NL8302353A - Fosforyleringsmiddel; werkwijze voor het bereiden daarvan; werkwijze voor het fosforyleren van een organische hydroxyl- of amineverbinding. - Google Patents
Fosforyleringsmiddel; werkwijze voor het bereiden daarvan; werkwijze voor het fosforyleren van een organische hydroxyl- of amineverbinding. Download PDFInfo
- Publication number
- NL8302353A NL8302353A NL8302353A NL8302353A NL8302353A NL 8302353 A NL8302353 A NL 8302353A NL 8302353 A NL8302353 A NL 8302353A NL 8302353 A NL8302353 A NL 8302353A NL 8302353 A NL8302353 A NL 8302353A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- mse
- group
- phosphorylating agent
- formula
- phosphorylating
- Prior art date
Links
- 230000000865 phosphorylative effect Effects 0.000 title claims abstract description 45
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 25
- TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N hydroxyl Chemical class [OH] TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 title 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 51
- -1 methylsulphonylethyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 43
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims abstract description 28
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 claims abstract description 7
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 claims abstract description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 23
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 20
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 14
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 claims description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 8
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 claims description 6
- 108091033319 polynucleotide Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000002157 polynucleotide Chemical class 0.000 claims description 5
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 5
- 238000004821 distillation Methods 0.000 claims description 3
- 239000012442 inert solvent Substances 0.000 claims description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 3
- 125000001376 1,2,4-triazolyl group Chemical group N1N=C(N=C1)* 0.000 claims description 2
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 3
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 abstract description 8
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 abstract description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 67
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 51
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 45
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 22
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 21
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 19
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 17
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 16
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 14
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 14
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 12
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 12
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 12
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 12
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 11
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 11
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 11
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 11
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 10
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 9
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 9
- AFQIYTIJXGTIEY-UHFFFAOYSA-N hydrogen carbonate;triethylazanium Chemical compound OC(O)=O.CCN(CC)CC AFQIYTIJXGTIEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 9
- JKTYGPATCNUWKN-UHFFFAOYSA-N 4-nitrobenzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 JKTYGPATCNUWKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- KZBUYRJDOAKODT-UHFFFAOYSA-N Chlorine Chemical compound ClCl KZBUYRJDOAKODT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 7
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 7
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 7
- 229960001866 silicon dioxide Drugs 0.000 description 7
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical compound C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 6
- RPACBEVZENYWOL-XFULWGLBSA-M sodium;(2r)-2-[6-(4-chlorophenoxy)hexyl]oxirane-2-carboxylate Chemical compound [Na+].C=1C=C(Cl)C=CC=1OCCCCCC[C@]1(C(=O)[O-])CO1 RPACBEVZENYWOL-XFULWGLBSA-M 0.000 description 6
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 5
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 5
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 5
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 5
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 4
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N phosphorous acid Chemical class OP(O)O OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XBPCUCUWBYBCDP-UHFFFAOYSA-N Dicyclohexylamine Chemical class C1CCCCC1NC1CCCCC1 XBPCUCUWBYBCDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000014443 Pyrus communis Nutrition 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229950006790 adenosine phosphate Drugs 0.000 description 3
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid Substances OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000003014 phosphoric acid esters Chemical class 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- CURNJKLCYZZBNJ-UHFFFAOYSA-M sodium;4-nitrophenolate Chemical compound [Na+].[O-]C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 CURNJKLCYZZBNJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- ZFWAHZCOKGWUIT-UHFFFAOYSA-N 1-anilino-3-phenyliminourea Chemical compound C=1C=CC=CC=1N=NC(=O)NNC1=CC=CC=C1 ZFWAHZCOKGWUIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000453 2,2,2-trichloroethyl group Chemical group [H]C([H])(*)C(Cl)(Cl)Cl 0.000 description 2
- 125000004201 2,4-dichlorophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C(Cl)C([H])=C1Cl 0.000 description 2
- 125000004182 2-chlorophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(Cl)=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- CSDQQAQKBAQLLE-UHFFFAOYSA-N 4-(4-chlorophenyl)-4,5,6,7-tetrahydrothieno[3,2-c]pyridine Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1C1C(C=CS2)=C2CCN1 CSDQQAQKBAQLLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XVMSFILGAMDHEY-UHFFFAOYSA-N 6-(4-aminophenyl)sulfonylpyridin-3-amine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1S(=O)(=O)C1=CC=C(N)C=N1 XVMSFILGAMDHEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100219382 Caenorhabditis elegans cah-2 gene Proteins 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- JSPSCIMSQMTXFU-UHFFFAOYSA-N bis[(4-nitrophenyl)methyl] hydrogen phosphate Chemical compound C=1C=C([N+]([O-])=O)C=CC=1COP(=O)(O)OCC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 JSPSCIMSQMTXFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 238000005660 chlorination reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- PAFZNILMFXTMIY-UHFFFAOYSA-N cyclohexylamine Chemical compound NC1CCCCC1 PAFZNILMFXTMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZJUGSKJHHWASAF-UHFFFAOYSA-N cyclohexylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].[NH3+]C1CCCCC1 ZJUGSKJHHWASAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 125000004573 morpholin-4-yl group Chemical group N1(CCOCC1)* 0.000 description 2
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- AQSJGOWTSHOLKH-UHFFFAOYSA-N phosphite(3-) Chemical class [O-]P([O-])[O-] AQSJGOWTSHOLKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAIAAWCVCHQXDN-UHFFFAOYSA-N phosphorus trichloride Chemical compound ClP(Cl)Cl FAIAAWCVCHQXDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000006748 scratching Methods 0.000 description 2
- 230000002393 scratching effect Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- AFINAILKDBCXMX-PBHICJAKSA-N (2s,3r)-2-amino-3-hydroxy-n-(4-octylphenyl)butanamide Chemical compound CCCCCCCCC1=CC=C(NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O)C=C1 AFINAILKDBCXMX-PBHICJAKSA-N 0.000 description 1
- WBBPRCNXBQTYLF-UHFFFAOYSA-N 2-methylthioethanol Chemical compound CSCCO WBBPRCNXBQTYLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004679 31P NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N Coenzym Q(11) Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(O)=O)C(O)C1O UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010029350 Neurotoxicity Diseases 0.000 description 1
- OOEWZEXEJQEFJO-UHFFFAOYSA-N O.[I] Chemical compound O.[I] OOEWZEXEJQEFJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 206010044221 Toxic encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O ammonium group Chemical group [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- TUCIXUDAQRPDCG-UHFFFAOYSA-N benzene-1,2-diol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O.OC1=CC=CC=C1O TUCIXUDAQRPDCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- VSGNNIFQASZAOI-UHFFFAOYSA-L calcium acetate Chemical compound [Ca+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O VSGNNIFQASZAOI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001639 calcium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000011092 calcium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229960005147 calcium acetate Drugs 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 239000010779 crude oil Substances 0.000 description 1
- PAFZNILMFXTMIY-UHFFFAOYSA-O cyclohexylammonium Chemical compound [NH3+]C1CCCCC1 PAFZNILMFXTMIY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 238000004042 decolorization Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000007135 neurotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000228 neurotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910000069 nitrogen hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- WYMSBXTXOHUIGT-UHFFFAOYSA-N paraoxon Chemical compound CCOP(=O)(OCC)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WYMSBXTXOHUIGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LCCNCVORNKJIRZ-UHFFFAOYSA-N parathion Chemical compound CCOP(=S)(OCC)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 LCCNCVORNKJIRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 125000000843 phenylene group Chemical group C1(=C(C=CC=C1)*)* 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 1
- 229920000137 polyphosphoric acid Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- AOJFQRQNPXYVLM-UHFFFAOYSA-N pyridin-1-ium;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC=[NH+]C=C1 AOJFQRQNPXYVLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- XMVONEAAOPAGAO-UHFFFAOYSA-N sodium tungstate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][W]([O-])(=O)=O XMVONEAAOPAGAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N teixobactin Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]1C(N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2NC(=N)NC2)C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@H]1C)[C@@H](C)CC)=O)NC)C1=CC=CC=C1 LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N 0.000 description 1
- ISIJQEHRDSCQIU-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 2,7-diazaspiro[4.5]decane-7-carboxylate Chemical compound C1N(C(=O)OC(C)(C)C)CCCC11CNCC1 ISIJQEHRDSCQIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 125000001425 triazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004383 yellowing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H11/00—Compounds containing saccharide radicals esterified by inorganic acids; Metal salts thereof
- C07H11/04—Phosphates; Phosphites; Polyphosphates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
- C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
- C07F9/09—Esters of phosphoric acids
- C07F9/091—Esters of phosphoric acids with hydroxyalkyl compounds with further substituents on alkyl
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
- C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
- C07F9/09—Esters of phosphoric acids
- C07F9/094—Esters of phosphoric acids with arylalkanols
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
- C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
- C07F9/09—Esters of phosphoric acids
- C07F9/12—Esters of phosphoric acids with hydroxyaryl compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
- C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
- C07F9/09—Esters of phosphoric acids
- C07F9/14—Esters of phosphoric acids containing P(=O)-halide groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
- C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
- C07F9/141—Esters of phosphorous acids
- C07F9/146—Esters of phosphorous acids containing P-halide groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
- C07F9/6527—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07F9/6533—Six-membered rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
- C07F9/6564—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms
- C07F9/6571—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms having phosphorus and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07F9/6574—Esters of oxyacids of phosphorus
- C07F9/65744—Esters of oxyacids of phosphorus condensed with carbocyclic or heterocyclic rings or ring systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/16—Purine radicals
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
: 'vs VO 4693
Titel: Fosforyleringsmiddel; werkwijze voor het bereiden daarvan; werkwijze voor het fosforyleren van een organische hydroxyl- of amineverbinding.
De uitvinding heeft betrekking op een fosforyleringsmiddel, dat tan minste één beschermde hydroxylgroep en ten minste één vertrekkende groep bevat. Tevens heeft de uitvinding betrekking op een werkwijze voor het bereiden van een dergelijk fosforyleringsmiddel en op een werkwijze 5 voor het fosforyleren van een organische hydroxyl- of amineverbinding.
Een belangrijk toepassingsgebied van fosforyleringsmiddelen is de synthese van DNA- en RNA-fragmenten, die bij biologisch onderzoek gebruikt kunnen worden, Een overzicht van de methoden ter bereiding van zulke fragmenten is beschreven in Tetrahedron 34, 3143-3179 (1978). Der-10 gelijke fragmenten worden oligonucleotiden genoemd. Het zijn polyfosfor-zuuresters, waarin de 3 *-hydroxylgroep van een nucleoside-eenheid met de 51-hydroxylgroep van een andere nucleoside-eenheid verbonden is via êen fosforzuurdiesterverbinding. Bij de koppeling van twee nucleoside-eenheden wordt doorgaans de 31-hydroxylgroep van de ene eenheid gefos- _ 15 foryleerd tot een fosforzuurester, die in staat is een esterverbinding te vormen met de 5'-hydroxylgroep van de andere eenheid.
Deze synthesetechniek, die geïntroduceerd is door Eckstein en Riszk in Angew. Chemie 79, 684-685 (1976), staat bekend als de fosfo-triester-benadering. De hierbij toegepaste fosforyleringsstratsgie wordt 20 in Reactieschema A op het formuleblad getoond. Hierin staaft Pr en Pr' voor hydroxyIbeschermende groepen, stelt L een vertrekkende groep voor en stelt R-OH een monovalent nucleosidederivaat, nucleqtidederivaat of polynucleotidederivaat voor.
