FI60019B - Foerfarande foer framstaellning av antibakteriella 7-((alfa-(2-aminometyl-1-cyklohexenyl- och -1,4-cyklohexadienyl)-acetamido)-3-heterocyklisk-tiometyl-3-cefem-4-karbonsyror - Google Patents

Description

U. —I Tul KUULUTUSJULKAISU , n n „ Λ

Wa w ^utläcgnincsskrift 6001 9 C (45)~ " 11 ^ (51) Kv.ik?/Int.a.3 C 07 D 501/36 SUO M I—FIN LAND (21) PttmttlhakMNM — tamumMcning 2560/7** (22) H«k«nl*pilvl — An*aknlng*d*g 02.09.71* ' ** (23) Alkupttvl—GlMghaudag 02.09.7^ (41) Tiillut fulklMlul — Blhrtt offwicllg 05.03.75

Patentti- ja rekisterihallitut .... ........ ,__, . ..., . . , __ , (44) NlhtlvIkiipanM ]* kuuLJulluJaun pvm. —

Patent- och registerstyrelsen AraMcan utlagd och utl.*krtft*n puMk*r»d 31.07.8l (32)(33)(31) Pyydetty ecuelkeu*—Begird priori*** OU.09.73 31.10.73 USA(US) 39^367, I+II559 (71) Bristol-lfyers Company, 3^5 Park Avenue, New York, N.Y. 10022, USA(US) (72) Takayuki Naito, Tokyo, Hideaki Hoshi, Tokyo, Jun Okumura, Yokohama,

Hajime Kamachi, Yokohama, Japani-Japan(JP) (7I+) Oy Kolster Ab (51) Menetelmä bakteerienvastaisten 7~/"(c<_(2-aminometyyli-l-sykloheksenyyli-ja -l,l+-sykloheksadienyyli )-asetamido7-3“heterosyklinen-tiometyyli-3-kefeemi-h-karbonihappojen valmistamiseksi - Förfarande för framställning av antibakterielia 7-/7c<;-(2-aminometyl-l-cyklohexenyl- och -l,h-eyklohexa-dienyl-acetamido7-3-heterocyklisk-tiometyl-3-cefem-U-karbonsyror

Keksinnön kohteena on menetelmä kaavan I mukaisten bakteerienvastaisten 7-/(0(-( 2-aminometyyli-l-sykloheksenyyli- ja -1,U-sykloheksadienyyli)-asetamido7~ 3-het ero syklinen-tiometyyli-3-kefeemi-l* Garboni happojen ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi ζ~γ**2**2 ^ CftgCONH—-^ S \

^ '·-kN-CHg-S-R

o 1

C00H

2 60019 jossa R on

OH

N=N L_„ -/ |

\V K~ N I N-N H H n-N

i=>w· AJ. ASL,V -(J=» CH3

li— N N N

’XsJJ XJl JT; Xl Π ja katkoviiva osoittaa mahdollista kaksoissidosta.

R on edullisesti h°

rf N—N ] H

_Jjb N__J —r y—OH , N ja erikoisesti

^ ^ H

jr? f"' CH3

Kaavan I mukaiset uudet 'J-f( ©<-(2-aminometyyli-l-sykloheksenyyli- ja -1,^-sykloheksädienyyli)-asetamido7-3-heterosyklinen-tiometyyli-3-kefeemi-U-karbonihapot ja niiden ei-myrkylliset, farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat ovat arvokkaita bakteerienvastaisia aineita ja erikoisen arvokkaita terapeuttisina aineina hoidettaessa gram-positiivisten ja gram-regatiivisten bakteerien aiheuttamia infektiosairauksia siipikarjassa ja muissa eläimissä sekä ihmisessä.

