FI73322B - Foerfarande foer bestaemning av karcinoembryonal antigen och i detta foerfarande anvaendbar loesning. - Google Patents
Foerfarande foer bestaemning av karcinoembryonal antigen och i detta foerfarande anvaendbar loesning. Download PDFInfo
- Publication number
- FI73322B FI73322B FI822800A FI822800A FI73322B FI 73322 B FI73322 B FI 73322B FI 822800 A FI822800 A FI 822800A FI 822800 A FI822800 A FI 822800A FI 73322 B FI73322 B FI 73322B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- cea
- antibody
- peroxidase
- bound
- mol
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57473—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving carcinoembryonic antigen, i.e. CEA
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/962—Prevention or removal of interfering materials or reactants or other treatment to enhance results, e.g. determining or preventing nonspecific binding
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/963—Methods of stopping an enzyme reaction or stabilizing the test materials
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/975—Kit
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/811—Test for named disease, body condition or organ function
- Y10S436/813—Cancer
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/826—Additives, e.g. buffers, diluents, preservatives
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Description
1 73322
Menetelmä karsinoembryonaalisen antigeenin määrittämiseksi ja menetelmässä käytettävä liuos
Julkaisusta Clin. Chem. 26/12, 1718-1722 (1980) tun-5 netaan entsyymi-immuunimenetelmä karsinoembryonaalisen antigeenin (CEA) määrittämiseksi. Tässä menetelmässä inkuboidaan esikäsiteltyjä seerumi- tai plasmanäytteitä ensimmäisessä vaiheessa kahden tunnin ajan 45°C:ssa helmien kanssa, jotka on herkistetty marsu-anti-CEA:11a. Pesuvaiheen jälkeen hel-10 miä inkuboidaan kahden tunnin ajan 45°C:ssa konjugaatin kanssa, jossa on vuohi-anti-CEA:ta ja piparjuuri-peroksidaa-sia. Kun ylimääräinen konjugaatti on poistettu pesemällä, määritetään entsyymiaktiivisuus kiintofaasilla tunnetuin menetelmin. Vertaamalla tätä arvoa analogisella tavalla val-15 mistettuun standardikäyrään, lasketaan näytteen CEA-pitoi-suus.
Tämän keksinnön puitteissa keksittiin nyt yllättäen, että tämä menetelmä voidaan toteuttaa ilman herkkyyshäviötä samassa ajassa myös ilman aikaa vievää ja vaivalloista pesu-20 vaihetta ensimmäisen ja toisen immunologisen reaktion välissä. Tämä yksinkertaistus käy mahdolliseksi, kun tutkittavaa näytettä inkuboidaan ensimmäisen CEA-vasta-aineen kanssa, joka on sidottu veteen liukenemattomaan kantimeen ja toisen CEA-vasta-aineen kanssa, johon peroksidaasi on sitoutunut, 25 käyttäen mukana 0,4-1,0 mol/1 fosfaatti-ioneja tai 0,2-0,4 mol/1 sulfaatti-ioneja.
Edelleen on käynyt ilmi, että mainittuja ioneja käyttämällä myös yllä mainitun julkaisun Clin. Chem. mukaista kaksivaiheista menetelmää voidaan ajallisesti lyhentää, si-30 käli että toinen inkubointi ilman herkkyyshäviötä voidaan toteuttaa puolessa ajassa, ts. yhdessä tunnissa.
Edellä mainittu entsyymi-immuunimenetelmä antigeenien, tässä tapauksessa CEA:n, määrittämiseksi, on yleisesti tunnettu ns. kiintofaasi-kerrostusmenetelmänä. Tässä menetelmäs-35 sä voi entsyymi, erikoistapauksesa peroksidaasi, olla suoraan tai biotiini/avidiini-sillan kautta sidottu vasta-aineeseen .
2 73322 Tämän keksinnön kohteena on siten kiintofaasi-kerros-tusmenetelmä karsinoembryonaalisen antigeenin (CEA) nopeaksi määrittämiseksi inkuboimalla tutkittavaa näytettä ensimmäisen CEA-vasta-aineen kanssa, joka on sidottu tai sido-5 taan veteen liukenemattomaan kantimeen, ja toisen CEA-vasta-aineen kanssa, johon peroksidaasi on suoraan tai biotiini/-avidiini-sillan kautta sidottu, erottamalla kiinteä ja nestemäinen faasi, mittaamalla peroksidaasiaktiivisuus joko kiinteässä tai nestemäisessä faasissa läsnäolevan CEA:n mi-10 taksi, jolle menetelmälle on tunnusomaista, että inkubointi suoritetaan käyttäen mukana 0,4-1,0 moolia/1 fosfaatti-ioneja tai 0,2-0,4 moolia/1 sulfaatti-ioneja.
Kuten jo mainittiin, voidaan keksinnön mukaisen kiin-tofaasi-kerrostusmenetelmän mukaisesti tutkittavaa näytettä 15 ensin inkuboida ensimmäisen CEA-vasta-aineen kanssa, joka on sidottu veteen liukenemattomaan kantimeen ja sen jälkeen inkuboida pesuvaiheen jälkeen toisen CEA-vasta-aineen kanssa, joka on merkitty peroksidaasilla. Koska 0,4-1,0 moolia/1 fosfaatti-ioneja tai 0,2-0,4 moolia/1 sulfaatti-ioneja vai-20 kuttaa aktivoivasti toiseen inkubointiin, suoritetaan tämä toinen inkubointi sen mukaisesti näiden ionien läsnäollessa.