Omdat de synthesetechniek voor de bereiding van polynucleotiden 25 met langere ketens in verband met de betrekkelijk langzame reactie van geactiveerde fosfaten met hydroxylgroepen niet erg efficiënt is, hebben Letsinger, Finnan en Lunsford in J.A.C.S. 97, 3278-3279 (1975) de synthesestrategie voorgesteld, welke in reactieschema B van het formuleblad is weergegeven. Hierin stelt Pr een hydroxylbeschermingsgroep voor, L 2
30 stellen L en L' vertrekkende groepen voor, en zijn R -OH en. R -OH
nucleosidederivaten, nucleotidederivatan of polynucleotidederivaten, die 8302353 * J* » tl - 2 - met elkaar verbonden moeten worden. Het fosforyleringsmiddel is in dit geval een geactiveerde fosfiet-triester. Na de koppeling van de hydroxyl-verbindingen wordt een fosfiet-triester verkregen, die met zeer hoge opbrengst met een jodium-water mengsel tot een fosfaat-triester kan worden 5 geoxydeerd. Deze synthesemethode staat bekend als de fosfiet-triester methode.
In de nucleoside-eenheden dienen in de regel alle andere reactieve groepen dat wil .zeggen in de ene nucleoside-eenheid alle reactieve groepen behalve de 3'-hydroxylgroep en in de andere nucleoside-eenheid 10 alle reactieve groepen behalve de 5'-hydroxylgroep, beschermd te zijn.
Het verdient de voorkeur als fosforyleringsmiddel een zodanig fosforzuur-derivaat of fosforigzuurderivaat te gebruiken, dat na het tot stand komen van de diesterverbinding .tussen twee nucleosiden de derde hydroxylgroep van het fosforzuur of fosforigzuur beschermd is. Het voornaamste bezwaar 15 van een onbeschermde, aan fosfor gebonden hydroxylgroep is namelijk, dat deze bij een volgende fosforylering met het fosforyleringsmiddel kan reageren (zie het bovengeciteerde artikel in ''Tetrahedron”). De beschermende groep moet echter aan het einde van de synthese verwijderd kunnen worden, zonder schade aan de intemucleotide bindingen en zonder dat 20 de purine- of pyrimidinebasen worden afgesplitst.
Als hydroxylbeschermingsgroepen voor het fosforyleringsmiddel worden in het algemeen in basisch milieu verwijderbare groepen toegepast, zoals de fenylgroep, de o-chloorfenylgroep, de 2,4-dichloorfenylgroep, de 2,2,2-trichloorethylgroep en de β-cyanoethylgroep, in het geval van : 25 fosfaat-triester fosforyleringsmiddelen, en de o-chloorfenylgroep, de 2,2,2-trichloorethylgroep en de methylgroep, in het geval van fosfiet-triester fosforyleringsmiddelen. De verwijdering van deze groepen in basisch milieu, verder aangeduid als ontscherming, is in het algemeen een lastige of langdurige affaire. Zo dient voor de ontscherming in geval van 30 fenyl als beschermende groep gedurende 8 uren bij 20°C met een 4:1 mengsel van 0,125 N NaOH/dioxan te worden behandeld; in geval van o-chloorfeny 1 enige uren met 0,1 - 0,125 fl NaOH te worden behandeld; in geval van 2,4-dichloorfeny 1 gedurende 1-10 uren met 5 equivalenten oximaat in Et^N/dioxan/^O te worden behandeld; en in geval van 2,2,2-trichloor-35 ethyl gedurende 0,5 uur met zinkstof in kokende pyridine te worden behandeld.
8302353
V
- 3 -
Thans is gevonden dat de methylsulfonylethylgroep CH^-SO^-C^-CH^ (verder aangeduid als Mse) een zeer geschikte hydroxylbeschermende groep voor fosforyleringsmiddelen is, die onder zure condities zeer stabiel is en onder basische condities zeer snel en gemakkelijk en desgewenst 5 selectief kan worden verwijderd.
De uitvinding verschaft dan ook een fosforyleringsmiddel van de in de aanhef vermelde soort, dat gekenmerkt is doordat het ten minste één, door methylsulfonylethyl beschermde hydroxylgroep bevat.
Meer in het bijzonder verschaft de uitvinding een fosforylerings-10 middel dat beantwoordt aan een van de formules 1-4, waarin Mse de methylsulfonylethylgroep CH^SC^CE^C^- voorstelt en L en LTvertrekkende groepen voorstellen.
In principe zijn als vertrekkende groepen L en L' alle gebruikelijke vertrekkende groepen geschikt, maar de voorkeur gaat uit naar 15 chloor; 1,2,4-triazolyl; tetrazolyl; ftalimidooxy; succinimidooxy en benzotriazooloxy.
De grootste voorkeur .gaat uit naar een fosforyleringsmiddel dat beantwoordt aan formule 5 (fosfaat-triester fosforyleringsmiddel) en een fosforyleringsmiddel dat beantwoordt aan formule 6 (fosfiet-triester 20 fosforyleringsmiddel).
Hoewel de uitvinding in de voorbeelden aan de hand van deze twee specifieke fosforyleringsmiddelen zal worden toegelicht, zal duidelijk zijn dat de uitvinding niet tot die twee voorkeursuitvoeringsvormen is beperkt en dat onder omstandigheden het gebruik van bijv. andere ver-25 trekkende groepen dan chloor de voorkeur heeft. Met name kan bij gebruik van een fosfiet-triester gewenst zijn dat het, een hoge reactiviteit maar tegelijk ook een geringe selectiviteit veroorzakende chloor vervangen wordt door een vertrekkende groep zoals een triazolyl- of een tetrazoiylgroep, waardoor de selectiviteit (0-fosforylering vein de 30 nucleoside-suiker i.p.v. N-fosforylering van de nucleoside-base) van het fosforyleringsmiddel wordt verbeterd.
De Mse-groep is niet eerder als beschermende groep voorgesteld.
Wel is uit de peptide-chemie de groep methylsulfonylethyloxycarbonyl CH^SC^C^C^OCO- (Msc-groep) bekend als aminobeschermingsgroep (Tesser 35 en Balvert-Geers in Int. J. Peptide Protein Res. 7, 295-305 (1975).
8302353 <* ί » - 4 -
Voor de synthese van verbindingen met deze Msc-groep wordt uitgegaan van 2-methylsulfonylethylalkohol, dat zelf bereid kan worden door katalytische oxydatie van 2-methylmercaptoethanol met waterstofperoxyde en natriumwolframaat. De Msc-functie is een extreem zuurstabiele, onder 5 basische condities snel te verwijderen beschezmingsgroep.
De fosforyleringsmiddelen volgens de uitvinding kunnen op een voor analoge verbindingen bekende wijze worden bereid. Een deskundige zal in het algemeen in staat zijn vast te stellen welke synthesemethoden in aanmerking komen en welke daarvan voor de synthese van een gekozen 10 fosforyleringsmiddel volgens de uitvinding bijzonder geschikt zijn.
Een bijzondere methode voor het bereiden van een fosforyleringsmiddel met formule 5 is een werkwijze, waarbij 2-methylsulfonylethylalkohol in een inert oplosmiddel, bij voorkeur droog tetrahydrofuran, achtereenvolgens in reactie wordt gebracht met PCl^ en Cl2· Bij voor- 15 keur vindt de behandeling met PCl^ plaats bij een lage temperatuur van o o 0 - 10 C, liefst ongeveer 5 c,. en vindt de daarop aansluitende behandeling met Cl^ plaats bij een temperatuur van 15 - 30°C, liefst 20 - 25°C. In reactieschema C op het formuleblad zijn de reacties weergegeven,die bij deze synthesemethode plaats kunnen, hebben. In de eerste stap ontstaat 20 een twee-fasensysteem tussen tetrahydrofuran en een olie, die kan bestaan uit tris-(Mse)-fosfiet of bis-(Mse)-fosfiet. De eerstgenoemde stof kan bovendien na reactie met HCl zijn overgegaan in de tweede. De ware aard van het intermediaire fosfiet is nog niet ondubbelzinnig vastgesteld. Door het in de eerste stap verkregen twee-fasensysteem met Cl2 25 te behandelen kan de verbinding met formule 5 in een hoge opbrengst van ongeveer 90% worden verkregen.
Een bijzondere methode voor het bereiden van een fosforyleringsmiddel met formule 6 is een werkwijze, waarbij 2-methylsulfonylethylalkohol onder uitsluiting van water al roerend in een overmaat PCl^ 30 onder terugvloeikoeling wordt gekookt, totdat geen HCl meer ontwijkt, . waarna de overmaat PCl-j wordt afgedestilleerd en de overblijvende olieachtige vloeistof onder verminderde druk wordt gedestilleerd. Bij voorkeur wordt de 2-methylsulfonylethylalkohol in een vier- tot achtvoudige overmaat, liefst zesvoudige overmaat PCl^ onder terugvloeikoeling bij 35 90 - 100°C gekookt. De 2-methylsulfonylethylalkohol wordt bijvoorbeeld 8302353 ar * - 5 - in zuivere vorm onder ultradroge omstandigheden en bij kamertemperatuur gedruppeld bij een zesvoudige overmaat PCl^, waarna in afwezigheid van een oplosmiddel of base onder hevig roeren bij 90 - 100°C onder terug-vloeikoeling wordt gekookt. Wanneer geen HC1 meer ontwijkt wordt de 5 overmaat PCl^ weggedestilleerd. Er blijft dan een zeer hygroscopische, met water heftig reagerende olie-achtige vloeistof over, die een of meer onbekende verontreinigingen naast het gewenste reactieprodukt bevat. Wanneer deze vloeistof bij verlaagde druk in een Kugelrohr wordt gedestilleerd, komt bij 0,1 mm Hg en 160°C een heldere olie-achtige vloei-10 stof over, die naast het gewenste reactieprodukt nog een geringe hoeveelheid verontreinigingen bevat. Onder dezelfde condities komt bij 200°C een nog minder verontreinigingen bevattende heldere olie-achtige vloeistof over. De opbrengst van de gewenste verbinding met formule 6 bedraagt na het destilleren ongeveer 56%, berekend op basis van de 15 als uitgangsmateriaal toegepaste 2-methylsulfonylethylalkohol.
Vanzelfsprekend kan de verbinding met formule 6 met bekende technieken in nog zuiverder vorm worden geïsoleerd.
De fosforyleringsmiddelen volgens de uitvinding kunnen worden gebruikt voor het fosforyleren van organische hydroxyl- en aminever-20 bindingen. Voorbeelden daarvan zijn suikers, bijv. glucose en myo-inositol; alkoholen, zoals p-nitrobenzylalkohol en pyrocatechol; en secundaire aminen zoals morfoline. Ook alkoholaten, zoals natrium-paranitrofenolaat, kunnen met behulp van de onderhavige fosforyleringsmiddelen worden ge-fosforyleerd. Wanneer het toegepaste fosf oryïeringsmiddel een fosfiet-25 triester is, kan het fosforyleringsprodukt op een op zichzelf bekende wijze worden geoxydeerd tot een fosfaat-triester, bijv. met jodium in water.
