FI69640B - Reagens foer lipasbestaemning och foerfarande foer framstaellning av denna - Google Patents
Reagens foer lipasbestaemning och foerfarande foer framstaellning av denna Download PDFInfo
- Publication number
- FI69640B FI69640B FI800199A FI800199A FI69640B FI 69640 B FI69640 B FI 69640B FI 800199 A FI800199 A FI 800199A FI 800199 A FI800199 A FI 800199A FI 69640 B FI69640 B FI 69640B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- weight
- reagent according
- reagent
- protective colloid
- activator
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/44—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/107497—Preparation composition [e.g., lysing or precipitation, etc.]
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
...... ffr-, :~~1 .......KUULUTUSJULKAISU
B 11 UTLÄGG NIN GSSKRIFT 6 9640
C (45) Pit.:/. *. ti nyönnctty , p- t··'·.·’t r.-2 2* ! λ t 10 00 3 0-2C
(51) Kv.lk.4/lnt.CI.* C 12 Q 1 /kk (21) Patenttihakemus — Patentansokning 800199 (22) Hakemispäivä — Ansökningsdag 23-01 .80 (Fi) (23) Alkupäivä — Giltighetsdag 23-01 .80 (41) Tullut julkiseksi — Blivit offentlif 06.08.80
Patentti- ja rekisterihallitus Njhtäväksipanon ja kuui.julkaisun pvm.— 29.ll.85
Patent- och registerstyrelsen ' Ansökan utlagd och utl.skriften publicerad (32)(33)(31) Pyydetty etuoikeus—Begärd prioritet 05-02-79
Saksan Li i ttotasava1 ta-Förbundsrepubl iken Tyskland(DE) P 290^305-8 (71) Boehringer Mannheim GmbH., Sandhofer Strasse 112-132, 6800 Mannheim--Waldhof, Saksan Liittotasavalta-Förbundsrepubl iken Tyskland(DE) (72) Ulrich Neumann, Peissenberg, Kar1-Wolfgang Knitsch, Andechs,
Joachim Ziegenhorn, Starnberg, Albert Röder, Seeshaupt,
Werner Zwez, Seeshaupt, Werner Kramer, Bernried,
Saksan Liittotasavalta-Förbundsrepubliken Tyskland(DE) (7h) Berggren Oy Ab (5A) Reagenssi 1ipaasimääritystä varten ja sen valmistusmenetelmä -
Reagens för 1ipasbestämning och förfarande för framställning av denna Keksinnön kohteena on reagenssi lipaasin määritystä varten etenkin turbidimetrisessä testissä sekä sen valmistusmenetelmä.
Haimasairauden diagnostiikkaa varten on amylaasi- (E.D. 3.2.1) ja lipaasi- (E.C. 3.1.1.3) määrityksellä erittäin suuri merkitys. Akuutissa pankreatiitissa tapahtuu muutamassa tunnissa molempien entsyymien jopa voimakasta nousua seerumissa. Vahingoittumattomassa munuaistoiminnassa erittyy amylaasi kuitenkin vähäisemmän molekyylipainonsa johdosta jälleen nopeammin, kun taas lipaasi-aktiivisuus pysyy seerumissa pitkähkön ajan korkeana. Varma pankreatiitin diagnoosi saadaan molempien entsyymien määrityksen avulla.
Lipaasi pilkkoo pääasiassa triglyseridien α-esterisidoksia, joissa triglyserideissä on edullisesti pitkäketjuisia rasvahap-poradikaaleja, diglyseridiksi ja vapaiksi rasvahapoiksi. Tätä seuraava reaktio monoglyseridiksi tapahtuu huomattavasti hitaammin.
2 69640
Tavanomaisten, entsyymillä katalysoitujen reaktioiden tapahtuessa vesifaasissa vaikuttaa lipaasi vain öljypisara/vesi-rajapin-nalla. Näin se eroaa esteraaseista, jotka reagoivat vesifaasissa. Kemiallisten parametrien lisäksi vaikuttaa tästä syystä substraatin pinnan laatu suuressa määrin kinetiikkaan.
Titrimetriset lipaasin määritysmenetelmät ovat tunnettuja. Näitä voitaisiin kuitenkin käyttää vain rajoitetussa määrin kliiniskemiallisissa rutiinilaboratorioissa, osittain vaikean käsitel-tävyyden, pitkän reaktioajan ja suuren näytteentarpeen johdosta.
Titrimetrisen määritysmenetelmän olennaiset haitat, nimittäin suuri näytteentarve ja pitkät inkubaatioajät, vältetään turbi-dimetrisissä menetelmissä, joissa triglyseridi/vesi-emulsion sameuden kirkastumista seurataan fotometrisesti. Turbidimetri-sen määrityksen huomattavana ongelmana on kuitenkin ollut sellaisen emulsion valmistus, jolla aina luotettavasti on sama pisarakoko. Tämä on erityisen tärkeää, koska reaktion kinetiikkaan vaikuttaa voimakkaasti triglyseridipisaroiden koko. DE-kuulutus-julkaisusta 19 61 983 tunnetaan tosin jo oliiviöljy-kuivaemulsio, joka soveltuu lipaasiaktiivisuuden titrimetriseen määritykseen. Tässä kuivaemulsiossa on kuitenkin triglyseridipitoisuus niin korkea, ettei se sovellu sameuden kirkastumisen fotometriseen määritykseen suuren valon absorption johdosta. Laimennettaessa tätä reagenssia, jotta sitä voitaisiin käyttää myös turbidimetri-seen kineettiseen lipaasin määritykseen, muuttuvat parametrit kuitenkin niin, ettei enää saavuteta nollannen kertaluvun reaktiota .