Suoloihin kuuluvat karbonihapposuolat, kuten ei-myrkylliset metallisuolat, joissa metallina on natrium, kalium, kalsium- ja aluminium, ammoniumsuola ja substituoidut ammoniumsuolat, esim. sellaisten ei-myrkyllisten amiinien kuten trialkyyliamiinien, kuten trietyyliamiinin, prokaiinin, dibentsyyliamiinin, N-bentsyyli-beta-fenyylietyyliamiinin, 1-efenamiinin, N,N1-dibentsyylietyleeni- 3 60019 diamiinin, dehydroabietyyliamiinin, NjlT-bis-dehydroabietyylietyleenidiamiinin, N-(alempi)-alkyylipiperidiinin, esim. N-etyylipiperidiinin suolat, ja muiden amiinien, joita on käytetty muodostamaan suoloja bentsyylipenisilliinin kanssa, suolat; ja kaikissa tapauksissa niiden ei-myrkylliset happoadditiosuolat (esim. amiini suolat), joihin kuuluvat mineraalihappoadditiosuolat, kuten hydrokloridi, hydrobromidi, hydrojodidi, sulfaatti, sulfamaatti ja fosfaatti, sekä orgaaniset happoadditiosuolat, kuten maleaatti, asetaatti, sitraatti, oksalaatti, sukkinaat-ti, bentsoaatti, tartraatti, fumaraatti, malaatti, mantelihapposuola, askorbaat-ti ja senkaltaiset.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että A) yhdisteen, jolla on kaava

H -N -SVS

2 ] II

#--CH^-S-R

COOH

jossa R merkitsee samaa kuin edellä, tai sen suolan annetaan reagoida hapon asyloimisjohdannaisen kanssa, jolla on kaava ch2nhb fjf

\ CH2C00H

jossa B on aminoryhmää suojaava ryhmä, jollaista käytetään esimerkiksi peptidi-synteeseissä tai valmistettaessa Oi -aminobentsyylipenisilliinejä 2-fenyyli-glysiinistä, ja katkoviiva merkitsee samaa kuin edellä, ja mainittu aminoryhmän suojaava ryhmä poistetaan halutun kaavan I mukaisen yhdisteen tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan muodostamiseksi, ja haluttaessa joko ennen ryhmän B:n poistamista tai sen jälkeen (a) muutetaan sinänsä tunnetulla tavalla vapaan hapon tai sen suolan muodossa oleva tuote farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi, tai (b) muutetaan sinänsä tunnetulla tavalla suolan muodossa oleva tuote vastaavaksi vapaaksi happoyhdisteeksi tai sen farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi, tai B) yhdisteen, jolla on kaava 11 6001 9 ^£H2BH2 ΓΤ = —μη-^ SN " ^- N\|^-CH2OCOCH3 co2h tai sen suolan annetaan reagoida tiolin, jolla on kaava

HS - R V

jossa R merkitsee samaa kuin edellä, tai sen suolan kanssa, kaavan I mukaisen yhdisteen tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan muodostamiseksi, ja haluttaessa (a) muutetaan sinänsä tunnetulla tavalla vapaan hapon tai sen suolan muodossa oleva tuote farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi, tai (b) muutetaan sinänsä tunnetulla tavalla suolan muodossa oleva tuote vastaavaksi vapaaksi happoyhdisteeksi tai sen farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi.

Kaavan II mukainen 3wtioloitu-7-aminokefalosporaanihappo voidaan valmistaa korvaamalla 7-aminokefalosporaanihapon tai sen suolan 3-asetoksiryhmä tarkoituksenmukaisella heterosyklisellä tiolilla tai sen suolalla. Esteriryhmän korvaaminen tiolirybmällä on tunnettu reaktio ja se suoritetaan edullisesti vesi-liuoksessa samalla kuumentaen.

Ennen asyloimisreaktiota suojataan asyloimisaineen III aminoryhmä tavanomaisella suojarybmällä B, jollaista käytetään esimerkiksi peptidi-synteeseissä tai lukuisissa 0<-amino-bentsyylipenisilliinin synteeseissä, joissa käytetään 2-fenyyliglysiiniä, joka suojaryhmä voidaan helposti poistaa reaktion päätyttyä. Esimerkkejä sopivista aminoryhmän suojaryhmistä ovat t -butoksikarbonyyli, karbo-bentsyylioksi, 2-hydroksi-l-naftkarbonyyli, trikloorietoksikarbonyyli, 2t-etoksi-karbonyyli-l-metyylivinyyli ja 2-metoksikarbonyyli-l-metyylivinyyli. Erikoisen arvokas suojaryhmä on protoni, kuten yhdisteessä, jolla on kaava aCH2NH2.HCl

S

CH2C-C1 5 60019 »

