NO152670B - Anordning for utfoerelse av immunologiske fremgangsmaater for bestemmelse av antigener og antistoffer - Google Patents
Anordning for utfoerelse av immunologiske fremgangsmaater for bestemmelse av antigener og antistoffer Download PDFInfo
- Publication number
- NO152670B NO152670B NO772888A NO772888A NO152670B NO 152670 B NO152670 B NO 152670B NO 772888 A NO772888 A NO 772888A NO 772888 A NO772888 A NO 772888A NO 152670 B NO152670 B NO 152670B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- sample
- antigen
- samples
- antibodies
- determination
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims description 33
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims description 33
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 20
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 title claims description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 14
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 30
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 6
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 6
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 102000013529 alpha-Fetoproteins Human genes 0.000 description 5
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 102100021022 Gastrin Human genes 0.000 description 4
- 108010052343 Gastrins Proteins 0.000 description 4
- AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N chembl413654 Chemical compound C([C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 description 3
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 description 3
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 3
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 229940084986 human chorionic gonadotropin Drugs 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 206010003645 Atopy Diseases 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 241001233242 Lontra Species 0.000 description 1
- 208000005777 Lupus Nephritis Diseases 0.000 description 1
- 206010067737 Lupus hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 1
- 230000009858 acid secretion Effects 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012857 radioactive material Substances 0.000 description 1
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
- G01N33/537—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/804—Radioisotope, e.g. radioimmunoassay
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/807—Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
- Y10S436/808—Automated or kit
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/807—Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
- Y10S436/809—Multifield plates or multicontainer arrays
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/82—Hepatitis associated antigens and antibodies
Description
Foreliggende oppfinnelse angår en anordning for utførelse av immunologiske fremgangsmåter for bestemmelse av antigener og antistoffer med en mikrotiterplate med utsparinger til opptagelse av prøver som skal undersøkes, og med faste bærere belagt med en kompleksdanner.
Ved en særlig egnet radioimmunologisk fremgangsmåte for bestemmelse av såvel antigener som antistoffer, særlig av hepatitis-B-overflate-antigen (HBgAG) eller -antistoffer (antiHBgAB), i menneskelige kroppsvæsker blir i et første kvantitativt fremgangsmåtetrinn mengden av tilstedeværende antistoffer eller antigener bestemt, og i et annet fremgangsmåtetrinn som inneholder en differensialanalyse, bestemmes om det kvantitativt bestemte stoff er et antigen eller et antistoff. Ved det første trinn ved frem-gangsmåten tilsettes en oppløsning av et radioaktivt merket antistoff svarende til antigenet til en første prøve av den menneskelige kroppsvæske. Blandingen inkuberes så, hvilket ved tilstedeværelse av antigen fører til dannelse av et antigen/radioaktivt antistoff-kompleks (AG-AB &-kompleks). En første fast,
med umerket antigen av den samme type belagt bærer bringes så
i kontakt med den første prøve. Under kontakten med prøven kan den første bærer til dannelse av et antistoff/antigenkompleks ved tilstedeværelsen av antistoff i den første prøve, dannes ved adsorpsjon på bæreren. Derpå vaskes bæreren, og radioaktiviteten av bæreren måles. Når tellertallet er mindre enn normalt for menneskelig kroppsvæske uten antigen eller antistoff, er dette et tegn på at hverken antistoff eller antigen er tilstede, dvs. prøven er positiv. Verdien av tellertallet for den positive prøve er omvendt proporsjonal med mengden av det i prøven tilstedeværende antistoff eller antigen. For å fastlegge om den positive prøve inneholder antistoff eller antigen, blir en annen prøve av den menneskelige kroppsvæske, som ga det positive resultat, brakt i kontakt med en annen fast, med umerket antigen belagt bærer. Denne blanding inkuberes. Derpå vaskes den annen bærer og tilsettes til en oppløsning av et radioaktivt merket antistoff. Bæreren inkuberes igjen mens den befinner seg i oppløsningen av det radioaktivt merkede antistoff. Derpå blir den annen bærer vasket på ny, og radioaktiviteten av denne annen bærer måles. Når tellertallet for den annen bærer er lavere enn for en antigen-anti-
stoff-negativ kontrollprøve, viser dette tilstedeværelsen av antistoff. Er tellertallet like høyt, er antigen tilstede i den menneskelige kroppsvæske.
En særlig fordel ved denne fremgangsmåte er den relativt store sikkerhet som særlig skyldes at tellertallet for antigen-konsentrasjonen er omvendt proporsjonal, dvs. en lavere antigen-konsentrasjon gir et høyere tellertall med god statistikk.
