FI65861C - Anordning foer genomfoering av ett radioimmunologiskt foerfarande - Google Patents

Anordning foer genomfoering av ett radioimmunologiskt foerfarande Download PDF

Info

Publication number
FI65861C
FI65861C FI772099A FI772099A FI65861C FI 65861 C FI65861 C FI 65861C FI 772099 A FI772099 A FI 772099A FI 772099 A FI772099 A FI 772099A FI 65861 C FI65861 C FI 65861C
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
antibody
antigen
sample
samples
carriers
Prior art date
Application number
FI772099A
Other languages
English (en)
Other versions
FI772099A (fi
FI65861B (fi
Inventor
Johann Eibl
Helmut Aicher
Original Assignee
Immuno Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Immuno Ag filed Critical Immuno Ag
Publication of FI772099A publication Critical patent/FI772099A/fi
Publication of FI65861B publication Critical patent/FI65861B/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI65861C publication Critical patent/FI65861C/fi

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/536Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
    • G01N33/537Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/804Radioisotope, e.g. radioimmunoassay
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/807Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
    • Y10S436/808Automated or kit
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/807Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
    • Y10S436/809Multifield plates or multicontainer arrays
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/82Hepatitis associated antigens and antibodies

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Sampling And Sample Adjustment (AREA)

Description

2 65861 kvantitatiivisesti erotetuiksi· Erottamista varten tulevat menetelminä kysymykseen paperisähköforeesi, seostaminen toisella vasta-aineella (kakeois- vasta-ainemenetelmä), antigeeni-vasta-aine -kompleksin saoetaminen poly-eteeniglykolilla, vapaan antigeenin adsorptio aktiivihiilelle tai erottaminen reaktiolla jähmeällä faasilla. Jälkimmäisessä tapauksessa valmistetaan jähmeä faasi joko kovalentisesti sitomalla reaktiokomponentti aktivoituun selluloosaan, Sephadex'iin tai Sepharose'en (Vide ja Forath, Bioohem. Biophys. Acta 130, 237-260, 1966, "Radioimmunoassay of proteins with the use of Sephadex Coupled antibodies"), tai jonkin reaktio-osapuolen adsorptiolla sopivalle pinnalle, esim. muoville, (Catt, Niall ja Tregear, Bioohem. J., 100, 31C-33C, 1966, "Solid-phase radioimmunoassay of human growth hormone").
Hepatitis-B-pinta-antlgeenin (HB AG) ja vastaavan vasta-aineen 8 (antiHB AB) osoittamiseksi radioimmunotesteillä tunnetaan ennestään seu- 8 raavat menetelmätt 1. Aueria I, Aueria II, Ausab (Abbot Laboratories). Nämä toimivat ns* kerrosperiaatteella.
Ausria I-menetelmässä käytetään vasta-aineella kuormitettua pientä putkea, joka täytetään tutkittavalla näytteellä; inkuboinnin jälkeen muodostuu antigeenin läsnäollessa vasta-aine-antigeeni -kompleksi (AB-AG), jolloin vasta-aine -komponentti on kiinnittynyt putkeen. Neste poistetaan sitten, putki pestään ja sekoitetaan radioaktiivisesti merkityn vasta-aineen liuoksen kanssa. Uudelleen inkuboinnin jälkeen muodostuu vasta-aine-antigeeni -merkitty vasta-aine -kompleksi (AB-AG-AB*); putki pestään jälleen ja AB-AG-AB*-kompleksin (kerros-kompleksin) radioaktiivisuus määritetään. Vasta-aineen merkitseminen tapahtuu sisällyttämällä radioaktiivista jodia (*^J) tunnetulla tavalla. Aueria II -menetelmässä käytetään pienten putkien asemesta pallomaisia jähmeitä kantimia. Ausab-menetelmä muistuttaa suuresti Ausria-menetelmää. Tässä valitaan kuitenkin päinvastainen kerros-kompleksin rakenne nimittäin AG-AB-AG*; 2. Elektro Nucleonics Laboratories'in Riausure -menetelmä.