Keksinnön eräs tehtävä on luoda etenkin lipaasin turbidimetris-tä tai nefelometristä aktiivisuusmääritystä varten sopiva rea-genssi, joka esiintyy pisaramuodossa ja joka voidaan muuttaa yksinkertaisesti veteen sekoittamalla emulsioksi, jossa on toistuvasti sama pisarakoko. Eräs keksinnön toinen päämäärä on luoda sellainen reagenssi, jossa alkuperäiseen väkevyyteen liuotetun emulsion pisarakokoa voidaan säätää kuivareagenssin kvantitatiivisen koostumuksen avulla ja on pitkälti riippumaton kuivareagenssin valmistuksessa käytetystä triglyseridiemulsiosta. Tämän avulla vältytään siltä, ettei käyttäjän tarvitse valmistaa itse 11 3 69640 triglyseridiemulsiota välittömästi ennen testin suorittamista. Koska substraatin pinnan laatu määrää suuressa määrin entsyymin aktiivisuuden (Clin. Chem. 23, 522-53, 1977), tarvitaan luotettavia tuloksia varten muuttumaton substraattipinta, myös pisarakoon suhteen. Emulsion laatu on kuitenkin hyvin voimakkaasti riippuvainen valmistustekniikasta ja kokemuksen mukaisesti jopa noudatettaessa määrättyjä määräyksiä eri henkilöiden suorittamana erilainen, niin että esiintyy huomattavia poikkeamia mitatuissa aktiivisuusarvoissa. Myös tämä vaikeus on poistettavissa keksinnön avulla.
Tämä tehtävä ratkaistaan alkuperäiseen väkevyyteen liuotettavissa olevalla kuivareagenssilla etenkin turbidimetristä lipaasin määritystä varten, mikä reagenssi lisättäessä vettä muodostaa emulsion, jossa on substraattiöljyä, suojakolloidia, emulgaat-toria ja aktivaattoria ja joka on tunnettu siitä, että se sisältää 0,2 - 10 paino-% nestemäistä triglyseridiä, 20 - 90 paino-% suojakolloidia, 5 - 60 paino-% sappihappoalkalisuolaa, 0,001 - 0,1 paino-% kolipaasia, 0,1 - 2,0 paino-% säilöntäainetta, 5-20 paino-% virtsa-ainetta, 3 - 50 paino-% puskuriainetta pH-arvoa 6,0 - 10,5 varten ja 0,5 - 5 paino-% aktivaattoria.
Yllättävästi on osoittautunut, että kuivareagenssin keksinnön mukaisella koostumuksella kvantitatiivisen koostumuksen pysyessä samana saadaan luotettavasti alkuväkevyyteen liuotetulle emulsiolle aina sama pisarakoko ja tämän lisäksi on myös substraatin pinnan laatu toistettavasta sellainen, että saadaan aina aikaan korkea reaktionopeus ja nollannen kertaluvun reaktionkulku, mikä on edellytyksenä käytännön mukaista turbidimetristä, kineettistä aktiivisuusmääritystä varten.
Muuttamalla reagenssin kvantitatiivista koostumusta yllä ilmoitettujen reagenssin yksittäisten ainesosien vaihtelurajojen puitteissa voidaan valmistustavasta riippumatta määrätä alkuväkevyyteen liuotetun emulsion haluttu pisarakoko. Koska mitattavan rea-genssierän alkuekstinktio riippuu triglyseridin pitoisuudesta, 4 69640 on yleensä lähdettävä määrätystä halutusta triglyseridipitoisuu-desta ja muiden ainesosien määrät voidaan sitten sovittaa kulloinkin kyseessä oleviin olosuhteisiin halutun pisarakoon suhteen.
Triglyseridiksi soveltuvat sinänsä sekä luonnolliset että myös synteettiset triglyseridit, joissa on noin 4-22 C-atomia sisältäviä rasvahapporadikaaleja. Esimerkiksi osoittautui myös tributyriini sopivaksi. Parhaimpana pidetään kuitenkin triglyseridejä, joissa on pitempiketjuisia tyydyttämättömiä rasvahapporadikaale ja , erityisesti triglyseridejä, joiden rasva-happoradikaaleissa on 8 - 20 C-atomia ja 1 - 8, erityisesti 1 -3 hiili-hiili-kaksoissidosta. Trioleiini on erityisen edullinen, koska sitä on helposti saatavilla, mutta myös oliiviöljy on erittäin sopiva. Edullinen triglyseridimäärä on 0,2 - 2,0 paino- % .
SuojakoIloidina tulevat kysymykseen asiantuntijalle tähän asti tarkoitukseen tunnetut aineet, kuten polyhydroksiyhdisteet, seerumalbumiini, polyvinyylipyrrolidoni, kiinteät polyetyleenioksidit yms. Parhaimpana pidetään polyhydroksiyhdisteitä, etenkin monomeerista heksoosia, huoneenlämpötilassa kiinteää polyetyleeniglykolia. Esimerkkejä edullisista polyhydroksiyhdisteistä ovat manniitti ja senkaltaiset sokerialkoholit, glukoosin oligosakkaridi, mannoosi, malto-heptoosi, polyetyleeniglykoli, jossa on keskimääräinen molekyyli-paino 3500 - 7000, yms. Muita käyttökelpoisia suojakolloideja ovat esim. aminohapot, kuten alaniini, kasvikumit, kuten arabi-kumi jne. Parhaimpana pidetty suojakolloidin tai suojakolloi-dien seoksen määrä on 50 - 70 paino-%. Erittäin sopivaksi osoittautui sokerialkoholin ja polyalkyleeniglykolin seos.
Sappihappoina tulevat kysymykseen tunnetut pinta-aktiiviset sap-pihapot, kuten koolihappo, taurokoolihappo, desoksikoolihappo, taurodesoksikoolihappo, glykodesoksikoolihappo tai näiden alkali-suolat, etenkin natriumsuola. Parhaimpana pidetty määrä on 10 -15 paino-%.
Keksinnön mukaisen reagenssin eräs olennainen ainesosa on kolipaa-si. Erittäin sopiva on epäpuhtauksista vapaa kolipaasi. Parhaimpana pidetty määrä on 0,003 - 0,01 paino-%.
5 69640 Säilöntäaineena käytetään keksinnön puitteissa sellaisia aineita, jotka eivät haittaa määrättävän lipaasin entsymaattista aktiivisuutta. Erittäin sopivia ovat alkaliatsidit, etenkin natriumat-sidi. Myös muita säilöntäaineita, kuten esim. tiotsidia ja muita rikkipitoisia säilöntäaineita voidaan käyttää. Parhaimpana pidetty säilöntäaineen määrä on 0,2 - 0,7 paino-%.
Keksinnön mukainen reagenssi sisältää lisäksi virtsa-ainetta, edullisesti 10 - 15 paino-%.
