- reux-kolonnin kautta, jolloin saatiin 80 g pääjaetta (kp. 38 - 41 °C/0,1 mbar), jonka puhtaus 31P-NMR:n mukaan oli 99 % (6 = 185 ppm).
Esimerkki 2 30 Fosf onlhappometyyliesteri [ (nitrofenyyli )etyylieste- ri]di-isopropyyliamidi (kaava VI)
Liuotettiin 5,01 g (30 mmol) tarkoin kuivattua 2-(p-nitrofenyyli)etanolia 60 ml:aan vastatislattua metylee-nikloridia ja lisättiin 24 ml di-isopropyylietyyliamiinia. 35 Jäähdytettiin noin 0 °C:seen ja lisättiin sekoittaen 5 mi nuutin aikana 6 ml (33 mmol) fosfonihappometyyliesteridi- 81 806 12 isopropyyliamidikloridia ja sekoitettiin vielä 10 minuuttia tässä lämpötilassa. Sitten reaktioseos laimennettiin 750 ml:11a etikkaesteriä, joka oli pesty 450 ml:11a fosfaattipuskuria (pH 7). Etikkaesterifaasia ravisteltiin 5 kolmasti 450 ml:n kanssa fosfaattipuskuria (pH 7), kuivat tiin natriumsulfaatilla ja haihdutettiin kuiviin. Muodostunut öljy kuivattiin suurtyhjössä 30 °C:ssa. Saatiin 9 g öljyä, jonka puhtaus oli 31P-NMR:n mukaan 86 %. Kromatogra-foimalla lyhyessä silikageelipylväässä, joka oli tasapai-10 notettu etikkaesteri/metyleenikloridi/trietyyliamiinilla tilavuussuhteessa 5:4:1, tuote voitiin rikastaa edelleen mainitulla eluenttisysteemillä (31P-NMR: puhtaus 95 %).
Saatiin öljy, joka jähmettyi pakastimessa (-20 °C). 31P-NMR: 6 = 149 ppm 15 ^-NMR: P-0-CH2-CH2- δ = 3,75 ppm, m (2) P-0-CH2-CH2- δ - 2,98 ppm, t (2) P-OCHj δ = 3,35 ppm, d (3) m = multipletti (intensiteetti); s = singletti; d = dub-letti ja t = tripletti 20 Esimerkki 3
Fosfonihappometyyllesteri-2-syaanietyyliesteridi-isopropyyliamidi (kaava Vili) NC-CH2-CH2-Ov / CH, \ 25 \p-N (V ) H3C-0/ NCH3 J 2
Samalla tavalla kuin esimerkissä 2 saatettiin 0,68 ml (10 mmol) 2-syaanietanolia reagoimaan 2 ml:n (11 mmol) 30 kanssa fosfonihappometyyliesteridi-isopropyyliamidiklori-dia 20 ml:ssa vastatislattua metyleenikloridia, jossa oli mukana 8 ml di-isopropyylietyyliamiinia. Kun seos oli kuivattu suurtyhjössä 30 °C:ssa, saatiin 2,5 g öljyä, joka 31P-NMR:n mukaan sisälsi 94 % yhdistettä VIII.
35 31P-NMR: δ = 150 ppm ^-NMR: P-OCH2CH2-CN δ = 3,75 ppm, m (2) P-OCH2CH2-CN δ * 2,60 ppm, t (2) P-0CH3 δ = 3,35 ppm, d (3)
II
13 81 806
Esimerkki 4
Fosf onihappo-2- (p-nltrof enyyli )etyyllesteridiklori- di 5 g (30 mmol) 2-(p-nitrofenyyli)etanolia liuotet-5 tiin 100 ml:aan absoluuttista eetteriä ja sen annettiin reagoida 40 minuutin ajan -20 - -30 °C:ssa 25,5 ml:n (150 mmol) kanssa vastatislattua fosforitrikloridia, joka lisättiin tipoittain samalla sekoittaen. Eetteri poistettiin 0 °C:ssa vesisuihkupumpun tyhjössä ja sitten fosforitriklo-10 ridin ylimäärä suurtyhjössä ja jäljelle jäänyt öljy kui vattiin suurtyhjössä.
31P-NMR: 6 = 179,8 ppm, 93 % P:n kokonaismäärästä.
Esimerkki 5
Fosfonihappodi-isopropyyliamididikloridi 15 87 ml (1 mol) fosforitrikloridia liuotettiin 800 ml:aan petrolieetteriä. Liuos jäähdytettiin 5 °C:seen ja sitten lisättiin tipoittain tunnin aikana 5 °C:ssa liuos, jossa oli 283 ml (2 mol) di-isopropyyliamiinia 660 ml:ssa petrolieetteriä. Sekoitettiin vielä tunti tässä lämpöti-20 lassa, saostunut amiinikloridi poistettiin suodattamalla, petrolieetteri poistettiin vesisuihkupumpun tyhjössä ja jäännös tislattiin tyhjössä (0,2 mbar). Pääjakeena saatiin 38-41 °C:ssa 98 g öljyä, joka kiteytyi seisotettaessa pakastimessa (-20 °C) ja jonka puhtaus oli 99 % (31P-NMR, 25 δ = 170 ppm).
