FI75432C - Komposition, anordning och foerfarande foer bestaemning av en analyt i ett prov. - Google Patents

Komposition, anordning och foerfarande foer bestaemning av en analyt i ett prov. Download PDF

Info

Publication number
FI75432C
FI75432C FI803189A FI803189A FI75432C FI 75432 C FI75432 C FI 75432C FI 803189 A FI803189 A FI 803189A FI 803189 A FI803189 A FI 803189A FI 75432 C FI75432 C FI 75432C
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
analyte
pyridine nucleotide
composition
substrate
enzyme
Prior art date
Application number
FI803189A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI75432B (fi
FI803189L (fi
Inventor
Erma C Cameron
Claude R Gunter
Rodric H White-Stevens
Original Assignee
Miles Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Miles Inc filed Critical Miles Inc
Publication of FI803189L publication Critical patent/FI803189L/fi
Publication of FI75432B publication Critical patent/FI75432B/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI75432C publication Critical patent/FI75432C/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C12Q1/32—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving dehydrogenase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Diaphragms For Electromechanical Transducers (AREA)
  • Burglar Alarm Systems (AREA)
  • Cultivation Of Seaweed (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Analysing Materials By The Use Of Radiation (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Description

75432
Koostumus, väline ja menetelmä analyytin määrittämiseksi näytteestä
Keksintö koskee koostumusta, välinettä ja menetel-5 mää analyytin määrittämiseksi näytteestä.
Keksintö koskee yleisesti diagnostisia testejä ja tarkemmin määriteltyinä sellaisia testejä, jotka soveltuvat biologisten komponenttien, kuten esimerkiksi maitohapon ja ketoaineiden kvalitatiiviseen ja kvantitatii-10 viseen määritykseen ja joissa nämä komponentit muutetaan hapettimeksi, esim. peroksidiksi.
Tunnetaan menetelmä, jossa tetratsoliumyhdistettä ja elektroneja sisältävää välituotetta (esim. fenatsii-nimetosulfaatti tai diaforaasia) käytetään pelkistynees-15 sä muodossa olevan nikotiiniadeniinidinukleotidifosfaatin (NAD(P)H) värjäykseen (C.L. Markert ja F. Möller,
Proc. Nat. Acad. Sei. US 45 (1959) 753, M.U. Tsao, Arch. Biochem. Biophys. 90 (1960) 234, M.M. Dewey ja J.L. Conklin, Proc. Soc. Exp. Biol. and Med. 105 (1960) 492, 20 M.M. Nachlas, S.I. Margulies, J.D. Goldberg ja A.M. Seligman, Anal. Biochem. 1 (1960) 317, A.L. Babson ja G.E. Phillips, Clin. Chim. Acta 12 (1965) 210, R.J. Gay, R.B. McComb ja G.N. Bowers, Clin. Chem. 14 (1968) 740). Tämän menetelmän haittoja ovat kuitenkin fenatsiinimeto-25 sulfaatin herkkyys valolle, värillisen formatsaanituot-teen liukenemattomuus ja diaforaasin liukenemattomuus ja epästabiilisuus.
NAD(P)H:n reagoidessa kuparisulfaatin kanssa vapautuu kupari (I)-ioni, joka sen jälkeen voi muodostaa 30 neokuproiini-kelaattiyhdisteen. Tämä kelaattiyhdiste on värillinen (S. Morgenstern, R. Flor, G. Kessler ja B. Klein, Anal. Biochem. 13 (1965) 149).
Pelkistyneessä muodossa oleva nikotiiniadeniinidinukleotidi (NADH) reagoi 2-oksobutyraatin ja 2,4-di-35 nitrofenyylihydratsiinin kanssa laktaattidehydrogenaa- 2 75432 sin läsnäollessa muodostaen 2,4-dinitrofenyylihydratso-nia (J. King, Practical Clinical Enzymology, D. van Nostrand Co., Ltd, s. 55 (1965), P.G. Cabaud ja F. Wroblewski, Am. J. Clin. Path. 30 (1958) 234). Tämä tuo-5 te on värillinen. Reaktiossa tarvitaan kuitenkin värin muodostukseen kaksi erillistä vaihetta. Lisäksi menetelmän tarkkuus on asetettu kyseenalaiseksi (M.F. Massod, R.J. Franey, M.E. Therrien, P.T. Rideout ja M.T. Babcock, Am. J. Clin. Path. 42 (1964) 623. Hajoittava hydroksy-10 laasi on ensimmäisen kerran todettu vuonna 1961 (Kaufman, Biochim. Biophys. Acta 51 (1961) 619). Ei-stökio- metrisessä hydroksylaasireaktiossa muodostui jokin tuote, joka ei kuitenkaan ollut hydroksyloitunut substraatti. Samoihin aikoihin julkaistiin lukuisia muita esimerk-15 kejä samanlaisesta hajoittavasta hydroksylaasista. Useimpien hajoittavien hydroksylaasien vaikutus ei kuitenkaan ollut täydellinen. Toisin sanoen muodostui jonkin verran hydroksyloitunutta tuotetta ja vetyperoksidia.
Osa voi tiettyjen pseudosubstraattien vaikutuksesta ha-20 jota täydellisesti. Tällöin ei muodostu lainkaan hydroksyloitunutta tuotetta. Esimerkiksi 100-prosenttisesti ha-joittavasta järjestelmästä on salisylaattihydroksylaasi ja bentsoaatti (R.H. White-Stevens ja H. Ramin, J. Biol. Chem. 247 (1972) 2358, R.H. White-Stevens, H. Kamin ja 25 Q.H. Gibson, J. Biol. Chem. 247 (1972) 2371, R.H. White-Stevens, H. Kamin ja G.H. Gibson teoksessa "Oxidation Reduction Enzymes", toim. A. Akeson ja A. Ehrenberg, s. 453, Pergamon Press, Oxford ja New York (1972), R.H. White-Stevens ja H. Kamin. Biochem. and Biophys. Res.