Puskuriaineeksi soveltuvat kaikki tunnetut puskuriaineet, jotka pystyvät keksinnön mukaisen reagenssin puitteissa säätämään pH-arvon välille 6,0 - 10,5. Edullinen pH-arvon alue on 8,3 - 9,5. Esimerkkejä sopivista puskuriaineista ovat dietanoliamiini-pus-kuri, trietanoliamiini-puskuri, Tris-puskuri ja Good-puskuri, kuten Hepes-puskuri (soveltuu hyvin lisättäväksi ennen lyofi-lointia), Taps-puskuri ja Bicine. Erittäin sopiva on Tris-puskuri. Edullinen puskuriainemäärä on 3 - 10 paino-%. Eräs toinen aktivaattori on kalsium-ionit. Koska nämä muodostavat desoksi-koolihapon kanssa liukenemattomia yhdisteitä, pidetään kalsiumin läsnäollessa taurodesoksikoolihappoa edullisena sappihappona, koska tämä sallii korkeammat kalsiumpitoisuudet alueella 1-5 mmoolia.
Paitsi mainittuja olennaisia ainesosia voi keksinnön mukainen reagenssi sisältää myös määrättyjä tarkoituksia varten inerttejä lisäaineita (täyteaineita), jotka helpottavat käsittelyä.
Keksinnön mukainen reagenssi sisältää myös lipaasin aktivaatto-rin. Lipaasiaktivaattorit ovat tunnettuja. Parhaimpana pidetään klorideja, etenkin natriumkloridia, mutta myös muita alkali- tai maa-alkaliklorideja, mikäli nämä eivät muodosta liukenemattomia yhdisteitä keksinnön mukaisten reagenssien tai näytteen ainesosien kanssa. Myös magnesium-ionit vaikuttavat aktivoivasti.
Keksinnön mukaisen reagenssin yksittäisten ainesosien toiminta tavasta ei olla keksinnön puitteissa täysin selvillä. Oletetaan kuitenkin, että kolipaasi poistaa sappihapposuolan, etenkin 6 69640 desoksikolaatin, taurodesoksikolaatin tai glykodesoksikolaatin korkean pitoisuuden aiheuttaman entsyymin aktiivisuuden alentumisen ja parantaa reaktiokulun lineaarisuutta. Virtsa-aine näyttää vaikuttavan emulsion vesi/lipidi-pintaan ja stabiloivan tätä.
Keksinnön mukainen kuivareagenssi valmistetaan lyofiloimalla ainesosista tavanomaisin menetelmin valmistettu emulsio. Tällöin lisätään edullisesti puskuriainetta, virtsa-ainetta ja mahdollisesti myös osa suojakolloidista ja säilöntäaineesta sekä mahdollisesti aktivaattoria vasta "kuivaemulsion" lyofiloinnin jälkeen. LyofHoitava emulsio voidaan valmistaa tavanomaisten menetelmien mukaan, esim. saattamalla kaikki ainesosat vesipitoiseen liuotti-meen, emulgoimalla tavanomaisilla menetelmillä, kuten ultraäänellä, kolloidimyllyllä tms. ja lopuksi jäädyttämällä n. -40°C:ssa ja kuivaamalla tyhjössä tavanomaisissa olosuhteissa, siis n. 10 -4 - 10 torr'issa.
Lyofiloinnissa on lisättävä sappihapposuola, kolipaasi, korkeintaan 10 paino-% suojakolloidia, ainakin osa säilöntäainetta ja mahdollisesti aktivaattoria. Eräs edullinen menetelmä lyofHoitavan vesiemulsion valmistamiseksi on se, jossa liuotetaan mainitut ainesosat, paitsi triglyseridi, veteen ja lisätään sitten liuokseen, haihtuvaan orgaaniseen liuottimeen liuotettu triglyseridi hienona suihkuna samalla sekoittaen. Haihtuviksi orgaanisiksi liuottimik-si soveltuvat tällöin etenkin alifaattiset alkoholit ja ketonit, joissa on 1 - 4 hiiliatomia.
Keksinnön mukaisen reagenssin muut ainesosat, nimittäin puskuri, virtsa-aine ja mahdollisesti loppu suojakolloidista, säilöntäaine ja aktivaattori voidaan lisätä lyofiloituun tuotteeseen välittömästi sen valmistuksen jälkeen tai vasta myöhemmin.
Kuten jo mainittiin, havaittiin yllättäen, että keksinnön mukainen reagenssi tuottaa alkuväkevyyteen tapahtuvan liuotuksen jälkeen ekstinktion tai ekstinktion muutoksen aikayksikköä kohden, joka on pitkälti riippumaton alkuemulsion ekstinktiosta ja reagenssin valmistustavasta. Tämän lisäksi on alkuväkevyyteen liuotetun emulsion ekstinktiovakio yllättävän hyvä.
7 69640
Sappihapposuolat puhdistetaan edullisesti epäpuhtauksista, kuten hajaantumistuotteista ja muusta sellaisesta, esim. uuttamalla n-butanolilla aikalisissä olosuhteissa, uudelleenkiteyttämällä alkoholi/asetonista ja muilla puhdistusmenetelmillä.
Tätä keksinnön mukaisen reagenssin yllättävää ominaisuutta tutkittiin määrittämällä pisarakoon jakaantuminen ennen lyofilointia ja sen jälkeen Coulter-laskijän avulla. Tällä laitteella on mahdollista määrittää hiukkasten, joiden läpimitta on 480 - 16000 nm, prosentuaalinen jakaantuminen 100 - 1000 nm-välein. Tällöin osoittautui, että pisarajakaantuma vaihteli ennen lyofilointia erä erältä erittäin voimakkaasti, mutta jossa kuitenkin oli lyofiloin-nin ja mahdollisesti muiden menetelmävaiheiden jälkeen, kuten reagenssin muiden ainesosien lisäämisen yms. jälkeen aina hyvin yhtäpitävä jakaantumismalli (termodynaamisen tasapainon säätö). Näin valmistetulle kuivaemulsiolle on edelleen tunnusomaista, että myös termisessä rasituksessa (3 viikkoa/35°C) on erittäin hyvä pisara jakaantuman vakavuus taattu. Pisarajakaantuman maksimiarvon havaittiin olevan 500 - 1000 nm. Keksinnön mukainen reagenssi soveltuu tästä syystä erittäin hyvin sameuden kirkastamisen fotometristä seurantaa varten 340 tai 365 nm:ssä. Hiukkaskoossa joka on olennaisesti alle 340 nm, ei voida enää havaita trigly-seridipisaroiden hajaantumista, suuret pisarat sitä vastoin eivät ole lipaasin ideaalinen perusaine.