Esimerkki 6
Fosfonihappobis-[2-(p-nitrofenyyli)etyyliesteri]- di-isopropyyliamidl (kaava IX) 30 Λ~λ ί /“’Λ (Ojn/Q) VcHj-cHj-oIjP-n I ch ) ix
Liuokseen, jossa oli 16 g (0,1 mol) 2-(p-nitrofe-35 nyyli)etanolia 40 ml:ssa absoluuttista tetrahydrofuraania, lisättiin 26 ml (0,15 mol) di-isopropyylietyyliamiinia ja 81 806 14 jäähdytettiin O °C:seen. Lisättiin tipoittain ja samalla sekoittaen 15 minuutin aikana 10 g (0,05 mol) fosfonihap-podi-isopropyyliamididikloridia. Sitten reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan ja reaktion annet-5 tiin vielä jatkua noin 30 minuuttia. Amiinihydrokloridi poistettiin imusuodattamalla, suodatuskakku pestiin pienellä määrällä tetrahydrofuraania ja yhdistetyt suodokset haihdutettiin kuviin, jolloin saatiin kiinteä jäännös.
1 g tätä jäännöstä puhdistettiin pylväskromatografoimalla 10 70 g:11a silikageeliä eluoiden tolueeni/n-heksaani/tri- etyyliamiini-seoksella tilavuussuhteessa 7:2:1. Saatiin 0,95 g jauhetta, jonka puhtaus oli 31P-NMR:n mukaan 96 %.
31P-NMR: 6 = 147,5 ppm 1H-NMR: P-OCH2CH2- δ = 3,85 ppm, m (4) 15 P-OCH2CH2- 6 = 2,98 ppm, t (4) P-N-CH δ = 3,5 ppm, m (2) P-N-CH(CH3)2 δ = 1,13 ppm, s (12)
Fosforylointireaktiot:
Yksijuosteiden oligonukleotidin, jossa on 5'-fos-20 faattitähde, Ncol-linkkerin 5’-pCCATGG-3', kemiallinen synteesi.
Esimerkki 7 3'-päätteinen nukleosidi, tässä tapauksessa siis guanosiini, sidotaan kovalenttisesti menetelmän M. J.
25 Gait et ai., Nucleid Acids Res. 8 (1980), ss. 1081 - 1096 mukaan 3'-hydroksifunktion välityksellä kontrolloidun huokoskoon omaavaan lasiin ("controlled pore class", CPG, Pierce).
Tällöin silikageelin annetaan ensin reagoida 30 3-(trietoksisilyyli )propyyliamiinin kanssa, jolloin etano li lohkeaa pois ja muodostuu Si-O-Si-sidos. Guanosiinin annetaan N2-isobutyryyli-S’-O-sukkinoyyli-S'-dimetoksi-trityyliesterinä reagoida modifioidun kantajan kanssa pa-ranitrofenolin ja N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidin läs-35 näollessa, jolloin sukkinoyyliryhmän vapaa karboksiryhmä asyloi propyyliamiiniryhmän aminoryhmän.
Il 81 806 15
Seuraavissa synteesivaiheissa emäskomponentti käytetään 5'-o-dimetoksitrityylinukleosidi-3'-fosfonihappomo-nometyyliesteridialkyyliamidina tai -klorodina, jolloin adeniini on N6-bentsoyyliyhdisteenä, sytosiini on N4-bent-5 soyyliyhdisteenä ja guaniini on N2-isobutyryyliyhdisteenä ja aminoryhmättömässä tymiinissä ei ole suojaryhmää.
Oligonukleotidiketjun rakentamisen reaktiosykli: 25 mg polymeeristä kantajaa, johon on sitoutunut 1 pmol guanosiinia, käsitellään peräkkäin seuraavilla ai-10 neilla: a) nitrometaani b) 3 % trikloorietikkahappoa 1,2-dikloorietaanissa c) nitrometaani d) asetonitriili 15 e) 10 - 20 pmol vastaavaa nukleosidifosfiittia ja 100 pmol tetratsolia 0,2 mlrssa vedetöntä asetonitriiliä (5 min) f) 20 % asetanhydridiä tetrahydrofuraanissa, jossa on 40 % lutidiinia ja 10 % dimetyyliaminopyridiiniä (2 min) g) asetonitriili 20 h) tetrahydrof uraani, jossa on 20 % vettä ja 40 % lutidiinia i) 3 % jodia kollidiini/vesi/tetrahydrofuraani-seoksessa tilavuussuhteessa 5:4:1 (0,5 min) j) asetonitriili.