De fosforyleringsmiddelen volgens de uitvinding zijn· In het bijzonder bestemd en geschikt voor het fosforyleren van nucleosidederivaten, 3Q nucleotidederivaten en polynucleotidederivaten, die een vrije 3'-hydroxyl- groep of een vrije 5'-hydroxyIgroep hebben en waarvan de overige reac-tieve groepen, bijv. hydroxyIgroepen en aminegroepen, indien aanwezig, beschermd zijn.
Voor de ontscherming zijn twee bijzonder geschikte methoden ont-35 wikkeld. De eerste methode maakt gebruik van een ontschermingsmengsel, 8302353 - 6 - * * t dat NaOH en methanol bevat, in het bijzonder een 14:5:1 mengsel (volume-verhouding) van dioxan/methanol/4N NaOH. Dit mengsel bevat 5 vol % water en heeft een NaOH concentratie van 0,2 M. Door een geschikte keuze van het aantal equivalenten base, waarmee de te ontschermen verbindingen in 5 aanraking wordt gebracht, is het mogelijk om de Mse-groep of Mse-groepen in korte tijd volledig te verwijderen of, indien de verbinding twee Mse-groepen bevat, desgewenst selectief slechts één van deze Mse-groepen te verwijderen. Zo zal het veelal mogelijk zijn om door slechts 1,1 equivalenten base te gebruiken selectief slechts één van de Mse-groepen te 10 verwijderen, terwijl bij gebruik van bijvoorbeeld 3 equivalenten base beide Mse-groepen volledig worden verwijderd. De ontscherming vereist in het algemeen een behandelingsduur in de orde van grootte van enkele seconden tot enkele minuten, bijvoorbeeld 10 seconden bij gebruik van 3 equivalenten base en 2 minuten in geval van 1,1 equivalenten base.
15 De tweede ontschermingsmethode maakt gebruik van ammoniak, hetzij als een geconcentreerde oplossing van ammoniak in methanol, hetzij als ammoniakgas dat door een oplossing van de te ontschermen verbinding in acetonitrile of tetrahydrofuran wordt geleid. Ook met deze methode is selectieve ontscherming mogelijk. Met een geconcentreerde oplossing van 20 ammoniak in methanol (1:1) kan binnen ongeveer 1-2 minuten bij 21°C een selectieve verwijdering van slechts één Mse-groep worden gerealiseerd; volledige verwijdering van beide Mse-groepen vereist meer dan 30 minuten. Bij doorleiden van ammoniakgas door een oplossing van de te ontschermen verbinding in acetonitrile of tetrahydrofuran is bij 21°C ongeveer 25 1 tot 1,5 uur nodig om een selectieve ontscherming van één Mse-groep te realiseren. Deze ontscherming kan echter sterk worden versneld door de reactie in tegenwoordigheid van water uit te voeren. Wanneer bijvoorbeeld 2 vol % water aan de oplossing wordt toegevoegd, blijkt de selectieve ontscherming in ongeveer 30 minuten te zijn gerealiseerd.
30 De uitvinding wordt aan de hand van het onderstaande experimentele gedeelte nader toegelicht.
1. Algemene voorzorgsmaatregelen.
Reacties waarin gebruik wordt gemaakt van fosfochloridaten of fosfodi-chloridieten, dienen onder ultradroge condities te geschieden. Daarom 8302353 - 7 - werd in deze gevallen gebruik gemaakt van glaswerk, dat enige uren of een nacht bij 100°C werd gedroogd en hierna werd afgekoeld in exsicca-toren boven of NaOH-pellets. In bovengenoemde reacties gebruikte oplosmiddelen werden als volgt gedroogd: 5 Tetrahydrofuran, THF. De absolute kwaliteit werd gedroogd en peroxide- vrij gemaakt door vlak voor gebruik te destilleren van calciumhydride (CaE2), uitgezonderd in reacties waar gebruik werd gemaakt van methyl-sulfonylethyl-fosfodichloridiet met formule 6, waar absolute THF eerst over een kolom actief aluminiumoxide (Alumina-Wöelm B- Super I, 0457Ι-ΙΟ b!159)t werd geleid, waarna minimaal 4 uren werd gedroogd op Na-metaal onder uitsluiten van daglicht.
acetonitrile, CH^CN. Technische kwaliteit werd vlak voor gebruik gedestilleerd van ?205*
Pyridine, C^H^N. Pyridine werd bewaard in een goed afgesloten fles op 15 CaH^ en vlak voor gebruik gedestilleerd van.CaH2 onder uitsluiten van vocht.
Het watervrij maken van reagentia geschiedde als volgt:
Methylsulfonylethylalkohol, Mse-OH, werd opgelost (60% w/v) in absolute ethanol (Baker), waarna de ethanol onder verminderde druk in de rotatie-20 verdamper werd verwijderd, (badtemperatuur 40-50°C). De bewerking werd drie maal herhaald. Spoortjes ethanol werden in een nacht aan een droog-vriezer verwijderd.
Fosfortrichloride, PCl^, werd vlak voor gebruik onder uitsluiten van vocht gedestilleerd.
25 Voorts moet hier nog worden gewaarschuwd voor de eventuele neurotoxici-teit van de gesynthetiseerde fosfaatesters. Dialkoxy-fosfochloridaten zijn notoire zenuwgiften, terwijl veel van de hier beschreven neutrale fosforzuuresters structurele overeenkomsten vertonen met de landbouw-bestrijdingsmiddelen Parathion (formule 7) en vooral Paraoxon (formule 3).
30 Verder zijn vele fosfieten bekend als giftige stoffen.
8302353 m * » - 8 - 2. Analytische technieken.
a) . Dunne-laag-chromatografie (TLC).: TLC werd uitgevoerd op kiezelgelplaten met ü.V.-indicator. Opgebracht werd telkens 2 γ van het te analyseren monster.
5 (1 γ is lpL van een 1%-oplossing.). Detectie vond plaats met 254 nm U.TZ.-licht.
De.'codering van gebruikte loopmiddelen is als volgt:
Loopmiddel Code
CHCl^:CH^OH 2:1 A
10 CHCl3:CH^OH 9:1 B
n-Butanol:azijnzuur:water 4:1:1 C
Isopropylalcohol.-NH^:water 4:1:1 D
Isopropylalcohol:NH3:water 7:1:2 E
b) . NMR-spectra.
15 ^H-NMR-spectra werden vervaardigd op een Hitachi 60 MHz- of op een Bruker lOOMHz-apparaat.
^P-NMR-spectra werden eveneens met laatstgenoemde machine vervaardigd.
c) . IR-spectra.
20 Infraroodspectra werden genomen met een Perkin-Elmer (KBr-pellets).
Hygroscopische vaste stoffen werden op een KBr-pellet uitgewreven en vervolgens "gesandwiched" met een tweede KBr-pellet.
d) . Bepaling van hydrolyseerbaar chloor.
Benodigd: 25 Isopropylalkohol p.a.; 0,1% broomfenolblauw in abs. ethanol.; 2N HCl04-oplossing; Difenylcarbazon, 0,5% in abs. ethanol.; o,oiitf Hg(NO^)^-oplossing.
Werkwijze: 10-40 mg van de te bepalen stof werd zeer nauwkeurig ingewogen en 8302353 • « - 9 - vervolgens opgenomen in 50 ml. isopropylalkohol p.a. Bij zeer reac-tieve stoffen werd ervoor gewaakt, dat tijdens deze behandeling geen HCl-gas ontweek.
Er werd 10 ml gedestilleerd water toegevoegd en hierna werd 0,2 ml.
5 broomfenol-blauw-oplossing toegevoegd. Een druppel van de 2N HCl04~ oplossing gaf nu omslag naar geel.
Er werd vervolgens 0,2 ml. difenylcarbazon-oplossing toegevoegd en de wand van het titratievat werd met 30 ml isopropylalkohol p.a. gespoeld. De oplossing werd met 0,01 M Hg(NO^)2-oplossing in gedes-10 tilleerd water tot kleuromslag naar paars getitreerd.
Titerstelling van de Hg(NO^)^-oplossing geschiedde met KC1, p.a.-kwaliteit.
3. Synthese van bis-(Mse)-fosfochloridaat (formule 5).
In een 250-ml driehalskolf, uitgerust met een thermometer, een calcium-15 chloridebuis, een 50-ml druppeltrechter en-een bovenroerder met gasdicht afsluitend paraffine-gesmeerd glijlager, werd 24,83 g (Q,2Q0 mol) Mse-OH in 50 ml tetrahydrofuran gebracht. Onder stevig roeren werd aan deze oplossing 9,16 g (0,0667 moll PCl^ in 25 ml tetrahydrofuran toegedruppeld.
De druppelsnelheid was ca. 1 druppel per 1,5 seconde, terwijl door koelen 20 met een ijs-zout-mengsel de temperatuur van het reactiemengsel op 5°C werd gehouden.
Halverwege de toevoeging van PCl^ ontstond een twee-fasen systeem. Nadat alle PCl3 was toegevoegd, werd nog één uur geroerd, waarna het twee-fasen systeem bij 21°C een nacht ongemoeid werd gelaten. (Hiertoe werd de 25 driehalskolf met aluminiumfolie tegen daglicht beschermd).
Onder hevig roeren werd vervolgens, via twee wasflessen met 98% H^SO^, chloorgas in het twee-fasen systeem geleid. De combinatie van koelen met ijs en snelheid van chloorgas inleiden tijdens deze exotherme reactie werd zodanig gekozen, dat de temperatuur tussen 20 en 25°c bleef.
30 Na ca. 13 minuten chloorgas inleiden verdween het twee-fasen systeem en ontstond een heldere, door chloorgas lichtgeel gekleurde, oplossing.
Na ca. 80 minuten chloorgas inleiden werd de oplossing plotseling troebel door het uitkristalliseren van bis-(Mse)-fosfochloridaat. Gedurende de hierop volgende vijf minuten kristalliseerde steeds meer van het produkt 35 uit, terwijl de exothermie van de reactie duidelijk afnam. Het laatste 8302353
. Λ W
- 10 - werd opgevangen door minder sterk te koelen. Na 90 minuten chloorgas inleiden verdween de gele kleur van het chloor nog binnen twee minuten uit de oplossing.
Na 120 minuten was de reactie nagenoeg afgelopen; de kleur van het 5 chloorgas had dan ca. 5 minuten nodig om te verdwijnen. Op dit tijdstip werd de chlorering dan ook gestopt.
"Overchloreren" leidde vaak tot een kwalitatief slecht produkt.
Nadat vervolgens gedurende 1 uur droog ^-gas door het mengsel was geleid om HCl-gas te verwijderen, werd het produkt verzameld op een G-3 10 glasfilter. Hierna werd het op het filter gewassen met droge tetra- hydrofuran en hierna twee maal met 80 ml tetrahydrofuran opgeroerd en wederom afgefiltreerd.
Vervolgens werd het produkt 3-4 uren in een exsiccator boven P2°5 aan het oliepompvacuum gebracht om HCl en tetrahydrofuran te verwijderen.
15 Hierna kon 19,24 g los, compact wit poeder worden verkregen. De stof werd bewaard in porties van 2 g in preparaat-flesjes, omwikkeld met parafilm. Deze flesjes werden in potten met uitgegloeid calciumchloride geplaatst, die wederom goed omwikkeld met parafilm, bij 4°C werden opgeslagen.
20 bis-(Mse)-fosfochloridaat (MW: 328,75): - Opbrengst 19,24 g (0,0585 mol) d.i. 88% (PCl-j) of 59% (Mse-OH).
- Smelttraject: 92-94°C
- Hydrolyseerbaar chloor: 98 mol%. (theorie 100 mol %).