Keksinnön mukaisen reagenssin eräs olennainen etu on se, että sillä on sekä ihmisen haimalipaasissa että myös sian haimali-paasissa sama aktiivisuusmuutos aikayksikköä kohden. Koska tit-rimetrisessä testissä (Rick'in mukaan) nämä molemmat lipaasit osoittavat samoja aktiivisuuspitoisuuksia, on mahdollista käyttää kalibrointia varten sian haimaa sisältävää standardia.
Keksinnön mukaisen reagenssin eräs toinen olennainen etu on vii-pymävaiheen puuttuminen. On tunnettua, että turbidimetrisessä lipaasitestissä saavutetaan vasta jonkin ajan kuluttua nollannen kertaluvun reaktionkulku. Tämänlaatuinen reaktionkulku on kuitenkin entsyymin aktiivisuuspitoisuuksien tarkkaa määritystä varten välttämättä tarpeellinen (vrt. H.U. Bergmeyer, Grundlagen 8 69640 der enzymatischen Analyse, 1979, alkaen s. 58). Tämän reaktion-kulun saavuttamiseen kuluvaa aikaa kutsutaan viipymävaiheeksi.
Seuraavat esimerkit selvittävät keksintöä lähemmin yhdessä oheisten piirustusten kanssa. Piirustuksen kuviot esittävät graafisesti Coulter-laskijassa eri esimerkkien kohdalla selitetyissä kokeissa saatuja emulsion pisarakoon jakaantumista.
Esimerkki 1 0,06 g CaCl2, 22,72 g natriumdesoksikolaattia, 25,35 g polyety-leeniglykolia (MG 4000), 1,1 g natriumatsidia, 0,02 g kolipaasia ja 50,8 osaa manniittia liuotetaan 1,0 l:aan tislattua vettä. Saatuun liuokseen ruiskutetaan sekoittaen 1,42 g trioleiinia, joka on liuotettu 32 ml:aan n-propanolia, 2 baarin paineessa läpimitaltaan 1,5 mm olevan suuttimen kautta. Näin saatu trio-leiiniemulsio jäädytetään -40°C:ssa ja kuivataan lyofiloimalla.
8,95 g natriumdesoksikolaattia, 7,25 g Tris-puskuria, 1,20 g Tris-HCl:a, 7,5 g polyetyleeniglykolia (MG 4000), 1,97 g NaClra, 16,2 g virtsa-ainetta ja 56,9 g manniittia sekoitetaan kuivina keskenään. 2 paino-osaa näin saatua puskuriaineseosta sekoitetaan 1 paino-osaan lyofiloitua tuotetta kierukkasekoittimella homogeeniseksi reagenssiksi.
Lipaasimäärityksen suorittamiseksi 150 mg tätä reagenssia liuotetaan 2,5 ml:aan vettä, tähän sekoitetaan 0,1 ml näytettä ja mitataan fotometrisesti 365 nm:ssä 25°C:ssa vettä vastaan. Näytteiksi soveltuvat seerumi, pohjukaissuolen neste, virtsa ja muut kehon nesteet.
Menetelmän tarkkuutta tutkittiin vertailemalla sitä Rick'in mukaiseen titrimetriseen menetelmään. Tutkittaessa 60 ihmisen seerumia, joissa oli erilainen lipaasiaktiivisuus, saatiin seuraavat arvot:
Korrelaatio" (x = Rick; y = keksinnön mukainen testi) Y = 0,93 . x - 20; r = 0,96.
Testin lineaarisuus säilyi n. 1300 Rick-yksikköön asti.
69640 s
Rick-yksikkö = l^umoolia FFA/min. = 1 U FFA = vapautetut rasvahapot.
Esimerkki 2 1.5 g manniittia, 0,9 g polyetyleeniglykolia (MG 4000), 0,524 g natriumdesoksikolaattia, 1,5 mg kolipaasia ja 8 mg natriumatsi-dia liuotetaan 50 ml:aan tislattua vettä. Tähän liuokseen ruiskutetaan hienon suuttimen kautta 150 mg trioleiinia, joka on liuotettu 5,0 ml:aan propanolia, samalla sekoittaen. Näin saatu emulsio jäädytetään -40°C:ssa ja lyofiloidaan.
3.5 g virtsa-ainetta, 3,73 g natriumdesoksikolaattia, 0,4 g NaCl:a, 0,1 g natriumatsidia, 2 mg kalsiumkarbonaattia, 1,355 g Tris-puskuria ja 0,2 g Tris.HCl:a sekoitetaan perusteellisesti keskenään. Tähän lisätään hienonnettu kuiva lyofiloitu tuote ja sekoitetaan homogeeniseksi.
Täydellinen seos = 12,3705 g sisältää: manniitti 1,500 g polyetyleeniglykoli 0,900 g summa = 2,400 g= 19,4 paino-% natriumdesoksikolaatti 4,254 g = 34,4 paino-% kolipaasi 1,5 mg 0,01 paino-% trioleiini 0,150 g 1,2 paino-% natriumatsidi 0,108 g 0,87 paino-%
Ca/NaCl 0,402 g 3,25 paino-%
Tris 1,355 g
Tris.HCl 0,200 g summa = 1 ,555 g= 12,57 paino-% virtsa-aine 3,500 g = 28,3 paino-% 37 mg tätä seosta liuotetaan 2,5 ml:aan tislattua vettä ja mitataan 200yUl näytteen (seerumin) kanssa 340 nm:ssä ja 25 tai 30°C: ssa vettä tai ilmaa vasten fotometrisesti. Lipaasiaktiivisuuden määritys tapahtuu ekstinktioerotuksesta/min.
Piirustuksen kuvio 1 esittää pisarakoon jakaantumista alkuväke-vyyteen tapahtuneen liuotuksen jälkeen sekä juuri valmistetulla reagenssilla että myös kuivareagenssin 3 viikkoa kestäneen 35°C:ssa tapahtuneen kuumennuksen jälkeen mitattuna Coulter-laskijän avulla.
10 69640
Esimerkki 3 8.41 g naudan seerumalbumiinia, 12,2 g natriumdesoksikolaattia, 0,02 g natriumatsidia ja 0,034 g kolipaasia liuotetaan 100 ml:aan tislattua vettä. Samalla sekoittaen ruiskutetaan paineella tähän liuokseen liuos, jossa on 3,5 g trioleiinia ja 7 ml propanolia. Näin saatu emulsio jäädytetään -40°C:ssa ja lyofiloidaan.