30 Comm. 38 (1970) 882). Muita esimerkkejä täydellisesti tai osittain hajoittavista hydroksylaaseista ovat fe-nyylialaniinihydroksyiaasi (C.B. Storm ja S. Kaufman, Biochem. and Biophys. Res. Comiran. 32 (1968) 788, D.B.
Fisher ja Kaufman, J. Biol. Chem. 248 (1973) 4300), p-35 hydroksibentsoaattihydroksylaasi (T. Spector ja V.
3 75432
Massey, J. Biol. Chem. 247 (1972) 4679, L.G. Howell, T. Spector ja V. Massey, J. Biol. Chem. 247 (1972) 4340, K.G. Howell ja V. Massey, Biochem. and Biophys. Res. Comm. 40 (1970) 887) ja orsinolihydroksylaasi (Y. Ohta, I.J.
5 Higgins ja D.W. Ribbons, J. Biol. Chem. 250 (1975) 3814) .
Kirjallisuudesta tunnetaan ainoastaan yksi julkaisu, jossa hydroksylaasijärjestelmä saatetaan reagoimaan peroksidaasin kanssa. Reaktio suoritettiin, jotta voitaisiin todeta vetyperoksidin muodostuminen eikä tar-10 koituksena ollut minkään reaktioihin osallistuvan komponentin määritys (C. B. Storm ja S. Kaufman, edellä). Pe-roksidaasia käytettiin hydroksylaasireaktioon osallistuvan pelkistyneen kofaktorin hapetukseen. Hydroksyloidun tuotteen määrän muuttuessa todettiin, että vetyperoksi-15 dia oli muodostunut. Tässä reaktiossa ei muodostunut mitään värillistä tuotetta. Kokeen tarkoitus oli osoittaa, että hydroksylaasireaktiossa oli muodostunut jonkin verran vetyperoksidia. Ei löydetty mitään viitteitä siitä, että hajoittavia hydroksylaaseja voitaisiin käyttää jo-20 ko sellaisenaan tai peroksidaasijärjestelmän yhteydessä määritys- tai toteamismenetelmässä.
Keksinnön mukaisella koostumuksella, jossa värin-muodostus suoritetaan lähtien pelkistyneestä pyridiini-nukleotidista, ei ole tunnetuilla menetelmillä esiinty-25 viä haittoja. Eräässä tavanomaisimmista menetelmistä, joissa värinmuodostukseen käytetään NAD(P)H:ta, käytetään tetratsoliumsuolaa ja elektroneja sisältävää välituotetta, esim. fenatsiinimetosulfaattia tai diaforaa-sia. Fenatsiinimetosulfaatti on kuitenkin hyvin herkkä 30 valolle, pelkistynyt värillinen tuote on liukenematon, ja diaforaasi on vaikeasti liukeneva. Nämä ongelmat on pystytty ratkaisemaan esillä olevan keksinnön avulla. Lisäksi keksinnön mukainen menetelmä on hyvin monipuolinen. Indikaattorijärjestelmissä, hajoittavissa hydrok-35 sylaaseissa ja pelkistyneen pyridiininukleotidin muodos- 4 75432 tusmenetelmissä on useita vaihtoehtoja. Täten näytteestä voidaan määrittää jokin analyytti tai tietystä koostumuk-seta voidaan määrittää haluttu komponentti.
Määritysmenetelmän kokonaiskaavio NAD(P):lle on 5 esitetty seuraavassa:
Yhtälö I
Analyytti -^ Pelkistynyt ana lyytti
Pelkistynyt Analyytin kanssa -Hapettunut analyytti + reagoiva komponentti analyytti +
NAD(P)H
Yhtälö II
H+ + NAD (P) H + 02 Haio:Lttaia-NAD(P)+ + H202
Yhtälö III
15 Peroksidaasi H202 + indikaattori--^ 2 H20 + indikaat- H2 (väritön) tori (vä rillinen
Keksinnön mukaisella menetelmällä määritetään näyt- 20 teestä analyytti käyttäen keksinnön mukaista koostumusta, jolle on tunnusomaista, että se sisältää a) analyytin kanssa reagoivan komponentin, joka käsittää pyridiininukleotidin, joka pelkistyy analyytin läsnäollessa, ja ainakin yhden aineosan, joka pystyy 25 reagoimaan välillisesti analyytin kanssa aiheuttaen pyridiininukleotidin pelkistymisen; b) hydroksylaasin, joka voi olla sitoutumattomana, ja valesubstraatin, joka pystyy vapauttamaan hydroksylaa- 30 sin, jolloin hydroksylaasi ja valesubstraatti pelkistyneessä muodossa olevan pyridiininukleotidin läsnäollessa ovat tehokkaita vetyperoksidin muodostajia; c) peroksidatiivisesti aktiivisen aineen; ja 35 d) hydratsoni-indikaattorin, joka sisältää hyd- ratsonin ja kytkentäaineen, joka indikaattori hapettuneessa muodossa ei pelkisty pyridiininukleotidin vaikutuksesta .
5 75432
Pyridiininukleotidi voi olla nikotiiniadeniini-dinukleotidi (NAD) tai nikotiiniadeniinidinukleotidi-fosfaatti (NADP).
Selvyyden vuoksi käytetään tiettyjä ilmaisuja, 5 jolloin nämä ilmaisut koskevat vain havainnollistamiseksi valittuja suoritusmuotoja.
Keksinnön kohteena on siis koostumus, joka joko liuoksessa tai välineessä muodostaa pelkistyneistä py-ridiininukleotideista näkyvän värin. Analyytin kanssa 10 reagoiva komponentti sisältää pyridiininukleotidin, joka analyytin läsnäollessa pelkistyy, ja ainakin yhden komponentin, joka pystyy reagoimaan välillisesti analyytin kanssa aiheuttaen pyridiininukleotidin pelkistymisen (yhtälö I). Pyridiininukleotidi on jo alun pe-15 rin pelkistyneessä muodossa tai pelkistyy ainakin yhden analyytin kanssa reaktiokykyisen komponentin vaikutuksesta, esim. entsyymin vaikutuksesta, joka käyttää py-ridiininukleotidia kofaktorina, ja sen substraatin vaikutuksesta. Tämä pelkistynyt pyridiininukleotidi muo-20 dostaa sitten hajoittajan, esim. hajoittavan hydroksy-laasin ja sen pseudosubstraatin vaikutuksesta hapettavaa ainetta, esim. vetyperoksidia (yhtälö II). Perok-sidatiivisesti aktiivisen aineen, esim. peroksidaasin vaikutuksesta näin muodostunut peroksidi saa indikaat-25 torin muodostamaan värillisen yhdisteen (yhtälö III): Kaikki tähän reaktioon tarvittavat aineet, analyyttiä lukuunottamatta, soveltuvat käytettäväksi liuoksessa tai ne voidaan yhdistää kantajaan, jonka kanssa ne muodostavat keksinnön mukaisen välineen.