En anordning for å utføre en slik fremgangsmåte er beskrevet i DE offentliggjørelsesskrift 25 30 678, ved hvilken den kuleformige, beskiktede bærer av en rørformig kuleholder er anbrakt i utsparingene i en plate. Bestemmelsen med kuleformige bærere er komplisert, da kulene må vaskes hver for seg, hvilket krevet omstendelige apparaturer. Dessuten har kuleformige bærere en relativt liten overflate og dermed en liten virkningsgrad.
Ved en annen anordning for utførelse av radioimmunologiske fremgangsmåter (DE offentliggjørelsesskrift 22 62 479) foreslåes kjegleformige bærere med bare ett håndtak. Da denne bærer og håndtaket beveges ved vaskeprosessen og bedømmes sammen med håndtaket i måleapparatet, er faren for en forurensning særlig ofte tilstede.
Den i fig. 1-8 i DE-OS 22 62 479 viste anordning er av en slik type hvor håndtaket ikke fjernes og hvor faren for forurensning er til stede.
Ifølge fig. 3 i offentliggjørelsesskriftet fjernes utelukk-ende en del av håndtaket, hvilket med hensyn til den påpekte mangel imidlertid er uten betydning, da resten av gripedelen kommer inn i tellerrøret.
Oppgaven ved foreliggende oppfinnelse er å fremskaffe en anordning for utførelse av radioimmunologiske fremgangsmåter, ved hjelp av en rekke bærere med en stor overflate som er lett håndter-bar og hvor faren for forurensning stort sett er utsjaltet.
Anordningen ifølge oppfinnelsen er kjennetegnet ved at bærerne består av små plater (4, 4', 4" ...) eller stifter, fortrinnsvis utført av plast, som er festet til en holdelist (3) dg er innsettbare i utsparingene (2, 2', 2" ...) i mikrotiterplaten (1), idet der mellom holdelisten (3) og hver enkelt liten plate (4, 4', 4" ...) er anordnet et hakk for å danne et bestemt brudd-
sted.
De små bæreplater kan, som angitt, bestå av plast, og blir ved dypning i en antigenoppløsning i et tidsrom på 24 til 60 timer belagt med antigener og antistoffer.
Utførelsesformer av oppfinnelsen beskrives i de vedlagte tegninger, hvor: fig. 1 viser en utførelsesform av anordningen ifølge oppfinnelsen for å utføre radioimmunologiske fremgangsmåter, i per-spektiv,
fig. 2 viser en anordning ifølge fig. 1, sett fra siden, og delvis i snitt,
fig. 3 viser en målekurve for de med anordningen ifølge oppfinnelsen utførte radioimmunologiske fremgangsmåter.
De i fig. 1 og 2 viste anordninger for utførelse av radioimmunologiske fremgangsmåter omfatter en mikrotiterplate 1, som har flere rekker med f.eks. 12 utsparinger 2, 2', 2" ... for prøven som skal undersøkes. Videre hører der til anordningen holdelister 3, hvor der på hver enkelt er en rekke nummererte små plater 4, 4', 4" svarende til antallet av utsparinger i en rekke på mikrotiterplaten. De små plater 4, 4', 4" ... er festet til holdelisten 3 ved hjelp av halsstykker 5, 5', 5" hvis tverrsnitt er mindre enn det for små plater. Disse halsstykker danner bestemte bruddsteder. Efter at de små plater ved den beskrevne fremgangsmåte har reagert med væsken som skal under-søkes i utsparingene i mikrotiterplaten, blir de små plater brukket av og får falle i tellerøret 6 som antydet på figur 2.
For ytterligere belysning av foreliggende fremgangsmåte i forbindelse med den beskrevne anordning, gies de følgende eks-empler :
Eksempel 1
Bestemmelse av HB AG og antiHB AB
S_ S
Ved denne undersøkelse kan prøven av menneskelig legems-væske som skal undersøkes,, inneholde enten HB s AG eller antiHB sAB eller ingen av de to stoffer. I en første undersøkelsesblanding inkuberes 0,2 ml av det materiale som skal undersøkes, i ca.