17.4 g manniittia, 4 g kiinteätä polyetyleeniglykolia, 7 g virtsa-ainetta, 7,47 g natriumdesoksikolaattia, 0,82 g NaCl:a, 0,2 g natriumatsidia, 2,71 g Tris-puskuria ja 0,4 g Tris.HCl:a jauhetaan ja sekoitetaan perusteellisesti keskenään. Tähän lisätään hienonnettu kuivaemulsio ja sekoitetaan homogeeniseksi.
90 mg tätä jauhemaista reagenssia lisätään 2 ml:aan tislattua vettä ja liukenemisen jälkeen tähän sekoitetaan 100^,ul näytettä (seerumia). Reaktiota seurataan fotometrisesti 340 (365) nm: ssä Hg.
Esimerkki 4 8.41 g alaniinia, 1,22 g natriumdesoksikolaattia, 0,02 g natriumatsidia ja 0,034 g kolipaasia liuotetaan 100 ml:aan tislattua vettä. Samalla sekoittaen ruiskutetaan tähän liuokseen paineella liuos, jossa on 3,5 g trioleiinia 7 ml:ssa propanolia. Näin saatu emulsio jäädytetään -40°C:ssa ja lyofiloidaan.
17.4 g manniittia, 4 g kiinteätä polyetyleeniglykolia, 7 g virtsa-ainetta, 7,47 g natriumdesoksikolaattia, 0,82 g NaCl:a, 0,2 g natriumatsidia, 2,71 g Tris-puskuria ja 0,4 g Tris.HCl:a jauhetaan ja sekoitetaan perusteellisesti keskenään. Tähän lisätään hienonnettu kuivaemulsio ja sekoitetaan homogeeniseksi.
90 mg tätä jauhemaista reagenssia lisätään 2 ml:aan tislattua vettä ja liuotuksen jälkeen tähän sekoitetaan lOO^ul näytettä (seerumia). Reaktiota seurataan fotometrisesti 340 (365) nm: ssä Hg.
Esimerkki 5 4,205 g polyetyleeniglykolia (MG 4000), 4,205 g naudan seerumalbumiinia, 1,22 g natriumdesoksikolaattia, 0,02 g natriumatsidia ja 0,034 g kolipaasia liuotetaan 100 ml:aan tislattua vettä.
il
Samalla sekoittaen ruiskutetaan tähän liuokseen paineella liuosta, jossa on 3,5 g trioleiinia 7 mlrssa propanolia. Näin saatu emul sio jäädytetään -40°C:ssa ja lyofiloidaan.
11 69640 17.4 g manniittia, 4 g polyetyleeniglykolia (MG 4000), 7 g virtsa-ainetta, 7,47 g natriumdesoksikolaattia, 0,82 g NaCl:a, 0,2 g natriumatsidia, 2,71 g Tris-puskuria ja 0,4 g Tris.HClra jauhetaan ja sekoitetaan perusteellisesti keskenään. Tähän lisätään hienonnettu kuivaemulsio ja sekoitetaan homogeeniseksi.
90 mg tätä jauhemaista reagenssia lisätään 2 ml:aan tislattua vettä ja tähän sekoitetaan liukenemisen jälkeen lOO^ul näytettä (seerumia) . Reaktiota seurataan fotometrisestä. 340 (365) nm: ssä Hg.
Esimerkki 6 6,73 g polyetyleeniglykolia (Polywachs 4000), 1,68 g polyvinyyli-pyrrolidonia, 1,22 g natriumdesoksikolaattia, 0,02 g natriumatsidia ja 0,034 g kolipaasia liuotetaan 100 ml:aan tislattua vettä. Liuokseen ruiskutetaan sekoittaen paineella liuos, jossa on 3,5 g trioleiinia 7 ml:ssa propanolia. Näin syntynyt emulsio jäädytetään -40°C:ssa ja lyofiloidaan.
17.4 g manniittia, 4 g polyetyleeniglykolia, 7 g virtsa-ainetta, 7,47 g natriumdesoksikolaattia, 0,82 g NaCl:a, 0,2 g natriumatsidia, 2,71 g Tris-puskuria ja 0,4 g Tris.HCl:a jauhetaan ja sekoitetaan perusteellisesti keskenään. Tähän lisätään hienonnettu kuivaemulsio ja sekoitetaan homogeeniseksi.
90 mg tätä jauhemaista reagenssia lisätään 2 ml:aan tislattua vettä ja tähän sekoitetaan liukenemisen jälkeen 100^,ul näytettä (seerumia). Reaktiota seurataan fotometrisesti 340 (365) nm: ssä Hg.
Esimerkki 7 (Vertailuesimerkki; liian vähän sappihapposuolaa) 4,69 g manniittia, 4,69 g polyetyleeniglykolia (Polywachs 4000), 0,38 g natriumdesoksikolaattia, 0,02 g natriumatsidia ja 0,034 g kolipaasia liuotetaan 100 ml:aan tislattua vettä. Samalla sekoittaen tähän liuokseen ruiskutetaan paineella liuos, jossa on 6 9 6 4 0 3,5 g trioleiinia 7 ml:ssa propanolia. Näin syntynyt emulsio jäädytetään -40°C:ssa ja lyofiloidaan.
17.4 g manniittia, 4 g polyetyleeniglykolia (MG 4000), 7 g virtsa-ainetta, 7,47 g natriumdesoksikolaattia, 0,82 g NaCl:a, 0,2 g natriumatsidia, 2,71 g Tris-puskuria ja 0,4 g Tris.HClra jauhetaan ja sekoitetaan perusteellisesti keskenään. Tähän lisätään hienonnettu kuivaemulsio ja sekoitetaan homogeeniseksi.
90 mg tätä jauhemaista reagenssia lisätään 2 ml:aan tislattua vettä ja tähän sekoitetaan liukenemisen jälkeen 100^,ul näytettä (seerumia). Reaktiota seurataan fotometrisesti 340 (365) nm: ssä Hg.
Piirustuksen kuvio 2 esittää pisarakoon jakaantumista ilman kuumennusta ja kuumennuksen jälkeen (ks. esimerkki 2).
Esimerkki 8 (Vertailuesimerkki) 3,76 g manniittia, 5,63 g polyetyleeniglykolia (MG 4000), 0,19 g natriumdesoksikolaattia, 0,02 g natriumatsidia ja 0,034 g koli-paasia liuotetaan 100 ml:aan tislattua vettä. Sekoittaen ruiskutetaan tähän liuokseen paineella liuos, jossa on 3,5 g trioleiinia 7 ml:ssa propanolia. Näin syntynyt emulsio jäädytetään -40°C:ssa ja lyofiloidaan.