30 Yhtälö I
Mitä tahansa entsymaattisia reaktiokomponentte-ja, jotka pystyvät muodostamaan pelkistyneen pyridiininukleotidin tai jotka voidaan yhdistää johonkin muuhun entsymaattiseen järjestelmään muodostamaan pelkistynyt-35 tä pyridiininukleotidia, voidaan käyttää reaktiokykyi- 6 75432 senä aineosana määritettävän aineen kanssa reagoivaan komponenttiin.
Tällöin voidaan joko näiden entsyymien substraatti tai itse entsyymit todeta tai niiden pitoisuus mää-5 rittää tämän menetelmän analyyttina.
Eräässä suoritusmuodossa analyytin kanssa reagoivan komponentin välittömästi tai välillisesti reagoiva aineosa voi olla analyytille spesifinen entsyymi, kun analyytti on tämän entsyymin substraatti, ja se on ana-10 lyytille spesifinen substraatti, kun analyytti on tälle substraatille spesifinen entsyymi. Edullisessa suoritusmuodossa entsyymi on dehydrogenaasi. Esimerkkejä sopivista substraatti/entsyymi-pareista ovat laktaatti/laktaat-tidehydrogenaasi, ^-hydroksibutyraatti/^-hydroksibuty-15 raattidehydrogenaasi, 'X-hydroksibutyraatti/'^L-hydroksibu-tyraattidehydrogenaasi, alkoholi (esim. etanoli)/alko-holidehydrogenaasi, steroidi (esim. kolesteroli)/steroi-didehydrogenaasi ja glukoosi/glukoosidehydrogenaasi. Toisessa edullisessa suoritusmuodossa substraatti/entsyymi-20 pari on 6-hydroksinikotinaatti/p-hydroksibentsoaattihyd-roksylaasi.
Eräässä toisessa suoritusmuodossa analyytin kanssa reagoivan komponentin välittömästi tai välillisesti reagoivat aineosat ovat analyytille spesifinen entsyy-25 mi ja entsyymi, joka on reaktiokykyinen analyytille spesifisen entsyymin ja analyytin välisessä reaktiossa muodostuneen tuotteen kanssa pelkistäen pyridiininukleo-tidin. Eräässä tämän suoritusmuodon mukaisessa esimerkissä analyytille spesifinen entsyymi on lipaasi ja 30 entsyymi, joka pystyy reagoimaan lipaasin ja analyytin reagoidessa muodostuneen tuotteen kanssa pelkistäen pyridiininukleotidin, on glyserolidehydrogenaasi.
Eräässä toisessa tämän suoritusmuodon mukaisessa esimerkissä analyytille spesifinen entsyymi on heksoki-35 naasi ja entsyymi, joka pystyy reagoimaan heksokinaasin 7 75432 ja analyytin reagoidessa muodostuneen tuotteen kanssa pelkistäen pyridiininukleotidin, on glukoosi-6-fosfaat-tihydrogenaasi.
Tämän suoritusmuodon käänteisessä muunnelmassa 5 analyytin kanssa välittömästi tai välillisesti reagoivat aineosat ovat analyytille spesifinen substraatti ja entsyymi, joka pystyy reagoimaan pelkistämällä pyridiininukleotidin analyytille spesifisen substraatin ja analyytin välisessä reaktiossa muodostuneen tuotteen 10 kanssa, eli substraatille spesifinen entsyymi ja substraatti ovat konjugaattipareja, ja siten kumpaakin voidaan nimittää analyytiksi. Mainittu analyytille spesifinen substraatti on esim. triglyseridi, jolloin ana-lyytti on lipaasi, ja entsyymi, joka on reaktiokykyi-15 nen triglyseridin ja analyytin välisessä reaktiossa muodostuneen tuotteen kanssa pelkistäen pyridiininukleotidin, on glyserolidehydrogenaasi.
Näiden esimerkkien mukaisen reaktion kulku, joka esittää dehydrogenaasitestiä tai sen substraattitestiä, 20 on esitetty seuraavassa:
Yleinen kaava
Substraatille 1. Pelkistynyt substraatti + spesifinen (NAD(P) entsyymi (esim.
sopiva dehydro- Hapettunut __ genaasi substraatti b --^ + NAD (P) H, jolloin analyytti on joko substraatti tai substraatille spesifinen entsyymi ja analyytin kanssa reagoivassa komponentissa välillisesti reagoiva aineosa on entsyymi/subs-^ traattiparin konjugaatti.
Erikoisesimerkkejä OH , o i Laktaattide- „
a) CH^-CH-COOH + NAD hydrogenaasi CII^-C-COOH+NADII
Laktaatti --Puruvaatti 8 75432 OH Λ-hydroksivoi- b) CH —CH—CH —COOH + NAD happodehydrogenaasi „
b) CH3 CH CH2 COOH + NAD -^ Ch3_c_CH2COOH+NADH
/’-hydroksi voi happo Asetetikkahappo <--hydroksivoihappo 0 c) CH3-CH2-CH-COOH + NAD dehydrogenaasi^ ^ -ch2-c-cooh+nadh 5 X-hydroksivoihappo \-oksobutyraatti d) CH3-CH2-0H + NAD Alkoholi- dehydrogenaasi „
-CH3-CH + NADH
Etanoli Asetaldehydi 10 e) Steroidi + NAD{P) Sopiva dehydrogenaasi Hapettunut steroi-
------di + NAD (P) H
irv η . , . Kolesteroli- , c f) Kolesteroli + NADP , , , T, , 15 dehydrogenaasi Kolestenom +
- -^ NADPH
Glukoosi- g) Glukoosi + NAD(P) dehydrogenaasi Glukono-t^-laktoni
— - —+ NAD (P) H
i n 2. Analyytti + analyytille spesifinen entsyymi -----—----Tuote
