FI74041C - Foerfarande foer framstaellning av en diagnostisk anordning, som aer avsedd saerskilt foer paovisande av en patologiskt oekad halt av dehydrogenaser. - Google Patents

Description

74041

Menetelmä diagnostisen välineen valmistamiseksi, joka on tarkoitettu erityisesti dehydrogenaasien patologisesti kohonneen pitoisuuden osoittamiseks i

Keksintö koskee menetelmää sellaisen diagnostisen välineen valmistamiseksi, joka on tarkoitettu erityisesti dehydrogenaasien patologisesti kohonneen pitoisuuden osoittamiseksi ihmisen ja eläinten nesteistä, ja joka koostuu kantimesta ja aineseoksesta.

Lääketieteellisillä diagnooseilla on suuri merkitys terveydenhoitoalalla. Tämä pätee erityisesti ennaltaehkäiseviin seulontatutkimuksiin. Niinpä ovat esim. pahanlaatuisten kasvainten varhaiseen toteamiseen tarkoitetut diagnoosit saavuttaneet jo suuren käytännön merkityksen, sillä oikeaan aikaan todettuna on tällaisen sairauden hoitotulosten onnistumisen mahdollisuudet parhaimmat.

Patologiset muutokset voivat ihmisillä tai eläimillä vaikuttaa näiden solun ulkopuolisten nesteiden koostumukseen. Esimerkiksi solujen patologisissa muutoksissa, kuten pahanlaatuisten kasvainten muodostumisen yhteydessä, siirtyvät dehydrogenaasit seerumiin ja muihin solun ulkopuolisiin nesteisiin. Tällöin voidaan jokaiselle dehydrogenaa-sille löytää patologisena pidettävä, diagnostisesti käyttökelpoinen raja-arvo.

On mahdollista käyttää kemiallisia diagnoosiaineita, joilla on dehydrogenaasin patologista raja-arvoa vastaava käänne-piste. Tämän käännepisteen ylitys voidaan esim. diagnostiseen aineeseen sijoitetun redox-väriaineen avulla tehdä näkyväksi siten, että patologisen raja-arvon kohdalla väritön aine muuttuu värilliseksi.

Diagnostinen aine, joka on tarkoitettu dehydrogenaasien patologisesti kohoneen pitoisuuden osoittamiseen solujen ulkopuolisista nesteistä, sisältää esim. aineseoksen, jonka pH on säädetty happamalle alueelle, ja joka sisältää 2 74041 kyseistä dehydrogenaasia vastaavan substraatin, vedynsiirtä-jäyhdisteen ja vähintään yhden redox-väriaineen. Jotta aine olisi sopiva differentiaalidiagnostiikkaan, jolla tulevat todetuksi vain patologisesti kohonneet pitoisuudet, pitää mainitun pH-arvon olla kohtalaisen matala, esim. alle 5,0.

Tiettyjä diagnoosityyppejä, kuten kehonsisäisiä tutkimuksia varten pitää diagnostinen aine ennen käyttöä sijoittaa kanti-meen. Tämä pätee esim. naisilla, joilta on tarkoitus tutkia kasvainten esiintyminen sukuelinten alueelta. Tätä tarkoitusta varten julkaisusta DE-PS 24 43 741 on tunnettua, että diagnostinen aine sijoitetaan hygieniatamponille ja viedään tässä muodossa potilaan emättimeen, jossa aine voi reagoida emätineritteen sisältämien dehydrogenaasien kanssa. Jos tamponi on värjäytynyt emättimessä ollessaan, on tämä osoitus siitä, että potilaan kehossa on patologinen muutos.

Julkaisusta DE-PS 23 43 741 tunnetaan mm. menetelmä diagnostisen välineen valmistamiseksi, joka väline muodostuu tamponista ja sille tuodusta aineseoksesta. Väline on tarkoitettu isoentsyymien 4 ja 5 yhteismääritykseen ja sitä käytetään naisen sukuelinkanavassa esiintyvien patologisten muutosten diagnooseihin.

Tässä ennestään tunnetussa valmistuksessa saatetaan happa-malla pH-alueelle säädetty aineseos energiarikkaalta valolta suojattuna nestemäisessä muodossa kosketukseen tamponin kanssa. Sen jälkeen tamponin ja aineseoksen muodostama yhdistelmä kuivataan ja suljetaan energiarikasta valoa läpäisemättömään pakkauskuoreen.

"Energiarikkaalla valolla" tarkoitetaan tässä yhteydessä ja myöhemmin sellaista valoa (UV-valo mukaanluettuna), joka on punaista valoa energiarikkaampaa.

