JPH01127959A - 解糖阻止剤及びこれを封入した採血管 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 この発明は、採血された血液中の解糖を阻止するために
添加する解糖阻止剤及びこの解糖阻止剤を封入した採血
管に関するものである。

更に詳しくは、採血された血液中の解糖を充分阻止する
と共に血液中の他の成分の測定値に対しても影響を及ぼ
さない解糖阻止剤、及びこの解糖阻止剤を封入した採血
管に関するものである。

〈従来の技術〉 血液中のグルコ−スの測定は、糖尿病等にまつわる糖代
謝、生体中でのエネルギー代謝の研宛、及び臨床化学検
査の分野で最も重要なものの一つである。

このグルコースの測定に関しでは、通常採血時に解糖阻
止剤（以下単に阻止剤という）といわれる製剤が使用さ
れてきた。

その理由は、採血から測定の実施に至るまでには、通常
検体の保管、検体の前処理等に一定の時間を要するので
、採血後の血液をそのまま放置すると採血直接からグル
コースが速やかに赤血球により消費され、採血管内でグ
ルコースが経時的に減少しで正しい測定値が得られない
からである。

もし実際の体内レベルでのグルコース値が測定に反映さ
れなければ、微妙なグルコース値の変動を探る糖尿病膚
係の診断にも由々しい結果をもたらす、従って、阻止剤
を採血管内に共存させ、グルコースの血球による消費を
抑制しようとする訳である。

ざて、従来前記した阻止剤としでは、フッ化物塩（ナト
リウム塩、カリウム塩等）やモノヨード酢酸塩（ナトリ
ウム塩、リチウム塩等）等が使用されてきた。これらの
阻止剤は機能的には、赤血球膜より侵入して赤血球中の
グルコース代謝に関する酵素を阻害するものである。

しかしながら、これらの阻止剤は次のような欠点を有し
ている。

（１）これらの阻止剤を添加した血液の試料は、通常グ
ルコースの測定のためにしか使用できず、貴重な血液試
料が無駄になることが多い。すなわち、これらの阻止剤
は一般の酵素に対しても阻害作用が強いため血液試料中
の酵素成分の検査や、酵素を使用した血液成分の測定に
対しでも重大な影響を与える場合が多く測定を不可能と
する。また、これらの阻害剤はアルカリ金属塩として添
加されるため、ナトリウム、カリウム等の測定試料とし
ては使用できなくなる。

（２）解糖阻止効果の出現に時間がかかる。

（３）溶血が引き起され易い、溶血が起こると、その程
度の多少にもよるが、赤血球中の成分が血漿または血清
中に遊Ｍ（遊出）し、測定対象に次のような悪影ｖＩを
与える。

（イ）測定対象と同じ成分が赤血球中から遊出すれば、
直接プラスの誤差を与える（例えば、赤血球がこわれる
ことにより放出されるカリウム値の上昇、乳酸脱水素酵
素（ＬＤＨ）の放出に伴なうＬＤＨの上昇等）。

（ロ）血色素であるヘモグロビンは、分光光学的測定に
対しで好ましくない影響を与える場合が多い。

（ハ）クレアチシキナーゼ（ＧＫ）測定法において、赤
血球中から遊出すアデニレートキナーゼ（ＡＫ）により
見かけ上のＧＫ値の上昇等、種々間接的な影響が起こる
。

そこで、本発明者等は前記した欠点を解決するために従
来の阻止剤の欠点を解消するものとして、Ｄ−マンノー
ス及びその誘導体を開発し、これを使用する解糖阻止剤
を先に出願した（特願昭６１−１４８０３６号、及び特
願昭６２−１１２２８９号）。中でも特にＤ−マンノー
スについでは、その即効性と他の測定成分に対しても干
渉が少ないため、貴重な血液試料を最大限に有効に利用
できるという意味で関心が高まっている。

〈発明が解決しようとする問題点〉 本発明者等が先に開発した阻止剤としてのＤ−マンノ一
スまたは／及びその誘導体（以下単にＤ−マンノースと
もいう）は、前記した従来の阻止剤の欠点を解消するも
のとして非常に有効であったが、このＤ−マンノースを
添加した血液試料をグルコース以外の他の全ての成分の
測定試料としで使用するためには、更１こ他の測定成分
（こ対する影響、特に溶血に関しては極めて像量であっ
ても、これを可能な限り少なくすることが極めて重要な
ことである。

