FI78300C - Foerfarande foer framstaellning av farmakologiskt verkande fosfatidylfoereningar. - Google Patents

Description

78300

Menetelmä farmakologisesti vaikuttavien fosfatidyyliyhdis-teiden valmistamiseksi - Förfarande för framställning av farmakologistk verkande fosfatidylföreningar

Keksinnön kohteena on menetelmä kaavan I mukaisen farmakologisesti vaikuttavan fosfatidyyliyhdisteen

O W

i " ' R -T-Y-O-P-O-CH (I)

OH Z

tai sen suolan valmistamiseksi, missä kaavassa R1 merkitsee bentsoyyliä, L-tyrosiinin, L-lysiinin, L-asparagiinihapon, L-asparagiinin, L-histidiinin, L-glutamiinihapon, L-seriinin tai L-proliinin asyylitähdettä, jolloin näissä asyylitähteis-sä esiintyvät aminoryhmät voivat olla typessä substituoituja tert.butyylioksikarbonyylillä, bentsyylioksikarbonyylillä tai alempialkanoyylillä, ja esiintyvät karboksyyliryhmät voivat olla esteröityjä alempialkanolilla, tai sitruunahapon asyylitähdettä, T merkitsee ryhmää NH, Y merkitsee substitu-oimatonta tai karboksilla tai alempialkoksikarbonyylillä substituoitua dimetyleeniä, W merkitsee vetyä ja Z merkitsee 1,2-dihydroksietyyli-, 2-hydroksietyyli- tai hydroksimetyy-liryhmää, jossa vähintään yksi hydroksiryhmä on esteröity C^Q.jg-alkaanihapolla tai C10-alkeenihapolla, tai W ja Z merkitsevät kumpikin hydroksimetyyliryhmää, joka on esteröity C^Q.jQ-alkaanihapolla tai C18-alkeenihapolla.

Siten R1 voi olla esim. L-tyrosiinin tai tert.butyyliok-sikarbonyyli- tai N-alempialkanoyyli-L-tyrosiinin asyylitäh-de, L-lysiinin tai Ne-bentsyylioksikarbonyyli-Na-tert.butyy-lioksikarbonyyli-L-lysiinin asyylitähde, L-glutamiinihapon tai N-bentsyylioksikarbonyyli-L-glutamiinihappo-a- tai -γ-alempialkyyliesterin asyylitähde, L-seriinin tai N-alempial-kanoyyli- tai N-tert.butyylioksikarbonyyli-L-seriinin asyylitähde tai L-proliinin tai N-tert.butyylioksikarbonyyli-L-proliinin asyylitähde.

2 78300 Tähteen Y substituenttina oleva karboksyyli- tai alem-pialkoksikarbonyyliryhmä on mieluimmin a-asemassa tähteen T suhteen. Tämän karboksyyliryhmän sisältävässä C-atomissa oleva konfiguraatio on pääasiassa (L).

1,2-dihydroksi-etyyli-tähteessä Z on esteröity esim. ainoastaan terminaalinen, s.o. 2-hydroksiryhmä tai mieluummin molemmat hydroksiryhmät on esteröity.

Alifaattisessa C10_1g-alkaanihapossa on mieluimmin parillinen luku C-atomeja, ensisijassa 12-18, esim. 16-18 C-atomia ja se on haarautunut tai mieluimmin suoraketjuinen. C^g-alkeenihappo on haasautunut tai mieluimmin suoraketjui-nen ja sisältää 1-3 eristettyä kaksoissidosta. Esimerkkejä yllämainituista aikaani- tai alkeenihapoista ovat luonnossa esiintyvät rasvahapot, kuten etenkin palmitiini-, öljy- tai steariinihappo, tai myös linoli- tai linoleenihappo. Tämän lisäksi mainittakoon esimerkkeinä kapriini- tai lauriinihap-po.

Edellä ja seuraavassa käytetyillä yleiskäsitteillä on, mikäli erityisessä tapauksessa ei ole toisin määritelty, mieluimmin seuraavat merkitykset:

Edellä ja seuraavassa käytetty etuliite "alempi" merkitsee tähteitä, joissa on korkeintaan 7, etenkin korkeintaan 4 hiiliatomia.

Alempialkanoyyli on esim. propionyyli, butyryyli tai heksanoyyli, ensisijassa asetyyli.

Alempialkyyli on esim. n-propyyli, n-butyyli, isobutyy-li, sek.-butyyli, tert.-butyyli, edelleen n-pentyyli, n-heksyyli tai n-hep-tyyli, ensisijassa metyyli, etyyli tai isopropyyli.

Alempialkoksi on esim. etoksi, propoksi tai mieluimmin metoksi sekä määrätyissä tapauksissa tert.-butoksi.

Koska hapen kautta fosforiatomiin sitoutunut protoni on hapan, muodostavat kaavan I mukaiset yhdisteet helposti suoloja. Kaavan I mukaiset yhdisteet, jotka sisältävät emäksisen ryhmän, esim. aminon, voivat esiintyä vastaavassa pH-ar-vossa sisäisinä suoloina, s.o. amfoteerisessa muodossa. Kaa- 3 78300 van I mukaiset yhdisteet, jotka sisältävät useamman kuin yhden emäksisen ryhmän, voivat muodostaa lisäksi happoadditio-suoloja ulkopuolisten happojen, esim. epäorgaanisten happojen, kuten mineraalihappojen, esim. suolahapon, rikkihapon tai fosforihapon, tai sopivien orgaanisten karboksyyli- tai sulfonihappojen, esim. trifluorietikka-, etikka-, maleiini-, fumaari-, viini-, sitruuna-, metaanisulfoni- tai 4-tolueeni-sulfonihapon, sekä muurahaishappojen, kuten arginiinin ja lysiinin kanssa.

Kaavan I mukaiset yhdisteet, jotka eivät sisällä yhtään emäksistä ryhmää tai jotka sisältävät enemmän happamia kuin emäksisiä ryhmiä, esim. kun fosforihapporyhmän lisäksi molekyylissä on vielä karboksyyliryhmiä, voivat muodostaa metalli- tai ammoniumsuoloja, kuten alkalimetalli- ja maa-alkali-metalli-, esim. natrium-, kalium-, magnesium- tai kalsium-suoloja, sekä ammoniumsuoloja, jotka on muodostettu ammoniakin tai sopivien orgaanisten amiinien kanssa, jolloin suo-lanmuodostukseen tulevat ensisijassa kysymykseen alifaatti-set, sykloalifaattiset, sykloalifaattis-alifaattiset tai aralifaattiset primääriset, sekundääriset tai tertiääriset mono-, di- tai polyamiinit, sekä heterosykliset emäkset, kuten alempialkyyliamiinit, esim. trietyyliamiini, hydroksi-alempialkyyliamiinit, esim. 2-hydroksietyyliamiini, bis-(2-hydroksietyyli)-amiini, 2-hydroksi-etyyli-dietyyli-amiini tai tri-(2-hydroksietyyli)-amiini, karboksyylihappojen emäksiset alifaattiset esterit, esim. 4-aminobentsoehappo-2-di-etyyliaminometyyliesteri, alempialkyleeniamiinit, esim. l-etyylipiperidiini, sykloalkyyliamiinit, esim. disykloheksyy-liamiini, tai bentsyyliamiinit, esim. N,N'-dibentsyyliety-leenidiamiini, edelleen pyridiinityyppiset emäkset, esim. pyridiini, kollidiini tai kinoliini.

Eristämisessä ja puhdistuksessa voidaan käyttää myös farmaseuttisesti sopimattomia suoloja. Terapeuttiseen käyttöön tulevat kuitenkin ainoastaan farmaseuttisesti käyttökelpoiset, ei-toksiset suolat, jotka ovat siitä syystä etusijalla.

4 78300

Esillä olevan kaavan I mukaisilla uusilla yhdisteillä on arvokkaita farmakologisia ominaisuuksia.

Yllättävästi on todettu, että yllä mainitut kaavan I mukaiset fosfatidyyliyhdisteet ja niiden farmaseuttisesti käyttökelpoiset yhdisteet soveltuvat erin-omaisesti virusinfektioiden hoitoon, kuten nähdään esim. eläinkokeista, joita on esitetty esimerkkeinä esimerkkiosassa. Näissä eläinkokeissa infektoidaan eläimiä, kuten hiiriä tai marsuja erilaisilla viruslajeilla annoksella, joka on kaikille tai suurimmalle osalle käsittelemättömistä (kontrolli-)eläimistä letaali-nen, esim. LDqO-90 3a iflfektionkulkua tutkitaan käsittelemättömissä eläimissä vertaamalla eläimiin, jotka on käsitelty ennen infektiota, samanaikaisesti infektion kanssa tai infektion jälkeen jollakin yllä mainituista yhdisteistä tai niiden suolalla.

Tällöin osoittautuu, että profylaktinen vaikutus syntyy annettaessa kaavan I mukaisia yhdisteitä jo useita päiviä aina muutamiin viikkoihin, esim. neljä viikkoa ennen infektiota ja terapeuttinen vaikutus syntyy vielä annettaessa niitä useita päiviä, esim. viikko infektion jälkeen.

Huomattavaa on myös laaja viraalinen spektri, jota vastaan yllä mainitut yhdisteet tehoavat.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää etenkin sairauksien ennaltaehkäisyyn ja hoitoon, joita ovat aiheuttaneet seuraavassa lähemmin nimetyt virukset [nimistön suhteen vrt. J.L. Melnick, Prog. med. Virol. 2j5, 214-232 (1980) ja 28, 208-221 (1982)]:

Kuutiomaisen symmetrian ja paljaan nukleokapsidin omaavat DNA-virukset, vaipalla varustetun virionin DNA-virukset ja kuutiomaisen symmetrian sekä kapsidin helikaalisen symmetrian omaavat RNA-virukset.

Mieluummin käytetään kaavan I mukaisia yhdisteitä DNA-virusten yhteydessä, joissa on vaipalla varustettu virioni ja kapsidin kuutiomainen rakenne, RNA-virusten yhteydessä, joissa on kapsidin helikaalinen symmetria ja joissa nukleo-kapsidivaippa on pintamembraanin luona, mutta myös adenovi- s 78300 rusten, rokkovirusten ja koronavirusten, kuten etenkin ihmisen koronavirusten yhteydessä.

Ensisijassa kaavan I mukaisia yhdisteitä käytetään herpesvirusten, pikornavirusten ja myksovirusten, mutta myös mastadenovirusten, kuten etenkin ihmisen adenovirusten, kordopox-virusten, kuten pääasiassa ortopoxvirusten, kuten etenkin vacciniavirusten, reovirusten, etupäässä (etenkin ihmisen) rotavirusten sekä calici-virusten ja rabdovirusten, kuten ensisijassa ihmisen sekä hevosten, nautojen ja sikojen vesiculo-virusten yhteydessä.

Pääasiassa kaavan I mukaisia yhdisteitä käytetään al-faherpesvirusten, kuten Varicella-virusten, esim. ihmisen Varicella-Zoster-virusten, rinovirusten, kardiovirusten ja ortomyksovirusten, mutta myös betaherpesvirusten, kuten etenkin ihmisen cytomegalovirusten, aftovirusten, ensisijassa sorkkaeläinten, kuten pääasiassa nautojen aftovirusten, sekä paramyksovirusten, ensisijassa pneumovirusten, esim. ihmisen hengityselinten syncitial-virusten ja kuten tämän lisäksi morbillivirusten tai paramyksovirusten, kuten parainfluens-savirusten, esim. ihmisen parainfluenssavirusten, mukaanlukien sendaivirusten sekä arbovirusten tai vesiculovirusten, esim. Vesicular stomatitis-virusten yhteydessä.

Aivan ensisijaisesti kaavan I mukaisia yhdisteitä käytetään simplex-virusten, esim. ihmisen tyyppien l ja 2 Herpes simplex-virusten, ihmisten encefalomyokarditis-virusten, influenssavirusten, kuten pääasiassa influenssa A- ja influenssa B-virusten ja aivan erityisesti esimerkeissä mainittujen virusten yhteydessä.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää siten, että niitä annetaan enteraalisesti tai parenteraalisesti, en-.. sisijassa yhdessä sopivien apu- tai kantoaineiden kanssa.

Mieluummin niitä annetaan limakalvolle, esim. intranasaali-sesti, rektaalisesti, vaginaalisesti tai silmän sidekalvolle tai oraalisesti. Antiviraalinen vaikutus syntyy kuitenkin annettaessa myös muita teitä, esim. subkutaanisesti, intra-venöösisesti, intramuskuläärisesti tai annettaessa normaa- 6 78300 lille iholle.

Vaikuttavan aineen annostus riippuu mm. lämminverisen lajista, elimistön torjuntatilasta, antotavasta ja viruksen lajista. Annoksen suhde vaikutukseen ei ole kovinkaan selvä.

Ennaltaehkäisyyn annetaan noin 0,01 - noin 25 mg:n, mieluimmin 0,05 - 7 mg:n, esim. 0,5 mg:n ainutkertainen annos vaikuttavaa ainetta noin 70 kg painavalle lämminveriselle, esim. ihmiselle. Tämän annoksen ennaltaehkäisevä vaikutus ulottuu useiden viikkojen ajalle. Tarvittaessa, esim. suuremman tartuntavaaran aikoina voidaan tämä annos antaa toistuvasti .

Noin 70 kg painavan lämminverisen terapeuttinen annos on 0,1 - 50 mg, mieluummin l - 10 mg, esim. 5 mg, etenkin oraalisessa käytössä. Tooppisessa, etenkin intranasaalisessa käytössä annostus on jopa 10 kertaa pienempi. Tarvittaessa voidaan kaavan I mukaisten yhdisteiden anto toistaa kunnes sairaus on ohi. Usein riittää kuitenkin ainutkertainen käyttö.

Etusijalla ovat kaavan I mukaiset yhdisteet, joissa W merkitsee vetyä ja Z merkitsee 1,2-dihydroksi-etyyliä, jossa joko ainoastaan 2-hydroksi-ryhmä tai molemmat hydroksi-ryhmät on esteröity C1Q_10-alkaani- tai C18-alkeenihapolla, tai W ja Z merkitsevät kumpikin C10_18-alkaani- tai C1Q-al-keenihapolla esteröityä hydroksimetyyliryhmää, ja näiden suolat.

Aivan erityisesti etusijalla ovat yllä mainitut kaavan I mukaiset yhdisteet, joissa R1 merkitsee L-seriinin, L-ty-rosiinin tai sitruunahapon asyylitähdettä, T merkitsee ryhmää NH, Y merkitsee substituoimatonta tai karboksilla subs-tituoitua dimetyleeniä, W merkitsee vetyä ja Z merkitsee 1,2-dihydroksi-etyyliä, jossa molemmat hydroksiryhmät on esteröity suoraketjuisella C16_18-alkaani- tai C18-alkeeni-hapolla, jossa on parillinen määrä C-atomeja, ja näiden suolat.

Ensisijassa etusijalla ovat yllä mainittujen kaavan I mukaisten yhdisteiden farmaseuttisesti käyttökelpoiset suo-

II

7 78300 lat.

Aivan ensisijassa etusijalla ovat esimerkeissä esitetyt kaavan I mukaiset yhdisteet ja niiden suolat.