Käytännössä on osoittautunut, että diagnostisen välineen tietyt ominaisuudet ovat erittäin toivottuja.

i 3 74041 Näin ollen keksinnön tarkoituksena on tarjota menetelmä sellaisen diagnostisen välineen valmistamiseksi, jota voidaan ennen käyttöä varastoida mahdollisimman pitkän aikaa niin, ettei sen toimintakyky oleellisesti muutu; esim. väline, jos se sisältää redox-väri-ainetta, ei saa varastoinnin aikana olla taipuvainen värjäytymään ennenaikaisesti. Lisäksi pitää välineellä olla korkea diagnostinen osumatarkkuus, vaikka sitä käytetään mahdollisimman lyhyen aikaa potilaassa (pitoaika on mahdollisimman lyhyt). Lisäksi sitä tilannetta varten, että diagnostinen väline muodostaa kehonsisäi-sesti käytettynä väriaineen, pyritään väriaineen ja kantimen mahdollisimman kiinteään sitoutumiseen toisiinsa diagnostisessa välineessä, jotta vältyttäisiin tämän väriaineen siirtymi seitä esim. tutkittavan naisen emättimen ihoon. Ja viimein pitää diagnostisen välineen valmistukseen kuluvan ajan olla mahdollisimman lyhyt.

Tämä tehtävä on ratkaistu keksinnön mukaisesti ja keksintö koskee näin ollen menetelmää sellaisen diagnostisen välineen valmistamiseksi, joka on tarkoitettu erityisesti dehydrogenaasien patologisesti kohonneen pitoisuuden osoittamiseksi ihmisen ja eläinten nesteistä, ja joka koostuu kantimesta ja aineseoksesta, jossa menetelmässä juoksevassa muodossa oleva aineseos, jonka pH on säädetty happamelle alueelle, saatetaan UV-valolta suojattuna kosketukseen kantimen kanssa ja sen jälkeen kantimen ja aineseoksen muodostama yhdistelmä kuivataan ja suljetaan punaista valoa energian" kkaampaa valoa läpäisemättömään pakkauskuoreen, jolle menetelmälle on tunnusomaista se, että kantimen ja aineseoksen muodostama yhdistelmä sijoitetaan jo ennen kuivaamista pakkauskuoreen, kuivataan kylmäkuivausl aitteessa, jolloin kuivauksen ensimmäisessä vaiheessa käytetään pientä alipainetta ja toisessa vaiheessa käytetään sitten suurempaa alipainetta, kunnes kantimen ja aineseoksen muodostaman kuivatun yhdistelmän kosteuspitoisuus on pienempi kuin 1 %, minkä jälkeen pakkauskuori suljetaan kylmäkui-vauslaitteessa suuremmassa alipaineessa.

Keksinnön edullisen toteutustavan mukaan käytetään kanninta, joka sitoo redox-väriaineen, ja aineseosta, joka sisältää kulloinkin osoitettavan dehydrogenaasin substraattia, vedynsiirtäjäyhdistet- 4 74041 tä, vähintään yhtä redox-väri ainetta ja mahdollisesti puskurisys-teemiä, jolloin menetelmälle on tunnusomaista se, että kantimessa on polaarisia ryhmiä, ja että aineseoksen pH on säädetty arvoon, joka on alle 5,0. Näin saadaan diagnostinen väline, joka soveltuu erityisesti di fferentiaalidiagnostiikkaan patologisesti kohonneiden dehydrogenaasipitoi suuksi en osoittamiseksi, ja jolla pitkän varastoi ntikelpoisuuden, esim. yli kaksi vuotta, ohella on korkea diagnostinen osumatarkkuus.

Menetelmän erityisenä sovellutuksena käytetään kantimena sellu-loosakuituja sisältävää tamponia. Näin valmistettu diagnostinen väline soveltuu ennen kaikkea kehonsisäisiin tutkimuksiin, kuten myös syövän tutkimiseen naisten sukuelinten alueella. Tätä diagnostista välinettä voidaan ennen käyttöä vartastoida useita vuosia ja se saavuttaa korkean diagnostisen osumatarkkuuden huolimatta siitä, että sen pitoaika potilaassa on korkeintaan 10 minuuttia, ja diagnoosin aikana mahdollisesti muodostunut väriaine pysyy taatusti kiinteästi kiinni tamponin sei 1 uioosakuiduissa niin, ettei väriaineen siirtymistä tutkittavan naisen emättimen limakalvoon pääse tapahtumaan.