6o minutter ved 45°C i en inkubator med det rensede <12>^I-merkede antiHBsAB (0,1 ml inneholder ca. 0,1 p.Ci) i en mikrotiterplate
idet der medføres to HB AG positive, tre HB AG/antiHB AB negative s s s
og syv HB^AG svakt positive kontrollprøver. Ved slutten av denne inkubering innføres den med HBsAG belagte kamformige bærer i den forinkuberte blanding, og der inkuberes videre ved 45°C i 90 - 120 minutter. Derpå fjernes den kamformige bærer fra forsøksoppløsningen og vaskes i et kar med springvann. De enkelte små forsøksplater på den kamformige bærer overføres ved avbrekning på de forutbestemte bruddsteder i prøverør og i et gamma-spektrometer bestemmes den på de enkelte plater bundne radioaktivitet. På de medførte kont roilprøver 1-12 og på prøvene 13-24 som skal undersøkes, fikk man de følgende verdier:
Prøvene 1 og 2 er sterkt HB^AG-positivt kontrollserum, prøvene 3 - 5 er HBsAG/antiHBsAB-negativt kontrollserum;
prøvene 6-12 er HBsAG-svakt positivt kontrollserum. Av disse tre grupper bestemmes gjennomsnittsverdien, og ved de syv HB^AG-svakt positive kontrollsera legges 20% til, hhv. trekkes fra, gjennomsnittsverdien. Det er nu nødvendig at i det minste seks av de syv prøver ligger innenfor disse bestemte grenser. Befinner en prøve seg utenfor de to grenseverdier (i den her foreliggende rekke prøve nr. 11), blir dens verdi ved bedømmelsen ikke tatt hensyn til. Gjennomsnittsverdien av de gjenværende seks prøver pluss 20% gjelder som grenseverdi. Hver prøve som har et lavere tellertall enn denne grenseverdi, er å anse som positiv og er i tabellen betegnet som positiv (prøvene 13, 14 , 21, 22).
Efter denne første forsøksblanding må det avgjøres om den positive reaksjon stammer fra HB^G eller fra antiHBsAB. For å fastlegge differensialbestemmelsen utfører man nu et annet forsøk på følgende måte: Der anbringes prøver hver på 0,2 ml i mikrotiterplaten og inkuberes med HBgAG belagte kamformige bærere i 60 minutter ved 45°C. Bæreren taes så ut av prøveoppløsningene, og blir som ovenfor beskrevet, vasket og ytterligere inkubert i 60-120 min-125
utter i 0,1 ml av en 1 pluss 1 fortynning av det I-merkede antiHBgAB i fysiologisk saltoppløsning. Derpå vaskes den kamformige bærer nok en gang og undersøkes som ovenfor i et gamma-spektrometer. Herunder er å merke at ved den første forsøks-rekke fører tilstedeværelsen av HBsAG i prøven ved den første inkubering til en spesifikk inhiber ing av det radioaktivt merkede antistoff, men ved tilstedeværelsen av antiHBsAB i prøven fører dette imidlertid bare til en økning av den totale anti-stoffmengde i reaksjonsblandingen. Efter innsetning av den kamformige bærer bindes det radioaktivt merkede antistoff som ikke er bundet til prøveantigenet, til overflaten av prøveplatene,
og ved tilstedeværelsen av HBsAB blir såvel en del av prøve-antistoffet som en del av det radioaktivt merkede antistoff fiksert til overflaten av den kamformige bærer. Det blir sammenlignet med de HBsAG/antiHBsAB-negative kontrollprøver såvel ved tilstedeværelsen av HBsAG i en prøve som ved tilstedeværelsen av
HBsAB i en prøve til en reduksjon av tellertallene for forsøks-platene. Ved differensialbestemmelsen fåes ved inkubasjonen av den kamformige bærer med prøvene ved tilstedeværelse av HBgAG i prøvene hhv. ved prøver som er HBsAG/antiHBsAB-negative, ingen immunologisk reaksjon. Er antiHBsAB tilstede i prøven, kan det bindes til antigenbindingsstedene på den kamformige bærer.
Vaskes nu de kamaktige bærere og inkuberes igjen, denne 125
gang med I-merket antiHB sAB, kan det radioaktive materiale bare bindes til de fremdeles frie antigenbindingssteder på den faste fase. Der fåes altså ved tilstedeværelsen av antiHB AB i
s prøven en nedsettelse av tellertallene. Ved tilstedeværelsen av HBsAG eller HBsAG/antiHBsAB-negative prøver forblir tellertallene høye.
De fundne resultater er angitt i den følgende tabell:
Som kontrollsera nr. 1 og 2 ble anvendt HBgAG svakt positivt serum; nr. 3 til 5 er HBsAG/ant iHBgAB-negat ive sera og kont roll - prøvene nr. 6 til 12 er antiHBsAB-positive sera. Igjen bestemmes gjennomsnittsverdiene av disse tre grupper, og grense-verdien for den antiHBsAB-positive gruppe. Hver prøve hvis tellertall ligger under denne grenseverdi, betraktes som positiv med hensyn til antiHBgAB (prøvene 21, 22). Prøvene 13 og 14 ga høye tellertall og er å betrakte som HBgAG-positive. Alle de andre prøver, som i begge reaksjoner ga høye tellertall, er HBgAG og antiHBsAB-negative.