25 Tässä "fosfiitilla" tarkoitetaan deoksiriboosi-3'- monofosfonihappo-monometyyliesteriä, jossa kolmas valenssi on tyydytetty kloorilla tai tertiaarisella aminoryhmällä, esim. morfolinoryhmällä.
Jokaisen synteesivaiheen saanto voidaan detrity-30 lointivaiheen (b) jälkeen määrittää spektrofotometrisesti mittaamalla dimetoksitrityylikationin absorptio aallonpituudella 496 nm.
5'-hydroksifunktion kemiallisen fosforyloinnin reaktiosykli tapahtuu periaatteessa kuten edellisissä esi-35 merkeissä, mutta erona on kuitenkin se, että ensiksikin 81 806 16 kohdassa e) annetaan 20 pmol:n vastaavaa fosforylointirea-genssia (esim. yhdistettä VI) ja 100 pmolrn tetratsolia reagoida 10 - 20 minuuttia 0,2 ml:ssa vedetöntä tetrahyd-rofuraani-asetonitriiliä (yhtä suurista tilavuuksista muo-5 dostuva seos), toiseksi jätetään kohta f) pois, ja kolman neksi pidennetään aika kohdassa i) viideksi minuutiksi.
Oligonukleotidin synteesin päätyttyä lohkaistaan oligomeerin metyylifosfaattisuojaryhmät p-tiokresolilla ja trietyyliamiinilla. Tämän jälkeen oligonukleotidi erote-10 taan kiinteästä kantajasta käsittelemällä 3 tuntia ammo niakilla. Kun oligomeerejä käsitellään 2-3 vrk väkevällä ammoniakilla, emästen aminoryhmien suojaryhmät lohkeavat kvantitatiivisesti.
a) Käytettäessä fosforylointireagenssina fosfonihappo- 15 metyyliesteri[2-(p-nitrofenyyli )etyyliesteri]di-isopropyy- liamidia (VI) saadaan tämän suojaryhmien poistamisen jälkeen oligonukleotidi, jonka 5'-pääteasemassa on 2-(p-nit-rofenyyli)etyylifosfaattiryhmä. Tämä fosfaattiesteri voidaan puhdistaa HPLC:llä käänteisfaasimateriaalilla, jol-20 loin hydroksikomponentti erottuu erityisen hyvin, p-nitro- fenyylietyyliryhmän lohkaisemiseksi esteriä käsitellään 0,9 M TBD:llä pyridiini/vesi-seoksessa tilavuussuhteessa 9:1 huoneen lämpötilassa 8 tuntia. HPLCtllä tai geeli-elektroforeesilla, joka suoritetaan 20-%:isella polyak-25 ryyliamidigeelillä ja 7 M urealla, ei tämän jälkeen voida todeta lähtöainetta. Reaktioseokseen lisätään 1 ml 2 M etikkahappoa ja haihdutetaan kuiviin. Jäännöksen suolan-poisto tapahtuu Sephadeji® g 50:llä täytetyssä pylväässä eluenttina 0,02 M trietyyliammoniumbikarbonaatti (pH 7). 30 Muodostunut 5'-fosfaattioligonukleotidi voidaan polymeroida polynukleotidiligaasin avulla kaksijuosteisek- si, toistuvaksi DNA:ksi, joka voidaan taas katkaista re- ψ striktioentsyymillä Hae III (tunnus GG CC).
b) Käytettäessä fosforylointireagenssina fosfonihappo-35 metyyliesteri-2-syaanietyyliesteridi-isopropyyliamidia
II
„ 81806 (VIII) sekä fosfonihappobis-(2-syaanietyyliesteri )di-iso-propyy1iamidia (X) f F* Λ (NC-CH2-CH2-0)2P-N ch x 5 NCH3 J 2 saadaan samalla tavoin lohkaisemalla ammoniakilla (väkevä ammoniakki, 3 vrk huoneen lämpötilassa tai 10 tuntia 75 °C:ssa) vapaa 5'-fosfaatti-p-CCATGG.
10 c) Käytettäessä reagenssina fosfonihappobis-[2-(p-nit- rofenyyli)etyyliesteri]-di-isopropyyliamiinia (IX) saadaan samoin tiofenolaatti- ja ammoniakkikäsittelyn jälkeen fos-faatti-2-(p-nitrofenyyli)-etyyliesteri, joka sekin voidaan lohkaista sopivalla emäksellä, kuten DBU:lla tai TBD:llä 15 suojaryhmättömäksi 5’-fosfaatiksi.