Tässä menetelmässä muodostetaan samalla tavalla kuin Ausria II -menetelmässä kerros-kompleksi, kuitenkin käytetään pallosten asemesta kiinteinä kantimina lasioaasia; 3. Kombi RIA Biotest »menetelmä.
Tässä antigeenin suhteen testattava näyte sekoitetaan tarkennetun 3 65861 vasta-aineen kanssa ja seos siirretään antigeenillä päällystettyyn kuppiin. Inku-boinnin ja pesun jälkeen lisätään radioaktiivista antigeeniä, inkuboidaan ja pestään uudelleen.
Myös tässä on siis kysymys eräästä kerrosmenetelmästä, joissa vaaditaan perinpohjaisia pesu- ja erotusvaiheita. Antigeenin pitoisuuden näytteissä ollessa vähäinen, ovat kaikki nämä menetelmät epätarkkoja.
Saksalaisesta hakemusjulkaisusta 2 530 678 tunnetaan laitteisto ja menetelmä, jossa käytetään pallomaisia, pinnoitettuja kantimia, jotka siirretään putkimaisesta kotelosta kanninlevyn syvennyksiin. Tämä tunnettu menetelmä on hankala, koska pallomaisia kantimia joudutaan pesemään yksitellen, eli tarvitaan monimutkaista laitteistoa. Lisäksi pallomaisilla kantimilla on suhteellisen pieni pinta-ala, ja siten pieni kapasiteetti.
Saksalaisesta hakemusjulkaisusta 2 262 479 tunnetaan laitteisto ja menetelmä, jossa käytetään kartiomaisia, vain kädensijan avulla siirrettäviä kantimia. Koska nämä kantimet ja kädensija siirretään pesuvaiheen aikana ja kantimet viedään mittauslaitteeseen kädensijan avulla, on olemassa suuri kontaminaatiovaara.
Tämän keksinnön mukaisella laitteistolla vältetään kuvatut haitat ja vaikeudet, eikä tarvita kalliita erotus- ja pesuvaiheita. Lisäksi määrityksen tarkkuus paranee.
Keksinnön mukaiselle laitteistolle on tunnusomaista, että kännin käsittää pieniä levyjä tai puikkoja, jotka on kiinnitetty kiinnityslistaan ja jotka voidaan upottaa mikrotiitterilevyn syvennyksiin, jolloin kiinnityslistan ja jokaisen yksittäisen levyn väliin on tehty uurre haluttua murtumiskohtaa varten.
Keksinnön mukaista laitetta käytettäessä tapahtuu tulkinta radioaktiivisuu-sen suoralla mittauksella jähmeästä faasista - eikä mittaamalla jäämien radioaktiivisuus, kuten tapahtuu ennestään tunnetuissa radioimmunotesteissä. Ottamatta huomioon työnsäästöä, joka saavutetaan välttämällä linkoaminen ja pipetointi, saadaan suurimmat laskenta-arvot negatiivisten tai erittäin heikosti positiivisten näytteiden alueella, mikä merkitsee oleellista parannusta ja testitulosten varmistusta.
Mikäli tutkittu näyte sisältää antigeeniä, reagoi tämä radioaktiivisesti merkityn vasta-aineen kanssa. Seuraavassa vaiheessa, jossa merkitsemättömällä antigeenillä kuormattu kännin kastetaan reaktionesteeseen, voi vain se osa merkitystä vasta-aineesta reagoida kantimelle adsorboidun antigeenin kanssa, joka ei kulunut näytteen antigeenipitoisuuden vaikutuksesta. Kantimen pesun jälkeen löydetään siis tietty määrä sidottua radioaktiivisuutta, joka on kääntäen verrannollinen näytteen antigeenipitoisuuteen.
4 65861
Tapauksessa, jossa tutkittava näyte ei sisällä antigeeniä, vaan vasta-ainetta, kasvaa vasta-ainepitoisuus koenesteessä. Ensimmäisen inkuboinnin aikana ei siis tapahdu ollenkaan reaktiota. Jos sitten seuraavassa vaiheessa merkitsemättömällä antigeenillä kuormattu kiinteä kännin saatetaan kosketuksiin tutkittavan nesteen kanssa, syntyy merkitsemättömän ja merkityn vasta-aineen välinen kilpailu reaktiossa kantimella olevan adsorboidun antigeenin kanssa, mikä tarkoittaa, että myös tässä tapauksessa tietty määrä radioaktiivisuutta todetaan pestyssä kan-timessa, joka määrä jälleen on kääntäen verrannollinen tutkitun näytteen vasta-ainepitoisuuteen. Jos näytteiden sarja-tutkimuksessa todetaan vähentynyt radioaktiivisuus verrattuna vertailunäytteeseen, joka sisältää joko antigeeniä tai vasta-ainetta, niin tosin tiedetään, että ko. näyte on sisältänyt joka antigeeniä tai vasta-ainetta, mutta vielä ei tiedetä kumpaa; tämän selvittämiseksi suoritetaan ns. erotusdiagnoosi, jossa samanlainen toinen näyte saatetaan kosketukseen toisen kantimen kanssa ja inkuboidaan. Kännin pestään ja saatetaan seuraavassa vaiheessa kosketukseen radioaktiivisesti merkityn vasta-aineen kanssa ja inkuboidaan.