-1H-NMR: p 25 functie groep 6 (ppm) mult. J (Hz) aantal prot.
Mse- CH3- 3,05 S - 6 |3-CH2- 3,60 T 3J , 5,5 4 crCH,- 4,72 "Sext" 3Ja _? 5,5 4
2 Ïï-H
W 8'5 £ fluit, staat voor de multipliciteit van het signaal· S: singlet 1 8302353 D: doublet; T: triplet; etc.
- 11 - 4. Synthese van bis-(Mse)-paranitrofenylfosfaat (formule 9)
Aan een oplossing van 3,616 g (0,011 mol) bis-(Mse)-fosfochloridaat in_110 ml acetonitrile in een 250 ml peerkolf werd 1,777 g (0,011 mol) natriumparanitrofenolaat (gedroogd boven in vacuo bij 60°C, tot ^ oranje-rode kleur zonder spoortjes geel) toegevoegd, waarna de kolf weer meteen werd afgesloten. Het oranje-rode natriumparanitrifenolaat ging onder roeren bij kamertemperatuur geleidelijk in oplossing, terwijl zich een neerslag van NaCl afscheidde.
Na ca. 20 minuten roeren was alle natriumparanitrofenolaat in oplossing 10 gegaan, en werd het ontstane NaCl afgefiltreerd.
Na indampen van het filtraat ontstond een gele olie, waaruit aan een oliepomp de resten acetonitrile werden verwijderd.
Na met een spatel de wand van de kolf te hebben bekrast, kristalliseerde de olie spontaan.
15 Herkristalliseren uit methanol leverde 4,07 g witte kristallen.
bis-(Mse)-paranitrofenylfosfaat. (MW: 431,4).: - Opbrengst 4,07 g (0,0094 mol), 85,5% - Smelttraject: 107-108°C.
- Rf-waarde in loopmiddel A: 0,78.
20 - Elementanalyse: C: 33,20-33,21; H: 4,11-4,16; N: 3,12-3,12.
theorie: C: 33,41; Es 4,21; N: 3,25.
-1H-NMR: functie groep $ (ppm) muit. J(Hz) aantal prot.
Mse CH3- 3,05 S - 6 25 S-CH2~ 3'50 T 3jH-H; 5,5 4 a-CH,- 4,57 "Sext” 3J ; 5,5 4 ,_ W 7-°_
Aryl- Aryl- 7,92 2x D 3J_ ? 9,0 4
η—H
' -IR: 8302353 functie groep golfgetal en sterkte v. signaal - 12 - £
Mse- -S02- 1315 cm"1 (M), 1135 en 1120 cm"1(S)
Aryl- Aryl-H 1600 cm 1 (M)
Aryl-N02 1520 en 1355 cm"1 (S) 5 Fosfaat- P=;0 1290 cm 1 (S) P-O-Aryl 1170 cm 1 (ZW) P-O-Alkyl 1035 cm"1 (S) £ Relatieve sterktes: ZW: zwak,* M; middel; S: sterk, 5. Kinetiek van de ontscherming van bis-(Mse)-paranitrofenylfosfaat 10 met NaOH/methanol.
86,3 mg (200 ^unol).. bis-(Mse)-paranitrofenylfosfaat werd onder verwarmen opgelost in 2 ml dioxan. Van deze oplossing werd telkens 50 yxL (totaal: 5 jl mol ester) in Eppendorf centrifugevaatjes gepipetteerd.
Het ontschermingsmengsel bestond uit 0,25 ml dioxan in 1,875 ml 15 methanol waaraan was toegevoegd: 0,375 ml 4N NaOH (Oplossing A) of: " 2,67N " ( " ' B) of: " 2,ON " ( " C) Of: " 1,47N " ( " D).
20 Het toevoegen van 25 pL. van bovenstaand ontschermingsmengsel A, B, C
of D aan het vaatje met 5 ^imol ester in 50 jxL dioxan resulteerde in een mengsel dioxan: methanol: Na0H/H20 14:5:1 met als relatieve baseconcen-tratie: 3 equivalenten (A), 2 eq. (B), 1,5 eq. (C) of 1,1 eq. (D) .
Het ontschermingsmengsel werd met een Hamilton-microsyringe toegevoegd 25 aan de ester-oplossing, waarna onmiddellijk werd gemengd met een Vortex-mixer. Na de voorgeschreven reactieperiode werd de base onmiddellijk gequenched met 0,1 ml van een oplossing van 0,2M azijnzuur in methanol. Dunne-laag-chromatografie werd uitgevoerd met 2 jxL van de ontstane oplossing op kiezelgelplaten met U.V-.—indicator in loopmiddel A, 8302353 - 13 - R^-waarden: Paranitrofenylfosfaat, bis Na-zout (formule 11):0; raono-(Mse)-paranitrofenylfosfaat, Na+-zaut(formule 10): 0,24; bis-(Mse)-paranitrofenylfosfaat (formule 9): 0,78»
De dunnelaagchromatogrammen lieten zien, dat bij gebruik van 1,1 eq.base 5 na 120 seconden selectief de verbinding met formule 10 was verkregen; dat bij gebruik van 3 eq.base reeds na 10 seconden nog alleen de verbinding met formule 11 aantoonbaar was. Bij gebruik van 1,5 resp. 2 eq.base werd na 300 sec. resp. 120 sec. steeds een mengsel van beide verbindingen verkregen, waarin de verbinding met formule 11 overheerste.
10 6. Ontscherming van bis-(Mse)-paranitrofenylfosfaat tot mono-(Mse)- + -f· paranitrofenylfosfaat. Na -zout en paranitrofenylfosfaat, bis Na -zout a) Mono-(Mse)-paranitrofenylfosfaat, Na*-zout (formule 10)
Aan een oplossing van 2,66 g (0,0062 mol) bis-(Mse)-paranitrofenylfosfaat in 61,25 ml dioxan werd onder hevig roeren bij kamertempera-15 tuur langzaam 92,75 ml ontschermingsmengsel (Dioxan: methanol: 1,4 N
NaOH/^O * 14:5:1) toegedruppeld. Na 8 minuten was de toevoeging voltooid en bedroeg de hoeveelheid toegevoegde base 1,05 equivalenten. Hierna werd met drie druppels azijnzuur gequenched tot kleuromslag van het vrijgekomen spoortje paranitrofenol (geel - >kleurloos)♦ 20 Indampen van het reactiemengsel aan de rotatieverdamper leverde een gele olie, die na toevoegen en weer afdampen van gedestilleerd water kristallijn werd. De gele kristallen werden door herhaaldelijk wassen met tetranydrofuran ontkleurd.
“f*
Mono-(Mse)-paranitrofenylfosfaat, Na -zout. (MW: 347,21): 25 . - Opbrengst 1,95 g (0,0562 mol), 91%.
- Chromatografisch zuiver, loopmiddel A: R^: 0,24.
b) Paranitrofenylfosfaat, bis-Na -zout (formule 11)
Aan een oplossing van 380 mg (0,00088 mol) bis-(Mse)-paranitrofenylfosfaat in 8,75 ml dioxan werd onder hevig roeren bij kamertempera-30 tuur 13,25 ml ontschermingsmengsel (Dioxan:methanol:4N NaOH/^O = 14:5:1) toegedruppeld. Vrijwel onmiddellijk ontstond een neerslag.
De toevoeging nam 15 seconden in beslag, en na in totaal 20 seconden reageren werd op kleuromslag van paranitrofenol gequenched met ongeveer 0,15 ml azijnzuur. Het neerslag werd afgefiltreerd en gewassen 3302353 • V v - 14 - met dioxan, waarna het gedurende een uur in een vacuumexsiccator bij 1 mm Hg werd gebracht, om dioxan en eventueel azijnzuur te verwijderen.
Paranitrofenylfosfaat, bis Na -zout 5 - Opbrengst Q,260 g (0,00099 mol), 112% (Kristalwater !) - Ruwaarde in loopmiddel A : £.
- IR: functie groep golfgetal (cm *) en sterkte
Aryl- Aryl-H · 1600 (S) 10 Aryl-N02 1500 (S) en 1355 (S)
Fosfaat- P=0 1290 (S) P-O-Aryl 1270 (S,schouder)
Ter karakterisering werd het bovenverkregen bis Na+-zout omgezet in het bis-cyclohexylammonium-zout van paranitrofenylfosfaat. Cyclohexyl-15 ammoniumchloride werd bereid door aan een oplossing van cyclohexylamine in di-ethylether een watervrije oplossing van HC1 in ethylacetaat toe te druppelen tot een dik papperig neerslag ontstond; kristallisatie uit ethanol leverde zuiver cyclohexylammoniumchloride.
Een oplossing van 0,261 g (0,00194 mol) cyclohexylammoniumchloride in 20 2,3 ml gedestilleerd water werd toegevoegd aan een oplossing van 0,230 g (0,00097 mol) paranitrofenylfosfaat, bis-Na+-zout in 2,3 ml gedestilleerd water, waarbij onmiddellijk het bis-cyclohexylammoniumzout van piaranitro-fenylfosfaat precipiteerde; het neerslag werd een aantal malen gewassen met gedestilleerd water.
25 De opbrengst bedroeg 0,312 g (0,000747 mol) hetgeen 77% is op basis van “t* het bis Na -zout. Dit impliceert een werkelijke opbrengst aan bis-Na -zout van 77%xll2% + 86%.
Paranitrofenylfosfaat, bis-cyclohexylammoniumzout - Smelttraject 199-201°C (Theoretisch: 199-200°C).
30 - Elementanalyse: C_: 51,37-51,50; H: 7,61-7,70; N_: 9,76-9,85.
theorie:. C_: 51,79 ; H.: 7,73 ; N: 10,07.
- IR: 3302353 functie groep golfgetal (cm *) en sterkte - 15 -
Aryl- Aryl-H 1590 (S) - -..... ..........Aryl-N02 1510 CS) en 1340 (S)
Fosfaat- P»0 1265 (S) 5 P-O-Aryl 1165 (M)
Cyclohexylammonium -CH2- 1455 (M) .___ ψ 7. Enzymatische hydrolyse van paranitrofenylfosf aat, bis-Na -zout, met zure fosfatase.
Om een kwalitatieve karakterisering van het bis-Na+-zout van paranitro-10 fenylf osfaat te verkrijgen werd dit zout aan enzymatische hydrolyse door een uit aardappelen geïsoleerd zuur fosfatase onderworpen-
Bereiding van zure fosfatase?
Een aardappel werd gemalen en de ontstane pulp gecentrifugeerd in een Labofuge 6000 bij 3000 rpm, gedurende 5 minuten. Aan 15 ml van het super-15 natant werd 0,1 g calciumacetaat toegevoegd om eventueel aarwezig fosfaat te precipiteren, waarna wederom bij 3000 rpm werd gecentrifugeerd, nu gedurende 20 minuten. Het verkregen supernatant werd verder aangeduid als "zure-fosfatase-oplossing".
Enzymatische hydrolyse: 20 60 mg paranitrofenylfosfaat, bis-Na+-zout werd opgelost in 50 ml natrium- acetaat-buffer, pH 5,0 (3 ml azijnzuur in 1 1 gedestilleerd water, gesteld met 4N NaOH). In vier reageerbuizen werd telkens 5 ml van bovengenoemde gebufferde oplossing gebracht, waarna in drie van deze buizen 0,2, 0,4 en 0,8 ml zure-fosfatase-oplossing werd gebracht. Aan een van 25 de buizen werd 0,8 ml vooraf gekookte zure-fosfatase-oplossing toegevoegd (Blanco).
