FI69640B - Reagens foer lipasbestaemning och foerfarande foer framstaellning av denna - Google Patents
Reagens foer lipasbestaemning och foerfarande foer framstaellning av denna Download PDFInfo
- Publication number
- FI69640B FI69640B FI800199A FI800199A FI69640B FI 69640 B FI69640 B FI 69640B FI 800199 A FI800199 A FI 800199A FI 800199 A FI800199 A FI 800199A FI 69640 B FI69640 B FI 69640B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- weight
- reagent according
- reagent
- protective colloid
- activator
- Prior art date
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 58
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 41
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 29
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Inorganic materials [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 27
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 21
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 19
- 102000005311 colipase Human genes 0.000 claims description 19
- 108020002632 colipase Proteins 0.000 claims description 19
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 claims description 18
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims description 17
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 15
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims description 14
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims description 14
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 claims description 14
- BAECOWNUKCLBPZ-HIUWNOOHSA-N Triolein Natural products O([C@H](OCC(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC)C(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC BAECOWNUKCLBPZ-HIUWNOOHSA-N 0.000 claims description 14
- PHYFQTYBJUILEZ-UHFFFAOYSA-N Trioleoylglycerol Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC PHYFQTYBJUILEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims description 14
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 14
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 claims description 14
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 14
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 14
- PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N triolein Chemical group CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N 0.000 claims description 14
- 229940117972 triolein Drugs 0.000 claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 11
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 11
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical class C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 claims description 7
- -1 bile acid alkali salt Chemical class 0.000 claims description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 6
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 claims description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 5
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 claims description 2
- 150000002402 hexoses Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 claims 1
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 44
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 27
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 26
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 19
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 19
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 19
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 18
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 18
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 18
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 18
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 14
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229940040461 lipase Drugs 0.000 description 12
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 12
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 11
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 6
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 235000019626 lipase activity Nutrition 0.000 description 5
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 5
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 3
- AWDRATDZQPNJFN-VAYUFCLWSA-N taurodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 AWDRATDZQPNJFN-VAYUFCLWSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 2
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 2
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108010035713 Glycodeoxycholic Acid Proteins 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 2
- UYXTWWCETRIEDR-UHFFFAOYSA-N Tributyrin Chemical compound CCCC(=O)OCC(OC(=O)CCC)COC(=O)CCC UYXTWWCETRIEDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000003841 chloride salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- WVULKSPCQVQLCU-BUXLTGKBSA-N glycodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 WVULKSPCQVQLCU-BUXLTGKBSA-N 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 1,3-dihydroxypropan-2-yl formate Chemical compound OCC(CO)OC=O LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical group [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- WVULKSPCQVQLCU-UHFFFAOYSA-N Glycodeoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(=O)NCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 WVULKSPCQVQLCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006173 Good's buffer Substances 0.000 description 1
- 101001134456 Homo sapiens Pancreatic triacylglycerol lipase Proteins 0.000 description 1
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N N,N-bis(2-hydroxyethyl)glycine Chemical compound OCCN(CCO)CC(O)=O FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000007817 Olea europaea Species 0.000 description 1
- 208000016222 Pancreatic disease Diseases 0.000 description 1
- 108050006759 Pancreatic lipases Proteins 0.000 description 1
- 102000019280 Pancreatic lipases Human genes 0.000 description 1
- 206010033647 Pancreatitis acute Diseases 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WBWWGRHZICKQGZ-UHFFFAOYSA-N Taurocholic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)C1(C)C(O)C2 WBWWGRHZICKQGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 201000003229 acute pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 239000007998 bicine buffer Substances 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 1
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000002183 duodenal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 102000046759 human PNLIP Human genes 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 229940116369 pancreatic lipase Drugs 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- WBWWGRHZICKQGZ-GIHLXUJPSA-N taurocholic acid Chemical compound C([C@@H]1C[C@H]2O)[C@@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@H](O)C1 WBWWGRHZICKQGZ-GIHLXUJPSA-N 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 230000008646 thermal stress Effects 0.000 description 1
- 238000007817 turbidimetric assay Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 description 1
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/44—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/107497—Preparation composition [e.g., lysing or precipitation, etc.]
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
...... ffr-, :~~1 .......KUULUTUSJULKAISU
B 11 UTLÄGG NIN GSSKRIFT 6 9640
C (45) Pit.:/. *. ti nyönnctty , p- t··'·.·’t r.-2 2* ! λ t 10 00 3 0-2C
(51) Kv.lk.4/lnt.CI.* C 12 Q 1 /kk (21) Patenttihakemus — Patentansokning 800199 (22) Hakemispäivä — Ansökningsdag 23-01 .80 (Fi) (23) Alkupäivä — Giltighetsdag 23-01 .80 (41) Tullut julkiseksi — Blivit offentlif 06.08.80
Patentti- ja rekisterihallitus Njhtäväksipanon ja kuui.julkaisun pvm.— 29.ll.85
Patent- och registerstyrelsen ' Ansökan utlagd och utl.skriften publicerad (32)(33)(31) Pyydetty etuoikeus—Begärd prioritet 05-02-79
Saksan Li i ttotasava1 ta-Förbundsrepubl iken Tyskland(DE) P 290^305-8 (71) Boehringer Mannheim GmbH., Sandhofer Strasse 112-132, 6800 Mannheim--Waldhof, Saksan Liittotasavalta-Förbundsrepubl iken Tyskland(DE) (72) Ulrich Neumann, Peissenberg, Kar1-Wolfgang Knitsch, Andechs,
Joachim Ziegenhorn, Starnberg, Albert Röder, Seeshaupt,
Werner Zwez, Seeshaupt, Werner Kramer, Bernried,
Saksan Liittotasavalta-Förbundsrepubliken Tyskland(DE) (7h) Berggren Oy Ab (5A) Reagenssi 1ipaasimääritystä varten ja sen valmistusmenetelmä -
Reagens för 1ipasbestämning och förfarande för framställning av denna Keksinnön kohteena on reagenssi lipaasin määritystä varten etenkin turbidimetrisessä testissä sekä sen valmistusmenetelmä.
Haimasairauden diagnostiikkaa varten on amylaasi- (E.D. 3.2.1) ja lipaasi- (E.C. 3.1.1.3) määrityksellä erittäin suuri merkitys. Akuutissa pankreatiitissa tapahtuu muutamassa tunnissa molempien entsyymien jopa voimakasta nousua seerumissa. Vahingoittumattomassa munuaistoiminnassa erittyy amylaasi kuitenkin vähäisemmän molekyylipainonsa johdosta jälleen nopeammin, kun taas lipaasi-aktiivisuus pysyy seerumissa pitkähkön ajan korkeana. Varma pankreatiitin diagnoosi saadaan molempien entsyymien määrityksen avulla.