17.4 g manniittia, 4 g polyetyleeniglykolia (MG 4000), 7 g virtsa-ainetta, 4,47 g natriumdesoksikolaattia, 0,82 g NaCl:a, 0,2 g natriumatsidia, 2,71 g Tris-puskuria ja 0,4 g Tris.HCl:a jauhetaan ja sekoitetaan perusteellisesti keskenään. Tähän lisätään hienonnettu kuivaemulsio ja sekoitetaan homogeeniseksi.
90 mg tätä jauhemaista reagenssia lisätään 2 ml:aan tislattua vettä ja tähän sekoitetaan liukenemisen jälkeen lOO^ul näytettä (seerumia). Reaktiota seurataan fotometrisesti 340 (365) nm: ssä Hg.
Piirustuksen kuvio 3 esittää pisarakoon jakaantumisen ilman kuumennusta ja kuumennuksen jälkeen (ks. esimerkki 2).
13 69640
Esimerkki 9 8.88 g manniittia, 0,86 g natriumdesoksikolaattia, 0,1 g natrium-atsidia ja 0,034 g kolipaasia liuotetaan 100 ml:aan tislattua vettä. Sekoittaen ruiskutetaan tähän liuokseen paineella liuos, jossa on 2,5 g trioleiinia 7 ml:ssa propanolia. Näin syntynyt emulsio jäädytetään -40°C:ssa ja lyofiloidaan.
22,4 g manniittia, 4 g polyetyleeniglykolia (MG 4000), 2 g virtsa-ainetta, 7,47 g natriumdesoksikolaattia, 0,82 g NaClra, 0,2 g natriumatsidia, 2,71 g Tris-puskuria ja 0,4 g Tris.HCl:a jauhetaan ja sekoitetaan perusteellisesti keskenään. Tähän lisätään hienonnettu kuivaemulsio ja sekoitetaan homogeeniseksi.
90 mg tätä jauhemaista reagenssia liuotetaan 2 ml:aan tislattua vettä ja tähän sekoitetaan liukenemisen jälkeen lOO^ul näytettä (seerumia). Reaktiota seurataan fotometrisesti 340 (365) nm: ssä Hg.
Piirustuksen kuvio 4 esittää pisarakoon jakaantumisen ilman kuumennusta ja kuumennuksen jälkeen (vrt. esimerkki 2).
Esimerkki 10 100 ml:aan tislattua vettä liuotetaan: 8.88 g manniittia, 0,86 g natriumdesoksikolaattia, 0,1 g natriumatsidia ja 0,52 mg (0,001 paino-%) kolipaasia. Sekoittaen ruiskutetaan tähän liuokseen paineella liuos, jossa on 2,5 g trioleiinia 7 ml:ssa propanolia. Siten syntynyt emulsio jäädytetään -40 C:ssa ja lyofiloidaan.
Manniittia, polyetyleeniglykolia (M 4000), virtsa-ainetta, natriumdesoksikolaattia, NaCl, natriumatsidi, Tris-puskuria ja Tris-HCl:a jauhetaan ja sekoitetaan perusteellisesti alla olevissa määrissä keskenään. Tähän lisätään hienonnettu kuivaemulsio ja sekoitetaan homogeeniseksi. ^ c)
Manniitti 2,8 g 2,4 g 22,4 g
Polyetyleeniglykoli (M 4000) 0,5 9 0,92 g 3,2 g
Virtsa-aine 2· g 2 g 2 g
Natriumdesoksikolaatti 23,95 g 1,76 g 7,47 g
NaCl 0,82 g 0,82 g 0,82 g
Natriumatsidi 0,2 g 0,2 g 0,95 g
Tris 2,71 g 22,31 g 2,71 g
Tris-HCl 0,4 g 3,38 g 0,4 g 14 69640 a) 60 paino-% natriumdesoksikolaattia koko reagenssissa.
b) 5 paino-% natriumdesoksikolaattia, 50 paino-% puskuria koko reagenssissa c) 2 paino-% säilöntäainetta koko reagenssissa.
90 mg tätä jauhemaista reagenssia lisätään 2 ml:aan tislattua vettä ja annetaan reagoida sen jälkeen, kun se on liuotettu 100 ml:n näyte-määrän (seerumin) kanssa. Reaktiota seurataan fotometrisesti 340 (365) nm:ssä.
Saadaan kuvan 4 kaltaista pisarakoon jakautumaa, kun kuormitettu ja kuormittamaton kuivareagenssi on saatettu alkutilaansa (vrt. esim. 2) ja kun otetaan huomioon mittaustarkkuus.
Claims (15)
1. Alkuväkevyyteen liuotettavissa oleva kuivareagenssi etenkin lipaasin turbidimetristä määritystä varten, joka reagenssi muodostaa vettä lisättäessä emulsion ja sisältää substraatti-öljyä, suojakolloidia, emulgaattorin ja aktivaattorin, tunnettu siitä, että se sisältää 0,2-10 paino-% nestemäistä triglyseridiä, 20-90 paino-% suojakolloidia, 5-60 paino-% sappihappoalkalisuolaa, 0,001-0,1 paino-% kolipaasia, 0,1-2,0 paino-% säilöntäainetta, 5-20 paino-% virtsa-ainetta, 3-50 paino-% puskuriainetta pH-arvon säätöön 6,0-10,5 välille ja 0,5-5 paino-% aktivaattoria.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että triglyseridi on trioleiini.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää 0,2-2,0 paino-% triglyseridiä.
4. Jonkin edellä olevan patenttivaatimuksen mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että suojakolloidi muodostuu kahdesta polyhydroksidi-yhdisteestä.
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että suojakolloidi muodostuu monomeerisesta heksoosista ja kiinteästä oolyetyleeniglykolista.
6. Jonkin edellä olevan patenttivaatimuksen mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää 50-70 paino-% suoja-kolloidia .
7. Jonkin edellä olevan patenttivaatimuksen mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää 10-15 paino-% sappi-happosuolaa. 16 69 640
8. Jonkin edellä olevan patenttivaatimuksen mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää 0,003-0,01 paino-% kolipaasia.
9. Jonkin edellä olevan patenttivaatimuksen mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää säilöntäaineena alkalimetalliatsidia.