Claims (4)

81 806 18
1. Menetelmä yhdisteiden valmistamiseksi, joilla on kaava I 5 Φ R--Z-Pv 2 Ka# I X OP n 10 jossa Kat on kationiekvivalentti, R on orgaaninen ryhmä, jossa ei ole muita fosforyloituvia vetyatomeja, X on happi, rikki tai seleeni, Z on happi, rikki tai -NH- ja n on vähintään 1, tunnettu siitä, että yhdiste, jolla 15 on kaava II f')„ 20 saatetaan reagoimaan heikon hapon läsnäollessa vähintään n moolin kanssa fosforylointireagenssia, jolla on kaava III R1-0 R3 \ / P-N III , / \ .
25 Rz-0^ R4 jossa R1 on ryhmä, jolla on kaava Ula tai Illb H R7
30 R8—C -C- R9-CH2 k» A· Ula Illb II 81 806 19 joissa R5, R6 ja R7 ovat samat tai erilaiset ja merkitsevät vetyä tai metyyliä, R8 on syaani, Ar tai ryhmä, jolla on kaava IIIc, Illd tai Ille
5 -S-(0)r-R10 -S1(C6H5)2-CH3 G /— '— G IIIc Illd Ille R10 on alempi alkyyli tai Ar, radikaalit G ovat samat tai 10 erilaiset ja ovat kukin C tai N, jolloin kuitenkin vähin tään yksi G on N, Ar on fenyyli, joka voi olla substituoi-tu 1 - 5 samalla tai erilaisella substituentilla ryhmästä kloori, fluori, nitro ja syaani tai joka voi olla elektroneja poistavien substituenttien lisäksi substituoitu yh-15 dellä tai kahdella lipofiilisellä ryhmällä, y on 0, 1 tai
2. Yhdisteet, joilla on kaava III R1-0. R3 \ X P-N III r2-o^/ Xr4 30 jossa R1, R2, R3 ja R4 merkitsevät samaa kuin patenttivaatimuksessa 1, mutta Rl on muu kuin metyyli.
2, R9 on ryhmä, jolla on kaava Ulf tai Illg . - <P Ulf Illg Y merkitsee samoja tai erilaisia substituentteja ryhmästä kloori, bromi ja jodi, R2 voi merkitä samaa kuin R1 ja R1 25 ja R2 voivat tällöin olla samat tai erilaiset, tai R2 on alempi alkyyli, ryhmä, jolla on kaava Illh -CH2-Ar Illh 30 tai myös Ar, jos Ar lohkeaa emäksisesti helpommin kuin R1, R5 ja R8 muodostavat yhdessä ryhmän, jolla on kaava Illi ;· Π Π 1111