Edullisia aminon suojaryhmiä ovat t-butoksikarbonyyli, protoni ja /5 -diketoni tai /3-ketoesteri, kuten on kuvattu GB-patentissa 1 123 333 tai US-patenteissa 3 325 Vf9 ja 3 316 Z'k'J, esim. metyyliasetoasetaatti tai /$-ketoamidi kuvattuna JP-patentissa 71/21+71^. Käytettäessä t-butoksikarbonyyliä, /J-ketoesteriä, /J-di-ketonia tai /3-ketoamidia suojaryhmänä on edullista muuttaa suojatun aminoryhmän sisältävä asyloimisaine seka-anhydridiksi, esim. käyttäen etyyli- tai isobutyyli-klooriformaattia, ennen reaktiota yhdisteen II tai sen suolan kanssa. Asyloimis-reaktion päätyttyä aminon suojaava ryhmä B voidaan poistaa sinänsä tunnetulla tavalla halutun kaavan I mukaisen yhdisteen saamiseksi. Niinpä esim. t-butoksi-karbonyyliryhmä voidaan poistaa käyttämällä muurahaishappoa, karbobentsyylioksi-ryhmä käyttäen katalyyttistä hydrausta, 2-hydroksi-l-naftkarbonyyliryhmää käyttäen hapanta hydrolyysiä, trikloorietoksikarbonyyliryhmä käsittelemällä sinkki-pölyllä jääetikassa, protoni neutraloimalla jne. Ilmeisesti voidaan käyttää muita funktionaalisesti ekvivalentteja suojaryhmiä aminoryhmän suojaamiseksi ja sellaiset ryhmät kuuluvat tämän keksinnön piiriin,

Kefalosporiini 7-aminoryhmän asyloiminen on hyvin tunnettu reaktio ja voidaan käyttää mitä tahansa kaavan III mukaisia funktionaalisia ekvivalentteja, joita tavallisesti käytetään asyloimisaineena primäärisiä aminoryhmiä varten. Esimerkkejä vapaan hapon sopivista asyloimisjohdannaisista ovat vastaavat happo-anhydridit, seka-anhydridit, esim. alkoksimuurahaishappoanhydridit, happohaloge-nidit, happoatsidit, aktiiviset esterit ja aktiiviset tioesterit. Vapaan hapon voidaan antaa reagoida yhdisteen II kanssa sen jälkeen kun mainitun vapaan hapon on ensiksi annettu reagoida N,N’-dimetyyliklooriforminiumkloridin kanssa tai käytetty entsyymejä tai N,N'-karbonyylidi-imidatsolia tai Ν,Ν'-karbonyylitriatsolia tai karbodi-imidi-reagenssia, esim. Ν,Ν'-di-isopropyylikarbodi-imidiä, Ν,Ν'-di-sykloheksyylikarbodi-imidiä tai N-sykloheksyyli-N'-(2-morfolinoetyyli)-karbodi-imidiä, ^heehan ja Hess, J. Amer. Chem. Soc., 77, 1967 (1955)J, tai alkylyyli-amiini-reagenssia [R. Buijle and H.G. Viehe, Angev. Chem. International Edition 3, 582, (19&*)Jy tai isoksatsoliumsuola-reagenssia /R.B. Woodvard, R.A. Olofson ja H. Mayer, J. Amer. Cbem. Soc. 83, 1010 (1961)/, tai keteeni-imiini-reagenssia, [c.h. Stevens and M.F. Munk, J. Amer. Chem. Soc. 80, U065 (1958)/, tai heksa-kloorisyklotrifosfatriatsiinia tai heksabromisyklotrifosfatriatsiinia (US-patent-ti 3 651 050) tai difenyylifosforyyliatsidia ,'DPPA; J. Amer. Chem. Soc., 9^ 6203-6205 (1972)/. Vapaan hapon muu ekvivalen-tti on vastaava atsolidi so. vastaavan hapon amidi, jossa hapossa amidi-typpi on näennäisaromaattisen viisi-jäsenisen renkaan jäsen, joka rengas sisältää ainakin 2 typpiatomia, so. imidatsoli, pyrat-soli, bentsimidatsoli, bentsotriät soli ja niiden substituoidut johdannaiset. Esimerkkinä atsolidin valmistuksesta N,N'-karbonyylidi-imidatsolin annetaan reagoida karbonihapon kanssa ekvimolaarisissa määrissä huoneenlämpötilassa tetra-hydrofuraanissa, kloroformissa, dimetyyliformamidissa tai senkaltaisessa liuotti- 6 60019 messa karbonihappo-imidatsolidin muodostamiseksi käytännöllisesti katsoen kvantitatiivisena saantona, jolloin vapautuu hiilidioksidi ja 1 mooli imidatso-lia. Dikarbonihapot antavat tulokseksi di-imidatsoiidin. Sivutuote, imidatsoli, saostuu ja voidaan erottaa ja imidatsolidi eristää, mutta tämä ei ole olennaista. Erikoisen edullinen asyloimisaine on happokloridi-hydrokloridi, jolla on kaava vs. ch2nh2.hci CXtvra joka sekä aktivoi karboksyylin että suojaa aminon. Edellä on esitetty myös entsyymien käyttö vapaan hapon kytkemiseksi suojattuine aminoryhmineen yhdisteen II kanssa. Sellaisissa menetelmissä käytetään vapaan hapon esteriä, esim. metyyli-esteriä entsyymien kanssa, jotka on aikaansaatu erilaisten mikro-organismien avulla, jotka on kuvattu esim. julkaisussa T. Takahashi et ai.; J. Amer. Chem. Soc., 9U(11), 1+035-^037 (1972) ja T. Nara et ai.: J. Antibiotics (Japan), 2l+(5), 321-323 (1971) ja DE-patentissa 2 216 113.