Eksempel 2
Be stemmelse av alfa- fetoprotein ( AFP)
Alfa-fetoprotein som ble renset ved gelkromatografi, ble anvendt for beskiktning av den kamformige bærer. Anti-alfa-fetoprotein-antistoff ble renset over en immunsorbens (BRCN-
125
sefarose) og merket med I. Normalspeilet ligger mellom 0 og 40 ng/ml serum. Ved bestemte leversykdommer og ved carzinoma økes verdiene til lOO ng/ml til lOOO ng/ml.
Den kvantitative bestemmelse av antigen, hhv. antistoff, utføres på følgende måte:
Istedenfor kontrollserumene medføres en fortynningsrekke
av det antigen som skal bestemmes. Fortynningsrekkene for frem-stilling av målekurven fremstilles som følger: Man velger fortrinnsvis geometriske fortynninger av standarden i negativt kontrollserum og anvender dessuten som kontrollprøver negativt kontrollserum og det merkede antistoff alene. Prøvene med de rene antistoffer gir verdier for den maksimale bindingsevne hos prøvene. Prøvene med det negative kontrollserum gir verdier for maksimal binding ved nærvær av negative prøver. Med stigende konsentrasjon av standardantigenet i målekurven synker den bundne aktivitet proporsjonalt med konsentrasjonen. Alle kontroll-prøver skal i det minste utføres i dobbelbestemmelse, fortrinnsvis i trippelbestemmelse.
En fra de følgende enkeltverdier oppsatt målekurve er vist
i figur 3 og er betegnet som AFP-standard:
Den videre fremgangsmåte er bare den samme som den ifølge eksempel 1 med HBgAG-prøven.
Man inkuberer prøven som skal undersøkes, med det merkede antiserum og innsetter derpå den kamformige bærer som er be-skiktet med AFP, i mikrotiterplaten. Efter en ytterligere inkubering vaskes den kamformige bærer og aktiviteten av de enkelte forsøksplater bestemmes i et gamma-spektrometer. De fundne tellertall var som følger:
Eksempel 3
Bestemmelse av HCG ( human chorionisk gonadotropin)
HCG, et glycoproteinhormon, ble anvendt til beskiktning av den kamformige bærer; og antiHGG AB ble. merket radioaktivt med <12*5>I. Normalverdiene ligger ved2miu/ml; ved opptreden av carzinoma økes verdiene inntil 100 mIU/ml. Bestemmelsen av HCG er særlig verdifull ved følging av kjemoterapien.
Eksempel 4
Bestemmelse av gastrin
Gastrin anvendes til beskiktning av den kamformige bærer.
125
Som antistoffoppløsning fremstilles en med I merket anti-gast rin-AB-oppløsning.
Bestemmelsen av gastrin er av økende betydning da det produseres av tumorer. Videre opptrer forhøyede gastrinspeil ved manglende syresekresjon i maven.
Bes temmelse av antistoffer
Eksempel 5
Bestemmelse av IgE
IgE er et spesifikt immunoglobulin, hvis tilstedeværelse kan gi et tegn på tilstedeværelsen av atopiske allergier. I dette tilfelle bindes et anti-IgE, som virker som antigen, til den kamformige bærer. Hvis prøvene nu forinkuberes med et merket IgE og bæreren så innføres, er den bundne aktivitet på bærerne omvendt proporsjonal med IgE-konsentrasjonen i under-søkelsesmåt erialet .
Eksempel 6
Bestemmelse av allergen
Hvis der istedenfor anti-IgE kobles et spesifikt allergen (f.eks. penicillin) til den kamformige bærer, kan den samme for-søksmetode utføres allergenspesifikt ved hjelp av merkede antistoffer mot disse allergener.
Eksempel 7
Bestemmelse av tetanusantistoffer
Tetanusantistoffer bindes til den kamformige bærer. Prøvene forinkuberes med 12 5I-merket tetanustoxin og innføres så. i den kamformige bærer. Tilstedeværelsen av tetanusantistoffer i prøven bestemmes ved nedsettelsen av tellertallene sammenlignet med kontrollprøver.
