SE450296B - Forfarande for direkt bestemning av fri obunden analyt - Google Patents
Forfarande for direkt bestemning av fri obunden analytInfo
- Publication number
- SE450296B SE450296B SE7907535A SE7907535A SE450296B SE 450296 B SE450296 B SE 450296B SE 7907535 A SE7907535 A SE 7907535A SE 7907535 A SE7907535 A SE 7907535A SE 450296 B SE450296 B SE 450296B
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- receptor
- analyte
- sample
- free
- amount
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
- G01N33/78—Thyroid gland hormones, e.g. T3, T4, TBH, TBG or their receptors
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/804—Radioisotope, e.g. radioimmunoassay
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/815—Test for named compound or class of compounds
- Y10S436/817—Steroids or hormones
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
450 296
aldosteron, progesteron och testosteron med könshormonbindan-
de globulin, difenylhydantoin och albumin, antihemofil faktor
och dess inhibitorer, proteolytiska enzymer och deras inhi-
bitorer eller aktivatorer, kortisol och kortisolbindande
protein samt vitamin B12 med "intrinsic factor". Många andra
är kända eller kommer att bli kända framöver. Det system som
har undersökts mest ingående och som är mest betydande är
thyroidhormon-TBP-bindningssystemet. Eftersom teknikens stånd-
punkt huvudsakligen hänför sig till detta system kommer ana-
lysen av fri thyroid i stor utsträckning att bli föremål för
diskussionen i det följande. Det skall emellertid observeras
att samma problem och metoder är relevanta med avseende på
bestämningen av andra fria analyter.
Man har vanligtvis utvärderat funktionell thyrometabolisk
- status genom mätning av den totala serumhalten av thyroid-
hormonet thyroxin (3,5,3',5'-L-tetrajodthyronin, T4). Mer än
99,95% av det cirkulerande T4 tjänstgör som en metaboliskt
inert reservoar, som transporteras i serum, primärt bundet
till thyroxinbindande globulin (TBG) och sekundärt till
thyroxinbindande prealbumin (TBPA) och albumin, för vilka
man använder samlingsbegreppet thyroxinbindande protein (TBP).
Det är mycket som talar för att resterande mindre än O,1% av
den fria eller obundna fraktionen av cirkulerande T4 är fysio-
logiskt aktiv, eftersom denna fraktion diffunderar in i väv-
naderna för att utöva sin verkan, dess koncentration är en
viktig determinant för hormonavlägsningshastigheten och ano-
malier i TBP normalt icke påverkar dess koncentration. Man
tror att T4 är en förstadieförening till trijodthyronin (T3),
som också är närvarande i serum i fri och i proteinbunden
form. I likhet med vad som gäller för T4 är nivån fritt T3
bäst korrelerad till funktionell thyroidstatus.
Den absoluta mängden av T4 i prover, oavsett dess fria eller
bundna status, har hittills uppmätts genom uppmätning av to-
tal mängd T4. Det normala förfarandet innefattar denaturering
450 296
av TBP med alkohol och tillsats av ett förträngningsmedel,
såsom salicylat, för att frigöra en stor del av T4 i lösning,
följt av tillsatsen av radioisotopmärkt T4 och en T4-recep-
tor, såsom ett jonbytarharts eller olöslig antikropp. Prov
och isotopmärkt T4 medges konkurrera om begränsade positio-
ner på receptorn. Receptorn avskiljs därefter från de lös-
liga reaktanterna och den till receptorn bundna mängden ra-
dioaktivitet bestäms. Denna radioaktivitet är omvänt propor-
tionell mot mängden ursprungligen närvarande T4 i provet.
Då den totala mängden T4 ökar och minskar med TBP-, i synner-
het TBG-nivåerna hos den" euthyroida individen kan en abnorm
thyroidfunktion emellertid felaktigt indikeras genom vilken
som helst faktor som ändrar koncentrationen av de bindande
proteinerna. Androgener, estrogener, anaboliska steroider,
glukokortikoider och normal graviditet ändrar TBG-nivåernan
Enbart analys av total mängd T4 har således icke visat sig
vara en pålitlig indikator för den thyrometaboliska statusen.
Ändringar i TBG-nivåerna kompenseras vanligtvis genom en änd-
ring i nivåerna av total mängd T4, eftersom hypothalam-thyro-
idaxelns negativa tillbakaföringsmekanism verkar i riktning_
mot att hålla koncentrationen av fri T4 konstant. Den obund-
na eller "fria" delen av thyroxin i serum är därför den mest
användbara konstantindikatorn på thyrometabolisk status.
Mängden av obunden thyroxin styrs av massverkans lag och är
i hög grad en funktion av den totala mängden cirkulerande T4
och koncentrationen av TBG.
Svârigheterna vid korrelation av thyrometabolisk status till
den totala mängden T4 har lett till utvecklingen av thyroid-
hormonupptagningsanalyser. Vid denna bestämning mäter man
den relativa mängden TBP-bindande kapacitet i serum, dvs. den
mängd som icke redan är upptagen genom upptagning av thyroid-
hormon in vivo. Thyroidupptagningsimmunoanalyser utförs van-
ligtvis genom tillsats av -märkt T3 till ett serumprov
till dess T3 har absorberats av de omättade TBP-bindande po-
sitionerna, avlägsnande av oabsorberat T3 från reaktionsbland-
450 296
ningen genom att blandningen bringas i kontakt med en olös- '
lig T3-receptor, såsom ett jonbytarharts eller antikropp,
och uppmätning av avlägsnat märkt T3. T4 kan även ut-
nyttjas. Ett förhållandevis stort antal obesatta bindnings-
positioner indikeras genom motsvarande låga mängd
märkt thyroidhormon bundet till den olösliga receptorn.
-I stället för en direkt mätning av fri T4 multipliceras den
procentuella thyroidhormonupptagningen med resultaten av en
analys av total mängd T4 eller proteinbundet jod, som har ut-
förts på samma prov,för bestämning av fritt-thyroxin-index
(Clark et al., "Journal Clin. Endocrinol." 2§:39-45 (l965)).
Fritt-thyroxin-indexet baserar sig på den förutsättningen
att resultatet av upptagningen är omvänt proportionellt mot
omättat TBP i serum och att fritt T4 varierar direkt med den
totala mängden T4 och omvänt proportionellt med icke beräkna-
de TBP-nivåer. Fritt-thyroxin-indexet lider av många brister.