Jos tässä mittauksessa todetaan radioaktiivisuuden suurempi lukuarvo, merkitsee tämä sitä, että näytteessä ei ollut vasta-ainetta vaan antigeeniä, koska kaikki adsorboitunut antigeeni kului antigeeni-vasta-ainekompleksin muodostamiseen. Jos sen sijaan todetaan alentunut lukuarvo, tarkoittaa tämä sitä, että inkuboinnissa näytteen vasta-aine adsorboidun antigeenin kanssa kului antigeeni-vasta-ainekompleksin muodostamiseen ja vielä joitakin sitoutumiskohtia merkitylle vasta-aineelle oli vapaina antigeenillä kuormatulla kantimella.
Edullisesti käytetään hepariinilla stabiloitua, radioaktiivisesti merkittyä vasta-ainetta.
Tarkoituksenmukaisesti suoritetaan inkuboinnit lämpötilassa 18 - 45°C kestoajan ollessa 30 minuutista 15 tuntiin, edullisesti 45°C:ssa 60 minuutissa.
Keksinnön mukainen laitteisto sopii erityisesti HB AG:n ja anti-HB AB;n S s määritykseen. Sitä voidaan periaatteessa kuitenkin käyttää kaikkien antigeenien osoittamiseen, joita vastaan voidaan kehittää spesifisiä vasta-aineita. Samoin laitteisto sopii vasta-aineiden osoittamiseen, joiden antigeenit ovat proteiineja tai polypeptidejä ja joita voidaan valmistaa puhdistetussa muodossa. Sitä voidaan käyttää myös, kuten systeemi HB AG/anti-HB AB osoittaa, suhteellisen harvinaises- S s sa tapauksessa, että potilaan seerumit sisältävät sekä antigeeniä että myös vasta-ainetta. Muita keksinnön mukaisen menetelmän käyttömahdollisuksia ovat virus-antigeenien määritys ja veren hyytymistekijöiden, erityisesti tekijä-VIII-pro-teiinin määritys.
5 65861
Kantimen kuormitus voi tapahtua siten, että sitä käsitellään upottamalla antigeeniliuokseen 24 - 60 tunnin ajaksi.
Piirroksessa on esitetty keksinnön mukaista laitteistoa, jolloin kuva 1 on kaavamainen perspektiivikuva ja kuva 2 on yhden kantimen pystyleikkaus.
Laitteisto käsittää mikrotiitterilevyn 1, jossa on useampia sarjoja, joissa on esim. 12 syvennystä 2, 2', 2"... näytteen tutkimiseksi. Lisäksi laitteistoon kuuluu kiinnityslistoja 3, joihin kuhunkin on järjestetty sarja numeroituja pieniä levyjä 4, 4', 4,f... , jotka vastaavat mikrotiitterin yhden sarjan syvennyksien lukumäärää. Levyt 4, 4’, 4"... on kiinnitetty kiinnityslistaan 3 kaula-kappaleiden 5, 5', 5"... avulla, joiden poikkileikkaus on pienempi kuin levyjen poikkileikkaus. Nämä kaulakappaleet muodostavat halutut murtumiskohdat. Sen jälkeen, kun levyt kuvatun menetelmän mukaisesti ovat reagoineet mikrotiitterilevyn syvennyksissä tutkittavan nesteen kanssa, katkaistaan levyjen kaulat ja levyjen annetaan pudota laskentaputkeen 6, kuten kuvassa 2 on esitetty.
HB AG:n ja anti-HB AB:n määritys keksinnön mukaisella laitteistolla S s Tässä tutkimuksessa voi jokin ihmiskehon nesteen tutkittava näyte sisältää joko HB AG tai anti-HB AB tai ei kumpaakaan näistä kahdesta aineesta. Ensim-S s mäisessä tutkimuserässä inkuboidaan 0,2 ml tutkittavaa ainetta n. 60 minuuttia 45°C!ssa hautomakaapissa puhdistetun J:llä merkityn anti-HB AB:n (0,1 ml, si-
S
sältää noin 0,1 mcCi) kanssa mikrotiitterilevyssä, jolloin mukaan tuodaan kaksi HB AG-positiivista, kolme HB AB/anti-HB AB-negatiivista ja seitsemän HB AG-heikos- S SS s ti positiivista vertailunäytettä. Tämän inkuboinnin loputtua HB AG:llä päällyste-
S
tyt kampamaiset kantimet upotetaan ennalta inkuboituihin seoksiin ja inkuboidaan edelleen 45°C:ssa 90 - 120 minuuttia. Sen jälkeen kampamaiset kantimet poistetaan testiliuoksista ja pestään altaassa vesijohtovedellä. Yksittäiset testilevyt kam-pamaisilla kantimilla siirretään katkaisemalla ennalta määrätyiltä kohdilta koeputkiin ja määritetään yksittäisestä levystä gamma-spektrometrillä sitoutunut radioaktiivisuus. Mukana olleilla vertailunäytteillä 1 - 12 ja testattavilla näytteillä 13-24 saatiin seuraavat arvot.