Eksempel 8
Bestemmelse av DNS- antistoffer
Bestemmelsen av ant i-DNS-ant istofftitere utgjør en følsom fremgangsmåte for påvisning av Lupus erythematodes visceralis og muliggjør differensialbestemmelse overfor kollagenoser av andre årsaker. De kamformige bærere beskiktes med anti-DNS-anti-125
stoff. I-merket DNS inkuberes med prøven, og derpå innføres den kamformige bærer. Tilstedeværelsen av anti-DNS-antistoffer ytrer seg ved nedsettelse av tellertallet på forsøksplatene.
Eksempel 9
Bestemmelse av immunkomplekser
Metode a) De kamformige bærere beskiktes med varmeaggregert IgG; (IgG aggregeres ved inkubasjon ved 6o°C efter 20 minutter). Dette materiale forholder seg immunologisk som immunkomplekser. 125 I-merket reumafaktor forinkuberes med prøven og binder seg til immunkomplekset. Derpå innføres de kamformige bærere. Den ikke forbrukte tracer binder seg til forsøksplatene. Lavere tellertall for forsøksplatene tyder på tilstedeværelsen av immunkomplekser i prøven. 12 5 12 5 Metode b) Den I-merkede reumafaktor kan erstattes med I-merket Clq (første komponent av komplementsystemet). Reaksjons-mekanismen forblir den samme.
Bestemmelsen av antigen-antistoffkomplekser vinner tiltag-ende betydning, da disse komplekser bringes i forbindelse med patogenesen av en rekke sykdomsbilder som arthritis, systemisk Lupus erythematosus, glomerulonefrit is, hepatitis og eventuell cancer.
Eksempel 10
Simultanbestemmelse av antigen og antistoff
Opptreden av antistoffer mot det antigen som skal under-søkes, er uvanlig ved konvensjonell radioimmunobestemmelse, da for det meste meget små antigener (f.eks. hormoner) bestemmes, som i og for seg ikke virker antigene, hhv. som strukturegne stoffer som ikke produserer antistoffer. Da i økende grad imidlertid også høymolekylære patogene stoffer undersøkes ved disse met oder, må der i slike tilfelle regnes med leilighetsvis opptreden av antistoffer mot disse forbindelser i enkelte prøver.
Claims (1)
- Anordning for utførelse av immunologiske fremgangsmåter for bestemmelse av antigener og antistoffer med en mikrotiterplate med utsparinger til opptagelse av prøver som skal undersøkes, og med faste bærere belagt med en kompleksdanner, karakterisert ved at bærerne består av små plater (4, 4', 4" ...) eller stifter, fortrinnsvis utført av plast, som er festet til en holdelist (3) og er innsettbare i utsparingene (2, 2<1>, 2" ...) i mikrotiterplaten (1), idet der mellom holdelisten (3) og hver enkelt liten plate (4, 4<*>, 4" ...) er anordnet et hakk for å danne et bestemt bruddsted.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT618576A AT343822B (de) | 1976-08-20 | 1976-08-20 | Radioimmunologisches verfahren und einrichtung zur bestimmung von antigenen |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO772888L NO772888L (no) | 1978-02-21 |
| NO152670B true NO152670B (no) | 1985-07-22 |
| NO152670C NO152670C (no) | 1985-10-30 |
Family
ID=3583732
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO772888A NO152670C (no) | 1976-08-20 | 1977-08-19 | Anordning for utfoerelse av immunologiske fremgangsmaater for bestemmelse av antigener og antistoffer |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4276259A (no) |
| AT (1) | AT343822B (no) |
| BE (1) | BE857668A (no) |
| CA (1) | CA1098441A (no) |
| CH (1) | CH636258A5 (no) |
| DE (1) | DE2734118C3 (no) |
| DK (1) | DK151398C (no) |
| ES (1) | ES461731A1 (no) |
| FI (1) | FI65861C (no) |
| FR (1) | FR2362397A1 (no) |
| GB (1) | GB1562957A (no) |
| IT (1) | IT1086008B (no) |
| LU (1) | LU77986A1 (no) |
| NL (1) | NL7708871A (no) |
| NO (1) | NO152670C (no) |
| SE (1) | SE441868B (no) |
Families Citing this family (41)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1572220A (en) * | 1976-10-07 | 1980-07-30 | Mochida Pharm Co Ltd | Immunochemical process of measuring physiologically active substances |