ざて、Ｄ−マンノースを解糖阻止剤としで使用する形態
としでは、まず水溶液として使用することか考えられる
。

Ｄ−マンノースは水（こ対する溶解度が大きいので、こ
の点に関しでは問題がない。またＤ−マンノースはそれ
自体は細胞毒ではないので、水溶液として使用する限り
採血した血液と瞬時に混ざり溶血を生じさせるものでは
ない、しかし、例えば水溶液を採血管に封入した場合、
封入量は極めて微小量（通常血液１ｍ１ｌ（こ対しＤ−
マンノースを２〜５ｍ９の割合で使用するので、約１０
ｍＡの血液を採取するとすれば、１５〜２０ｍ１の採血
管に２００−５００ｍｑ／ｍｕのＤ−マンノース溶液を
０．１ｍｌ封入することになる）のため精確に一定量分
注し難いし、また分注した溶液が試験管の壁に分散して
しまい外観上好ましくなく、更にたとえ１％程度であっ
ても血液が稀釈される欠点がある。

また、Ｄ−マンノースを固体として（剤型化して）使用
する方法について検討したところ、固体としての使用は
後に示すように、採血試料によっては多少の溶血を示す
場合があることが判明した。すなわちＤ−マンノースの
凍結乾燥品、顆粒、フィコールやポリエチレングリコー
ル等の賦形剤を添加して乾燥した粉末等について詳細に
検討したが、完全に溶血を防止することができなかった
。

そこで本発明者等はＤ−マンノースの使用形態について
、更に鋭意検討の結果、Ｄ−マンノースについてはこれ
を予じめ担体に保持させで使用すれば、意外にも剤型化
により生ずる不都合な溶血はほとんど起こらないことを
見い出し本発明を完成した。

く問題を解決するための手段〉 すなわちこの発明は、■Ｄ−マンノースまたは／及びそ
の誘導体を担体に保持させたことを特徴とする解糖阻止
剤と、■Ｄ−マンノースまたは／及びその誘導体を担体
に保持させた解糖阻止剤を、採血管に封入したことを特
徴とする解糖阻止剤を封入した採血管を提供することを
目的として開発したものである。

本発明により、解糖阻止剤としてのＤ−マンノースは剤
型化に伴なう溶血という最大の欠点を解消し、この阻止
剤を添加した採血試料は、血液中のグルコースの測定は
もちろんのこと、血液中の他の成分についてもこの同じ
試料を用いて測定することにより、充分信頼する測定値
を得ることができるものとなるのである。

本発明においては、Ｄ−マンノースまたは／及びＤ−マ
ンノースの誘導体は解糖を阻止する基本物質としで使用
される。Ｄ−マンノースの誘導体としては、その構造に
Ｄ−マンノースに相当する炭素骨格と、水酸基の立体配
Ｍを有し、水酸基はアミノ基、リン酸エステル、有機酸
エステル、酸アミド等の他の置換基に貫きかわってもよ
いものであり、例えばＤ−マンノサミン等である。

本発明に使用する担体は、本質的にはＤ−マンノースを
保持またはコーティングすることが可能であり、血液中
で速やかに溶出・拡散するものであればその材質、形状
（形態）を問わない。しかしＤ−マンノースの血液中へ
の溶解速度、Ｄ−マンノースの保持量、採血管内での浸
透・拡散の効果等を考慮すれば、担体の表面へコーティ
ングする場合がより好ましい形態といえる。担体の材質
としでは合成ポリマー、ガラス、セラミック等のいずれ
でもよい、コーティングする担体の形状は、入手し易さ
、コスト、乾燥等の製造工程等を考慮すると球形の゛ビ
ーズが扱い易い、変った形態としては、採血用試験管の
内壁に直接コーティングすることも可能である。