6 65861 Näyte Aika minuuteissa epä (impulsesja/min.) 1 1.00 684 2 1.00 672 3 1.00 4 644 4 1.00 4 148 5 1.00 4 087 6 1.00 1 974 7 1.00 1 997 Θ 1.00 1 846 9 1.00 2 035 10 1.00 1 942 11 1.00 2 455 12 1.00 1 598 13 1.00 433 positiivinen 14 1.00 340 positiivinen 15 1.00 4 996 16 1.00 4 020 17 1.00 2 946 18 1.00 2 673 19 1.00 2 445 20 1.00 2 822 21 1.00 1 317 positiivinen 22 1.00 1 55O positiivinen 23 1.00 3 991 24 1.00 4 052 Näytteet 1 Ja 2 ovat voimakkaasti HB AG-positiivista vertailuseeru- 0 mia, näytteet 3-5 HB AG/antiHBAB-negatiivista vertailuseerumia} näytteet s 0 6-12 ovat heikosti HB AG-positiivista vertailuseerumia. Näistä kolmesta 8 ryhmästä määritettiin keskiarvot Ja seitsemällä HB AG-heikosti positiivi- 8 elia vertailueeerumilla lisätään 20 # keskiarvoon tai vähennetään siitä. Nyt vaaditaant että vähintään kuusi näistä seitsemästä näytteestä ovat määritetyissä rajoissa. Jos yksi näyte on näiden raja-arvojen ulkopuolella (tässä esiintyvässä sarjassa näytenumero 11), niin sen arvoa ei arvos- 7 65861 telussa oteta huomioon. JS1jelle jäävän kuuden näytteen keskiarvo + 20 ^ pätee raja*arvona. Jokainen näyte» jonka laskenta-arvo on tätä raja-arvoa pienempi, on katsottava positiiviseksi ja on taulukossa merkitty positiiviseksi (näytteet 13» 14, 21, 22).
Tämän ensimmäisen testisarjan jälkeen on erotettava, onko kysymyksessa HB AG:n vai antiHB AB:n positiivinen reaktio. Erotusmääritystä var-8 8 ten suoritetaan nyt toinen testisarja seuraavalla tavalla: 0,2 ml:n näytteitä pannaan mikrotiitterilevylle ja inkuboidaan HB AGillä päällystettyjen kampamaisten kantimien kanssa 60 minuuttia 45° 0
Ctssa. Kantimet poistetaan sen jälkeen näyteliuokeista, ja kuten edellä kuvattiin, pestään ja inkuboidaan vielä 60-120 minuuttia 0,2 ml:ssa 1+1 125 laimennettua J:llä merkittyä antiHB AB fysiologisessa suolaliuoksessa.
8
Sen jälkeen kampamaiset kantimet pestään toisen kerran ja tutkitaan, kuten edellä gamma-spektrometrissä. Tällöin on otettava huomioon, että ensimmäisessä testisarjassa, kun näytteessä on läsnä HB AG ensimmäisessä inku- 8 bolnnissa tapahtuu radioaktiivisesti merkityn vasta-aineen spesifinen estyminen, ja kun näytteessä on läsnä antiHB AB tapahtuu kuitenkin ainoas- 8 taan vasta-aineen kokonaismäärän lisääntyminen reaktioseoksessa. Kampamaisten kantimien upottamisen jälkeen sitoutuu näyteantigeeniin sitoutumaton radioaktiivisesti merkitty vasta-aine testilevyn pinnalle, ja HB ABtn läsnäollessa sekä osa näytteen vasta-aineesta että myös osa radio-8 aktiivisesti merkitystä vasta-aineesta kiinnittyy kampamaisten kantimien pinnalle. Verrattuna HB AG/antiHB AB-negatiivisiin vertailunäytteisiin, 8 8 tapahtuu sekä näytteen sisältäessä HB AG että myös näytteen sisältäessä 8 HB AB testilevyillä laskenta-arvojen aleneminen. Erotusmäärityksessä inku-
B
hoitaessa kampamaisia kantimia näytteiden kanssa, kun näytteissä on läsnä HB AG tai kun näytteet ovat HB AG/antiHB AB-negatiivisia, ei tapahtu im- B 8 8 munologista reaktiota, Jos antiHB AB on näytteessä, niin se voi täyttää 8 antigeenisitoutumispaikat kampamaisella kantimellä.
Jos nyt kampamaiset kantimet pestään ja vielä uudelleen, tällä ker-125 taa ^J:llä merkityn antiHB ABtn kanssa inkuboidaan, niin voi radioak-
S
tiivinen aine täyttää ainoastaan vielä vapaat antigeenisitoutumlspaikat jähmeällä faasilla. Tapahtuu siis, kun näytteessä on läenä antiHB AB, 8 laskenta-arvojen pieneneminen. HB AG:n tai HB AG/antiHB AB-negatiivisten 8 8 8 näytteiden läsnäollessa pysyvät laskenta-arvot korkeina.
Saadut tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa: 8 65861 Näyte Aika minuuteissa opm (impulsesja/min.) 1 1.00 3 866 2 1.00 3 716 3 1.00 3 949 4 1.00 3 799 5 1.00 3 964 6 1.00 1 435 7 1.00 1 504 Θ 1.00 1 605 9 1.00 1 627 10 1.00 1 482 11 1.00 1 449 12 1.00 1 448
13 1.00 3 951 positiivinen HB AG
e
14 1.00 4 026 positiivinen HBeAG