Kaavan I mukaiset fosfatidyyliyhdisteet ja niiden suolat valmistetaan sinänsä tunnettujen menetelmien mukaisesti. Ne saadaan esim. siten, että

a) kaavan II

0 W

Il I

H-T-Y-O-P-O-CH (II)

1 I

OH Z

mukainen yhdiste, jossa substituenteilla on yllä mainitut merkitykset, jolloin kaavan II mukaisessa yhdisteessä esiintyvät funktionaaliset ryhmät lukuunottamatta reaktioon osallistuvaa ryhmää esiintyvät tarvittaessa suojatussa muodossa, tai sen reaktiokykyinen johdannainen saatetaan reagoimaan kaavan III

R1 - OH (III) mukaisen yhdisteen kanssa, jossa tähteellä R1 on yllä mainittu merkitys, jolloin kaavan III mukaisessa yhdisteessä esiintyvät funktionaaliset ryhmät lukuunottamatta reaktioon osallistuvaa ryhmää esiintyvät tarvittaessa suojatussa muodossa, tai sen reaktiokykyisen karboksyylihappojohdannaisen kanssa ja lohkaistaan esiintyvät suojaryhmät, tai

b) kaavan IV

r "V

O

II

R1-T-Y- O-P- OH (IV)

OH

L W

mukainen yhdiste, jossa w on 0 tai 1 ja tähteillä R1, T ja Y on yllä mainitut merkitykset, jolloin kaavan IV mukaisessa 8 78300

yhdisteessä esiintyvät funktionaaliset ryhmät lukuunottamatta reaktioon osallistuvaa ryhmää esiintyvät tarvittaessa suojatussa muodossa, tai sen reaktiokykyinen johdannainen saatetaan reagoimaan kaavan V

O w

It I

H- O-P- O-CH (V)

OH Z

- “* m mukaisen yhdisteen kanssa, jossa tähteillä W ja Z on yllä mainitut merkitykset, jolloin kaavan V mukaisessa yhdisteessä esiintyvät funktionaaliset ryhmät lukuunottamatta reaktioon osallistuvaa ryhmää esiintyvät tarvittaessa suojatussa muodossa, ja m on 1, kun kaavan IV mukaisessa yhdisteessä w on 0, tai m on 0, kun w on 1, tai kaavan V mukaisen yhdisteen reaktiokykyisen johdannaisen kanssa ja lohkaistaan esiintyvät suojaryhmät, tai

c) kaavan VI

W

i 1 R -T-Y-O-P-O-CH (VI) 0 ' '

R -O Z

mukainen yhdiste, jossa R2 merkitsee vetyä tai suojaryhmää ja muilla substituenteilla on yllä mainitut merkitykset, jolloin kaavan VI mukaisessa yhdisteessä esiintyvät funktionaaliset ryhmät lukuunottamatta reaktioon osallistuvaa ryhmää esiintyvät tarvittaessa suojatussa muodossa, tai kaavan VI mukaisen yhdisteen tautomeeri hapetetaan hapetusaineella ja lohkaistaan esiintyvät suojaryhmät, tai

d) hydrolysoidaan kaavan VII

9 78300 0 w R1-T-Y-0-P-0-CH (VII)

R3 Z

mukainen yhdiste, jossa R3 merkitsee halogeenia ja muilla substituenteilla on yllä mainitut merkitykset, jolloin kaavan VII mukaisessa yhdisteessä esiintyvät funktionaaliset ryhmät lukuunottamatta reaktioon osallistuvaa ryhmää esiintyvät tarvittaessa suojatussa muodossa, ja lohkaistaan esiintyvät suojaryhmät, tai

e) kaavan VIII

O W

i " ' R -T-Y-O-P-O-CH (VIII) OH Z’ mukainen yhdiste, jossa W merkitsee vetyä ja Z' merkitsee 1,2-dihydroksietyyliä, 2-hydroksietyyliä, hydroksimetyyliä tai 1,2-dihydroksietyyliä, jossa toinen hydroksiryhmistä on esteröity C^.^g-alkaanihapolla tai C18-alkeenihapolla, tai toinen tähteistä W ja Z' merkitsee hydroksimetyyliä ja toinen tähteistä W ja Z' merkitsee vapaata hydroksimetyyliä tai hydroksimetyyliä, joka on esteröity C10_18-alkaanihapolla tai C18-alkeenihapolla, ja tähteillä R1, T ja Y on yllä mainitut merkitykset, jolloin kaavan VIII mukaisessa yhdisteessä esiintyvät funktionaaliset ryhmät lukuunottamatta reaktioon osallistuvaa ryhmää esiintyvät tarvittaessa suojatussa muodossa, tai sen reaktiokykyinen johdannainen esteröidään ε18_18-alkaanihapolla tai C18-alkeenihapolla tai sen reaktiokykyi-sellä johdannaisella ja lohkaistaan esiintyvät suojaryhmät, tai

f) kaavan IX

10 78300 0 w X-Y-O-P-O-CH (XI)

1 I

OH Z

mukainen yhdiste, jossa X merkitsee nukleofiilistä lähtöryh-mää ja muilla substituenteilla on yllä mainitut merkitykset, jolloin kaavan IX mukaisessa yhdisteessä esiintyvät funktionaaliset ryhmät lukuunottamatta reaktioon osallistuvaa ryhmää esiintyvät tarvittaessa suojatussa muodossa, saatetaan reagoimaan kaavan X

R1-T-H (X) mukaisen yhdisteen kanssa, jossa substituenteilla on yllä mainitut merkitykset, jolloin kaavan X mukaisessa yhdisteessä esiintyvät funktionaaliset ryhmät lukuunottamatta reaktioon osallistuvaa ryhmää esiintyvät tarvittaessa suojatussa muodossa, tai sen reaktiokykyisen johdannaisen kanssa ja lohkaistaan esiintyvät suojaryhmät, tai g) kaavan I mukaisessa yhdisteessä, jossa substituenteilla on yllä mainitut merkitykset, jolloin kaavan I mukaisessa yhdisteessä vähintään yhden funktionaalisen ryhmän on oltava suojattu helposti lohkaistavalla ryhmällä, lohkaistaan suojaryhmä(t), tai h) kaavan I mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, jossa W merkitsee vetyä ja Z merkitsee 1,2-dihydroksietyyliryhmää, jossa 2-hydroksiryhmä on esteröity C10_18-alkaanihapolla tai C18-alkeenihapolla, kaavan I mukainen yhdiste, jossa W merkitsee vetyä ja Z merkitsee 1,2-dihydroksietyyliryhmää, jossa molemmat hydroksiryhmät on esteröity C10_18-alkaanihapol-la tai C18-alkeenihapolla, saatetaan reagoimaan 1-hydroksi-ryhmän esteröivän tähteen regioselektiiviseen lohkaisuun sopivan entsyymin kanssa, ja jonkin yllä mainitun menetelmämuunnelman a-h) suorittamisen jälkeen suolan valmistamiseksi tarvittaessa muunnetaan kaavan I mukainen yhdiste suolaksi tai kaavan I mukaisen yh 11 78300 disteen tai sen suolan muuntamiseksi joksikin toiseksi kaavan I mukaiseksi yhdisteeksi tai sen suolaksi asyloidaan tähteeseen R1 sisältyvä amino- tai hydroksiryhmä tai este-röidään tai amidoidaan tähteeseen R1 tai Y sisältyvä kar-boksyyliryhmä.

Yllä mainittuja menetelmämuunnelmia selitetään seuraa-vassa lähemmin:

Menetelmä a:

Kaavan II mukaisessa yhdisteessä esiintyvä reaktioon osallistuvva ryhmä on ryhmä H-T. Mikäli T merkitsee mahdollisesti alempialkyylillä substituoitua ryhmää NH, on sopivassa reaktion toimeenpanossa tarpeen suojata muut kaavan II molekyylissä esiintyvät aminoryhmät sekä mahdollisesti kar-boksyyliryhmät. Hydroksiryhmien suojaaminen on fakultatiivi-nen.

Mikäli T merkitsee happea, suojataan tarkoituksenmukaisesti kaikki muut kaavan II molekyylissä esiintyvät hydrok-siryhmät sekä vapaa amino, alempialkyyliamino ja karboksi ja mahdollisesti muut funktionaaliset ryhmät.

Suojaryhmiä, niiden liitäntää ja lohkaisua on esitetty esimerkiksi julkaisuissa "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, Lontoo, New York 1973 ja "Methoden der Organischen Chemie", Houben-Weyl, 4.painos, osa 15/1, Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart 1974 Ciba-Geigy AG-852841-case 4-15015/+ sekä Theodora W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, New York 1981. Luonteenomaista suojaryhmille on, että ne ovat lohkaistavissa helposti, so. ilman että tapahtuu ei-toivottuja sivureaktioita, esim. solvolyyttisesti, pelkistyksen avulla, foto-lyyttisesti tai myös fysiologisissa olosuhteissa.

. . Hydroksisuojaryhmiä ovat esim. asyylitähteet, kuten, mahdollisesti esim. halogeenilla substituoitu alempialkanoyy-li, kuten 2,2-diklooriasetyyli, tai hiilihappopuoliesterei-den asyylitähteet, etenkin tert.-butyylioksikarbonyyli, mahdollisesti substituoitu bentsyylioksikarbonyyli, esim. 4-nitro-bentsyylioksikarbonyyli, tai difenyylimetoksikarbo- i2 78300 nyyli, tai 2-halogeeni-alempialkoksikarbonyyli, kuten 2,2,2-trikloorietoksikarbonyyli, edelleen trityyli tai formyyli, tai orgaaniset silyyli- tai stannyylitähteet, edelleen helposti lohkaistavat eetteröivät ryhmät, kuten tert.-alempial-kyyli, esim. tert.-butyyli, 2-oksa- tai 2-tia-alifaattiset tai -sykloalifaattiset hiilivetytähteet, ensisijassa l-alem-pialkoksialempialkyyli tai 1-alempialkyylitio-alempialkyyli, esim. metoksi-metyyli, 1-metoksi-etyyli, 1-etoksi-etyyli, metyylitiometyyli, 1-metyylitioetyyli tai 1-etyylitioetyyli, tai 2-oksa- tai 2-tiasykloalkyyli, jossa on 5-6 rengasatomia, esim. tetrahydrofuryyli tai 2-tetrahydropyranyyli tai vastaavat tia-analogit, sekä mahdollisesti substituoitu 1-fenyy-lialempialkyyli, kuten mahdollisesti substituoitu bentsyyli tai difenyylimetyyli, jolloin fenyylitähteiden substituent-teina tulevat kysymykseen esim. halogeeni, kuten kloori, alempialkoksi, kuten metoksi ja/tai nitro.

Karboksyyliryhmät on suojattu tavanomaisesti esteröidys-sä muodossa, jolloin tällaiset esteriryhmittymät ovat helposti lohkaistavissa miedoissa olosuhteissa. Tällä tavalla suojatut karboksyyliryhmät sisältävät esteröivinä ryhminä ensisijassa 1-asemassa haarautuneita tai l- tai 2-asemassa sopivasti substituoituja alempialkyyliryhmiä. Etusijalla, esteröidyssä muodossa esiintyviä karboksyyliryhmiä ovat mm. tert.-alempialkoksikarbonyyli, esim. tert.-butyylioksikarbo-nyyli, aryylimetoksikarbonyyli, jossa on yksi tai kaksi aryy-litähdettä, jolloin nämä merkitsevät mahdollisesti esim. alempialkyylillä, kuten tert.-alempialkyylillä, esim. tert.-butyylillä, alempialkoksilla, kuten nietoksilla, hydroksilla, halogeenilla, esim. kloorilla ja/tai nitrolla mono- tai po-lysubstituoituja fenyylitähteitä, kuten mahdollisesti esim. yllä mainitulla tavalla substituoitu bentsyylioksikarbonyy-li, esim. 4-metoksibentsyylioksikarbonyyli, tai 4-nitrobent-syylioksikarbonyyli, tai mahdollisesti, esim. yllä esitetyllä tavalla substituoitu difenyylimetoksikarbonyyli, esim. difenyylimetoksikarbonyyli tai di-(4-metoksifenyyli)-metok-sikarbonyyli, 1-alempialkoksialempialkoksikarbonyyli, kuten

II

13 78300 metoksimetoksikarbonyyli, l-metoksietoksikarbonyyli tai l-etoksimetoksikarbonyyli, 1-alempialkyyli-tioalempialkoksi-karbonyyli, kuten 1-metyylitiometoksikarbonyyli tai 1-etyy-litioetoksikarbonyyli, aroyylimetoksikarbonyyli, jossa aroyy-liryhmä merkitsee mahdollisesti, esim. halogeenilla, kuten bromilla substituoitua bentsoyyliä, esim. fenasyylioksikar-bonyyli, 2-halogeenialempialkoksikarbonyyli, esim. 2,2,2-tri-kloorietoksikarbonyyli, 2-bromietoksikarbonyyli tai 2-jodi-etoksikarbonyyli, tai 2-(trisubstituoitu silyyli)-etoksikar-bonyyli, jossa substituentit merkitsevät toisistaan riippumatta kukin mahdollisesti substituoitua, esim. alempialkyy-lillä, alempialkoksilla, aryylillä, halogeenilla ja/tai nitrolla substituoitua, alifaattista, aralifaattista, sykloali-faattista tai aromaattista hiilivetytähdettä, kuten vastaavaa, mahdollisesti substituoitua alempialkyyliä, fenyylialem-pialkyyliä, sykloalkyyliä tai fenyyliä, esim. 2-trialempial-alkyylisilyylietoksikarbonyyli, 2-trimetyylisilyylietoksi-karbonyyli tai 2-(di-n-butyyli-metyyli-silyyli)-etoksikar-bonyyli, tai 2-triaryylisilyylietoksikarbonyyli, kuten 2— trifenyylisilyylietoksikarbonyyli.

Yllä ja seuraavassa mainitut orgaaniset silyyli- tai stannyylitähteet sisältävät mieluummin alempialkyylin, etenkin metyylin pii- tai tina-atomien substituentteina. Vastaavia silyyli- tai stannyyliryhmiä ovat ensisijassa trialempi-alkyylisilyyli, etenkin trimetyylisilyyli, edelleen dimetyy-li-tert.-butyyli-silyyli, tai vastaavasti substituoitu stan-nyyli, esim. tri-n-butyylistannyyli.

Etusijalla olevia karboksyyliryhmiä ovat tert.-alempi-alkoksikarbonyyli, kuten tert.-butoksikarbonyyli ja ensisijassa mahdollisesti, esim. yllä esitetyllä tavalla substituoitu bentsyylioksikarbonyyli, kuten 4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli, tai difenyylimetoksikarbonyyli, ennen kaikkea 2-(trimetyylisilyyli)-etoksikarbonyyli.

Suojattu aminoryhmä voi esiintyä esim. helposti lohkaistavan asyyliamino-, aryylimetyyliamino-, eetteröidyn merkap-toamino-, 2-asyyli-alempialk-l-en-yyli-amino-, silyyli- tai i4 7 830 0 stannyyliaminoryhmän muodossa.

Vastaavassa asyyliaminoryhmässä asyyli on esimerkiksi orgaanisen, esim. korkeintaan 18 hiiliatomia sisältävän kar-boksyylihapon, etenkin mahdollisesti, esim. halogeenilla tai aryylillä substituoidun alkaanikarboksyylihapon tai mahdollisesti, esim. halogeenilla, alempialkoksilla tai nitrolla substituoidun bentsoehapon tai hiilihappopuoliesterin asyy-litähde. Tällaisia asyyliryhmiä ovat esimerkiksi alempialka-noyyli, kuten formyyli, asetyyli tai propionyyli, halogeeni-alempialkanoyyli, kuten 2-halogeeniasetyyli, etenkin 2-kloo-ri-, 2-bromi-, 2-jodi-, 2,2,2-trifluori- tai 2,2,2-trikloo-riasetyyli, mahdollisesti, esim. halogeenilla, alempialkoksilla tai nitrolla substituoitu bentsoyyli, esim. bentsoyy-li, 4-klooribentsoyyli, 4-metoksibentsoyyli tai 4-nitrobent-soyyli, tai alempialkyylitähteen 1-asemassa haarautunut tai l- tai 2-asemassa sopivasti substituoitu alempialkoksikarbo-nyyli, etenkin tert.-alempialkoksikarbonyyli, esim. tert.-butyylioksikarbonyyli, aryylimetoksikarbonyyli, jossa on yksi tai kaksi aryylitähdettä, jotka merkitsevät mieluimmin mahdollisesti, esim. alempialkyylillä, etenkin tert.-alempi-alkyylillä, kuten tert.-butyylillä, alempialkoksilla, kuten metoksilla, hydroksilla, halogeenilla, esim. kloorilla ja/ tai nitrolla mono- tai polysubstituoitua fenyyliä, kuten mahdollisesti substituoitu bentsyylioksikarbonyyli, esim.

4-nitro-bentsyylioksikarbonyyli, tai substituoitu difenyyli-metoksikarbonyyli, esim. bentshydryylioksikarbonyyli tai di-(4-metoksifenyyli)-metoksikarbonyyli, aroyylimetoksikarbo-nyyli, jossa aroyyliryhmä merkitsee mieluummin mahdollisesti esim. halogeenilla, kuten bromilla substituoitua bentsoyyliä, esim. fenasyylioksikarbonyyli, 2-halogeenialempialkoksikar-bonyyli, esim. 2,2,2-trikloorietoksikarbonyyli, 2-bromietok-sikarbonyyli tai 2-jodietoksikarbonyyli, tai 2-(trisubsti-tuoitu silyyli)-etoksikarbonyyli, jossa substituentit merkitsevät toisistaan riippumatta kukin mahdollisesti substituoitua, esim. alempialkyylillä, alempialkoksilla, aryylillä, halogeenilla tai nitrolla substituoitua alifaattista, 15 78300 aralifaattista, sykloalifaattista tai aromaattista, korkeintaan 15 C-atomia sisältävää hiilivetytähdettä, kuten vastaavaa mahdollisesti substituoitua alempialkyyliä, fenyylialem-pialkyyliä, sykloalkyyliä tai fenyyliä, esim. 2-trialempial-kyylisilyylietoksikarbonyyli, kuten 2-trimetyylisilyylietok-sikarbonyyli tai 2-(di-n-butyyli-metyyli-silyyli)-etoksikar-bonyyli, tai 2-triaryylisilyylietoksikarbonyyli, kuten 2-tri-fenyylisilyylietoksikarbonyyli.

Muita aminosuojaryhminä kysymykseen tulevia asyylitäh-teitä ovat myös orgaanisten fosfori-, fosfoni- tai fosfiini-happojen vastaavat tähteet, kuten dialempialkyylifosforyyli, esim. dimetyylifosforyyli, dietyylifosforyyli, di-n-propyy-lifosforyyli tai di-isopropyylifosforyyli, disykloalkyyli-fosforyyli, esim. disykloheksyylifosforyyli, mahdollisesti substituoitu difenyylifosforyyli, esim. difenyylifosforyyli, mahdollisesti, esim. nitrolla substituoitu di-(fenyylialempi-alkyyli)-fosforyyli, esim. dibentsyylifosforyyli tai di-(4-nitrobentsyyli)-fosforyyli, mahdollisesti substituoitu fenyy-lioksi-fenyyli-fosfonyyli, esim. fenyylioksifenyyli-fosfo-nyyli, dialempialkyylifosfinyyli, esim. dietyylifosfinyyli, tai mahdollisesti substituoitu difenyylifosfinyyli, esim. difenyylifosfinyyli.

