FI62539B - Foerfarande foer framstaellning av proteastoxoid som anvaends vid framstaellning av mot pseudomonas aeruginosainfektioner verkande trekomponentvaccin - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av proteastoxoid som anvaends vid framstaellning av mot pseudomonas aeruginosainfektioner verkande trekomponentvaccin Download PDFInfo
- Publication number
- FI62539B FI62539B FI770169A FI770169A FI62539B FI 62539 B FI62539 B FI 62539B FI 770169 A FI770169 A FI 770169A FI 770169 A FI770169 A FI 770169A FI 62539 B FI62539 B FI 62539B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- protease
- toxoid
- oep
- solution
- framstaellning
- Prior art date
Links
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 title description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 41
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 41
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 24
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 208000032536 Pseudomonas Infections Diseases 0.000 claims description 2
- 108010011176 Pseudomonas serine proteinase Proteins 0.000 claims description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 claims description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 claims description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 claims description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 claims description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 41
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 38
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 28
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 28
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 25
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 21
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 12
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 12
- JJCQSGDBDPYCEO-XVZSLQNASA-N dibekacin Chemical compound O1[C@H](CN)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N JJCQSGDBDPYCEO-XVZSLQNASA-N 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 5
- 241000772415 Neovison vison Species 0.000 description 5
- 235000011126 aluminium potassium sulphate Nutrition 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 5
- GRLPQNLYRHEGIJ-UHFFFAOYSA-J potassium aluminium sulfate Chemical compound [Al+3].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O GRLPQNLYRHEGIJ-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 5
- 241000282339 Mustela Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- 208000004396 mastitis Diseases 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 3
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 3
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 229940072033 potash Drugs 0.000 description 3
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Substances [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 235000015320 potassium carbonate Nutrition 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 101100166590 Arabidopsis thaliana CCX3 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010061788 Corneal infection Diseases 0.000 description 1
- 208000028006 Corneal injury Diseases 0.000 description 1
- 231100000757 Microbial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000011887 Necropsy Methods 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000001388 Opportunistic Infections Diseases 0.000 description 1
- 231100000742 Plant toxin Toxicity 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 206010040893 Skin necrosis Diseases 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 231100000659 animal toxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 201000007717 corneal ulcer Diseases 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 1
- 244000144980 herd Species 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052594 sapphire Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010980 sapphire Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 229940031572 toxoid vaccine Drugs 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 230000036269 ulceration Effects 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/104—Pseudomonadales, e.g. Pseudomonas
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Iirarm r„, /4.. KUULUTUSJULKAISU
3BV W <") utlAgonimcsskrift 62 5 3 9 •SeSJHJ C Patentti myönnetty 10 01 19^3 (45) Patent rr.oudclafc 0 0? G 7/00, (51) Kv.ik. /Intel. A 61 K 39/104 770169 SUOM I —FI N LAN D (21) Ewnttltakumm — Nrtnttiwaiwini (22) Htkamlipilvl — Aneöknlnjtdtj 20.01.77 (23) Alkupilvl —GlMghutadtg 20.01.77 (41) Tullut (ulkhakal — Wlvlt off«ncll| 06.08.77
Patentti- j» rekisterihallitus (44) Nihuviiuipwtoo |a kuuL|uiiuiMin pvm.— 30.09.82
Patanfe och rtf isterstyrelsen ' 7 Antekan uttagd oeh wl.»krifun pubitnrad (32)(33)(31) PyydMty «uoikuu*—»«jtrt prior*·* 05.02.76
Japani-Japan(JP) IO838/76 (71) Shionogi & Co., Ltd., No. 12, 3-chome, Dosho-machi, Higashi-ku, Osaka,
The Kitasato Institute, No. 5-9-1, Shirogane, Minato-ku, Tokyo Pref.,
Japani-Japan (JP) (72) Yuzuru Homma, Tokyo Pref., Kazuyuki Morihara, Osaka Pref.,
Japani-Japan(JP) (lk) Leitzinger Oy (5^) Menetelmä valmistaa proteaasitoksoidia, jota käytetään Pseudomonas aeruginosa-infektion vastaisen kolmikomponenttirokotteen valmistamiseksi - Förfarande för framställning av proteastoxoid, som använes vid framställning av mot Pseudomonas aeruginosa-infektioner verkande trekomponentvacc in
Keksinnön kohteena on menetelmä valmistaa proteaasitoksoidia, jota käytetään Pseudomonas-aeruqinosa-infektion vastaisen kolmekomponent- tirokotteen valmistamiseksi, jolla proteaasitoksoidilla on seuraavat.
ominaisuudet: 1) molekyylipaino: 63.000 (geelisuodatus), 2) UV-absorptiospektri: maksimi 280 mp (e|®^ = 9,27, 0,1 M KC1), minimi 250 mp, 3) isoelektrinen piste: pH 5,2 (fokaalinen elektroforeesi), 4) ulkonäkö: väritön jauhe, 5) aminohappokoostumus: aminohapporyhmät (g/100 g proteiinia); asparagiinihappo (15,6), treoniini (5,0), seriini (7,6), glu-tamiinihappo (9,5), proliini (2,1), glysiini (7,7), alaniini (8,5), väliini (5,0), isoleusiini (3,9), leusiini (8,7), tyrosiini (6,9), fenyylialaniini (5,9), lysiini (4,1), histi-diini, (1,9), arginiini (2,3), tryptofaani (2,3), ammoniakki (1,4) (yhteensä 98,5 g), 6) proteaasiaktiivisuus: ei 7) antigeeniaktiivisuus: havaittu.
