FI66388C - Foerfarande foer framstaellning av 7-(d-alfa-amino-alfa-(p-hydroxifenyl)acetamido)-3-(1,2,3-triazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyra-1,2-propylenglykolat - Google Patents

Description

-.«fr-rl r.n KUULUTUSJULKAISU .

W 01) UTLÄGGNINGSSKRIFT 6 6388 (51) KwJ^/hbCl* C 07 D 501/02, 501/36 SUOMI—FINLAND («) 750002 (Fi) S 02 01 *75 (23) Alkupäivä—Gik%fc*a4ag 02.01.75 (41) Tie* Mklwtai—Bunt dr—i q8 07 75

Patentti* ja rekleterfhallItue le heeiMUMi

Patent- och regfaterstyrahwi ΙμΤSjTeA29.06.84 (32)(33)(31) Weity ww*ew-*tlN prww 07.01.74 18.12.74 USA(US) 431251, 534114 (71) Bristol-Myers Company, 345 Park Avenue, New York, New York, USA(US) (72) Murray Arthur Kaplan, Syracuse, New York, Alphonse Peter Granatek,

Baldwinsville, New York, USA(US) (74) Oy Kolster Ab (54) Menetelmä 7-/C“c*-amino-0<-(p-hydroksi fenyyl i)asetamido7“3_(l ,2,3“ -triatsol-5-yylitiometyyli)-3-kefeemi-4-karboksyy1ihappo-1,2-pro-pyleeniglykolaatin valmistamiseksi - Förfarande för framstälIning av 7“ZÖ-o^amino-o<r(p-hydroxi fenyl)acetamido/-3-(l,2,3-triazo1-5~ ylt iomety1)-3"cefem-4-karboxy1syra-1,2-propylenglykolat Tämän keksinnön kohteena menetelmä 7-/D-<?^-amino-(p-hydrok-sifenyyli)ase tamido7~3-(1,2,3-triatsol-5-yylitiometyyli)-3-kefeemi- 4-karboksyylihappo-l,2-propyleeniglykolaatin valmistamiseksi, jossa kefeemijohdannaisen ja 1,2-propyleeniglykolin moolisuhde on 1:1. Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että (1) 7-/D- amino (p-hydroksifenyyli) asetamidq/-3- (1,2,3- triatsol-5-yylitiometyyli)-3-kefeemi-4-karboksyylihapon metanolaatti liuotetaan funktionaalisen ketoryhmä sisältävän orgaanisen hapon vesiliuokseen; (2) liuoksen pH säädetään noin 4,5:ksi; (3) liuos laimennetaan epäpuhtauksien saostamiseen riittävällä vesimäärällä; (4) liukenemattomat epäpuhtaudet erotetaan; 2 66388 (5) vesiliuokseen lisätään riittävä määrä 1,2-propyleeni-glykolia kiteisen 7-/D- c\-amino-<*-(p-hydroksifenyyli) asetamidoj- 3-(1,2,3-triatsol-5-yylitiometyyli)-3-kefeemi-4-karboksyylihappo- 1,2-propyleeniglykolaatin saostamiseksi; (6) tuote otetaan talteen.

7-/D- ^-amino- d - (p-hydroksifenyyli) asetamido_7-3- (1,2,3-triatsol-5-yylitiometyyli)-3-kefeemi-4-karboksyylihappo on kefalo-sporiini johdannainen, jota nimitetään myös BL-S640:ksi. us-patent-tihakemuksessa n:o 318 340 on esitetty 7-/D- oi-amino--(p-hydroksifenyyli) -asetamido_7-3- (1,2,3-triatsol-5-yylitiometyyli) -3-kefee-mi-4-karboksyylihapon ja sen metanolaatin valmistus ja eristys.

Vaikeuksia tunnetussa menetelmässä aiheutti erityisesti 7-/0- (k -amino- d -p- (hydroksifenyyli) asetamido_7-3-(1,2,3-triatsol-5-yylitiometyyli)-3-kefeemi-4-karboksyylihapon puhdistaminen lääke-käyttöön riittävän puhtaaksi.