Kuten jo aikaisemmin mainittiin, voidaan ensimmäisenä CEA-vasta-aineena, joka on sidottu veteen liukenemattomaan kantimeen, käyttää marsu-CEA-vasta-ainetta. Toisena CEA-25 vasta-aineena, johon peroksidaasi on sidottu, voidaan käyttää vuohi-anti-CEA:ta.
Ensimmäisenä ja toisena CEA-vasta-aineena voidaan kuitenkin käyttää myös kahta erilaista monoklonaalista hiiri-CEA-vasta-ainetta, jotka kumpikin suuntautuvat CEA:ta vas-30 taan, mutta CEA:n eri epitooppeja vastaan.
Lisäksi on myös mahdollista ensimmäisenä vasta-aineena käyttää monoklonaalista hiiri-CEA-vasta-ainetta ja toisena jonkin eläimen, esim. vuohen, vastaseerumin polyklonaa-lista vasta-ainetta.
il 3 73322
Peroksidaasi voidaan sitoa vasta-aineeseen sinänsä tunnetuin menetelmin, esim. Wilson'in ja Nakane'n julkaisussa "Immunfluorescence and Staining Techeniques", 1978, sivu 215 kuvaamalla menetelmällä. Monoklonaalisilla hiiri-5 CEA-vasta-aineilla on käynyt ilmi, että nämä tunnetut menetelmät vaikuttavat tietyissä olosuhteissa haitallisesti näiden vasta-aineiden immunologisiin ominaisuuksiin. Tässä tapauksessa on eduksi biotinyloida monoklonaalinen hiiri-CEA-vasta-aine, ja sen jälkeen saattaa reagoimaan avidiiniperok- 10 sidaasi-kompleksin kanssa. Avidiini-peroksidaasi-kompleksin valmistus tapahtuu yhdenmukaisesti edellä mainitun Wilson'in ja Nakane'n menetelmän kanssa. Polyklonaalisilla vasta-aineilla, ts. eläinseerumeista saaduilla vasta-aineilla, on peroksidaasin suora sitominen vasta-aineeseen edullinen.
15 Veteen liukenemattomina kantimina ensimmäistä vasta- ainetta varten tulevat kysymykseen orgaaniset ja epäorgaaniset polymeerit Zamylaasi, dekstraani, luonnon tai modifioitu selluloosa, polyakryyliamidi, agarose, magnetiitti, huokoinen lasijauhe, polyvinylideenifluoridi (Kynar) ja lateksij, 20 testausastioiden (koeputkien, tiitterilevyjen tai lasisten tai muovisten kyvettien) sisäseinä sekä kiinteiden kappaleiden (sauvan, helmen tai muunlaisten lasisten tai muovisten kappaleiden) pinta. Varsin sopivia kantimia keksinnön mukaista menetelmää varten ovat lasi- ja muovihelmet.
25 Vasta-aine voi olla sidottu veteen liukenemattomaan kantimeen fysikaalisesti (adsorptiivisesti) tai kemiallisesti tai voidaan reaktion aikana tai sen jälkeen sitoa jonkin muun reaktio-osapuolen avulla, joka puolestaan on sitoutunut kantimeen.
30 Immunologiset reaktiot tapahtuvat edullisesti lämpö tilassa välillä 0-55°C. Normaalisti immunologinen reaktio-nopeus kasvaa lämpötilan noustessa, minkä vaikutuksesta muuten samoissa testiolosuhteissa tasapaino saavutetaan nopeammin.
35 Tämän keksinnön mukainen uusi menetelmä on erinomaisen herkkä ja sille on ominaista erityisesti lyhyt reaktioaika.
73322
Testaussarja keksinnön mukaista menetelmää varten sisältää erityisesti astian, jossa on CEA-vasta-aineita, joille peroksidaasi on sidottu, vesipitoisessa liuoksessa, jonka pH on 4-9 ja joka sisältää 0,4-1,0 mol/1 fosfaatti-ioneja 5 tai 0,2-0,4 mol/1 sulfaatti-ioneja.
Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä.
Esimerkki 1 CEA:n kvantitatiivinen määritys potilasplasmoissa mo-noklonaalisella CEA-vasta-aineella ja jollakin yleisesti 10 käytetyllä CEA-vasta-aineella (vuohen)
Tarvittavaan määrään koeputkia (10 x 75 mm) pipetoi-daan kuhunkin 0,2 ml testiliuosta (0,8 mol/1 NaH2P04/Na2HPC>4 / pH 6,5, jossa on 2 g/1 naudan seerumialbumiinia, 20 % normaalia vuohiseerumia, 0,2 g/1 4-amino-antipyriiniä ja 0,2 15 /ug/ml vuohi-anti-CEA-peroksidaasi-konjugaattia), ja niihin sekoitetaan 0,050 ml analysoitavia potilasplasmoja tai CEA-standardeja (0 ng/ml CEA, 2,5 ng/ml CEA, 10 ng/ml CEA ja 20 ng/ml CEA) ja CEA-vertailuseerumia (10,2 ng/ml CEA - 1,0 ng/ml) , jokaiseen putkeen lisätään monoklonaalisella hiiri-20 anti-CEA:lla herkistetty polystyreenihelmi* (0 = 6,5 ml) ja inkuboidaan 45°C:ssa neljän tunnin ajan. Sen jälkeen pestään polystyreenihelmet kolme kertaa kulloinkin 2-5 ml:11a tislattua vettä, siirretään kukin 0,5 ml:aan substraattipus-kuria peroksidaasin aktiivisuuden määritystä varten (0,1 25 _ *Monoklonaalisen hiiri-anti-CEA:n valmistus tapahtuu analogisesti julkaisussa Journal of Immunological Methods, 32 (1980) 297-304 kuvatun menetelmän kanssa, jolloin lähtösolu-linjana fuusiota varten käytetään myelooma-linjaa Sp 2/01-AG, 30 joka on talletettu ATCC:aan 25.5.1979 numerolla CRL 8006 ja tehty julkisesti saatavaksi 24.11.1981. Fuusio tapahtuu CEA:lie immunoitujen hiirien pernasoluilla. Hiirien immu-nointi tapahtui analogisesti mainitun julkaisun taulukon I kanssa, jolloin molemmat ensimmäiset immunoinnit tapahtuvat 35 kumpikin 50 ^g:lla CEA:ta, immunoinnit 3 ja 4 jätettiin pois, immunointi 5 tapahtui 50 yug:lla CEA:ta ja immunoinnit 6-8 kukin 200 /ag:Ha CEA:ta.