| FI54842C (fi) * | 1977-01-14 | 1979-03-12 | Suovaniemi Finnpipette | Formstycke i anordningar foer immunitetsbestaemningar och enzymreaktioner |
| CA1100037A (en) * | 1977-03-11 | 1981-04-28 | Chung-Mei Ling | Hb.sub.c ag coated on solid phase |
| CA1148859A (en) * | 1979-06-14 | 1983-06-28 | Lacy R. Overby | Simultaneous assay of two hepatitis viruses using a solid phase |
| EP0146654A3 (en) * | 1980-06-20 | 1986-08-20 | Unilever Plc | Processes and apparatus for carrying out specific binding assays |
| JPH0235944B2 (ja) * | 1980-06-20 | 1990-08-14 | Unilever Nv | Tokuitekiketsugokenteiojitsushisuruhohooyobigaihohoojitsushisurutamenoshikenkitsuto |
| US4696907A (en) * | 1980-07-18 | 1987-09-29 | Science Research Center, Inc. | Identification of reagins in the blood serum of allergen sensitized vertebrates |
| US4486540A (en) * | 1980-07-18 | 1984-12-04 | Science Research Center, Inc. | Identification of reagins in the blood serum of allergen sensitized vertebrates |
| US4459360A (en) * | 1981-10-05 | 1984-07-10 | Mast Medical Industries, Ltd. | Multiple-component binding assay system and method of making and using it |
| DE3382430D1 (de) * | 1982-03-03 | 1991-11-14 | Becton Dickinson Co | Trageplatte und anordnung mit mehreren bechern fuer immunologische untersuchungen. |
| DE3416933A1 (de) * | 1984-05-04 | 1985-11-07 | Dora 1000 Berlin Köhler | Mit antigenen oder antikoerpern beschichteter traeger |
| JPH0823558B2 (ja) * | 1984-11-27 | 1996-03-06 | オ−ジエニクス リミテツド | 検定装置 |
| US4940670A (en) * | 1986-01-24 | 1990-07-10 | Rhodes Buck A | Method for compounding and testing patient specific monoclonal antibodies and monoclonal antibody fragments for in vivo use |
| GB2188418A (en) * | 1986-03-27 | 1987-09-30 | Gen Biolog Corp | Assay tray assembly |
| US4891321A (en) * | 1987-10-21 | 1990-01-02 | Hubscher Thomas T | Apparatus for performing determinations of immune reactants in biological fluids |
| AT394114B (de) * | 1989-07-13 | 1992-02-10 | Immuno Ag | Verfahren zur bestimmung von antigenen und/oder antikoerpern in menschlichen koerperfluessigkeiten sowie set zur durchfuehrung des verfahrens |
| US5319436A (en) * | 1992-05-28 | 1994-06-07 | Packard Instrument Company, Inc. | Microplate farming wells with transparent bottom walls for assays using light measurements |
| EP0576090B1 (en) * | 1992-06-22 | 2001-10-10 | Packard Instrument B.V. | Adhesive plastic scintillator |
| US5244788A (en) * | 1992-07-01 | 1993-09-14 | Hubscher Thomas T | Method and apparatus for performing determinations of immune rectants in biological fluids |
| US5512753A (en) * | 1994-06-08 | 1996-04-30 | Packard Instrument, B.V. | Scintillation counting system using scintillator capsules |
| SE9402518D0 (sv) * | 1994-07-18 | 1994-07-18 | Pharmacia Biotech Ab | Processing system |
| US6063338A (en) | 1997-06-02 | 2000-05-16 | Aurora Biosciences Corporation | Low background multi-well plates and platforms for spectroscopic measurements |
| US6426050B1 (en) | 1997-05-16 | 2002-07-30 | Aurora Biosciences Corporation | Multi-well platforms, caddies, lids and combinations thereof |
| US6171780B1 (en) | 1997-06-02 | 2001-01-09 | Aurora Biosciences Corporation | Low fluorescence assay platforms and related methods for drug discovery |
| US6229603B1 (en) | 1997-06-02 | 2001-05-08 | Aurora Biosciences Corporation | Low background multi-well plates with greater than 864 wells for spectroscopic measurements |
| US5910287A (en) * | 1997-06-03 | 1999-06-08 | Aurora Biosciences Corporation | Low background multi-well plates with greater than 864 wells for fluorescence measurements of biological and biochemical samples |
| US6517781B1 (en) * | 1997-06-02 | 2003-02-11 | Aurora Biosciences Corporation | Low fluorescence assay platforms and related methods for drug discovery |
| US6861035B2 (en) | 1998-02-24 | 2005-03-01 | Aurora Discovery, Inc. | Multi-well platforms, caddies, lids and combinations thereof |