15 1.00 3 910 16 1.00 3 996 17 1.00 3 884 18 1.00 3 843 19 1.00 3 917 20 1.00 3 871
21 1.00 363 positiivinen antiHB AB
β
22 1.00 1 335 positiivinen antiHBgAB
23 1.00 3 776 24 1.00 3 778
Vertailueeerumina numero 1 ja 2 HB AG käytettiin heikosti positii-
S
vietä seerumia} numerot 3“5 ovat HB AG/antiHB AB-negatiivisia seerumeja ja 0 0 vertailunäytteet numero 6-12 ovat antiHB8AB-positlivieia seerumeja. Jälleen määritettiin näiden kolmen ryhmän keskiarvo sekä antiHB AB-posltii-vieen ryhmän raja-arvo kuten edellä. Jokainen näyte» jonka laskenta-arvo on tämän laskenta-arvon alapuolella» on katsottava positiiviseksi· mitä antiHB AB:hen tulee (näytteet 21» 22). Näytteet 13 ja 14 antoivat suuret
D
laskenta-arvot ja ne on tulkittava HB AG-positiivisiksi. Kaikki muut näyt- 0 teet» jotka molemmissa reaktioissa antoivat suuria laskenta-arvoja» ovat HB AG- ja antiHB AB-negatiivlsla.
B 8 9 65861
Alfa-fetoproteiinin määritys
Alfa-fetoproteiinia, joka on puhdistettu geelikromatografiaa käyttäen, käytetään kampamaisten kantimien päällystämiseen. Anti-Alfa-feto-proteiini -vasta-aineita puhdistetaan immuunisorboivalla aineella (BRCN- 1 pe
Sepharose'lla) ja merkitään pJ:llä. Normaalimäärät ovat väliltä 0-40 ng/ml seerumia. Tietyissä maksasairauksissa ja syöpäsairauksissa ovat arvot nousseet välille 100 - 1 000 ng/ml.
Antigeenien tai vasta-aineiden kvantitatiivinen määritys suoritetaan seuraavalla tavallas
Vertailuseerumien aeemesta käytetään määritettävän antigeenin lai-mennussarjaa. Laimennussarjat kalibrointikäyrän aikaansaamiseksi muodostetaan seuraavasti: Valitaan edullisesti standardin geometrisiä laimennuksia negatiivisessa vertailuseerumissa ja käytetään vertailunäytteinä lisäksi negatiivista vertailuseerumia ja merkittyä vasta-ainetta pelkästään. Näytteet, joissa on pelkkää vasta-ainetta, antavat arvoja panoksen enimmäis-sitomiskyvylle. Näytteet, joissa on negatiivista vertailuseerumia, antavat arvoja enimmäissitoutumista varten negatiivisten näytteiden läsnäollessa. Standardiantigeenin nousevan pitoisuuden mukana kalibroimiskäyräl-lä alenee sitoutunut aktiivisuus pitoisuuteen verrannollisesti. Kaikki vertailunäytteet arvioidaan vähintään kaksoismäärityksellä, edullisesti kolmo iemäärityk s ellä.
Seuraavista yksittäisarvoista saatu kalibrointikäyrä on esitetty ohei8eeea graafisessa kaaviossa (kuva 3) ja nimetty AFP-standardiksi:
Yksittäisarvot Kalibrointikäyrä 10 ng AFP c1= 2516 cl- 2488 c=2460 cpm 03= 2376 1 ng c.= 2276 c;=2360 5=2287 cpm 03= 2225 40 ng c = 2100 cl— 2045 c=2100 cpm c|=2156 10 65861
Yksittälaarvot Kalibrointikäyrä 80 ng c =1673 c'=1515 c=1581 cpm cy=1555 160 ng = 983 <=2= 875 C= .955 cpm 0^=1006 320 ng AFP c = 614 c2= 588 c- 567 cpm c^= 499 640 ng AFP c^= 143 c^= 205 c= 171 cpm c3= 166 1280 ng c.= 122 c_= 166 c= 126 cpm c3= 89
Negatiivinen vertailuseerumi c = 2625 c7=2783 c=2707 cpm c3=2712 125
Enimmäiesitoutuminen •'J-vasta-aineella 3540 of 3245 5=3340 cpm
Jatkomenettely on nyt samanlainen kuin edellä kuvatussa HBsAG-testissä.
Tutkittavia näytteitä inkuboIdaan merkityn vastaseerumin kanssa ja upotetaan sen jälkeen kampamaiset kantimet, jotka on päällystetty AFP:llä, mikrotiitterilevyihin· Uudelleen inkuboinnin jälkeen pestään kampamaieet kantimet ja aktiivisuus yksittäisillä testilevyillä määritetään gamma-epektrometrissä. Saadut laskenta-arvot olivat seuraavat: Näyte Näyte 1 c-i- 2525 4 c = 146 c2= 2481 _ cl= 135 c3= 2411 c=24 72 cpm c3= 104 c= 128 cpm 2 c.= 1142 5 Cl=5017 c2= 1276 _ cl=1965 c3~ 1217 c=1212 cpm c3=2034 c= 2005 cpm 3 c = 475 c 2= 512 c3= 489 c= 492 cpm 11 6 5 8 61 N&mä arvot vietiin kalibrointikäyrälle ja saatiin seuraava tulos:
Koe 1 negatiivinen 2 140-145 ng 3 380 ng 4 n. 1 000 ng 5 48 ng HCGtn (Human Chorionic Gonadotropin) määritys HCG:tä glykoproteiinihormonia, käytetään kampamaisten kantimien päällystämiseen; antiHCG AB merkitään radioaktiivisesti *2^J:llä. Normaaliarvot ovat noin 2 mlU/ml; syöpäsairauksien esiintyessä kohoavat arvot 100 mITJ/ml:aan asti; ECG:n määrittäminen on erityisesti seurattaesa kemo-terapiaa tärkeää.