5 73322 mol/1 kaliumsitraattipuskuria, jonka pH on 5,0, 6 mmol/l:n kanssa H2O2 ja 40 mmol/l:n kanssa o-fenyleenidiamiinia) ja inkuboidaan 30 minuuttia huoneen lämpötilassa (22°C). Per-oksidaattisen aktiivisuuden lopettamiseksi sekä värin voi-5 makkuuden lisäämiseksi sekoitetaan mukaan 2,0 ml 1 mol/1 HC1 ja mitataan 30 minuutin aikana absorptio fotometrisesti aallonpituudella 492 nm. Taulukossa I on esitetty erään CEA-määrityksen arvot ja toisaalta verrattu arvojen kanssa, jollaiset saatiin Roche'n radioimmunoanalyysilla (vertailuar-10 voja) ja toisaalta arvojen kanssa, jollaiset saatiin modifioidun (käyttäen vuohi-anti-CEA-peroksidaasi-konjugaattia 0,2 M fosfaattipuskurissa TRIS-puskurin asemesta) menetelmän Clin. Chem. 26/12, 1718-1722 (1980) mukaisesti.
6 73322
Taulukko I
. ι-ι- ' — ~ 1 .............. ........ —......« I'l ... -......... I —...... I
Testiaine ^A492 nm/RT/3O min CEA-Standardi O ng/ml CEA 0,105 5 2,5 ng/ml CEA 0,330 5,0 ng/ml CEA 0,490 10.0 ng/ml CEA 0,755 20.0 ng/ml CEA 1,220 CEA-vertailuseerumi 10 10,2 ng/ml CEA 0,770
Potilas- R0CHE-RIA-- Clin.Chem. Keksinnön mukainen plasma testi (loc.cit.) mu- menetelmä . kaan modifioitu .
(CEA-pitoi- , . .. (CEA-pitoisuus) f menetelmä (CEA- suus) . , . ' -------------pitoisuus)-----
No. Pool I 0,8 ng/ml 0,7 ng/ml 0,7 ng/ml 15 No. Pool 2 1,4 ng/ml lro ng/ml 1,0 ng/ml
No. Pool 3 2,3 ng/ml 2,5 ng/ml 2,4 ng/ml
No. 3155 25,0 ng/ml 20,0 ng/ml 22,0 ng/ml
No. 3157 3,3 ng/ml 4,1 ng/ml 3,7 ng/ml
No. 3368 7,1 ng/ml 6,7 ng/ml 6,9 na/ml 20 No. 3395 14,8 ng/ml 15,0 ng/ml 14,7 ng/ml
No. 3401 9,0 ng/ml 8,8 ng/ml 9,2 ng/ml
No. 3410 23,0 ng/ml 21,0 ng/ml 24,0 ng/ml
No. 3419 4,2 ng/ml 4,5 ng/ml 4,4 ng/ml
No* 3416 4'! ng/™1 5,3 ng/ml 5,2 ng/ml 25 No. 3 64 6 5,5 ng/ml 5,2 ng/ml 5,3 ng/rnl
No* 3657 5'2 n9/ml 5,5 ng/ml 5,5 ng/ml
No· 3679 5'7 ng/ml 5,9 ng/ml 6,0 ng/ml 30 Arvot, jotka ovat alle 2,5 ng/ml CEA, ovat normaali alueella, kun taas arvot, jotka ovat suurempia kuin 2,5 ng/ml, ovat patologisella alueella. Taulukosta I nähdään, että keksinnön mukaisella menetelmällä saadut arvot ovat hyvin
II
7 73322 vastaavuussuhteessa näiden arvojen kanssa, jotka saatiin yllä mainitun julkaisun Clin. Chem. menetelmästä modifioidulla menetelmällä tai ROCHE-RIA-testin mukaisesti.