Alle buizen werden vervolgens gedurende 30 minuten bij 37°C geincubeerd. Na deze periode was in alle oplossingen, behalve in de blanco, een duidelijks geelkleuring ten gevolge van het vrijkomen van paranitrofenol 30 waar te nemen.
8302353 - 16 - / 8. Ontscherming van bis-(Mse)-paranitrofenylfosfaat met NH^-gas tot mono-(Mse)-paranitrofenylfosfaat, NH*-zout (formule 12).
Door een oplossing van 1,92 g (0,00445 mol) bis-(Mse)-paranitrofenylfosfaat in 50 ml technische acetonitrile in een 100 ml peerkolf werd bij 5 kamertemperatuur via een pasteurpipet langzaam NH^-gas geleid. Na onge- . .. veer dertig minuten begon een vaste stof uit de oplossing te kristalliseren. Na 45 minuten werd het doorleiden van NH^-gas gestopt en de kolf met het reactiemengsel afgesloten. Nadat deze kolf nogmaals 45 minuten bij kamertemperatuur had gestaan, werd het neerslag op een G-3 glas-10 filter verzameld en met tot 0°C gekoeld acetonitrile gewassen.
Herkristalliseren uit acetonitrile leverde 1,22 g naaldvormige, witte kristallen.
Mono-(Mse)-paranitrofenvlfosfaat, NK^-zout, (MW: 341,25).
--------------------- r-*.................... 4- - Opbrengst: 1,22 g (0,00358 mol), 81%.
15 - Smelttraject: 142-143°C.
- Rf-waarde in loopmiddel A:0,24.
- Elementanalysej C: 31,51-31,66 H: 4,39-4,39 N: 8,01-8,06 theorie: C: 31,58 H: 4,42 N: 8,18.
-^H-NMR: 20 functie groep 5 (ppm) muit. J(Hz) aant. prot.
Mse CH3- 2,97 S - 3 6-CEL·- Verdwenen onder restwater van DMSO-d-.
2 3 6 ct-CH2- 4,08 "Sext.” J _^5,5 4 ____3W 7__
Aryl Aryl- 7,78 2x D ;9,0 4
Η—H
25 NH*- (NH3D)+ 7,26 S,breed - 3 - IR: 8 3 ö 2 3 5 3 functie groep golf getal (cm *) en sterkte - 17 -
Mse- -S°2~ 1315 (ZW) en 1135 (S)
Aryl Aryl-H 1595 (S) 5 Aryl-N02 1515 (S) en 1350 (S)
Fosfaat- P=0 1255 (S) P-O-Aryl 1173 (ZW) P-O-Alkyl 1035 (S) NH*- NH*- 1440 (M) en 1420 (M) 10 9. Bepaling van de katalytische werking van water bij de ontscherming met NS^-gas (Chromatografisch).
Benodigd:
Ammoniak-gas, NH^ werd gedroogd door na condensatie van het gas in een tot -78°C gekoelde driehalskolf (aceton/droogijs), voorzichtig stukjes 15 Natrium-metaal toe te voegen tot de vloeistof geheel diepblauw werd gekleurd.
Uitvoering:
In vier afzonderlijke experimenten werd telkens 12 ml van een 1% (w/v)-oplossing van bis-(Mse)-paranitrofenylfosfaat in droge acetonitrile in 20 een 50 ml driehalskolf gebracht. Deze kolf was uitgerust met een gas-inleidbuis en een calciumchloride-buis. Vervolgens werd ammoniak-gas door de oplossing geleid, door een hoeveelheid gecondenseerd gas de gelegenheid te geven te verdampen.
Vóór echter met gasinleiöen werd begonnen, was in het eerste experiment 25 0,01%, in het tweede 0,2% en in het derde 2% water aan de acetonitrile- oplossing toegevoegd. (Volume-percentages).
In het Blanco-experiment werd onder volledig droge condities gewerkt.
Het verloop van de ontscherming werd gevolgd door op de tijdstippen 0, 1,5, 5, 10, 15 en 30 minuten, gemeten na aanvang van de reactie, i 8302353 - 18 - 2 ^iL-monsters te nemen en deze te brengen op een kiezelgelplaat. Loopmiddel A: R.-waarden: bis-(Mse)-paranitrofenylfosfaat: 0,78, mono-(Mse)-paranitrofenylfosfaat, NH4-zout: %,24.
De dunnelaagchromatogrammen laten zien, dat toevoeging van grotere hoe-5 veelheden water tot snellere ontscherming leidde. Bij gebruik van 2 vol.% water was reeds na 5 minuten een significante selectieve ontscherming gerealiseerd, terwijl na 30 minuten nagenoeg geen bis-(Mse)-paranitrofenylfosfaat meer werd aangetroffen.
10. Synthese van bis-(Mse)-paranitrobenzylfosfaat (formule 13).
10 Benodigd:
Paranitrobenzylalkohol, MW: 153,13, werd als volgt gezuiverd: 20 g van de stof werd bij 80°C opgelost in 500 ml van een 9:l-mengsel van water en methanol, waarna 20 g Norit (actieve kool) werd toegevoegd en nog 30 minuten werd geroerd bij 80°C. Hierna werd Norit afgefil-15 treerd over Cellite ("Hyflo"). Uit het heldere, lichtgeel gekleurde filtraat kristalliseerde paranitrobenzylalkohol in lichtgele naaldjes. Voor gebruik werd de stof gedroogd op -*-n vacuo bij kamertemperatuur, (er werd op toegezien dat geen sublimatie plaatsvond). Smelttraject na drogen: 96-97°C.
20 Uitvoering:
Aan een oplossing van 0,750 g (0,0049 mol) paranitrobenzylalkohol in 4 ml droge pyridine in een 50 ml peerkolf, werd onder roeren bij kamertemperatuur zeer snel 1,838 g (0,0056 mol) bis-(Mse)-fosfochloridaat toegevoegd, waarna de kolf snel gesloten werd. De reactie werd chroma-25 tografisch gevolgd, door op gezette tijden met een Hamilton microsyringe zeer snel een 50 ^iL-monster uit de oplossing te nemen en dit monster, na verdunnen met 1 ml methanol, op een kiezelgelplaat te brengen.
(Loopmiddel C: Paranitrobenzylalkohol: = 0,76; bis-(Mse)-paranitro- r benzylfosfaat: = 0,44).
30 Na 20 minuten roeren was de reactie voltooid en werd pyridine verwijderd aan de rotatieverdamper, gevolgd door 1 uur oliepomp-vacuum (0,1 mm Hg). Het residu, een gele olie, werd door krassen met een spatel tot kristallisatie gebracht. Herkristalliseren uit water/methanol, 9:1, leverde grote, zeer lichtgele naaldvormige kristallen op.
8302353
,· /T
- 19 -
Bis-(Mse)-paranitrobenzylfosfaat (MW: 445,4).
- Opbrengst: 2,13 g (0,00483 mol), 90% (Op basis van p-nitrobenzylalkohol)
- Smelttraject: 85-88°C
- Rp-waarde in loopmiddel: B: 0,31; C: 0,44.
5 - Elementanalyse: C: 35,17-35,27 H: 4,41-4,53 N: 3,13-3,15.
theorie: C_: 35,06 H: 4,53 N: 3,14.
1H-NMR: functie groep 5(ppm) mult. J(Hz) aant.prot.
Mse CH3- 3,03 S - 6 io s-ch2“ 3,50 T 3jh-h;5,5 4 a-CH0- 4,52 "Sext." 3J „,-5,5 4 JP-H'*7'0
Benzyl- -CHj- 5,28 D 3jp-H;7'0 2 Η H 3 -/TV 7,98 2x D ;9,0 4
wf Η—H
Η H
-31P-NMR: 15 kern 5(ppm) mult. J(Hz) 31 P, proton-ontkoppeld 72,46 S - 31P, proton-gekoppeld 72,46 Quintet 3J„ „;7,0 ^ 1 1'' - ~ _ 31P, TMP-standaard,
proton-ontkoppeld. 76,92 S
3302353 i functie groep golfgetal (cm ^ en sterkte - 20 - - IR:
Mse- -S°2~ 1320 (M) en 1130 (S)
Benzyl- Benzyl-H 1608 (M) 5 Benzyl-N02 1515 (S) en 1350 (S) fosfaat PssO 1290 (S) P-O-Benzyl 1193 (M) P-O-Alkyl 1040 (S) 8302353 -21-- 11. Synthese van bis-(Mse)-fosfomorfolidaat.(formule 14)
Benodigd:
Morfoline werd gedroogd op NaOH-pellets.
Uitvoering:
Aan een oplossing van 1,644 g (0,0050) bis-(Mse)-fosfochloridaat in 12,8 ml droge acetonitrile werd onder magnetisch roeren bij kamertemperatuur een oplossing van 0,957 g (0,011 mol) droge morfoline in 5 ml droge tetrahydrofuran toegedruppeld. Halverwege de toevoeging precipiteerde uit de oplossing een wit neerslag van morfolino-HCL. Nadat gedurende 10 minuten alle morfolino was toegevoegd, werd nog 20 minuten doorgeroerd bij kamertemperatuur. Affiltreren van het mor-folino-HCL-precipitaat en indampen van het ontstane filtraat leverde 2,05 g van een gele olie, die na enige tijd bij 4°C te zijn bewaard spontaan kristalliseerde. Herkristalliseren uit absolute ethanol leverde 1,68 g naaldvormige witte kristallen.
Bis-(Mse)-fosformorfolidaat: (MW: 379,4).
- Opbrengst: 1,68 g (0,00443 mol), 89% (Op basis van verbinding met formule 5.
- Smelttraject: 63-67°C.
- Elementanalyse: Ct 31,67-31,74 H: 5,86-5,87 N: 3,60-3,71 theorie: C: 31,66 iï: 5,85 N 3,69 -
Functie groep £(ppm) muit. J(Hz) aant.prot.
Mse- CH - 3,03 S - 6 3 3j ς 5 S-CH-- 3,18 T H-H; '3 4 ^ C c a-CH2- 4,41 "Sext." H-H; ' 4 3J_ 7 P-H;
Morfolino -"N^ \) 3,60 multi- - 8 '—' plet _______ - IR: 8302353 - 22 - — .
Functie groep golfgetal (cm ) en sterkte
Mse- -S02- 1320 (S) en 1140 (S) morfolino -CH2- 1460 (M) fosfaat P=0 1290 (S) Ρ-0-Alkyl 1015 (S) 12.Synthese van 2,3-0-isopropylideen-adenosine-5'-monofosfaat, bis-NH*-zout, (formule 15)
Benodigd? -2,3-Q-Isopropylideen-adenosine, MW: 307,24, in de handel verkrijgbaar, 5 werd vlak voor gebruik gedroogd in vacuo bij 110°C boven P20j., ^durende 3 uur. ----- -Silicagel-kolom:160 g silicagel (70-230 Mesh, Merck) werd opgeroerd in loopmiddel A en na ontluchten gestapeld in een kolom met een doorsnede van 6 cm. De bedhoogte bedroeg hierna 20 cm. Voor gebruik werd 10 gespoeld met één kolomvolume A (700 ml).