62539
Sekä lääketieteessä että eläinlääketieteessä P. aeruginosa aiheuttaa erilaisia tärkeitä ongelmia tyypillisenä patogeeninä opportunistisissa infektioissa, jotka ovat kiinnittäneet yhä enemmän huomiota lääketieteellisen hoidon edistyessä merkittävästi.
P. aeruginosan aiheuttamia infektioita, erityisesti vakavalaatuisia, tapahtuu herkästi vastasyntyneessä lapsessa, kun immuniteetti on fysiologisesti riittämätöntä, potilaissa, joiden immuniteetti on pienentynyt syövän, leukemian, kudossiirrosten ja palovammojen johdosta, ja kun immuniteetti on heikentynyt lääkityksen johdosta.
Eläinlääketieteessä P. aeruginosan aiheuttama verenvuotokeuhkokuume minkeillä ja P. aeruginosan aiheuttama utaretulehdus karjalla ovat vakava taloudellinen ongelma elintarviketeollisuudessa.
Viime aikoina on kehitetty muutamia antibiootteja P. aeruginosaa vastaan, mutta ne voivat tuskin olla tehokkaita, kun immuniteeetti on riittämätöntä tai sen toiminta on pienentynyt elävässä ruumissa. Mitä taas tulee edellä mainitunlaisiin P. aeruginosan aiheuttamiin infektioihin eläinlääketieteessä, minkkejä on käytännössä mahdotonta ja kaupallisesti kannattamatonta hoitaa antibiooteilla antamalla antibioottia useille tuhansille ja jopa useille kymmenille tuhansille eläimille. Utaretulehdus ongelma karjalla omaa melkein samanlaiset olosuhteet. Tämän vuoksi on mitä toivottavinta voida käyttää immuno-terapiaa kemoterapian asemesta tai yhdistettyä hoitoa niillä.
Immunoterapiassa on jo eristetty normaali antigeeni Original Endotoxin Protein, josta seuraavassa käytetään lyhennystä OEP, joka suojaa kaikkia P. aeruginosan aiheuttamia infektioita vastaan riippumatta serotyypin mukaisesta kannan laadusta (tällä hetkellä tunnetaan 13 laatua tai enemmän). Homma et ai.on alkanut soveltaa tätä antigeeniä käytäntöön (J. Y. Homma et ai., Japan. J. Exp. Med., 45, 355 - 360 (1975); J.Y. Homma et ai., Japan. J. Exp. Med., 42, 23 - 34 (1972); J. Y. Homma, Microbial Drug Resistance, Tokyo University Press, Tokyo, 267 - 279 (1975); J. Y. Homma, The Fourth International Congress of Animal, plant and Microbial Toxins,
Plenum Publisher, London (1975)).
3 62539
Pseudomonas aeruginosa muodostaa proteaasia, elastaasia ja muita aineita bakterisolun ulkopuolelle. Näiden kahden entsyymin on osoitettu toimivan patogeenisinä tekijöinä (K. Kawaharajo et ai.,
Japan. J. Exp. Med., £5, 79 - 88 (1975); K. Kawaharajo et ai.,
Japan. J. Exp. Med., 45, 515 (1975); K. Kawaharajo et ai., Japan.
J. Exp. Med., 44, 435 - 442 (1974); J. Y. Homma et ai., Japan.
J. Exp. Med., £6, 245 - 246 (1976)). Tämä käy riittävän hyvin ilmi siitä seikasta, että potilaiden, jotka kärsivät p. aeruginosan aiheuttamasta kroonisesta hengitysteiden infektiosta, ja karjan, joka kärsii P. aeruginosan aiheuttamasta utaretulehduksesta, seerumissa on todettu korkeat proteaasin ja elastaasin antigeeniarvot sekä OEP-arvot (J. Y. Homma, Japan. J. Exp. Med,, £5, 361 - 366 (1975); Tomiyama et ai., Japan. J. Exp. Med., 43, 185 - 189 (1973)).
Eläinkokeilla on osoitettu, että hyvin pieni määrä proteaasia tai elastaasia voi aiheuttaa ihokuolioita ja sarveiskalvon haavaumia ja aiheuttaa huomattavia patogeenisiä muutoksia sisäelimiin (K. Kawaharajo et ai., Japan. J. Exp. Med., 4J5, 79 - 88 (1975); K. Kawaharajo et ai., Japan. J. Exp. Med., £5, 515 (1975); K. Kawaharajo et ai., Japan. J. Exp. Med., ££, 435 - 442 (1974); K. Kawaharajo et ai., Japan. J. Exp. Med., £5, 89 - 100 (1975)).
Edelleen on osoitettu, että kun bakteereita, jotka muodostavat pro teaasia ja elastaasia, ja bakteereita, jotka eivät näitä entsyymejä muodosta, siirrostetaan hiiren sarveiskalvoon, edelliset bakteerit aiheuttavat haavaumien muodostumista, kun taas jälkimmäiset eivät tätä tee. Tämä osoittaa, että näiden kahdenlaisten bakteereiden patogeenisissä ominaisuuksissa on ilmeinen ero (J. Y. Homma et ai., Japan. J. Exp. Med., £5, 515 (1975). Samanlaisia tuloksia saadaan suolistoon kohdistuvissa vertailukokeissa.
Sen vuoksi jotta immunoterapia olisi riittävän tehokasta, metaboliit-tien myrkyllinen vaikutus on neutraloitava ja bakteereiden kasvu on estettävä normaalilla infektiolta suojaavalla OEP antigeenillä. Tämän saavuttamiseksi immunisointi on suoritettava proteaasi- ja elas-taasitoksoideilla.