Esimerkki 2 5 Monoklonaalisella hiiri-anti-CEA:11a ja vuohi-anti- CEA-vuohi-anti-CEA-peroksidaasikonjugaaati11a suoritettavan entsyymi-immunologisen CEA-määrityksen herkkyyden lisääminen lisäämällä 0,8 mol/1 fosfaatti-ioneja
Tarvittavaan määrään koeputkia (10 x 75 mm) pipetoi-10 daan kuhunkin 0,5 ml testiliuosta (2 g/1 naudan seerumialbu-miinia, 20 % vuohiseerumia, 0,2 g/1 4-amino-antipyriiniä, ja 0,2 /ug/ml vuohi-anti-CEA-peroksidaasikonjugaattia kerran 0,2 mol/1 natriumfosfaattipuskurissa ja kerran 0,8 mol/1 natriumfosfaattipuskurissa, pH-arvo 6,5) ja sekoitetaan 15 mukaan 0,050 ml CEA-standardeja (0 ng/ml CEA, 2,5 ng/ml CEA, 5,0 ng/ml CEA, 10,0 ng/ml CEA ja 20,0 ng/ml CEA) ja CEA-vertailuseerumia (10,2 ng/ml CEA - 1,0 ng/ml), lisätään jokaiseen putkeen monoklonaalisella hiiri-CEA-vasta-aineella herkistetty polystyreenihelmi (0 = 6,5 mm) ja inkuboidaan 20 45°C:ssa neljä tuntia. Sen jälkeen polystyreenihelmet pestään kolme kertaa kulloinkin 2-5 ml :11a tislattua vettä, siirretään kukin 0,5 ml:aan substraattipuskuria peroksidaa-sin aktiivisuuden määrittämistä varten (0,1 mol/1 kalium-sitraattia, pH 5,0, jossa on 6 mmol/1 H2O2 ja 40 mmol/1 o-25 fenyleenidiamiinia) ja inkuboidaan 30 minuuttia huoneen lämpötilassa (22°C). Peroksidaattisen aktiivisuuden lopettamiseksi sekä värin voimakkuuden lisäämiseksi sekoitetaan mukaan 2,0 ml 1 mol/1 HC1 ja mitataan 30 minuuttia aikana fo-tometrisesti absorptio aallonpituudella 492 nm. Arvot on 30 esitetty taulukossa II sellaisina kuin ne saatiin 0,2 mol/1 ja 0,8 mol/1 natriumfosfaattipuskurilla.
........... - L
7 3 3 2 2
Taulukko II
CEA-standardit ^A492 nm/RT/30 min mukana 0,2 mol/1 mukana 0,8 mol/1 5 fosfaatti-ioneja fosfaatti-ioneja 0 ng/ml CEA 0,050 0,130 2,5 ng/ml CEA 0,125 0,290 5,0 ng/ml CEA 0,230 0,450 10,0 ng/ml CEA 0,400 0,770 10 20,0 ng/ml CEA 0,780 1,400 CEA-vertailuseerumi 10,2 ng/ml CEA 0,430 0,800 Tästä taulukosta II käy selvästi ilmi, että herkkyys lisääntyy selvästi käytettäessä 0,8 mol/1 fosfaatti-ioneja 15 verrattuna 0,2 mol/1:aan fosfaatti-ioneja.
Esimerkki 3
Monoklonaalisella hiiri-anti-CEA:11a ja vuohi-anti-CEA-peroksidaasikonjugaatilla suoritetaan entsyymi-immunologisen CEA-määrityksen herkkyyden lisääminen lisäämällä 0,4 mol/1 20 sulfaatti-ioneja
Tarvittavaan määrään koeputkia (10 x 75 mm) pipetoi-daan kuhunkin 0,5 ml testiliuosta (2 g/1 naudan seerumialbu-miinia, 20 % vuohiseerumia, 0,2 g/1 4-amino-antipyriiniä ja 0,2/ug/ml vuohi-anti-CEA-peroksidaasikonjugaattia 0,2 mol/1 25 natriumfosfaattipuskurissa kerran ilman sulfaatti-ioneja ja kerran 0,4 mol/l:n kanssa sulfaatti-ioneja (Na2SO^, pH-arvo 6,5), sekoitetaan mukaan 0,050 ml CEA-standardeja (0 ng/ml CEA, 2,5 ng/ml CEA, 5,0 ng/ml CEA, 10,0 ng/ml CEA ja 20,0 ng/ml CEA) ja CEA-vertailuseerumia (10,2 ng/ml CEA - 1,0 30 ng/ml), lisätään jokaiseen monoklonaalisella hiiri-CEA-vas-ta-aineella herkistetty polystyreenihelmi (0 = 6,5 mm) ja inkuboidaan 45°C:ssa neljä tuntia. Sen jälkeen pestään poly-styreenihelmet kolme kertaa kulloinkin 25 ml:11a tislattua vettä, siirretään kukin 0,5 ml:aan substraattipuskuria per-35 oksidaasin aktiivisuuden määritystä varten (0,1 mol/1 kalium-sitraattia, pH 5,0, jossa on 6 mmol/1 H2O2 ja 40 mmol/1 o- 9 73322 fenyleenidiamiinia) ja inkuboidaan 30 minuuttia huoneen lämpötilassa (22°C). Peroksidaattisen aktiivisuuden lopettamiseksi sekä värin voimakkuuden lisäämiseksi sekoitetaan mukaan 2 , 0 ml 1 mol/1 HC1 ja mitataan fotometrisesti 30 minuu-5 tin aikana absoptio aallonpituudella 492 nm. Arvot on esitetty taulukossa III sellaisina kuin ne saatiin 0,2 mol/1 natriumfosfaattipuskurilla kerran ilman sulfaatti-ioneja ja kerran 0,4 mol/l:n sulfaatti-ioneja kanssa.