また、溶液を含浸した後乾燥して保持させる担体として
は、通常の口紙、布等が使用でき、その材質としてはア
セテート、ニトロセルロース等が適している。

以上の一般的な記載の中で、特に有用な製剤形式及び使
用方法は次の通りである。

比重１．００６〜１．０５０程度の血清（血漿）と血球
の中間の比重をもつ適当な大きざのプラスッチクど−ズ
（例えば直径１〜５ｍｍ程度のポリスチレン製ビーズ）
にコーティングし、その何粒かを採血管（通常真空採血
管）の大きざ、及びＤ−マンノースの必要量に合せて使
用するものである。このように調製した採血管に、その
底面積を充分覆うだけの血液を採取すれば、このビーズ
が担体としてコーティングに充分な表面積を備えでおり
、かつ採血管を振とうすることにより内容物を容易に攪
拌することができるので、阻止剤であるＤ−マンノース
が血液中に直ちに拡散する。そして、この血液についで
血Ｗｔ（血清）分離をする際には、採血管をそのまま遠
心分離機にかけて遠心分離すれば、前記ビーズが血漿（
血清）と血球との境界を仕切るので検体としての血漿（
血清）の採取に極めて便利であり、このようにして解糖
阻止機能と血漿（血清）分層機能を併せもつ、本発明に
係る解糖阻止剤を封入した採血管が得られるのである。

なお、前記ビーズにはその表面にシリコン処理をしでお
くと一層よい結果が得られることが多い。

また、本発明に係る解糖阻止剤を封入した採血管には、
シリコンやアクリル樹脂等で作製された通常の血漿（血
清）分離用ゲルを併用してもよい、この場合においては
、ビーズは採血前から一部のゲルの表面を覆うので、ビ
ーズをその分だけ余分に添加しておく、この採血管を遠
心分離すれば、ビーズはゲル内にめり込む形で安定で強
固な隔壁を形成する。この場合にはビーズ単独の場合に
比較してビーズの隙間に入る血清が無いのでロスが少な
くなり有効なサンプリングができ、また血清が分離した
ままの、この状態で保存可能である。

本発明に係る解糖阻止剤を封入した採血管内の血液から
、その検査目的により血漿を得る場合には、Ｄ−マンノ
ースの阻止剤と共に、ＥＤＴＡ塩、ヘパリン等の血液凝
固阻止剤を採血管内に共存させ、また血清を得る場合は
トロンビン様酵素等の血液凝固促進剤と共存させること
により目的を達成することができる。これらの物質の共
存のさせ方についでは特に制限はなく市販の採血管に夫
々の物質′Ｐｊ：Ｄ−マンノースの解糖阻止剤と共に封
入すればよい、前記血液凝固阻止剤、または促進剤は、
Ｄ−マンノースと同様合成ポリマービーズの担体に保持
させて使用することも可能である（この場合において、
同一のビーズへＤ−マンノースの解糖阻止剤と共にコー
チイブしで使用することも可能である）、このようにす
れば、封入する物質の組み合せにより他機能、多目的を
有する解糖阻止機能り採血管が作製できる。

また、追記すれば血清を用いるグルコースの測定は、阻
止剤としでＤ−マンノースを使用することによってはじ
めてなし得たものである。その理由は、従来の阻止剤を
添加すると血液凝固系に関連するカスケード酵素が阻害
されるため検体として血清を取得することが困難であっ
たからである０通常行なわれる臨床検査のうち、その大
多数は血清を検体として実施されるから、これらの臨床
検査と同一の検体でグルコースの測定ができることは検
査効率も上り、経済的にも大きなメリットが生ずる。

次にＤ−マンノースのコーティング、及び含浸、乾燥等
の手法についでのべる。

（１）担体にコーティングする場合 Ｄ−マンノースの使用量は、３０〜５０ｍ９／血液１０
ｍβ程度である。この量のＤ−マンノースを水溶液、ま
たはメタノール（アルコール、アセトン等の有機溶媒が
使用可）溶液として前記した担体にコーティングした後
乾燥する。多量のボス リ士チレン製のビーズにコーティングする場合には、必
要量のＤ−マンノース溶液を噴霧しでコーティングした
後、温風乾燥により行なうのが有利であるが、ロータリ
ーエバポレーターによっても行なうことができる。

採血管内へ直接コーティングする場合には、前記相当量
のＤ−マンノース溶液を管内に分注し、加温、吸引、乾
燥して管内へ均一にコーティングする。

なお、Ｄ−マンノース溶液の調製は、アルコール性水溶
液を使用すると乾燥が速く出来上りもよい。このとき、
温風に窒素ガスを使用すると更によい製品を得ることが
できる。出来上ったビーズはＤ−マンノース量を検定し
た後、その必要個数を採血管に封入して減圧にした後採
血管として完成する。