Pyrkimykset kahtaisionin tai sen hydraatin kiteyttämiseksi ovat epäonnistuneet, koska ei löydetty mitään tapaa liuottimen poistamiseksi solvaatista vedettömän puhtaan yhdisteen saamiseksi. Metanolaatti ei metanolin myrkyllisyyden vuoksi sovi lääkekäyttöön ja lisäksi sen käytöllä saavutetaan vähäinen puhdistuminen. Eta-nolaattia käyttäen ei saatu puhdasta tuotetta, vaikkakin etano-laatti oli kiteinen. Lisäksi veteen suspendoituna etanolaatti menetti asteittain etanolipitoisuutensa muuttuen kiinteään tahmeaan muotoon, joka ei enää ollut kiteinen, ei suspendoitunut tasaisesti ja muuttui vähitellen kumimaiseksi.

Käyttämällä keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettua kiteistä 7-^D- d -amino- d - (p-hydroksifenyyli) asetamido_/-3- (1,2,3-triatsol-5-yylitiometyyli)-3-kefeemi-4-karboksyylihappo-1,2-propy-leenglykolaattia, jossa on 1,0 mooli 1,2-propyleeniglykolia moolia kohti kefalosporiini-kahtaisionia, voitetaan edellä kuvatut vaikeudet .

Keksinnön mukaisesti valmistettu propyleeniglykolaattituote on kiteinen, veteen suspendoituna se ei menetä biologista tehokkuuttaan tai kiteisyyttään, se suspendoituu helposti, ei muutu öljynäi-seksi tai tahmeaksi. Kiinteänä aineena tavanomaisissa vaativissa koeolosuhteissa se menettää korkeintaan 10 % bioaktiivisuudestaan sitä varastoitaessa kuukauden ajan 56°C:n lämpötilassa. Siinä lämpötilas- 3 66388 sa ja myös 100°C:ssa se on huomattavasti stabiilimpi kuin etano-laatti. Ylimääräisen propyleeniglykolin poistamiseksi voidaan käyttää asetoni-, metanoli- tai etyyliasetaattipesujaj tämä ei ole mahdollista muiden solvaattien puhdistuksessa.

Kiteisen 7-/D-pCramino-dL-(p-hydroksifenyyli)asetamido/-3-(1,2,3-triatsol-5-yylitiometyyli)-3-kefeemi-4-karboksyylihappo-l,2-propyleeniglykolin in vitro aktiviteetti vastaa sen sisältämän kah-taisionin aktiiviteettia. In vivo tulokset ovat oleellisesti samat (sellaisessa työssä esiintyvien koevaihteluiden rajoissa), koska tuotetta annostellaan kahtaisioniin perustuvan vaikutuksen mukaan.

Kiteistä mono-propyleeniglykolaattia valmistetaan käsittelemällä 7-/D-*X-amino-(Λ -(p-hydroksifenyyli)-asetamido/-3-(1,2,3-triat-sol-5-yylitiometyyli)-3-kefeemi-4-karboksyylihapon metanolisolvaatin vesisuspensiota funktionaalisen ketoryhmän sisältävän orgaanisen hapon vesiliuoksella. Edullisia happoja ovat 2-oksopropionihappoa ja 4-oksopentaanihappo.

Mikäli täydellistä liukenemista ei saavuteta lisättäessä ke-tonin sisältävää orgaanista yhdistettä, pH-arvo voidaan säätää lisäämällä happoa tai emästä liukenemisen saavuttamiseksi. Suositeltavassa menettelyssä käytetään vesiliukoista ketohappoa vesipitoisen reaktioseoksen pH-arvon alentamiseksi arvoon noin 2,0 tai pienemmäksi, jolloin kefalosporaanihappo liukenee. Mikäli täydellistä liukenemista ei saavuteta ketohappoa käytettäessä per se, voidaan reaktio-seosta säätää lisäämällä mineraalihappoa liukenevuuden saamiseksi suu-rimmilleen. Vesiliuoksen pH säädetään sitten arvoon noin 4,5 lisäämällä sopivaa happoa tai emästä. Jos käytetään suositeltavaa keto-happoja, nostetaan happamen liuoksen pH arvoon 4,5 lisäämällä emästä, esim. NaOH:ta, edullisesti nopeasti sekoittaen.

Liuos laimennetaan sitten vedellä mahdollisten veteen liukenemattomien epäpuhtauksien saostamiseksi. Laimennusaste ei ole kriittinen, mutta laimentamalla noin suhteessa 1:1 saadaan erittäin puhdas tuote.