Aryylimetyyliaminoryhmässä, joka merkitsee mono-, di-tai etenkin triaryylimetyyliaminoryhmää, asyylitähteitä ovat etenkin mahdollisesti substituoidut fenyylitähteet. Tällaisia ryhmiä ovat esimerkiksi bentsyyli-, difenyylimetyyli-tai etenkin trityyliamiini.

Eetteröity merkaptoryhmä tällaisella tähteellä suojatussa aminoryhmässä on ensisijassa aryylitio tai aryyli-alem-pialkyylitio, jossa aryyli on etenkin mahdollisesti, esim.

. . alempialkyylillä, kuten metyylillä tai tert.-butyylillä, alempialkoksilla, kuten metoksilla, halogeenilla, kuten kloorilla ja/tai nitrolla substituoitu fenyyli. Vastaava amino-suojaryhmä on esim. 4-nitrofenyylitio.

Aminosuojaryhmänä käytettävässä 2-asyyli-alempialk-l-en-l-yyli-tähteessä asyyli on esim. vastaava alempialkaani- 16 78300 karboksyylihapon, mahdollisesti, esim. alempialkyylillä, kuten metyylillä tai tert.-butyylillä, alempialkoksilla, kuten metoksilla, halogeenilla, kuten kloorilla ja/tai nitrolla substituoidun bentsoehapon, tai etenkin hiilihappopuolieste-rin, kuten hiilihappo-alempialkyylipuoliesterin tähde. Vastaavia suojaryhmiä ovat ensisijassa 1-alempialkanoyyli-prop- l-en-2-yyli, esim. l-asetyyli-prop-l-en-2-yyli, tai 1-alem-pialkoksikarbonyyli-prop-l-en-2-yyli, esim. 1-etoksikarbonyy-li-prop-l-en-2-yyli.

Aminoryhmä voidaan suojata myös protonoidussa muodossa; vastaavina anioneina tulevat kysymykseen ensisijassa vahvojen epäorgaanisten happojen, kuten halogeenivetyhappojen anionit, esim. kloori- tai bromianioni, tai orgaanisten sul-fonihappojen, kuten p-tolueenisulfonihapon anionit.

Etusijalla olevia aminosuojaryhmiä ovat hiilihappopuo-liestereiden asyylitähteet, etenkin tert.-butyylioksikarbo-nyyli, mahdollisesti, esim. esitetyllä tavalla substituoitu bentsyylioksikarbonyyli, esim. 4-nitro-bentsyylioksi-karbo-nyyli, tai difenyylimetoksikarbonyyli, tai 2-halogeeni-alem-pialkoksikarbonyyli, kuten 2,2,2-trikloorietoksikarbonyyli, ·-: edelleen trityyli tai formyyli.

Mieluummin reaktio suoritetaan niin, että kaavan III mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan aktivoidun karboksyyli-johdannaisen muodossa kaavan II mukaisen yhdisteen kanssa, jolloin kaavan III mukaisen karboksyylihapon aktivointi voi tapahtua myös in situ kaavan II mukaisen yhdisteen läsnäollessa.

Kaavan III mukaisten yhdisteiden aktivoituja karboksyy-lihappojohdannaisia ovat ensisijassa reaktiokykyiset aktivoidut esterit tai reaktiokykyiset anhydridit, edelleen reaktiokykyiset sykliset amidit; tällöin voidaan kaavan III mukaisten happojen reaktiokykyiset johdannaiset muodostaa myös in situ.

Happojen aktivoituja estereitä ovat etenkin esteröivän tähteen liitäntähiiliatomissa tyydyttymättömät esterit, esim. vinyyliesteri-tyyppiset, kuten varsinaiset vinyyliesterit I, 78300 (jotka voidaan saada esim. uudelleenesteröimällä vastaava esteri vinyyliasetaatilla; aktivoidun vinyyliesterin menetelmä), karbamoyylivinyyliesterit (jotka voidaan saada esim. käsittelemällä vastaava happo isoksatsoliumreagenssilla; 1,2-oksatsolium- tai Woodward-menetelmä), tai 1-alempialkoksivi-nyyliesterit (jotka voidaan saada esim. käsittelemällä vastaava happo alempialkoksiasetyleenillä; etoksiasetyleeni-me-netelmä), tai amidino-tyyppiset esterit, kuten Ν,Ν'-disubs-tituoidut amidinoesterit (jotka voidaan saada esim. käsittelemällä vastaava happo sopivalla N,N'-disubstituoidulla kar-bodi-imidillä, esim. N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidillä; karbodi-imidi-menetelmä), tai Ν,Ν-disubstituoidut amidinoesterit (jotka voidaan saada esim. käsittelemällä vastaava happo Ν,Ν-disubstituoidulla syaaniamidilla; syaaniamidi-me-netelmä), sopivat aryyliesterit, etenkin elektroneja puoleensa vetävillä substituenteilla sopivasti substituoidut fenyy-liesterit (jotka voidaan saada esim. käsittelemällä vastaava happo sopivasti substituoidulla fenolilla, esim. 4-nitrofe-nolilla, 4-metyylisulfonyyli-fenolilla, 2,4,5-trikloorifeno-liila, 2,3,4,5,6-pentakloori-fenolilla tai 4-fenyylidiatso-fenolilla sopivan kondensointiaineen, kuten N,N'-disyklohek-syyli-karbodi-imidin läsnäollessa; aktivoitujen aryylieste-reiden menetelmä), syaanimetyyliesterit (jotka voidaan saada esim. käsittelemällä vastaava happo klooriasetonitriilil-lä emäksen läsnäollessa; syaanimetyyliesteri-menetelmä), tio-esterit, etenkin mahdollisesti esim. nitrolla substituoidut fenyyli-tioesterit (jotka voidaan saada esim. käsittelemällä vastaava happo mahdollisesti, esim. nitrolla substituoiduil-la tiofenoleilla, mm. anhydridi- tai karbodi-imidi-menetel-män avulla; aktivoitujen tioliestereiden menetelmä), amino-tai amidoesterit (jotka voidaan saada esim. käsittelemällä vastaava happo N-hydroksi-amino- tai vast. N-hydroksi-amido-yhdisteellä, esim. N-hydroksi-sukkinimidillä, N-hydroksi-piperidiinillä, N-hydroksi-ftaali-imidillä tai N-hydroksi-bentstriatsolilla, esim. anhydridi- tai karbodi-imidi-mene-telmän mukaisesti; aktivoitujen N-hydroksiestereiden mene 1β 78300 telmä) tai silyyliesterit (jotka voidaan saada esim. käsittelemällä vastaava happo silylointiaineella, esim. heksame-tyylidisilatsaanilla ja jotka reagoivat helposti hydroksi-, mutta eivät aminoryhmien kanssa).

Kaavan III mukaisten happojen anhydridit voivat olla näiden happojen symmetrisiä tai mieluummin seka-anhydridejä, näin esim. epäorgaanisten happojen kanssa muodostetut anhydridit, kuten happohalogenidit, etenkin happokloridit (jotka voidaan saada esim. käsittelemällä vastaava happo tionyyli-kloridilla, fosforipentakloridilla tai oksalyylikloridilla; happokloridimenetelmä), atsidit (jotka voidaan saada esim. vastaavasta happoesteristä vastaavan hydratsidin kautta ja käsittelemällä se typpihapolla; atsidimenetelmä), anhydridit, jotka on muodostettu hiilihappopuolijohdannaisten, kuten vastaavien estereiden, esim. hiilihappoalempialkyylipuo-liestereiden kanssa (jotka voidaan saada esim. käsittelemällä vastaava happo halogeeni-, kuten kloorimuurahaishappo-alempialkyyliestereillä tai l-alempialkoksikarbonyyli-2-alem-pialkoksi-1,2-dihydro-kinoliinillä, esim. 1-alempialkoksi-karbonyyli-2-etoksi-l,2-dihydrokinoliinillä; O-alkyyli-hii-lihappo-seka-anhydridien menetelmä) tai anhydridit, jotka on muodostettu dihalogenoidun, etenkin diklooratun fosforihapon kanssa (jotka voidaan saada esim. käsittelemällä vastaava happo fosforioksikloridilla; fosforioksikloridimenetelmä), tai orgaanisten happojen kanssa muodostetut anhydridit, kuten orgaanisten karboksyylihappojen kanssa muodostetut seka-anhydridit (jotka voidaan saada esim. käsittelemällä vastaava happo mahdollisesti substituoidulla alempialkaani- tai fenyylialkaanikarboksyylihappohalogenidilla, esim. fenyyli-etikkahappo-, pivaliinihappo- tai trifluorietikkahappoklori-dilla; karboksyylihappo-seka-anhydridien menetelmä) tai orgaanisten sulfonihappojen kanssa muodostetut anhydridit (jotka voidaan saada esim. käsittelemällä vastaavan hapon suola, kuten alkalimetallisuola sopivalla orgaanisella sulfonihap-pohalogenidilla, kuten alempialkaani- tai aryyli-, esim. metaani- tai p-tolueenisulfonihappokloridilla; sulfonihappo- i9 78300 seka-anhydridien menetelmä), sekä symmetriset anhydridit (jotka voidaan saada esim. kondensoimalla vastaava happo kar-bodi-imidin tai 1-dietyyliaminopropiinin läsnäollessa; symmetristen anhydridien menetelmä).

Sopivia syklisiä amideja ovat etenkin amidit, jotka on muodostettu viisijäsenisten aromaattisluonteisten diatsasyk-lien kanssa, kuten amidit, jotka on muodostettu imidatsolien, esim. imidatsolin kanssa (jotka voidaan saada esim. käsittelemällä vastaava happo N,N'-karbonyylidi-imidatsolilla; imi-datsoli-menetelmä), tai pyratsolien, esim. 3,5-dimetyyli-pyratsolin kanssa (jotka voidaan saada esim. happohydratsi-din kautta käsittelemällä asetyyliasetonilla; pyratsolidi-menetelmä).

Kuten mainittiin, kaavan III mukaisten happojen johdannaiset voidaan muodostaa myös in situ. Näin voidaan muodostaa esim. N,N'-disubstituoitu amidinoesteri in situ siten, että kaavan II mukaisen lähtöaineen ja kaavan III mukaisen hapon seos saatetaan reagoimaan sopivan N,N-disubstituoidun karbodi-imidin, esim. N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidin läsnäollessa. Edelleen kaavan lii mukaisten happojen amino- tai amidinoesterit voidaan muodostaa kaavan II mukaisen asyloi-tavan lähtöaineen läsnäollessa siten, että vastaavan happoja amino-lähtöaineen seos saatetaan reagoimaan N,N'-disubs-tituoidun karbodi-imidin, esim. N,N'-disykloheksyyli-karbo-di-imidin ja N-hydroksi-amiinin tai N-hydroksi-amidin, esim. N-hydroksisukkinimidin läsnäollessa, mahdollisesti sopivan emäksen, esim. 4-dimetyyliamino-pyridiinin läsnäollessa.

Vaihtoehtoisesti menetelmämuunnelma a) voidaan suorittaa myös niin, että happo III saatetaan reagoimaan kaavan II mukaisen reaktiokykyisen johdannaisen kanssa.

Kaavan II mukaisen yhdisteen johdannainen, jossa tähde H-X5 merkitsee ryhmää NH ja jossa reaktioon osallistuva ami-noryhmä esiintyy reaktiokykyisessä muodossa, voidaan valmistaa esim. saattamalla reagoimaan fosfiitin, esim. dietyyli-kloorifosfiitin, 1,2-fenyleeni-kloorifosfiitin, etyyli-di-kloori-fosfiitin, etyleeni-kloori-fosfiitin tai tetraetyyli- 20 7 8 3 0 0 pyrofosfIitin kanssa. Kaavan II mukaisen yhdisteen reaktio-kyky inen muoto on esim. myös karbamiinihappohalogenidi tai isosyanaatti, jolloin kaavan II mukaisen yhdisteen reaktioon osallistuva aminoryhmä on sitoututunut halogeenikarbonyyliin, esim. kloorikarbonyyliin tai vast, se esiintyy isosyanaattina, jolloin viimeksi mainitussa tapauksessa saadaan ainoastaan kaavan I mukaisia yhdisteitä, jotka sisältävät reaktiossa muodostuneen amidiryhmän typpiatomissa vetyatomin.

Kaavan II mukaisen yhdisteen johdannainen, jossa ryhmä H-T merkitsee reaktiokykyisessä muodossa esiintyvää hydrok-sia, on esim. halogenidi. Tässä tapauksessa esim. myös kaavan III mukaisen karboksyylihapon metallisuola, kuten alka-limetalli-, mieluummin cesium-suola voidaan saattaa reagoimaan mainitun halogenidin kanssa.

Reaktio voidaan suorittaa sinänsä tunnetulla tavalla, jolloin reaktio-olosuhteet riippuvat ensisijassa siitä, onko reaktioon osallistuva karboksyyliryhmä aktivoitu ja miten se on aktivoitu, tavanomaisesti sopivan liuottimen tai laimen-timen tai tällaisten seoksen läsnäollessa ja tarvittaessa kondensointiaineen läsnäollessa, joka esim. silloin, kun reaktioon osallistuva karboksyyliryhmä esiintyy anhydridinä, voi olla myös happoa sitova aine, jäähdyttäen tai lämmittäen, esim. noin -30° - noin +150°C:n lämpötila-alueella, suljetussa reaktioastiassa ja/tai inertin kaasun, esim. typen atmosfäärissä. Tavanomaisia kondensointiaineita ovat esim. kar-bodi-imidit, esimerkiksi N,N'-di-etyyli-, N,N'-dipropyyli-, N,N'-disykloheksyyli-tai N-etyyli-N'-(3-dimetyyliaminopropyy-li)-karbodi-imidi, sopivat karbonyyliyhdisteet, esimerkiksi karbonyylidi-imidatsoli, tai 1,2-oksatsoliumyhdisteet, esim.

2-etyyli-5-fenyyli-l,2-oksatsolium-3'-sulfonaatti ja 2-tert.-butyyli-5-metyyli-isoksatsolium-perkloraatti, tai sopiva asyyliaminoyhdiste, esim. 2-etoksi-l-etoksikarbonyyli-l,2-dihydrokinoliini. Tavanomaisia happoja sitovia kondensointiaineita ovat esim. alkalimetallikarbonaatit tai -vetykarbo-naatit, esim. natrium- tai kaliumkarbonaatti tai -vetykarbo-naatti (tavanomaisesti yhdessä sulfaatin kanssa) tai orgaa 2i 783 0 0 niset emäkset, kuten tavanomaisesti steerisesti estyneet trialempialkyyliamiinit, esim. N,N-di-isopropyyli-N-amiini.

Suojaryhmien, esim. karboksyyli-, amino- tai hydroksi-suojaryhmien lohkaisu tapahtuu sinänsä tunnetulla tavalla, esim. solvolyysin, etenkin hydrolyysin, alkoholyysin tai asidolyysin avulla, tai pelkistyksen, etenkin hydrogenolyy-sin tai kemiallisen pelkistyksen avulla, mahdollisesti asteittain tai samanaikaisesti, jolloin voidaan käyttää myös entsymaattista menetelmiä.

Näin tert.-alempialkoksikarbonyyli tai 2-asemassa orgaanisella silyyliryhmällä tai 1-asemassa alempialkoksilla tai alempialkyylitiolla substituoitu alempialkoksikarbonyyli tai mahdollisesti substituoitu difenyylimetoksikarbonyyli voidaan muuntaa vapaaksi karboksiksi esim. käsittelemällä sopivalla hapolla, kuten muurahaishapolla tai trifluorietik-kahapolla, mahdollisesti lisäämällä nukleoftilistä yhdistettä, kuten fenolia tai anisolia. Mahdollisesti substituoitu bentsyylioksikarbonyyli voidaan vapauttaa esim. hydrogeno-lyysin avulla, esim. käsittelemällä vedyllä metallisen hyd-rauskatalysaattorin, kuten palladiumkatalysaattorin läsnäollessa. Edelleen sopivasti substituoitu bentsyylioksikarbonyyli, kuten 4-nitrobentsyylioksikarbonyyli voidaan muuntaa vapaaksi karboksyyliksi myös kemiallisen pelkistyksen avulla, esim. käsittelemällä alkalimetalli-, esim. natriumditio-niitillä tai pelkistävällä metallilla, esim. sinkillä, tai metallisuolalla, kuten kromi-II-suolalla, esim. kromi-II-kloridilla, tavanomaisesti vetyä luovuttavan aineen läsnäollessa, joka pystyy tuottamaan yhdessä metallin kanssa syntyvää vetyä, kuten hapon, ensisijassa sopivan karboksyyliha-pon, kuten mahdollisesti, esim. hydroksilla substituoidun alempialkaanikarboksyylihapon, esim. etikkahapon, muurahaishapon, glykolihapon, difenyyliglykolihapon, maitohapon, man-telihapon, 4-kloori-mantelihapon tai viinihapon, tai alkoholin tai tiolin läsnäollessa, jolloin lisätään mieluummin vettä. Käsittelemällä pelkistävällä metallilla tai metalli-suolalla yllä esitetyllä tavalla myös 2-halogeeni-alempial- 22 7 8 3 0 0 koksikarbonyyli (mahdollisesti muuntamalla ensin 2-bromi-alempialkoksikarbonyyliryhmä vastaavaksi 2-jodi-alempialkok-sikarbonyyliryhmäksi) tai aroyylimetoksikarbonyyli voidaan muuntaa vapaaksi karboksyyliksi, jolloin aroyylimetoksikarbonyyli voidaan lohkaista samoin käsittelemällä nukleofiili-sellä, mieluummin suolan muodostavalla reagenssilla, kuten natriumtiofenolaatilla tai natriumjodidilla. Substituoitu 2-silyylietoksikarbonyyli voidaan muuntaa vapaaksi karbok-syyliksi myös fluorivetyhapon fluoridianionin luovuttavalla suolalla, kuten alkalimetallifluoridilla, esim. natrium- tai kaliumfluoridilla, makrosyklisen polyeetterin ("kruunueette-rin") läsnäollessa tai orgaanisen kvaternäärisen emäksen fluoridilla, kuten tetra-alempialkyyliammoniumfluoridilla tai trialempialkyyli-aryyli-ammoniumfluoridillä, esim. tet-raetyyliammoniumfluoridilla tai tetrabutyyliammoniumfluori-dilla aproottisen polaarisen liuottimen, kuten dimetyylisul-foksidin tai Ν,Ν-dimetyyliasetamidin läsnäollessa.