Ga8triinin määritys
Gastriinia käytetään kampamaisten kantimien päällystämiseen. Vasta-ainslluoksena käytetään valmiiksi tehtyä ^2^J:llä merkittyä antigastriini-AB-liuosta.
Gastriinin määrittämisellä on yhä kasvava merkitys, koska sitä tuotetaan suoraan kasvaimista. Lisäksi esiintyy kohonneita gastriinimääriä mahan puutteellisessa hapon erityksessä.
IgE;n määritys
IgE on spesifinen lmmunoglobuliini, jonka läsnäolo voi antaa osoituksen luontaisten allergioiden läsnäolosta. Tässä tapauksessa kampattaisiin kantimiin sidotaan anti-IgE, joka vaikuttaa antigeeninä. Jos näytteitä, joissa on merkittyä IgE, esi-lnkuboidaan ja sen jälkeen upotetaan kantimet, niin on sidottu aktiivisuus kantlmilla kääntäen verranollinen IgE-pitoisuuteen tutkittavassa aineessa.
Allergeenin määritys
Jos anti-IgEtn asemesta kampamaisiin kantimiin kytketään spesifinen allergeeni (esim. penisilliini), niin voidaan merkittyjen vasta-aineiden avulla tätä allergeenia vastaan toteuttaa sama testimenetelmä allergeeni-spesifisenä.
12 65861
Tetanus-vasta-aineen määritys
Tetanus-vasta-aineita sidotaan kampailtaisiin kantimiin. Näytteet esi-125 inkuboidaan ^»merkityllä tetanusoksilnilla ja sen jälkeen upotetaan kam-paaaiset kantiaet. Tetanus-vasta-ainelden läsnäolo näytteessä todetaan laskenta-arvojen pienentymisestä verrattuna vertailunäytteisiln.
DNS-vasta-aineiden määritys
Anti-DNS-vasta-alnetiittereiden määrittäminen tarjoaa herkän menetelmän Lupus erytheaatodes visoeraliksen toteamiseksi ja tekee mahdolliseksi erotusmäärityksen muulla tavalla syntyneistä kollagenooseista. Kam-pamaiset kantimet päällystetään anti-DNS -vasta-aineella* ^^J-aerkittyä MS inkuboidaan näytteen kanssa ja upotetaan sen jälkeen kampamaiset kantiaet. Anti-MS -vasta-aineiden läsnäolo käy ilmi pienentyneistä laskenta-arvoista testilevyillä.
Immuunikompleksien määritys
Menetelmä a) Kampamaiset kantimet päällystetään kuuma-aggregoidulla IgCtlla; (igC aggregoidaan inkuboiaalla 60°C:ssa 20 minuutin jälkeen).
125 Tämä aine käyttäytyy immunologisesti kuten immuunikompleksit. J-mer-klttyä reumatekljää esi-inkuboidaan yhdessä näytteen kanssa ja se sitoutuu imauunikomplekeiin. Sen jälkeen upotetaan kampamaiset kantimet. Käyttämätön merkkiaine sitoutuu testilevyihin. Pienemmät laskenta-arvot tes-tilevyillä ilmaisevat iaauunikoapleksien läsnäolon näytteessä.
Menetelmä b) -merkitty reumatekljä voidaan korvata -merkityllä Clg (komplementtisysteemin ensimmäinen komponentti). Beaktiomeka-nismi pysyy samana.
Antigeenl-vasta-ainekompleksien määrittäminen saavuttaa yhä lisääntyvää merkitystä, koska nämä kompleksit voidaan saattaa yhteyteen joukon taudinkuvia synnyn kanssa, kuten niveltaudin, systemaattisen Lupus eryt-hematosuksen, munuaistaudin, maksatulehduksen ja mahdollisesti syövän taudinkuvan synnyn kanssa.
Antigeenin ja vasta-aineen samanaikainen määritys
Vasta-aineiden esiintyminen tutkittavaa antigeeniä vastaan on tähän astisissa radioimmunotutkimuksissa epätavallista, koska useimmiten määritetään hyvin pieniä antigeenejä (esim. hormoneja), jotka itsessään eivät vaikuta antigeenisesti tai oman kehon aineina eivät tuota vasta-aineita. Koska lisääntyvässä määrin kuitenkin myös suurmolekyylisiä tautiasynnyttä- 15 6 5 8 61 viä aineita näillä menetelmillä tutkitaan, on tällaisissa tapauksissa otettava lukuun satunnainen vasta-aineiden esiintyminen näitä aineita vastaan yksittäisissä näytteissä.
FI772099A 1976-08-20 1977-07-05 Anordning foer genomfoering av ett radioimmunologiskt foerfarande FI65861C (fi)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AT618576 1976-08-20
AT618576A AT343822B (de) 1976-08-20 1976-08-20 Radioimmunologisches verfahren und einrichtung zur bestimmung von antigenen