Reaktioseoksen lämpötila edellä mainituissa vaiheissa ei ole kriittinen. On kuitenkin edullista suorittaa nämä prosessivaiheet (erityisesti pH:n säätö arvoon 4,5 ja laimennusvaihe) huoneenlämpö-tilassa tai sen alapuolella, edullisimmin alueella 5-20°C olevassa lämpötilassa niin, että laimennusvaiheessa muodostuneitten epäpuhtauksien määrä tulee mahdollisimman suureksi.

4 66388

Laimennusvaiheen jälkeen voidaan kiinteät epäpuhtaudet poistaa esim. suodattamalla. Liuoksessa olevan tuotteen tarkkaa luonnetta ei tunneta, mutta sen oletetaan olevan kefalosporiini-kahtaisionin ja ketoyhdisteen heikosti sidottu, liukeneva fysikaalinen kompleksi. Joka tapauksessa keto-yhdistettä käyttämällä kefalosporii-ni-kahtaisionit pysyvät liuoksessa pH-arvossa 4,5, jolloin liukenemattomat epäpuhtaudet (mukaan luettuna lähes kaikki värilliset epäpuhtaudet) saostuvat. Kiinteiden epäpuhtauksien poistamisen jälkeen liuosta käsitellään edullisesti aktiivihiilellä, joka suodatetaan ennen propyleeniglykolin lisäysvaihetta.

Vesiliuosta käsitellään sitten riittävällä määrällä 1,2-pro-pyleeniglykolia mono-propyleeniglykolaatin kiteyttämiseksi, joka erotetaan sitten suodattamalla, pestään ja kuivataan.

Edellä esitetyn menetelmän mukaan valmistettu mono-propylee-niglykolaatti on lähes väritön, kiteinen materiaali, jonka värin stabiilisuus ja lämpöstabiilisuus ovat erinomaiset. On erittäin edullista käyttää vesisuspensioita, koska yhdiste ei suspendoita-essa veteen menetä biologista tehokkuuttaan eikä kiteisyyttään.

Jos huomioidaan propyleeniglykolin biologinen tehottomuus, mono-propyleeniglykolaatti omaa lähes saman antibakteerisen tehon ja spektrin in vivo ja in vitro kuin lähtöaineena käytetty kahtaisioni-tuote.

Kiteistä 7-^D- ^-amino-°( - (p-hydroksifenyyli)asetamido_/-3-(1,2,3-triatsol-5-yylitiometyyli)-3-kefeemi-4-karboksyylihappo- 1,2-propyleeniglykolaattia voidaan käyttää paitsi farmaseuttisissa valmisteissa myös 7-/D- «i-amino-<X -(p-hydroksifenyyli)asetamido_7**3-(1,2,3-triatsol-5-yylitiometyyli)-3-kefeemi-4-karboksyylihapon puhdistamiseen. Jos edellä esitetyssä menetelmässä käytetään epäpuhdasta 7-ZD-<A -amino-^ - (p-hydroksifenyyli) -asetamido_/-3-(1,2,3-tri-atsol-5-yylitiometyyli)-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa, voidaan ke-falosporiini ottaa talteen oleellisesti puhtaana kiteisenä 1,2-pro-pyleeniglykolaattina, jossa propyleeniglykolaatin ja kefalosporiini-kahtaisionin moolisuhde on 1:1. Korvaamalla metanolilla edellä esitetyssä menettelyssä 1,2-propyleeniglykoli saadaan kiteinen mono-metanolaatti, jota voidaan käyttää lähtöaineena valmistettaessa esiteltävän keksinnön mukaista kiteistä propyleeniglykolaattia.

Esiteltävän keksinnön avulla saadaan myös stabiili vesisuspensio, joka on käyttökelpoinen bakteeriperäisten tulehdusten käsit- 66388 telyyn imettäväisillä ja joka sisältää vähintäin 30 mg/ml ja edullisesti vähintäin 125 mg/ml kiteistä 7-/D-o(-amino- *-(p-hydroksi-fenyyli) asetamido_/-3- (1,2,3-triatsol-5-yylitiometyyli) -3-kefeemi- 4-karboksyylihappo-1,2-propyleeniglykolaattia, jossa 1,2-propylee-niglykolin kefalosporiini-kahtaisionin moolisuhde on 1:1, jolloin mainitun suspension pH on alueella 2,8-5 ja edullisesti alueella 2,8-3,5.