Taulukko III
10 CEA-standardit ΔΑ492 nm/RT/30 min ilman sulfaatti- mukana 0,4 mol/1 ioneja sulfaatti-ioneja 0 ng/ml CEA 0,050 0,135 15 2,5 ng/ml CEA 0,125 0,350 5,0 ng/ml CEA 0,230 0,520 10.0 ng/ml CEA 0,400 0,890 20.0 ng/ml CEA 0,780 1,620 CEA-vertailuseerumi 20 10,2 ng/ml CEA 0,430 0,930
Taulukosta III käy selvästi ilmi, että sulfaatti-ionien läsnäolon ansiosta herkkyys lisääntyy huomattavasti. Esimerkki 4
Testiherkkyyden lisääminen nostetulla fosfaattiväke-25 vyydellä käytettäessä monoklonaalista biotinyloitua anti-CEA:ta ja avidiini-peroksidaasi-komplekseja
Tarvittavaan määrään koeputkia (10 x 75 mm) pipetoi-daan kuhunkin 0,2 ml testiliuosta (0,2 mol/1 tai 0,8 mol/1 natriumfosfaattipuskuria, pH 6,5, jossa on 2 g/1 naudan see-30 rumialbumiinia, 20 % vuohiseerumia, 0,1 g/1 4-aminoantipyrii-niä ja 480 ng/ml monokloonista hiiri-anti-CEA-(C-3)-biotii-ni/avidiini-peroksidaasia). Tähän testiliuokseen sekoitetaan mukaan 0,050 ml CEA-standardeja (0 ng/ml CEA, 2,5 ng/ml CEA, 5,0 ng/ml CEA, 10 ng/ml CEA ja 20 ng/ml CEA) ja lisä-35 tään jokaiseen monoklonaalisella hiiri-anti-CEA-(C-19):11a herkistetty polystyreenihelmi (0 = 6,5 mm) ja inkuboidaan 10 73322 37°C:ssa 16 tuntia. Sen jälkeen polystyreenihelmet pestään kolme kertaa kulloinkin 2-5 ml:11a tislattua vettä, jokainen siirretään 0,5 ml:aan substraattipuskuria (0,1 mol/1 kaliumsitraattia, pH 5,0, jossa on 6 mmol/1 H202 ja 40 5 mmol/1 o-fenyleenidiamiinia) helmille immunologisesti sidotun peroksidaasin aktiivisuuden määrittämiseksi ja inkuboi-daan 30 minuuttia 19-26°C:ssa. Peroksidaattisen aktiivisuuden lopettamiseksi sekä värin voimakkuuden lisäämiseksi sekoitetaan mukaan 2,0 ml IN HC1 ja mitataan fotometrisesti 10 30 minuutin aikana ekstinktio aallonpituudella 492 nm. Tau lukossa IV on esitetty arvot CEA-standardeille.
Taulukko IV
CEA-standardi ^492 nm/20°C/30 min 15 0,2 mol/1 fosfaatti- 0,8 mol/1 fos- puskuria faattipuskuria 0 ng/ml CEA 0,080/0,080 0,090/0,095 2,5 ng/ml CEA 0,160/0,170 0,310/0,315 5,0 ng/ml CEA 0,230/0,235 0,450/0,460 20 10,0 ng/ml CEA 0,425/0,435 0,830/0,850 20,0 ng/ml CEA 0,810/0,825 1,700/1,650
Taulukosta IV käy selvästi ilmi, että lisätyn fosfaat-tiväkevyyden ansiosta herkkyys lisääntyy huomattavasti.
Tässä esimerkissä käytettyjä monoklonaalisia hiiri-25 anti-CEA-vasta-aineita saadaan analogisesti julkaisussa
Journal of Immunological Methods, 32 (1980) 297-304) kuvatun menetelmän kanssa, jolloin kuitenkin lähtösolulinjana fuusiota varten käytetään mainittua myeloomalinjaa Sp 2/01-AG. Fuusio tapahtuu CEA:11a immunoitujen hiirien pernaso-30 luilla. Hiirien immunoiminen tapahtui analogisesti mainitun julkaisun taulukon I kanssa, jolloin ensimmäiset kaksi im-munointia tapahtuivat kumpikin 50/ag:lla CEA:ta, immunoinnit 3 ja 4 jätettiin pois, immunointi 5 tapahtui 50 jagtlla CEA:ta ja immunoinnit 6-8 kukin 200 /ug:lla CEA:ta. Käytetään 35 kahta erilaista sopivaa monoklonaalista vasta-ainetta, jotka kohdistuvat CEA-antigeenin eri epitooppeja vastaan ja jotka nimetään anti-CEA-(C-3):ksi tai anti-CEA-(C-19):ksi.
11 7332 2
Anti-CEA-(03)-vasta-aineiden IgG-jaetta dialysoidaan yli yön 2-8°C:ssa 0,1 mol/1 natriumbikarbonaattiliuosta (pH 8,2-8,5) vastaan ja säädetään proteiinipitoisuuteen 1 mg/ml. Tätä varten lisätään sekoittaen millilitraa kohti pro-5 teiiniliuosta 120 μΐ aivan vastavalmistettua biotiini-suk-kiini-imidiesteri-liuosta (1 mg/ml dimetyylisulfoksidissa) ja inkuboidaan neljä tuntia huoneen lämpötilassa. Sen jälkeen dialysoidaan biotiini-vasta-aine-konjugaattia 2-8°C:ssa fosfaatilla puskuroitua fysiologista keittosuolaliuosta vas-10 taan, jossa on 0,66 mg/1 merfeeniä. Proteiinistabilaattorik-si lisätään 10 mg/ml naudan seerumialbumiinia.