Det är i stånd till att ge begränsad känslighet och precision,
separata bestämningar är nödvändiga och det upptagningstest
varpå indexet baserar sig kan ge felaktiga värden, när det
används på sjuka euthyroida patienter, personer med ärftlig
TBG-brist, personer med förhöjda TBP-koncentrationer och pa-
tienter som behandlas med läkemedel såsom fenylbutazon, dife-
nylhydantoin, salicylat och prednison.
Ett krav på två separata bestämningar utgör även en integre-
rad del av den kinetiska analys av fritt T4 som avslöjas i
den amerikanska patentskriften 4 046 876. Enligt nämnda pa-
tentskrift analyseras två serier provrör. I båda serierna
etableras först en_ jämvikt mellan märkt T4, endogent
T4-prov och TBP. I den ena serien är ett medel närvarande för
att ersätta en stor del av T4 från TBP, dvs. denna serie ger
en bestämning av den totala mängden T4. Eftersom den andra
serien_icke innehåller något sådant medel kommer den väsent-
ligen att tillhandahålla en bestämning av T4-upptagningen.
Varje reaktionsblandning sätts därefter till olöslig T4-anti-
kropp och inkuberas under en fastställd period, varefter fa-
450 296
serna separeras och den första fasen analyseras med avseen-
de på märkämnet. De relativa reaktionshastig-
heterna i de två serierna beräknas för varje par av provrör
och resultaten jämförs med en standardkurva. Förutom olägen-
heten att det krävs två analysserier för varje bestämning,
liksom i fallet med den närbesläktade bestämningen av fritt-
thyroxin-index, kräver denna metod lângrandiga beräkningar.
Eftersom metoden är en kinetisk metod är den dessutom synner-
ligen tidsberoende, vilket gör det svårt att nöjaktigt utfö-
ra ett stort antal bestämningar samtidigt.
Den amerikanska patentskriften 3 799 740 beskriver en teknik
för att i en enkel behållare erhålla ett mått på den fria
mängden T4, den s.k. effektivt-thyroxin-kvoten. Denna metod
baserar sig emellertid i väsentlig utsträckning på en dubbel-
bestämning av thyroinhormonupptagningen och total mängd T4.
I överensstämmelse med denna metod extraheras prov-T4 från
TBG och en alikvot av detta extrakt kombineras med ett kom-
plex av -märkt T4 med TBG och med en alikvot omättat
TBG från samma prov. Ett anjonselektivt harts sätts därefter till
reaktionsblandningen, som inkuberas under en noggrant regle-
rad period, hartset avlägsnas och mängden märkämne i
den överliggande vätskan bestäms. Även om en del av analys-
stegen vid denna metod kan utföras i en enkel behållare är
T4-extraktionsprocessen besvärlig och inför avsevärda fel i
bestämningen. Det andra felet införs vid hanteringen av de
två provalikvoterna. Metoden är överhuvudtaget procedurtek-
niskt komplicerad.
Den amerikanska patentskriften 3 941 504 avslöjar likaledes
en analys av fritt T4, som kan utföras i en enkel behållare.
I detta fall kombineras ett prov och en alikvot av
märkt T4, varefter märkt och omärkt T4 från serum-TBP
extraheras på en dextrangelkolonn vid högt pH-värde. En pro-
centuell mängd av det totalt tillsatta märkämnet
kvarhâlls av kolonnen efter eluering med omättat TBP och en
del av det förextraherade provet. Denna procentuella andel,
450 296
fritt-thyroxin-ekvivalenten, är ett indirekt mått på fritt
T4, som kan kvantifieras genom jämförelse med lämpliga stan-
dardprover. Även om denna metod icke uttryckligen kräver en
analys av den totala mängden T4 som en del av förfarandet
uppvisar den icke desto mindre samma felkällor, som införs
genom extraktionen av T4 och märkt T4 från TBG på
dextrangelkolonnen. Vidare är kolonnkromatografering en obe-
kväm och oexakt metod, som icke är lämpad för kliniskt bruk
i stor skala. Denna metod innebär även hantering av dubbla
patientprover, en omedelbar felkälla, och innefattar ett o-
rimligt antal hanteringssteg.
En annan grupp besläktade analyser, generiskt betecknade fritt-
thyroxin-tester,kräver även bestämning av den totala halten
endogent T4. Vid dessa bestämningar inkuberas serum med
märkt T4 till dess märkt och omärkt T4 har fördelat
sig jämnt mellan TBP och den fria delen av T4. Samtidigt med
eller efter denna inkubation avskiljs obundet T4 från den TBP-
bundna fraktionen under användning av olika tekniker, exem-
pelvis träkol- eller dextrangelabsorption, ultrafiltrering
eller dialys. Även i detta fall kombineras resultatet matema-
tiskt med resultaten från en bestämning av den totala mängden
T4 på samma prov. Dessa tester uppvisar därför den principi-
ella olägenhet som har noterats vid andra metoder för analys
av fritt T4, dvs. behovet av en analys av den totala mängden
T4 för kvantifiering av den procentuella andelen fritt T4,
vilket resultat erhålls genom den andra av de tvâ analyserna.
Detta multiplicerar de vid varje test involverade felen och
fördubblar kostnaderna och tiden. Man stöter även på några
speciella problem vid dessa metoder, exempelvis behovet av
ett kraftigt renat märkt T4 vid dialys- och ultrafil-
treringsteknikerna. Exempel på dessa metoder beskrivs av
Oppenheimer et al: “Journal of Clinical Investigation" gg (ll)
(1963) 1769-1782 och Cavaleri et al: “Journal of Nuclear
Medicine" lg (9) (1969) 566-570. En liknande analys för be-
stämning av fritt testosteronwntær amwàmming av dialyssepa-
ration är känd.
450 296
Slutligen har fritt T4 bestämts direkt genom dialys av ett
prov och analys av dialysatet genom gaskromatografi eller
elektrofores. Dessa metoder är i avsaknad av bindningsanaly-
sernas känslighet, precision och enkelhet, kräver stor tek-
nisk sakkunskap och är för långsamma för rutinmässigt labora-
toriebruk.