Bioanalyysi

Bioanalyysit suoritettiin turbidometrisesti mikro-organismia S. aureus 209F (A.T.C.C 6538P) vastaan käyttäen standardina 7-/D- X' -amino-Ά -(p-hydroksifenyyli)-asetamido/-3-(1,2,3-triatsol-5-yyli-tiometyyli)-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa-1,2-propyleeniglykolaattia, jonka potenssi oli 820 jig/mg (se sisälsi kemiallisen analyysin mukaan 16,7 % 1,2-propyleeniglykolia ja 0,3 % vettä), kun vedettömän 7-Z.D- ·* -amino - (p-hydroksifenyyli) asetamido./-3-kefeemi-4-karboks-yylihapon kahtaisionin potenssiksi määriteltiin 1000 ;ug/mg.

7-/D- ^-amino- - (p-hydroksifenyyli) asetamido/-3- (1,2,3-tri-atsol-5-yylitiometyyli)-3-kefeemi-4-karboksyylihappo-monopropyleeni-glykolaatti valmistettiin esimerkissä 2 kuvatulla menetelmällä, ja sen potenssi oli 865 pg/mg; näyte sisälsi kemiallisen analyysin mukaan 15,6 % 1,2-propyleeniglykolia ja 0,3 % vettä.

IR- ja NMR-spektrit määritettiin samasta mono-propyleenigly-kolaattinäytteestä; spektrien funktionaalisten ryhmien arvot on esitetty seuraavassa: IR (KBr) 2400-3600 cm ^ (leveät toisensa peittävät huiput) - amidi NH,

nh3+, OH

1780 f1 -laktaami C=0 1705 amidi C=0 1570 COO-

1515 aromaattinen C=C

NMR (DMSO, laimea DC1) 7,98 ppm^ singletti, 1H, Ha 6,7-7,6 1 multipletti, 4H, H^ 5,68 dubletti, 1H, Hc

4,9-5,2 multipletti, 2H, H., H

3,2-4,2 multipletti, 7H, H^, H®, H., H,

1,1 dubletti, 3H, H 1 9 3 K

n

Kokonaisarvot osoittavat, että propyleeniglykolin 1 moolia kohti on 1 mooli BL-S640 kahtaisionia.

6 66388 SÖ

EC_O_ X

O EC

K

O —O —W I

c c a —o —a c

K

_ /*

Z Z

H ! «s Z U—a cc

C*-l 4-t Z B

\ /

O

tr tr a, ® \ I ®

N ' CM

co v 8

tC° Z

o I

a — — o a z 0=0 <D cn a a u-z χι i a λ

\ .·'·. /K

\. "^/ i- Ί Λ ' v Λ a j a o a 7 66388 BL-S640-propyleeniglykolaatista valmistetun lihaksensisäisesti annettavan suspension, varastointikestävyys määritettiin käyttäen seuraavaa valmistekoostumusta:

Koostumus Pulloa kohti BL-S640-propyleeniglykolaattia, steriiliä mikrojauhettua x 1,196 g

Natriumkloridia, steriiliä, mikrojauhettua 0,008 g

Tween 80 0,004 g

Lesitiiniä 0,008 g

Polyvinyylipyrrolidonia (Povidone) 0,020 g

Sekoitetaan edellä olevat aineet, jolloin saadaan 1,236 g

Edellä olevaan seokseen lisätään VNS-tarvetta varten xx 0,349 g

Kokonaispaino 5 ml:n pulloa varten 1,585 g x Tämä paino vastaa 1,0 grammaa BL-S640-aktiivisuutta. xx VNS tarkoittaa pulloa, neulaa ja ruiskua. Lisättäessä 3,7 ml vettä injektiota varten saadaan suspensio, joka omaa 250 mg:n BL-S640-aktiivisuuden ml.

8 66388 I*-5--

Bioaktiviteetin häviö 23 C:ssa (%)

Aika vrk. j Erä 1 j Erä 2 ϊ ......j"~..... 4 ........