Tuote + välillisesti reagoiva entsyymi + NAD (P) — NAD (P) + muita reaktiotuotteita, 25 jolloin välillisesti reagoiva aineosa käsittää analyytil-le spesifisen entsyymin ja entsyymin, joka pystyy reagoimaan sen reaktiotuotteen kanssa, joka muodostuu analyytille spesifisen entsyymin reagoidessa toisen entsyymin 30 kanssa, aiheuttaen pyridiininukleotidin pelkistymisen.
9 75432
O
If a) R1-C-0-CH2 HO-CH2
q Lipaasi(+) CH-OH
» (analyytille Hn.L
0 CH-O-C-R2+3H2O spesifinen „ "2 R3_c_0-ch2 en.L5.yy-?iL·- 3Rn-c-o- +
Triglyseridi Glyseroli (analyytti) (tuote) Tässä , R2 ja R^ merkitsevät toisistaan riippumatta rasvahappoa, ja Rn on mielivaltaisesti R^, R2 tai R3.
10 HO-CH2 Glyseroli- HO-CH2
CH-OH + NAD ^ C=0 + NADH
1 (välillisesti I
HO-CH2 reagoiva entsyymi) HO-CH2
Glyseroli Dihydroksiasetoni (tuote) 15 b) Glukoosi + ATP Heksokinaasi (analyytti) (analyytille Glukoosi-6-fosfaat-
spesifinen ti + ADP
entsyymi) (tuote) ' Glukoosi-6-fosfaat- 2q tidehydrogenaasi (välillisesti reagoiva entsyymi
Glukoosi-6-fosfaatti + NADP
(tuote) =" Glukono-i-
laktoni-6-fosfaatti + NADPH
25
^Yhtälöt II ja III
Hajoittava hydroksylaasireaktio, joka tapahtuu pelkistyneen pyridiininukleotidin läsnäollessa, kulkee seuraavasti: 3o Hajoittava, esim. hajoittava hydroksylaasi NAD (P) H + C>2 -^ MAD (P) + H202 pelkistynyt ja pseudosubs- , indikaattori traatti | ^ (väritön)
Peroksidaasi
Hapettunut 35 2 H 2 O indikaattori (värillinen) 10 75432 Näitä kahta reaktiota tutkittaessa havaittiin, että hajoittavan hydroksylaasireaktion (II) komponentit eivät häirinneet peroksidaasireaktiota (III) , mutta päinvastaisessa tapauksessa häiriöitä oli.
5 Salisylaattihydroksylaasireaktiossa lisätty NADH vaikutti pelkistäen ja vaalentaen hapettuneessa muodossa olevan o-tolidiini-indikaattorin (värillinen) heti värin muodostuttua. Sen jälkeen peroksidaasireak-tioon alettiin etsiä pelkistyneessä muodossa olevaa 10 indikaattorijärjestelmää, joka ei peroksidaasihapetuk-sen jälkeen pelkistyisi NADH:n vaikutuksesta. Löydettiin useita ei-reversiibelejä indikaattoreita, jotka eivät herkästi pelkistyneet NADH:n vaikutuksesta. Esimerkiksi seuraavaa sidottua irreversiibeliä indikaat-15 toria voitiin käyttää värin muodostukseen: ch3
^ CH - (CK2)3 - NH2 H-N
20 + AA
2 i -UU
ch3 MBTH Primakiini 25 (3-metyyli-2-bentsotiatso- (8-Z_4-amino-l-metyy- lonihydratsoni) libutyyliamino?-6- CH3 nJ/ metoksikinoliini) CH-(CH2)3-NH2
H-N
30
f II N
ch3o
N
tl
N
d 11 75432
Myös muut hydratsonityyppiset sidotut redox-in-dikaattorit soveltuvat keksinnön mukaiseen tarkoitukseen, näitä on kuvattu esimerkiksi US-patentissa 4 119 405. Voidaan käyttää joko yhtä sitovaa ainetta tai useiden 5 sitovien aineiden yhdistelmää.
Analyytin määrittämisessä koostumusta voidaan käyttää liuoksena. Liuottimiksi koostumuksen liuosten valmistukseen soveltuvat vesi, fysiologiset liuokset ja muut liuottimet, joiden soveltuvuus tunnetaan. Koos-10 tumusta käytetään edullisesti analyytin toteamiseen siten, että sitä lisätään näytteeseen, esim. virtsaan, aivo-selkäydinnesteeseen, kudosviljelmien pintaseeru-miin, plasmaan tai täysvereen.
Kun koostumusta käytetään liuosmuodossa, pyri-15 diininukleotidia käytetään edullisesti noin 0,0001-0,01-m pitoisuuksina. Edullinen pitoisuusalue on noin 0,001-0,01-m. Kun dehydrogenaasia käytetään analyytin kanssa reagoivaan komponenttiin, sen pitoisuus on edullisesti noin 0,0003-0,1 mg/ml. Kun lipaasia käytetään 20 analyytin kanssa reagoivaan komponenttiin, sen pitoisuus on edullisesti noin 0,0001-0,1 mg/ml. Kun heksoki-naasia käytetään analyytin kanssa reagoivaan komponenttiin, sen pitoisuus on edullisesti noin 0,0005-0,2 mg/ml. Hajoittavaa hydroksylaasia käytetään noin 25 0,001-0,01 mg/ml:n pitoisuuksina, ja sen pseudosubstraa- -3 -3 tin pitoisuus on noin 0,5 x 10 -30 x 10 -m. Peroksidaasia käy tettäessä sen pitoisuus on edullisesti 0,001-0,1 mg/ml. Indikaattorin edullinen pitoisuus on noin 10-^-10~^-m. Esimerkeissä mainitut entsyymit ja muut reagenssit on 30 hankittu esim. seuraavasta laitoksesta. Research
Products Division, Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Indiana. Hydroksylaasit on valmistettu kirjallisuudessa kuvatulla tavalla.
Keksintö kohdistuu lisäksi välineisiin, jotka 35 sisältävät keksinnön mukaista koostumusta liitettynä I2 754 32 kantajaan. Koostumus voidaan yhdistää kantajaan impregnoimalla ja sen lisäksi myös muilla sopivilla menetelmillä, esim. puristamalla tai ruiskuttamalla. "Kantaja" merkitsee tässä yhteydessä perusmateriaaleja, jotka ei-5 vät liukene tutkittavaan fysiologiseen tai muuhun sen tyyppiseen nesteeseen ja joiden rakenne säilyy vahingoittumattomana kantajan joutuessa kosketukseen tutkittavan nesteen kanssa. Esimerkkejä sopivista kanta-jamateriaaleista ovat paperi, selluloosa, puu, muovi-10 kuitu, lasikuitu, kuitumatto ja kuitukudos, erilaiset orgaaniset polymerisaatit, esim. polypropyleeni ja muut orgaaniset materiaalit, joiden asiantuntija tietää soveltuvan kalvon muodostukseen. Vaihtoehtoisesti kantaja voidaan puristaa tai muotoilla tabletiksi, 15 joka sisältää tavanomaista kantajamateriaalia. Käsittelyn helpottamiseksi kantajaan voidaan sopivalla tavalla kiinnittää liukenematon tukiosa tai kädensi-ja, jotka voivat olla esim. polystyreeniä.