Edulliset reaktio-olosuhteet, esim. lämpötila, liuotin, reaktioaika jne. valittua kytkentäreaktiota varten määrätään käytetyn asyloimismenetelmän lajin mukaan ja ne ovat sinänsä tunnettuja tällä alalla. Yleensä on käyttökelpoista lisätä orgaaninen tertiäärinen amiini, esim. trietyyliamiini, H,N’-dimetyyli-aniliini, etyylipiperidiini, 2,6-lutidiini tai kinoliini protonia vastaanottavaksi tai suolaa muodostavaksi aineeksi.

Keksinnön mukaiset yhdisteet voidaan erottaa samalla tavalla kuin mitä tavanomaisesti käytetään vastaavanlaisten kefalosporiinien erottamiseksi. Niinpä tuote voidaan saada neutraalina molekyylinä, vaikkakin se todennäköisemmin esiintyy amfoteerisena ionina, tai se voidaan erottaa suolana. Halutun farmaseuttisesti hyväksyttävän karbonihappo- tai happoadditiosuolan muodostaminen voidaan suorittaa sinänsä tunnetulla tavalla, esim. antamalla hapon reagoida sopivan emäksen tai hapon kanssa.

Asyloimisreaktion päätyttyä saatu tuote voidaan muuttaa (joko aminon suo-jaryhmän poistamisen jälkeen tai ennen sitä) sinänsä tunnetulla tavalla muuksi halutuksi kaavan I mukaiseksi tuotteeksi. Niinpä kaavan I mukainen yhdiste vapaan hapon tai sen suolan muodossa voidaan muuttaa sinänsä tunnetulla tavalla farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi. Samoin kaavan I mukainen tuote suolan muodossa voidaan muuttaa vapaaksi hapoksi tai sen farmaseuttisesti hyväksyttäväksi 7 6001 9 suolaksi.

Suoritusmuodossa B saatetaan kaavan CH2NH2 I |j ' Il 0 ^-K -cH2OCOCH3 co2h mukainen yhdiste vapaana happona tai suolana reagoimaan kaavan V mukaisen heterosyklisen tiolin tai sen suolan kanssa, edullisesti natrium- tai kalium-suolan kanssa. Sellaisen asetoksiryhmän korvausreaktio tiolin kanssa on hyvin tunnettu reaktio ja se voidaan suorittaa liuoksessa, kuten vedessä tai vesipitoisessa asetonissa ainakin huoneenlämpötilassa ja edullisesti lämpötilassa noin 50-100°C, laimean emäksen kuten natriumbikarbonaatin läsnäollessa, esim. edullisesti lähellä neutraalia pistettä, kuten pH-arvossa noin 6. Edullisesti käytetään ylimäärää tiolia. Reaktiotuote erotetaan tekemällä reaktioseos tarkasti happameksi ja sen jälkeen uuttamalla veteen sekoittumattomalla orgaanisella liuottimena. Korvausreaktiosta saatu tuote voidaan haluttaessa muuttaa farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi käsittelemällä sopivalla hapolla tai emäksellä. Kuten edellä kuvatussa vaihtoehtoisessa menetelmässä kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi niin saatu vapaan hapon tai sen suolan muodossa oleva tuote voidaan muuttaa farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi, tai vaihtoehtoisesti suolan muodossa saatu tuote voidaan muuttaa vapaaksi hapoksi tai sen farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi.