35 AA 81 806 20 ja R1 voi myös olla metyyli, jos R2 on myös metyyli, R3 ja R4 voivat olla samat tai erilaiset ja merkitsevät 1-8 hiiliatomia sisältävää alkyyliä, 5-12 hiiliatomia sisältävää sykloalkyyliä, bentsyyliä tai fenyyliä tai ne 5 muodostavat niihin liittyvän typpiatomin kanssa tyydytty neen tai tyydyttymättömän heterosyklisen renkaan, jossa voi olla muitakin heteroatomeja ja substituentteja, ja hapetetaan saatu yhdiste, jolla on kaava IV r
10 R1-Os^ P-Z--R IV r2-o/ n 15 jossa R1, R2, R, Z ja n merkitsevät samaa kuin edellä, ja saadusta hapetetusta yhdisteestä, jolla on kaava V R3-0^ X V
20 R2-0^ Z--R n - jossa n, R1, R2, X, Z ja R merkitsevät samaa kuin edellä, vapautetaan kaavan I mukainen yhdiste emäksillä.
3. Patenttivaatimuksen 2 mukaiset yhdisteet, tunnetut siitä, että R5, R6 ja R7 ovat kukin vety, 35 R8 on syaani, fenyyli tai nitrolla, kloorilla tai yhdellä tai kahdella 8-24 hiiliatomia sisältävällä hiilivetyryh- II 21 81 806 mällä substituoitu fenyyli, R9 on ryhmä, jolla on kaava Ulf, R2 on alempi alkyyli tai merkitsee samaa kuin R1, R3 ja R4 merkitsevät 1-6 hiiliatomia sisältävää alkyyliä, sykloheksyyliä, bentsyyliä, fenyyliä tai yhdessä typpiato-5 min kanssa pyrrolidyyliä, piperidyyliä, morfolyyliä, tri-atsoloa, bentsotriatsoloa tai tetratsoloa, jolloin aromaattisten radikaalien substituenttina voi olla kloori, fluori, nitro tai syaani.
4. Patenttivaatimuksen 3 mukaiset yhdisteet, 10 tunnetut siitä, että R8 on mono- tai dinitrofenyy- li, mono-, di- tai trikloorifenyyli, 2-kloori-4-nitrofe-nyyli tai elektroneja poistavien substituenttien lisäksi yhdellä tai kahdella 12 - 18 hiiliatomia sisältävällä hii-livetyryhmällä substituoitu fenyyli, R9 on trikloorimetyy-15 li, R2 on metyyli ja R3 ja R4 merkitsevät alempaa alkyyliä. 81 806 22 Patenkrav
FI860905A 1985-03-06 1986-03-04 Fosforyliseringsfoerfarande och -medel. FI81806C (fi)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19853507881 DE3507881A1 (de) 1985-03-06 1985-03-06 Verfahren und mittel zur phosphorylierung
DE3507881 1985-03-06