-Triethylammoniumbicarbonaat (TEAB)-buffer: 40,48 g (0,40 mol) vers gedestilleerd triethylamine (Baker) werd in 1 liter gedestilleerd water gebracht en het mengsel werd door inleiden van C02 gesteld op pH 8,0.
(De buffer werd vlak voor gebruik bereid en slechts éénmaal gebruikt).
15 -DEAE-A25-kolom: DEAE-A25 (Sephadex) werd in 0,4QM TEAB-buffer gebracht en gestapeld in een kolom met een doorsnee van 3 cm en een uiteindelijke bedhoogte van 30 cm. Vervolgens werd de kolom gedurende 24 uur gespoeld met 0,01M TEAB-buffer, pH 8,0, flowrate 20 ml per uur. -Dowex-50W-X2-kolom: Dowex-50W-X2 (200-400 Mesh) werd een aantal 20 malen op een G-3 glasfilter geëquilibreerd en gewassen met: 1) 2N HC1; 2) gedestilleerd water; 3) 2N NaOH; 4) gedestilleerd water; Hierna werd de ionenuitwisselaar in de NH*-vorm gebracht door hem een aantal malen te wassen en te equilibreren met een 2N NH^-oplossing. Hierna werd een aantal malen gewassen met. gedestilleerd water, waarna 25 de ionenwisselaar werd gestapeld in een kolom met een doorsnede van 3 cm en een uiteindelijke bedhoogte van 20 cm.
I': 8302353 - 23 -
Uitvoering:
Aan een oplossing van 1,536 g (0,0050 mol) 2,3-O-isopropylideenadenosine in 20 ml droge pyridine werd bij kamertemperatuur onder magnetisch roeren in 1,30 g (0,0055 mol) bis-(Mse)-fosfochloridaat toegevoegd.
5 Na 20 minuten roeren werd pyridine bij 40-50°C aan de rotatieverdamper verwijderd, waarna het residu, een taaie, heldere olie, neg 2,5 uur aan het oliepompvacuum werd gebracht om de laatste restjes pyridine te verwijderen.
10 Dunnen-laag-chromatografische controle van de olie in loopmiddel A leverde: 1) pyridine-HCL: Rf=0-0,3; 2) 2,3-o-isopropylldeenadenosine-5'-bis-(Mse)-monofosfaat (formule 16): R^® 0,37; 2,3-0-isopropylideen-adenosine (uitgangsstof): R^® 0,57.
Ter zuivering werd de olie onderworpen aan silicagel-kolomchromatografie 15 in loopmiddel A; Bij een stroomsnelheid van 4-5 ml/min werden fracties van ca 12 ml verzameld. Na 250 ml van de kolom te hebben geëlueerd verscheen een geringe hoeveelheid uitgangsstof en na 400 ml elutie verscheen chromatografisch zuiver 2,3-0-isopropylideen-adenosine-5'-bis-(Mse)-fosfaat (formule 16) in een totaalvolume van 300 ml A. Indampen 20 van dit eluaat leverde 2,62 g (0,00435 moDkristallijne verbinding met formule 16, 87%. Deze werd als volgt ontschermd: 2,61 g (0,00435 mol) van de stof werd opgelost in 40 ml methanol, waarna onder roeren bij kamertemperatuur 6 ml 4N NaOH-oplossing werd toegevoegd (4,5 equivalenten base). Na 1 minuut roeren werd de oplossing met 25 azijnzuur op pH 6 gebracht. Indampen van de oplossing leverde een taaie olie, die na herhaaldelijk wassen met isopropyl-alcohol en isopropyl- __________ ether kristallijn werd. Het verkregen 2,3-0-isopropylideen-adenosine-5'-monofosfaat, bis Na*-zout (formule 17), had een Rf-waarde van 0,48 in loopmiddel D. De opbrengst was 2,25 g (0,00522 mol), d.i. 120% op basis 30 van de verbinding met formule 16. Dit is verklaarbaar door het in de stof aanwezige natriumacetaat. De verdere zuivering van de verbinding met formule 17 verliep als volgt:
De totale hoeveelheid stof, 2,25 g, werd opgelost in 0,01M TEAB-buffer, pH 8,0 en op een DEAS-A25 kolom gebracht, waarna deze 3 uur werd ge-35 spoeld met de laatste buffer bij een stroomsnelheid van 20 ml/uur.
Elutie van de kolom vond plaats met een 300 ml/3Q0ml lineaire gradient van 0,01-*Ό,4Μ TEAB, pH 8,0 bij een stroomsnelheid van 30 ml/uur? er werden 6 ml-fracties verzameld en de elutie van de kolom werd gevolgd 8302353 - 24 - met een U.V-detectie-eenheid. Na ca 320 ml van de gradient door de kolom te hebben geleid, bedroeg de sterkte van de gradient 0,2M TEAB en werd een U.V-absorberende stof geregistreerd. Na volledige elutie bevond de stof zich in 300 ml TEAB-buffer; Deze werd ingedampt en TEAB 5 verwijderd door herhaalde malen het residu in water op te lossen en dit water aan de rotatieverdampter te verwijderen. Het uiteindelijke residu, een hoeveelheid witte kristallen, werd wederom opgelost in 50 ml gedestilleerd water en drooggevroren. De verkregen witte kristallen bestonden uit het triethylammonium-zout van de verbinding met formule 17, 10 en waren chromatografisch zuiver.
Na te zijn opgelost in gedestilleerd water werd de stof over een kolom Dowex 50W-X2, ammonium-vorm, gevoerd en drooggevroren.
2,3-0-isopropylideen-adenosine-5'-monofosfaat, bis-NH*-zout, (MW: 421,36)i 15 - Opbrengst: 1,454 g (0,00345 mol), 69% (Basis: beschermd adenosine) - ^H-NMR: 8302353 -25- f 1 · - - · . ...... — functie groen |£ (upm) muit. aant. prot.
MÖT"--1-1--:- A _ / Va 0 \-H (ή (^A/ Hj_·· 3,22 S 1
Ha 7,93 3 1 adeains- -?Ht -0S2- 3,93 T 2 H3 6,03 D . 2 a ^,85-5,3 multi- 3 «U; ribose- -CK-- 1,50 2x S 6 iscurouylidsen ' I - 13. Synthese van. S-D-glucose-o-fosfaat, bis-K^-zout.(formule 18).
Benodigd: - 1,2,3,4-tetra-acetyl-3-D-glucose, MW: 348, in de handel verkrijgbaar, werd vlak voor gebruik gedroogd in vacuo boven ?205 bij 60 °C gedurende 5 3 uur.
Uitvoering:
Aan een oplossing van 0,612 g (0,00176 mol) 1,2,3,4-tetra-acetyl-8-D-glucose in 5 ml droge pyridine werd onder roeren bij kamertemperatuur 0,673 g (0,00206 mol) bis-(Mse)-fosfochloridaat toegevoegd. Na 30 mi-10 nuten roeren werd pyridine bij 40-50°C aan de rotatieverdamper verwijderd. Vervolgens werd de ruwe olie in 50 ml methanol opgelost en in 8302353 - 26 - een centrifugebui s gebracht, waarna onder magnetisch roeren 3,6 ml 4N KOH-oplossing (9 equivalenten base) werd toegevoegd, waarbij onmiddellijk een neerslag ontstond. Na 20 seconden werd de base gequenched met 3 equivalenten azijnzuur en het neerslag af gecentrifugeerd, 2 mi-5 nuten, 3000 rpm. (Labofuge 6000).
Na verwijderen van het supernatant werd het pellet tweemaal gewassen met methanol- 3-D-Glucose-6-fosfaat, bis-K -zout (MW: 351,3).
- Opbrengst: 0,470 g (0,00134 mol), 76%.
10 - Hygroscopische stof, evenals het in de handel verkrijgbare bis-Na+- van SIGMA.
- *H-NMR.: Identiek aan dat van het bis-Na+-zout van SIGMA.
. II 1* II I» II II II II It II
15 14.Synthese van Mse-fosfodichloridiet.(formule 6)
Aan 66-,3 g (0,483 mol) vers gedestilleerd PCl^ in een 500 ml driehals-kolf, uitgerust met gasdicht afsluitend glijlager en terugvloelkoeler met aftapmogelijkheid, werd gedurende twee uur bij kamertemperatuur en onder hevig roeren 10 g (0,0805 mol) Mse-OH toegedruppeld. Daar Mse-OH 20 niet direct in PCl^ oplost, ontstond een twee-fasen systeem. Halverwege de toevoeging (na ca 1 uur) begon enige HCl uit de oplossing te ontwijken.
Nadat alle Mse-OH was toegevoegd werd onder hevig roeren bij 90-100°C op een paraffinebad onder terugvloeikoeling gekookt, tot geen HCl meer 25 ontweek (ca 3-3,5 uur). Hierna werd de temperatuur van het paraffinebad tot maximaal 120°C verhoogd, waarna (nog steeds onder roeren) de overmaat PCl^ werd afgetapt aan de terugvloelkoeler (dit PCl^ werd bewaard) .
De troebele rest in de kolf werd snel. overgegoten in een 250 ml kolf, 30 waarna PCl^- en HCl-resten aan rotatieverdamper en oliepompvacuum werden verwijderd. Vervolgens werd de troebele, hevig met water reagerende olie in porties van 3 g in 25 ml rondbodemkolfjes gebracht, die goed afgesloten bij -18°C werden bewaard- Vlak voor gebruik werd telkens een 3 g-portie in vacuo gedestilleerd in een "kugelrohr"-destil-35 latie-apparaat. Dit leverde twee fracties op: fractie 1, overgekomen 8302353 i' JO- - 27 - bij 160°C en 0,1 mm Hg en fractie 2, 200°C en 0,1 mm Hg. Aangezien fractie 1 op basis van het *H-NMR spectrum meer verontreiniging bevat dan fractie 2, werd in verdere reacties van laatstgenoemde fractie gebruik gemaakt.
Mse-fosfodichloridiet . (MW: 225,12) - Opbrengst na destilleren, fractie 2: 94%x60% 56% - *H-NMR, fractie 2: functie groep (ppm) muit. J(Hz) aant.prot.
Mse- -CH3 2,72 S - 3 10 3,17 T 3jH-H;5,5 2 a-CH^- 4,33 vervormd ^H-H'^'3 ^ sextet ;8 P-H' 15. Synthese van o-fenyleen-Mse-fosflet (formule 19)
Pyrocatechol(1,2-dihydroxybenzeen), MWfll0,ll, werd vlak voor gebruik 15 gedroog bij kamertemperatuur in vacuo boven
Aan een -78eC gekoelde oplossing van 1,59 g (0,00706 mol) Mse-fosfodichloridiet in 25 ml droge tetrahydrofuran werd onder magnetisch roeren langzaam een oplossing van 0,78 g (0,00708 mol) pyrocatechol en 1,15 ml (0,0142 mol) pyridine in 80 ml droge tetrahydrofuran toegevoegd, waar-20 bij onmiddellijk een taai, wit neerslag ontstond- Na 15 minuten was alle pyrocatechol-oplossing toegevoegd, en werd het mengsel onder roeren in een half uur tijd tot kamertemperatuur opgewarmd.
Vervolgens werd aan het mengsel 250 ml ethylacetaat, gevolgd door 100 ml gedestilleerd water, toegevoegd. Na schudden in een scheitrech-25 ter werd de ethylacetaat-laag opgewerkt en ingedampt tot een witte kristalmassa. Herkristalliseren van dit residu uit tolueen leverde 1,72 g witte kristallen.