3 ! 7 : 2,0 2,1 14 2,0 1,1 21 +8,1 +6,3 30 1,0 5,3 42 0,0 +1,1 60 5,1 4,2 90 1,0 9,5

Bioaktiviteetin häviö 4°C:ssa (%)

Aika vrk. Erä 1 Erä 2 30 +1,0 1,1 45 +1,0 1,1 60 3,0 2,1 90 1,0 5,3 120 180

Kuivat jauheet pysyvät stabiileina vähintään 4 kuukautta 56°C:ssa.

66388

Edellä esitettyjä suspensioita voidaan parantaa lisäämällä pieni määrä myrkytöntä, farmaseuttisesti hyväksyttävää polykarbok-syylihappoa, esim. sitruunahappoa. Käytetyn hapon määrä (joka luonnollisesti lisätään kuivana muiden aineosien muodostamaan seokseen) on sellainen, että pH saadaan alueelle 2,8-3,5 uudelleen muodostettaessa; ilman hapon lisäämistä valmisteen pH-arvo on alueella 4,4-5. Parannus muodostuu paremmasta väristä, so. kehittyy vähemmän epäedullista värittymistä varastoitaessa ja bioaktiivisuuden aleneminen on myös pienempi varastoitaessa.

Oraalinen annostus beagle-koirille

Kolmelle beagle-koiralle (keskimääräinen paino 8,2 - 0,4 kg) annosteltiin 200 mesh'in 7-/D- .·*-amino- 7-(p-hydroksifenyyli) aseta-mido7-3-(1,2,3-triatsol-5-yylitiometyyli)-3-kefeemi-4-karboksyyli-happo-propyleeniglykolaattia (bioanalyysi 820 jig/mg) oraalisesti 30 mg:n aktiivisuuden omaavina annoksina painon kg:aa kohti kovina gelatiinikapseleina. Kaikki tässä esitetyt annokset ja pitoisuudet on laskettu amfoteerisena materiaalina ja korjattu biopotenssieroa-vaisuuksien suhteen. Seuraavassa taulukossa 1 on esitetty keskimääräiset pitoisuudet beagle-koirien plasmassa, kun koirat ovat saaneet 30 mg/kg oraalisesti 7-/D- ^-amino-<*-(p-hydroksifenyyli)-asetamido7-3-(1,2,3-triatsol-5-yylitiometyyli)-3-kefeemi-4-karbok-syylihappo-propyleeniglykolaattia. Noin 40 % annoksesta erittyi virtsaan 8 tunnin kuluessa lääkkeen annostuksesta. Plasman puoliintumisaika oli noin 1,36 tuntia.

Taulukko 1

Plasmakonsentraatio (pg/ml + standardivirhe 7-/D- cL-amino- Oi·-(p-hydroksifenyyli) -3-(1,2,3-triatsol-5-yylitiometyyli)-3-kefeemi-4-karboksyylihappo-propyleeniglykolaatti

Aika, h 0,08 0,04 + - 0,25 0,3 + 0,1 0,50 5,9 + 2,0 0,75 8,4 + - 1.0 15,8 + 3,2 1,5 17,7 + 2,0 2.0 18,7 + 0,9 3.0 13,7 + 1,2 4.0 8,4 + 1,3 6.0 3,2 + 0,4 8.0 1,6 + 0,2 10 66388 Lähtöaineet Lähtöaineiden valmistus on kuvattu US-patenttihakemuksessa n:o 318 340.

Esimerkki 1

Kiteisen 7-/D- * -amino- (p-hydroksifenyyli) asetamido_/-3- (1,2,3-triatsol-5-yylitiometyyli)-3-kefeemi-4-karboksyyli- happometanolaatin valmistus 1. 50 g 7-/D- -amino- ·< - (p-hydroksifenyyli) asetamido_/-3-(1,2,3-triatsol-5-yylitiometyyli)-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa lietetään 250 ml:aan 95-%:ista (tilav./tilav.) metanoli/vesiliuosta 22-25°C:ssa.

2. Lisätään väkevöityä suolahappoa nopeasti sekoittaen, kunnes pH-arvo on 1,3-1,5. Saadaan liuos tai lähes täydellinen liukeneminen .

3. Lisätään trietyyliamiinia pH-arvoon 1,7.

4. Lisätään 7,5 g aktiivihiiltä ("Darco G-60”) ja lietetään 0,5 tuntia.

5. Hiili poistetaan suodattamalla ja pestään 75 ml:11a meta-nolia, joka lisätään suodokseen. Vaiheiden 2, 3 ja 4 tulee olla suoritettuja 5 tunnin kuluessa.