Suojattu aminoryhmä vapautetaan sinänsä tunnetulla tavalla suojaryhmien laadusta riippuen monella eri tavalla, mieluummin solvolyysin tai pelkistyksen avulla. 2-halogeeni-alempialkoksi-karbonyyliamino (mahdollisesti muuntamalla ensin 2-bromi-alempialkoksikarbonyyliaminoryhmä 2-jodi-alempi-alkoksikarbonyyliaminoryhmäksi), aroyylimetoksikarbonyyliami-: no tai 4-nitrobentsyylioksikarbonyyliamino voidaan lohkaista • i esim. käsittelemällä sopivalla kemiallisella pelkistysaineel- la, kuten sinkillä sopivan karboksyylihapon, kuten vesipitoisen etikkahapon läsnäollessa. Aroyylimetoksikarbonyyli-amino voidaan lohkaista myös käsittelemällä nukleofiilisel-lä, mieluimmin suolanmuodostavalla reagenssilla, kuten natriumtiofenolaatilla, ja 4-nitro-bentsyylioksikarbonyyliamino myös käsittelemällä alkalimetalli-, esim. natriumditionii-tillä. Mahdollisesti substituoitu difenyylimetoksikarbonyy-liamino, tert.-alempialkoksikarbonyyliamino tai 2-trisubsti-tuoitu silyylietoksikarbonyyliamino voidaan vapauttaa käsittelemällä sopivalla hapolla, esim. muurahais- tai trifluo-rietikkahapolla, mahdollisesti substituoitu bentsyylioksi- li ,, 78300 23 karbonyyliamino esim. hydrogenolyysin avulla, so. käsittelemällä vedyllä sopivan hydrauskatalysaattorin, kuten palla-diumkatalysaattorin läsnäollessa, mahdollisesti substituoitu triaryylimetyyliamino tai formyyliamino esim. käsittelemällä hapolla, kuten mineraalihapolla, esim. kloorivetyhapolla, tai orgaanisella hapolla, kuten muurahais-, etikka- tai tri-fluorietikkahapolla, mahdollisesti veden läsnäollessa, ja orgaanisella silyyliryhmällä suojattu aminoryhmä esim. hyd-rolyysin tai alkoholyysin avulla. 2-halogeeniasetyylillä, esim. 2-klooriasetyylillä suojattu aminoryhmä voidaan vapauttaa käsittelemällä tiovirtsa-aineella emäksen läsnäollessa tai tiovirtsa-aineen tiolaattisuolalla, kuten aikaiimetalli-tiolaatilla ja suorittamalla tämän jälkeen muodostuneen kon-densointituotteen solvolyysi, kuten alkoholyysi tai hydro-lyysi. 2-substituoidulla silyylietoksikarbonyylillä suojattu aminoryhmä voidaan muuntaa vapaaksi aminoryhmäksi myös käsittelemällä fluorivetyhapon fluoridianioneja tuottavalla suolalla, kuten yllä on esitetty vastaavasti suojatun kar-boksyyliryhmän yhteydessä.

Atsidoryhmän muodossa suojattu amino muunnetaan esim. ....: pelkistyksen avulla vapaaksi aminoksi, esimerkiksi katalyyt tisen hydrauksen avulla vedyllä hydrauskatalysaattorin, kuten platinaoksidin, palladiumin tai Raney-nikkelin läsnäollessa, tai myös käsittelemällä sinkillä hapon, kuten etikka-hapon läsnäollessa. Katalyyttinen hydraus suoritetaan mieluimmin inertissä orgaanisessa liuottimessa, kuten haloge-noidussa hiilivedyssä, esim. metyleenikloridissa tai myös vedessä tai veden ja orgaanisen liuottimen, kuten alkoholin tai dioksaanin seoksessa, suunnilleen 20-25°C:ssa tai myös jäähdyttäen tai lämmittäen.

Sopivalla asyyliryhmällä, orgaanisella silyyliryhmällä tai mahdollisesti substituoidulla l-fenyylialempialkyylillä suojattu hydroksiryhmä vapautetaan samalla tavalla kuin vastaavasti suojattu aminoryhmä. 2,2-diklooriasetyylillä suojattu hydroksiryhmä vapautetaan emäksisen hydrolyysin avulla, tert.-alempialkyylillä tai 2-oksa- tai 2-tia-alifaatti- 24 78300 sella tai -sykloalifaattisella hiilivetytähteellä eetteröity hydroksiryhmä asidolyysin avulla, esim. käsittelemällä mine-raalihapolla tai vahvalla karboksyylihapolla, esim. trifluo-rietikkahapolla. Kaksi hydroksiryhmää, jotka on suojattu yhdessä mieluimmin substituoidulla metyleeniryhmällä, kuten alempialkylideenillä, esim. isopropylideenillä, sykloalkyli-deenillä, esim. isopropylideenillä, sykloalkylideenillä, esim. sykloheksylideenillä, tai bentsylideenillä, voidaan vapauttaa happamen solvolyysin avulla, etenkin mineraaliha-pon tai vahvan orgaanisen hapon läsnäollessa.

Etenkin, kun esiintyy useita suojattuja funktionaalisia ryhmiä, suojaryhmät valitaan niin, että samanaikaisesti voidaan lohkaista useampi kuin yksi tällainen ryhmä, esimerkiksi asidolyyttisesti, kuten käsittelemällä trifluorietikkaha-polla tai muurahaishapolla, tai pelkistyksen avulla, kuten käsittelemällä sinkillä ja etikkahapolla, tai vedyllä ja hyd-rauskatalysaattorilla, kuten palladium-hiili-katalysaattoril-la.

Menetelmä b:

Kaavan IV mukaisen yhdisteen reaktiokykyinen johdannainen, jossa yhdisteessä w on 1, tai kaavan V mukaisen yhdisteen reaktiokykyinen johdannainen, jossa yhdisteessä m on l, on esim. mono- tai bisanhydridi, joka on muodostettu vahvan hapon, etenkin mineraalihapon, kuten etenkin halogeenivety-hapon, kuten pääasiassa kloorivetyhapon kanssa. Toinen hapan fosforihapporyhmä voi esiintyä sellaisenaan, anhydridinä, kuten yllä on esitetty tai esteröidyssä muodossa, jolloin esteröivinä tähteinä ovat etusijalla sellaiset, jotka voidaan lohkaista kaavojen IV ja V mukaisten yhdisteiden välisen reaktion jälkeen jälleen regioselektiivisesti, esim. me-tyyliesteriryhmä, joka voidaan lohkaista esim. alkalisen saippuoinnin avulla tai mieluimmin litiumkloridin avulla, tai etenkin hydrogenolyyttisesti lohkaistavat tähteet, esim. bentsyyli- tai fenyyliesteritähteet, jolloin bentsyylieste-ritähteet voidaan lohkaista esim. palladiumkatalysaattorei-den, kuten palladium-hiilen läsnäollessa ja fenyyliesteri- 25 78300 tähteet esim. platina- tai platina-palladium-sekakatalysaat-toreiden läsnäollessa.

Reaktiokykyisten fosforihappojohdannaisten muodostus voi tapahtua myös in situ yhdisteiden läsnäollessa, jotka pystyvät muodostamaan fosforihapon tai sen monoestereiden kanssa ainakin välillisesti reaktiokykyisiä, anhydridi- tai enoliesterityyppisen luonteen omaavia yhdisteitä, esim. p-tolueenisulfonihappokloridin, syanuurikloridin, N-alkyyli- 5-fenyyli-isoksatsoliumsuolojen, etoksiasetyleenin tai etenkin triklooriasetonitriilin tai etenkin karbodi-imidin, kuten pääasiassa disykloheksyylikarbodi-dimidin läsnäollessa. Esimerkiksi kaavojen IV tai V mukainen fosforihappomonoeste-ri, joissa w tai vast, m on 1, voidaan saattaa reagoimaan kaavojen IV tai vast. V mukaisen ylimääräisen alkoholin kanssa, joissa w tai vast, m on 0, disykloheksyylikarbodi-imidin moninkertaisen, esim. viisinkertaisen moolimäärän läsnäollessa tertiäärisen amiinin läsnäollessa tai ilman sitä.

Kun fosforihappomonoesterissä molemmat happamet ryhmät esiintyvät halogeenivetyhapon kanssa muodostettuna anhydri-dinä, voidaan saada ensin triesterin lisäksi myös fosfori-happodiesteri-halogenideja, jotka voidaan hydrolysoida tämän jälkeen diestereiksi vedellä, vettä luovuttavalla aineella tai kuumentamalla tertiääristen alkoholien, kuten tert.-bu-tanolin tai tetrahydropyranyylin kanssa.

Kun lähdetään fosforihappomonoesteri-dihalogenidista, esim. fosforihappomonoesteri-dikloridista, reaktio suoritetaan mieluummin tertiäärisen amiinin, kuten pyridiinin, lu-tidiinin tai kinoliinin läsnäollessa, jolloin esterikloridin ylimääräinen aktivointi saadaan aikaan dimetyyliformamidilla.

Menetelmän b eräs edullinen sovellutusmuoto on fosfori-happomonoesteri-dikloridin reaktio vastaavan alkoholin kanssa tertiäärisen amiinin läsnäollessa, minkä jälkeen suoritetaan ensiksi saadun fosforihappodiesterihalogenidin hydro-lyysi.

Kaavojen IV tai V mukaisen yhdisteen reaktiokykyisessä johdannaisessa, joissa w tai vast, m on 0, reaktioon osallis- 26 7 8 3 0 0 tuva hydroksiryhmä esiintyy reaktiokykyisessä esteröidyssä muodossa.

Reaktiokykyinen esteröity hydroksi on esim. vahvalla epäorgaanisella tai orgaanisella hapolla esteröity hydroksi, kuten mineraalihapolla, esim. halogeenivetyhapolla, kuten kloorivety-, bromivety- tai jodivetyhapolla, edelleen rikkihapolla, tai halogeenirikkihapolla, esim. fluoririkki-hapolla, tai vahvalla orgaanisella sulfonihapolla, kuten mahdollisesti esim. halogeenilla, kuten fluorilla substitu-oidulla alempialkaanisulfonihapolla tai aromaattisella sulfonihapolla, esim. mahdollisesti alempialkyylillä, kuten metyylillä, halogeenilla, kuten bromilla ja/tai nitrolla subs-tituoidulla bentseenisulfonihapolla, esim. metaanisulfoni-, trifluorimetaanisulfoni- tai p-tolueenisulfonihapolla esteröity hydroksi, etenkin kloridi, bromidi tai jodidi.

Reaktio voidaan suorittaa niin, että kaavojen IV tai V mukainen reaktiokykyinen fosforihappojohdannainen saatetaan reagoimaan kaavojen V tai vast. IV mukaisen aktivoimattomas-sa muodossa esiintyvän alkoholin kanssa tai siten, että kaavojen IV tai V mukainen reaktiokykyinen esteröity alkoholi saatetaan reagoimaan kaavojen V tai vast. IV mukaisen, akti-voimattomattomassa muodossa esiintyvän fosforihappojohdan-naisen tai sen reaktiokykyisen suolan kanssa.

Kaavojen IV tai V mukaisten yhdisteiden suoloina käytetään aiottuun nukleofiiliseen substituutioreaktioon nähden erittäin reaktiokykyisiä suoloja, esim. suoloja, kuten hopea-suoloja, jotka pystyvät muodostamaan reaktiokumppanissa esiintyvän nukleofiilisen lähtöryhmän, esim. jonkin yllä mainitun halogenidi-ionin kanssa vaikeasti liukenevan sakan, tai suuren kationin omaavia suoloja, esim. cesiumsuoloja, joissa fos-faattitähteen nukleofiilisyys on suuri. Fosfaattitähteen nukleofiilisyyden lisäämiseksi voidaan vastaioni poistaa myös tilallisesti, esim. lisäämällä kompleksinmuodostajia, kuten kruunueettereitä, esim. 18-kruunu-6:a. Käytettäessä 18-kruunu-6:a voidaan reaktio suorittaa kaliumsuolan kanssa.

Eräs menetelmän b edullinen sovellutusmuoto on kaavan 27 78300 IV tai V mukaisen fosforihappomonoesterin hopeasuolan reaktio, jossa toinen happamista ryhmistä on suojattu helposti lohkaistavalla suojaryhmällä, esim. jollakin yllä mainituista, esim. bentsyyli- tai fenyyliesterinä kaavan V tai vast. IV mukaisen reaktiokykyisen alkoholin kanssa, jossa OH-ryhmä on korvattu kloorilla, bromilla tai jodilla. Reaktion suorittamisen jälkeen suojaryhmä lohkaistaan, esim. bentsyyli-tai fenyyliesterisuojaryhmä hydraamalla yllä esitetyllä tavalla.

Menetelmä c:

Kaavan VI mukaiset yhdisteet, joissa R2 merkitsee vetyä, esiintyvät pääasiassa tautomeerisessä muodossa, jossa protoni on sidottu suoraan fosforiin. Hapetus voidaan suorittaa esim. vesipitoisella kaliumpermanganaatilla suunnilleen 0eC:n lämpötiloissa. Vesipitoisessa väliaineessa ovat hapetusainena sopivia myös mm. alkalijodaatit, -perjodaatit ja -hypokloriitit, peretikkahappo, N-kloori-4-metyyli-bent-seeni-sulfonihappoamidi.

Suojaryhmiä R2 ovat esim. menetelmässä b mainitut. Menetelmä d:

Kaavan VII mukaisessa yhdisteessä R3 merkitsee halogeenia, kuten bromia tai jodia, ensisijassa kuitenkin klooria.

Hydrolyysi suoritetaan vedellä tai vettä luovuttavalla aineella, mieluummin korotetussa lämpötilassa, esim. 30 -95eC:ssa.

Lähtöaineet saadaan esim. kuten menetelmässä b on esitetty tai klooraamalla vastaava fosforihapokediesteri, esim. alkuainekloorilla.

Menetelmä e:

Suojaryhminä tai reaktiokykyisinä karboksyylihappojohdannaisina voivat toimia esim. menetelmässä a mainitut. Reak-tio suoritetaan esim. siten, että kaavan VIII mukainen, ak-tivoimattomassa muodossa esiintyvä yhdiste saatetaan reagoimaan reaktiokykyisen karboksyylihappojohdannaisen kanssa, jolloin karboksyylihapon aktivointi voi tapahtua myös in situ, kaavan Vili mukaisen yhdisteen läsnäollessa, esim. vas- 78300 28 taavalla tavalla kuin menetelmässä a on esitetty. Vaihtoehtoisesti reaktio voidaan suorittaa siten, että kaavan Vili mukainen yhdiste, jossa reaktioon osallistuva(t) hydroksi-ryhmä(t) esiintyy (esiintyvät) reaktiokykyisessä, esteröi-dyssä muodossa, esim. halogenidina, saatetaan reagoimaan ak-tivoimattomassa muodossa esiintyvän karboksyylihapon tai reak-tiokykyisen karboksyylihapposuolan kanssa, esim. vastaavalla tavalla kuin menetelmässä a on esitetty.

Menetelmä f;

Nukleofiilinen lähtöryhmä X on etenkin sopivilla hapoilla esteröity hydroksiryhmä, esim. reaktiokykyinen esteröity hydroksi kuten menetelmässä b on esitetty.