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI860905A0 FI860905A0 (fi) 1986-03-04
FI860905A FI860905A (fi) 1986-09-07
FI81806B FI81806B (fi) 1990-08-31
FI81806C true FI81806C (fi) 1990-12-10

Family

ID=6264335

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI860905A FI81806C (fi) 1985-03-06 1986-03-04 Fosforyliseringsfoerfarande och -medel.

Country Status (17)

Country Link
US (1) US5039796A (fi)
EP (1) EP0195277B1 (fi)
JP (2) JPH0643433B2 (fi)
KR (1) KR940005338B1 (fi)
AT (1) ATE44151T1 (fi)
AU (1) AU596091B2 (fi)
CA (1) CA1340950C (fi)
DE (2) DE3507881A1 (fi)
DK (1) DK174772B1 (fi)
ES (1) ES8801293A1 (fi)
FI (1) FI81806C (fi)
GR (1) GR860600B (fi)
HU (1) HU202247B (fi)
IE (1) IE58874B1 (fi)
IL (1) IL78033A (fi)
PT (1) PT82139B (fi)
ZA (1) ZA861629B (fi)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5332845A (en) * 1985-03-28 1994-07-26 Chiron Corporation Phosphorylating reagents
US5071974A (en) * 1986-10-31 1991-12-10 Amoco Corporation Compositions and methods for the synthesis of oligonucleotides having 5'-phosphorylated termini
US5585481A (en) * 1987-09-21 1996-12-17 Gen-Probe Incorporated Linking reagents for nucleotide probes
US6031091A (en) * 1987-09-21 2000-02-29 Gen-Probe Incorporated Non-nucleotide linking reagents for nucleotide probes
SE8802574D0 (sv) * 1988-07-08 1988-07-08 Wallac Oy Oligonucleotide hybridization probes and means for the synthesis of the most preferred probes
US5380835A (en) * 1991-06-07 1995-01-10 Abbott Laboratories Silyl phosphorylating reagents and methods of using them
US6232465B1 (en) 1994-09-02 2001-05-15 Andrew C. Hiatt Compositions for enzyme catalyzed template-independent creation of phosphodiester bonds using protected nucleotides
US5763594A (en) * 1994-09-02 1998-06-09 Andrew C. Hiatt 3' protected nucleotides for enzyme catalyzed template-independent creation of phosphodiester bonds
US5990300A (en) * 1994-09-02 1999-11-23 Andrew C. Hiatt Enzyme catalyzed template-independent creation of phosphodiester bonds using protected nucleotides
US6214987B1 (en) 1994-09-02 2001-04-10 Andrew C. Hiatt Compositions for enzyme catalyzed template-independent formation of phosphodiester bonds using protected nucleotides
US5872244A (en) * 1994-09-02 1999-02-16 Andrew C. Hiatt 3' protected nucleotides for enzyme catalyzed template-independent creation of phosphodiester bonds
US5808045A (en) * 1994-09-02 1998-09-15 Andrew C. Hiatt Compositions for enzyme catalyzed template-independent creation of phosphodiester bonds using protected nucleotides
US6184347B1 (en) 1998-11-19 2001-02-06 Agilent Technologies Inc. Minimization of blooming in high-density arrays by using reactive wash reagents
EP1163251A1 (en) 1999-03-24 2001-12-19 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES N-acylphosphoramidites and their use in oligonucleotide synthesis
US7355037B2 (en) * 2001-12-03 2008-04-08 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Thermolabile hydroxyl protecting groups and methods of use
GB0304371D0 (en) 2003-02-26 2003-04-02 Solexa Ltd DNA Sequence analysis
WO2006065751A2 (en) 2004-12-13 2006-06-22 Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Cpg oligonucleotide prodrugs, compositions thereof and associated therapeutic methods
DE102009012640A1 (de) 2009-03-09 2010-09-30 Freie Universität Berlin Mit einer Phosphoamidatgruppe modifizierte Verbindung und deren Verwendung
US10128538B2 (en) 2014-07-09 2018-11-13 Nec Corporation Non-aqueous electrolytic solution and lithium ion secondary battery

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1075584B (de) * 1960-02-18 Hooker Chemical Corporation, Niagara Falls, N. Y. (V. St. A.) Verfahren zur Herstellung von tertiären aliphatischen Estern der phosphorigen Säure
DE1252648B (de) * 1962-01-29 1967-10-26 Hooker Chemical Corporation, Niagara Falls NY (V St A) Verfahren zur Herstellung von Tnmethyl phosphit
US4321365A (en) * 1977-10-19 1982-03-23 Research Corporation Oligonucleotides useful as adaptors in DNA cloning, adapted DNA molecules, and methods of preparing adaptors and adapted molecules
US4415732A (en) * 1981-03-27 1983-11-15 University Patents, Inc. Phosphoramidite compounds and processes
NL8302353A (nl) * 1983-07-01 1985-02-01 Stichting Katholieke Univ Fosforyleringsmiddel; werkwijze voor het bereiden daarvan; werkwijze voor het fosforyleren van een organische hydroxyl- of amineverbinding.
DE3484719D1 (de) 1983-08-19 1991-07-25 Gen Electric Modifizierte polyesterzusammensetzung.
CA1293938C (en) * 1985-03-28 1992-01-07 Thomas Horn Purification of synthetic oligomers