Sei 1 uioosakuiduista muodostetut tamponit ovat osoittautuneet erityisen edullisiksi sellaisissa diagnostisissa välineissä, jotka on tarkoitettu syövän toteamiseen naisten sukuelinten aluuelta. Tässä voidaan käyttää tavallisia hygieniatamponeja. On parempi, jos nämä eivät ole kierrettyjä vaan sellaisia, joissa on pituussuunnassa kulkeva ommel. Sei 1 uioosakuitutamponei11 a on se etu, että ne sitovat erittäin tiukasti itseensä kiinni diagnostista välinettä käytettäessä syntyvän väriaineen, jolloin ilmeisesti sell uioosamateriaalin sisältävät polaariset ryhmät ja väriaineessa olevat vastaavat polaariset ryhmät muodostavat kiinteän sidoksen .

Sei 1 uioosakuidun ja väriaineen välisen sidoksen vahvuuden osoittavat kokeet, joissa yritettiin liuottaa väriaine (formatsaani) tamponista. Uutossa käytettiin neljää erilaista ainetta: a. fysiologinen suolaliuos, b. liuos, joka jäljitteli emättimen eritettä (jota ei ollut saatavissa riittävästi) sisältäen ihmisen albumiinia ja musiinia, |: 5 74041 c. kohdan b. mukainen liuos, jossa oli lisäksi pinta-aktiivista ainetta, esim. natriumlauryylisulfaattia, d. kloroformi.

Millään näistä aineista ei voitu liuottaa suuria väriaine-määriä (formatsaani) tamponista. Jopa kuumennettaessa tamponia 6 tuntia kiehuvassa kloroformissa, saatiin uutetuksi vain noin 7 % väriaineesta {formatsaani). Koska tamponi ihmisten ollessa kyseessä viipyy vain korkeintaan 10 minuuttia 37°C:ssa kehon sisässä, ei ilmeisesti ole olemassa mitään sellaista vaaraa, että tamponiin imeytyvä kehon neste uuttaisi mahdollisesti muodostuneen väriaineen, joka joutuisi kehoon .

Tamponi voi myös muodostua muista kuiduista, esim. hydro-fiilisistä keinokuiduista, jotka voivat olla onttoja pinta-alan ja absorptiokyvyn suurentamistarkoituksessa. On itsestään selvää, että voidaan käyttää tamponeja, jotka ovat erilaisten kuitulaatujen, esim. luonnonkuitujen ja synteettisten kuitujen seoksia, kunhan vaan kuidut ovat hydrofiilisia ja sisältävät polaarisia ryhmiä.

Tamponista muodostuva diagnostinen väline soveltuu sekä kehonsisäisiin että kehonulkoisiin diagnooseihin. Viimeksi-mainitussa tapauksessa saatetaan tutkittava kehon neste kosketukseen sen tamponialueen kanssa, joka sisältää mainittua aineseosta.

Kantimen ja a.ineseoksen muodostama yhdistelmä sijoitetaan pakkauskuoreen jo ennen kuivausta. Tällä tavoin tarvitsee pakkauskuori vain sulkea kuivauksen jälkeen. Koska tämä sulkeminen kestää vain lyhyen hetken, vältetään se vaara, että kosteus joutuu uudestaan kantimeen ja aineseokseen ja heikentää diagnostisen välineen säilyvyyttä.

Keksinnön mukaan suljetaan pakkauskuori, joka sisältää kantimen ja aineseoksen, jo kuivauslaitteessa. Tällä tavoin voidaan taata se, että kuivaamalla saavutettu 6 74041 alhainen kosteuspitoisuus säilyy sisätilassa vielä pakkaus-kuoren sulkemisen jälkeenkin.

Kun diagnostista välinettä käytetään tamponin muodossa, on edullista, jos tamponi on sijoitettu applikaattoriin. Tällä saavutetaan se, että tamponi voidaan viedä kehon sisään, esim. emättimeen, koskettamatta sormilla, joten näin ollen ei esiinny infektiovaaraa.

Näin ollen tällaisen diagnostisen välineen valmistuksen yhteydessä tamponi viedään applikaattorin sisäänvientihylsyyn. Tällöin on edullista, jos tamponi ennen aineseoksen lisäämistä sijoitetaan applikaattoriin, koska tällöin applikaattori toimii tamponin telineenä, kun tamponille lisätään aine-seosta.