Väline valmistetaan liittämällä keksinnön mukai-20 nen koostumus kantajaan. Koostumuksen ollessa nestemäistä se kuivataan ensin. Laite valmistetaan edullisesti kertaimpregnointimenetelmällä. Impregnointiliuok-seen käytettävien reagenssien pitoisuuden alaraja on noin 0,001-m ja yläraja kyllästetty liuos. Edullisin 25 pyridininukleotidipitoisuus on useimmissa tapauksissa — *3 noin 50 x 10 -m. Impregnointiliuoksen peroksidaasi- pitoisuus on noin 0,015-2 mg/ml. Liuottimiksi impreg-nointiliuosten valmistukseen soveltuvat vesi, fysiologiset liuokset, orgaaniset liuottimet tai näiden 30 liuottimien yhdistelmät.
Välinettä käytetään edullisesti siten, että se kastetaan lyhyeksi ajaksi tutkittavaan näytteeseen tai tutkittava näyte johdetaan muulla tavalla kanta-jamateriaaliin, jolloin analyytin läsnäollessa ta-35 pahtuu silmin havaittava värin muutos. Kantajan tila- 13 754 32 vuus rajoittaa sen absorboiman ja siihen liitetyn koostumuksen kanssa kosketukseen johtuvan näytteen määrää. Ylimäärä näytettä voidaan poistaa huuhtelemalla tai kuivaamalla kantajamateriaali, jolloin tutkittava näy-5 temäärä rajoittuu kantajämässään absorboituneeseen todelliseen näytetilavuuteen. Välinettä voidaan käyttää samalla tavalla riippumatta siitä, onko näyte plasma, seerumia tai muuta kehon nestettä.
Keksinnön mukaisia välineitä, joissa on eri ta-10 voin käsitelty kantajamateriaali, joudutaan usein säilyttämään pitkiäkin aikoja ennen käyttöä. Sen tähden on tarkoituksenmukaista, että käytetyt reagenssit eivät ilmassa helposti hapetu itsestään. On suositeltavaa suojata välineitä valolta ja tietyissä tapauk-15 sissa on tarkoituksenmukaista säilyttää niitä tiiviisti kosteudelta suojatuissa pakkauksissa, jotka avataan vasta vähän ennen käyttöä.
Näytteessä olevan analyytin reagoidessa muodostuneen reaktiotuotteen heijastuskyky voidaan mitata 20 tavallisilla kaupallisesti saatavilla spektrofotomet-reillä, esim. Beckman-DK-2-spektrofotometrillä (Beckman Instruments, Inc. Fullerton, California) tai spektro-kolorimetrillä SCF-1 (Israel Elektro-Optival Industries Ltd, maahantuoja USA:ssa Broomer Research Corporation, 25 Plainwell, Long Island, N.Y.).
Esimerkit 2 ja 3 havainnollistavat keksinnön edullisia suoritusmuotoja.
Esimerkki 1 Tämä esimerkki kohdistuu kokeisiin, jotka suo-30 ritettiin neljällä koostumuksella, joista kukin sisälsi eri indikaattoria. Seuraavat neljä eri indikaattoria testattiin: 1) o-tolidiini, 2) MBTH + N,N-dimetyyliani-liini, 3) MBTH + kromotrooppihappo ja 4) MBTH + prima-kiini.
14 75432
Reagenssit valmistettiin liuokseen, jossa komponenttien pitoisuudet (o-tolidiinitestiä lukuunottamatta) olivat seuraavat: 0,31-m sitraattia (pH 7,59) 0,03-m natriumbentsoaattia, 0,001-m EDTA, 0,000147-m NADH,
5 0,005 mg/ml piparjuuriperoksidaasia ja 0,0001-m MBTH
ja kutakin sen sitojaa. o-tolidiinitestiin käytettiin 0,0001275-m o-tolidiinia, ja sitraattipuskurin tilalla käytettiin 0,02-m kaliumfosfaattia (pH 7,6). Muuten käytettiin samoja yhdisteitä kuin kolmeen edellä mai-10 nittuun koostumukseen, jotka sisälsivät MBTHrta ja sen sitojaa. Reaktio suoritettiin lisäämällä reagenssiin salisylaattihydroksylaasia 1,17 |ig/ml:n pitoisuuteen saakka. Reaktiot suoritettiin huoneen lämpötilassa laboratoriossa, ja reaktiossa muodostuneen värin kehit-15 tymisnopeus mitattiin spektrofotomerillä "Gilford 2000". Värin voimakkuus mitattiin kullakin indikaattorilla käyttäen aallonpituutta, joka oli havaittu kullekin yhdisteelle optimaaliseksi.
Yllä mainituista reaktioista saadut tulokset on 20 esitetty seuraavassa:
Pelkistyneessä muodossa Värinkehittymisnopeus oleva indikaattori_ __
Aallonpituus AOD/min o-tolidiini 411 0,0000 MBTH + N,N-dimetyylianiliini 585 0,0112 7 5 MBTH + kromotrooppihappo 565 0,186 MBTH + primakiini 510 0,266
Tulokset osoittavat, että koostumukset, jotka sisälsivät MBTH:ta ja primakiinia indikaattorina, muo-30 dostivat värillisen yhdisteen NADH:sta, kun sen sijaan o-tolidiinia sisältävä koostumus ei kehittänyt väriä.
Esimerkki 2
Maitohapon määritys
Diabeetikoilla on erikoisen suuri riski maito-35 happomyrkytyksen kehittymiseen. Tämä taipumus kasvaa 15 754 32 käytettäessä hypoglymemialääkettä "fenformiinia". Tilanteen arvioimiseksi tarvitaan maitohappotestiä. Tässä kuvatussa kokeessa laktaatin annettiin reagoida keksinnön mukaisesti liuoksen muodossa tai välineessä olevien 5 koostumusten kanssa, joilla oli seuraava koostumus:
Koostumus Välineen
Ensimmäinen kosketuskerta Liuotintesti impregnointiliuos Pyrofosfaattipuskuri, 0,05 0,05 pH 8,0 Mol 10 EDTA, mMol 1,0 1,0