Kaavan I mukaisen yhdisteen Sehiff-emäkset, erikoisesti salisyylialdehydi-Schiff-emäs ovat myös käyttökelpoisia aktiivisina bakteerienvastaisina aineina.

Ne valmistetaan antamalla vapaan kaavan I mukaisen aminoyMisteen reagoida alde-hydin ja edullisesti salisyylialdehydin kanssa. Reaktio suoritetaan tavallisesti ympäristön tai korotetussa lämpötilassa inertissä liuottimessa, esim. bentsee-nissä tai tolueenissa, jolloin vesi poistetaan atseotrooppisella tislauksella, tai vettä sitovan aineen, esim. kaliumkarbonaatin läsnäollessa.

Keksinnön mukaiset farmaseuttisesti aktiiviset yhdisteet ovat voimakkaita bakteerienvastaisia aineita, joita käytetään useiden gram-positiivisten ja gram-negatiivisten bakteerien aiheuttamien infektio-sairauksien hoitamiseksi siipikarjassa ja muissa eläimissä sekä ihmisessä. Aktiiviset yhdisteet uvat 'myös arvokkaita ravinnon täydennysaineena eläinrehuissa ja aineena hoidettaessa naudan 8 60019 nisätuleMusta. Edullisten yhdisteiden on myös yllättäen todettu tehokkaasti absorboituvan suun kautta annosteltaessa.

Keksinnön mukaiset yhdisteet saatetaan farmaseuttiseksi annokseksi, joka sisältää aktiivisen ainesosan lisäksi farmaseuttisesti hyväksyttävää kantajaa tai laimennusainetta. Yhdisteitä voidaan annostella sekä suun kautta että paren-teraalisesti. Farmaseuttiset valmisteet voivat olla kiinteitä, kuten kapseleita, tabletteja tai lääkerakeita, tai nestemäisiä, kuten liuoksia, suspensioita tai emulsioita. Hoidettaessa bakteeri-infektioita ihmisessä voidaan keksinnön mukaisia yhdisteitä annostella parenteraalisesti määrässä noin 5-200 mg/kg/päivä ja edullisesti noin 5~20 mg/kg/päivä jaettuna annoksena, esim. 3-*+ kertaa päivässä. Niitä annostellaan annosyksikköinä, jotka sisältävät esim. 125, 250 tai 500 mg aktiivista ainesosaa sopivan fysiologisesti hyväksyttävän kantoaineen tai lisäaineen kanssa. Annosyksiköt ovat nestemäisiä valmisteita, kuten liuoksia tai suspensioita.

Tietyt 3-substituoidut 7-^6<r(2-aminometyylifenyyli )-asetamido/kefalosporaa-nihappo-johdannaiset (A; katso hollantilainen patentti 72/06326, Farmdoc 7637^T, joka vastaa DE-hakemusjulkaisua 2 222 95M muodostavat earjoja parenteraalisesti käytettäviä kefalosporaaneja, jotka ovat erittäin tehokkaita johdannaisia, joilla on laaja vaikutusspektri. Niiden rajoitettu vesiliukoisuus ({ 2 rag/ml) on kuitenkin aiheuttanut kiteiden muodostumista virtsaan vieläpä silloin kun antibiootteja on annosteltu parenteraalisesti helposti dissosioituvana liukoisena johdannaisena. Esillä olevan keksinnön kohteena on senvuoksi aikaansaada vastaavia aktiivisia yhdisteitä, joilla on suurempi vesiliukoisuus kuin amfoteerisellä muodolla.

ex .