（２）口紙に吸着させる場合 口紙上に、前記した量の溶液をスポットするか、または
口紙の打ち抜き面積に対応したＤ−マンノースの必要量
を口紙全体に含浸させこれを温風により乾燥した後口紙
を打ち抜き、それを採血管に封入する。

〈実施例１〉ポリスチレン製ビーズへのＤ−マンノース
のコーティング ポリスチレン製ビーズ５９を５０ｍβ容量のナス型フラ
スコにとり、これに３０　ｍｑ／ｍβのメタノールに溶
解したＤ−マンノース溶液１０ｍ１を加え、ロータリー
エバポレーターで吸引乾燥（４０℃）した。

更に乾燥のため、乾燥管へビーズを移し、吸引乾燥（６
０’Ｃ）Ｌ、、、窒素ガスにより風乾して解糖閉止剤を
得た。

〈実施例２〉　濾紙へのＤ−マンノースの保持Ｄ−マン
ノース溶液（６０ｍｃ＋／ｍβ）をメタノールと水で調
製し、このＤ−マンノース溶液５ｍβを平底のトレーに
入れ、１０１０Ｘ１０の濾紙をひたし、Ｄ−マンノース
溶液を濾紙に吸収させた。

濾紙が完全にＤ−マンノース溶液を吸収したら取り出し
て熱風乾燥した後、直径８ｍｍのデスクを作成した（直
径８ｍｍデスク当り約６ｍ９のＤ−マンノース）。

〈実施例３〉　採血管の作製 実施例１及び２によるビーズと濾紙を使用し、空採血管
にプロ社製５ｍβ用）にビーズは０゜５９、濾紙は１枚
を封入し、各々の内圧を３４５ｍｇＨｇに調整した真空
採血管（Ａ）、（Ｂ）を作製した。

この採血管（Ａ）、（Ｂ）を使用して次の試験を行った
。

（１）溶血性試験 前記採血管（Ａ）、（Ｂ）を使用して次のように溶血性
の試験を行った。すなわち採血管（Ａ）、（Ｂ）、また
対照として無添加のもの（Ｃ）と、マンノースを含む濃
厚溶液を封入した採血管（Ｄ）及びマンノースの顆粒６
ｎ＋ｑを封入した採血管（Ｅ）！使用して、以下の溶血
性の試験を実施した。血液は上記採血管に各２ｍρづつ
採血し、室温に２時間放雷後、遠心分Ｍ　（３，０００
ｒ。

ｐ、ｍ１０分）した。得られた血清についで溶血の有無
とその程度を調べた。

結果は第１表（巻末）の通りであった。

第１表の判定の結果から、（Ａ）、ＣＢ）は（Ｃ）に対
して有意の差は認められないが、（Ｅ）に対しでは明ら
かに差があった。

すなわち本発明における剤型（Ａ）、（Ｂ）のＤ−マン
ノースによる溶血はないと判断される良好な結果が得ら
れた。

（２）Ｄ−マンノースの血清への溶出量の測定前記採血
管（Ａ）、ＣＢ）についで採血後、血清中へのＤ−マン
ノースの経時的な溶出量を調べた。

採血後、１５秒、３０秒、６０秒、３００秒の各時点で
遠心分離（３，００Ｏｒ、ｐ、ｍ　１０分）し、上清中
のＤ−マンノース量を酵素法により比色定量した。

測定試験組成 （Ｉ　）　　１．７ＭＭ　３．５−ジメトキシアニリノ
プロパンスルホン酸を含む０．１５Ｍリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ６，９） （ｎ）　　ムタロターゼＩ　、　６０／ｍβ、グルコー
スオキシダーセ１７Ｘ　１０’　　Ｕ／ｍβ、ペルオキ
シダーゼ５，６００Ｕ／ｍ、＆、１．ＯｍＭ　４−アミ
ノアンチピリン、０．２χＴｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００％
含む５０ｍＭリシ酸緩衝液（ｐＨ７，２）検量用標準液
　Ｄ−マンノース（６ｎ＋ｑ／ｍり測定操作 ＣＩ）、（ＩＩ）各１．５ｍ、ｆｆｔ３７℃に予め加温
し、血清２０ｕ上を添加して反応を開始した。５８０ｎ
ｍで３分後と４分後の１分間当りの吸光度変化量を測定
した。同様に血清を検量用標準液に代えで測定を行い、
マンノースｌｉｔ算出した。