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI772099A FI772099A (fi) 1978-02-21
FI65861B FI65861B (fi) 1984-03-30
FI65861C true FI65861C (fi) 1984-07-10

Family

ID=3583732

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI772099A FI65861C (fi) 1976-08-20 1977-07-05 Anordning foer genomfoering av ett radioimmunologiskt foerfarande

Country Status (16)

Country Link
US (1) US4276259A (fi)
AT (1) AT343822B (fi)
BE (1) BE857668A (fi)
CA (1) CA1098441A (fi)
CH (1) CH636258A5 (fi)
DE (1) DE2734118C3 (fi)
DK (1) DK151398C (fi)
ES (1) ES461731A1 (fi)
FI (1) FI65861C (fi)
FR (1) FR2362397A1 (fi)
GB (1) GB1562957A (fi)
IT (1) IT1086008B (fi)
LU (1) LU77986A1 (fi)
NL (1) NL7708871A (fi)
NO (1) NO152670C (fi)
SE (1) SE441868B (fi)

Families Citing this family (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1572220A (en) * 1976-10-07 1980-07-30 Mochida Pharm Co Ltd Immunochemical process of measuring physiologically active substances
FI54842C (fi) * 1977-01-14 1979-03-12 Suovaniemi Finnpipette Formstycke i anordningar foer immunitetsbestaemningar och enzymreaktioner
CA1100037A (en) * 1977-03-11 1981-04-28 Chung-Mei Ling Hb.sub.c ag coated on solid phase
CA1148859A (en) * 1979-06-14 1983-06-28 Lacy R. Overby Simultaneous assay of two hepatitis viruses using a solid phase
EP0111762B1 (en) * 1980-06-20 1987-11-19 Unilever Plc Processes and apparatus for carrying out specific binding assays
WO1982000058A1 (en) * 1980-06-20 1982-01-07 Porter P Processes and apparatus for carrying out specific binding assays
US4486540A (en) * 1980-07-18 1984-12-04 Science Research Center, Inc. Identification of reagins in the blood serum of allergen sensitized vertebrates
US4696907A (en) * 1980-07-18 1987-09-29 Science Research Center, Inc. Identification of reagins in the blood serum of allergen sensitized vertebrates
US4459360A (en) * 1981-10-05 1984-07-10 Mast Medical Industries, Ltd. Multiple-component binding assay system and method of making and using it
DE3382548D1 (de) * 1982-03-03 1992-05-27 Becton Dickinson Co Trageplatte und anordnung fuer immunologische untersuchungen.
DE3416933A1 (de) * 1984-05-04 1985-11-07 Dora 1000 Berlin Köhler Mit antigenen oder antikoerpern beschichteter traeger
IL77144A (en) * 1984-11-27 1991-04-15 Orgenics Ltd Method and apparatus for performing solid phase immuno-assay on test card in a plurality of samples
US4940670A (en) * 1986-01-24 1990-07-10 Rhodes Buck A Method for compounding and testing patient specific monoclonal antibodies and monoclonal antibody fragments for in vivo use
GB2188418A (en) * 1986-03-27 1987-09-30 Gen Biolog Corp Assay tray assembly
US4891321A (en) * 1987-10-21 1990-01-02 Hubscher Thomas T Apparatus for performing determinations of immune reactants in biological fluids
AT394114B (de) * 1989-07-13 1992-02-10 Immuno Ag Verfahren zur bestimmung von antigenen und/oder antikoerpern in menschlichen koerperfluessigkeiten sowie set zur durchfuehrung des verfahrens
US5319436A (en) * 1992-05-28 1994-06-07 Packard Instrument Company, Inc. Microplate farming wells with transparent bottom walls for assays using light measurements
EP0576090B1 (en) * 1992-06-22 2001-10-10 Packard Instrument B.V. Adhesive plastic scintillator
US5244788A (en) * 1992-07-01 1993-09-14 Hubscher Thomas T Method and apparatus for performing determinations of immune rectants in biological fluids
US5512753A (en) * 1994-06-08 1996-04-30 Packard Instrument, B.V. Scintillation counting system using scintillator capsules
SE9402518D0 (sv) * 1994-07-18 1994-07-18 Pharmacia Biotech Ab Processing system
US5910287A (en) * 1997-06-03 1999-06-08 Aurora Biosciences Corporation Low background multi-well plates with greater than 864 wells for fluorescence measurements of biological and biochemical samples
US6063338A (en) 1997-06-02 2000-05-16 Aurora Biosciences Corporation Low background multi-well plates and platforms for spectroscopic measurements
US6426050B1 (en) 1997-05-16 2002-07-30 Aurora Biosciences Corporation Multi-well platforms, caddies, lids and combinations thereof
US6229603B1 (en) 1997-06-02 2001-05-08 Aurora Biosciences Corporation Low background multi-well plates with greater than 864 wells for spectroscopic measurements
US6171780B1 (en) 1997-06-02 2001-01-09 Aurora Biosciences Corporation Low fluorescence assay platforms and related methods for drug discovery
US6517781B1 (en) 1997-06-02 2003-02-11 Aurora Biosciences Corporation Low fluorescence assay platforms and related methods for drug discovery
US6861035B2 (en) * 1998-02-24 2005-03-01 Aurora Discovery, Inc. Multi-well platforms, caddies, lids and combinations thereof
DE29803626U1 (de) * 1998-03-03 1998-05-07 Pache, Wolfgang, 79294 Sölden Pinplatte
US7005029B2 (en) * 1999-10-26 2006-02-28 Nalge Nunc International Corporation Method of making a multi-well test plate having adhesively secured transparent bottom panel
ITCZ20020002A1 (it) * 2002-04-11 2003-10-13 Parco Scient E Tecnologico Del Dispositivo e metodo per il rilevamento simultaneo di differenti anticorpi e antigeni in campioni clinici, alimentari ed ambientali
US20040043398A1 (en) * 2002-04-15 2004-03-04 Demetrio Sanchez-Martinez Use of the multipin platform as anchor device
WO2004098764A2 (en) 2003-04-30 2004-11-18 Aurora Discovery, Inc. Multi-well plate providing a high-density storage and assay platform
US20050173059A1 (en) * 2004-02-11 2005-08-11 Nalge Nunc International Corporation Methods of making a multi-well test plate having an adhesively secured transparent bottom panel
US7816081B2 (en) * 2005-04-28 2010-10-19 Hitachi Chemical Co., Ltd. Method of minimizing reagent consumption in microplate-based reactions
GB0609612D0 (en) * 2006-05-15 2006-06-21 Glaxosmithkline Biolog Sa Detection method and kit
CN102341696B (zh) 2009-03-03 2013-12-11 万迈医疗仪器有限公司 用于高灵敏度荧光分析的检测系统和方法
EP2699906B1 (en) 2011-04-20 2017-11-29 Access Medical Systems, Ltd. Luminescent polymer cyclic amplification
EP2699908A1 (en) * 2011-04-21 2014-02-26 Universita' Degli Studi Del Molise Device, method and kit for the detection of different markers in different cellular or molecular types and their quantification
US8569075B2 (en) * 2011-09-14 2013-10-29 Atomic Energy Council Energy—Institute of Nuclear Energy Research Radioimmunoassay with a 96-welled micro-plate
US9568431B2 (en) 2012-04-16 2017-02-14 Access Medical Systems, Ltd. Luminescent immunoassays for quantitating analytes having a wide concentration range