Lipaasi pilkkoo pääasiassa triglyseridien α-esterisidoksia, joissa triglyserideissä on edullisesti pitkäketjuisia rasvahap-poradikaaleja, diglyseridiksi ja vapaiksi rasvahapoiksi. Tätä seuraava reaktio monoglyseridiksi tapahtuu huomattavasti hitaammin.
2 69640
Tavanomaisten, entsyymillä katalysoitujen reaktioiden tapahtuessa vesifaasissa vaikuttaa lipaasi vain öljypisara/vesi-rajapin-nalla. Näin se eroaa esteraaseista, jotka reagoivat vesifaasissa. Kemiallisten parametrien lisäksi vaikuttaa tästä syystä substraatin pinnan laatu suuressa määrin kinetiikkaan.
Titrimetriset lipaasin määritysmenetelmät ovat tunnettuja. Näitä voitaisiin kuitenkin käyttää vain rajoitetussa määrin kliiniskemiallisissa rutiinilaboratorioissa, osittain vaikean käsitel-tävyyden, pitkän reaktioajan ja suuren näytteentarpeen johdosta.
Titrimetrisen määritysmenetelmän olennaiset haitat, nimittäin suuri näytteentarve ja pitkät inkubaatioajät, vältetään turbi-dimetrisissä menetelmissä, joissa triglyseridi/vesi-emulsion sameuden kirkastumista seurataan fotometrisesti. Turbidimetri-sen määrityksen huomattavana ongelmana on kuitenkin ollut sellaisen emulsion valmistus, jolla aina luotettavasti on sama pisarakoko. Tämä on erityisen tärkeää, koska reaktion kinetiikkaan vaikuttaa voimakkaasti triglyseridipisaroiden koko. DE-kuulutus-julkaisusta 19 61 983 tunnetaan tosin jo oliiviöljy-kuivaemulsio, joka soveltuu lipaasiaktiivisuuden titrimetriseen määritykseen. Tässä kuivaemulsiossa on kuitenkin triglyseridipitoisuus niin korkea, ettei se sovellu sameuden kirkastumisen fotometriseen määritykseen suuren valon absorption johdosta. Laimennettaessa tätä reagenssia, jotta sitä voitaisiin käyttää myös turbidimetri-seen kineettiseen lipaasin määritykseen, muuttuvat parametrit kuitenkin niin, ettei enää saavuteta nollannen kertaluvun reaktiota .
Keksinnön eräs tehtävä on luoda etenkin lipaasin turbidimetris-tä tai nefelometristä aktiivisuusmääritystä varten sopiva rea-genssi, joka esiintyy pisaramuodossa ja joka voidaan muuttaa yksinkertaisesti veteen sekoittamalla emulsioksi, jossa on toistuvasti sama pisarakoko. Eräs keksinnön toinen päämäärä on luoda sellainen reagenssi, jossa alkuperäiseen väkevyyteen liuotetun emulsion pisarakokoa voidaan säätää kuivareagenssin kvantitatiivisen koostumuksen avulla ja on pitkälti riippumaton kuivareagenssin valmistuksessa käytetystä triglyseridiemulsiosta. Tämän avulla vältytään siltä, ettei käyttäjän tarvitse valmistaa itse 11 3 69640 triglyseridiemulsiota välittömästi ennen testin suorittamista. Koska substraatin pinnan laatu määrää suuressa määrin entsyymin aktiivisuuden (Clin. Chem. 23, 522-53, 1977), tarvitaan luotettavia tuloksia varten muuttumaton substraattipinta, myös pisarakoon suhteen. Emulsion laatu on kuitenkin hyvin voimakkaasti riippuvainen valmistustekniikasta ja kokemuksen mukaisesti jopa noudatettaessa määrättyjä määräyksiä eri henkilöiden suorittamana erilainen, niin että esiintyy huomattavia poikkeamia mitatuissa aktiivisuusarvoissa. Myös tämä vaikeus on poistettavissa keksinnön avulla.
Tämä tehtävä ratkaistaan alkuperäiseen väkevyyteen liuotettavissa olevalla kuivareagenssilla etenkin turbidimetristä lipaasin määritystä varten, mikä reagenssi lisättäessä vettä muodostaa emulsion, jossa on substraattiöljyä, suojakolloidia, emulgaat-toria ja aktivaattoria ja joka on tunnettu siitä, että se sisältää 0,2 - 10 paino-% nestemäistä triglyseridiä, 20 - 90 paino-% suojakolloidia, 5 - 60 paino-% sappihappoalkalisuolaa, 0,001 - 0,1 paino-% kolipaasia, 0,1 - 2,0 paino-% säilöntäainetta, 5-20 paino-% virtsa-ainetta, 3 - 50 paino-% puskuriainetta pH-arvoa 6,0 - 10,5 varten ja 0,5 - 5 paino-% aktivaattoria.
Yllättävästi on osoittautunut, että kuivareagenssin keksinnön mukaisella koostumuksella kvantitatiivisen koostumuksen pysyessä samana saadaan luotettavasti alkuväkevyyteen liuotetulle emulsiolle aina sama pisarakoko ja tämän lisäksi on myös substraatin pinnan laatu toistettavasta sellainen, että saadaan aina aikaan korkea reaktionopeus ja nollannen kertaluvun reaktionkulku, mikä on edellytyksenä käytännön mukaista turbidimetristä, kineettistä aktiivisuusmääritystä varten.
Muuttamalla reagenssin kvantitatiivista koostumusta yllä ilmoitettujen reagenssin yksittäisten ainesosien vaihtelurajojen puitteissa voidaan valmistustavasta riippumatta määrätä alkuväkevyyteen liuotetun emulsion haluttu pisarakoko. Koska mitattavan rea-genssierän alkuekstinktio riippuu triglyseridin pitoisuudesta, 4 69640 on yleensä lähdettävä määrätystä halutusta triglyseridipitoisuu-desta ja muiden ainesosien määrät voidaan sitten sovittaa kulloinkin kyseessä oleviin olosuhteisiin halutun pisarakoon suhteen.
Triglyseridiksi soveltuvat sinänsä sekä luonnolliset että myös synteettiset triglyseridit, joissa on noin 4-22 C-atomia sisältäviä rasvahapporadikaaleja. Esimerkiksi osoittautui myös tributyriini sopivaksi. Parhaimpana pidetään kuitenkin triglyseridejä, joissa on pitempiketjuisia tyydyttämättömiä rasvahapporadikaale ja , erityisesti triglyseridejä, joiden rasva-happoradikaaleissa on 8 - 20 C-atomia ja 1 - 8, erityisesti 1 -3 hiili-hiili-kaksoissidosta. Trioleiini on erityisen edullinen, koska sitä on helposti saatavilla, mutta myös oliiviöljy on erittäin sopiva. Edullinen triglyseridimäärä on 0,2 - 2,0 paino- % .