Natriumbentsoaatti mMol 30 30 NAD, mMol 5,25 52,5
Peroksidaasi, mg/ml 0,005 0,5
Polyvinyylipyrroli- 15 doni, mg/ml - 6,4
Salisylaattihydrok- sylaasi, mg/ml 0,0117 1,17
Laktaattidehydro- genaasi, mg/ml 0,0017 0,017 20
Toinen kosketuskerta MBTH.HC1, mMol 0,1 10
Primakiinidifosfaatti (PDP), mM 0,1 10 25 Bentseeni liuotin liuotin Käytettäessä, testiliuoksia molemmat koostumukset lisättiin kyvettiin, johon lisättiin myös laktaatin vesiliuos (pitoisuudet ilmoitettu myöhemmin), ja reak-30 tion edistymistä seurattiin mittaamalla spektrofoto-metrillä ekstinktion kasvu 510 nm:n kohdalta.
Välineet valmistettiin kyllästämällä erillisiä suodatinpaperilevyjä ("Eaton-Dikeman 205", Eaton-Dikeman, Mount Holly Springs, Pa.) yllä mainituilla impregnointi-35 liuoksilla. Impregnoinnin jälkeen levyjä pidettiin ta- 16 75432 vanomaisessa laboratorion lämpökaapissa 60°C:ssa, kunnes ne olivat kuivuneet. Nämä paperilevyt, jotka sisälsivät impregnointiliuoksen kuivuneen jäännöksen, leikattiin sitten neliöiksi, joiden sivun pituus oli 5 2,5 mm. Testilevyyn kiinnitettiin sitten kaksipuolinen liimanauha, ja tämän avulla levy kiinnitettiin muovi-alustaan. Värin muodostamiseksi laktaattien vesiliuoksia (pitoisuudet ilmoitettu myöhemmin) pipetoitiin välineisiin. Värin kehittymistä seurattiin paljain sil-10 min tai heijastusspektrofotomerillä.
Sekä testiliuoksessa että välineessä määritettiin laktaattipitoisuuksia, jotka vastasivat veren fysiologisia laktaattipitoisuuksia (0,0006-0,006-m). Liuosmuotoa käytettäessä pitoisuudet määritettiin vä-15 rinkehittymisnopeuden perusteella. Värinkehittymisno-peus ilmaistiin optisen tiheyden muutoksena minuutissa (Δ OD/min). Mitä enemmän laktaatti liuoksessa oli, sitä nopeammin väri kehittyi. Käytettäessä välineitä pitoisuudet määritettiin minuutissa havaitun prosen-20 tuaalisen heijastusasteen muutoksen perusteella. Mitä enemmän laktaattia välineessä oli, sitä enemmän väriä minuutissa muodostui.
Laktaatti reagoi seuraavalla tavalla näissä tes- tiolosuhteissa käytettäessä liuoksia ja välineitä.
25 Liuos Laktaatti- Värinkehittymisnopeus pitoisuus, ( AOD/Min. 510 nm:ssä) mM__ 7,75 0,576 2,58 0,395 0,65 0,148 30 0 0,0116 Väline Laktaatti Heijastusasteen muutos-% pitoisuus, mM yhdessä minuutissa 520 nm;ssä____ 77,5 19,2 35 7,75 29,1 0,775 40,2 0 54,9 17 754 32
Testitulokset sekä liuosta että välinettä käytettäessä osoittavat, että keksinnön mukaisella koostumuksella maitohappo pystytään kvantitatiivisesti määrittämään sekä liuoksessa että välineessä.
5 Esimerkki 3
Ketoaineiden määritys /'’-hydroksivoihappo muodostaa noin 80 % kaikista virtsassa esiintyvistä ketoaineista. Tällä hetkellä virtsan ketoaineiden määritykseen käytettävät testit 10 määrittävät ainoastaan asetetikkahapon, joka muodostaa vain noin 20 % virtsan ketoaineista. Sen tähden f-hyd-roksivoihappotesti olisi arvokas ketoainetesti.
i'-hydroksivoihaposta muodostettiin keksinnön mukaisesti liuoksessa tai välineessä värillinen yh-15 diste. Testiliuoksessa ja esimerkin 2 mukaisesti valmistetuissa välineissä käytetyt pitoisuudet olivat samat kuin esimerkin 2 mukaisessa laktaattimäärityk-sessä seuraavin poikkeuksin:
Reagenssi Liuotin- Välineiden impreg- 2g__ testi noint iliuos__
NAD 3,5 nM 52,5 mM
/’-hydroksibutyraatti- dehydrogenaasi 0,0017 mg/ml 0,2 mg/ml
Laktaattidehydro- genaasi ei mukana ei mukana 25 Polyvinyylipyrro-lidoni
Testiliuosta käytettäessä molemmat koostumukset lisättiin kyvettiin, johon sitten lisättiin myös /3-hyd-30 roksivoihapon vesiliuos (pitoisuudet ilmoitettu myöhemmin) , ja reaktion edistymistä seurattiin mittaamalla spektrofotometrilla ekstinktion kasvu 510 nm:n kohdalta.
Välineet valmistettiin esimerkissä 2 kuvatulla 35 tavalla edellä mainitun koostumuksen muutoksin, f'-hyd- 18 754 32 roksivoihappoliuokset lisättiin välineeseen, ja värin kehittymistä seurattiin paljain silmin ja heijastus-spektrofotometrilla.
Sekä liuoksessa että välineissä määritettiin 5 /-hydroksivoihappopitoisuuksia, jotka vastasivat virtsassa esiintyviä pitoisuuksia. Liuoksessa pitoisuudet määritettiin värinkehittymisnopeuden perusteella. Käytettäessä välineitä pitoisuudet määritettiin minuutissa havaitun heijastusasteen muutoksen perusteella.
10 /-hydroksivoihappo reagoi seuraavalla tavalla näissä testiolosuhteissa käytettäessä liuoksia ja välineitä:
Liuos /’’-hydroksivoihappo- Värinkehittymis- pitoisuus mftl_ nopeus (Δοο/πιίη 510 nm:ssä 15 2.5 0,152 5,0 0,187 10,0 0,201 30.0 0,229 20 Väline /'-hydroksivoihappo- Heijastusasteen pitoisuus, mM_ muutos (%) yhdessä minuutissa 510 nm:ssä 0 50,8 2.5 34,6 10.0 25,6 25 30,0 20,9 Tästä kokeesta saadut tulokset osoittavat, että keksinnön mukaisella koostumuksella /3-hydroksivoihappo pystytään kvantitatiivisesti määrittämään sekä liuok-30 sessa että välineessä.