CHgCO-N-^

-CHg-S-R

co2h (A)

K

i 0 €0019 ,» 7

Esillä olevalla keksinnöllä on aikaansaatu tiettyjä T~ 2-amino-metyyli-l-sykloheksenyyli- ja-l,^-sykloheksadienyyli)-asetamidoJkefalosporaa-nihappoja (B).

H

HgCO-N—y-/ »S

-N CH2-S-B

co2h . , (B)

Useiden uusista yhdisteistä on todettu liukenevan paremmin veteen kuin vastaavat fenyylijohdannaiset ja niillä on liukoisuus suurempi kuin 7 mg/ml määrättynä 0,1M pH 7»0 fosfaattipuskurissa, kuten on osoitettu seuraavissa vertailutaulukoissa verrattuna vastaavien fenyylijohdannaisten kanssa.

ίο 6001 9 re r

CO

* '« o t ti C? ^ Λ · /—λ o r' O8 .

n 3i - i % «; 'ξ < 41

OJ ί ° O £? *0 M

§ 8 5, -a * E ε .

cm * cm .2 ** m o> o ö -3 ** |f\ , Vi d * ά I e e e • 3 >c < cm to ^ . .

δ ‘3 g> % % /—§ J1 Ί b ^ *, y° 31 » ® on 1 1 t— oo o\ _I h h r-r gs> CM » # PC O * c ϋ * · co w a fl s

δ δ « ‘5 ffl M

\ / Ρΰ h a O . s ^ „

J >0 Ύ) W

Κ Μ ν II i { * g I i 't I a* O IP w 63

Hv I -s \ V“ 3 o y-5f ω P< u ? « £^ I 1 CM f ° °. « ft o · vo

ft O C\J

0U CM ί*Ί *·* δ S' a H a b " \ 5 3 -..Λν s£.iL r--. ^ j Q ip 11 6001 9 # dj

1 ? I

•s ' 9 g> .1 «o g •4 0 ή .s

P

0 . T3

S

O) 09

O

M

• · · »S

M 3 * <-» •"'O

I < -ξ ' ^ i •H W M U> bO d ö

o EE E E 3 S

X +» λ

3 VO Ο .=} -P +J

•H . ·----- . . . D rt

,q J >- t- o\ CO * > 3 J

Ό . · 1Λ 1Λ O oi O i—1 Cv Cv

„ 3 -rt OJ -H

O H - CM 00 01 S 4 H CM CM

rvi CM CM · CU R t- t- W W

« O ΙΛ to OI Cii . i ta ö • * A «S ‘ e «e aJ cu c\j —> θ η 5 2 .H * ® B Eh •H ·Μ ·Η *25 h ϊ ΙΩ CO oö <33 -ΞΙ» Ä Ä [5 3 S 3 3 W W b- W W W “· o tn w to w oc _ β -H -H 3 3 ΚΛ 3 ö et) cö to m vo tC Z—q, iy 4Ä fii .H -H t- J? gj » ^N=* riääi <,

rt il Irt5 I

1 _r Λχ T 1 ch a> -ρ ρ en en p, te 25~1 T te to Ö e 3 2 et) 1 1 O -rl 0! ω e S <« ti a 4 p ω a> p< a) td Λΐ X ·« 8 f* f4 S S % C— Λί M M I I (Τ', ta fc fc W W vo

SO Q Q O

. . Pc S 3 3

• .· p p p 3 3 CU

-j r~i S .* P -P -P -P t--

v! {- rHuctJoö-P-P

_ E -U * p, > > tfl oi to \ \ Oto33i>t*2 ' · · Ai>433fi K hn- tn aJ3ft4Aiai a eii -rl P ö G .¾ 3 E fcs P -H O O G G 3

3 G O O O JA

to vn 3 ta ^

•<-t , >» >, O VO —' G

O * rt- r-tUACMSVOd;

Jd ·=*" , VO -4- 3 H CM C\ C\ G

3 I . d CO CO CO CO -H

*rH K\ ci 3 I 1 I I 03 S ' : m pq pq g pc h _. to —» pq pq s § ·η

-=^ --3---^---—- — -P

υ ^ g O οι Φ d> n> 3

irc LTV p P -P P rH

-4- i/\ cm -G· co tn w CP r-t

_. · -H -H -H -H O

s a 53 S S S 3 Ä

•H ’rt P >»>»>* i>» O

co n v ai to , rC M 1 p CO :CÖ !<Ö .-tö :ce p I οίί I ·§ I I ί M ’> En E-t Eh Eh *— V >0) to H — sT* * -3-3 3 3 „ Äj( s A» 12 6001 9