10. Jonkin edellä olevan patenttivaatimuksen mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää 10-15 paino-% virtsa-ainetta .
11. Jonkin edellä olevan patenttivaatimuksen mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää 3-10 paino-% puskuri-ainetta.
12. Jonkin edellä olevan patenttivaatimuksen mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää puskuriaineena "Hepes"-puskuria tai Tris-puskuriainetta.
13. Jonkin edellä olevan patenttivaatimuksen mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää aktivaattorina natrium-tai kalsiumkloridia.
14. Menetelmä jonkin patenttivaatimuksista 1-13 mukaisen kuivareagenssin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että valmistetaan triglyseridin vesiemulsio, joka sisältää sappi-happosuolaa, kolipaasia, korkeintaan 10 paino-% suojakolloidia, ainakin osan säilöntäaineesta ja mahdollisesti aktivaattoria, joka emulsio lyofiloidaan ja lyofiloituun tuotteeseen lisätään puskurointiainetta, virtsa-ainetta ja mahdollisesti loput suojakolloidista ja säilöntäaineesta sekä mahdollisesti lisää aktivaattoria.
15. Patenttivaatimuksen 14 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että liuokseen, jossa on suojakolloidia, sappihapposuolaa, kolipaasia ja säilöntäainetta ja aktivaattoria, ruiskutetaan sekoittamalla hienona suihkuna liuos, jossa on triglyseridiä, joka on haihtuvassa orgaanisessa liuottimessa. li 17 69640
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2904305 | 1979-02-05 | ||
| DE2904305A DE2904305C2 (de) | 1979-02-05 | 1979-02-05 | Reagens zur Lipasebestimmung und Verfahren zu seiner Herstellung |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI800199A FI800199A (fi) | 1980-08-06 |
| FI69640B true FI69640B (fi) | 1985-11-29 |
| FI69640C FI69640C (fi) | 1986-03-10 |
Family
ID=6062202
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI800199A FI69640C (fi) | 1979-02-05 | 1980-01-23 | Reagens foer lipasbestaemning och foerfarande foer framstaellning av denna |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4343897A (fi) |
| EP (1) | EP0014252B1 (fi) |
| JP (1) | JPS55104900A (fi) |
| AR (1) | AR219647A1 (fi) |
| AT (1) | ATE2227T1 (fi) |
| AU (1) | AU515131B2 (fi) |
| CA (1) | CA1139201A (fi) |
| CS (1) | CS236458B2 (fi) |
| DD (1) | DD148830A5 (fi) |
| DE (2) | DE2904305C2 (fi) |
| DK (1) | DK158526C (fi) |
| ES (1) | ES487676A1 (fi) |
| FI (1) | FI69640C (fi) |
| HU (1) | HU181539B (fi) |
| IE (1) | IE49039B1 (fi) |
| IL (1) | IL59132A (fi) |
| SU (1) | SU1367867A3 (fi) |
| ZA (1) | ZA80630B (fi) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0021572A1 (en) * | 1979-06-04 | 1981-01-07 | American Hospital Supply Corporation | A substrate for use in a turbidimetric assay for lipase and a method for making this substrate |
| US4806469A (en) * | 1982-09-20 | 1989-02-21 | The Dow Chemical Company | Process for the determination of lipase activity |
| DE3365307D1 (en) * | 1983-09-07 | 1986-09-18 | American Hospital Supply Corp | Reconstitutable dry reagent for diagnostic purposes and method of manufacture |
| DE3413118A1 (de) * | 1984-04-06 | 1985-10-24 | Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Ind. | Analysenverfahren und mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme |
| DE3516001A1 (de) * | 1985-05-03 | 1986-11-06 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Lipasefarbtest |
| DE3618049A1 (de) * | 1986-05-28 | 1987-12-03 | Miles Lab | Verfahren zur herstellung von reagenzschichten die hydrophobe reagenzien enthalten |
| US5158872A (en) * | 1986-10-07 | 1992-10-27 | Hoechst Celanese Corporation | Aromatic substituted glycoside |
| US4963479A (en) * | 1986-10-07 | 1990-10-16 | Hoechst Celanese Corporation | Reagent system for an alpha-amylase assay containing aromatic substituted glycoside |
| DE3719196A1 (de) * | 1987-06-09 | 1988-12-29 | Behringwerke Ag | Verwendung von polyinylpyrrolidon (pvp) zur truebungsminderung von seren, kontrollseren enthaltend pvp und verfahren zu deren herstellung |
| ES2034037T3 (es) * | 1987-07-01 | 1993-04-01 | Abbott Laboratories | Un metodo turbidimetrico mejorado para la determinacion de lipasa en suero. |
| FR2619219A1 (fr) * | 1987-08-07 | 1989-02-10 | Strasbourg I Louis Pasteur Uni | Reactif sec pour la determination de la lipase pancreatique, procede de preparation dudit reactif sec et reactif sec et reactif sous forme d'emulsion obtenu par reconstitution du reactif sec. |
| JP2711332B2 (ja) * | 1988-04-15 | 1998-02-10 | 株式会社ヤトロン | 非水溶性物質の透明な水溶液が得られる凍結乾燥品の製造方法 |
| US5248598A (en) * | 1989-05-25 | 1993-09-28 | Ivan E. Modrovich | Lipase single reagent system |
| US5378609A (en) * | 1988-12-28 | 1995-01-03 | Ivan E. Modrovich | Lipase single reagent system |
| US5756357A (en) * | 1993-04-27 | 1998-05-26 | Dexsil Corporation | Method for detecting hydrocarbons in soil |
| US6117682A (en) * | 1993-04-27 | 2000-09-12 | Dexsil Corporation | Method for detecting hydrocarbons in water |
| US5679574A (en) * | 1995-01-09 | 1997-10-21 | Ensys Environmental Products, Inc. | Quantitative test for oils, crude oil, hydrocarbon, or other contaminants in soil and a kit for performing the same |
| US5759445A (en) * | 1995-05-24 | 1998-06-02 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Lipid-dispersed solution and process for producing the same |