On edullista, jos applikaattorissa on sisäänvientihylsy, jossa on nestettä läpäisemätön sisäseinä, ja tamponi sijaitsee sisäänvientihylsyssä sillä tavoin, että sisäänvientihyl-syn sisällä on vapaa tila ennen tamponin sisäänvientipäätä. Tamponiin sijoitettava aineseos voi tilapäisesti olla tässä tilassa ja edistää menetelmän nopeampaa toteuttamista. Applikaattorin sisäänvientihylsyn nestettä läpäisemätön sisäseinä mahdollistaa sen, että aineseos siirtyy nopeasti tamponiin ilman, että osa tästä nesteestä imeytyy sisäänvientihylsyn seinään ja jopa tulee sen läpi ulos ja joutuu näin ollen hukkaan.

Käytännössä erittäin sopivassa menetelmän toteutustavassa ruiskutetaan aineseoksen liuos mainittuun vapaaseen tilaan esim. annostelulaitteen avulla. Tämä ruiskutus voi tapahtua erittäin nopeasti, mikä nopeuttaa valmistusprosessia.

Pakkauskuorena käytetään mielellään toisesta päästä avointa suuren lämmönjohtokyvyn omaavasta metallista tehtyä putkea, jossa on elastinen sulkutulppa. Tällainen putki, joka on esim. alumiinia, voidaan omalta osaltaan valmistaa helposti ja takaa sulkutulpan, joka voi olla kumimaista materiaalia, li 7 74041 asettamisen jälkeen sen, että diagnostinen väline on pitkäaikaisesti suojattu ilman, kosteuden, valon ja mekaanisen vahingon vaikutukselta.

Sitäpaitsi voi putki toimia telineenä diagnostiselle välineelle sinä aikana, kun aineseos tuodaan kantimelle.

Viimein edesauttaa putkimateriaalin suuri lämmönjohtokyky nopeata lämmönsiirtymistä yksittäisten putkien välillä.

Tämä on edullista, kun putket kuivataan keskinäisessä kosketuksessa sen jälkeen, kun ne on panostettu diagnostisella välineellä.

Vielä eräässä menetelmävaihtoehdossa panostetaan putki tamponin ja applikaattorin yhdistelmällä, sen jälkeen aineseos tuodaan tamponille ja putki suljetaan osittain sulkutulpalla ja sisältö kuivataan. Putken osittainen sulkeminen tekee toisaalta mahdolliseksi halutun kuivauksen ja toisaalta kuivumisen jälkeen putken täydellisen ja nopean sulkemisen, joka voi tapahtua jopa kuivauslaitteen sisällä.

Pakattujen diagnostisten välineiden erityisen pitkän säilyvyyden saavuttamiseksi kuivataan kännin ja aineseos kylmä-kuivauslaitteessa ja sen jälkeen pakkauskuori suljetaan alennetussa paineessa, joka on jo valmiiksi säädetty kylmäkuivaus-laitteessa tapahtuvaa kuivausta varten.

Kylmäkuivaus on erittäin suositeltavaa tässä menetelmässä, koska tuote pitää suhteellisen nopeasti ja perusteellisesti vapauttaa aineseoksen liuottimesta.

Nopea kuivaaminen edesauttaa aineseoksen erittäin tasalaatuista jakautumista kantimelle. Tämä merkitsee sitä, että aineseos on kuivaamisen jälkeen pääasiassa amorfisessa muodossa, eikä suurempien kiteiden muodossa, sidottuna kantimeen. Tällöin sidos aineseoksen yksittäisten aineosien, erityisesti väriainekomponenttien, ja kantimen välillä muodostuu voimakkaammaksi .

δ 74041

Sitäpaitsi kylmäkuivauksessa poistuvat kantimesta, esim. tamponin selluloosakuiduista, haihtuvat aineosat, esim. vesi, jolloin väriainekomponenttien tilaolosuhteet tulevat vieläkin paremmiksi sille, että saavutetaan mahdollisimman tiivis kosketus kantimen molekyylien kanssa. Tästä on seurauksena suuri määrä kovalenttisia sidoksia väriaineen ja kantimen välillä. Tämä vähentää huomattavasti sitä vaaraa, että väriainemolekyylit liukenisivat kantimesta kehon nesteiden vaikutuksesta.

Sitäpaitsi on osoittautunut, että kantimen ja väriaineen välisen kiinteän sidoksen välityksellä tapahtuu diagnostista välinettä käytettäessä etenevä värireaktio halutussa pH-ar-vossa, joka on alle 5,0, erityisen spesifisesti, ja näin ollen on diagnoosin osumatarkkuus huomattavan korkea.

Kylmäkuivauksella saavutettu aineseoksen ja kantimen välinen voimakas sidos on myös syynä näin valmistetun diagnostisen välineen pitkään säilyvyyteen.