Esimerkkien 3 ja 19 mukaan valmistettujen yhdisteiden pienimmät esto-väkevyydet (MIC) mcg/ml on esitetty seuraavassa taulukossa.

aCH2NH2 ' --^ 0 (Γ--

COOH

a a

f S ,N N

Organismi M.I.C. (mcg/ml) ~S τ"*Νϊ ^ _s_ Jj ™3 6c (Esim. 3) (Esim. 19) S. aureus Smith + A953T 0,2-0,1+ 0,6 S. aureus Smith + A953T 0,8-1,6 1,6 + 50 % serum S. aureus Russel 0,1+-0,8 0,8 S. aureus BX1633 A9606 1,6 1,6

Str. pyogenes* A960I+ 0,01+-0,08 0,16 + 5 % serum D. pneumoniae* A9585 0,01+-0,08 0,08 + 5 % serum

Mycobacterium 607 >100 >.100 E. coli NIHJ 1,6-3,1 3,1 E. coli ATCC 8739 3,1-6,3 3,1 E. coli Jubl + A15119 3,1-6,3 6,3 K. pneumoniae + A9977 0,8-3,1 3,1 K. pneumoniae + A15130 3,1-6,3 3,1

Pr. mirabilis + A9900 100 25

Pr. morganii + A15153 >100 >100

Sal. enteritidis + A9531 1,6-3,1 1,6

Ser. marcescens + A20019 >100 >100

Ps. aeruginosa + A981+3 >100 >100 *50 % ravintoliemi - 1+5 % antibioottinen analyysiliemi + -1+ + at 10 laimennus i3 60 01 9

Edellä esitetyillä näytteillä liuottamisen jälkeen ravintoliemeen todettiin olevan ilmoitetut pienimmät estoväkevyydet (M.I.C.) mcg/ml ilmoitettuja mikro-organismeja vastaan määrättynä yli yön tapahtuvalla viljelyllä 37°C:ssa putkilaimennuksella.

Keksinnön mukaisten edullisten yhdisteiden, esim. 7c (esimerkki 19, BB-S311) ja 6c (esimerkki 3, BB-S336) erinomainen in vivo aktiviteetti todettiin vertailemalla MR-S9U:n kanssa määräämällä pienin parantava annos (annostelemalla ihonalaisesti lääkettä infektoituun hiireen) 50 #:lle hiiriä (CD^Q) mg/kg verrattuna ilmoitettujen mikro-organismien kuolettaviin annoksiin. Tulokset olivat seuraavat: CD50 mg/kg

Organismi BB-S311 BB-S336 MR-S9^ (kohta l)

S. aureus BX-1633 1,8 2,U 3,H

St. pyogenes Α96θΗ 1,0 - 0,8

E. coli Juhl 6,25 5,H H,H

E. coli Juhl 5,6 - H,2

Pr. mirabilis A9900 9,H - 8 K. pneumoniae D-ll 8,5 - H,6 S. aureus Smith 1,8 - 3,1

Rotan virtsan talteenottotutkimuksissa kefalosporiineita annosteltiin ihonalaisesti 200 mg/kg amfoteeristen ionien ollessa vesisuspensiona (HO mg/ml; DMS0 - 0,5 % NaHCO^-H^O =1:1:8) ja salisyylialdehydijohdannaisinä, jotka ovat yhtä voimakkaita laskettuna molekyylipainon mukaan, vesiliuoksessa.

Rotan kiteisyystutkimuksissa BB-S311 antoi tyydyttävän suuret seerumi-ja virtsa-pitoisuudet ilman kiteytymisen löytymistä. Tutkimukset koirilla osoittivat että BB-S311 antaa suuria kidevapaita virtsa-väkevyyksiä. Parenteraaliset (IM) absorptio-tutkimukset hiirellä osoittavat, että BB-S311:n huipputaso on korkeampi kuin kefalotiinin ja että tämä antibiootti voi säilyä veressä kauemmin kuin kefalotiini. BB-S311:n JM-annostellvn annoksen määrä, joka talteenotet-tiin rottien virtsasta, oli 31 %, mikä arvo on erittäin lähellä MR-S9U:n yhteydessä saadun arvon (35,5 %) kanssa. Kefaloriciinin talteenotto oli **3,1 %, kun taas kefalotiinin oli 18,1 %. BB-S3H esiintyi virtsassa aina bioaktiivisena 14 60019 aineena, jolloin sen RF-arvo oli identtinen sen kanssa kun mitä todettiin itse yhdisteen vesiliuoksessa.