Det är således ett allmänt ändamål med uppfinningen att re-
ducera de tekniska och teoretiska bristerna vid de kända
analyserna av fri analyt och den tid och den sakkunskap som
krävs för att genomföra dylika analyser. Ett annat ändamål
är att förbättra precisionen hos de kända metoderna för ana-
lys av fri analyt, att nedbringa kostnaden och att reducera
antalet reagens som krävs vid dylika analyser.
Ett huvudändamål med uppfinningen är att undvika behovet av
en analys av den totala mängden analyt vid bestämning av kon-
centrationen fri analyt. Ett annat ändamål är att tillhanda-
hålla ett förfarande för direkt bestämning av fri analyt,
att eliminera provanalytextraktioner i analyser för bestäm-
ning av koncentrationen fri analyt, att undvika hanteringen
av dubbla alikvoter av prover som skall analyseras och att
förenkla avlägsnandet av fri analyt från lösningar innehåll-
ande endogent bunden analyt. Dessa och andra ändamål framgår
närmare av beskrivningen.
Uppfinningen avser därför ett förfarande för direkt bestämning
av fri obunden analyt i ett prov, som innehåller en andel ana-
lyt bunden till en receptor i provet, varvid med uttrycket “ana-
lyt bunden till en receptor i provet" ej avses “antingen-anti-
kropp" utan systemen thyroidhormoner och thyroxinbindande pro-
teiner (TBP), aldosteron, progesteron och testosteron med köns-
hormonbindande globulin, difenylhydantoin och albumin, anti-
hempfil faktor och dess inhibitorer, proteolytiska enzymer och
deras inhibitorer eller aktivatorer, kortisol och kortisolbin-
dande protein samt vitamin B12 med “intrinsic factor", varvid
förfarandet utmärkes av att man
450 296
a) bringar provet i kontakt med en känd mängd av en omärkt
receptor för analyten i syfte att binda den fria analyten;
b) avlägsnar provet från kontakt med den omärkta receptorn;
c) bringar den omärkta receptorn i kontakt med ett märkt rea-
gens i form av
i) en märkt analytanalog eller
ii)n en märkt löslig analytreceptor;
d) avskiljer receptorn i steg (c) från obundet märkt reagens;
e) bestämmer mängden bundet eller obundet märkt reagens; och
f) korrelerar den uppmätta mängden i steg (e) till mängden fri
analyt i provet.
Det är i motsats till vid de hittills kända metoderna för be-
stämning av fri analyt fullständigt onödigt att bestämma den
totala mängden analyt, eftersom resultatet av förfarandet enligt
uppfinningen innebär ett direkt kvantitativt mått på fri analyt
och icke en procentandel. Resultaten kan enkelt jämföras med en
typisk standardkurva och den fria analyten kan bestämmas direkt.
Uppfinningen eliminerar på ett anmärkningsvärt sätt svårigheter-
na vid de hittills kända metoderna för bestämning av fria analy~
ter och ersätter dessa med ett förfinat, känsligt, exakt och
enkelt förfarande.
Det är minst tre analytreceptorer involverade i förfarandet
enligt uppfinningen. Provreceptorn är den naturliga receptor
som finns i provet som ett komplex med olika mängder analyt.
De märkta och omärkta receptorerna är båda reagens, som an-
vänds vid förfarandet. Medan den omärkta receptorn används
till att binda fri analyt vid alla utföringsformer enligt
uppfinningen används den märkta receptorn endast i ett spe-
cifikt alternativ. Två eller flera av dessa receptorer kan
vara lika eller olika.
45Û 296
Den omärkta receptorn för analyten måste väljas med omsorg.
Som allmän princip gäller att den bör ha en mycket hög affi-
nitet till analyten men låg kapacitet för bindning av analy-
ten, dvs. den bör icke vara i stånd att absorbera signifikant
större mängder analyt än vad som förväntas förekomma i fri
form i provet. Skälet härtill är att det steg som innebär att
man bringar omärkt receptor i kontakt med provet går ut på 7
att binda den normalt förekommande fria analyten. Det är icke
föredraget att avdraga analyt från analyt-receptorkomplexet
i provet, eftersom analyskänsligheten kan pâverkas ogynnsamt.
Om en tillräckligt stor del av analyten absorberas från ana-
lyt-receptorkomplexet kommer förfarandet i huvudsak att mäta
koncentrationen totalanalyt. Om vidare_kapaciteten och affi-
niteten hos den omärkta receptorn avviker radikalt från prov-
anahmreceptorn kommer en grad av tidsberoende att införas i
analysar;förstastegsabsorption, vilket orsakas av det grad-
visa avlägsnandet av analyt från dess komplex med provrecep-
torn. I de flesta fall kommer detta avlägsnande icke att re-
sultera i artificiellt höga nivåer av fri analyt, eftersom
en parallell absorption äger rum i standardproverna och kon-
trollproverna, men inkubationstidenfför standardproverna, kon-
trollproverna och de för analys avsedda proverna bör kontrol-
leras noggrant.
Lämpliga omärkta receptorer är svaga jonbytarhartser, oorga-
niskt sorptionsmaterial, såsom avslöjas i den amerikanska
patentskriften 3 666 854, eller proteiner såsom analytanti-
kropp. När den omärkta analytreceptorn insolubiliseras före
kontakt med provet kan man använda samma analytreceptor som
finns i provanalyt-receptorkomplexet, exempelvis TBG. Analyt-
antikropp föredras emellertid och för analys av fritt thyroxin
l .
har en beräknad affinitetskonstant av ca 1,4 x 10 O liter/mol
visat sig vara tillfredsställande.
Den omärkta receptorn insolubiliseras vanligtvis för att un-
derlätta avlägsnandet av provet från kontakten med receptorn.
Receptorn kan före, under eller efter bindningen av fri ana-
450 296
10
lut insolubiliseras genom att den absorberas eller binds ko-
valent till en inert yta eller genom att den aggregeras eller
tvärförbinds kovalent till dess den har blivit olöslig, exem-
pelvis genom polyetylenglykolutfällning eller glutaraldehyd-
tvärförbindning i överensstämmelse med känd teknik. Metoder
för absorbering eller bindning av receptorer, såsom prote-
iner, till olösliga bärare är även kända.