Peroksidaasin kytkemiseksi avidiiniin 5 mg avidiinia liuotetaan 2,5 ml:aan 0,1 mol/1 natriumbikarbonaattiliuosta (pH 9,5) ja dialysoidaan yli yön 2-8°C:ssa samaa liuosta 15 vastaan. 10 mg piparjuuri-peroksidaasia liuotetaan 3,0 ml: aan tislattua vettä, annetaan seistä yksi tunti huoneen lämpötilassa, sekoitetaan sitten 0,5 ml:n kanssa vesipitoista, vastavalmistettua 0,1 mol/1 natriumperjodaattiliuosta ja inkuboidaan tasan 20 minuuttia huoneen lämpötilassa. Sitten 20 peroksidaasi vapautetaan ultrasuodattamalla ylimääräisestä natriumperjodaatista ja väkevöidään alkuperäiseen tilavuuteen. Ultrasuodatuksen jälkeen peroksidaasiliuos sekoitetaan avidiiniliuokseen, minkä jälkeen inkuboidaan kaksi tuntia huoneen lämpötilassa. Schiff-emästen pelkistämiseksi ja 25 siten kovalenttisen sidoksen stabiloimiseksi sekoitetaan avidiini-peroksidaasi-liuokseen 0,5 ml vastavalmistettua vesipitoista 0,1 mol/1 natriumboorihydridiliuosta, minkä jälkeen inkuboidaan vähintään kaksi tuntia 2-8°C:ssa. Sen jälkeen avidiini-peroksidaasi-konjugaattia dialysoidaan fos-30 faattipuskuroitua fysiologista keittosuolaliuosta vastaan, jossa on 0,66 mg/1 merfeeniä, ja stabiloidaan 10 mg/ml naudan seerumialbumiinilla.
Kompleksin muodostamiseksi sekoitetaan 55 /ui anti-CEA-(C-3)-vasta-aine-biotiini-konjugaattia 48 /ul:n kanssa avi-35 diini-peroksidaasi-konjugaatteja inkuboidaan huoneen lämpötilassa 15 minuuttia.
12 7 332 2
Keksinnön mukaista käyttöä varten kompleksi laimennetaan liuoksella, joka sisältää 0,20 mol/1 tai 0,80 mol/1 natriumfosfaattipuskuria, jonka pH on 6,5, 2 g/1 naudan seerumia Ibumiini a , 20 % vuohiseerumia ja 0,1 g/1 4-amino-anti-5 pyriiniä.
Claims (10)
1. Kiintofaasi-kerrostusmenetelmä karsinoembryonaali-sen antigeenin (CEA) nopeaksi määrittämiseksi inkuboimalla 5 tutkittavaa näytettä ensimmäisen CEA-vasta-aineen kanssa, joka on sidottu tai sidotaan veteen liukenemattomaan kanti-meen, ja toisen CEA-vasta-aineen kanssa, johon peroksidaasi on sidottu suoraan tai biotiini/avidiini-sillan kautta, erottamalla kiinteä ja nestemäinen faasi, mittaamalla peroksi-10 daasi-aktiivisuus joko kiinteässä tai nestemäisessä faasissa läsnäolevan CEA:n mitaksi, tunnettu siitä, että inkubointi suoritetaan käyttäen mukana 0,4-1,0 mol/1 fosfaatti-ioneja tai 0,2-0,4 mol/1 sulfaatti-ioneja.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n -15 n e t t u siitä, että näytettä ensin inkuboidaan ensimmäisen CEA-vasta-aineen kanssa, joka on sidottu tai sidotaan veteen liukenemattomaan kantimeen, ja pesuvaiheen jälkeen inkuboidaan toisen CEA-vasta-aineen kanssa, johon peroksidaasi on suoraan tai biotiini/avidiini-sillan kautta sidot- 20 tu, jolloin toinen inkubointi suoritetaan käyttäen mukana 0,4-1,0 mol/1 fosfaatti-ioneja tai 0,2-0,4 mol/1 sulfaatti-ione j a.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että yhdessä vasta-aineessa perok- 25 sidaasi on suoraan sidottu vasta-aineeseen.
4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että molemmat CEA-vasta-aineet saadaan eri eläinlajien antiseerumeista ja että yhdessä vasta-aineessa peroksidaasi on suoraan sidottu vasta-aineeseen.
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että käytetään vuohien ja marsujen CEA-vasta-aineita ja että vuohi-vasta-aineessa peroksidaasi on suoraan sidottu vasta-aineeseen.
6. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, 35 tunnettu siitä, että käytetään kahta eri monoklonaa-lista hiiri-CEA-vasta-ainetta ja että yhdellä monoklonaali- 14 73322 sella hiiri-CEA-vasta-aineella peroksidaasi on sidottu bio-tiini/avidiini-sillan kautta vasta-aineeseen.
7. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään CEA-vasta-ainetta, joka 5 saadaan jonkin eläimen vastaseerumista sekä monoklonaalista hiiri-CEA-vasta-ainetta ja että vastaseerumista saadulla vasta-aineella peroksidaasi on suoraan sidottu vasta-aineeseen .
8. Patenttivaatimuksen 7 mukainen menetelmä, t u n -10 n e t t u siitä, että CEA-vasta-aineina käytetään vuohi- CEA-vasta-aineita ja monoklonaalisia hiiri-CEA-vasta-ainei-ta ja että vuohi-CEA-vasta-aineilla peroksidaasi on suoraan sidottu vasta-aineeseen.
9. Vesipitoinen liuos, jonka pH on 4-9 ja joka sisäl-15 tää CEA-vasta-aineita, joihin peroksidaasi on kytketty suoraan tai biotiini/avidiini-sillan kautta, tunnettu siitä, että liuos sisältää 0,4-1,0 mol/1 fosfaatti-ioneja tai 0,2-0,4 mol/1 sulfaatti-ioneja.