O-fenyleen-Mse-fosfiet - Opbrengst : 1,72 g (0,00656 mol), 93% 30 - smelttraject : 97-104°C.
-1H-NMR
- 8302353 - 28 - functie groep 5 (ppm) muit. J(Hz) aant.prót.
Mse- CH3 2,88 S 3 3t cc S“CH2- 3,08 T H-H' ' 2 a-CH2 3,96 "Sext" 3JH-h' 5,5 2 3j ?6 5 Fenyleen hJI/ 7,0' S - 4 _ t _______i— I ___________I - — ( 16. Synthese van bis-(Mse)-paranitrobenzylfosfaat (formule 13), via Mse-fosfodichloridiet 2,80 g (0,0124 mol) vers gedestilleerd Mse-fosfodichloridiet werd, opgélost iri 15 ml drogë tetrahydrofuran, in éen 500 ml driehalskolf, 10 uitgerust met drie 50 ml druppeltrechters, gebracht. Nadat deze oplossing tot -78°C was gekoeld, werd in een tijdbestek van 5 minuten, onder hevig roeren, een oplossing van 1,29 g (0,0104 mol) Mse-OH en 0,85 ml (0,0104 mol) pyridine in 30 ml droge tetrahydrofuran toegedruppeld, waarna nog 10 minuten werd geroerd; vervolgens werd in 8 minuten tijd aan 15 het ontstane mengsel een oplossing van 1,59 g (0,0104 mol) paranitro- benzylalkohol en 0-,.85 ml (0,0104 mol) pyridine in 30 ml tetrahydrofuran toegedruppeld. Na nogmaals 20 minuten roeren werd de oplossing tot kamertemperatuur opgewarmd, waarna 200 ml ethylacetaat en 50 ml 0,5 M NaHCO^-oplossing aan de oplossing werden toegevoegd. Terwijl het aldus 20 ontstane twee-fasen systeem heftig werd geroerd bij kamertemperatuur, werd langzaam een oplossing van 3,12 g (0,0124 mol) jodium in ethylacetaat toegedruppeld. De reductie van het jodium door de in de oplossing aanwezige fosfieten kon onmiddellijk worden waargenomen door het snelle verdwijnen van de donkerbruine jodium-kleur in het twee-fasen 25 systeen. Na 15 minuten is de oxidatie-reactie beëindigd en werd de in- houd van de kolf in een scheidtrechter overgebracht, waarna ethylacetaat-en waterige laag werden gescheiden.
8302353 - 29 -
Vervolgens werd de donkerbruine ethylacetaatlaag van jodium ontdaan door te schudden met een waterige NaESO^-oplossing tot ontkleuring. Verder opwerken en indampen van de ethylacetaatlaag leverde 2,8 g gele olie. Chromatografische controle van deze olie in loopmiddel B deed 5 2 U.V.-positieve fracties onderscheiden: één fractie met R^= 0,310 (gelijk aan de R^-waarde van bis-(Mse)-paranitrobenzylfosfaat in dit loopsysteem) en één fractie met R^-waarde 0,46 (Hetgeen gelijk is aan die voor paranitrobenzylalkohol).
De olie werd opgelost in loopmiddel B en over een silicagelkolom ge-10 voerd. (Diameter 6 cm, bedhoogte 20 cm, stroomsnelheid 4-5 ml/min, fractiegrootte 8-12 ml.).
Fracties 24 t/m 34 bevatten de stof met de hoogste R^-waarde,
Fracties 36 t/m 54 die met de laagste.
Indampen van de laatste reeks fracties leverde 1,20 g gele olie, die 15 na wassen met water vast werd. Herkristalliseren uit methanol leverde 1,10 g zeer lichtgele kristallen van bis-(Mse)-paranitrobenzylfosfaat.
Bis-(Mse)-paranitrobenzylfosfaat - Opbrengst: 1,10 g (0,00247 mol), 20%. (Op basis van de verbinding met formule 6).
20 - Smelttraject: 85-86,5°C.
- Mengsmelttraject van een l:l-mengsel van de hier gesynthetiseerde stof en de reeds eerder via de verbinding met formule 5 gesynthetiseerde paranitribenzylester, die een smelttraject van 85-88°C bezat, bedroeg: 85-37°C.
25 -1H-NMR: functie groep 5(ppm) muit. J(Hz) aant.prot.
Mse— —CH^ 3,03 S — 6 8-CH2- 3,46 T 3jh-h”5'5 4 o-CH-- 4,55 "Sext" 3J _;5,5 4
£* - α—H
30 ,_ JP-H'·7 3enzyl -CH„- 5,25 D 3J_ _;7 2 H__H 7,92 2x D JJ„ _;9 4
-jZf | [ I
8302353 v a - 30 -
Indampen van de eerste reeks fracties leverde 0,9 g gele olie, die na toevoegen van water kristallijn werd. Herkristalliseren uit isopropyl-alkohol gaf 0,33 g zeer lichtgele kristallen van Mse-bis-(paranitroben-zyl)-fosfaat.
5 Mse-bis-(paranitrobenzyl)-fosfaat - Opbrengst 0,33 g (0,00069 mol), 5,6%. (op basis van de verbinding met formule 6.
- Smelttraject: 77-78°C.
- R--waarde in loopmiddel B: 0,46.
1r 10 - H-NMR: functie groep <5 (ppïa) muit. J(Hz) aant.prot.
Mse- -CH3 '3,00 S - 3 6-CH2- 3,40 T 3jH-h;5,S 2 a-CH2- 4,.57 3jH-H75,5 2
3J ;6 P-H
15 Benzyl- -CH-- 5,25 D 3J_ _;6 4
^ - P-H
7,90 2x 0 Jh_h;9 S
8302353
Claims (16)
1. Fosforyleringsmiddel, dat ten minste één beschermde hydroxyIgroep en ten minste één vertrekkende groep bevat, met het kenmerk, dat het ten minste één, door methylsulfonylethyl beschermde hydroxyIgroep bevat.
2. Fosf oryleringsmiddel volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat 5 het beantwoordt aan een van de formules 1-4, waarin Mse de methylsulfo-nylethyIgroep CH^SC^C^CI^- voorstelt en L en L' vertrekkende groepen voorstellen.
3. Fosforyleringsmiddel volgens conclusie 2, met het kenmerk, dat L en/of L' chloor; 1,2,4-triazolyl; tetrazolyl; ftalimidooxy; succinimi-10 dooxy of benzotriazooloxy voorstellen.
4. Fosforyleringsmiddel volgens conclusie 3, met het kenmerk, dat het beantwoordt aan formule 5 of formule 6.
5. Werkwijze voor het bereiden van een fosforyleringsmiddel, dat ten minste één beschermde hydroxylgroep en ten minste één vertrekkende 15 groep bevat, met het kenmerk, dat men op een voor analoge verbindingen bekende wijze een ten minste één, door methylsulfonylethyl beschermde hydroxylgroep bevattend fosforyleringsmiddel, zoals gedefinieerd in een van de conclusies 1-4, bereidt.
6. Werkwijze voor het bereiden van een fosforyleringsmiddel, dat 20 ten minste één beschermde hydroxylgroep en ten minste één vertrekkende groep bevat, met het kenmerk, dat men een verbinding met formule 5 bereidt door 2-methylsulfonylethylalkohol in een inert oplosmiddel te laten reageren met achtereenvolgens PCl^ en Cl2-
7. Werkwijze volgens conclusie 6, met het kenmerk, dat als inert 25 oplosmiddel droog tetrahydrofuran wordt toegepast. ·
3. Werkwijze volgens conclusie 6 of 7, met het kenmerk, dat de reactie met 2Cl. bij 0-10°C en de reactie met CI2 bij 15-30°C wordt uitgevoerd.
9- Werkwijze voor het bereiden van een fosforyleringsmiddel, dat 30 ten minste één beschermde hydroxylgroep en ten minste één vertrekkende groep bevat, met het kenmerk, dat men een verbinding met formule 6 bereidt door 2-methylsulfonylethylalkohol onder uitsluiting van water in een overmaat PCl^ al roerend onder terugvloeikoeling te koken totdat 8302353 Λ ^ * - 32 - geen HCl meer ontwijkt, waarna de overmaat PCl^ wordt afgedestilleerd en de overblijvende olie-achtige vloeistof onder verminderde druk wordt gedestilleerd.
10. Werkwijze volgens conclusie 9, met het kenmerk, dat de 2-methyl-5 sulfonylethylalkohol in een vier- tot achtvoudige overmaat PCl^ onder terugvloeikoeling wordt gekookt bij 90-100°C.
11. Werkwijze volgens conclusie 9 of 10, met het kenmerk, dat de na afdestilleren van de overmaat PCl^ overblijvende olie-achtige vloeistof onder verminderde druk in een Kugelrohr wordt gedestilleerd.
12. Werkwijze voor het fosforyleren van een organische hydroxyl- of amineverbinding door deze in reactie te brengen met een fosforylerings-middel, dat ten minste één beschermde hydroxylgroep en ten minste één vertrekkende groep bevat, met het kenmerk, dat men een,, ten minste één door methylsulfonylethyl beschermde hydroxylgroep bevattend fosforyle-15 ringsmiddel zoals gedefinieerd in een van de conclusies 1-4 toepast.