En speciellt föredragen konventionell teknik innebär absorp-
tion av en analytantikropp på innerväggen av plastprovrör
före kontakten med provet. I detta fall blir provröret den
enda reaktionsbehållaren för hela bestämningen av fri analyt
och hanteringen av reagensen förenklas betydligt, eftersom
man icke behöver tillgripa centrifugering eller filtrering
för att separera lösligt material från olösligt material vid
utförandet av förfarandet. Även om det ligger inom ramen för
uppfinningen att insolubilisera den omärkta receptorn efter
att den har bundit den fria analyten, är det klart nödvän-
digt att insolubiliseringstekniken i sådana fall icke också
gör provreceptorn olöslig.
När provreceptorn och den omärkta receptorn skiljer sig åt
immunologiskt kan den omärkta receptorn utfällas efter absorp-
tion av fri analyt och i närvaro av provreceptorn genom att
man helt enkelt tillsätter en tillräcklig mängd omärkt recep-
torantikropp för att åstadkomma immunprecipitation av omärkt
receptor.
Den använda mängden omärkt receptor är en funktion av dess
kapacitet och affinitet med avseende på analyten under analys-
betingelserna. Emellertid är mängden, uttryckt enbart som
bindningspositioner, vanligtvis större än den uppskattade
mängden fri analyt i provet men mindre än summan av det märk-
ta reagenset och den uppskattade mängden fri analyt. När det
märkta reagenset är en märkt analytanalog måste den omärkta
receptorns bindningspositioner vara begränsande. Konventio-
nella antikroppsabsorberade provrör, som hittills har använts
450 296
ll
för bestämning av total analyt, exempelvis totalt T4, är
tillfredsställande.
Den märkta analytreceptorn måste vara löslig och det är en-
dast praktiskt genomförbart att använda en sådan receptor,
där analyten samtidigt kan binda två receptorer, dvs; omärkt
och märkt analytreceptor. Så exempelvis måste analyten vara
polyepitopisk, när både den omärkta och den märkta receptorn
är analytantikroppar. Såsom en följd härav används märkta
receptorer vanligtvis för analyter med hög molekylvikt som
med större sannolikhet uppvisar minst två bindningspositioner.
Märkta receptorer och förfaranden för framställning därav är
välkända. Dylika receptorer har sedan någon tid tillbaka an-
vänts vid s.k. sandwich-immunoanalyser och histokemi. Efter-
som man önskar maximal bindning av märkt receptor till ana-
lyt vid användning av detta speciella märkta reagens, är det
föredraget att man väljer en receptor med så hög affinitet
och kapacitet som möjligt, så att en maximal mängd analyt
binds. Det är föredraget att använda analytantikropp, som har
märkts radioisotopiskt.
De märkta analytanalogerna utgör också en välkänd klass av
reagens. De framställs genom att man ersätter minst en atom
i den nativa analyten med en detekterbar grupp, vanligtvis
en radioisotop eller ett enzym, som kan sammankedjas med ana-
lyten med hjälp av en bärargrupp eller genom direkt substi-
tution av en analytatom. Ett exempel på sistnämnda är T4,
vari en av jodatomerna är ersatt med en radioisotop av jod,
såsom 1251 eller l3lI.
Lämpliga märkämnen är kända för det märkta reagenset, vare
sig detta är analytanalogen eller analytreceptorn. Sâ exem-
pelvis ligger det inom ramen för uppfinningen att utöver ovan-
nämnda enzymer och radioisotoper använda stabila fria radika-
ler, fluorescerande föreningar eller reaktanter, såsom coen-
Izymer eller kemiluminiscenta föreningar.
450 296
12
Vid förfarandet enligt uppfinningen bringas ett prov innehål-
lande fri analyt och receptorbunden analyt i kontakt med
omärkt analytreceptor. Som har beskrivits ovan är den omärkta
receptorn företrädesvis analytantikropp, absorberad på inner-
väggen på en plastbehâllare, exempelvis ett provrör av poly-
propen. Om receptorn är ett protein kan detta vara tvärförbun-
det med glutaraldehyd och absorberat på ytan i överensstämmel-
se med den amerikanska patentskriften 4 069 352.
I allmänhet är det icke fördelaktigt att utnyttja prov av
full styrka, i synnerhet när provet är blodserum. Den förhöj-
da koncentrationen av upplösta material i dylika prover kan
inverka ogynnsamt på analytreceptorns prestanda. Vidare är
antikroppbelagda ytor receptorer med förhållandevis låg kapa-
citet och hög affinitet. Den effektiva användningen därav med
de extremt låga koncentrationerna av fri analyt, som oftast
förekommer i prover, underlättas avsevärt genom provutspäd-
ning. Provutspädningen förtränger en liten mängd analyt från
dess receptor, som, när den kombineras med fri analyt, resul-
terar i att det binds tillräckligt med analyt till ytan så
att en efterföljande bestämning av receptorbunden analyt kan
utföras. Detärsåledes föredraget att sätta vatten eller
buffert till proven i en mängd av från ca 2 till 15 gånger
provvolymen, antingen före eller under provets kontakt med
den omärkta receptorn. Vanligtvis är en 1:10-utspädning av
provet i 0,0lM fosfatbuffrad saltlösning innehållande en li-
ten mängd bovinserumalbumin godtagbar.
Reaktionsblandningen, som icke innehåller märkt reagens, in-
kuberas under en tidsrymd och vid en temperatur som är till-
räcklig för att receptorn skall absorbera åtminstone en be-
tydande andel av den fria analyten. Dessa parametrar varierar
kraftigt beroende på sådana faktorer såsom jonstyrka, prov-
utspädning och receptoraffinitet. Eftersom jämvikten till
förmån för associering av analyt med receptor är avsevärt
större än för dissociering från endogent analyt-receptorkom-
plex är det föredraget att endast utnyttja en kort inkuba-
411
450 296
13
tionstid i detta skede, exempelvis från ca 5 till 12 minuter,
och en temperatur, vid vilken reaktionskomponenterna är sta-
bila. En föredragen inkubation för bestämning av fritt T4 är
ca 10 minuter vid ca 37OC under användning av ovan angivna
provutspädning och T4-antikroppsaffinitet.