Diagnostinen väline tulee optimaalisesti kylmäkuivatuksi, kun ensimmäisessä vaiheessa toimitaan pienemmässä alipaineessa ja toisessa vaiheessa suuremmassa alipaineessa. Tämä edesauttaa esim. vesimolekyylien erottumista, jotka tuodusta aineseoksesta riippumattomasti ovat karit imellä. Esikui- vauksessa käytetty pienempi alipaine on suuruusluokassa noin _2 1,33 Pa (10 Torr.). Sitä seuraava jälkikuivausvaihe suoritetaan suuremmassa alipaineessa, joka on noin 0,13 Pa (10-3 Torr.).

Diagnostinen väline on pitkään säilyvä, kun se kuivataan siinä määrin, että pakkauskuoren sisäosassa on kosteuspitoisuus alle 1 %. Tässä tapauksessa voidaan diagnostista välinettä varastoida ennen käyttöä yli 3 1/2 vuotta ilman, että varastoinnilla olisi oleellista vaikutusta sen toimintakykyyn.

Seuraavissa esimerkeissä valaistaan keksinnön mukaista 9 74041 menetelmää ja sen avulla valmistettujen diagnostisten välineiden säilyvyyttä.

Esimerkki 1

Aineseoksen yksittäiset aineosat punnitaan ja liuotetaan tislattuun veteen energiarikkaalta valolta suojattuna, esim. punaisessa valossa. Energiarikkaalta valolta suojauksesta pidetään huolta myös seuraavissa menetelmävaiheissa.

Aineseoksen kännin on tavallinen sellullosakuitua oleva hy-gieniatamponi. Se sijoitetaan tamponiapplikaattorin sisään-vientihylsyyn, johon on työnnetty teleskooppimaisesti osittain sisään ulkohalkaisijaltaan hieman pienempi ulostyöntö-hylsy. Applikaattorin molemmat hylsyt ovat esim. kerroskar-tonkia tai muovia. Tällaisia applikaattoreita on kaupallisesti saatavissa.

Ulostyöntöhylsyn tarkoitukseton liukuminen ulos sisäänvienti-hylsystä estetään siten, että sijoitetaan stanssattu uloke sille alueelle, jolla applikaattorin sisäänvientihylsy ja ulostyöntöhylsy ovat päällekkäin.

Tamponi työnnetään sisäänvientihylsyn sisäänvientipään puolelta niin pitkälle applikaattoriin, että se on ulostyöntöhylsyn etupään kohdalla ja samanaikaisesti jää sisäänvienti-hylsyyn tamponin sisäänvientipään eteen vapaata tilaa noin 3 cm^ tai aksiaalisena pituutena noin 3 cm. Tamponin ulosve-tolangat kulkevat tamponin takapäästä ulostyöntöhylsyn sisältä takapään kautta ulos.

Applikaattorin ja tamponin muodostama yhdistelmä sijoitetaan alumiiniseen pakkausputkeen siten, että applikaattorin sisääntyöntöpää ja putken avoin pää ovat ylöspäin suunnattuja.

Tämän jälkeen ruiskutetaan annostelulaitteen avulla noin 2 ml alussa valmistettua vesiliuosta yläpuolelta mainittuun 10 74041 vapaaseen tilaan, joka on sisääntyöntöhylsyn sisällä ennen tamponin sisääntyöntöpäätä.

Valmistusnopeuden kohottamiseksi tämä ruiskutus tapahtuu niin nopeasti, että osa liuoksesta jää lyhyeksi ajaksi mainittuun applikaattoriin vapaaseen tilaan, ennenkuin se imeytyy tamponiin kokonaan. Sen estämiseksi, että tänä aikana ja vielä liuoksen imeytymisen jälkeenkin osa liuoksesta imeytyisi vesiliukoiseen ja vettäimevään sisäänvientihylsyn seinämään, eikä näin ollen joutuisi tamponiin, on sisäänvientihylsyn sisäseinä päällystetty nestettä läpäisemättömällä aineella, esim. alumiini- tai PVDC-kalvolla.

Aineseoksen liuos aiheuttaa tamponin paisumisen applikaattorin sisällä. Koska tamponi sijaitsee jo aivan ulostyöntö-hylsyn sisäänvientipään kohdalla, jonka liikkuminen taaksepäin on estetty mainitun stanssauksen avulla, ei tamponi voi laajentua applikaattorin takapään suuntaan, ja näin ollen tamponi ottaa tilaa nesteen aiheuttamalle laajenemisel-leen applikaattorin sisäänvientipäästä ja täyttää näin ollen oleellisessa määrin sisäänvientihylsyssä olevan mainitun vapaan tilan.