Also Published As

Publication number Publication date
KR940005338B1 (en) 1993-06-17
DK100986D0 (da) 1986-03-05
IE860579L (en) 1986-09-06
PT82139B (pt) 1988-07-29
FI81806B (fi) 1990-08-31
DE3507881A1 (de) 1986-09-11
ZA861629B (en) 1986-10-29
EP0195277A1 (de) 1986-09-24
HUT40675A (en) 1987-01-28
FI860905A0 (fi) 1986-03-04
JP2549495B2 (ja) 1996-10-30
JPS61207397A (ja) 1986-09-13
IE58874B1 (en) 1993-12-01
DK174772B1 (da) 2003-10-27
ATE44151T1 (de) 1989-07-15
IL78033A (en) 1990-12-23
IL78033A0 (en) 1986-07-31
JPH06228172A (ja) 1994-08-16
GR860600B (en) 1986-07-07
JPH0643433B2 (ja) 1994-06-08
FI860905A (fi) 1986-09-07
ES552614A0 (es) 1987-12-16
ES8801293A1 (es) 1987-12-16
DE3664047D1 (en) 1989-07-27
AU596091B2 (en) 1990-04-26
US5039796A (en) 1991-08-13
CA1340950C (en) 2000-04-11
PT82139A (de) 1986-04-01
AU5431186A (en) 1986-10-16
HU202247B (en) 1991-02-28
EP0195277B1 (de) 1989-06-21
DK100986A (da) 1986-09-07
KR860007273A (ko) 1986-10-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI81806C (fi) Fosforyliseringsfoerfarande och -medel.
JP2552048B2 (ja) ヌクレオチド鎖合成用試薬
US4816571A (en) Chemical capping by phosphitylation during oligonucleotide synthesis
JP5143872B2 (ja) ホスホネートヌクレオシド誘導体
Stawinski et al. Nucleoside H-phosphonates. 12. Synthesis of nucleoside 3'-(hydrogen phosphonothioate) monoesters via phosphinate intermediates
US5071974A (en) Compositions and methods for the synthesis of oligonucleotides having 5&#39;-phosphorylated termini
NZ225944A (en) Biotinylated polynucleotides and analogues thereof, processes for their preparation and intermediates therefor
JPH0531560B2 (fi)
Puri et al. The synthesis and reactivity of new 2-(N, N-diisopropylamino)-3-methylsulfonyl-1, 3, 2-benzoxazaphospholes. The utility of the 5-chloro analogue in the one-pot synthesis of oligothiophosphates:[ApsppA, ApspppA, ppp5′ A2′ ps5′ A, m7GpsppA, Apspppp, Apspp]
NL8902521A (nl) Werkwijze voor het bereiden van fosforothioaatesters.
Tawarada et al. Mechanistic studies on oxidative condensation of a thymidine 3′-H-phosphonate derivative with 3′-O-acetylthymidine
US5332845A (en) Phosphorylating reagents
Tolmachev et al. Phosphorus‐Containing Heterocyclic Compounds Derived from N‐Vinylpyrroles
Guzaev et al. Novel reagents for terminal phosphorylation and thiophosphorylation of synthetic oligonucleotides
Saady et al. First Synthesis of Fully Deprotected Diimidotriphosphoric Acid and Derivatives Designed for the Synthesis of" PNPNP" Nucleotides and Dinucleotides
Wu et al. ASYMMETRIC SYNTHESIS OF (Rp)-AND (Sp)-2-ETHYL-,(Rp)-2-PENTYLOXY-,(Sp)-2-PENTYLTHIO-AND (Sp)-2-PENTYLAMINO-4 H-1, 3, 2-BENZODIOXAPHOSPHORIN 2-OXIDES
JPH0588240B2 (fi)
Harger N-(Diphenylphosphinothioyl) hydroxylamine: preparation, characterisation and base-induced transposition of sulfur and oxygen atoms in its O-benzoyl derivative 1
Michalski et al. REACTIONS OF COMPOUNDS OF PHOSPHORUS HAVING POSITIVELY POLARIZED DIVALENT SULFUR WITH DISILATHIANES. SYNTHETIC AND MECHANISTIC ASPECTS
Surles et al. Synthesis and evidence for the stability of a glycerophosphochloridate: rac-1-O-hexadecyl-2-O-(methylcarbamyl)-sn-glycero-3-phosphorochloridocholine
Yang et al. Reactivity of nucleoside 5′‐O‐phosphates,‐phosphorothioates,‐methanephosphonates, and‐methanephosphonothioates toward activated xylonucleosides
Purit et al. The Synthesis and Reactivity of New 2-(N, N. Diisopropylamino)-3-Methylsulfonyl-l, 3, 2-Benzoxazaphospholes. The Utility of the 5-Chloro analogue in the One-Pot Synthesis of Oligothiophosphates:[APsPPA, APsPppA, ppp5'A2'Ps5'A, m7GPsppA, APsPPPP, APsPP]
Rao et al. Preparation and 17O NMR Spectra of 17O-Labeled Thymidine 5′-Phosphate Triesters, Alkylphosphonates, Dialkylphosphinates, and Phosphoramidates
JPH0613545B2 (ja) ヌクレオシドホスホロチオイットおよびその合成法
JPS63222187A (ja) リン酸エステル形成用縮合剤及びその使用方法

Legal Events

Date Code Title Description
FG Patent granted

Owner name: HOECHST AKTIENGESELLSCHAFT

MA Patent expired