Efter inkubationen separeras den omärkta receptorbundna ana-
lyten från de övriga reaktionskomponenterna. Detta kan utfö-
ras genom de ovan beskrivna metoderna för insolubilisering
av receptorn. Emellertid är bortsugning eller dekantering av
vätskeinnehållet i ett receptorbelagt rör den mest bekväma
metoden. Det är föredraget att tvätta den olösliga receptor-
bundna analyten med en buffert eller vatten för att ombesör-
ja att det olösliga materialet är i huvudsak fritt från prov-
receptor eller provreceptorbunden analyt.
Därefter analyseras mängden av bunden analyt genom tillsats
antingen av märkt analytanalog eller märkt löslig analytre-
ceptor, följt av separation av den lösliga fasen från den
olösliga och bestämning av märkämnesinnehållet i minst en av
faserna. Man använder företrädesvis en märkt analytanalog, i
vilket fall den olösliga receptorns bindningspositioner måste
föreligga i underskott i förhållande till den totala mängden
analyt och märkt analyt, så att en konkurrerande förträng-
ningsjämvikt kan inställa sig. Annars är mängden receptor-
bindningspositioner i allmänhet irrelevant om icke en ospe-
cifik märkt receptorbindning blir ett problem. Mängden märkt
analytanalog är icke kritisk. Mängden märkt receptor bör va-
ra större än mängden omärkt receptorbunden analyt. De märkta
reagensen tillsätts vanligtvis i form av buffrade lösningar.
Vanligtvis låter man jämvikt inställa sig mellan det märkta
reagenset och den olösliga receptorbundna analyten före fas-
separationen. Det är möjligt att öka analytkänsligheten genom
att avlägsna det märkta reagenset innan en betydande mängd
av receptorbunden analyt har dissocierat i lösning. Om disso-
ciering inträder är emellertid beroende av tiden och följakt-
450 296
14
ligen är det svårt att utföra analyser av stora provgrupper.
Det är i stället föredraget att låta reaktionsblandningen nå
ett stabilt tillstånd. Jämviktsinställningen är beroende av
samma faktorer som bestämmer analytbildning med omärkt recep-
tor och kan lätt fastställas av fackmannen. När det gäller
T4 är en inkubation av ca l timmme vid ca 37°C tillfredsstäl-
lande.
Fasseparationen utförs effektivt med hjälp av känd teknik,
såsom centrifugering, filtrering eller, vid användning av
belagda rör, dekantering eller avsugning. Den olösliga pro-
dukten kan därefter tvättas med vatten eller buffras såsom
i föregående steg. Det olösliga materialet analyseras där-
efter företrädesvis med avseende på halten märkämne, även om
också det resterande lösliga märkta reagenset kan bestämmas.
De med proven erhållna resultaten jämförs därefter med re-
sultaten för på liknande sätt behandlade kontrollprover och stan-
dardprover genom interpolering, varvid man erhåller ett di-
rekt kvantitativt mått på den fria analyten.
Uppfinningen åskådliggörs närmare medelst följande utförings-
exempel, vari temperaturangivelserna avser Celsiusgrader.
Exempel l
Detta exempel visar den lätthet varmed en analys av fritt T4
i prover från två patienter kan utföras under användning av
förfarandet enligt uppfinningen. Polypropenrör belagda med
kaninantigen för T4 märktes två och två enligt följande
schema.
TABELL I
Fritt T4 tillsatt
Rör nr Rörinnehåll (pg i 0,1 ml)
l,2 Fritt T4-serum-blindprøv, 0 ng/dl 0
3,4 Fritt T4-serum-standardprov, 0,25 ng/dl 0.25
m-
450 296
15
Tabe11 _l_(forts.)
5,6 Fritt T4-serum-standardprov, 1,0 ng/d1 1,00
7,8 Fritt T4-serum-standardprov, 2,9 ng/d1 2,90
9,10 Fritt T4-serum-standardprov, 4,9 ng/d1 4,90
11,12 Fritt T4-serum-standardprov, 7,35 ng/d1 7,35
13,14 Serumprov från patient "X" "X"
15,16 Serumprov från patient "Y" "Y"
Av statistiska skäl användes dubbelprover och icke på grund
av något obligatoriskt analyskrav. Följande reagens fick anta
rumstemperatur och sattes till de lämpliga rören ifråga såsom
dubbelorover:
(a) 100 ml fritt T4~serum-blindprov, 0ng/dl,
(b) 100 mikroliter av varje fritt T4-serum-standard-
prov i koncentrationer av 0,25, 1,0, 2,9, 4,9 och
7,35 ng/dl,
Ä(c) l00 mikroliter av varje prov.
Man tillsåg att avpipetteringen av alikvoterna om 100 mikro-
liter utfördes reproducerbart och på samma sätt för såväl
standardprov som analysprov. 1,0 ml av en saltlösning buffrad
med 0,0lM fosfatbuffert med pH 7,4 och innehållande bovinse-
rumalbumin och uppvärmt till 370 sattes till varje rör för
spädning av analysproverna, standardproverna och blindproverna.
Proverna och buffertlösningen blandades genom virvelströmning.
Samtliga rör inkuberades därefter i ett vattenbad med tempera-
turen 37° under 10 minuter, varefter rörens innehåll avsögs.
1,0 milzsx m4 1 trisbuffert (0,5 pci) pa 8,5 innehållande
0Jm6M natriumsalicylat, 0,004M 8-anilino-l-naftalinsulfonsyra
och 0,7M natriumklorid tillsattes och rören inkuberades under
60 minuter vid 37°. Innehållet i samtliga rör avsögs och radio-
aktiviteten i rören uppmättes med hjälp av en gammaräknare
under l minut med fönstret inställt på jod-125. Resultaten av
denna analys anges i tabell II nedan.Antalet pulser per minut
för sfandardproverna avsattes i ett halvlogaritmiskt diagram
~.
450 296
16
och koncentrationen av fritt T4 i de okända patientserumpro-
verna bestämdes med hjälp av interpolering. Patientserumresul-
taten är också angivna i tabell II.