| DE29803626U1 (de) * | 1998-03-03 | 1998-05-07 | Pache Wolfgang | Pinplatte |
| US7005029B2 (en) * | 1999-10-26 | 2006-02-28 | Nalge Nunc International Corporation | Method of making a multi-well test plate having adhesively secured transparent bottom panel |
| ITCZ20020002A1 (it) * | 2002-04-11 | 2003-10-13 | Parco Scient E Tecnologico Del | Dispositivo e metodo per il rilevamento simultaneo di differenti anticorpi e antigeni in campioni clinici, alimentari ed ambientali |
| US20040043398A1 (en) * | 2002-04-15 | 2004-03-04 | Demetrio Sanchez-Martinez | Use of the multipin platform as anchor device |
| US7858044B2 (en) | 2003-04-30 | 2010-12-28 | Nexus Biosystems, Inc. | Multi-well plate providing a high-density storage and assay platform |
| US20050173059A1 (en) * | 2004-02-11 | 2005-08-11 | Nalge Nunc International Corporation | Methods of making a multi-well test plate having an adhesively secured transparent bottom panel |
| EP1875243B1 (en) * | 2005-04-28 | 2013-04-03 | Hitachi Chemical Research Center, Inc. | Method of minimizing reagent consumption in microplate-based reactions |
| GB0609612D0 (en) * | 2006-05-15 | 2006-06-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Detection method and kit |
| JP5775004B2 (ja) | 2009-03-03 | 2015-09-09 | アクセス メディカル システムズ，リミティド | 高感度蛍光分析のための検出システム及び方法 |
| JP6010110B2 (ja) | 2011-04-20 | 2016-10-19 | アクセス メディカル システムズ，リミティド | 発光重合体の反復増幅 |
| RU2013150683A (ru) * | 2011-04-21 | 2015-05-27 | Университа Дегли Студи Дел Молисе | Устройство, способ и набор для выявления различных маркеров в разных клеточных или молекулярных образцах и их количественной оценки |
| US8569075B2 (en) * | 2011-09-14 | 2013-10-29 | Atomic Energy Council Energy—Institute of Nuclear Energy Research | Radioimmunoassay with a 96-welled micro-plate |
| US9568431B2 (en) | 2012-04-16 | 2017-02-14 | Access Medical Systems, Ltd. | Luminescent immunoassays for quantitating analytes having a wide concentration range |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE341239B (no) * | 1967-09-06 | 1971-12-20 | Pharmacia Ab | |
| US3826619A (en) * | 1971-12-21 | 1974-07-30 | Abbott Lab | Test apparatus for direct radioimmuno-assay for antigens and their antibodies |
| US3949064A (en) * | 1973-10-26 | 1976-04-06 | Baxter Laboratories, Inc. | Method of detecting antigens or antibodies |
| DE2424465C3 (de) * | 1974-05-20 | 1978-03-23 | Biotest-Serum-Institut Gmbh, 6000 Frankfurt | Verfahren zum gleichzeitigen Nachweis von Antigenen und deren Antikörpern im Festkörper-Radioimmuntest |
| US3932141A (en) * | 1974-07-10 | 1976-01-13 | Abbott Laboratories | Apparatus for determining immunoassays of antigens and their antibodies |
| ZA754347B (en) * | 1974-07-10 | 1976-06-30 | Abbott Lab | The use of a heterologous system of antibodies or antigens in immunoassay procedures |
| US3951605A (en) * | 1974-08-08 | 1976-04-20 | Rohe Scientific Corporation | Instrument for automated immunochemical analysis |
| US4155711A (en) * | 1975-06-24 | 1979-05-22 | Smutko Raymond A | Method and apparatus for determining thyroid function of multiple samples |
| DE2625896C3 (de) * | 1976-06-04 | 1979-09-06 | Auergesellschaft Gmbh, 1000 Berlin | Atemgerät |
| US4090850A (en) * | 1976-11-01 | 1978-05-23 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Apparatus for use in radioimmunoassays |
| US4160803A (en) * | 1978-03-23 | 1979-07-10 | Corning Glass Works | Self packaged test kit |
-
1976
- 1976-08-20 AT AT618576A patent/AT343822B/de not_active IP Right Cessation
-
1977
- 1977-06-23 SE SE7707310A patent/SE441868B/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-07-05 FI FI772099A patent/FI65861C/fi not_active IP Right Cessation
- 1977-07-06 DK DK305177A patent/DK151398C/da not_active IP Right Cessation
- 1977-07-19 CH CH892977A patent/CH636258A5/de not_active IP Right Cessation