62539
Vaikkakin OEP-rokotetta pidetään tehokkaana suojana P. aeruginosan aiheuttamia infektioita vastaan, laajan tutkimuksen avulla on yritetty löytää tehokkaampi rokote. Tutkimuksen seurauksena on havaittu, että kolmikomponenttinen sekarokote, joka on valmistettu sekoittamalla P. aeruginosasta saatua OEP:tä P. aeruginosasta saadun elas-taasitoksoidin ja P. aeruginosasta saadun proteaasitoksoidin kanssa, omaa merkittävän tehon estettäessä ja hoidettaessa P. aeruginosan aiheuttamia infektioita verrattuna yksinkertaiseen rokotteeseen, joka sisältää pelkästään OEP:tä. Tämä keksintö perustuu edellä olevaan havaintoon.
Oheisissa kokeissa käytetty infektiolta suojaava normaali antigeeni OEP on tunnettu. Tällaisen OEP:n fysikaaliset ja kemialliset ominaisuudet sekä valmistusmenetelmä on kuvattu seuraavassa kirjallisuudessa: Japanilainen patenttijulkaisu (ei-tutkittu) No. 40925/1973; J. Y. Homma et ai., Japan. J. Exp. Med., 42, 23 - 34 (1972); J. Y. Homma, Microbial Drug Resistance, Tokyo University Press, 267 - 279 (1975); J. Y. Homma et al., Abstracts of Lectures at The 22nd Toxoid Symposium, 45 - 50 (1975).
Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista se, että Pseudomonas aeruginosa-proteaasi deaktivoidaan formaldehydillä tai oksimetaanisulfiinihapolla ja dialysoidaan ja lyofilisoidaan.
Lähtöaineena käytetty proteaasi on tunnettu ja sen ominaisuuksia ja valmistusmenettelyä on kuvattu seuraavassa kirjallisuudessa: japanilainen patenttijulkaisu No. 27315/1965; K. Morihara et ai., Biochem. Biophys., Acta, 73, 113 - 124, 125 - 131 (1963); K. Morihara et ai., Biochem. Biophys. Acta, 92, 351 - 360, 361 - 366 (1964); K. Morihara et ai., Arch. Biochem. Biophys., 114, 158 - 165 (1966); K. Morihara et ai., Biochem. Biophys. Acta, 309, 414 - 429 (1973); K. Morihara et ai., Agr. Biol. Chem., 38, (3), 621 - 626 (1974).
Seuraavassa esimerkissä kuvataan proteaasitoksoidin valmistusta.
Esimerkki P. aeruginosasta saatuja proteaasikiteitä (100 mg) liuotetaan ? 62539 0,1 M Na2HPO^ liuokseen (noin 20 ml), joka sisältää 0,2 M lvsiiniä, ja tähän lisätään formaliinia tai vaihtoehtoisesti oksimetaanisul-fiinihappoa tai sen suolaa niin, että lopulliseksi konsentraatioksi tulee noin 8 % (til/til). Seoksen annetaan seistä paikallaan huoneen lämpötilassa 3 päivää tai enemmän ja sen jälkeen seosta dialysoidaan vettä vasten ja lopuksi lyofilisoidaan toksoidiksi.
Seuraavissa esimerkeissä A ja B on havainnollistettu keksinnön mukaan valmistetun toksoidin käyttöä kolmikomponenttirokotteissa.
Esimerkki A
(1) Proteaasitoksoidin-potaska-alunaliuos: proteaasitoksoidia (100 mg) liuotetaan fosfaattipuskuroituun natriumkloridin vesiliuokseen (M/15, pH 7,4) (PBS) (24,8 ml) ja tähän lisätään 10 %:sta potaska-alunan IK2AI2(SO^)4·24H2OJ liuosta (2,5 ml). Saatuun liuokseen lisätään edelleen 20 %:sta Na2HP04*I2H2O liuosta (2,5 ml) ja pH säädetään fi,5:een täydellistä saostumista varten. Lopuksi tähän lisätään antiseptisenä aineena 1 %:sta timerosaliliuosta (0,3 ml) (1 mg proteaasitoksoidia /0,3 ml).
(2) Elastaasitoksoidi-potaska-alunaliuos: valmistus suoritetaan samalla tavoin kuin edellä, mutta proteaasitoksoidin asemesta käytetään elastaasitoksoidia.
(3) OEP-potaska-alunaliuos: OEP:tä (100 mg) liuotetaan 0,01 N NaOH-liuoksen (5 ml) ja tähän lisätään PBS:ä (28 ml). Saatuun liuokseen lisätään peräkkäin 10 %:sta potaska-alunaliuosta (3,3 ml) ia 20 %:sta Na2HP04 liuosta (3,3 ml) ja lopuksi lisätään 1 %:sta timerosaliliuosta (0,4 ml) (1 mg OEP/0,4 ml).
(4) Välittömästi ennen käyttöä sekoitetaan keskenään edellä valmistettu proteaasitoksoidi-potaska-alunaliuos, elastaasitoksoidi-potaska-alunaliuos ja OEP-potaska-alunaliuos. 0,5 ml tätä yhdistettyä liuosta sisältää 500y proteaasitoksoidia, 500y elastaasitoksoidia ja 500y OEP:tä.
6 62539
Esimerkki B
Esimerkissä A kuvatulla tavalla valmistetaan käyttämällä 10 %:sen potaska-alunaliuoksen asemesta 10 %:sta alumiinihydroksidiliuosta proteaasitoksoidi-alumiinihydroksidiliuosta, elastaasitoksoidi-alumiinihydroksidiliuosta ja OEP-alumiinihydroksidiliuosta.
Edellä valmistetut kolme liuosta sekoitetaan yhteen välittömästi ennen käyttöä.
Jäljempänä esitettyjen kokeiden tulosten perusteella on ilmeistä, että keksinnön mukainen kolmikomponenttinen sekarokote ehkäisee paljon tehokkaammin P. aeruginosan aiheuttamia infektioita kuin yksinkertainen rokote, joka sisältää vain OEPrtä.