SuojakoIloidina tulevat kysymykseen asiantuntijalle tähän asti tarkoitukseen tunnetut aineet, kuten polyhydroksiyhdisteet, seerumalbumiini, polyvinyylipyrrolidoni, kiinteät polyetyleenioksidit yms. Parhaimpana pidetään polyhydroksiyhdisteitä, etenkin monomeerista heksoosia, huoneenlämpötilassa kiinteää polyetyleeniglykolia. Esimerkkejä edullisista polyhydroksiyhdisteistä ovat manniitti ja senkaltaiset sokerialkoholit, glukoosin oligosakkaridi, mannoosi, malto-heptoosi, polyetyleeniglykoli, jossa on keskimääräinen molekyyli-paino 3500 - 7000, yms. Muita käyttökelpoisia suojakolloideja ovat esim. aminohapot, kuten alaniini, kasvikumit, kuten arabi-kumi jne. Parhaimpana pidetty suojakolloidin tai suojakolloi-dien seoksen määrä on 50 - 70 paino-%. Erittäin sopivaksi osoittautui sokerialkoholin ja polyalkyleeniglykolin seos.
Sappihappoina tulevat kysymykseen tunnetut pinta-aktiiviset sap-pihapot, kuten koolihappo, taurokoolihappo, desoksikoolihappo, taurodesoksikoolihappo, glykodesoksikoolihappo tai näiden alkali-suolat, etenkin natriumsuola. Parhaimpana pidetty määrä on 10 -15 paino-%.
Keksinnön mukaisen reagenssin eräs olennainen ainesosa on kolipaa-si. Erittäin sopiva on epäpuhtauksista vapaa kolipaasi. Parhaimpana pidetty määrä on 0,003 - 0,01 paino-%.
5 69640 Säilöntäaineena käytetään keksinnön puitteissa sellaisia aineita, jotka eivät haittaa määrättävän lipaasin entsymaattista aktiivisuutta. Erittäin sopivia ovat alkaliatsidit, etenkin natriumat-sidi. Myös muita säilöntäaineita, kuten esim. tiotsidia ja muita rikkipitoisia säilöntäaineita voidaan käyttää. Parhaimpana pidetty säilöntäaineen määrä on 0,2 - 0,7 paino-%.
Keksinnön mukainen reagenssi sisältää lisäksi virtsa-ainetta, edullisesti 10 - 15 paino-%.
Puskuriaineeksi soveltuvat kaikki tunnetut puskuriaineet, jotka pystyvät keksinnön mukaisen reagenssin puitteissa säätämään pH-arvon välille 6,0 - 10,5. Edullinen pH-arvon alue on 8,3 - 9,5. Esimerkkejä sopivista puskuriaineista ovat dietanoliamiini-pus-kuri, trietanoliamiini-puskuri, Tris-puskuri ja Good-puskuri, kuten Hepes-puskuri (soveltuu hyvin lisättäväksi ennen lyofi-lointia), Taps-puskuri ja Bicine. Erittäin sopiva on Tris-puskuri. Edullinen puskuriainemäärä on 3 - 10 paino-%. Eräs toinen aktivaattori on kalsium-ionit. Koska nämä muodostavat desoksi-koolihapon kanssa liukenemattomia yhdisteitä, pidetään kalsiumin läsnäollessa taurodesoksikoolihappoa edullisena sappihappona, koska tämä sallii korkeammat kalsiumpitoisuudet alueella 1-5 mmoolia.
Paitsi mainittuja olennaisia ainesosia voi keksinnön mukainen reagenssi sisältää myös määrättyjä tarkoituksia varten inerttejä lisäaineita (täyteaineita), jotka helpottavat käsittelyä.
Keksinnön mukainen reagenssi sisältää myös lipaasin aktivaatto-rin. Lipaasiaktivaattorit ovat tunnettuja. Parhaimpana pidetään klorideja, etenkin natriumkloridia, mutta myös muita alkali- tai maa-alkaliklorideja, mikäli nämä eivät muodosta liukenemattomia yhdisteitä keksinnön mukaisten reagenssien tai näytteen ainesosien kanssa. Myös magnesium-ionit vaikuttavat aktivoivasti.
Keksinnön mukaisen reagenssin yksittäisten ainesosien toiminta tavasta ei olla keksinnön puitteissa täysin selvillä. Oletetaan kuitenkin, että kolipaasi poistaa sappihapposuolan, etenkin 6 69640 desoksikolaatin, taurodesoksikolaatin tai glykodesoksikolaatin korkean pitoisuuden aiheuttaman entsyymin aktiivisuuden alentumisen ja parantaa reaktiokulun lineaarisuutta. Virtsa-aine näyttää vaikuttavan emulsion vesi/lipidi-pintaan ja stabiloivan tätä.
Keksinnön mukainen kuivareagenssi valmistetaan lyofiloimalla ainesosista tavanomaisin menetelmin valmistettu emulsio. Tällöin lisätään edullisesti puskuriainetta, virtsa-ainetta ja mahdollisesti myös osa suojakolloidista ja säilöntäaineesta sekä mahdollisesti aktivaattoria vasta "kuivaemulsion" lyofiloinnin jälkeen. LyofHoitava emulsio voidaan valmistaa tavanomaisten menetelmien mukaan, esim. saattamalla kaikki ainesosat vesipitoiseen liuotti-meen, emulgoimalla tavanomaisilla menetelmillä, kuten ultraäänellä, kolloidimyllyllä tms. ja lopuksi jäädyttämällä n. -40°C:ssa ja kuivaamalla tyhjössä tavanomaisissa olosuhteissa, siis n. 10 -4 - 10 torr'issa.
Lyofiloinnissa on lisättävä sappihapposuola, kolipaasi, korkeintaan 10 paino-% suojakolloidia, ainakin osa säilöntäainetta ja mahdollisesti aktivaattoria. Eräs edullinen menetelmä lyofHoitavan vesiemulsion valmistamiseksi on se, jossa liuotetaan mainitut ainesosat, paitsi triglyseridi, veteen ja lisätään sitten liuokseen, haihtuvaan orgaaniseen liuottimeen liuotettu triglyseridi hienona suihkuna samalla sekoittaen. Haihtuviksi orgaanisiksi liuottimik-si soveltuvat tällöin etenkin alifaattiset alkoholit ja ketonit, joissa on 1 - 4 hiiliatomia.
Keksinnön mukaisen reagenssin muut ainesosat, nimittäin puskuri, virtsa-aine ja mahdollisesti loppu suojakolloidista, säilöntäaine ja aktivaattori voidaan lisätä lyofiloituun tuotteeseen välittömästi sen valmistuksen jälkeen tai vasta myöhemmin.
Kuten jo mainittiin, havaittiin yllättäen, että keksinnön mukainen reagenssi tuottaa alkuväkevyyteen tapahtuvan liuotuksen jälkeen ekstinktion tai ekstinktion muutoksen aikayksikköä kohden, joka on pitkälti riippumaton alkuemulsion ekstinktiosta ja reagenssin valmistustavasta. Tämän lisäksi on alkuväkevyyteen liuotetun emulsion ekstinktiovakio yllättävän hyvä.