Claims (7)

19 75432
1. Koostumus analyytin määrittämiseksi näytteestä, tunnettu siitä, että se sisältää 5 a) analyytin kanssa reagoivan komponentin, joka käsittää pyridiininukleotidin, joka pelkistyy analyytin läsnäollessa, ja ainakin yhden aineosan, joka pystyy reagoimaan välillisesti analyytin kanssa aiheuttaen pyridiininukleotidin pelkistymisen; 10 b) hydroksylaasin, joka voi olla sitoutumattoma na, ja valesubstraatin, joka pystyy vapauttamaan hydroksylaasin, jolloin hydroksylaasi ja valesubstraatti pelkistyneessä muodossa olevan pyridiininukleotidin läsnäollessa ovat tehokkaita vetyperoksidin muodostajia; 15 c) peroksidatiivisesti aktiivisen aineen; ja d) hydratsoni-indikaattorin, joka sisältää hydratsonin ja kytkentäaineen, joka indikaattori hapettuneessa muodossaan ei pelkisty pyridiininukleotidin vaikutuksesta.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen koostumus, tunnettu siitä, että analyytin kanssa välillisesti reagoivat aineosat ovat analyytille spesifinen entsyymi ja analyytille spesifisen entsyymin ja analyytin välisessä reaktiossa muodostuneen tuotteen 25 kanssa reaktiokykyinen entsyymi.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen koostumus, tunnettu siitä, että analyytin kanssa välillisesti reagoiva komponentti on analyytin substraatti.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen koostumus, 30 tunnettu siitä, että analyytin kanssa välillisesti reagoivat aineosat ovat analyytille spesifinen substraatti ja analyytille spesifisen substraatin ja analyytin välisessä reaktiossa muodostuneen tuotteen kanssa reaktiokykyinen entsyymi.
5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen koostumus, 20 7 54 32 tunnettu siitä, että redox-indikaattori sisältää hydratsonin ja yhden sitovan aineen.
6. Väline analyytin määrittämiseksi näytteestä, tunnettu siitä, että se sisältää kantajan, 5 johon on liitetty patenttivaatimuksen 1 mukainen koostumus .
7. Menetelmä analyytin määrittämiseksi näytteestä, tunnettu siitä, että näyte saatetaan kosketukseen patenttivaatimuksen 1 mukaisen koostumuk- 10 sen kanssa ja tarkastellaan tällöin mahdollisesti tapahtuvaa värinmuutosta. 754 32
FI803189A 1979-10-10 1980-10-08 Komposition, anordning och foerfarande foer bestaemning av en analyt i ett prov. FI75432C (fi)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US8340879A 1979-10-10 1979-10-10
US8340879 1979-10-10