TABELL II
koncentration
Rör nr Innehå11 i rör Pu1ser per min. av fritt T4
(bundet) (ng/d1)
1 Fritt T4-serum-b1indprov 26.458 0
2 ll II II ll 0
3 Fritt T4-standardprov 25.054 0,25
4 “ “ " g 24.487 0,25
5 Fritt T4-standardprov 21.044 1,0
6 “ " " 21.090 1,0
7 Fritt T4-standardprov 16.412 2,9
8 " " “ 16.737 2,9
9 Fritt T4-standardprov 14.442 4,9
10 " " " . i 14.991 4,9
11 Fritt T4~standardprov 13.012 7,35
12 " " “ 13.447 7,35
13 Serumprov från patient "X" 20.356 1,25
14 " " " " 20.664 1,15
15 Serumprov från patient "Y" 18.054 2,2
16 " " " " 17.281 1,5
Exemgel 2
En serie serumprover från gravida kvinnor analyserades med
avseende på procentuell T3-upptagning och total mängd T4 i
enlighet med det i exempel l beskrivna förfarandet. Fritt-
thyroxin-index (FTI) beräknades utgående från resultaten av
de första två analyserna och jämfördes med förfarandet enligt
exempel l. Som framgår av tabell III föreligger en god korre-
lation mellan de vid förfarandet enligt uppfinningen uppnådda
resultaten och det hittills använda fritt-thyroxin-index.
-01
(x
Prov
265
272
271
274
295
308
310
311
313
345
368
% Tsu
(35-4Ü%)
25,3
25,6
27,3
_24,9
31,6
25,8
23,6
30,5
23,6
23,1
24,4
17
TABELL
1012111214
(4a5"l 195 Pg%)
15,4 pg%
14,1
11,8
11,6
11,5
8,6
18,2
8,6
12,4
11,2
12,1
III
-FTI
(4,5-TTÛÉ ug%)
11,11 pg%
10,34
9,19
8,27
10,42
6,32
12,27
7,51
8,36
7,59
8,45
450 296
Fritt 14
(Û,§~É,3 ng/d1)
2,3 ng/d1
1,8
1,4
1,2
1,8
1,4
2,5
1,8
1,9
1,0
1,3
Claims (10)
- l. Förfarande för direkt bestämning av fri obunden analyt i ett prov, som innehåller en andel analyt bunden till en receptor i provet, varvid med uttrycket "analyt bunden till en receptor i provet" ej avses "antigen-antikropp" utan 2 systemen thyroidhormoner och thyroxinbindande proteiner (TBP), aldosteron, progesteron och testosteron med köns- hormonbindande globulin, difenylhydantoin och albumin, antihemofil faktor och dess inhibitorer, proteolytiska enzymer och deras inhibitorer eller aktivatorer, kortisol och kortisolbindande protein samt vitamin B12 med "intrinsic factor", k ä n n e t'e c k n a t_ av att man a) bringar provetj_kontakt med en känd mängd av en omärkt receptor för analyten i syfte att binda den fria analyten; b) avlägsnar provet från kontakt med den omärkta receptorn; c) bringar den omärkta receptorn i kontakt med ett märkt reagens i form av i) en märkt analytanalog eller ii) en märkt löslig analytreceptor; d) avskiljer receptorn i steg (c) från obundet märkt reagens; e) bestämmer mängden bundet eller obundet märkt reagens; och f) korrelerar den uppmätta mängden i steg (e) till mängden fri analyt i provet.
- 2. Förfarande enligt krav l, k ä n n e t e c k n a t av att analytreceptorn är en antikr0PP: som anbringas såsom en beläggning på åtminstone en del av en behållares inneryta.
- 3. Förfarande enligt krav l eller 2, k ä n n e t e c k - n a t av att den omärkta analytreceptorn tvättas efter det att 10 15 20 25 30 35 450 296 19 bringas i kontakt med märkt reagens.
- 4. Förfarande enligt något av föregående patentkrav, k ä n n e t e c k n a t av att provanalyten är thyroxin, tri-jodthyronin, testosteron eller difenylhydantoin.
- 5. Förfarande enligt något av föregående patentkrav, k ä n n e t e c k n a t av att receptormängden är sådan att antalet av receptorns bindningspositioner är mindre än den totala mängden provanalyt och provanalyt-analog.
- 6. Förfarande för bestämning av fritt thyroidhormon i ett fluidum, som också innehåller endogent bundet thyroid- hormon, i enlighet med förfarandet enligt krav l, k ä n n e t e c k n a t av att man a) bringar fluidet i kontakt med en känd mängd av en omärkt receptor för hormonet, varvid det fria hor- monet absorberas från fluidet; b) avskiljer receptorn från fluidet; c) bringar receptorn i kontakt med märkt hormon; d) avskiljer receptorn från obundet märkt hormon; e) bestämmer mängden obundet eller receptorbundet märkt hormon; och f) korrelerar den uppmätta mängden i steg (e) till mängden fritt hormon i fluidet.
- 7. Förfarande enligt krav 6, k ä n n e t e c k n a t av att thyroidhormonet är thyroxin.
- 8. Förfarande enligt krav 6 eller 7; k ä n n e - t e c k n a t av att receptorn är en thyroxinantikropp, som är applicerad såsom en beläggning på åtminstone en del av en behâllares invändiga yta och att fluidet är ett utspätt prov. 450 296 20
- 9. Förfarande enligt något av kraven 6-8, k ä n n e - t e c k n a t av att receptorn tvättas efter att den har avskiljts från fluidet.