7 69640
Sappihapposuolat puhdistetaan edullisesti epäpuhtauksista, kuten hajaantumistuotteista ja muusta sellaisesta, esim. uuttamalla n-butanolilla aikalisissä olosuhteissa, uudelleenkiteyttämällä alkoholi/asetonista ja muilla puhdistusmenetelmillä.
Tätä keksinnön mukaisen reagenssin yllättävää ominaisuutta tutkittiin määrittämällä pisarakoon jakaantuminen ennen lyofilointia ja sen jälkeen Coulter-laskijän avulla. Tällä laitteella on mahdollista määrittää hiukkasten, joiden läpimitta on 480 - 16000 nm, prosentuaalinen jakaantuminen 100 - 1000 nm-välein. Tällöin osoittautui, että pisarajakaantuma vaihteli ennen lyofilointia erä erältä erittäin voimakkaasti, mutta jossa kuitenkin oli lyofiloin-nin ja mahdollisesti muiden menetelmävaiheiden jälkeen, kuten reagenssin muiden ainesosien lisäämisen yms. jälkeen aina hyvin yhtäpitävä jakaantumismalli (termodynaamisen tasapainon säätö). Näin valmistetulle kuivaemulsiolle on edelleen tunnusomaista, että myös termisessä rasituksessa (3 viikkoa/35°C) on erittäin hyvä pisara jakaantuman vakavuus taattu. Pisarajakaantuman maksimiarvon havaittiin olevan 500 - 1000 nm. Keksinnön mukainen reagenssi soveltuu tästä syystä erittäin hyvin sameuden kirkastamisen fotometristä seurantaa varten 340 tai 365 nm:ssä. Hiukkaskoossa joka on olennaisesti alle 340 nm, ei voida enää havaita trigly-seridipisaroiden hajaantumista, suuret pisarat sitä vastoin eivät ole lipaasin ideaalinen perusaine.
Keksinnön mukaisen reagenssin eräs olennainen etu on se, että sillä on sekä ihmisen haimalipaasissa että myös sian haimali-paasissa sama aktiivisuusmuutos aikayksikköä kohden. Koska tit-rimetrisessä testissä (Rick'in mukaan) nämä molemmat lipaasit osoittavat samoja aktiivisuuspitoisuuksia, on mahdollista käyttää kalibrointia varten sian haimaa sisältävää standardia.
Keksinnön mukaisen reagenssin eräs toinen olennainen etu on vii-pymävaiheen puuttuminen. On tunnettua, että turbidimetrisessä lipaasitestissä saavutetaan vasta jonkin ajan kuluttua nollannen kertaluvun reaktionkulku. Tämänlaatuinen reaktionkulku on kuitenkin entsyymin aktiivisuuspitoisuuksien tarkkaa määritystä varten välttämättä tarpeellinen (vrt. H.U. Bergmeyer, Grundlagen 8 69640 der enzymatischen Analyse, 1979, alkaen s. 58). Tämän reaktion-kulun saavuttamiseen kuluvaa aikaa kutsutaan viipymävaiheeksi.
Seuraavat esimerkit selvittävät keksintöä lähemmin yhdessä oheisten piirustusten kanssa. Piirustuksen kuviot esittävät graafisesti Coulter-laskijassa eri esimerkkien kohdalla selitetyissä kokeissa saatuja emulsion pisarakoon jakaantumista.
Esimerkki 1 0,06 g CaCl2, 22,72 g natriumdesoksikolaattia, 25,35 g polyety-leeniglykolia (MG 4000), 1,1 g natriumatsidia, 0,02 g kolipaasia ja 50,8 osaa manniittia liuotetaan 1,0 l:aan tislattua vettä. Saatuun liuokseen ruiskutetaan sekoittaen 1,42 g trioleiinia, joka on liuotettu 32 ml:aan n-propanolia, 2 baarin paineessa läpimitaltaan 1,5 mm olevan suuttimen kautta. Näin saatu trio-leiiniemulsio jäädytetään -40°C:ssa ja kuivataan lyofiloimalla.
8,95 g natriumdesoksikolaattia, 7,25 g Tris-puskuria, 1,20 g Tris-HCl:a, 7,5 g polyetyleeniglykolia (MG 4000), 1,97 g NaClra, 16,2 g virtsa-ainetta ja 56,9 g manniittia sekoitetaan kuivina keskenään. 2 paino-osaa näin saatua puskuriaineseosta sekoitetaan 1 paino-osaan lyofiloitua tuotetta kierukkasekoittimella homogeeniseksi reagenssiksi.
Lipaasimäärityksen suorittamiseksi 150 mg tätä reagenssia liuotetaan 2,5 ml:aan vettä, tähän sekoitetaan 0,1 ml näytettä ja mitataan fotometrisesti 365 nm:ssä 25°C:ssa vettä vastaan. Näytteiksi soveltuvat seerumi, pohjukaissuolen neste, virtsa ja muut kehon nesteet.
Menetelmän tarkkuutta tutkittiin vertailemalla sitä Rick'in mukaiseen titrimetriseen menetelmään. Tutkittaessa 60 ihmisen seerumia, joissa oli erilainen lipaasiaktiivisuus, saatiin seuraavat arvot:
Korrelaatio" (x = Rick; y = keksinnön mukainen testi) Y = 0,93 . x - 20; r = 0,96.
Testin lineaarisuus säilyi n. 1300 Rick-yksikköön asti.
69640 s
Rick-yksikkö = l^umoolia FFA/min. = 1 U FFA = vapautetut rasvahapot.
Esimerkki 2 1.5 g manniittia, 0,9 g polyetyleeniglykolia (MG 4000), 0,524 g natriumdesoksikolaattia, 1,5 mg kolipaasia ja 8 mg natriumatsi-dia liuotetaan 50 ml:aan tislattua vettä. Tähän liuokseen ruiskutetaan hienon suuttimen kautta 150 mg trioleiinia, joka on liuotettu 5,0 ml:aan propanolia, samalla sekoittaen. Näin saatu emulsio jäädytetään -40°C:ssa ja lyofiloidaan.
3.5 g virtsa-ainetta, 3,73 g natriumdesoksikolaattia, 0,4 g NaCl:a, 0,1 g natriumatsidia, 2 mg kalsiumkarbonaattia, 1,355 g Tris-puskuria ja 0,2 g Tris.HCl:a sekoitetaan perusteellisesti keskenään. Tähän lisätään hienonnettu kuiva lyofiloitu tuote ja sekoitetaan homogeeniseksi.