10. Patenttivaatimuksen 9 mukainen vesipitoinen liuos, 20 tunnettu siitä, että peroksidaasi on kytketty suoraan vasta-aineeseen. tl 73322 15
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH540381 | 1981-08-21 | ||
| CH540381 | 1981-08-21 | ||
| CH725881 | 1981-11-11 | ||
| CH725881 | 1981-11-11 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI822800A0 FI822800A0 (fi) | 1982-08-11 |
| FI822800L FI822800L (fi) | 1983-02-22 |
| FI73322B true FI73322B (fi) | 1987-05-29 |
| FI73322C FI73322C (fi) | 1987-09-10 |
Family
ID=25697628
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI822800A FI73322C (fi) | 1981-08-21 | 1982-08-11 | Foerfarande foer bestaemning av karcinoembryonal antigen och i detta foerfarande anvaendbar loesning. |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4467031A (fi) |
| EP (1) | EP0072902B1 (fi) |
| AU (1) | AU554304B2 (fi) |
| CA (1) | CA1185526A (fi) |
| DE (1) | DE3263249D1 (fi) |
| DK (1) | DK158246C (fi) |
| ES (1) | ES515132A0 (fi) |
| FI (1) | FI73322C (fi) |
| NO (1) | NO159754C (fi) |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4578349A (en) * | 1982-04-08 | 1986-03-25 | Abbott Laboratories | Immunoassay for carcinoembryonic antigen (CEA) |
| US4631254A (en) * | 1982-12-06 | 1986-12-23 | Hoffmann-La Roche Inc. | Carcinoembryonic antigen determination |
| GB8317022D0 (en) * | 1983-06-23 | 1983-07-27 | Erba Farmitalia | Adenocarcinoma related new antigenic determinants |
| JPS6015559A (ja) * | 1983-07-06 | 1985-01-26 | Shiraimatsu Shinyaku Kk | アポリポ蛋白−ｂの酵素免疫測定試薬 |
| EP0158291A3 (en) * | 1984-04-10 | 1988-07-27 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | A method for purifying carcinoembryonic antigen and a method for producing a carcinoembryonic antigen-reactive monoclonal antibody |
| US4686180A (en) * | 1984-11-21 | 1987-08-11 | South Alabama Medical Science Foundation | Onco-fetal specific monoclonal antibodies, methods of preparation and use |
| US4873313A (en) * | 1985-01-18 | 1989-10-10 | Beckman Research Institute Of City Of Hope | Specific hybridoma cell line and monocolonal antibodies produced from such specific hybridoma cell line and method of using such monoclonal antibodies to detect carcinoembryonic antigens |
| US4722889A (en) * | 1985-04-02 | 1988-02-02 | Leeco Diagnostics, Inc. | Immunoassays using multiple monoclonal antibodies and scavenger antibodies |
| DE3609217A1 (de) * | 1986-03-19 | 1987-09-24 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur bestimmung eines reaktionspartners einer immunologischen reaktion |
| US5190864A (en) * | 1986-04-15 | 1993-03-02 | Northeastern University | Enzyme amplification by using free enzyme to release enzyme from an immobilized enzyme material |
| US4937188A (en) * | 1986-04-15 | 1990-06-26 | Northeastern University | Enzyme activity amplification method for increasing assay sensitivity |
| ATE80948T1 (de) * | 1986-07-14 | 1992-10-15 | Abbott Lab | Diagnostisches immuntest-verfahren mittels festphasenabscheidung. |
| US6013772A (en) * | 1986-08-13 | 2000-01-11 | Bayer Corporation | Antibody preparations specifically binding to unique determinants of CEA antigens or fragments thereof and use of the antibody preparations in immunoassays |
| US5888728A (en) | 1988-10-17 | 1999-03-30 | Molecular Devices Corporation | Hapten derivatized capture membrane and diagnostic assays using such membrane |
| JPH03501777A (ja) | 1988-10-17 | 1991-04-18 | モレキユラー デヴアイシズ コーポレイシヨン | ハプテン誘導捕獲膜及び該膜を使用する診断アツセイ法 |
| JP2619549B2 (ja) * | 1989-06-29 | 1997-06-11 | 日本商事株式会社 | 抗原の定量法およびそれに用いる固相 |
| US5180828A (en) * | 1990-02-09 | 1993-01-19 | Molecular Devices Corporation | Chromophoric reagents for incorporation of biotin or other haptens into macromolecules |
| US5200316A (en) * | 1990-02-15 | 1993-04-06 | Miles Inc. | Immunoassay methods using noncross reactive cea gene family members antibodies |
| NZ511705A (en) * | 2001-05-14 | 2004-03-26 | Horticulture & Food Res Inst | Methods and rapid immunoassay device for detecting progesterone and other steroids |
| WO2003069343A2 (de) * | 2002-02-14 | 2003-08-21 | Schebo Biotech Aktiengesellschaft | Verfahren zum nachweis der tumormarker: cea, ca19.9 oder ca72.4 im stuhl zur gastrointestinaler tumore |
| NZ528323A (en) * | 2003-09-18 | 2006-05-26 | Horticulture & Food Res Inst | Immunoassay |
| US20050214882A1 (en) * | 2004-03-25 | 2005-09-29 | Ez Bio Inc. | Reagents, methods and kits for the universal rapid immuno-detection |