Kun kaavan X mukaisessa yhdisteessä tähde T merkitsee ryhmää NH, reaktio suoritetaan parhaiten emäksen avulla, jolloin käytetään mieluummin tämän emäksen ekvimolaarisia määriä. Emäksinä käytetään etenkin esim. metallihydroksideja, -karbonaatteja tai -alkoholaatteja, kuten alkalimetalli- tai maa-alkalimetallihydroksideja tai -alkoholaatteja, esim. natrium- tai kaliumhydroksidia tai natriumtert.-butylaattia, tai alkalimetallikarbonaatteja tai sekundääristen amiinien suoloja, etenkin alkalimetallisuoloja, esim. 2-okso-pyrroli-diini-natriumia, tai vahvasti emäksisiä ioninvaihtimia, esim. Dowex 1 (rekisteröity tavaramerkki), tämän lisäksi myös hyd-ridejä tai amideja, esim. alkalimetallihydridejä tai -amideja, kuten natriumhydridiä tai -amidia tai litiumdi-isopropyy-liamidia.

Reaktio suoritetaan mieluummin inertissä orgaanisessa liuottimessa, haluttaessa tai tarvittaessa jäähdyttäen tai lämmittäen, esim. noin -80° - noin 150°C:n lämpötila-alueella, pääasiassa 0° - 100eC:ssa.

Emäksen avulla suoritettava aktivointi voi tapahtua samassa tai jossakin muussa lämpötilassa kuin varsinainen lii-täntäreaktio.

Etenkin käytettäessä hyvin vahvoja emäksiä, esim. li-tiumdi-isopropyyliamidia, aktivointi emäksen kanssa ("metallointi") tapahtuu alhaisemmassa lämpötilassa (esim. -80eC:ssa) li 29 7 8 3 0 0 kuin syklisointi. Tässä tapauksessa voidaan esim. reaktioas-tian antaa lämmetä hitaasti metalloinnin jälkeen.

Liuotinta valittaessa on otettava huomioon myös käytettävä emäs. Alkalimetallihydroksidien kanssa suoritettavat reaktiot suoritetaan mieluummin dimetyylisulfoksidissa tai alkoholeissa, kuten alempialkanoleissa, esim. vedettömässä etanolissa kiehumislämpötilassa, alkoholaattien kanssa suoritettavat reaktiot suoritetaan mieluimmin eettereissä, etenkin syklisissä eettereissä, käytettäessä natrium-tert.-buty-laattia esim. dioksaanissa huoneen lämpötilassa. Esim. 2-okso-pyrrolidiini-natriumin kanssa suoritettavat reaktiot suoritetaan mm. syklisen eetterin ja aromaattisen hiilivedyn seoksessa, esim. dioksaani-tolueeni-seoksessa huoneen lämpötilan ja 60eC:n välillä olevassa lämpötilassa.

Ioninvaihtimen avulla suoritettava keksinnön mukainen reaktio suoritetaan etenkin alkoholissa, esim. alempialka-nolissa, esim. etanolissa huoneenlämpötilassa.

Kaavan X mukaisen yhdisteen reaktiokykyinen johdannainen, jossa kaavassa tähde T merkitsee happea, on esim. sopiva karboksyylihapposuola, esim. cesiumsuola, jossa karbok-sylaatti-anionilla on suuri nukleofiilisyys, tai hopeasuola, jolloin hopeaioni muodostaa halogenidin X kanssa vaikeasti liukenevan sakan. Karboksylaattianionin nukleofiilisyyden lisäämiseksi vastaioni voidaan myös poistaa tilallisesti, esim. lisäämällä kompleksinmuodostajia, kuten kruunueette-reitä, esim. 18-kruunu-6:a. Käytettäessä 18-kruunu-6:a reaktio voidaan suorittaa kaliumsuolan kanssa.

Mahdolliset suojaryhmät ja niiden lohkaisu on esitetty menetelmässä a.

Menetelmä g; : Kaavan I mukaisen yhditeen funktionaalisia ryhmiä, jot ka on mahdollisesti suojattu helposti lohkaistavalla suoja-ryhmällä, ovat etenkin fosforihapporyhmä, hydroksiryhmä tähteessä Z, vapaa karboksi tähteessä Y, tai vapaa amino, hyd-roksi, karboksi tai merkapto tähteessä R1. Sopivia suojaryh-miä ja niiden lohkaisu on esitetty esim. menetelmässä b.

30 7 8 3 0 0

Menetelmä h:

Sopiva entsyymi on esim. fosfolipaasi A2, jota on markkinoilla (esim. Boehringer AG, Mannheim. Saksan Liittotasavalta) .

Yllä mainittujen menetelmien suorittamiseksi tarvittavat lähtöaineet ovat tunnettuja tai ne voidaan valmistaa sinänsä tunnettujen menetelmien mukaisesti, esim. jonkin edellä esitetyn menetelmän mukaisesti.

Tähteeseen R1 sisältyvän amino- tai hydroksiryhmän asy-lointi suoritetaan vastaavalla tavalla kuin menetelmässä a on esitetty.

Tähteeseen R1 sisältyvän karboksyyliryhmän esteröinti suoritetaan esim. seuraavasti:

Sopivia aineita ovat esimerkiksi vastaavat diatso-yhdis-teet, kuten mahdollisesti substituoidut diatsoalempialkaanit, esim. diatsometaani, diatsoetaani, diatso-n-butaani tai di-fenyylidiatsometaani. Nämä reagenssit käytetään sopivan iner-tin liuottimen, kuten alifaattisen, sykloalifaattisen tai aromaattisen hiilivedyn, kuten heksaanin, sykloheksaanin, bentseenin tai tolueenin, halogenoidun alifaattisen hiilivedyn, esim. metyleenikloridin, tai eetterin, kuten dialempi-alkyylieetterin, esim. dietyylieetterin, tai syklisen eetterin, esim. tetrahydrofuraanin tai dioksaanin, tai liuotinseok-sen läsnäollessa ja riippuen diatsoreagenssista jäähdyttäen, huoneen lämpötilassa tai hieman lämmittäen, edelleen tarvittaessa suljetussa astiassa ja/tai inertin kaasun, esim. typen atmosfäärissä.

Muita sopivia aineita ovat vastaavien alkoholien esterit, ensisijassa sellaiset, jotka on muodostettu epäorgaanisten tai orgaanisten happojen, kuten mineraalihappojen, esim. halogeenivetyhappojen, kuten kloorivety-, bromivety- tai jo-divetyhapon, edelleen rikkihapon, tai halogeeni-rikkihapon, : esim. fluoririkkihapon, tai vahvojen orgaanisten sulfonihap- pojen, kuten mahdollisesti, esim. halogeenilla, kuten fluorilla substituoitujen alempialkaanisulfonihappojen tai aromaattisten sulfonihappojen, kuten esim. mahdollisesti alem- 31 7 8 300 pialkyylillä, kuten metyylillä, halogeenilla, kuten bromilla ja/tai nitrolla substituoitujen bentseenisulfonihappojen, esim. metaanisulfoni-, trifluorimetaanisulfoni- tai p-toluee-nisulfonihapon kanssa. Tällaisia estereitä ovat mm. alempi-alkyylihalogenidit, dialempialkyylisulfaatit, kuten dimetyy-lisulfaatti, edelleen fluorisulfonihappoesterit, kuten -alem-pialkyyliesterit, esim. fluorisulfonihappometyyliesteri, tai mahdollisesti halogeeni-substituoidut metaanisulfoni-alempi-alkyyliesterit, esim. trifluorimetaanisulfonihappometyylies-teri. Niitä käytetään tavanomaisesti inertin liuottimen, kuten mahdollisesti halogenoidun, kuten klooratun alifaatti-sen, sykloalifaattisen tai aromaattisen hiilivedyn, esim. metyleenikloridin, eetterin, kuten dioksaanin tai tetrahyd-rofuraanin tai näiden seoksen läsnäollessa. Tällöin käytetään mieluummin sopivia kondensointiaineita, kuten alkalime-tallikarbonaatteja tai -vetykarbonaatteja, esim. natrium-tai kaliumkarbonaattia tai -vetykarbonaattia (tavanomaisesti yhdessä sulfaatin kanssa) tai orgaanisia emäksiä, kuten tavanomaisesti steeerisesti estyneitä trialempialkyyliamiine-ja, esim. N,N-di-isopropyyli-N-etyyli-amiinia (mieluummin yhdessä halogeenisulfonihappo-alempialkyyliestereiden tai mahdollisesti halogeenisubsituoitujen metaanisulfonihappo-alempialkyyliestereiden kanssa), jolloin työskennellään jäähdyttäen, huoneenlämpötilassa tai lämmittäen, esim. noin -20* - noin 50eC:n lämpötiloissa ja tarvittaessa suljetussa astiassa ja/tai inertin kaasun, esim. typen atmosfäärissä.

Muita aineita ovat vastaavat trisubstituoidut oksonium-suolat (niin kutsutut Meerwein-suolat) tai disubstituoidut karbenium- tai halonium-suolat, joissa substituentit ovat eetteröiviä tähteitä, esimerkiksi trialempialkyylioksonium-suolat, sekä dialempialkoksikarbenium- tai dialempialkyyli-haloniumsuolat, etenkin vastaavat suolat, jotka on muodostettu kompleksien, fluoripitoisten happojen kanssa, kuten vastaavat tetrafluoriboraatit, heksafluorifosfaatit, hek-safluoriantimonaatit tai heksaklooriantimonaatit. Tällaisia reagensseja ovat esim. trimetyylioksonium- tai trietyyliok- 32 78300 sonium-heksafluoriantimonaatti, -heksaklooriantimonaatti, -heksafluorifosfaatti tai -tetrafluoriboraatti, dimetoksi-karbeniumheksafluorifosfaatti tai dimetyylibromoniumheksa-fluoriantimonaatti. Näitä aineita käytetään mieluummin iner-tissä liuottimessa, kuten eetterissä tai halogenoidussa hiilivedyssä, esim. dietyylieetterissä, tetrahydrofuraanissa tai metyleenikloridissa tai niiden seoksessa, tarvittaessa emäksen, kuten orgaanisen emäksen, esim. mieluummin steeri-sesti estyneen trialempialkyyliamiinin, esim. N,N-di-isopro-pyyli-N-etyyli-amiinin läsnäollessa ja jäähdyttäen, huoneen lämpötilassa tai hieman lämmittäen, esim. noin -20° - noin 50®C:ssa, tarvittaessa suljetussa astiassa ja/tai inertin kaasun, esim. typen atmosfäärissä.

Vapaan karboksyylin muunto kaavan (I) mukaisessa yhdisteessä esteröidyksi karboksyyliksi voi tapahtua edelleen esimerkiksi siten, että kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa muut, mahdollisesti esiintyvät funktionaaliset ryhmät esiintyvät mahdollisesti suojatussa muodossa, tai sen reaktiokyky inen funktionaalinen karboksijohdannainen, mukaanlukien sen suola, saatetaan reagoimaan vastaavan alkoholin kanssa, esim. vastaavalla tavalla kuin esimerkissä a on esitetty.

Yllä esitetyt menetelmät, mukaanlukien menetelmät suo-jaryhmien lohkaisemiseksi ja ylimääräiset menetelmävaiheet suoritetaan sinänsä tunnetulla tavalla, esim. liuottimien tai laimentimien läsnäollessa tai ilman näitä, tarvittaessa kondensaatioaineiden tai katalysaattoreiden läsnäollessa, alennetussa tai korotetussa lämpötilassa, esim. noin -20° -noin 150eC:n lämpötila-alueella, suljetussa astiassa ja/tai inertin kaasun, esim. typen atmosfäärissä.

Tällöin on käytettävä ottamalla huomioon kaikki molekyylissä olevat substituentit, tarvittaessa, esim. helposti hydrolysoitavien tähteiden läsnäollessa, erittäin mietoja reaktio-olosuhteita, kuten lyhyitä reaktioaikoja, mietoja happamia tai emäksisiä aineita alhaisissa konsentraatioissa, stö-kiometrisiä määräsuhteita, sopivia katalysaattoreita, liuottimia, lämpötila- ja/tai paineolosuhteita.

33 78 300

Keksinnön kohteena ovat myös menetelmän ne sovellutus-muodot, joissa lähtöaine käytetään reaktiokykyisen johdannaisen tai suolan muodossa. Tällöin lähdetään mieluummin sellaisista lähtöaineista, jotka johtavat menetelmän mukaisesti yllä erittäin arvokkaiksi esitettyihin yhdisteisiin.

Isomeerien seokset voidaan erottaa sinänsä tunnetulla tavalla, esim. jakokiteytyksen, kromatografian jne. avulla yksittäisiksi isomeereiksi, rasemaatit esim. muodostamalla johdannaisia optisesti aktiivisten yhdisteiden kanssa ja erottamalla näin saadut diastereomeeriseokset optisesti aktiivisiksi antipodeiksi.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää farmaseuttisten valmisteiden muodossa, jotka sisältävät virusinfektioiden profylaksiaan tai terapiaan tehokkaan määrän aktiivista ainetta, mahdollisesti yhdessä farmaseuttisesti sopivien kantoaineiden kanssa, jotka soveltuvat tooppiseen, esim. intranasaaliseen, enteraaliseen, esim. oraaliseen tai rek-taaliseen, tai parenteraaliseen käyttöön, ja jotka voivat olla epäorgaanisia tai orgaanisia, kiinteitä tai nestemäisiä. Näin käytetään tabletteja tai gelatiinikapseleita, jotka sisältävät vaikuttavan aineen yhdessä laimentimien, esim. laktoosin, dekstroosin, sakkaroosin, mannitolin, sorbitolin, selluloosan ja/tai glyseriinin ja/ tai voiteluaineiden, esim. piimään, talkin, steariinihapon tai sen suolojen, kuten magnesium- tai kalsiumstearaatin ja/tai polyeteeniglykolin kanssa. Tabletit voivat sisältää samoin sideaineita, esim. mag-nesiumaluminiumsilikaattia, tärkkelyksiä, kuten maissi-, vehnä- tai riisitärkkelystä, gelatiinia, metyyliselluloosaa, natriumkarboksimetyyliselluloosaa ja/tai polyvinyylipyrroli-donia ja haluttaessa hajotusaineita, esim. tärkkelyksiä, agaria, algiinihappoa tai sen suolaa, esim. natriumalginaat-tia ja/tai kuohuseoksia, tai adsorptioaineita, väriaineita, makuaineita ja makeuttimia. Edelleen esillä olevan keksinnön mukaisia farmakologisesti vaikuttavia yhdisteitä voidaan käyttää parenteraalisesti annettavien valmisteiden tai in-fuusioliuosten muodossa. Tällaiset liuokset ovat mieluummin 34 78300 isotonisia vesipitoisia liuoksia tai suspensioita, jolloin nämä esim. lyofilisoitujen valmisteiden ollessa kyseessä, jotka sisältävät vaikuttavan aineen yksinään tai yhdessä kantoaineen, esim. manniitin kanssa, voidaan valmistaa ennen käyttöä. Farmaseuttiset valmisteet voivat olla steriloituja ja/tai ne voivat sisältää apuaineita, esim. säilöntä-, stabilointi-, kostutus- ja/tai emulgointiaineita, liukoiseksi tekeviä aineita, suoloja osmoottisen paineen säätämiseksi ja/tai puskureita. Esillä olevat farmaseuttiset valmisteet, jotka voivat haluttaessa sisältää muita farmakologisesti vaikuttavia aineita, kuten antibiootteja, valmistetaan sinänsä tunnetulla tavalla, esim. tavanomaisten sekoitus-, granulointi-, rakeistus-, liuotus-tai lyofilisointimenetel-mien avulla ja ne sisältävät noin 0,001 - 99 %, etenkin noin 0,01 - noin 10 %, ensisijassa 0,1-5 % aktiivista aineosaa tai aktiivisia aineosia, jolloin vaikuttavan aineen alle 1 %:n konsentraatio soveltuu etenkin tooppisesti käytettyihin valmisteisiin.

Tooppisesti käytettävinä käyttömuotoina ovat etenkin seuraavat: voiteet, salvat tai tahnat, joiden vaikuttavan aineen pitoisuus on 0,001 - 1 %, etenkin 0,01 - 0,1 %, esim. 0,05 %, esim. salvat, jotka on tarkoitettu intranasaaliseen käyttöön tai huulipuikkoina, tai vesipitoiset liuokset, joiden vaikuttavan aineen pitoisuus on 0,001 - 1 %, etenkin 0,05 - 0,5 %, esim. 0,1 %, mieluimmin isotoniset steriilit ja fysiologisesti sopivat liuokset, esim. silmätipat, mieluimmin mikrosäiliöissä ainutkertaista käyttöä varten, tai sprayt, jotka on tarkoitettu suun ja nielun alueella tapahtuvaan käyttöön.

Etenkin sopivia ovat esimerkeissä esitetyt farmaseuttiset valmisteet.