6. Vaiheesta 5 saatujen yhdistettyjä pesuliuosta ja suodosta sekoitetaan nopeasti. Lisätään trietanoliamiinia 5 minuutin kuluessa pH-arvoon 4,5. Kiteytyminen alkaa noin 1-3 minuutin kuluessa. Seosta lietetään tunnin ajan.

7. Kiteet otetaan talteen suodattamalla, pestään 100 ml :11a metanolia ja kuivataan tyhjiössä 56°C:ssa 24 tunnin aikana. Bio-saanto 75-90 %; bioanalvysi = 850-900 μg/mg; NMR ja IR osoittavat, että yhdisteessä on 1 mooli metanolia; H2O 2-4,0 % (Karl Fischer).

Esimerkki 2 BL-S640-monopropyleeniglykolaatin valmistus 1. 100 g BL-S640-metanolaattia sekoitetaan nopeasti 300 ml:aan vettä.

2. Lisätään 80 g 4-oksopentaanihappoa.

3. Lisätään hitaasti väkevöityä suolahappoa voimakkaasti sekoittaen, kunnes pH-arvo on 0,8-1,2. Saadaan liuos tai lähes täydellinen liukeneminen. Liuos jäähdytetään 20-25°C:een tarvittaessa.

4. Vaiheesta 3 saatuun sekoitettuun liuokseen lisätään 40-%:ista NaOH-liuosta, kunnes pH-arvo on 4,5 (sakka voi muodostua pH-arvolla 2,0-3,0 ja liukenee sitten pH-arvolla 4-4,5). Lämpötila ei saa nousta 27°C:n yläpuolelle.

66388 5. Liuos jäähdytetään 4-10°C:seen ja lisätään erittäin nopeasti sekoittaen 500 ml:aan 4-10°C:n lämpötilassa olevaa vettä. Muodostuu sakka.

6. Seosta sekoitetaan 5-10°C:ssa 5 minuuttia. Sakka (X), joka sisältää suurimman osan väriaineista ja epäpuhtauksista mukaanluettuna des-triatsoli-BL-S640, poistetaan suodattamalla. Sakka pestään 50 ml:11a vettä (pesuvettä ei saa lisätä kiinteiden aineiden X suo-dokseen) ja 75 ml:11a metanolia (metanolia ei saa lisätä kiinteiden aineiden X suodokseen) ja kuivataan tyhjiössä 50°C:ssa 25 tunnin aikana. Saanto 5-15 g keltaisenruskeaa kiinteää ainetta. (0-500 yksikköä /mg) .

7. 15 g Darco G60 tai KB-aktiivihiiltä lisätään vaiheesta 6 saatuun sakan X suodokseen. Seosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 0,5 tuntia.

8. Hiili poistetaan suodattamalla ja pestään 40 ml:11a vettä. Pesuvesi lisätään suodokseen.

9. Suodos suodatetaan steriilistä 0,22 jam Millipore-suodatti-men lävitse. Vaiheet 4-9 täytyy suorittaa neljän tunnin kuluessa.

10. Lisätään yhtä suuri määrä (noin 1 litra) steriiliä, pyro-geenivapaata propyleeniglykolia vaiheesta 9 saatuun pH-arvossa 4,5 olevaan liuokseen kohtuullisesti sekoittaen. Kiteet muodostuvat noin minuutin kuluessa. Säilytetään pH-arvossa 4,5.

11. Seosta sekoitetaan 18-23°C:ssa tunnin ajan.

12. Valkoiset kiteet suodatetaan, pestään 175 ml:11a steriiliä 50-%:ista propyleeniglykolin vesiseosta ja 450 ml :11a steriiliä metanolia sekä kuivataan tyhjiössä 56°C:ssa 24 tunnin kuluessa.

13. Saanto on 70-80 g (biosaanto 75-85 %) BL-S640-monopropy-leeniglykolaattia.

Esimerkissä 3 esitetyllä menetelmällä valmistetun mono-propy-leeniglykolaatin analyysi: a. Bioanalyysi = 86.5 pg/mg.

b. IR ja NMR osoittavat, että yhdiste sisältää yhden moolin propyleeniglykolia yhtä kefalosporiini-kahtaisionin moolia kohti.

c. H2O 0,3 % (Karl Fischer).

d. Kidemorfologia = hyvin määriteltyjä sauvamaisia kiteitä.