Koe 1 PHA (passiivinen hemaglutinaatio) arvo minkkien seerumissa, kun minkit on immunisoitu yksinkertaisella rokotteella, joka sisältää pelkästään OEP:tä, tai kolmikomponenttisella sekarokotteella, joka sisältää OEPitä, proteaasitoksoidia ja elastaasitoksoidia, sekä suo-jaamisteho infektiota vastaan: (1) Menetelmä:
Eläimet: 5-6 kuukautta vanhoja naarasminkkejä (safiiri).
Rokotteen antamistapa: Ihonalainen tai lihaksensisäinen injektio.
Rasituskoe: käytetään P. aeruginosan kantaa n:o 5, joka tuottaa sekä proteaasia että elastaasia. Infektoiminen elävillä bakteereilla suoritetaan kaatamalla bakteeriliuosta (0,5 ml) nenäonteloon vinyy-liputken kautta eetterinukutuksessa.
PHA-arvon määrittäminen: proteaasi PHA-arvo ja elastaasi PHA-arvo mitataan J. Y. Homman et ai. kuvaamalla menetelmällä Japan. J. Exp. Med., £5, 361 - 365 (1975). OEP-PHA arvo mitataan T. Tomiyaman et ai. kuvaamalla menetelmällä Japan. J. Exp. Med., 4_3, 1R5 - 189 (1973).
7 62539 OEP-rokote: 0,01 N natriumhydroksidiliuokseen, johon oli liuotettu OEP:ta lisättiin M/15 fosfaattipuskuria (pH 7,4). 10 %:sta KAI(SO^)2*12H20-liuosta lisättiin 10:1 - tilavuussuhteessa ja tämän jälkeen lisättiin 20 %:sta Na2HP04-liuosta kunnes kokonais-liuoksen pH oli 6,5.
Proteaasi- ja elastaasitoksoidien rokotteet: molempien toksoidien M/15 fosfaattipuskuriliuoksiin lisättiin 10 %:sta KAI(S04)2*12H20-liuosta ja tämän jälkeen 20 %:sta Na2HP04*12H20-liuosta kunnes liuoksen lopullinen pH oli 6,5. Sekarokotteita valmistettiin sekoittamalla OEP-liuosta elastaasitoksoidiliuoksen ja proteaasitoksoidi-liuoksen kanssa.
Seuraavassa taulukossa 1 on annettu immunointiaika, käytetyt annokset, infektointiaika ja ruumiinavausaika.
Taulukko I
Eläin Antigeeni Immunisointipäivä Infektointi Ruumiin- __päivä__avaus ___9/8 23/8 9/9__21/9__4/10
Ryhmä A OEP c c 10% KA1(S04) 2 200y 300 y 500/ c C ! ——————— In 1 ' 1 Ή ·Η
Ryhmä B Proteaasitoksoidi S -h 1 % ka1(so4)2 200/ 300y sooy § £ --- , , —— - ....... I m
Ryhmä C Elastaasitoksoidi -h -S
1 % KA1(S04)2 200y 3001 500/ g g
Ryhmä D OEP 200/ 300/ 500/ g g
Proteaasitoksoidi 200/ 300/ 500/ -h .'h
Elastaasitoksoidi :(0 1 % kai(so4)2 200/ 300/ sooy > a c 1,1......... :«J (U :!β o
Ryhmä E 1 % KAl(SO.), * ml $ ml $ ml __Z__cn :<0 ^ :nj I _ h -n rH -n
Ryhmä F Immunoimaton____ 62539 8
Kokeiden tulokset: 12 päivän kuluttua viimeisestä immunoinnista suoritettiin infektointikannalla n:o 5 käyttämällä hakteeripitoisuuksia välillä 10 3 - 103-8. Tulokset on esitetty taulukossa II.
Taulukko II
Rokotetut Bakteerien PHA-arvo1 Minkkien lukumäärä elä- ryhmät määrä (elä- _ _ vien solu vien solujen OEP Proteaasi- infek- eloon jen luku-_lukumäärä)_toksoidi toituja jääneet määrä 1.5 x 106 768 <80 5 2 A 1,5 x 107 1024 <80 5 3 (OEP) 1,5 x 108 1280 <80 5 0 $7,5 x TO6 1.5 x 109 2560 <80 4 0 _1,5 x 1010 4095_<_80_5_0__ 1.5 x 104 144 2304 5 5 1.5 x 105 64 1408 5 5 B 1,5 x 106 40 1792 5 5 >1,2 x 109 (Proteaa- 1,5 x 107 i 32 1400 5 5 sitoksoi- 1,5 x 108 <40 1536 5 4 di)_1,5 x 109 < 40_4096_5_3 _ 1.5 x 104 160 <80 5 5 1.5 x 105 80 <32 5 5 C 1,5 x 106 80 s 80 5 42
(Elastaa- 1,5 x 107 S 64 <80 5 5 >7,5 x 10R
sitoksoi- 1,5 x 108 <80 <80 5 4 di)_1,5 x 109 < 80_<_80_5_2_ D 1,5 x 106 288 1280 5 4 (OEP, 1,5 x 107 384 1920 5 4
Proteaasi & 1,5 x 108 1088 1664 5 3 <1,9 x 108
Elastaasi- 1,5 x 109 2304 1792 4 1 toksoidi 1,5 x 1010 2304_4352_5_0________ 1.5 x 103 % 32 <80 5 42 E 1,5 x 104 < 80 <80 5 1 (Potaska- 1,5 x 105 <80 <80 5 1 $1,2 x 104 aluna) 1,5 x 106 <80 <80 5 1 _1,5 x 107 < 80_<_80_5_0 _ 1.5 x 103 112 <80 5 1 F 1,5 x 104 < 80 <80 5 2 (Immunoi- 1,5 x 10^ <80 < 80 5 2 $7,5 x 103 maton) 1,5 x 108 <80 <80 5 1 _1,5 x 107 < 80_<_80_5_0 _ PHA-arvo minkkiseerumissa ennen infektointia 2
Yksi viidestä minkistä kuoli ilman verenvuotoja.