Voiteet ovat öljy-vesi-emulsioita, jotka sisältävät yli 50 % vettä. Öljyisenä perustana käytetään ensisijassa rasva-alkoholeja, esim. lauryyli-, setyyli- tai stearyylialkoholia, rasvahappoja, esim. palmitiini- tai steariinihappoa, nestemäisiä. ...kiinteitä vahoja, esim. isopropyylimyristaattia, 35 78 30 0 villavahaa tai mehiläisvahaa ja/tai hiilivetyjä, esim. vaseliinia (Petrolatum) tai parafiiniöljyä. Emulgaattoreina tulevat kysymykseen pinta-aktiiviset aineet, joilla on pääasiassa hydrofiilisiä ominaisuuksia, kuten vastaavat ei-ioniset emulgaattorit, esim. polyalkoholien rasvahappoesterit tai niiden etyleenioksidi-additiotuotteet, kuten polyglyseriini-rasvahappoesterit tai polyoksietyleenisorbitaani-rasvahappo-esterit (Tweens), edelleen polyoksietyleeni-rasva-alkoholi-eetterit tai -rasvahappoesterit, tai vastaavat ioniset emulgaattorit, kuten rasva-alkoholisulfaattien alkalimetallisuo-lat, esim. natriumlauryylisulfaatti, natriumsetyylisulfaatti tai natriumstearyylisulfaatti, joita käytetään tavanomaisesti rasva-alkoholien, esim. setyylialkoholin tai stearyylial-koholin läsnäollessa. Vesifaasin lisäaineita ovat mm. aineet, jotka vähentävät voiteiden kuivumista, esim. polyalkoholit, kuten glyseriini, sorbiitti, propyleeniglykoli ja/tai poly-eteeniglykolit, edelleen säilöntäaineet, hajusteet jne.

Salvat ovat vesi-öljy-emulsioita, jotka sisältävät korkeintaan 70 %, mieluimmin kuitenkin noin 20 - noin 50 % vettä tai vesipitoista faasia. Rasvafaasina tulevat kysymykseen ensisijassa hiilivedyt, esim. vaseliini, parafiiniöljy ja/ tai kovaparafiinit, jotka sisältävät veden sitomiskyvyn parantamiseksi mieluimmin sopivia hydroksiyhdisteitä, kuten rasva-alkoholeja tai niiden estereitä, esim. setyylialkoho-lia tai villavaha-alkoholeja tai vast, villavahaa. Emulgaat-toreita ovat vastaavat lipofiiliset aineet, kuten sorbitaa-ni-rasvahappoesterit (Spans), esim. sorbitaanioleaatti ja/ tai sorbitaani-isostearaatti. Vesifaasin lisäaineita ovat esim. kosteudenpysyttimet, kuten polyalkoholit, esim. glyseriini, propyleeniglykoli, sorbiitti ja/tai polyeteeniglyko-li, ja säilöntäaineet, hajusteet jne.

Rasvasalvat ovat vedettömiä ja ne sisältävät perustana etenkin hiilivetyjä, esim. parafiiniä, vaseliinia ja/tai nestemäisiä parafiinejä, edelleen luonnollisia tai osittain synteettisiä rasvoja, esim. kookosrasvahappotriglyseridiä, tai mieluimmin kovetettuja öljyjä, esim. hydrattua maapäh „ 78300

JO

kinä- tai risiiniöljyä, edelleen glyserolin rasvahappo-osit-taisestereitä, esim. glyserolimono- tai -distearaattia, sekä esim. salvojen yhteydessä mainittuja, veden imeytymistä edistäviä rasva-alkoholeja, emulgaattoreita ja/tai lisäaineita.

Tahnat ovat voiteita ja salvoja, jotka sisältävät eritteitä absorboivia jauheaineosia, kuten metallioksideja, esim. titaanioksidia tai sinkkioksidia, edelleen talkkia ja/tai aluminiumsilikaatteja ja joiden tehtävänä on sitoa esiintyvä kosteus tai eritteet.

vaahdot annetaan painesäiliöistä ja ne ovat aerosoli-muodossa esiintyviä nestemäisiä öljy-vesi-emulsioita, jolloin ponneaineena käytetään halogenoituja hiilivetyjä, kuten kloorifluorialempialkaaneja, esim. diklooridifluorimetaania ja diklooritetrafluorietaania. öljyfaasina käytetään mm. hiilivetyjä, esim. parafiiniöljyä, rasva-alkoholeja, esim. se-tyylialkoholia, rasvahappoestereitä, esim. isopropyylimyris-taattia ja/tai muita vahoja. Emulgaattoreina käytetään mm. etupäässä hydrofiilisiä ominaisuuksia omaavien, kuten poly-oksietyleeni-sorbitaani-rasvahappoestereiden (Tween) ja etupäässä lipofiilisiä ominaisuuksia omaavien, kuten sorbi-taanirasvahappoestereiden (Spans) seoksia. Lisäksi tulevat tavanomaiset lisäaineet, kuten säilöntäaineet jne.

Tinktuuroissa ja liuoksissa on useimmiten vesipitois-etanolinen perusta, johon on lisätty mm. polyalkoholeja, esim. glyseriiniä, glykoleja ja/tai polyeteeniglykolia kosteuden-pysyttimiksi haihtumisen vähentämiseksi ja takaisinrasvoit-tavia aineita, kuten alempien polyeteeniglykolien kanssa muodostettuja rasvahappoestereitä, so. vesipitoisessa seoksessa liukenevia, lipofiilisiä aineita korvaamaan etanolin iholta poistamat rasva-aineet ja tarvittaessa muita apu- ja lisäaineita.

Tooppisesti käytettävien farmaseuttisten valmisteiden valmistus tapahtuu sinänsä tunnetulla tavalla, esim. liuottamalla tai suspendoimalla vaikuttava aine perustaan tai sen osaan tarvittaessa. Käsiteltäessä vaikuttava aine liuoksena se yleensä liuotetaan ennen emulgointia toiseen faaseista; 37 78 30 0 käsiteltäessä se suspensiona se sekoitetaan emulgoinnin jälkeen perustan osan kanssa ja lisätään sitten loppuosaan.

Seuraavat esimerkit havainnollistavat keksintöä rajoittamatta sitä kuitenkaan millään tavoin. Rf-arvot on selvitetty piihappogeeli-ohutkerroslevyillä (firma Merck, Darmstadt, Saksa). Ajoaineiden suhde käytetyissä ajoaineseoksis-sa toisiinsa on esitetty tilavuusosina (V/V), lämpötilat on esitetty Celsius-asteina. Aineen konsentraatio, c, liuotti-messa (liuotinseoksessa) on esitetty optisen kierron yhteydessä prosentteina (paino/tilavuus).

Lyhenteet:

Boc * tert.-butyylioksikarbonyyli Me = metyyli MeOH = metanoli.

Esimerkki 1: 29 g N-Boc-L-tyrosiini-2-(l,2-dipalmito- yyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamidia* 0,67 H20 (osittain natriumsuolan muodossa) liuotetaan seokseen, jossa on 40 ml trifluorietikkahappoa ja 80 ml metyleeniklo-ridia ja annetaan seistä 2,5 tuntia huoneen lämpötilassa. Liuos haihdutetaan tyhjössä kuiviin, jäännöstä hierotaan 3 kertaa jäävedellä, jolloin saadaan väritön suspensio, joka imetään pois. Sakka kiteytetään uudelleen kaksi kertaa etyy-limetyyliketoni-isopropyylialkoholi-vedestä (1:1:1). Saadaan L-tyrosiini-2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksifosfo-ryylioksi)-etyyliamidi värittömien kiteiden muodossa, hajaan-tumispiste 185-200°; [a]20D - +39° (c = 1,007; CHCl3:MeOH: H20 = 80:10:2), Rf = 0,40 (CHCl3:MeOH:H20 = 80:20:2).

Lähtöaine saadaan seuraavasti:

Vaihe 1.1: 2 g:aan 2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3- hydroksifosforyylioksi)-etyyliamiinia (kefaliini), joka on liuotettu 30 ml:aan CHC13:MeOH:H20-seosta (80:20:2), lisätään huoneen lämpötilassa 1,52 g (1,5 ekvivalenttia) N-Boc-L-ty-rosiini-N-hydroksisukkinimidiesteriä ja 0,422 ml trietyyli-amiinia. Pidetään 18 tuntia huoneen lämpötilassa, minkä jälkeen liuotin haihdutetaan tyhjössä kuiviin, jäännös otetaan etikkahappoetyyliesteri-tetrahydrofuraanilla (7:2) ja ravis- 38 78300 teilaan kerran 5 %:isen NaHC03-liuoksen kanssa ja kaksi kertaa kyllästetyn NaCl-liuoksen kanssa. Yhdistetyt vesipitoiset faasit uutetaan kerran etikkahappoetyyliesteri-tetrahyd-rofuraanilla (7:2). Kuivattamisen (Na2S04) ja orgaanisen faasin haihduttamisen jälkeen saadaan raakatuote, joka puhdistetaan kromatografoimalla piihappogeelissä CHCl3:MeOH: H20-seoksella (90:10:0,5). Saadaan N-Boc-L-tyrosiini-2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliami-di‘0,67 H20, joka esiintyy osittain natriumsuolan muodossa; sp. 110-112°, [a]20d = +8° (c = 0,786; metanoli), Rf= 0,64 (CHC13:MeOH:H20 = 80:20:2). Täydellinen muunto natriumsuo-laksi onnistuu esimerkissä 3 esitetyn suodatusmenetelmän mukaisesti .

Esimerkki 2: N-Boc-glysiini-2-(1,2-dipalmitoyyli-sn- glysero- 3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamidi-natriumsuola* 0,87 H20:sta saadaan esimerkin 1 mukaisesti lohkaisemalla trifluorietikkahapolla metyleenikloridissa glysiini-2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi Jetyyliami-di’0,13 H20; sp. 220-227° (haj.), Rf= 0,16 (CHCl3:MeOH:H20 = 80:20:2).

Lähtöaine saadaan seuraavasti:

Vaihe 2.1: 2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksi- fosforyylioksi)-etyyliamiinista ja N-Boc-glysiini-N-hydrok-si-sukkinimidiesteristä saadaan vaiheen l.l mukaisesti N-Boc-glysiini-2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyy-lioksi)-etyyliamidi-natriumsuola*0,87 H20, sp. 60-65°, [a]2l^D = +5,9° (c = 0,945, CHCl3:MeOH = 1:1), Rf= 0,37 (CHCl3:MeOH: H2O=80:20:2).

Esimerkki 3: 4,7 g 2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3- hydroksifosforyylioksi)-etyyliamiini-natriumsuolaa liuotetaan 80 ml:aan kloroformi-metanolia (9:1). Tähän lisätään liuos, jossa on 1,21 g sitruunahappoanhydridiä 16 ml:ssa absoluuttista dimetyyliasetamidia ja tämän jälkeen 1,9 ml tri-etyyliamiinia. Annetaan seistä 2 tunnin ajan huoneen lämpötilassa, minkä jälkeen liuos haihdutetaan 35°:ssa tyhjössä kuiviin, jäännökseen sekoitetaan 20 ml yksinormaalista suo- 39 7 8 3 0 0 lahappoa ja imetään muodostuneet kiteet pois. Tämä toistetaan, kiteet pestään yksinormaalisella suolahapolla, imusuo-dos suspendoidaan 200 ml:aan vettä ja pH säädetään kontrolloimalla elektrodilla arvoon 6,8. Aine menee tällöin täysin liuokseen. Suodatetaan sekoituskennossa ultrasuodat-timen läpi, jossa on sulkurajana 10'000 daltöniä (valmistaja: Amicon Corporation, Danvers, Massachusetts, 01932 USA, malli 402, ultrasuodatin PM 10/76 mm O, inerttejä, ei-ioni-sia polysulfoni-perustaisia polymeerejä, keskimääräinen huokoskoko 10 A), kunnes läpivirtaus on kloridivapaa. Suodattimen päällä oleva liuos, joka sisältää aineen, konsentroidaan 2 baarin paineessa 50 ml:aan ja jäädytyskuivataan. Näin saadaan 3,4-dikarboksi-3-hydroksi-voihappo-[2-(1,2-dipalmitoyy-li-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyli]-amidi-trinat-riumsuola*2 H20 (= sitruunahappo-mono-[2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksiosforyylioksi)-etyyli]-amidi-trinatrium-suola_2 H20) värittömänä tuotteena, sp. 80-82® (haj.); [ot]20d = +8,3" (c = 1,385; vesi), Rf= 0,21 (CHC13:MeOH:fosfaattipuskuri [dinatriumvetyfosfaatti-kaliumdivetyfosfaatti; pH = 7] = 70:30:5).

Esimerkki 4: 30 naaraspuolisen, 14-16 g painavan MF-2f SPF-hiiren ryhmiä, jotka oli kevyesti nukutettu seoksella, jossa oli yhtä suuret osat dietyylieetteriä, etanolia ja kloroformia, infektoitiin letaalisilla annoksilla (noin LD80_9q; 1-4 plaque forming units [PFU]) intranasaalisesti, kulloinkin 0,05 ml:11a influenssa A/Texas/l/77-virussuspensiota (hiiri-adaptoitu kanta).

Kymmenelle näistä hiiristä annetaan alla esitettynä ajankohtana (päiviä), laskettuna infektiopäivästä, kerran (yksi ainoa annos) taulukossa 1 mainittuina määrinä kulloinkin kyseessä olevaa vaikuttavaa ainetta 0,05 tai vast. 0,2 ml:ssa 0,005 paino-%:ista liuosta, jossa on karboksimetyyli-selluloosa-natriumsuolaa kahdesti tislatussa, pyrogeeniva-paassa vedessä, intranasaalisesti tai vast, oraalisesti taulukossa 1 esitetyllä tavalla.

Loput yllä mainituista hiiristä, s.o. 20 toimivat kont- 40 7 8 300 rollina, s.o. ne saavat plaseboa (0,005 paino-%:inen karbok-simetyyliselluloosa-natriumsuolan liuos).

Vaikuttavan aineen intranasaalinen anto suoritetaan kevyessä narkoosissa, joka on aikaansaatu yhtä suuret osat di-etyylieetteriä, etanolia ja kloroformia sisältävällä seoksella.

yhdiste I = glysiini-2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero- 3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamidi · 0,13 H20; yhdiste II = L-tyrosiini-2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksi-fosforyylioksi)-etyyliamidi; yhdiste III = sitruunahappo-mo-no-2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamidi-trinatriumsuola·2 H20; yhdiste IV = L-alaniini- 2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamidi.

Taulukko l: vaikut- Antotapa Käyttö- 23 päivää infektion jälkeen vietävä aika lä elävien hiirien prosenttimää- aine (päiviä) rä suhteessa vaikuttavan aineen määrään (mg/kg), tilastollinen merkitsevyys * P < 0,05 **p < 0,001 (Vierfelder-koe) 10 1 0,1 0,01 0=kont- _rolli I oraalinen +7 70 60 80* 30 intranasaa- _linen_^7_60 80** 60_20 II oraalinen +7 40 70 100** 30 intranasaa- _linen_^7_60 90** 90** 20 III _oraalinen_+7_50 70* 60_20 IV oraalinen +7 90** 90** 90** 30 intranasaa- _linen__100* 80** 50 20

Esimerkki 5: 3,80 g (3,53 mmoolia) Na-bentsyylioksikar-bonyyli-Ne-tert.-butyylioksikarbonyyli-L-lysiini-2-(1,2-di- 4i 7 8 300 palmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)etyyliamidi-trietyyliammoniumsuolaa liuotetaan 15 ml:aan absoluuttista dioksaania ja lohkaistaan, kun se on jäähtynyt 5°:seen lisäämällä 24 ml 33 %:ista jääetikassa olevaa bromivetyhappoa. Muodostuvaa punertavaa suspensiota sekoitetaan 30 minuutin ajan 5e:ssa, sitten se haihdutetaan ja lyofilisoidaan sen jälkeen, kun on lisätty 50 ml absoluuttista dioksaania. Jäännös puhdistetaan kromatografoimalla kaksi kertaa piihappogee-lissä (Merck, tyyppi 60, raekoko 0,063-0,200 mm; 1:130, 5 ml fraktiot) kloroformi-metanoli-vedessä (70:30:5). Puhtaiden fraktioiden haihduttamisen jälkeen jäännös liuotetaan 60 ml: aan kloroformi-metanoli-vettä (70:30:5), steriilisuodatetaan Millipore-suodattimen läpi (valmistaja: Millipore Corporation, Bedford, Massachusetts, 01730 USA, Teflon®, tyyppi FGLP 0,2 ym) ja saatetaan kiteytymään lisäämällä 100 ml absoluuttista dioksaania. Saadaan L-lysiini-2-[1,2-dipalmitoyyli-sn-glyse-ro-3-hydroksifosforyylioksi]-etyyliamidi-monohydrobromidi *0,9 H20 neulamaisten kiteiden muodossa, sp. 210-212®, [a]20D = +2,9® ja [g]2°546nm = +4° (kummassakin tapauksessa c = 0,700; kloroformi:metanoli:vesi = 70:30:5), Rf= 0,35 (kloroformi: metanoli:vesi:etikkahappo = 70:40:10:0,5), Rf= 0,13 (kloroformi :metanoli: vesi = 70:30:5).