結果は第２表（巻末）の通りであった。

第２表によれば、（Ａ）、（Ｂ）とも採血後、数十秒で
阻止剤として必要なり一マンノース量ヲ効率よく溶出さ
せていることがわかった。

（３）血清グルコースの経時変化 前記採血管（Ａ）及び（Ｃ）、（Ｄ）の採血管について
採血、Ｘ後の血清グルコースの経時的変化量を調べた。

測定は酵素法（ＩＡＴＲＯＮ社製グルコース測定用試薬
）により比色定量した。

測定試薬及び操作法は添付の説明書に従った。

その結果を第３表（巻末）に示す。

第３表によれば、Ｄ−マンノースコート担体を使った（
Ａ）は、濃厚水溶液を使った（Ｄ）に比し、同等の阻害
効果を有することが示された。

（４）各種検査項目測定への影響 前記（Ａ）の採血管について、（Ｃ）Ｖ対照として各検
査項目の測定を行い、Ｄ−マンノースの影響を調べた。

結果を第４表（巻末）に示す。

第４表によれば本発明による採血管（Ａ）は、日常実施
されている検査項目に有意の影響を与えなかった。また
ビーズによる血清と血球境界の隔壁により検体血清の採
取が著しく簡単に行うことができた。

〈発明の効果〉 以上のようにこの発明に係る解糖阻止剤及びこれを封入
した採血管によれば、次のよ・うな効果を有する。

（１）Ｄ−マンノース剤型化による不都合な溶血が回避
され、血漿、血清にかかわらず調製することかでき、調
製された同一の検体でグルコースの他、多数の測定項目
が精度よく測定可能となるので、これにより採血本数の
増加による患者への負担、経費等が削減され、また検査
効率が著しく上昇するという効果を有する。

（２）担体に、血漿（血清）と血球の中間の比重を有す
るポリスチレン等のビーズを使用して得た阻止剤を採血
管に封入することにより、この採血管に血漿（血清）分
離機能を付与することができる。また同様に処理して解
糖阻止剤以外の血液凝固阻止剤、血液凝固促進剤等を併
用することにより、多機能、多目的を備えた採血管を作
製することができるという効果を有する。

第１表 ］　　　　　　　　−士　　士　　士　　−２−−一−
− ３−−−−＋ ４　−±−−＋ ５　−一一一± ８　−±−−± ９　−一一士士 １０　　＋＋十±＋ １１　　−−−一± １２　　−−−一± 判定基準 一：溶血は認められない ±：做溶血 ＋：明らかな溶血 ＋＋二強溶血 第２表 放置時間 Ａ　　３．３３．６３．４３．７ 第　　３　　表 放言時間 採血管　直後　０．５１２４６（時間）Ａ　　　ＩＯ２
１０３１０２１０１９９９７Ｃ９８９３８８８３８０７
５ Ｄ　　　ＩＯ２１０４１０２１００９９９６単位：ｎ’
１９／ｍβ

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. （１）Ｄ−マンノース、または／及びその誘導体を担体
   に保持させたことを特徴とする解糖阻止剤。
2. （２）担体の比重が１．００６〜１．０５０である特許
   請求の範囲第１項記載の解糖阻止剤。
3. （３）担体が合成ポリマーである特許請求の範囲第１〜
   第２項記載の解糖阻止剤。
4. （４）担体がポリスチレンである特許請求の範囲第３項
   記載の解糖阻止剤。
5. （５）Ｄ−マンノースまたは／及びその誘導体を担体に
   コーティングした特許請求の範囲第１〜第４項記載の解
   糖阻止剤。
6. （６）担体がロ紙である特許請求の範囲第１項記載の解
   糖阻止剤。
7. （７）Ｄ−マンノースまたは／及びその誘導体を担体に
   保持させた解糖阻止剤を、採血管に封入したことを特徴
   とする解糖阻止剤を封入した採血管。
8. （８）担体にＤ−マンノースまたは／及びその誘導体を
   保持させた解糖阻止剤を、血漿または血清分離用ゲルと
   共に採血管に封入した特許請求の範囲第７項記載の解糖
   阻止剤を封入した採血管。
9. （９）Ｄ−マンノースまたは／及びその誘導体を担体に
   保持させた解糖阻止剤を、血液凝固阻止剤または血液凝
   固促進剤と共に採血管に封入した特許請求の範囲第７項
   記載の解糖阻止剤を封入した採血管。