P. aeruginosaa ei voitu viljellä kuolleiden minkkien veressä. Elastaasitoksoidin PHA-arvoja ei mitattu 9 62539
Suoritettujen kokeiden tulokset osoittavat, että immunoimattomassa ryhmässä F ja potaska-alunalla immunoidussa ryhmässä E LD50-arvo oli noin 7,5 x 103 ja 1,2 x 104. OEP-liuoksella rokotetussa ryhmässä A LD5Q-arvo oli pienempi kuin 7,5 x lO*’ ja näin ollen selvästi eroaa edellä mainituista vertailuryhmistä E ja F. Ryhmissä B ja O, joissa immunointiin käytetään pelkästään joko proteaasitoksoidia tai elas-taasitoksoidia, LD^Q-arvo oli suurempi kuin 1,2 x 10° tai suurempi kuin 7,5 x 10®. Ryhmässä D, jossa käytettiin kolmikomponenttiroko-
Q
tetta LD5Q-arvo oli alle 1,9 x 10 . Näin voidaan siis sanoa, että ryhmien B, C ja D LDgg-arvot ovat suurinpiirtein saman suuruisia ja arvot olivat huomattavasti suurempia kuin ryhmän A arvo, jossa siis käytetään pelkästään OEP-rokotetta.
Koe 2
Hiirten sarveiskalvoinfektion hoito antiseerumilla ja 3',4'-dideoksi-kanamysiini B:llä (DKB): (i) Menetelmä:
Antiseerumi: Erilaisia antiseerumeja saadaan käyttämällä kaniineja. Käytettyjen antiseerumien laadut ja PHA-arvot on esitetty taulukossa 3.
Taulukko 3
Antiseerumi__OEP-PHA__Proteaasi-PHA
OEP-seerumi__2560__-_
Proteaasitokso- idiseerumi____32__5120_
Normaali kanii- nin seerumi___-__-_
Infektio: Liuosta (0,01 ml), joka sisältää 10^ elävää pseudomonas aeruginosa bakteeria, tiputetaan haavalliseen sarveiskalvoon .
10 62539
Antiseerumin ja DKB:n antaminen:
Pelkästään DKBrtä: DKB-liuosta, jonka konsentraatio vaihtelee (800 - 12,5 y/0,2 ml), injektoidaan (0,2 ml) lihaksensisäisesti jokaiseen hiireen (6 viikon vanhoja, naaraita) välittömästi ennen infektiota.
DKB + antiseerumi: Antiseerumia (0,1 ml) injektoidaan ihonalaisesti jokaiseen hiireen 18 tuntia ennen infektiota. Senjälkeen DKB liuosta (0,2 ml), jonka konsentraatio vaihtelee, injektoidaan lihaksensisäisesti välittömästi ennen infektiota.
Vertailuryhmässä käytetään natriumkloridin vesiliuosta DKB:n ja antiseerumin asemesta.
Sarveiskalvon tarkkailu:
Infektion aiheuttamaa sarveiskalvon vahingoittumista tarkkaillaan 6 päivän ajan injektoinnin jälkeen. Arviointi suoritetaan sarveiskalvon opasiteetin ja tulehduspesäkkeen ja haavauman muodos-tumisasteen perusteella.
(ii) Tulokset: Esitetty taulukossa 4.
62539 I ·Η •h g
P 3 c P
<0 Φ o Φ cc
+ CO
O
CQ (X
« ω .. o o :ro --- H *------- * i—I I (0
·· <0 -rl | P
CC, Ό Ρ Ή | 4J
x: c co -p 3 Q 3 (0 <0 Ό ·ρ 3 ω (0 ·-< e -* (0 w -f 0) o 3 oo m -v
·(—l 3 p CO P CC 'f O
3 B O i ¢) « » £ «j .* irf Ρ O <U O O 0)
H ·* C O4 P CO 4J
|—I o -—----"" ——— — ρ x: i ro
g Φ -H -rl P
3 -P I -H e CO
P P C 3 •H
Φ O <0 P > 0) C -5C 0) ·* (0 0) O i—I O ·Ρ
•H + ·Ρ CO CO CO O P
-P iH * * - -P
C CQ (0 C Ή i—i i—I 0} (0 W (0 ·Ρ o Ω E C 04 __________
^ rH P
rH CQ O H O', CO (0 O Ή ^ O Γ" <X> Γ" > j£pp ·> » * (0
Λί ·Ρ CO rH Ι-H O P
3 ·η P
rH -H
3 o (0 o en
E- p O —* O
•p m -p OOP ·“< Ä W -h
-p uo in o o C
CCX3 o t" oo o (N -p O ·· \ Oi rH rP <ί IC 3 h CQ - -* p t*; JC Q ~ p 0) 3 ---------j> C | I C 3
•p ·Ρ | JC ·Ρ rH
I :<a p 3 I *p O C
C -p :(0 C P -P E P *p P
O ρρ(θοω3·ρ·ρ (fl > C rH 0) Pö p CO C g rH (0:(0-,03(00)(0(0 £ mai (0nj-pp(D(0J< o
JCC >, .ρ ·ρ Ό CO (0 CO 0) P
ω .p p co g -p (C ·ρ i p c 3 •P (0 p30rHgd40-P 3 φ φΦΡ(0Φ3ωΡ·Η 03
> 3 p j* φ J* I Ρ O O, ·ρ <fl C
Ρ ρ (0ΟΦΟ·ρΦ|ΙΕ«0 :Λ5 (0 ·ρ ·ρ ·η to ρ ρ Φ -ρ ·ρ 3 £ :co *
03 Ο <Ό l-PCCOPPPP C
ρ χ;·.Ρ4ω<Β·Ρ00Φ0 -ρ JC >1 -Ρ ω (0 <Ό (0 (0 Φ C ·Ρ C0 ο Φ ΕΟ<0(0·η coEjc-p Ρ + 3 ! Φ ·γο Ο Η- + ·Ρ + 3 >ί Ε C p.ppco ΌΡ Ο M PQ Φ Ρ O flJCfflffl-pBlliB 3 ^Φ3Ρ·Ρθθ£;ί>ίΟί>ίΦ5«5 Κ __Q CO (g Οι E Ρ' Q Q CO Q C0 ο 12 62539
Taulukon 4 perusteella on ilmeistä, että proteaasitoksoidi, elas-taasitoksoidi ja OEP antiseerumi ovat paljon tehokkaampia kuin DKB yksinään.