Sitten pakkausputken aukkoon sijoitetaan osittain sulkevasti elastista materiaalia oleva tulppa. Tällöin työnnetään tulppa sisään putkeen tulpassa olevaan ensimmäiseen ulokkeeseen asti. Tulpan ollessa tässä asennossa, jää putken sisätilan ja ulkoilman välille tulpassa olevan kolon ansiosta virtaus-kanava.

Suuri määrä tällä tavoin esivalmistettuja pakkausputkia sijoitetaan vierekkäin kosketukseen toinen toisensa kanssa ja viedään kylmäkuivauslaitteeseen.

Siellä putket sisältöineen esijäädytetään ja sen jälkeen esikuivataan ensimmäisessä kuivausvaiheessa noin 1,33 Pa:n alipaineessa. Toisessa kuivausvaiheessa tavara jälkikuiva- i 11 74041 taan suuremmassa, 0,13 Pa:n alipaineessa. Koko kuivaus kestää noin 24 tuntia.

Kun on saavutettu alle 1 %:n jäännöskosteus, suljetaan pak-kausputket kylmäkuivauslaitteessa vallitsevassa alipaineessa. Tämä tapahtuu siten, että sulkulevy lasketaan hydraulisesti, joka levy työntää pakkausputkien sulkutulpat tulpan kehällä olevaan toiseen ulkonemaan asti ja näin putket tulevat täysin suljetuiksi.

Tämän jälkeen voidaan pakkausputket ottaa ulos kylmäkuivaus-laitteesta ja viedä ulkoisiin olosuhteisiin, kuten ilmaan, tavalliseen kosteuteen ja energiarikkaaseen valoon, ilman, että ne vaikuttaisivat pakattuihin diagnostisiin välineisiin haitallisesti.

Seuraavaksi esitetään erityisiä esimerkkejä aineseoksen koostumuksesta sekä valmistettujen diagnostisten välineiden säilyvyydestä .

Esimerkki 2

Diagnostiset välineet valmistetaan esimerkin 1 mukaisesti. Kantimena käytetään tavallista hygieniatamponia, joka on tehty selluloosakuidusta eikä ole kierretty, vaan koostuu useista selluloosakuitukerroksista, jotka on ommeltu yhteen vastanauhalla tamponin pituussuunnassa ja sen jälkeen puristettu lopulliseen tamponimuotoon.

Aineseos tuodaan tamponille vesiliuoksena, jonka koostumus on seuraava:

Aineosa Määrä DL-natriumlaktaatti 57,6 mg

Nikotiiniamidiadeniinidinukleotidi (NAD) 3,0 mg 2,2'-atsino-bis(3,3'-etyylibentstiatso- liini-6,6'-sulfonihappo) 272,5 ^ug

Trietanoliamiini 39,8 mg

Fenatsiinimetosulfaatti (PMS) 10,0 ^ug

Vesi, puhdistettu määrään 2,0 g 12 74041

Liuoksen pH säädetään 3N suolahapolla arvoon 4,0.

Selostetulla menetelmällä saadaan valmistetuksi diagnostisia välineitä, jotka ovat toimintakykyisiä useampien vuosien ajan.

Esimerkki 3

Esimerkin 1 mukaisesti valmistetaan diagnostisia välineitä käyttämällä aineseoksen vesiliuosta, jolla on seuraava koostumus :

Aineosa Määrä DL-natriumlaktaatti 57,6 mg NAD 3,0 mg

Nitrosininentetratsoliumkloridi (NBT) 556,0 ^ug

Diaforaasi 6,4 K.Y.

Trietanoliamiini 39,8 mg

Vesi, puhdistettu määrään 2,0 g

Liuoksen pH säädetään arvoon 4,9.

Tällä liuoksella saadut diagnostiset välineet ovat samalla tavoin käyttökelpoisia ja säilyviä kuin esimerkin 2 mukaisesti valmistetut välineet.

Esimerkki 4

Esimerkin 1 mukaisesti valmistetaan diagnostisia välineitä käyttäen aineseoksen vesiliuosta, jolla on seuraava koostumus:

Aineosa Määrä DL-natriumlaktaatti 57,6 mg NAD 3,0 mg NBT 50,0 ^ug

Meldolasininen 2,5 ^ug

Trietanoliamiinihydrokloridi 50,0 mg

Vesi, puhdistettu määrään 2,0 g

Liuoksen pH on 4,0.