Täydellinen seos = 12,3705 g sisältää: manniitti 1,500 g polyetyleeniglykoli 0,900 g summa = 2,400 g= 19,4 paino-% natriumdesoksikolaatti 4,254 g = 34,4 paino-% kolipaasi 1,5 mg 0,01 paino-% trioleiini 0,150 g 1,2 paino-% natriumatsidi 0,108 g 0,87 paino-%
Ca/NaCl 0,402 g 3,25 paino-%
Tris 1,355 g
Tris.HCl 0,200 g summa = 1 ,555 g= 12,57 paino-% virtsa-aine 3,500 g = 28,3 paino-% 37 mg tätä seosta liuotetaan 2,5 ml:aan tislattua vettä ja mitataan 200yUl näytteen (seerumin) kanssa 340 nm:ssä ja 25 tai 30°C: ssa vettä tai ilmaa vasten fotometrisesti. Lipaasiaktiivisuuden määritys tapahtuu ekstinktioerotuksesta/min.
Piirustuksen kuvio 1 esittää pisarakoon jakaantumista alkuväke-vyyteen tapahtuneen liuotuksen jälkeen sekä juuri valmistetulla reagenssilla että myös kuivareagenssin 3 viikkoa kestäneen 35°C:ssa tapahtuneen kuumennuksen jälkeen mitattuna Coulter-laskijän avulla.
10 69640
Esimerkki 3 8.41 g naudan seerumalbumiinia, 12,2 g natriumdesoksikolaattia, 0,02 g natriumatsidia ja 0,034 g kolipaasia liuotetaan 100 ml:aan tislattua vettä. Samalla sekoittaen ruiskutetaan paineella tähän liuokseen liuos, jossa on 3,5 g trioleiinia ja 7 ml propanolia. Näin saatu emulsio jäädytetään -40°C:ssa ja lyofiloidaan.
17.4 g manniittia, 4 g kiinteätä polyetyleeniglykolia, 7 g virtsa-ainetta, 7,47 g natriumdesoksikolaattia, 0,82 g NaCl:a, 0,2 g natriumatsidia, 2,71 g Tris-puskuria ja 0,4 g Tris.HCl:a jauhetaan ja sekoitetaan perusteellisesti keskenään. Tähän lisätään hienonnettu kuivaemulsio ja sekoitetaan homogeeniseksi.
90 mg tätä jauhemaista reagenssia lisätään 2 ml:aan tislattua vettä ja liukenemisen jälkeen tähän sekoitetaan 100^,ul näytettä (seerumia). Reaktiota seurataan fotometrisesti 340 (365) nm: ssä Hg.
Esimerkki 4 8.41 g alaniinia, 1,22 g natriumdesoksikolaattia, 0,02 g natriumatsidia ja 0,034 g kolipaasia liuotetaan 100 ml:aan tislattua vettä. Samalla sekoittaen ruiskutetaan tähän liuokseen paineella liuos, jossa on 3,5 g trioleiinia 7 ml:ssa propanolia. Näin saatu emulsio jäädytetään -40°C:ssa ja lyofiloidaan.
17.4 g manniittia, 4 g kiinteätä polyetyleeniglykolia, 7 g virtsa-ainetta, 7,47 g natriumdesoksikolaattia, 0,82 g NaCl:a, 0,2 g natriumatsidia, 2,71 g Tris-puskuria ja 0,4 g Tris.HCl:a jauhetaan ja sekoitetaan perusteellisesti keskenään. Tähän lisätään hienonnettu kuivaemulsio ja sekoitetaan homogeeniseksi.
90 mg tätä jauhemaista reagenssia lisätään 2 ml:aan tislattua vettä ja liuotuksen jälkeen tähän sekoitetaan lOO^ul näytettä (seerumia). Reaktiota seurataan fotometrisesti 340 (365) nm: ssä Hg.
Esimerkki 5 4,205 g polyetyleeniglykolia (MG 4000), 4,205 g naudan seerumalbumiinia, 1,22 g natriumdesoksikolaattia, 0,02 g natriumatsidia ja 0,034 g kolipaasia liuotetaan 100 ml:aan tislattua vettä.
il
Samalla sekoittaen ruiskutetaan tähän liuokseen paineella liuosta, jossa on 3,5 g trioleiinia 7 mlrssa propanolia. Näin saatu emul sio jäädytetään -40°C:ssa ja lyofiloidaan.
11 69640 17.4 g manniittia, 4 g polyetyleeniglykolia (MG 4000), 7 g virtsa-ainetta, 7,47 g natriumdesoksikolaattia, 0,82 g NaCl:a, 0,2 g natriumatsidia, 2,71 g Tris-puskuria ja 0,4 g Tris.HClra jauhetaan ja sekoitetaan perusteellisesti keskenään. Tähän lisätään hienonnettu kuivaemulsio ja sekoitetaan homogeeniseksi.
90 mg tätä jauhemaista reagenssia lisätään 2 ml:aan tislattua vettä ja tähän sekoitetaan liukenemisen jälkeen lOO^ul näytettä (seerumia) . Reaktiota seurataan fotometrisestä. 340 (365) nm: ssä Hg.
Esimerkki 6 6,73 g polyetyleeniglykolia (Polywachs 4000), 1,68 g polyvinyyli-pyrrolidonia, 1,22 g natriumdesoksikolaattia, 0,02 g natriumatsidia ja 0,034 g kolipaasia liuotetaan 100 ml:aan tislattua vettä. Liuokseen ruiskutetaan sekoittaen paineella liuos, jossa on 3,5 g trioleiinia 7 ml:ssa propanolia. Näin syntynyt emulsio jäädytetään -40°C:ssa ja lyofiloidaan.
17.4 g manniittia, 4 g polyetyleeniglykolia, 7 g virtsa-ainetta, 7,47 g natriumdesoksikolaattia, 0,82 g NaCl:a, 0,2 g natriumatsidia, 2,71 g Tris-puskuria ja 0,4 g Tris.HCl:a jauhetaan ja sekoitetaan perusteellisesti keskenään. Tähän lisätään hienonnettu kuivaemulsio ja sekoitetaan homogeeniseksi.
90 mg tätä jauhemaista reagenssia lisätään 2 ml:aan tislattua vettä ja tähän sekoitetaan liukenemisen jälkeen 100^,ul näytettä (seerumia). Reaktiota seurataan fotometrisesti 340 (365) nm: ssä Hg.
Esimerkki 7 (Vertailuesimerkki; liian vähän sappihapposuolaa) 4,69 g manniittia, 4,69 g polyetyleeniglykolia (Polywachs 4000), 0,38 g natriumdesoksikolaattia, 0,02 g natriumatsidia ja 0,034 g kolipaasia liuotetaan 100 ml:aan tislattua vettä. Samalla sekoittaen tähän liuokseen ruiskutetaan paineella liuos, jossa on 6 9 6 4 0 3,5 g trioleiinia 7 ml:ssa propanolia. Näin syntynyt emulsio jäädytetään -40°C:ssa ja lyofiloidaan.