Edellä esitetystä havaitaan, että keksinnön mukaan valmistettu proteaasitoksoidi soveltuu erityisen hyvin kolmikomponenttisen sekarokotteen valmistamiseksi.
Liuotin voi olla mikä tahansa liuotin, joka sopii ihmisten ja eläinten rokotteisiin. Esimerkkejä ovat tislattu vesi, fysiologinen nat-riumkloridiliuos, fosfaattipuskuroitu natriumkloridiliuos jne..
Apuaineena voidaan käyttää mitä tahansa tavanomaista apuainetta kuten alumiinihydroksidia, alumiinifosfaattia, kalsiumfosfaattia, alunaa tai Freundin epätäydellistä apuainetta. Apuaineen määrä voidaan valita sopivalla tavalla niin, että se riittää immunoaktiivisuuden lisäämiseen. Antiseptinen aine voi olla myös mikä tahansa tavanomainen aine kuten esimerkiksi timerosali, fenoli, karbolihappo tai formaliini .
Kolmikomponenttisen sekarokotteen komponenttien suhdetta voidaan halutulla tavalla muuttaa tehokkaalla alueella sen suojaavan tehon lisäämiseksi rokotteena. Kunkin komponentin tehokas määrä vaihtelee suuresti riippuen immunisointikertojen määrästä ja immunisointivälistä. Se vaihtelee myös rokotteen käyttötarkoituksesta riippuen (s.o. ehkäisevä käyttö tai terapeuttinen käyttö).
Seuraavassa on annettu joitakin esimerkkejä antigeenien suositelluista annoksista ja suhteista: (i) Käyttö ihmisillä (myös karjalla):
Kun immunisointi suoritetaan 2-3 kertaa viikossa (ilman apuainetta) seuraavia suhteita suositellaan: OEP, 0,1 JVpaino-kg - 10 ^/pai-no-kg; proteaasitoksoidi, 1 ^/paino-kg - 50 //paino-kg? elastaasi-toksoidi, 1 J//paino-kg - 50 ^/paino-kg. Immunisointiasteesta riippuen määriä voidaan sopivalla tavalla lisätä.
13 62539 (ii) Käyttö minkeillä: a) Ehkäisevä rokote
Kun immunisointi suoritetaan kaksi kertaa (käyttämällä apuainetta), seuraava suhde on suositeltu: OEP, 10 //eläin - 2000 //eläin; proteaasitoksoidi, 10 jr/eläin - 2000 //eläin; elastaasitoksoidi, 10 //eläin - 2000 f/e lain.
Kun immunisointi suoritetaan yhdellä kertaa seuraava suhde on suositeltu: OEP, 500 //eläin - 2000 //eläin; proteaasitoksoidi, 500 //eläin - 4000 //eläin; elastaasitoksoidi, 500 //eläin -4000 //eläin.
b) terapeuttinen rokote:
Kun immunisointi suoritetaan kaksi - kolme kertaa yhden viikon välein (käyttämällä apuainetta tai ilman) seuraavaa suhdetta suositellaan: OEP, 0,1 //eläin - 100 //eläin; proteaasitoksoidi, 10 //eläin -12 //eläin; elastaasitoksoidi, 10 //eläin - 2000 //eläin.
Kolmikomponenttinen sekarokote voidaan antaa eläimille ja ihmisille lihaksen sisäisesti, ihonalaisesti tai ihonsisäisesti.
Kolmikomponenttisen sekarokotteen komponenttien toksisuudet ovat seuraavat: OEP:n toksisuus: intraperitoneaalinen injektio hiirille annoksina 100 mg/kg aiheuttaa väliaikaista heikkoutta, mutta eläimet eivät kuole.
OEP:n kuumetta aiheuttava ominaisuus: tavallisessa kuumekokessa kaniineilla havaitaan positiivinen vaikutus annoksella 0,3 mg/kg.
Yleisesti sanoen OEP:n toksisuus endotoksiinina on erittäin pieni verrattuna LPS-(lipopolysakkaridi) ja OEP-LPS kompleksiin.
Elastaasitoksoidin ja proteaasitoksoidin ja toksisuus: intraperitoneaalinen antaminen hiirille annoksena 1 mg/hiiri ei aiheuta akuuttia toksisuutta, pienin tappava proteaasiannos on 0,2 mg/hiiri (i.p.) ja pienin tappava elastaasiannos on 0,125 mg/hiiri (i.p.).