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI803189L FI803189L (fi) 1981-04-11
FI75432B FI75432B (fi) 1988-02-29
FI75432C true FI75432C (fi) 1988-06-09

Family

ID=22178119

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI803189A FI75432C (fi) 1979-10-10 1980-10-08 Komposition, anordning och foerfarande foer bestaemning av en analyt i ett prov.

Country Status (13)

Country Link
EP (1) EP0029104B1 (fi)
JP (1) JPS5661652A (fi)
AT (1) ATE11569T1 (fi)
AU (1) AU521507B2 (fi)
BR (1) BR8006520A (fi)
CA (1) CA1141637A (fi)
DE (1) DE3070067D1 (fi)
DK (1) DK162400C (fi)
ES (1) ES495782A0 (fi)
FI (1) FI75432C (fi)
IE (1) IE50326B1 (fi)
IL (1) IL61147A (fi)
NO (1) NO156506C (fi)

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3046741A1 (de) * 1980-12-11 1982-07-15 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Nachweis von nad(p)h oder salicylat
JPS5889200A (ja) * 1981-11-19 1983-05-27 Amano Pharmaceut Co Ltd Ｎａｄ依存性コレステロール脱水素酵素を使用するコレステロールの定量法およびその定量用試薬
EP0094161A1 (en) * 1982-05-07 1983-11-16 Imperial Chemical Industries Plc Method for determining glucose content of fluid
EP0117032B1 (en) * 1983-01-12 1989-04-19 Alcoholism And Drug Addiction Research Foundation Rapid analysis of ethanol in body fluids
JPS59205999A (ja) * 1983-05-10 1984-11-21 Wako Pure Chem Ind Ltd 還元型補酵素の定量方法
JPS60164498A (ja) * 1984-02-06 1985-08-27 Unitika Ltd アルコ−ル検出用試験片
JPS60172298A (ja) * 1984-02-17 1985-09-05 Unitika Ltd アルコ−ル検出用試験片
JPS60180600A (ja) * 1984-02-29 1985-09-14 Kyowa Medetsukusu Kk 還元型ニコチンアミド・アデニン・ジヌクレオチドの定量方法
US4810633A (en) * 1984-06-04 1989-03-07 Miles Inc. Enzymatic ethanol test
JPS61108400A (ja) * 1984-10-31 1986-05-27 Amano Pharmaceut Co Ltd コレステロ−ルの定量法
CH664975A5 (fr) * 1985-03-15 1988-04-15 Battelle Memorial Institute Procede analytique pour la determination d'un coenzyme reduit.
JPS62296A (ja) * 1985-06-26 1987-01-06 Kyowa Medetsukusu Kk 過酸化水素の定量方法
EP0227073A3 (en) * 1985-12-23 1989-03-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Method of determining a co-enzyme
EP0230572B1 (en) * 1985-12-23 1990-07-04 F. Hoffmann-La Roche Ag A method of manufacturing ion-selective electrodes for analyzing selected ions in solution
EP0231476A1 (en) * 1985-12-23 1987-08-12 Siddiqi, Iqbal W., Dr. Selectively ion-permeable electrodes for analyzing selected ions in aqueous solution
DE3783851T2 (de) * 1986-10-09 1993-06-17 Fuji Photo Film Co Ltd Integrales, mehrschichtiges element fuer analyse.
US5250420A (en) * 1987-04-02 1993-10-05 Toyo Boseki Kabushiki Kaisha Method and reagent for determination of dehydrogenase or its substrate
JPH07102156B2 (ja) * 1987-04-02 1995-11-08 東洋紡績株式会社 脱水素酵素または基質の測定法
EP0317070A3 (en) * 1987-10-08 1990-09-19 Enzymatics, Inc. Digital colorimetric quantitative assay system
JP2893100B2 (ja) 1991-11-27 1999-05-17 富士写真フイルム株式会社 ハロゲン化銀カラー写真感光材料
AU3661193A (en) * 1992-02-10 1993-09-03 Actimed Laboratories, Inc. Method for immobilizing dye on substrates
JP3026243B2 (ja) 1993-06-08 2000-03-27 富士写真フイルム株式会社 ハロゲン化銀カラー写真感光材料
JPH09152696A (ja) 1995-11-30 1997-06-10 Fuji Photo Film Co Ltd ハロゲン化銀カラー写真感光材料

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK678474A (fi) * 1974-02-15 1975-10-13 Hoffmann La Roche
DE2600526C3 (de) * 1976-01-08 1981-06-19 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren zur quantitativen Bestimmung von mit Sauerstoff unter Oxidaseeinwirkung H↓2↓O↓2↓ bildenden Substanzen und Reagens zu seiner Durchführung
US4119405A (en) * 1978-02-13 1978-10-10 Miles Laboratories, Inc. Test means and method for interference resistant determination of oxidizing substances

Also Published As

Publication number Publication date
ES8106934A1 (es) 1981-09-16
CA1141637A (en) 1983-02-22
FI75432B (fi) 1988-02-29
IL61147A (en) 1983-11-30
IL61147A0 (en) 1980-11-30
JPS5661652A (en) 1981-05-27
AU521507B2 (en) 1982-04-08
NO156506B (no) 1987-06-22
EP0029104B1 (en) 1985-01-30
AU6311380A (en) 1981-04-16
BR8006520A (pt) 1981-04-14
ATE11569T1 (de) 1985-02-15
NO803012L (no) 1981-04-13
ES495782A0 (es) 1981-09-16
EP0029104A1 (en) 1981-05-27
DK162400C (da) 1992-03-16
DK427080A (da) 1981-04-11
JPH0334920B2 (fi) 1991-05-24
DK162400B (da) 1991-10-21
IE50326B1 (en) 1986-04-02
NO156506C (no) 1987-09-30
FI803189L (fi) 1981-04-11
IE802098L (en) 1981-06-10
DE3070067D1 (en) 1985-03-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI75432C (fi) Komposition, anordning och foerfarande foer bestaemning av en analyt i ett prov.
US5326697A (en) Composition and method of assaying for D-β-hydroxybutyrate
US3298789A (en) Test article for the detection of glucose
KR920001449B1 (ko) 효소적산화에 의한 검체의 비색적 측정방법 및 시약
AU763065B2 (en) Diagnostics based on tetrazolium compounds
US4361648A (en) Color fixed chromogenic analytical element
NO300244B1 (no) Fremgangsmåte for bestemmelse av en analytt ved anvendelse av et tungtlöselig salt av en heteropolysyre samt middel for anvendelse ved bestemmelsen
US4273868A (en) Color stable glucose test
US5510245A (en) Composition and method of assaying for ketone bodies
US4291121A (en) Bilirubin-resistant determination of uric acid and cholesterol
US4394444A (en) Cofactor indicator compositions
AU754237B2 (en) Uric acid assay device with stabilized uricase reagent composition
JPS59162899A (ja) β‐ヒドロキシ酪酸の定量用組成物
US6753159B1 (en) Uric acid assay device with stabilized uricase reagent composition
DK167197B1 (da) Middel og fremgangsmaade til bilirubinresistent bestemmelse af urinsyre
Kayamori et al. Enzymatic method for assaying uric acid in serum with a new tetrazolium salt produces water-soluble formazan dye
IE47123B1 (en) Analytical device
JPH0668490B2 (ja) 生体試料中の還元物質の除去法
JPS5982100A (ja) 細胞物質検出方法とそれに用いる化学試験試薬系
WO1989007653A1 (en) Enzymatic determination of theophylline

Legal Events

Date Code Title Description
MM Patent lapsed
MM Patent lapsed

Owner name: MILES INC.