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE341239B (fi) * 1967-09-06 1971-12-20 Pharmacia Ab
US3826619A (en) * 1971-12-21 1974-07-30 Abbott Lab Test apparatus for direct radioimmuno-assay for antigens and their antibodies
US3949064A (en) * 1973-10-26 1976-04-06 Baxter Laboratories, Inc. Method of detecting antigens or antibodies
DE2424465C3 (de) * 1974-05-20 1978-03-23 Biotest-Serum-Institut Gmbh, 6000 Frankfurt Verfahren zum gleichzeitigen Nachweis von Antigenen und deren Antikörpern im Festkörper-Radioimmuntest
US3932141A (en) * 1974-07-10 1976-01-13 Abbott Laboratories Apparatus for determining immunoassays of antigens and their antibodies
ZA754347B (en) * 1974-07-10 1976-06-30 Abbott Lab The use of a heterologous system of antibodies or antigens in immunoassay procedures
US3951605A (en) * 1974-08-08 1976-04-20 Rohe Scientific Corporation Instrument for automated immunochemical analysis
US4155711A (en) * 1975-06-24 1979-05-22 Smutko Raymond A Method and apparatus for determining thyroid function of multiple samples
DE2625896C3 (de) * 1976-06-04 1979-09-06 Auergesellschaft Gmbh, 1000 Berlin Atemgerät
US4090850A (en) * 1976-11-01 1978-05-23 E. R. Squibb & Sons, Inc. Apparatus for use in radioimmunoassays
US4160803A (en) * 1978-03-23 1979-07-10 Corning Glass Works Self packaged test kit

Also Published As

Publication number Publication date
AT343822B (de) 1978-06-26
ES461731A1 (es) 1978-05-16
BE857668A (fr) 1977-12-01
SE7707310L (sv) 1978-02-21
FI772099A (fi) 1978-02-21
DE2734118A1 (de) 1978-03-02
DE2734118B2 (de) 1980-04-24
DE2734118C3 (de) 1981-01-15
CH636258A5 (de) 1983-05-31
CA1098441A (en) 1981-03-31
NO772888L (no) 1978-02-21
NL7708871A (nl) 1978-02-22
SE441868B (sv) 1985-11-11
ATA618576A (de) 1977-10-15
FI65861B (fi) 1984-03-30
IT1086008B (it) 1985-05-28
FR2362397A1 (fr) 1978-03-17
DK305177A (da) 1978-02-21
GB1562957A (en) 1980-03-19
DK151398C (da) 1988-05-16
US4276259A (en) 1981-06-30
NO152670B (no) 1985-07-22
NO152670C (no) 1985-10-30
DK151398B (da) 1987-11-30
FR2362397B1 (fi) 1980-02-22
LU77986A1 (fi) 1978-01-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI65861C (fi) Anordning foer genomfoering av ett radioimmunologiskt foerfarande
CA1149279A (en) Method and apparatus for performing multiple, simultaneous in vitro diagnostic tests using a solid phase system
US4305924A (en) Method and apparatus for performing in vitro clinical diagnostic tests using a solid phase assay system
KR970007079B1 (ko) 주변 분석물의 농도 측정 방법
US5026653A (en) Scavenger antibody mixture and its use for immunometric assay
US3826619A (en) Test apparatus for direct radioimmuno-assay for antigens and their antibodies
JP2002509254A (ja) 全血用クロマトグラフィーデバイス内のポリカチオンの中和
GB1603001A (en) Determination of immunogens and antibodies
SE450296B (sv) Forfarande for direkt bestemning av fri obunden analyt
WO1983004371A1 (en) Inactivation of a lipid virus
CN103630531A (zh) 乙型肝炎表面抗原测定试剂盒以及检测方法
JPS626185B2 (fi)
Wu et al. Time-resolved fluorescence immunoassay of thyroxine in serum: immobilized antigen approach
Tsuruta et al. An automated ELISA system using a pipette tip as a solid phase and a pH-sensitive field effect transistor as a detector
Lin et al. A thyroid-stimulating hormone immuno-electrode
Cohen et al. Comparison of radioimmunoassay and counter-immunoelectrophoresis for the detection of antibody to hepatitis B core antigen
Llopis et al. A new microplate red blood cell monolayer technique for screening and identifying red blood cell antibodies
US4618485A (en) Kinetic radioimmunoassay test method and device
Burrell et al. Rapid detection of hepatitis B surface antigen by double antibody radioimmunoassay
Sagnelli et al. Radioimmunoassay for hepatitis B core antigen.
FI95417B (fi) Menetelmä ja reagenssi vasta-aineiden määrittämiseksi
US4474891A (en) Mini-iodinated polypeptide hormone tracer and method for its use
Neurath et al. Automated enzyme-linked fluorescence immunoassays for antiviral antibodies: A test for anti-HBs
Miyai Classification of immunoassay
Ukkonen et al. Subtyping of hepatitis B surface antigen by radioimmunoassay

Legal Events

Date Code Title Description
MM Patent lapsed

Owner name: "IMMUNO" AKTIENGESELLSCHAFT FUER