- 10. Förfarande enligt krav 8, k ä n n e t e c k n a t av att thyroxinantikroppen omsättes med glutaraldehyd innan thyroxinantikroppen anbringas såsom beläggning på ytan.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US05/941,707 US4292296A (en) | 1978-09-12 | 1978-09-12 | Diagnostic method |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SE7907535L SE7907535L (sv) | 1980-03-13 |
SE450296B true SE450296B (sv) | 1987-06-15 |
Family
ID=25476940
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SE7907535A SE450296B (sv) | 1978-09-12 | 1979-09-11 | Forfarande for direkt bestemning av fri obunden analyt |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4292296A (sv) |
JP (1) | JPS5539089A (sv) |
AU (1) | AU524202B2 (sv) |
BE (1) | BE878687A (sv) |
CA (1) | CA1113391A (sv) |
DE (1) | DE2936307A1 (sv) |
DK (1) | DK160448C (sv) |
FR (1) | FR2436396A1 (sv) |
GB (1) | GB2030290B (sv) |
IE (1) | IE48481B1 (sv) |
IT (1) | IT1193197B (sv) |
LU (1) | LU81619A1 (sv) |
NL (1) | NL7906584A (sv) |
SE (1) | SE450296B (sv) |
Families Citing this family (27)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4381291A (en) * | 1979-02-23 | 1983-04-26 | Ab Fortia | Measurement of free ligands |
US4366143A (en) * | 1979-09-24 | 1982-12-28 | Amersham International Public Limited Company | Assay for the free portion of substances in biological fluids |
US4481298A (en) * | 1981-04-13 | 1984-11-06 | Amf Incorporated | Pre-precipitated double antibody immunoassay method |
US4447528A (en) * | 1981-08-10 | 1984-05-08 | Corning Glass Works | Detecting intrinsic factor blocking site antibody |
US5304498A (en) * | 1982-03-19 | 1994-04-19 | Ekins Roger Philip | Method and composition for free ligand assay |
WO1983003306A1 (en) * | 1982-03-19 | 1983-09-29 | Roger Philip Ekins | Method and composition for free ligand assays |
EP0089806B1 (en) * | 1982-03-22 | 1989-06-28 | AMERSHAM INTERNATIONAL plc | Assay for the free portion of substances in biological fluids |
US4687808A (en) * | 1982-08-12 | 1987-08-18 | Biospecific Technologies, Inc. | Activation of biocompatible polymers with biologicals whose binding complements are pathological effectors |
US4737544A (en) * | 1982-08-12 | 1988-04-12 | Biospecific Technologies, Inc. | Biospecific polymers |
ZA837119B (en) * | 1982-10-07 | 1984-12-24 | Amersham Int Plc | Assay for the free portion of substances in biological fluids |
US4749647A (en) * | 1984-06-22 | 1988-06-07 | Genetic Systems Corporation | Polymerization-induced separation assay using recognition pairs |
DE3442817A1 (de) * | 1984-11-23 | 1986-05-28 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und reagenz zur quantitativen bestimmung von freiem thyroxin in plasma, serum oder vollblut |
US5063151A (en) * | 1985-09-20 | 1991-11-05 | Biometallics, Inc. | Immunoassay method and kit |
GB8618443D0 (en) | 1986-07-29 | 1986-09-03 | Univ London | Monoclonal antibodies |
DE3626468A1 (de) * | 1986-08-05 | 1988-02-11 | Hoechst Ag | Verfahren und testkit zur bestimmung freier wirkstoffe in biologischen fluessigkeiten |
GB8621495D0 (en) * | 1986-09-05 | 1986-10-15 | Acade Diagnostic Systems Sa Nv | Assay |
GB8803000D0 (en) * | 1988-02-10 | 1988-03-09 | Ekins Roger Philip | Determination of ambient concentrations of several analytes |
GB8800419D0 (en) * | 1988-01-08 | 1988-02-10 | Amersham Int Plc | Method for measuring free fraction of ligands in biological fluids |
DE8902413U1 (de) * | 1989-03-01 | 1989-07-13 | Rappold Gmbh & Co Kg Karosserie- Und Fahrzeugbau, 5603 Wuelfrath | Kraftwagen |
US5198340A (en) * | 1991-01-17 | 1993-03-30 | Genentech, Inc. | Assay for free igf-i, igf-ii, and gh levels in body fluids |
US5464749A (en) * | 1991-07-22 | 1995-11-07 | Bayer Corporation | Immunoassay of free substances in biological fluids |
IT1254858B (it) * | 1992-04-14 | 1995-10-11 | Metodo per la determinazione della frazione libera di sostanze presenti nei fluidi biologici. | |
WO1994029722A1 (en) * | 1993-06-08 | 1994-12-22 | Chronomed, Inc. | Two-phase optical assay method and apparatus |
US6153440A (en) * | 1998-09-23 | 2000-11-28 | The Regents Of The University Of California | Simultaneous measurement of free triiodothyronine and free thyroxine by equilibrium dialysis and immunoassay |
US20050148063A1 (en) * | 2003-12-24 | 2005-07-07 | Cracauer Raymond F. | Disposable reaction vessel with integrated optical elements |
EP2062052A4 (en) * | 2006-09-14 | 2010-02-03 | Ge Healthcare Bio Sciences Ab | METHOD FOR DETERMINING ANALYZ CONCENTRATION |
EP2372365A1 (en) | 2010-04-01 | 2011-10-05 | Future Diagnostics B.V. | Direct immunoassay for vitamin D |
Family Cites Families (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA990416A (en) * | 1972-04-19 | 1976-06-01 | Sieuwko J. Mantel | Device suitable for use in radioimmunoassay and method of determining the content of a specific hormone in a serum sample |
NL154600B (nl) * | 1971-02-10 | 1977-09-15 | Organon Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen. |
US3666854A (en) * | 1969-07-30 | 1972-05-30 | Nuclear Med Lab | Test for thyroid hormone |
US3799740A (en) * | 1971-07-12 | 1974-03-26 | Mallinckrodt Chemical Works | Clinical competitive-binding test methods |
US4012494A (en) * | 1971-12-21 | 1977-03-15 | Abbott Laboratories | Direct radioimmunoassay for antigens and their antibodies |
US3896218A (en) * | 1972-07-13 | 1975-07-22 | Research Corp | Radiommunoassay determining the hepatitis associated antigen content of blood |
US3941564A (en) * | 1973-09-13 | 1976-03-02 | Miles Laboratories, Inc. | Method for assessing thyroid function |
US3980764A (en) * | 1973-11-05 | 1976-09-14 | Curtis Nuclear Corporation | Polymeric competitive protein binding adsorbents for radioassey |