- 1977-07-28 DE DE2734118A patent/DE2734118C3/de not_active Expired
- 1977-08-02 GB GB32422/77A patent/GB1562957A/en not_active Expired
- 1977-08-03 FR FR7723974A patent/FR2362397A1/fr active Granted
- 1977-08-10 BE BE180068A patent/BE857668A/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-08-11 NL NL7708871A patent/NL7708871A/xx active Search and Examination
- 1977-08-18 LU LU77986A patent/LU77986A1/xx unknown
- 1977-08-18 ES ES461731A patent/ES461731A1/es not_active Expired
- 1977-08-18 IT IT26775/77A patent/IT1086008B/it active
- 1977-08-19 CA CA285,025A patent/CA1098441A/en not_active Expired
- 1977-08-19 NO NO772888A patent/NO152670C/no unknown
-
1978
- 1978-08-24 US US05/936,500 patent/US4276259A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA1098441A (en) | 1981-03-31 |
| DE2734118C3 (de) | 1981-01-15 |
| DK151398B (da) | 1987-11-30 |
| SE7707310L (sv) | 1978-02-21 |
| FR2362397A1 (fr) | 1978-03-17 |
| NO152670C (no) | 1985-10-30 |
| ES461731A1 (es) | 1978-05-16 |
| US4276259A (en) | 1981-06-30 |
| CH636258A5 (de) | 1983-05-31 |
| IT1086008B (it) | 1985-05-28 |
| FI65861B (fi) | 1984-03-30 |
| DE2734118A1 (de) | 1978-03-02 |
| FI65861C (fi) | 1984-07-10 |
| DK305177A (da) | 1978-02-21 |
| FR2362397B1 (no) | 1980-02-22 |
| SE441868B (sv) | 1985-11-11 |
| NL7708871A (nl) | 1978-02-22 |
| FI772099A (fi) | 1978-02-21 |
| DE2734118B2 (de) | 1980-04-24 |
| GB1562957A (en) | 1980-03-19 |
| BE857668A (fr) | 1977-12-01 |
| NO772888L (no) | 1978-02-21 |
| DK151398C (da) | 1988-05-16 |
| LU77986A1 (no) | 1978-01-11 |
| ATA618576A (de) | 1977-10-15 |
| AT343822B (de) | 1978-06-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO152670B (no) | Anordning for utfoerelse av immunologiske fremgangsmaater for bestemmelse av antigener og antistoffer | |
| TW297094B (no) | ||
| US6485982B1 (en) | Test device and method for colored particle immunoassay | |
| CA1149279A (en) | Method and apparatus for performing multiple, simultaneous in vitro diagnostic tests using a solid phase system | |
| US5030555A (en) | Membrane-strip reagent serodiagnostic apparatus and method | |
| US4197088A (en) | Method for qualitative and quantitative determination of immunological reactions | |
| US4639419A (en) | Immunological color change test involving two differently colored reagent spots | |
| US4400353A (en) | Electro-optical system for use in evaluating immunological reactions | |
| US4166103A (en) | Specific binding assay method and test kit employing polyvinyl alcohol as separating agent | |
| VanVunakis et al. | Use of the double antibody and nitrocellulose membrane filtration techniques to separate free antigen from antibody bound antigen in radioimmunoassays | |
| Headings et al. | A radioimmunoassay for quantifying carbonic anhydrase isozymes in crude lysates | |
| EP0218680A1 (en) | Direct homogeneous assay | |
| GB1597556A (en) | Device for use in immunoassays | |
| Wiseman | A modification of Hepatest, using the Terasaki plate, for the detection of HBSAg in blood donors. | |
| CN110174518A (zh) | 一种基于固相凝集技术的分检式红细胞血型不规则抗体检测试剂盒及制备方法 | |
| US20080241967A1 (en) | Radioimmunoassay using nanoparticle-antibody conjugates | |
| Wheeler | The measurement of LH, FSH, and prolactin | |
| Wheeler | Assays for LH, FSH, and prolactin | |
| JPH028270B2 (no) | ||
| Moore et al. | Development of a filter paper blood spot radioimmunoassay for thyroid stimulating hormone suitable for a regional neonatal screening unit | |
| Balfour et al. | Detection of specific IgG and IgM antibodies to Toxoplasma gondii with a commercially available enzyme immunoassay kit system. | |
| Garretta et al. | Screening of HBs antigen and detection of corresponding antibodies on Groupamatic equipment | |
| TALAL | Antibodies to nucleic acids | |
| Sagnelli et al. | Radioimmunoassay for hepatitis B core antigen. | |
| Talmadge et al. | Macro-And Micro-Spheres As Carriers In Immunoassays |