Lähtömateriaali saadaan seuraavasti:

Vaihe 5.1: 5,53 g (7,99 mmoolia) 2-(l,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamiinia suspendoi-daan 120 ml:aan kloroformi-metanoli-vettä (70:30:5) ja saatetaan liuokseksi lisäämällä tipoittain 1,23 ml (8,80 mmoolia) trietyyliamiinia. Tähän liuokseen lisätään tipoittain 4,67 g (10,38 mmoolia) Na-bentsyylioksikarbonyyli-Ne-tert. -butyylioksikarbonyyli-L-lysiini-p-nitrofenyyliesteriä, j oka on liuotettu 60 ml:aan dimetyyliformamidia. Sekoitetaan 16 tunnin ajan huoneen lämpötilassa, minkä jälkeen hieman kellertävä suspensio haihdutetaan kuiviin. Amorfinen jäännös eluoidaan piihappogeelillä (Merck, tyyppi 60, raekoko 0,063-0,200 mm; 1:50; 5 ml fraktiot) ensin kloroformilla, sitten kloroformi-metanolilla (9:1) pylväästä ja puhtaat fraktiot 42 78300 kerätään. Saadaan Na-bentsyylioksikarbonyyli-NE:-tert.-butyy-lioksikarbonyyli-L-lysiini-2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero- 3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamidi-trietyyliammoniumsuo-la * H20 värittömänä jauheena; [α]2®ρ = +2,2° ja [a]2°54gnm = +2,7® (kummassakin c = 0,555; kloroformi), Rf= 0,61 (kloroformi rmetanoli:vesi = 70:30:5), Rf= 0,82 (etikkahappoetyy-liesteri:n-butanoli:pyridiini-etikkahappo:vesi = 42:21:21: 6:10).

Esimerkki 6: Ei-veslpitoinen yksittäisannos nasaallseen käyttöön Koostumus: L-alaniini-2-(l,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksi-fosforyylioksi)-etyyliamidia 0,03 mg

Miglyol 812 30,00 mg

Valmistus: 0,03 mg vaikuttavaa ainetta liuotetaan aseptisissa olosuhteissa 29,97 mg:aan Miglyolia.

Tämä liuos täytetään markkinoilta saatavaan kertakäyt-tönenäaplikaattoriin, esim. US-patentin n:o 3 739 951 mukaiseen, joka asetetaan ennen käyttöä ponneainepurkin päälle. Esimerkki 7: Nenätipat

Koostumus: I II

L-alaniini-2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksi-fosforyylioksi)- etyyliamidia 0,15 mg 0,10 mg tiomersaalia 0,02 mg natriummonovetyfosfaatti*2 H20 0,30 mg 0,30 mg natriumdivetyfosfaatti·12 H20 10,10 mg 10,10 mg bentsalkoniumkloridia -- 0,10 mg etyleenidiamiinitetraetikkahappo- dinatriumsuolaa (EDTA) 0,50 mg 0,50 mg natriumkloridia 3,70 mg 4,50 mg demineralisoitua vettä 988,30 mg 987,60 mg pH-arvo: 5,0+0,3 5,0+0,3

jäätymispisteen lasku -0,51°C -0,56°C

43 7 8 3 0 0

Valmistus:

Demineralisoidun veden yllä mainitun määrän osaan liuotetaan sekoittaen natriumdivetyfosfaatti, dinatriumvetyfos-faatti, natriumkloridi, tiomersaali ja EDTA-dinatriumsuola huoneen lämpötilassa.

Tähän liuokseen liuotetaan tämän jälkeen vaikuttava aine ja täydennetään demineralisoidun veden loppuosalla.

Liuos tai osa tai monikertainen määrä suodatetaan kal-vosuodattimen läpi ja täytetään puhdistettuihin säiliöihin. Sopivia säiliöitä ovat esim.

a) lasi- tai muovisäiliöt (ä 5 ml tai 10 ml), joissa on lasinen tai muovinen pipetti ja elastomeerinen pipetti-imu-laite, b) muoviset poimutetut pullot, joissa on nousuputki ja suihkutuspää muovista, c) muoviset yksittäisannossäiliöt (sisältö 2-3 tippaa) tai d) lasi- tai muovipullot, jotka on varustettu muovisella normitetulla pumppuannostelusprayllä (ilman ponnekaasua).

Esimerkki 8; Nenäsalva Koostumus; L-alaniini-2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)- etyyliamidia 0,03 g parafiiniöljyä, sakeaa 20,00 g valkoista vaseliinia 30,00 g villarasvaa, vedetöntä 40,00 g demineralisoitua vettä 19,97 g

Valmistus;

Rasvafaasi, joka koostuu parafiiniöljystä, vaseliinista ja villarasvasta, sulatetaan yhdessä. Vaikuttavan aineen vesipitoinen liuos vaivataan n. 50eC:ssa rasvafaasiin.

^ 78300 44

Esimerkki 9: 1000 tabletin valmistus, -jotka sisältävät 0,5 % vaikuttavaa ainetta Koostumus/1000 tablettia: L-alaniini-2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamidia 0,5 g laktoosia, jauhettua 43,0 g maissitärkkelystä 52,0 g

Pharmacoat 603®:a (hydroksipropyylimetyy-liselluloosaa, joka sisältää 28-30 % me-toksyyliryhmiä ja jota toimittaa Shinetsu Chemical Company, Tokio, Japani) 3,0 g

Aerosil®:iä (kolloidinen piidioksidi, toimittaja Degussa, Frankfurt, Saksan Liittotasavalta) 1,0 g magnesiumstearaattia 0,5 g

Valmistus:

Vaikuttava aine ja 15 g laktoosia sekoitetaan ensin keskenään. Näin saatu esiseos ja 28 g laktoosia ja 47 g maissi-tärkkelystä sekoitetaan keskenään. Näin saadulla seoksella ja Pharmacoatin vesipitoisella liuoksella valmistetaan gra-nulointivalmis massa, joka granuloidaan, kuivataan ja jauhetaan. Tähän sekoitetaan 5 g maissitärkkelystä, Aerosil ja magnesiumstearaatti ja puristetaan 1000 tabletiksi, jotka painavat 100 mg. Puristeet voidaan lakata sinänsä tunnetulla tavalla mahanestettä kestäviksi.

Esimerkki 10: 2 g N-bentsyylioksikarbonyyli-L-asparagii-nihappo-a-bentsyyliesteri-2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamidi-natriumsuolaa liuotetaan kloroformi-metanoli-veteen (60:40:2) ja hydrataan 2 g:n kanssa Pd/BaS04:ia normaalipaineessa. Suodatetaan katalysaattorista ja suodos haihdutetaan tyhjössä kuiviin. Jäännös otetaan 100 ml:aan vettä ja pH saatetaan kyllästetyllä NaHCOj-liuoksella arvoon 7. Näin saatu liuos suodatetaan esimerkin 3 mukaisesti Amicon-kennossa, tyyppi 402, ultrasuodattimen 45 7 8 3 0 0

Diaflo® PM10 läpi 2 baarin N2-paineessa ja suodatuksen su-pernatantti konsentroidaan suunnilleen 50 ml:aan. Sitten lisätään 300 ml 10 %:ista NaCl-liuosta ja suodatetaan lisäämällä vettä, kunnes suodos on vapaa kloridista. Näin saadaan supernatantin jäädytyskuivatuksen jälkeen L-asparagiinihap-po-6-2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyyliok-si)-etyyliamidi-natriumsuola, joka saadaan puhtaana digeroi-malla lämpimällä dimetoksietaanilla; sp. 197-200® (haj.),

Rf = 0,36, (CHCl3:Me0H:H20 = 60:40:2), Rf= 0,11 (CHCl3:MeOH: H20 * 80:20:2).

Lähtöaine saadaan seuraavasti:

Vaiheen 1.1 mukaisesti saatetaan dipalmitoyylikefalii-ni reagoimaan N-bentsyylioksikarbonyyli-asparagiinihappo-a-bentsyyliesterin 8-N-hydroksisukkinimidiesterin kanssa. Suoritetaan loppuvaiheet esimerkin 3 mukaisesti ja kromatogra-foidaan piihappogeelissä CHC13 - MeOH:ssa (9:1), jolloin saadaan N-bentsyylioksikarbonyyli-L-asparagiinihappo-a-bent-syyliesteri-2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksifosfo-ryylioksi)-etyyliamidi-natriumsuola, joka sisältää vielä hieman N-bentsyylioksikarbonyyli-asparagiinihappo-a-bentsyyli-esteriä ja joka voidaan käyttää suoraan hydraukseen; Rf = 0,54 (CHCl3:Me0H:H20 = 80:20:2).

Esimerkki li: Hydraamalla katalyyttisesti esimerkin 10 mukaisesti saadaan N-bentsyylioksikarbonyyli-L-asparagiini-a-2-(1,2-dilauroyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamidi-natriumsuolasta L-asparagiini-a-2-(l,2-dilauro-yyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamidi.

Lähtöaine saadaan vaiheen 1.1 mukaisesti N-bentsyyli-oksikarbonyyli-asparagiini-N*-hydroksisukkinimidiesteristä ja dilauroyylikefaliinista ja suorittamalla loppuvaiheet esimerkin 3 mukaisesti.

Esimerkki 12: N-Boc-D-alaniini-2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamiidi-natriumsuolas-ta saadaan esimerkin 1 mukaisesti D-alaniini-2-(1,2-dipalmi-toyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamidi hyd-raattina; Rf = 0,61 (CHC13:Me0H:H20 = 70:30:5), Rf = 0,53 46 ?8300 (CHCl3:MeOH:etikkahappo:H20 = 75:27:0,5:5), [a]20D =-14,1° + 1,2° (C = 0,836; CHCl3:Me0H:H20 = 70:30:2).

Lähtöaine saadaan vaiheen 1.1 ja esimerkin 3 mukaisesti dipalmitoyylikefaliinista ja N-Boc-D-alaniini-N-hydroksi-sukkinimidiesteristä natriumsuolana; Rf = 0,5 (CHCl 3: MeOH: H20 = 80:20:2).

Esimerkki 13: N-bentsyylioksikarbonyyli-N,0-metyleeni-L-asparagiinihappo-S-2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hyd-roksifosforyylioksi)-etyyliamidi-trietyyliammoniumsuolan käsittely seoksella, joka koostuu 9 tilavuusosasta jääetikassa olevaa 3 N HBr:a ja 1 tilavuusosasta kloroformia, huoneen lämpötilassa 3 tunnin ajan johtaa bentsyylioksikarbonyyli-ryhmän lohkaisuun. Laimennetaan dimetoksietaanilla, saatetaan pH NaHC03-liuoksella arvoon 7 ja laimennetaan 1 tila-vuusosalla vettä. Etsitty yhdiste saostuu, se imetään pois ja hierretään kaksi kertaa veden kanssa huoneen lämpötilassa ja kolme kertaa etanolin kanssa 50°C:ssa, jäähdytetään huoneen lämpötilaan ja imetään pois. Näin saadaan Ν,Ο-metylee-ni-D,L-asparagiinihappo-B-2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero- 3-hydroksifosforyylioksi)etyyliamidi [= 2-(1,3-oksatsolidin- 5-on-4-yyli)-etikkahappo-2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamidi] hydraattina; sp. 174-179 *, Rf = 0,43 (CHCl3:MeOH:H20 = 70:30:3).

Lähtöaine saadaan seuraavasti:

Valhe 13.1: 6,3 g N-bentsyylioksikarboyyli-N,0-metylee-ni-L-asparagiinihappoa (oksatsolidinoni-johdannaista), 3,6 g N-hydroksibentstriatsolia ja 5 g N,N'-disykloheksyylikarbo-di-imidiä liuotetaan 90 ml:aan kloroformia ja sekoitetaan 1,5 tunnin ajan huoneen lämpötilassa. N,N'-disykloheksyyli-virtsa-aine saostuu ja muodostuneeseen suspensioon lisätään esimerkin l.l mukaisesti liuos, jossa on 12 g dipalmitoyyli-kefaliiniä ja 5 ml trietyyliamiinia 400 ml:ssa kloroformi: isopropyylialkoholi:vesi-seosta (70:30:0,3). Tunnin kuluttua reaktio on päättynyt. Työskennellään esimerkin 3 mukaisesti ja saadaan N-bentsyylioksikarbonyyli-N,0-metyleeni-D,L-aspa-ragiinihappo-8-2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksi- 47 7 8 3 0 0 fosforyylioksijetyyliamidi-natriumsuola värittömänä, kiteisenä hydraattina; sp. 94-98°, Rf = 0,45 (CHC13:MeOH:H20 = 80:20:2).

Esimerkki 14: Esimerkin 1 mukaisesti saadaan Na,Nim-di-Boc-L-histidiini-2-(l,2-didekanoyyli-sn-glysero-3-hydroksi-fosforyylioksi)-etyyliamidi-natriumsuolasta trifluorietikka-hapon kanssa metyleenikloridissa ja esimerkin 3 mukaisten loppuvaiheiden jälkeen L-histidiini-2-(1,2-didekanoyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamidi hydraattina.

Lähtöaine saadaan vaiheen 1.1 ja esimerkin 3 mukaisesti Na-N^-di-Boc-L-histidiini-N-hydroksisukkinimidiesteristä ja 2-(1,2-didekanoyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamiinista.

Esimerkki 15: Liuokseen, jossa on 9,69 g (0,01 moolia) N-Boc-L-tyrosiini-2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-metoksi-fosforyylioksi)-etyyliamidia 100 ml:ssa asetonia, lisätään 3,47 g (0,04 moolia) litiumbromidia (purum, Fluka) ja kuumennetaan 3 tunnin ajan sekoittaen ja palautusjäähdyttäen.

Jäähauteessa jäähtymisen jälkeen saostunut tuote imetään pois ja pestään kylmällä asetonilla.

Saadaan N-Boc-L-tyrosiini-2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-gly-sero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamidi-litiumsuola värittömänä jauheena, joka sisältää vielä 0,7 moolia vettä; Rf = 0,68 (kloroformi:metanoli:vesi = 80:20:2).

Lähtöaine saadaan seuraavasti:

Esimerkin 1 mukaisesti saadaan 7,06 g:sta (0,01 moolia) 2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-metoksifosforyylioksi)-etyyliamiinia (kefaliinimetyyliesteri) ja 5,46 g:sta (1,5 ekvivalenttia) N-Boc-L-tyrosiini-N-hydroksi-sukkinimidieste-riä N-Boc-L-tyrosiini-2-(l,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-me-toksi-fosforyylioksi)-etyyliamidia; Rf = 0,85 (kloroformi: metanoli:vesi = 80:20:2).

Esimerkki 16: Fosforihappo-[2-(N-Boc-L-tyrosyyliamido)-etyyli]-monoesteri-natriumsuolasta saadaan tunnetulla tavalla [H.-J. Riiger, P. Kertscher ja P. Nuhn, Pharmazie 21/ 287 (1979); R. Aneja, J.S. Chadha ja A.P. Davies, Tetrahedron 48 78 30 0

Letters £8, 4183 (1969)] saattamalla reagoimaan 1,2-dipalmi-toyyli-sn-glyserolin kanssa absoluuttisessa pyridiinissä 2,4,6-tri-isopropyylibentseenisulfonihappokloridin (TPS) läsnäollessa, joka toimii kondensointiaineena, N-Boc-L-tyro-siini-2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksi-fosforyyli-oksi)-etyyliamidi-natriumsuola; sp. 110-112®, Rf = 0,64 (CHCl3:Me0H:H20 = 80:20:2).

Esimerkki 17: N-Boc-L-tyrosiini-2-(1,2-dipalmitoyyli- sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamidi-natrium-suolasta (4,27 mmoolia) saadaan lohkaisemalla fosfolipaasi A2:lla (0,1 mg; sian munuaisista; Boehringer, Mannheim, Saksa) 50®:ssa ja pH-arvosssa 8 kalsiumkloridi-dihydraatin (5,26 mmoolia) läsnäollessa hyvin sekoitetussa seoksessa, jossa on 369 ml vettä ja 3 31 ml di-isopropyylieetteriä, N-Boc-L-tyrosiini-2-(l-palmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksifosfo-ryylioksi)-etyyliamidi-kalsiumsuola (^½ Ca2+), joka voidaan esteröidä 2-asemassa tunnetulla tavalla muilla rasvahapoilla Steglich-menetelmän mukaisesti [G. Höfle, W. Steglich ja H. Vorbrilggen, Angew. Chem. 9£, 602 (1978); disykloheksyyli- karbodi-imidi/4-dimetyyli-amino-pyridiini].

Esimerkki 18: 0,5 g N-bentsyylioksikarbonyyli-L-gluta-miinihappo-γ-tert.-butyyliesteri-α -2-(1,3-palmitoyyli-glyse-ro-2-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamidi-natriumsuolaa liuotetaan seokseen, jossa on 4 ml trifluorietikkahappoa ja 6 ml metyleenikloridia, ja annetaan seistä 2 tunnin ajan 22®:ssa. Haihdutetaan tyhjössä ja jäännöstä digeroidaan useita kertoja petrolieetteri-dietyylieetterin (2:1) kanssa. Saatu jauhemainen jäännös liuotetaan 10 ml:aan CHC13:MeOH:H20-seosta (75:25:5) ja hydrataan palladium-bariumsulfaatin läsnäollessa. Vedyn imeytymisen jälkeen suodatetaan pois katalysaattori ja suodos haihdutetaan tyhjössä. Digeroidaan jääveden kanssa, jolloin saadaan jauhemainen L-glutamiinihappo-a-2-(1,3-dipalmitoyyli-glysero-2-hydroksifosforyylioksi)-etyyli-amidi .