17.4 g manniittia, 4 g polyetyleeniglykolia (MG 4000), 7 g virtsa-ainetta, 7,47 g natriumdesoksikolaattia, 0,82 g NaCl:a, 0,2 g natriumatsidia, 2,71 g Tris-puskuria ja 0,4 g Tris.HClra jauhetaan ja sekoitetaan perusteellisesti keskenään. Tähän lisätään hienonnettu kuivaemulsio ja sekoitetaan homogeeniseksi.
90 mg tätä jauhemaista reagenssia lisätään 2 ml:aan tislattua vettä ja tähän sekoitetaan liukenemisen jälkeen 100^,ul näytettä (seerumia). Reaktiota seurataan fotometrisesti 340 (365) nm: ssä Hg.
Piirustuksen kuvio 2 esittää pisarakoon jakaantumista ilman kuumennusta ja kuumennuksen jälkeen (ks. esimerkki 2).
Esimerkki 8 (Vertailuesimerkki) 3,76 g manniittia, 5,63 g polyetyleeniglykolia (MG 4000), 0,19 g natriumdesoksikolaattia, 0,02 g natriumatsidia ja 0,034 g koli-paasia liuotetaan 100 ml:aan tislattua vettä. Sekoittaen ruiskutetaan tähän liuokseen paineella liuos, jossa on 3,5 g trioleiinia 7 ml:ssa propanolia. Näin syntynyt emulsio jäädytetään -40°C:ssa ja lyofiloidaan.
17.4 g manniittia, 4 g polyetyleeniglykolia (MG 4000), 7 g virtsa-ainetta, 4,47 g natriumdesoksikolaattia, 0,82 g NaCl:a, 0,2 g natriumatsidia, 2,71 g Tris-puskuria ja 0,4 g Tris.HCl:a jauhetaan ja sekoitetaan perusteellisesti keskenään. Tähän lisätään hienonnettu kuivaemulsio ja sekoitetaan homogeeniseksi.
90 mg tätä jauhemaista reagenssia lisätään 2 ml:aan tislattua vettä ja tähän sekoitetaan liukenemisen jälkeen lOO^ul näytettä (seerumia). Reaktiota seurataan fotometrisesti 340 (365) nm: ssä Hg.
Piirustuksen kuvio 3 esittää pisarakoon jakaantumisen ilman kuumennusta ja kuumennuksen jälkeen (ks. esimerkki 2).
13 69640
Esimerkki 9 8.88 g manniittia, 0,86 g natriumdesoksikolaattia, 0,1 g natrium-atsidia ja 0,034 g kolipaasia liuotetaan 100 ml:aan tislattua vettä. Sekoittaen ruiskutetaan tähän liuokseen paineella liuos, jossa on 2,5 g trioleiinia 7 ml:ssa propanolia. Näin syntynyt emulsio jäädytetään -40°C:ssa ja lyofiloidaan.
22,4 g manniittia, 4 g polyetyleeniglykolia (MG 4000), 2 g virtsa-ainetta, 7,47 g natriumdesoksikolaattia, 0,82 g NaClra, 0,2 g natriumatsidia, 2,71 g Tris-puskuria ja 0,4 g Tris.HCl:a jauhetaan ja sekoitetaan perusteellisesti keskenään. Tähän lisätään hienonnettu kuivaemulsio ja sekoitetaan homogeeniseksi.
90 mg tätä jauhemaista reagenssia liuotetaan 2 ml:aan tislattua vettä ja tähän sekoitetaan liukenemisen jälkeen lOO^ul näytettä (seerumia). Reaktiota seurataan fotometrisesti 340 (365) nm: ssä Hg.
Piirustuksen kuvio 4 esittää pisarakoon jakaantumisen ilman kuumennusta ja kuumennuksen jälkeen (vrt. esimerkki 2).
Esimerkki 10 100 ml:aan tislattua vettä liuotetaan: 8.88 g manniittia, 0,86 g natriumdesoksikolaattia, 0,1 g natriumatsidia ja 0,52 mg (0,001 paino-%) kolipaasia. Sekoittaen ruiskutetaan tähän liuokseen paineella liuos, jossa on 2,5 g trioleiinia 7 ml:ssa propanolia. Siten syntynyt emulsio jäädytetään -40 C:ssa ja lyofiloidaan.
Manniittia, polyetyleeniglykolia (M 4000), virtsa-ainetta, natriumdesoksikolaattia, NaCl, natriumatsidi, Tris-puskuria ja Tris-HCl:a jauhetaan ja sekoitetaan perusteellisesti alla olevissa määrissä keskenään. Tähän lisätään hienonnettu kuivaemulsio ja sekoitetaan homogeeniseksi. ^ c)
Manniitti 2,8 g 2,4 g 22,4 g
Polyetyleeniglykoli (M 4000) 0,5 9 0,92 g 3,2 g
Virtsa-aine 2· g 2 g 2 g
Natriumdesoksikolaatti 23,95 g 1,76 g 7,47 g
NaCl 0,82 g 0,82 g 0,82 g
Natriumatsidi 0,2 g 0,2 g 0,95 g
Tris 2,71 g 22,31 g 2,71 g
Tris-HCl 0,4 g 3,38 g 0,4 g 14 69640 a) 60 paino-% natriumdesoksikolaattia koko reagenssissa.
b) 5 paino-% natriumdesoksikolaattia, 50 paino-% puskuria koko reagenssissa c) 2 paino-% säilöntäainetta koko reagenssissa.
90 mg tätä jauhemaista reagenssia lisätään 2 ml:aan tislattua vettä ja annetaan reagoida sen jälkeen, kun se on liuotettu 100 ml:n näyte-määrän (seerumin) kanssa. Reaktiota seurataan fotometrisesti 340 (365) nm:ssä.
Saadaan kuvan 4 kaltaista pisarakoon jakautumaa, kun kuormitettu ja kuormittamaton kuivareagenssi on saatettu alkutilaansa (vrt. esim. 2) ja kun otetaan huomioon mittaustarkkuus.
Claims (15)
1. Alkuväkevyyteen liuotettavissa oleva kuivareagenssi etenkin lipaasin turbidimetristä määritystä varten, joka reagenssi muodostaa vettä lisättäessä emulsion ja sisältää substraatti-öljyä, suojakolloidia, emulgaattorin ja aktivaattorin, tunnettu siitä, että se sisältää 0,2-10 paino-% nestemäistä triglyseridiä, 20-90 paino-% suojakolloidia, 5-60 paino-% sappihappoalkalisuolaa, 0,001-0,1 paino-% kolipaasia, 0,1-2,0 paino-% säilöntäainetta, 5-20 paino-% virtsa-ainetta, 3-50 paino-% puskuriainetta pH-arvon säätöön 6,0-10,5 välille ja 0,5-5 paino-% aktivaattoria.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että triglyseridi on trioleiini.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää 0,2-2,0 paino-% triglyseridiä.