Claims (2)
14 62539 Patenttivaatimus Menetelmä valmistaa proteaasitoksoidia, jota käytetään Pseudomonas aeruginosa-infektion vastaisen kolmikomponenttirokotteen valmistamiseksi, jolla proteaasitoksoidilla on seuraavat ominaisuudet: 1. molekyylipaino: 63.000 (geelisuodatus),
2. UV-absorptiospektri: maksimi 280 mp (e|®| = 9,27, 0,1 M KC1), minimi 250 mp, 3. isoelektrinen piste: pH 5,2 (fokaalinen elektroforeesi), 4. ulkonäkö: väritön jauhe, 5. aminohappokoostumus: aminohapporyhmät (g/100 g proteiinia); asparagiinihappo (15,6), treoniini (5,0), seriini (7,6), glu-tamiinihappo (9,5), proliini (2,1), glysiini (7,7), alaniini (8,5), väliini (5,0), isoleusiini (3,9), leusiini (8,7), tyrosiini (6,9), fenyylialaniini (5,9), lysiini (4,1), histi-diini, (1,9), arginiini (2,3), tryptofaani (2,3), ammoniakki (1,4) (yhteensä 98,5 g), 6. proteaasiaktiivisuus: ei 7. antigeeniaktiivisuus: havaittu. tunnettu siitä, että Pseudomonas aeruginosa-proteaasi deaktivoidaan formaldehydillä tai oksimetaanisulfiinihapolla ja dialysoidaan ja lyofilisoidaan.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI812882A FI62540C (fi) | 1976-02-05 | 1981-09-15 | Foerfarande foer framstaellning av elastastoxoid som anvaends vid framstaellning av mot pseudomonas aeruginosa-infektion verksam trekomponentvaccin |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1083876 | 1976-02-05 | ||
| JP1083876A JPS5296729A (en) | 1976-02-05 | 1976-02-05 | Mixed vaccin for cyanomycosis |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI770169A7 FI770169A7 (fi) | 1977-08-06 |
| FI62539B true FI62539B (fi) | 1982-09-30 |
| FI62539C FI62539C (fi) | 1983-01-10 |
Family
ID=11761482
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI770169A FI62539C (fi) | 1976-02-05 | 1977-01-20 | Foerfarande foer framstaellning av proteastoxoid som anvaends vid framstaellning av mot pseudomonas aeruginosainfektioner verkande trekomponentvaccin |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4157389A (fi) |
| JP (1) | JPS5296729A (fi) |
| CA (1) | CA1082595A (fi) |
| DE (1) | DE2704766A1 (fi) |
| DK (1) | DK144753C (fi) |
| FI (1) | FI62539C (fi) |
| FR (1) | FR2340099A1 (fi) |
| GB (1) | GB1546035A (fi) |
| NL (1) | NL7701266A (fi) |
| SE (1) | SE425213B (fi) |
| SU (1) | SU784796A3 (fi) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1085293A (en) * | 1976-02-05 | 1980-09-09 | Yuzuru Homma | Toxoids derived from protease and elastase of pseudomonas aeruginosa and production thereof |
| US4428931A (en) | 1982-03-15 | 1984-01-31 | Merck & Co., Inc. | Bacterial toxoids and gram-negative immune globulin therefrom |
| HU188847B (en) * | 1983-02-22 | 1986-05-28 | Human Oltoanyagtermeloe Es Kutato Intezet,Hu | Process for producing liophylized combined vaccines |
| US4663160A (en) * | 1983-03-14 | 1987-05-05 | Miles Laboratories, Inc. | Vaccines for gram-negative bacteria |
| CA1256370A (en) * | 1984-02-24 | 1989-06-27 | Yuzuru Homma | Toxoids of elastase of pseudomonas aeruginosa origin |
| US4834976A (en) * | 1986-07-03 | 1989-05-30 | Genetic Systems Corporation | Monoclonal antibodies to pseudomonas aeruginosa flagella |
| US4772465A (en) * | 1986-10-27 | 1988-09-20 | Miles Laboratories, Inc. | Method of treating polymicrobial burn wound sepsis with a combination therapy of ciprofloxacin and pseudomonas immune globulin |
| US5233024A (en) * | 1991-04-09 | 1993-08-03 | The Brigham & Women's Hospital | Anti-idiotypic monoclonal antibodies for mucoid pseudomonas aeruginosa, their preparation and use |
| GB2523399B (en) * | 2014-02-25 | 2019-03-13 | Orban Tihamer | A composition comprising ten overlapping peptide fragments of the entire preproinsulin sequence |
| CN109929776A (zh) * | 2016-02-17 | 2019-06-25 | 中国农业科学院特产研究所 | 菌株及其应用，以及疫苗及其制备方法 |
| CN110724647B (zh) * | 2018-07-17 | 2022-11-04 | 黑龙江省科学院微生物研究所 | 一株所产内毒素蛋白对7种血清型菌株具有免疫保护作用的铜绿假单胞菌及其应用 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2528972A (en) * | 1947-05-15 | 1950-11-07 | Western Reserve University | Prophylactic toxoid compound and method of making same |
| US3135662A (en) * | 1961-01-05 | 1964-06-02 | Burroughs Wellcome Co | Diphtheria toxoid preparation and its production |
| US3658986A (en) * | 1969-07-02 | 1972-04-25 | Victor N Tompkins | Immunization methods against toxic effects of bacterial infection |
| US3674863A (en) * | 1969-12-08 | 1972-07-04 | Parke Davis & Co | Polyvalent immunizing agents and methods for their production |
| US3928565A (en) * | 1971-10-19 | 1975-12-23 | Yuzuru Homma | Pharmaceutical preparation of pseudomonas aeruginosa bacterial component possessing anti-tumor and anti-infection properties |
| US3987164A (en) * | 1970-10-20 | 1976-10-19 | Yuzuru Homma | Method for prevention of pseudomonas aeruginosa infections |