Tällä liuoksella valmistetuilla diagnostisilla välineillä I, 13 74041 oli samat ominaisuudet kuin esimerkkien 2 ja 3 mukaisesti valmistetuilla välineillä.

Esimerkki 5

Esimerkin 1 mukaisesti valmistetaan diagnostisia välineitä käyttämällä aineseoksen vesiliuosta, jolla on seuraava koostumus:

Aineosa Määrä DL-natriumlaktaatti 37,0 mg NAD 2,0 mg NBT 490,0 ^,ug PMS 48,7 ^ug

Trietanoliamiini-HCl 49,0 mg

Vesi, puhdistettu määrään 2,019 g

Liuoksen pH säädetään 3N suolahapolla arvoon 4,5.

Saadut diagnostiset välineet vastaavat ominaisuuksiltaan esimerkkien 2-4 mukaisia välineitä.

Esimerkki 6

Aineosa Määrä DL-natriumlaktaatti 25,6 mg NAD 1,33 mg 3,3'-P^'-dimetoksi^^'-bisfenyleenD-bis- ccc n (2,5-p-nitrofenyyli-2H-tetratsoliumkloridi)(ΊΝΒΓγ 3 3' u PMS 30,3 yUg

Trietanoliamiini-HCl 49,0 mg

Vesi, puhdistettu määrään 2,0 g

Liuoksen pH säädetään 3N suolahapolla arvoon 4,0.

Esimerkki 7

Esimerkin 1 mukaisesti valmistettuja diagnostisia välineitä varastoidaan eripituisia aikoja pakatussa tilassa ja sen jälkeen niiden toimintakyky tutkitaan.

Tamponit otetaan vastaavan varastointiajän kuluttua pimeässä pakkauksestaan ja saatetaan kukin reagenssilasissa kosketukseen 2 ml:n kanssa koeliuosta.

74041 14

Kaikissa tapauksissa on koeliuoksen kohdalla kyse fosfaatti-puskuriliuoksesta, jonka pH-arvo on 7,5. Ensimmäinen 2 ml:n erä koeliuosta on puhdasta fosfaattipuskuriliuosta, jolla saadaan selville eri-ikäisten tamponien sokkoarvot. Toisiin 2 ml:n koeliuoseriin lisätään vielä kuhunkin kolme kansainvälistä yksikköä (K.Y.) laktaattidehydrogenaasia. Kolmansiin 2 ml:n koeliuoseriin lisätään kuhunkin 1 % albumiinia, 0,9 % natriumkloridia ja 0,1 % musiinia. Neljänsiin 2 ml:n koeliuoseriin lisätään albumiinin, natriumkloridin ja musii-nin, joita on edellä mainitut määrät, lisäksi vielä kolme kansainvälistä yksikköä LDH:a.

Tamponien toimintakyvyn tutkimisessa in vitro jäljittelevät kaikki edellä mainitut 2 ml:n koeliuoserät kehon nestettä .

Koko kokeilu suoritetaan huoneen lämpötilassa ja energia-rikkaalta valolta suojattuna. Jokainen näyte (tamponi ja koeliuos reagenssilasissa) tutkitaan visuaalisesti 20 minuutin kuluttua siitä, kun koeliuos on imeytynyt tamponiin, tamponin mahdollisen värjäytymisen toteamiseksi ja suoritetaan myös valokuvaus, jotta tämä arvio voidaan vielä myöhemminkin varmistaa.

Tuloksista on esitetty yhteenveto seuraavassa taulukossa: ib 74041

Taulukko

Tamponi___Koeliuos________

Aine- Varas- Vain Puskuri Puskuri, Puskuri, seoksen tointi- puskuri LDH albumiini, albumiini, pH-arvo aika (sokko- NaCl NaCl, koe) musiini musiini, _ _ _ _ _ LDH_ 4.5 1 vuosi (-) + 4.5 1 vuosi (-) + - ++ (-) - kel- + - ++ täinen 4.5 1 1/2 (-) + - ++ (-) + - ++ vuotta 4.5 2 vuotta (-) + 4.5 2 1/2 (-) (+) - + vuotta 4.5 3 vuotta (-) + - ++ 4.5 3 1/2 (-) + - ++ (-) (+) - + vuotta (-) = ei värjäytymistä = diagnoosi negatiivinen (+) = vaaleanpunainen = diagnoosi vielä negatiivinen + = vaaleansininen, jossa = diagnoosi positiivinen violetti sävy ++ = sininen = diagnoosi positiivinen

Tuloksista voidaan havaita, että diagnostinen väline, jossa tamponi on kan-timena, on vielä kolmen ja puolen varastointivuocien jälkeen toimintakykyinen. Tämä pätee myös riippumatta siitä ovatko tamponit vain selluloosakuitua tai puuvillan ja selluloosan seosta tai pelkkää puuvillaa.