4. Jonkin edellä olevan patenttivaatimuksen mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että suojakolloidi muodostuu kahdesta polyhydroksidi-yhdisteestä.
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että suojakolloidi muodostuu monomeerisesta heksoosista ja kiinteästä oolyetyleeniglykolista.
6. Jonkin edellä olevan patenttivaatimuksen mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää 50-70 paino-% suoja-kolloidia .
7. Jonkin edellä olevan patenttivaatimuksen mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää 10-15 paino-% sappi-happosuolaa. 16 69 640
8. Jonkin edellä olevan patenttivaatimuksen mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää 0,003-0,01 paino-% kolipaasia.
9. Jonkin edellä olevan patenttivaatimuksen mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää säilöntäaineena alkalimetalliatsidia.
10. Jonkin edellä olevan patenttivaatimuksen mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää 10-15 paino-% virtsa-ainetta .
11. Jonkin edellä olevan patenttivaatimuksen mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää 3-10 paino-% puskuri-ainetta.
12. Jonkin edellä olevan patenttivaatimuksen mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää puskuriaineena "Hepes"-puskuria tai Tris-puskuriainetta.
13. Jonkin edellä olevan patenttivaatimuksen mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää aktivaattorina natrium-tai kalsiumkloridia.
14. Menetelmä jonkin patenttivaatimuksista 1-13 mukaisen kuivareagenssin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että valmistetaan triglyseridin vesiemulsio, joka sisältää sappi-happosuolaa, kolipaasia, korkeintaan 10 paino-% suojakolloidia, ainakin osan säilöntäaineesta ja mahdollisesti aktivaattoria, joka emulsio lyofiloidaan ja lyofiloituun tuotteeseen lisätään puskurointiainetta, virtsa-ainetta ja mahdollisesti loput suojakolloidista ja säilöntäaineesta sekä mahdollisesti lisää aktivaattoria.
15. Patenttivaatimuksen 14 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että liuokseen, jossa on suojakolloidia, sappihapposuolaa, kolipaasia ja säilöntäainetta ja aktivaattoria, ruiskutetaan sekoittamalla hienona suihkuna liuos, jossa on triglyseridiä, joka on haihtuvassa orgaanisessa liuottimessa. li 17 69640
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2904305A DE2904305C2 (de) | 1979-02-05 | 1979-02-05 | Reagens zur Lipasebestimmung und Verfahren zu seiner Herstellung |
| DE2904305 | 1979-02-05 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI800199A7 FI800199A7 (fi) | 1980-08-06 |
| FI69640B true FI69640B (fi) | 1985-11-29 |
| FI69640C FI69640C (fi) | 1986-03-10 |
Family
ID=6062202
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI800199A FI69640C (fi) | 1979-02-05 | 1980-01-23 | Reagens foer lipasbestaemning och foerfarande foer framstaellning av denna |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4343897A (fi) |
| EP (1) | EP0014252B1 (fi) |
| JP (1) | JPS55104900A (fi) |
| AR (1) | AR219647A1 (fi) |
| AT (1) | ATE2227T1 (fi) |
| AU (1) | AU515131B2 (fi) |
| CA (1) | CA1139201A (fi) |
| CS (1) | CS236458B2 (fi) |
| DD (1) | DD148830A5 (fi) |
| DE (2) | DE2904305C2 (fi) |
| DK (1) | DK158526C (fi) |
| ES (1) | ES487676A1 (fi) |
| FI (1) | FI69640C (fi) |
| HU (1) | HU181539B (fi) |
| IE (1) | IE49039B1 (fi) |
| IL (1) | IL59132A (fi) |
| SU (1) | SU1367867A3 (fi) |
| ZA (1) | ZA80630B (fi) |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0021572A1 (en) * | 1979-06-04 | 1981-01-07 | American Hospital Supply Corporation | A substrate for use in a turbidimetric assay for lipase and a method for making this substrate |
| US4806469A (en) * | 1982-09-20 | 1989-02-21 | The Dow Chemical Company | Process for the determination of lipase activity |
| ATE21415T1 (de) * | 1983-09-07 | 1986-08-15 | American Hospital Supply Corp | Rekonstituierbares trockenreagenz fuer diagnostische zwecke und verfahren zu seiner herstellung. |
| DE3413118A1 (de) * | 1984-04-06 | 1985-10-24 | Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Ind. | Analysenverfahren und mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme |
| DE3516001A1 (de) * | 1985-05-03 | 1986-11-06 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Lipasefarbtest |
| DE3618049A1 (de) * | 1986-05-28 | 1987-12-03 | Miles Lab | Verfahren zur herstellung von reagenzschichten die hydrophobe reagenzien enthalten |
| US4963479A (en) * | 1986-10-07 | 1990-10-16 | Hoechst Celanese Corporation | Reagent system for an alpha-amylase assay containing aromatic substituted glycoside |
| US5158872A (en) * | 1986-10-07 | 1992-10-27 | Hoechst Celanese Corporation | Aromatic substituted glycoside |
| DE3719196A1 (de) * | 1987-06-09 | 1988-12-29 | Behringwerke Ag | Verwendung von polyinylpyrrolidon (pvp) zur truebungsminderung von seren, kontrollseren enthaltend pvp und verfahren zu deren herstellung |
| ES2034037T3 (es) * | 1987-07-01 | 1993-04-01 | Abbott Laboratories | Un metodo turbidimetrico mejorado para la determinacion de lipasa en suero. |
| FR2619219A1 (fr) * | 1987-08-07 | 1989-02-10 | Strasbourg I Louis Pasteur Uni | Reactif sec pour la determination de la lipase pancreatique, procede de preparation dudit reactif sec et reactif sec et reactif sous forme d'emulsion obtenu par reconstitution du reactif sec. |
| JP2711332B2 (ja) * | 1988-04-15 | 1998-02-10 | 株式会社ヤトロン | 非水溶性物質の透明な水溶液が得られる凍結乾燥品の製造方法 |
| US5378609A (en) * | 1988-12-28 | 1995-01-03 | Ivan E. Modrovich | Lipase single reagent system |
| US5248598A (en) * | 1989-05-25 | 1993-09-28 | Ivan E. Modrovich | Lipase single reagent system |
| US5756357A (en) * | 1993-04-27 | 1998-05-26 | Dexsil Corporation | Method for detecting hydrocarbons in soil |