Lähtöaine saadaan seuraavasti:

Valhe 18.1: Liuokseen, jossa on 2 g 2-(1,3-dipalmitoyy- 49 7 8 3 0 0 li-glysero-2-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamiinia 30 ml:ssa CHC1g-MeOH-H20-seosta (80:20:2), lisätään 22e:ssa 1,3 g N-bentsyylioksikarbonyyli-L-glutamiinihappo-a-i-hydroksibent-sotriatsoliesteri-y-tert.-butyyliesteriä ja 0,42 ml trietyy-liamiinia. Pidetään 17 tunnin ajan 22°:ssa, minkä jälkeen haihdutetaan tyhjössä, jäännös otetaan etikkahappoetyylies-teri-asetoni-seokseen (4:1) ja ravistellaan 5 %:isen natrium-vetykarbonaattiliuoksen kanssa. Faasit erotetaan ja orgaaninen faasi pestään 2 kertaa kyllästetyllä natriumkloridiliuok-sella. Vesipitoiset faasit uutetaan vielä kerran etikkahap-poetyyliesteri-asetoni-seoksella (4:1), orgaaniset faasit kuivataan (natriumsulfaatti) ja haihdutetaan. Jäännös kroma-tografoidaan piihappogeelissä. CHCl3:MeOH:H20-seoksella (85:15:0,5) eluoidut fraktiot sisältävät N-karboksi-L-gluta-miinihappo-Y-tert.-butyyliesteri-a-2-(1,3-dipalmitoyyli-gly-sero-2-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamidin.

Esimerkki 19: Esimerkin 18 mukaisesti N-bentsyylioksi-karbonyyli-L-glutamiinihappo-a-tert.-butyyliesteri-Y-2-(1,3-dilauroyyli-glysero-2-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamidi-natriumsuolassa lohkaistaan suojaryhmät, minkä jälkeen saadaan L-glutamiinihappo-Y-2-(1,3-dilauroyyli-glysero-2-hydrok-sifosforyylioksi)-etyyliamidi.

Lähtöaine valmistetaan vaiheen 18.1 mukaisesti 2-(1,3-dilauroyyli-glysero-2-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamiinista ja N-bentsyylioksikarbonyyli-glutamiinihappo-y-tert.-butyyli-esteri-a-hydroksibentstriatsoliesteristä.

Esimerkki 20: Esimerkin 18 mukaisesti N-bentsyylioksi-karbonyyli-L-glutamiinihappo-Y-metyyliesteri-a-2-(1,2-dipal-mitoyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)etyyliamidi-nat-riumsuolassa hydrataan bentsyylioksikarbonyyli-ryhmä pois ja saadaan L-glutamiinihappo-γ-metyyliesteri-a-2-(1,2-dipalmi-toyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamidi.

Lähtöaine valmistetaan vaiheen 18.1 mukaisesti 2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamiinista ja N-bentsyylioksikarbonyyli-L-glutamiinihappo-a- l-hydroksibentstriatsoliesteri-Y-metyyliesteri.

so 7 8 3 0 0

Esimerkki 21: N-Boc-L-tyrosiini-2-(1-palmitoyylioksi- propyyli-3-oksihydroksifosforyylioksi)-etyyliamidi-natrium-suolasta saadaan lohkaistaessa Boc-ryhmä esimerkin 1 mukaisesti L-tyrosiini-2-(l-palmitoyylioksi-propyyli-3-oksi-hyd-roksifosforyylioksi)-etyyliamidi.

Lähtöaine valmistetaan vaiheen 1.1 mukaisesti 2-(l-pal-mitoyyli-propyyli-3-oksi-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamii-nista ja N-Boc-L-tyrosiini-N-hydroksisukkinimidiesteristä.

Esimerkki 22: Esimerkin 1 mukaisesti saadaan N-Boc-L-seriini-2-(1,2-diheksadekyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyy-lioksi)-etyyliamidi-natriumsuolasta käsittelemällä trifluo-rietikkahapolla L-seriini-2-(1,2-diheksadekyyli-snglysero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamidi.

Lähtöaine valmistetaan seuraavasti:

Valhe 22.1: 2 g Boc-L-seriiniä, 6,6 g 2-(l,2-diheksa-dekyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamiinia ja 1,3 ml trietyyliamiinia liuotetaan 35 ml:aan N,N-dimetyy-liformamidia ja lisätään 2,7 g 1-hydroksibentstriatsolia sekä 0°:ssa 2,3 g N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä. Sekoitetaan 2 tunnin ajan 0e:ssa ja annetaan seistä yön yli huoneen lämpötilassa. Suodatetaan, suodos haihdutetaan tyhjössä ja suoritetaan loppuvaiheet kuten vaiheessa 18.1 etikkahap-poetyyliesteri-asetonilla (4:1). Saadaan N-Boc-L-seriini-2-(1,2-diheksadekyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamidi.

Esimerkki 23: Esimerkin 1 mukaisesti käsiteltäessä N-Boc-L-proliini-2-(1,2-didekanoyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi ) -etyyliamidi-natriumsuola trifluorietikkaha-polla saadaan L-proliini-2-(l,2-didekanoyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamidi.

Lähtöaine saadaan vaiheen 18.1 mukaisesti N-Boc-L-pro-liini-l-hydroksibentstriatsoliesteristä ja 2-(l,2-didekano-yyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamiinista.

Esimerkki 24: 3,1 g:aan (0,005 moolia) O-(1,3-dilauro-yyli-glysero-2-hydroksifosforyyli)-L-seriiniä, joka on 50 ml:ssa kloroformia, lisätään 0,8 ml trietyyliamiinia ja 2,56 51 78300 g (1,9 ekvivalenttia) N-asetyyli-L-leusiini-N'-hydroksisuk-kinimidiesteriä, joka on 10 ml:ssa kloroformia. Pidetään 3 tunnin ajan huoneen lämpötilassa, minkä jälkeen liuotin haihdutetaan tyhjössä ja suoritetaan loppuvaiheet esimerkin 3 mukaisesti. Näin saadaan N-asetyyli-L-leusyyli-O-(1,3-dilau-royyli-glysero-2-hydroksifosforyyli)-L-seriinin natriumsuola värittömänä jauheena.

Esimerkki 25: 3,45 g:aan (0,005 moolia) O-(1,2-diole-yyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyyli)-L-seriiniä, joka on 50 ml:ssa kloroformia, lisätään 1 ml trietyyliamiinia ja 3 g N-Boc-L-leusiini-N-hydroksisukkinimidiesteriä huoneen lämpötilassa. 4 tunnin kuluttua haihdutetaan tyhjössä ja viimeistellään esimerkin 3 mukaisesti N-Boc-L-leusyyli-0-(l,2-dioleyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyyli)-L-seriini.

Tämä yhdiste lohkaistaan esimerkin 1 mukaisesti trifluo-rietikkahapolla metyleenikloridissa L-leusiini-0-(l,2-diole-yyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyyli)-L-seriiniksi.

Esimerkki 26: Suspensioon, jossa on 0,8 g 2-(l,2-dipal-mitoyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamiinia 200 ml:ssa CHCl3:ssa lisätään 22e:ssa 0,5 ml trietyyliamiinia ja 15 minuuttia kestävän sekoittamisen jälkeen 0,23 ml bentsoyylikloridia. Sekoitetaan 2 tunnin ajan 22°:ssa, minkä jälkeen nyt kirkas liuos haihdutetaan pieneen tilavuuteen, lisätään 3,5 ml 2-etyyli-heksaanihappo-natriumsuolan metano-lissa olevaa 3-molaarista liuosta ja haihdutetaan kuiviin. Kromatografoidaan 100 g:ssa piihappogeeliä ja eluoidaan CHCl3-MeOH:lla (7:3). Öljyinen tuote liuotetaan 20 ml:aan asetonia n. 40°:ssa ja jäähdytetään 0e:seen. Tällöin kiteytyy bentsoehappo-(l,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksi- fosforyylioksi)-etyyliamidi-natriumsuola; sp. 60-61°, Rf = 0,68 (CHCl3:MeOH:H20= 60:40:3).

Claims (5)

52 7 8 3 0 0

1 I OH Z tai sen suolan valmistamiseksi, missä kaavassa R1 merkitsee bentsoyyliä, L-tyrosiinin, L-lysiinin, L-asparagiinihapon, L-asparagiinin, L-histidiinin, L-glutamiinihapon, L-seriinin tai L-proliinin asyylitähdettä, jolloin näissä asyylitähteis-sä esiintyvät aminoryhmät voivat olla typessä substituoituja tert.butyylioksikarbonyylillä, bentsyylioksikarbonyylillä tai alempialkanoyylillä, ja esiintyvät karboksyyliryhmät voivat olla esteröityjä alempialkanolilla, tai sitruunahapon asyylitähdettä, T merkitsee ryhmää NH, Y merkitsee substitu-oimatonta tai karboksilla tai alempialkoksikarbonyylillä substituoitua dimetyleeniä, W merkitsee vetyä ja Z merkitsee 1,2-dihydroksietyyli-, 2-hydroksietyyli- tai hydroksimetyy-liryhmää, jossa vähintään yksi hydroksiryhmä on esteröity C^Q_18-alkaanihapolla tai C18-alkeenihapolla, tai W ja Z merkitsevät kumpikin hydroksimetyyliryhmää, joka on esteröity Cio.ie-sikaanihapolla tai C18-alkeenihapolla, tunnettu siitä, että a) kaavan II O W H-T-Y-O-P-O-CH (II) f I OH Z mukainen yhdiste, jossa substituenteilla on yllä mainitut merkitykset, jolloin kaavan II mukaisessa yhdisteessä esiintyvät funktionaaliset ryhmät lukuunottamatta reaktioon osallistuvaa ryhmää esiintyvät tarvittaessa suojatussa muodossa, 53 7 8 3 0 0 tai sen reaktiokykyinen johdannainen saatetaan reagoimaan kaavan lii R1 - OH (III) mukaisen yhdisteen kanssa, jossa tähteellä R1 on yllä mainittu merkitys, jolloin kaavan III mukaisessa yhdisteessä esiintyvät funktionaaliset ryhmät lukuunottamatta reaktioon osallistuvaa ryhmää esiintyvät tarvittaessa suojatussa muodossa, tai sen reaktiokykyisen karboksyylihappojohdannaisen kanssa ja lohkaistaan esiintyvät suojaryhmät, tai b) kaavan IV - -O II rI-T-Y- ο-p- OH (IV) OH - J w mukainen yhdiste, jossa w on 0 tai 1 ja tähteillä R1, T ja Y on yllä mainitut merkitykset, jolloin kaavan IV mukaisessa yhdisteessä esiintyvät funktionaaliset ryhmät lukuunottamatta reaktioon osallistuvaa ryhmää esiintyvät tarvittaessa suojatussa muodossa, tai sen reaktiokykyinen johdannainen saatetaan reagoimaan kaavan V 0 w •Il H- O-P- O-CH (V) 1 i OH Z - -Jm mukaisen yhdisteen kanssa, jossa tähteillä W ja Z on yllä mainitut merkitykset, jolloin kaavan V mukaisessa yhdisteessä esiintyvät funktionaaliset ryhmät lukuunottamatta reaktioon osallistuvaa ryhmää esiintyvät tarvittaessa suojatussa muodossa, ja m on 1, kun kaavan IV mukaisessa yhdisteessä w on 0, tai m on 0, kun w on l, tai kaavan V mukaisen yhdis- 54 7 8 3 0 0 teen reaktiokykyisen johdannaisen kanssa ja lohkaistaan esiintyvät suojaryhmät, tai c) kaavan VI W R1-T-Y-0-P-0-CH (VI) R2-0 Z mukainen yhdiste, jossa R2 merkitsee vetyä tai suojaryhmää ja muilla substituenteilla on yllä mainitut merkitykset, jolloin kaavan VI mukaisessa yhdisteessä esiintyvät funktionaaliset ryhmät lukuunottamatta reaktioon osallistuvaa ryhmää esiintyvät tarvittaessa suojatussa muodossa, tai kaavan VI mukaisen yhdisteen tautomeeri hapetetaan hapetusaineella ja lohkaistaan esiintyvät suojaryhmät, tai d) hydrolysoidaan kaavan VII O W If I R1-T-Y-0-P-0-CH (VII) ' 3 1 RJ Z mukainen yhdiste, jossa R3 merkitsee halogeenia ja muilla substituenteilla on yllä mainitut merkitykset, jolloin kaavan VII mukaisessa yhdisteessä esiintyvät funktionaaliset ryhmät lukuunottamatta reaktioon osallistuvaa ryhmää esiintyvät tarvittaessa suojatussa muodossa, ja lohkaistaan esiintyvät suojaryhmät, tai e) kaavan VIII O W 11 ' R1-T-Y-0-P-0-CH (VIII) II OH Z' II mukainen yhdiste, jossa W merkitsee vetyä ja Z* merkitsee 1,2-dihydroksietyyliä, 2-hydroksietyyliä, hydroksimetyyliä tai 1,2-dihydroksietyyliä, jossa toinen hydroksiryhmistä on 55 7 8 3 0 0 esteröity Cj^Q.^^g-alkaanihapolla tai C18-alkeenihapolla, tai toinen tähteistä W ja Z' merkitsee hydroksimetyyliä ja toinen tähteistä W ja Z1 merkitsee vapaata hydroksimetyyliä tai hydroksimetyyliä, joka on esteröity C1Q_1g-alkaanihapolla tai C18-alkeenihapolla, ja tähteillä R1, T ja Y on yllä mainitut merkitykset, jolloin kaavan VIII mukaisessa yhdisteessä esiintyvät funktionaaliset ryhmät lukuunottamatta reaktioon osallistuvaa ryhmää esiintyvät tarvittaessa suojatussa muodossa, tai sen reaktiokykyinen johdannainen esteröidään C10_18-alkaanihapolla tai C18-alkeenihapolla tai sen reaktiokykyi-sellä johdannaisella ja lohkaistaan esiintyvät suojaryhmät, tai f) kaavan IX

0 W X-Y-O-P-O-CH (XI) 1 · OH Z mukainen yhdiste, jossa X merkitsee nukleofiilistä lähtöryh-mää ja muilla substituenteilla on yllä mainitut merkitykset, jolloin kaavan IX mukaisessa yhdisteessä esiintyvät funktionaaliset ryhmät lukuunottamatta reaktioon osallistuvaa ryhmää esiintyvät tarvittaessa suojatussa muodossa, saatetaan reagoimaan kaavan X R1-T-H (X) mukaisen yhdisteen kanssa, jossa substituenteilla on yllä mainitut merkitykset, jolloin kaavan X mukaisessa yhdisteessä esiintyvät funktionaaliset ryhmät lukuunottamatta reaktioon osallistuvaa ryhmää esiintyvät tarvittaessa suojatussa muodossa, tai sen reaktiokykyisen johdannaisen kanssa ja lohkaistaan esiintyvät suojaryhmät, tai g) kaavan I mukaisessa yhdisteessä, jossa substituenteilla on yllä mainitut merkitykset, jolloin kaavan I mukaisessa yhdisteessä vähintään yhden funktionaalisen ryhmän on 56 78300 oltava suojattu helposti lohkaistavalla ryhmällä, lohkaistaan suojaryhmä(t), tai h) kaavan I mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, jossa w merkitsee vetyä ja Z merkitsee l,2-dihydroksietyyliryhmää, jossa 2-hydroksiryhmä on esteröity C10_18-alkaanihapolla tai Cie-alkeenihapolla, kaavan I mukainen yhdiste, jossa W merkitsee vetyä ja Z merkitsee 1,2-dihydroksietyyliryhmää, jossa molemmat hydroksiryhmät on esteröity C10_18-alkaanihapol-la tai C18-alkeenihapolla, saatetaan reagoimaan 1-hydroksi-ryhmän esteröivän tähteen regioselektiiviseen lohkaisuun sopivan entsyymin kanssa, ja jonkin yllä mainitun menetelmämuunnelman a-h) suorittamisen jälkeen suolan valmistamiseksi tarvittaessa muunnetaan kaavan I mukainen yhdiste suolaksi tai kaavan I mukaisen yhdisteen tai sen suolan muuntamiseksi joksikin toiseksi kaavan I mukaiseksi yhdisteeksi tai sen suolaksi asyloidaan tähteeseen R1 sisältyvä amino- tai hydroksiryhmä tai este-röidään tai amidoidaan tähteeseen R1 tai Y sisältyvä kar-boksyyliryhmä.

1. Menetelmä kaavan I mukaisen farmakologisesti vaikuttavan fosfatidyyliyhdisteen

0 W » I R1-T-Y-0-P-0-CH (I)

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lähtöaineet valitaan niin, että valmistetaan L-tyrosiini-2-(l,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamidi tai sen farmaseuttisesti käyttökelpoinen suola.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lähtöaineet valitaan niin, että valmistetaan sitruunahappo-mono-2-(l,2-dipalmitoyyli-sn-glyse-ro-3-hydroksifosforyylioksi)-etyyliamidi tai sen farmaseuttisesti käyttökelpoinen suola.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lähtöaineet valitaan niin, että valmistetaan L-lysiini-2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hyd-roksifosforyylioksi)-etyyliamidi tai sen farmaseuttisesti käyttökelpoinen suola.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lähtöaineet valitaan niin, että vai- 57 7 8 3 0 0 mistetaan Na-bentsyylioksikarbonyyli-Ne-tert.butyylioksi-karbonyyli-L-lysiini-2-(1,2-dipalmitoyyli-sn-glysero-3-hyd-roksifosforyylioksi)-etyyliamidi tai sen farmaseuttisesti käyttökelpoinen suola.