Keksinnön mukaisesti käytetyn kantimen ei välttämättä tarvitse olla kuitua. Se voi olla esim. vaahtomuovia tai ko-koonkäärittyä tai muulla tavoin muotoiltua kalvoa. Vaatimuksena on pelkästään se, että kännin on riittävän hydrofiili-nen, jotta se diagnostista välinettä käytettäessä voi imeä sisäänsä tutkittavan kehonnesteen. Sitäpaitsi on tärkeätä, että kantimen ja aineseoksen väriainekomponentin välillä on mainittu voimakas sidos.

74041 16

Keksinnön mukaisesti pakataan diagnostinen väline mielellään voimakkaasti alennetussa paineessa valo-, kosteus- ja ilmatiiviisti, mikä tarkoituksenmukaisesti tapahtuu kylmäkui-vauksen jälkeen kylmäkuivauslaitteessa. Ilman ja kosteuden sisäänpääsy voidaan myös estää muulla tavoin. Esimerkiksi voidaan pakkauskuori sisällä olevine diagnostisine välineineen täyttää kuivalla typellä ja sulkea sen jälkeen. On myös mahdollista sijoittaa pakkauskuoreen diagnostisen välineen lisäksi kuivausaine, esim. molekyyliseula.

i-

Claims (8)

17 74041

1. Menetelmä sellaisen diagnostisen välineen valmistamiseksi, joka on tarkoitettu erityisesti dehydrogenaasien patologisesti kohonneen pitoisuuden osoittamiseksi ihmisen ja eläinten nesteistä, ja joka koostuu kantimesta ja aineseoksesta, jossa menetelmässä juoksevassa muodossa oleva aineseos, jonka pH on säädetty happamelle alueelle, saatetaan UV-valolta suojattuna kosketukseen kantircen kanssa ja sen jälkeen kantimen ja aineseoksen muodostama yhdistelmä kuivataan ja suljetaan punaista valoa energiarikkaam-paa valoa läpäisemättömään pakkauskuoreen, tunnettu siitä, että kantimen ja aineseoksen muodostama yhdistelmä sijoitetaan jo ennen kuivaamista pakkauskuoreen, kuivataan kylmäkuivauslaittees-sa, jolloin kuivauksen ensimmäisessä vaiheessa käytetään pientä alipainetta ja toisessa vaiheessa käytetään sitten suurempaa alipainetta, kunnes kantimen ja aineseoksen muodostaman kuivatun yhdistelmän kosteuspitoisuus on pienempi kuin 1 %, minkä jälkeen pak-kauskuori suljetaan kylmäkuivauslaitteessa suuremmassa alipaineessa.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, jossa käytetään kanninta, joka sitoo redox-väriaineen, ja aineseosta, joka sisältää kulloinkin osoitettavan dehydrogenaasin substraattia, vedyn-siirtäjäyhdistettä, vähintään yhtä redox-väriainetta ja mahdollisesti puskurisysteemiä, tunnettu siitä, että kantimessa on polaarisia ryhmiä, ja että aineseoksen pH on säädetty arvoon, joka on alle 5,0.

3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kantimena käytetään selluloosakuituja sisältävää tamponia .

4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että tamponi sijoitetaan tamponiapplikaattoriin ennen aine-seoksen tuontia. is 74041

5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että applikaattorissa on sisäänvientihyisy, jossa on kosteutta läpäisemätön sisäseinä, ja että tamponi on sijoitettu sisäänvientihylsyyn sillä tavoin, että sisäänvienti-hylsyn sisäpuolelle ennen tamponin sisäänvientipäätä jää vapaa tila.

6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että aineseoksen liuos ruiskutetaan vapaaseen tilaan.

7. Minkä tahansa edellä olevan patenttivaatimuksen mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että pakkauskuorena käytetään toisesta päästään avonaista, suuren lämmönjohtokyvyn omaavasta metallista valmistettua putkea, jossa on elastinen sulkutulppa.

8. Patenttivaatimuksen 7 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että putki panostetaan applikaattorin ja tamponin yhdistelmällä, sitten tuodaan aineseos tamponille ja sen jälkeen putki suljetaan sulkutulpalla osittain ja sisältö kuivataan .