| DE2152112C3 (de) * | 1970-10-20 | 1979-10-11 | Yuzuru Homma | Impfstoff gegen Pseudomonas aeruginosa |
| FR2227861B1 (fi) * | 1973-05-04 | 1976-07-02 | Anvar | |
| DE2340911A1 (de) * | 1973-08-13 | 1975-05-07 | Behringwerke Ag | Tetanus-antigen und verfahren zu seiner herstellung |
| JPS51133489A (en) * | 1975-05-14 | 1976-11-19 | Tokyo Daigaku | Process for producing microbial components of pseudomonas aeruginosa h aving antimicrobial and antitumor activities |
-
1976
- 1976-02-05 JP JP1083876A patent/JPS5296729A/ja active Granted
-
1977
- 1977-01-20 FI FI770169A patent/FI62539C/fi not_active IP Right Cessation
- 1977-01-28 US US05/763,538 patent/US4157389A/en not_active Expired - Lifetime
- 1977-01-31 GB GB3906/77A patent/GB1546035A/en not_active Expired
- 1977-01-31 CA CA270,705A patent/CA1082595A/en not_active Expired
- 1977-02-01 SE SE7701038A patent/SE425213B/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-02-04 FR FR7703273A patent/FR2340099A1/fr active Granted
- 1977-02-04 DK DK49677A patent/DK144753C/da not_active IP Right Cessation
- 1977-02-04 SU SU772448254A patent/SU784796A3/ru active
- 1977-02-04 DE DE19772704766 patent/DE2704766A1/de active Granted
- 1977-02-07 NL NL7701266A patent/NL7701266A/xx not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE2704766A1 (de) | 1977-08-11 |
| FI62539C (fi) | 1983-01-10 |
| SU784796A3 (ru) | 1980-11-30 |
| US4157389A (en) | 1979-06-05 |
| SE425213B (sv) | 1982-09-13 |
| FR2340099A1 (fr) | 1977-09-02 |
| DK144753B (da) | 1982-06-01 |
| DK144753C (da) | 1982-10-25 |
| DK49677A (da) | 1977-08-06 |
| NL7701266A (nl) | 1977-08-09 |
| JPS5296729A (en) | 1977-08-13 |
| FR2340099B1 (fi) | 1981-05-08 |
| JPS6133010B2 (fi) | 1986-07-31 |
| SE7701038L (sv) | 1977-08-06 |
| CA1082595A (en) | 1980-07-29 |
| FI770169A7 (fi) | 1977-08-06 |
| DE2704766C2 (fi) | 1988-06-16 |
| GB1546035A (en) | 1979-05-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI62539B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av proteastoxoid som anvaends vid framstaellning av mot pseudomonas aeruginosainfektioner verkande trekomponentvaccin | |
| CN102238960B (zh) | 制造疫苗的方法 | |
| WO1992016232A1 (en) | Polysaccharide-protein conjugates | |
| Maurer | Attempts to produce antibodies to a preparation of polyglutamic acid. | |
| Lincoln et al. | Anthrax toxin | |
| Irwin et al. | Enhanced resistance to Corynebacterium pseudotuberculosis infections associated with reduced serum immunoglobulin levels in levamisole-treated mice | |
| FI62540C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av elastastoxoid som anvaends vid framstaellning av mot pseudomonas aeruginosa-infektion verksam trekomponentvaccin | |
| JPH03151400A (ja) | 化学修飾されたアレルゲン類およびそれらの調製方法 | |
| US4160023A (en) | Toxoids derived from protease and elastase of Pseudomonas aeruginosa and production thereof | |
| US4575459A (en) | Toxoids of elastase of Pseudomonas aeruginosa origin | |
| RU2329828C1 (ru) | Способ изготовления вакцины для профилактики и лечения некробактериоза животных, вакцина для профилактики и лечения некробактериоза животных и способ профилактики и лечения некробактериоза животных | |
| Krasnoshtanova et al. | Egg components like a basis for development of scientific foundation of technology for products of lipid and protein origin with high level value | |
| Frobisher Jr et al. | Further studies on the immunization of rabbits to toxigenic Corynebacterium diphtheriae by injections of nontoxigenic diphtheria bacilli | |
| Sabolovic et al. | Effect of a protein bound polysaccharide (PS-K) on tumor development and infections in splenectomized rats and mice | |
| RU2279274C2 (ru) | Способ профилактики вторичного альвеолярного эхинококкоза (гидатидоза) | |
| RU2093178C1 (ru) | Ассоциированная вакцина против трихофитии рогатого скота и других парнокопытных | |
| CA2246744C (fr) | Complexe immunomodulateur et son utilisation dans les affections par helicobacter | |
| US10987415B2 (en) | Process for production of purified recombinant cholera toxin B (rCTB) and formulation thereon | |
| JPS6154769B2 (fi) | ||
| KR102616625B1 (ko) | 건락성 림프절염의 예방 또는 치료용 백신 조성물 및 이의 용도 | |
| US12178866B2 (en) | Polypeptides of fusobacterium and methods of use | |
| RU2190424C1 (ru) | Антигенный состав чумной химической вакцины | |
| GB1560861A (en) | Toxoid derived from the elastase of pseudomonas aeruginosa and the production thereof | |
| AU2004232972A1 (en) | Prophylactic and therapeutic benefits of new class of immune stimulating peptides | |
| RU2204412C2 (ru) | Вакцина против инфекций, вызываемых условно-патогенными возбудителями |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: SHIONOGI & CO., LTD. |