| US20060084184A1 (en) * | 2004-10-19 | 2006-04-20 | Renovar Incorporated | Reagents for urine-based immunological assays |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1549069A (en) * | 1976-12-10 | 1979-08-01 | Erba Farmitalia | Enzyme linked immunoassay |
| US4180556A (en) * | 1977-03-09 | 1979-12-25 | Abbott Laboratories | Pretreatment method for carcinoembryonic antigen assay |
| JPS5510590A (en) * | 1978-05-04 | 1980-01-25 | Wellcome Found | Enzyme immunity quantity analysis |
| US4272504A (en) * | 1978-12-14 | 1981-06-09 | Abbott Laboratories | Antibody adsorbed support method for carcinoembryonic antigen assay |
| US4349528A (en) * | 1979-11-21 | 1982-09-14 | The Wistar Institute | Monocolonal hybridoma antibody specific for high molecular weight carcinoembryonic antigen |
| US4299815A (en) * | 1980-02-08 | 1981-11-10 | Hoffmann-La Roche Inc. | Carcinoembryonic antigen determination |
| US4376110A (en) * | 1980-08-04 | 1983-03-08 | Hybritech, Incorporated | Immunometric assays using monoclonal antibodies |
| US4466687A (en) * | 1982-05-20 | 1984-08-21 | Amp Incorporated | Low profile connector providing high density application |
-
1982
- 1982-06-26 EP EP82105693A patent/EP0072902B1/de not_active Expired
- 1982-06-26 DE DE8282105693T patent/DE3263249D1/de not_active Expired
- 1982-07-06 CA CA000406742A patent/CA1185526A/en not_active Expired
- 1982-08-11 AU AU87058/82A patent/AU554304B2/en not_active Ceased
- 1982-08-11 FI FI822800A patent/FI73322C/fi not_active IP Right Cessation
- 1982-08-16 US US06/408,388 patent/US4467031A/en not_active Expired - Fee Related
- 1982-08-19 DK DK373182A patent/DK158246C/da not_active IP Right Cessation
- 1982-08-20 ES ES515132A patent/ES515132A0/es active Granted
- 1982-08-20 NO NO822853A patent/NO159754C/no unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI822800L (fi) | 1983-02-22 |
| EP0072902A1 (de) | 1983-03-02 |
| CA1185526A (en) | 1985-04-16 |
| AU8705882A (en) | 1983-05-12 |
| DK158246B (da) | 1990-04-16 |
| ES8400147A1 (es) | 1983-10-16 |
| ES515132A0 (es) | 1983-10-16 |
| NO159754B (no) | 1988-10-24 |
| FI73322C (fi) | 1987-09-10 |
| AU554304B2 (en) | 1986-08-14 |
| US4467031A (en) | 1984-08-21 |
| NO822853L (no) | 1983-02-22 |
| NO159754C (no) | 1989-02-01 |
| DK373182A (da) | 1983-02-22 |
| DK158246C (da) | 1990-09-24 |
| EP0072902B1 (de) | 1985-04-24 |
| DE3263249D1 (en) | 1985-05-30 |
| FI822800A0 (fi) | 1982-08-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI73322B (fi) | Foerfarande foer bestaemning av karcinoembryonal antigen och i detta foerfarande anvaendbar loesning. | |
| EP0782710B1 (en) | Method for detecting antibodies | |
| CA1123336A (en) | Method for the demonstration and determination of an antigen or antibody | |
| US10830771B2 (en) | PIVKA-II assay method and method for manufacturing reagent or kit for PIVKA-II immunoassay | |
| CN110850100B (zh) | 一种检测血清抗Annexin A2-IgG抗体的试剂盒 | |
| EP0315364A2 (en) | Simultaneous immunoassay for the determination of antigens and antibodies | |
| CN112679605B (zh) | 针对新型冠状病毒核衣壳蛋白的抗体或其抗原结合片段及其应用 | |
| CN102725633A (zh) | 用于诊断心肌细胞损害的测定 | |
| CN109239367A (zh) | 测定小分子化合物的方法及试剂盒 | |
| EP0062892B1 (en) | Single incubation immunochemical assay for creatin phosphokinase mb | |
| US9952230B2 (en) | Method of inhibiting nonspecific reaction in PIVKA-II assay reagent | |
| JPH0670629B2 (ja) | 免疫反応の反応成分を測定するための方法及び試薬 | |
| CN109239368A (zh) | 测定孕酮的方法及试剂盒 | |
| EP1347301A1 (en) | Method for ultra-rapid and ultra-sensitive measurement | |
| US7074903B2 (en) | Monoclonal antibody specific to tartrate-resistant acid phosphatase 5b and use thereof | |
| US5137807A (en) | Method for determining beta-subunit of human prolyl 4-hydroxylase by immunoassay to detect hepatic disease | |
| JP2004325192A (ja) | 金コロイド凝集法によるハプテンの測定方法および測定キット | |
| JPH03170058A (ja) | イムノアッセイ用試薬複合体 | |
| JP2000055917A (ja) | 抗抗原−抗体複合体抗体を用いた検出または測定方法 | |
| JPS60249058A (ja) | Ａｔｌウイルス抗体の測定方法および試薬 | |
| EP0193935B1 (en) | Method for determining human prolyl 4-hydroxylase by immunoassay | |
| EP0138946B1 (en) | Methods for monitoring the status of cancer in humans | |
| JP2763910B2 (ja) | 血液中の特異的結合性物質の検出方法及び該方法実施用の試験キット | |
| Akman et al. | An Enzymeimmunoassay for total Thyroxine using avidin-biotin separation system and Thyroxine-Peroxidase conjugate | |
| AU1642792A (en) | Denatured vehicular proteins to improve enzyme linked immunosorbent assays |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: F. HOFFMANN-LA ROCHE AG |