Λ ·Λ e. /S/q (C = 1 %; 1N HC1) =+55,9° f. Propyleeniglykolia kemiallisen analyysin mukaan = 15,6 %.

66388 g. muita liuottimia = 0,1 %.

h. UV-absorptiospektri,(0, IN HCl:ssä): A max 227 nm (a = 28,4) ja 272 nm (a=16,6).

Mono-propyleeniglykolaatti tutkittiin Röntgen-diffraktiomene-telmällä.

Tulokset Näyte oli kiteinen antaen 35 mitattavaa diffraktioviivaa. D-välit ja suhteelliset intensiteetit olivat seuraavat:

Viiva Väli d (A) Suhteellinen intensiteetti 1 10,11 65 2 9,26 32 3 7,83 18 4 7,33 51 5 6,88 82 6 6,28 56 7 5,71 42 8 5,27 3 9 5,02 41 10 4,68 62 11 4,46 99 12 4,30 59 13 4,13 35 14 3,91 90 15 3,80 100 16 3,63 37 17 3,47 49 18 3,35 13 19 3,24 11 20 3,13 14 21 3,02 18 22 2,95 17 23 2,85 25 24 2,78 55 25 2,72 23 26 2,61 18 27 2,53 20 28 2,49 6 29 2,35 8 30 2,31 14 13 66388

Viiva Väli d (A) Suhteellinen intensiteetti 31 2,27 14 32 2,24 14 33 2,19 10 34 2,14 14 35 2,10 15 Nämä Röntgen-diffraktioarvot määritettiin seuraavasti:

Pieni määrä näytettä suljettiin 0,2 mm:n läpimittaiseen pienen sironnan omaavaan lasiseen kapillaariputkeen, joka asennettiin valotusta varten 114,6 mm:n läpimittaiseen Debye-Scherrer-diffrak-tiokameraan. Valotusaika oli 4 tuntia 35 kV:lla ja 20 mA:lla toimivalla Norelco X-ray Generator'ilia käytettäessä standardipolttovä-listä kuparikohtio Röntgen-putkea (CuKot aallonpituus = 1,5418 A). Käytettiin Kodak'in No-Screen X-Ray filmiä ja kehitettiin 3 minuuttia 20°C:ssa kodak Liquid X-ray kehitteessä.

Erittäin pieni määrä kiteistä natriumfluotidia sekoitettiin eräisiin näytteisiin sisäistä kalibrointia varten. Lisäksi puhdas NaF-näyte tutkittiin samaa tarkoitusta varten.

Filmit luettiin Norelco Debye-Scherrer filminlukijän avulla määrittäen diffraktiorenkaiden paikat lähimpään 0,05 mm:iin. Arvot korjattiin filmin kutistuman mukaan ja tasojen keskinäiset välit (d-välit) laskettiin korjatuista arvoista. Tietokoneohjelmaa (X-RAY, P. Zugenmaier) käytettiin kaikissa laskuissa. Saatujen d-välien arvojen tarkkuus oli -v, 1 %. Kaikkien filmien intensiteettilukemat saatiin käyttäen Joyce-Loeble IIIC Recording Microdensitometer1iä (pyyhkäisysuhde 5:1 0,1 OD kiilalla). Suhteellinen intensiteetti asteikolla 0-100 laskettiin kaikille tunnistettaville diffraktioren-kaille käyttäen taustalukeman mukaan korjattuja huippuintensiteet-te jä.

Esimerkki 3 BL-S640-mono-propyleeniglykolaatin valmistus 1. 100 g 2-oksopropionihappoa liuotetaan 250-300 ml:aan vettä.

2. 100 g BL-S640-metanolaattia sirotellaan nopeasti sekoittaen viiden minuutin aikana liuokseen. Saadaan täydellinen tai lähes täydellinen liuos, jonka pH on 2,0.

3. Liuos jäähdytetään 10°C:seen.

4. Vaiheesta 3 saatuun liuokseen lisätään sekoittaen 5 minuutin kuluessa 40-%:ista NaOH-liuosta, kunnes pH-arvo 4,5 (sakka voi 66388 muodostua pH-arvolla 2,0-3,0, mutta se liukenee jälleen pH-arvolla 4-4,5). Lämpötila ei saa nousta 27°C:n yläpuolelle.