US4016250A (en) * | 1974-03-22 | 1977-04-05 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method for testing for pregnancy |
US3960492A (en) * | 1974-05-31 | 1976-06-01 | Nuclear Diagnostics, Inc. | Method for determining an index of binding protein content of blood |
US4001583A (en) * | 1974-10-04 | 1977-01-04 | Barrett M James | Covalently bound biological substances to plastic materials and use in radioassay |
US4066410A (en) * | 1975-09-15 | 1978-01-03 | Nuclear-Medical Laboratories, Inc. | Thyroid hormone assay |
US4225784A (en) * | 1976-06-17 | 1980-09-30 | Smith Kline Instruments, Inc. | Covalently bound biological substances to plastic materials and use in radioassay |
US4032626A (en) * | 1976-06-30 | 1977-06-28 | Corning Glass Works | Reagent and method for tbg assay |
US4052504A (en) * | 1976-06-30 | 1977-10-04 | Corning Glass Works | Assay for thyroxine binding globulin |
US4046870A (en) * | 1976-06-30 | 1977-09-06 | Corning Glass Works | Assay for free thyroid hormones |
US4120945A (en) * | 1976-07-06 | 1978-10-17 | Becton, Dickinson & Company | Substrate coated with receptor and labeled ligand for assays |
IT1206354B (it) * | 1977-03-10 | 1989-04-21 | Lepetit Spa | Corredo da usarsi per la determinazione degli ormoni liberi nei fluidi biologici |
IT1153999B (it) * | 1977-03-15 | 1987-01-21 | Snam Progetti | Composizione atta alla determinazione della triiodotironina e metodo diagnostico impiegante la stessa |
DE2731028C2 (de) * | 1977-07-08 | 1986-09-04 | Thoma, Hans A., Dipl.-Chem. Dr., 8000 München | Verwendung eines Antikörpergels zur immunologischen Bestimmung von Hormonen, Pharmaka und Vitaminen, welche in ungebundenem Zustand vorliegen |
-
1978
- 1978-09-12 US US05/941,707 patent/US4292296A/en not_active Expired - Lifetime
-
1979
- 1979-05-16 CA CA327,701A patent/CA1113391A/en not_active Expired
- 1979-06-05 JP JP7109679A patent/JPS5539089A/ja active Granted
- 1979-07-02 AU AU48575/79A patent/AU524202B2/en not_active Expired
- 1979-07-09 GB GB7923822A patent/GB2030290B/en not_active Expired
- 1979-07-31 IT IT24824/79A patent/IT1193197B/it active
- 1979-08-17 FR FR7920829A patent/FR2436396A1/fr active Granted
- 1979-08-21 LU LU81619A patent/LU81619A1/xx unknown
- 1979-09-03 NL NL7906584A patent/NL7906584A/nl active Search and Examination
- 1979-09-07 DE DE19792936307 patent/DE2936307A1/de active Granted
- 1979-09-10 BE BE0/197071A patent/BE878687A/xx not_active IP Right Cessation
- 1979-09-11 SE SE7907535A patent/SE450296B/sv not_active IP Right Cessation
- 1979-09-11 IE IE1726/79A patent/IE48481B1/en unknown
- 1979-09-11 DK DK379479A patent/DK160448C/da not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
GB2030290B (en) | 1983-05-18 |
DE2936307A1 (de) | 1980-04-10 |
SE7907535L (sv) | 1980-03-13 |
DE2936307C2 (sv) | 1988-06-09 |
NL7906584A (nl) | 1980-03-14 |
LU81619A1 (fr) | 1979-12-07 |
CA1113391A (en) | 1981-12-01 |
IE48481B1 (en) | 1985-02-06 |
IE791726L (en) | 1980-03-12 |
AU524202B2 (en) | 1982-09-02 |
IT1193197B (it) | 1988-06-02 |
DK379479A (da) | 1980-03-13 |
FR2436396A1 (fr) | 1980-04-11 |
JPS5539089A (en) | 1980-03-18 |
DK160448B (da) | 1991-03-11 |
DK160448C (da) | 1991-08-26 |
JPS6311627B2 (sv) | 1988-03-15 |
FR2436396B1 (sv) | 1985-01-18 |
GB2030290A (en) | 1980-04-02 |
IT7924824A0 (it) | 1979-07-31 |
BE878687A (fr) | 1979-12-31 |
US4292296A (en) | 1981-09-29 |
AU4857579A (en) | 1980-03-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
SE450296B (sv) | Forfarande for direkt bestemning av fri obunden analyt | |
Ward et al. | The investigation of interferences in immunoassay | |
Zaharko et al. | Studies of a simplified plasma insulin immunoassay using cellulose powder | |
EP0089806B1 (en) | Assay for the free portion of substances in biological fluids | |
AU2009314258B2 (en) | Thyroid analyte detection and measurement | |
CN106370860A (zh) | 血清免疫球蛋白e胶体金层析定量检测试剂盒及试纸条 | |
Monneret et al. | Evaluation of LOCI® technology-based thyroid blood tests on the Dimension Vista® analyzer | |
JPH05203646A (ja) | 遊離種アナライト検定 | |
US4307071A (en) | Analytical reagent and method | |
CN102305866A (zh) | 快速诊断急性心肌梗死的检测装置 | |
CN104730231B (zh) | 一种用于荧光免疫定量检测的样本缓冲液及其应用 | |
CN106546729A (zh) | 一种去除干式免疫荧光定量法检测中血清基质效应的新工艺方法 | |
Ismail et al. | Testosterone assays: guidelines for the provision of a clinical biochemistry service | |
Giles | An improved method for the radioimmunoassay of free‐thyroxine in serum dialysates | |
Pelletier et al. | New automated method for measuring thiamine (vitamin B1) in urine | |
Morovat | Methods for the investigation of thyroid function | |
Spencer et al. | Thyroid testing for the new millenium | |
Doetsch et al. | Determination of urinary total protein by use of gel filtration and a modified biuret method | |
Coleman et al. | Triiodothyronine uptake assay with immobilized triiodothyronine antibody as the bound-free separating agent. | |
CN103399156B (zh) | 绿色荧光蛋白放射免疫试剂盒及其制备方法和检测方法 | |
CN115327099B (zh) | 一种抗线粒体抗体m2的检测试剂盒 | |
Yeromenko et al. | The relevance of the development and implementation of quality system in clinical diagnostic laboratories | |
Moore et al. | Development of a filter paper blood spot radioimmunoassay for thyroid stimulating hormone suitable for a regional neonatal screening unit | |
Dhar et al. | Determination of dehydroepiandrosterone sulfate in plasma by a one-step enzyme immunoassay with a microtitre plate. | |
JPS6262291B2 (sv) |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
NAL | Patent in force |
Ref document number: 7907535-4 Format of ref document f/p: F |
|
NUG | Patent has lapsed |
Ref document number: 7907535-4 Format of ref document f/p: F |
|
NUG | Patent has lapsed |
Ref document number: 7907535-4 Format of ref document f/p: F |