13. Werkwijze volgens conclusie 12., met het kenmerk, dat men een nucleosidederivaat, nucleotidederivaat of polynucleotidederivaat met een vrije 3'-hydroxylgroep of een vrije 5'-hydroxylgroep, waarvan de overige reactieve groepen, indien aanwezig, beschermd zijn, fosforyleert. 20 14. Werkwijze volgens conclusie 12 of 13, met het kenmerk,'dat men - : het fosforyleringsprodukt, indien dat een fosfiet-triester is, oxydeert tot een fosfaat-triester . 8302353
1. Mse-Ux O 3 Mse-Ov y0 / Mse-O-P-l /v , Mse-Q L I L L Q-Mse 4 |_ 5 δ Mse'°-<., Mse-°y° Mse-O- Mse-0/ 'ci Cl
0 A 8 ii ii R-OH + PrO—P—L -— RO-P-OPr + HL I , I , OPr OPr 1 8 /OR1 PrO-pf * RTOH -- PrO-P + HL R2-0H \' \' 1 0 /OR t ju η II i prO-p + HL' V 2U PrO-P-OR1 '®2 OR? C PCI, — (MseO),P + 3HCI- 3Mse—OH -i-r- 3 THF,5 C *—«-(MseO^P-OH + Mse-Cl*2HCL — droog (MseOLP _Ü2---(MseOLPOCl ♦ Mse-Cl THF,20-25°C 2 iMseülj P-°H jh2F ;0.2B;,riMse012P0<:UHC[ — ^ ^ ^ ^ ^ ^ Stichting Katholieke Dniversiteit Faculteit der Wiskunde en Natuurwetenschappen 8 CH3-CH2-“wS CH3-CH2"°v / P P CH3-CH2-0^ N0-^-N02 C«3-CHj-O7 ^0--^3- 9 10 Mse'°\/ Na* "O O P ' * Mse-O7 N0^Q-N02 Mse-O7 \ -0-11¾ 11 12 Na* '0, O Mse‘°\ P P Na*O/ Nü-^-N02 NHt* V X0-Q^-N02
13 W ^se~8\/8' Mse-0 O f \ t Mse-O' VcH2-0-NO2 Mse-Z^Q g 15 g 16 NhT~0—p—O-CH, A Mse-O-P-O-CHo A 4 l 'q ' 2n NH,*O / \ Mse-0 Vf w 0 0 18 o 0 0 x ii x , aw-οκ 0 17 ηο-Λ-Λ^ο « *io~Y“—[Λ NaO-P-O-CH, a OH 1-0H 1 19 NaO ^ _ n \ r ^XQ\ —[ P-O-Mse Ov O V^l)/ 8302353 X . . ., Stichting Katholieke Univers ιte it Faculteit der Wiskunde en Natuurwetenschappen
Priority Applications (10)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL8302353A NL8302353A (nl) | 1983-07-01 | 1983-07-01 | Fosforyleringsmiddel; werkwijze voor het bereiden daarvan; werkwijze voor het fosforyleren van een organische hydroxyl- of amineverbinding. |
| CA000456949A CA1224165A (en) | 1983-07-01 | 1984-06-19 | Phosphorylating agent; a process for the preparation thereof; a process for phosphorylating an organic hydroxyl or amine compound |
| US06/622,571 US4692542A (en) | 1983-07-01 | 1984-06-20 | Phosphorylating agent |
| AU29787/84A AU572158B2 (en) | 1983-07-01 | 1984-06-22 | Phosphorylating agents and process for phosphorylating an organic hydroxyl or amine compound |
| DK312784A DK312784A (da) | 1983-07-01 | 1984-06-27 | Phosphorylerende middel, fremgangsmaade til fremstilling af et saadant samt en fremgangsmaade til phosphorylering af en organisk hydroxyl- eller amin-forbindelse |
| JP59135055A JPS6069087A (ja) | 1983-07-01 | 1984-06-29 | リン酸化剤 |
| EP84200951A EP0131993B1 (en) | 1983-07-01 | 1984-06-29 | Phosphorylating agent; a process for the preparation thereof; a process for phosphorylating an organic hydroxyl or amine compound |
| NO842662A NO842662L (no) | 1983-07-01 | 1984-06-29 | Fosforyleringsreagens, fremgangsmaate ved fremstilling og anvendelse derav |
| DE8484200951T DE3471484D1 (en) | 1983-07-01 | 1984-06-29 | Phosphorylating agent; a process for the preparation thereof; a process for phosphorylating an organic hydroxyl or amine compound |
| AT84200951T ATE34577T1 (de) | 1983-07-01 | 1984-06-29 | Phosphorylierungsmittel, verfahren zu seiner herstellung, verfahren zur phosphorylierung einer organischen hydroxyl- oder amin-verbindung. |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL8302353 | 1983-07-01 | ||
| NL8302353A NL8302353A (nl) | 1983-07-01 | 1983-07-01 | Fosforyleringsmiddel; werkwijze voor het bereiden daarvan; werkwijze voor het fosforyleren van een organische hydroxyl- of amineverbinding. |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL8302353A true NL8302353A (nl) | 1985-02-01 |
Family
ID=19842103
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL8302353A NL8302353A (nl) | 1983-07-01 | 1983-07-01 | Fosforyleringsmiddel; werkwijze voor het bereiden daarvan; werkwijze voor het fosforyleren van een organische hydroxyl- of amineverbinding. |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4692542A (nl) |
| EP (1) | EP0131993B1 (nl) |
| JP (1) | JPS6069087A (nl) |
| AT (1) | ATE34577T1 (nl) |
| AU (1) | AU572158B2 (nl) |
| CA (1) | CA1224165A (nl) |
| DE (1) | DE3471484D1 (nl) |
| DK (1) | DK312784A (nl) |
| NL (1) | NL8302353A (nl) |
| NO (1) | NO842662L (nl) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL8302353A (nl) * | 1983-07-01 | 1985-02-01 | Stichting Katholieke Univ | Fosforyleringsmiddel; werkwijze voor het bereiden daarvan; werkwijze voor het fosforyleren van een organische hydroxyl- of amineverbinding. |
| USRE34069E (en) * | 1983-08-18 | 1992-09-15 | Biosyntech Gmbh | Process for the preparation of oligonucleotides |
| DE3329892A1 (de) * | 1983-08-18 | 1985-03-07 | Köster, Hubert, Prof. Dr., 2000 Hamburg | Verfahren zur herstellung von oligonucleotiden |
| DE3507881A1 (de) | 1985-03-06 | 1986-09-11 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren und mittel zur phosphorylierung |
| US5332845A (en) * | 1985-03-28 | 1994-07-26 | Chiron Corporation | Phosphorylating reagents |
| US5252760A (en) * | 1985-03-28 | 1993-10-12 | Chiron Corporation | Method of using colored phosphorylating reagents |
| JPH0291088A (ja) * | 1988-09-29 | 1990-03-30 | Central Glass Co Ltd | ホスファイトおよびヌクレオシド‐３’‐ホスファイト誘導体およびこれを用いるオリゴヌクレオチドの合成法 |
| ES2019839A6 (es) * | 1990-05-10 | 1991-07-01 | Europharma Sa | Procedimiento de obtencion de derivados polifosforilados de galactosa con actividad insulinica. |
| CN105829331A (zh) * | 2013-09-11 | 2016-08-03 | 株式会社棱镜制药 | 生产吡嗪并[2，1-c][1，2，4]三嗪化合物的方法 |
| CN110627830A (zh) * | 2019-10-15 | 2019-12-31 | 安徽昊帆生物有限公司 | 对硝基苯磷酸二钠及其制备方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL8302353A (nl) * | 1983-07-01 | 1985-02-01 | Stichting Katholieke Univ | Fosforyleringsmiddel; werkwijze voor het bereiden daarvan; werkwijze voor het fosforyleren van een organische hydroxyl- of amineverbinding. |
-
1983
- 1983-07-01 NL NL8302353A patent/NL8302353A/nl not_active Application Discontinuation
-
1984
- 1984-06-19 CA CA000456949A patent/CA1224165A/en not_active Expired
- 1984-06-20 US US06/622,571 patent/US4692542A/en not_active Expired - Fee Related
- 1984-06-22 AU AU29787/84A patent/AU572158B2/en not_active Withdrawn - After Issue
- 1984-06-27 DK DK312784A patent/DK312784A/da not_active Application Discontinuation
- 1984-06-29 JP JP59135055A patent/JPS6069087A/ja active Pending
- 1984-06-29 NO NO842662A patent/NO842662L/no unknown
- 1984-06-29 AT AT84200951T patent/ATE34577T1/de active
- 1984-06-29 EP EP84200951A patent/EP0131993B1/en not_active Expired
- 1984-06-29 DE DE8484200951T patent/DE3471484D1/de not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU572158B2 (en) | 1988-05-05 |
| EP0131993B1 (en) | 1988-05-25 |
| NO842662L (no) | 1985-01-02 |
| ATE34577T1 (de) | 1988-06-15 |
| DK312784A (da) | 1985-01-02 |
| CA1224165A (en) | 1987-07-14 |
| EP0131993A3 (en) | 1985-05-15 |
| JPS6069087A (ja) | 1985-04-19 |
| EP0131993A2 (en) | 1985-01-23 |
| DE3471484D1 (en) | 1988-06-30 |
| DK312784D0 (da) | 1984-06-27 |
| AU2978784A (en) | 1985-01-03 |
| US4692542A (en) | 1987-09-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Maryanoff et al. | Stereochemical aspects of phosphorus‐containing cyclohexanes | |
| Stawinski et al. | Nucleoside H-phosphonates. 12. Synthesis of nucleoside 3'-(hydrogen phosphonothioate) monoesters via phosphinate intermediates | |
| Brill et al. | Synthesis of deoxydinucleoside phosphorodithioates | |
| NL8302353A (nl) | Fosforyleringsmiddel; werkwijze voor het bereiden daarvan; werkwijze voor het fosforyleren van een organische hydroxyl- of amineverbinding. | |
| Gerlt et al. | Oxygen chiral phosphodiesters. 1. Synthesis and configurational analysis of cyclic [18O]-2'-deoxyadenosine 3', 5'-monophosphate | |
| Grüner et al. | Direct and facile synthesis of carbon substituted alkylhydroxy derivatives of cobalt bis (1, 2-dicarbollide), versatile building blocks for synthetic purposes | |
| Kers et al. | Studies on aryl H-phosphonates. 3. Mechanistic investigations related to the disproportionation of diphenyl H-phosphonate under anhydrous basic conditions | |
| Gołębiewska et al. | Reaction of boranephosphonate diesters with amines in the presence of iodine: the case for the intermediacy of H-phosphonate derivatives | |
| Burski et al. | Synthesis of isothiocyanatophosphoranes and isothiocyanatophosphonium salts via oxidative addition of thiocyanogen and ligand substitution: Novel reagents for converting hydroxy groups into thiocyanate and isothiocyanate functions under mild conditions | |
| Sobkowski et al. | Studies on reactions of nucleoside H-phosphonates with bifunctional reagents. Part 2. Stability of nucleoside H-phosphonate diesters in the presence of amino alcohols | |
| Dabkowski et al. | Anhydrides of phosphorus and sulfur acids, 2. Mixed anhydrides of phosphoric, phosphonic, and phosphinic acids with sulfonic acids and sulfuric Monoimidazolide. New methods of synthesis, novel structures, phosphorylating properties | |
| Volkov et al. | Phosphorylation of Acetylaminophenols with Secondary Phosphine Chalcogenides: Synthesis of O-(Acetylamino) phenyl Chalcogenophosphinates | |
| CA1309415C (en) | Inositol phosphate analogues | |
| Mukhlall et al. | Sulfurization of dinucleoside phosphite triesters with chiral disulfides | |
| Hägele et al. | Synthesis and properties of compounds related to 1-t-butylacetylene-2-phosphonic acid and 1-t-butylethane-1, 2, 2-triphosphonic acid. Sterically overcrowded phosphorus compounds, Part I | |
| Nifant'ev et al. | Phosphates, phosphinate, and hydrophosphoryl compound derived from flavonoid dihydroquercetin. | |
| McKenna et al. | Carbonylbisphosphonate and (diazomethylene) bisphosphonate analogues of AZT 5′-diphosphate | |
| SU988821A1 (ru) | Способ получени о,о-диалкил-N-фенил-N-/дифенилтиофосфинил/ амидотионфосфатов | |
| Goryunov et al. | N-diphenylphosphorylureas on the basis of natural α-amino acid esters: One-pot synthesis and extraction properties | |
| Zhou et al. | Reactions of 4-alkyl-1-trityl-1-phospha-2, 6, 7-trioxabicyclo [2.2. 2] octane cations with bases | |
| SU1182045A1 (ru) | Способ получени @ , @ -диалкил(диалкоксиметил)-фосфонитов | |
| Łopusiński et al. | Stereochemistry of the acyclic phosphono-and phosphino-thiocyanide isomerisation into corresponding isothiocyanidates: Synthesis of optically active thiocyanidates> P (O) SCN isothiocyanidates> P (O) NCS, isocyanidates> P (O) NCO and related phosphorylated derivatives of carbonic acid | |
| Volcko et al. | Novel high-yield transesterification and transamination routes to P (OCH2) 3CCH3 and P [N (CH3) CH2] 3CCH3, respectively | |
| US5852197A (en) | Cyclic disphosphoric esters, a process for their preparation and their use | |
| SU1578132A1 (ru) | Способ получени бис(триметилсилил)фосфита |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A1B | A search report has been drawn up | ||
| BV | The patent application has lapsed |