| US6117682A (en) * | 1993-04-27 | 2000-09-12 | Dexsil Corporation | Method for detecting hydrocarbons in water |
| US5679574A (en) * | 1995-01-09 | 1997-10-21 | Ensys Environmental Products, Inc. | Quantitative test for oils, crude oil, hydrocarbon, or other contaminants in soil and a kit for performing the same |
| US5759445A (en) * | 1995-05-24 | 1998-06-02 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Lipid-dispersed solution and process for producing the same |
| EP0949336A1 (en) * | 1998-03-20 | 1999-10-13 | Unilever Plc | Process for identification of organic material |
| FR2881139A1 (fr) * | 2005-01-26 | 2006-07-28 | Agronomique Inst Nat Rech | Composition pour la lyophilisation de proteines |
| JP5081680B2 (ja) * | 2008-03-25 | 2012-11-28 | 富士フイルム株式会社 | リパーゼ測定用乾式分析要素 |
| CN112858687B (zh) * | 2020-12-30 | 2023-09-15 | 宁波职业技术学院 | 一种血清淀粉样蛋白a检测试剂及其制备方法 |
| USD1071165S1 (en) * | 2022-11-28 | 2025-04-15 | Sensile Medical Ag | Medicine injector |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3527674A (en) * | 1966-06-30 | 1970-09-08 | Calbiochem | Reagent material and method for urea assay |
| US3917515A (en) * | 1974-03-13 | 1975-11-04 | Jack M Goldberg | Serum lipase method and medium |
| US3898130A (en) * | 1974-03-18 | 1975-08-05 | American Hospital Supply Corp | Rapid enzymatic hydrolysis of triglycerides |
| US4115313A (en) * | 1974-10-08 | 1978-09-19 | Irving Lyon | Bile acid emulsions |
| GB1530238A (en) * | 1976-05-04 | 1978-10-25 | Du Pont | Method of determining lipase activity using a triglyceride reagent and method for preparing that reagent |
-
1979
- 1979-02-05 DE DE2904305A patent/DE2904305C2/de not_active Expired
- 1979-12-13 AT AT79105154T patent/ATE2227T1/de not_active IP Right Cessation
- 1979-12-13 DE DE7979105154T patent/DE2964508D1/de not_active Expired
- 1979-12-13 EP EP79105154A patent/EP0014252B1/de not_active Expired
- 1979-12-13 AR AR279278A patent/AR219647A1/es active
- 1979-12-26 CS CS799136A patent/CS236458B2/cs unknown
-
1980
- 1980-01-02 CA CA000342938A patent/CA1139201A/en not_active Expired
- 1980-01-02 DK DK001380A patent/DK158526C/da not_active IP Right Cessation
- 1980-01-07 IE IE20/80A patent/IE49039B1/en not_active IP Right Cessation
- 1980-01-14 ES ES487676A patent/ES487676A1/es not_active Expired
- 1980-01-15 IL IL59132A patent/IL59132A/xx not_active IP Right Cessation
- 1980-01-23 SU SU802872054A patent/SU1367867A3/ru active
- 1980-01-23 FI FI800199A patent/FI69640C/fi not_active IP Right Cessation
- 1980-01-28 US US06/115,864 patent/US4343897A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-01-29 DD DD80218712A patent/DD148830A5/de not_active IP Right Cessation
- 1980-02-01 AU AU55125/80A patent/AU515131B2/en not_active Ceased
- 1980-02-04 HU HU80249A patent/HU181539B/hu not_active IP Right Cessation
- 1980-02-04 ZA ZA00800630A patent/ZA80630B/xx unknown
- 1980-02-05 JP JP1215580A patent/JPS55104900A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0014252A1 (de) | 1980-08-20 |
| ATE2227T1 (de) | 1983-01-15 |
| FI69640C (fi) | 1986-03-10 |
| ES487676A1 (es) | 1980-06-16 |
| DE2964508D1 (en) | 1983-02-17 |
| DK158526B (da) | 1990-05-28 |
| DE2904305B1 (de) | 1980-08-14 |
| ZA80630B (en) | 1981-02-25 |
| EP0014252B1 (de) | 1983-01-12 |
| DD148830A5 (de) | 1981-06-10 |
| SU1367867A3 (ru) | 1988-01-15 |
| AU515131B2 (en) | 1981-03-19 |
| FI800199A7 (fi) | 1980-08-06 |
| JPS5728275B2 (fi) | 1982-06-15 |
| DE2904305C2 (de) | 1981-07-02 |
| HU181539B (en) | 1983-10-28 |
| DK158526C (da) | 1990-10-29 |
| AR219647A1 (es) | 1980-08-29 |
| CS236458B2 (en) | 1985-05-15 |
| US4343897A (en) | 1982-08-10 |
| IE49039B1 (en) | 1985-07-10 |
| DK1380A (da) | 1980-08-06 |
| IE800020L (en) | 1980-08-05 |
| CA1139201A (en) | 1983-01-11 |
| IL59132A (en) | 1983-10-31 |
| AU5512580A (en) | 1981-01-29 |
| JPS55104900A (en) | 1980-08-11 |
| IL59132A0 (en) | 1980-05-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI69640B (fi) | Reagens foer lipasbestaemning och foerfarande foer framstaellning av denna | |
| Ladd et al. | Short-term assays of soil proteolytic enzyme activities using proteins and dipeptide derivatives as substrates | |
| US4011045A (en) | Turbidity reduction in triglyceride standards | |
| US11746348B2 (en) | Euglobulin-based method for determining the biological activity of defibrotide | |
| EP0080304A1 (en) | Stabilization of oxidase | |
| EP0019601B1 (en) | Substrate composition and use thereof | |
| CA1109373A (en) | Method of determining lipase activity using a novel triglyceride reagent and method for preparing that reagent | |
| RS63104A (sr) | Postupak za određivanje biološke aktivnosti defibrotida | |
| Schlame et al. | Intramembraneous hydrogenation of mitochondrial lipids reduces the substrate availability, but not the enzyme activity of endogenous phospholipase A. The role of polyunsaturated phospholipid species | |
| JPH0365760B2 (fi) | ||
| JP2700501B2 (ja) | リパーゼ定量用単一試薬系およびその製造方法 | |
| US5378609A (en) | Lipase single reagent system | |
| EP0021572A1 (en) | A substrate for use in a turbidimetric assay for lipase and a method for making this substrate | |
| EP0778949B1 (en) | Stable substitute tryglycerides for use in clinical chemistry assay controls or calibrators and process for their preparation | |
| Nghiem et al. | Esterase activity in snake skin | |
| CA1191772A (en) | Process and reagent for determining the activity of chymotrypsin and trypsin in faeces | |
| JP3073076B2 (ja) | リパーゼ活性測定用組成物及びその組成物を用いるリパーゼ活性測定方法 | |
| Bonderman et al. | Addition of triglyceride to serum for use in quality control and reference. | |
| JP2894710B2 (ja) | 膵リパーゼの活性測定法 | |
| JPH082318B2 (ja) | 透明なコリパーゼ測定用トリグリセライド基質溶液とこれを用いたコリパーゼ活性の測定方法 | |
| JPS6317440B2 (fi) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: BOEHRINGER MANNHEIM GMBH |