5. Täydellinen tai lähes täydellisesti liuennut liuos jäähdytetään 8-12°C:seen ja lisätään erittäin nopeasti sekoittaen 500-600 ml:aan 8-12°C:n lämpötilassa olevaa vettä. Muodostuu sakka.

6. Seosta sekoitetaan 8-12°C:ssa kolme minuuttia. Sakka (6X), joka sisältää suurimman osan väriaineista ja epäpuhtauksista mukaanluettuna des-triatsoli-BL-S640, poistetaan suodattamalla. Suodatus on hidasta. Suodatuskakku imetään niin kuivaksi kuin mahdollista. Suodatinpaperi ja suodatuskakku sijoitetaan 300 mlraan metanolia ja pidetään siinä neljä tuntia. Suodatinpaperi ja suodatuskakku kuivataan ilmassa, kiinteät aineet pois kaavitaan ja kuivataan tyhjiössä 50°C:ssa 24 tunnin aikana. Saanto 5-25 grammaa keltaisenruskeaa kiinteää ainetta (potenssi 200-700 yksikköä/mg). Säilytetään jatkokäsittelyä varten.

7. 15 g Darco G60 tai KB lisätään vaiheesta 6 saadun sakan (6X) suodokseen. Seosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 0,5 tuntia.

8. Hiili poistetaan suodattamalla ja pestään 40 ml:11a vettä. Pesuvesi yhdistetään suodoksen kanssa.

9. Suodos suodatetaan steriilisti 0,22 pm Millipore-suodatti-men lävitse. Vaiheiden 4-9 tulee olla loppuunsuoritettuja neljän tunnin aikana. Lämpötilan täytyy olla alle 24°C vaiheissa 7-9.

10. Yhtä suuri määrä (noin yksi litra) steriiliä, pyrogeeni-vapaata propyleeniglykolia lisätään sekoittaen pH-arvossa 4,5 olevaan vaiheesta 9 saatuun liuokseen. Kiteet muodostuvat yhden minuutin kuluessa. Pidetään pH-arvossa 4,5.

11. Seosta sekoitetaan 10-20°C:ssa yksi tunti.

12. Valkoiset kiteet poistetaan suodattamalla, pestään 175 ml:11a steriiliä 50-%:ista propyleeniglykolin vesiseosta ja 450 ml:11a steriiliä metanolia ja kuivataan tyhjiössä 56°C:ssa 24 tunnin aikana.

13. Saanto 55-60 grammaa (biosaanto 60-70 %) kiteistä BL-S640-monopropyleeniglykolaattia.

Claims (2)

15 66388

1. Menetelmä 7-/t)-®C-amino-</~ (p-hydroksifenyyli )asetamidq7- 3-(1,2,3-triatsol-5-yy1iti ometyyli)-3-kefeemi-4-karboksyylihappo- 1.2- propyleeniglykolaatin valmistamiseksi , jossa kefeemijohdannai-sen ja 1,2-propyleeniglykolin moolisuhde on 1:1 tunnettu siitä, että (1 ) 7-/D-o(- ami no (p-hydroks if enyy li ) asetamido7-3- (1 ,2,3-triatsol-5-yy1 itiometyyli)-3-kefeemi-4-karboksyylihapon metano-laatti liuotetaan funktionaalisen ketoryhmän sisältävän orgaanisen hapon vesiliuokseen; (2) liuoksen pH säädetään noin 4,5:ksi; (3) liuos laimennetaan epäpuhtauksien saostamiseen riittävällä vesimäärällä; (4) liukenemattomat epäpuhtaudet erotetaan; (5) vesiliuokseen lisätään riittävä määrä 1,2-propyleeni- glykolia kiteisen amino-J·-(p-hydroks if enyy li ) asetami dq7~ 3-(1,2,3-tri atsol-5-yylitiometyyli)-3-kefeemi-4-karboksyylihappo- 1.2- propyleeniglykolaatin saostamiseksi; (6) tuote otetaan talteen.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n n e t -t u siitä, että funktionaalisen ketoryhmän sisältävä orgaaninen happo on 2-oksopropionihappo tai 4-oksopentaanihappo.