| EP0949336A1 (en) * | 1998-03-20 | 1999-10-13 | Unilever Plc | Process for identification of organic material |
| FR2881139A1 (fr) * | 2005-01-26 | 2006-07-28 | Agronomique Inst Nat Rech | Composition pour la lyophilisation de proteines |
| JP5081680B2 (ja) * | 2008-03-25 | 2012-11-28 | 富士フイルム株式会社 | リパーゼ測定用乾式分析要素 |
| CN112858687B (zh) * | 2020-12-30 | 2023-09-15 | 宁波职业技术学院 | 一种血清淀粉样蛋白a检测试剂及其制备方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3527674A (en) * | 1966-06-30 | 1970-09-08 | Calbiochem | Reagent material and method for urea assay |
| US3917515A (en) * | 1974-03-13 | 1975-11-04 | Jack M Goldberg | Serum lipase method and medium |
| US3898130A (en) * | 1974-03-18 | 1975-08-05 | American Hospital Supply Corp | Rapid enzymatic hydrolysis of triglycerides |
| US4115313A (en) * | 1974-10-08 | 1978-09-19 | Irving Lyon | Bile acid emulsions |
| GB1530238A (en) * | 1976-05-04 | 1978-10-25 | Du Pont | Method of determining lipase activity using a triglyceride reagent and method for preparing that reagent |
-
1979
- 1979-02-05 DE DE2904305A patent/DE2904305C2/de not_active Expired
- 1979-12-13 AT AT79105154T patent/ATE2227T1/de not_active IP Right Cessation
- 1979-12-13 AR AR279278A patent/AR219647A1/es active
- 1979-12-13 DE DE7979105154T patent/DE2964508D1/de not_active Expired
- 1979-12-13 EP EP79105154A patent/EP0014252B1/de not_active Expired
- 1979-12-26 CS CS799136A patent/CS236458B2/cs unknown
-
1980
- 1980-01-02 DK DK001380A patent/DK158526C/da not_active IP Right Cessation
- 1980-01-02 CA CA000342938A patent/CA1139201A/en not_active Expired
- 1980-01-07 IE IE20/80A patent/IE49039B1/en not_active IP Right Cessation
- 1980-01-14 ES ES487676A patent/ES487676A1/es not_active Expired
- 1980-01-15 IL IL59132A patent/IL59132A/xx not_active IP Right Cessation
- 1980-01-23 FI FI800199A patent/FI69640C/fi not_active IP Right Cessation
- 1980-01-23 SU SU802872054A patent/SU1367867A3/ru active
- 1980-01-28 US US06/115,864 patent/US4343897A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-01-29 DD DD80218712A patent/DD148830A5/de not_active IP Right Cessation
- 1980-02-01 AU AU55125/80A patent/AU515131B2/en not_active Ceased
- 1980-02-04 ZA ZA00800630A patent/ZA80630B/xx unknown
- 1980-02-04 HU HU80249A patent/HU181539B/hu not_active IP Right Cessation
- 1980-02-05 JP JP1215580A patent/JPS55104900A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IL59132A (en) | 1983-10-31 |
| DE2904305B1 (de) | 1980-08-14 |
| IE49039B1 (en) | 1985-07-10 |
| IL59132A0 (en) | 1980-05-30 |
| CS236458B2 (en) | 1985-05-15 |
| FI800199A (fi) | 1980-08-06 |
| DE2904305C2 (de) | 1981-07-02 |
| DE2964508D1 (en) | 1983-02-17 |
| HU181539B (en) | 1983-10-28 |
| ZA80630B (en) | 1981-02-25 |
| AU5512580A (en) | 1981-01-29 |
| ATE2227T1 (de) | 1983-01-15 |
| DK158526C (da) | 1990-10-29 |
| SU1367867A3 (ru) | 1988-01-15 |
| DK1380A (da) | 1980-08-06 |
| FI69640C (fi) | 1986-03-10 |
| US4343897A (en) | 1982-08-10 |
| EP0014252B1 (de) | 1983-01-12 |
| AR219647A1 (es) | 1980-08-29 |
| ES487676A1 (es) | 1980-06-16 |
| DK158526B (da) | 1990-05-28 |
| IE800020L (en) | 1980-08-05 |
| JPS5728275B2 (fi) | 1982-06-15 |
| EP0014252A1 (de) | 1980-08-20 |
| AU515131B2 (en) | 1981-03-19 |
| JPS55104900A (en) | 1980-08-11 |
| DD148830A5 (de) | 1981-06-10 |
| CA1139201A (en) | 1983-01-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI69640B (fi) | Reagens foer lipasbestaemning och foerfarande foer framstaellning av denna | |
| de Araújo et al. | Determination of phospholipase A2 activity by a colorimetric assay using a pH indicator | |
| Ladd et al. | Short-term assays of soil proteolytic enzyme activities using proteins and dipeptide derivatives as substrates | |
| US4011045A (en) | Turbidity reduction in triglyceride standards | |
| US11236328B2 (en) | Euglobulin-based method for determining the biological activity of defibrotide | |
| EP0080304A1 (en) | Stabilization of oxidase | |
| EP0019601B1 (en) | Substrate composition and use thereof | |
| IE44834B1 (en) | Method of determining lipase activity using a novel triglyceride reagent and method for preparing that reagent | |
| Schlame et al. | Intramembraneous hydrogenation of mitochondrial lipids reduces the substrate availability, but not the enzyme activity of endogenous phospholipase A. The role of polyunsaturated phospholipid species | |
| JPH0365760B2 (fi) | ||
| JP2700501B2 (ja) | リパーゼ定量用単一試薬系およびその製造方法 | |
| US5378609A (en) | Lipase single reagent system | |
| EP0021572A1 (en) | A substrate for use in a turbidimetric assay for lipase and a method for making this substrate | |
| Hume et al. | The human adrenal microsomal glucose-6-phosphatase system | |
| KR100346645B1 (ko) | 임상화학검정용콘트롤또는칼리브레이터로사용되는트리글리세라이드치환체및이의제조방법 | |
| Nghiem et al. | Esterase activity in snake skin | |
| CA1191772A (en) | Process and reagent for determining the activity of chymotrypsin and trypsin in faeces | |
| TSUJI et al. | Changes in glucose uptake by and phlorizin binding to brush-border membrane vesicles of small intestine from streptozotocin-induced diabetic rats | |
| JPH05123194A (ja) | リパーゼ活性測定用組成物及びその組成物を用いるリパーゼ活性測定方法 | |
| Bonderman et al. | Addition of triglyceride to serum for use in quality control and reference. | |
| JPH082318B2 (ja) | 透明なコリパーゼ測定用トリグリセライド基質溶液とこれを用いたコリパーゼ活性の測定方法 | |
| JPS6317440B2 (fi) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: BOEHRINGER MANNHEIM GMBH |