BB-S311:n bakteerienvastakaista aktiviteettia verrattiin myös MR-69^:n aktiviteettiin agar-laimennuskoejärjestelmän avulla. Mueller-Hinton-kokeissa, joihin sisältyi 18 gram-positiivista ja 58 gram-negatiivista organismia, BB-S311:n todettiin omaavan samaa suuruusluokkaa olevan aktiviteetin kuin MR-S9^· Lisäkoesarjoissa MR-S9^:n ja BB-S311:n suhteellinen aktiviteetti määrättiin käyttäen mikro-organismeista Sarratia marcescens, Enterobacter sp., Provi-dencia stuartii ja Proteus sp. jokaisesta 32 kantaa. Näillä yhdisteillä oli erinomainen aktiviteetti mikro-organismien Enterobacter sp., Providencia stuartii useimpia edustajia vastaan ja mikro-organismin Proteus sp. kaikkia edustajia vastaan lukuunottamatta P-morganiita.

Keksinnön mukaisilla yhdisteillä, senjälkeen kun ne oli liuotettu, esim. DMS0:n tai veteen 2 mg/ml ja sen jälkeen laimennettu ravintoliemellä, todettiin olevan seuraavat pienimmät estoväkevyydet (M.I.C.) mcg/ml ilmoitettuja mikro-organismeja vastaan määrättynä yli yön tapahtuvalla viljelyllä 37°C:ssa käyttäen putkilaimennusta. Tulokset koskien erilaisia tunnettuja kefalosporiineja on myös ilmoitettu. Tässä ja muissa kokeissa salisyylialdehydi-johdannaiset ovat yhtä voimakkaita kuin vastaavat yhdisteet ja ne liukenevat myös helposti veteen.

15 6001 9

O

OJ

B ' O!} "

. r-i -i COVO CC'D VO

O i-h O H U5l<\ KMA VO VO CO H VO

W ςί OO OO' OH HW ΗΛ H|<v O · VO KN HKN

l Ό............ «O** · · pr, *2, OOOOOOO r-t cvi Ori WW OO ww «1 * voi VO VO K\

Ö rH r-i r-i lA LTV IT\ VO

CO O O * OJ CM OJ rH VO VO

I · · O · · · · · CU ·

g OOOCUOO OCU

^ <y\ r-t Η.

E H

N . ·* . r-4 “

bC ri GVO VO

’j ri Λ Η[Λ ηγλ ιλιλ m covo

C« *JOO OO HW «IP !*\f<\ K\VO Ο ΤΛ VD VO KNKN

^ C OO OO OO OO CU OJ O OO Cvl-=J- OO CUOJ

« V

H

« si ;_-___________________— .-rl co 00 cj ο ο k\ m vo <»

COi 0,0 rH CVJ ΙΛ ΓΛ rH K\ O

|l ······ ·· · gjj OOOO HOOCU f* ---- -1" ·~"— b- cv δ

l£Y t- l— VÖ VO CTv rH r-i lT\ C— fA

CO Ο K\ ί<Λ O O O f°V r-l t- r-i tnvoiAiovovo in in in ltv C?v in

Ov CTV OV OV OV Ov r-i (J\ r-i OV Ον ι—l <i < <; «ς < . < * * rs ^ * * Λ w =r

r-» JU· (I I

K\ NN I OO O r-, r- I t O r-i r-i · ι—i .¾st O O r-t —- ra —- -=j- it

r-i i-t --- φ I O O

^ rvrVOiCQO rH- rH

.C . Yft. KV K\ I -H r-ι w-v— * * *> Or-' VO VO JZ *o --- ·—' S Q ri IfW rH 1-1 +Ϊ «rt <=J- <t) 0) « Φ 6 I X X 0) 43 rH I tow

«H β CO tO W « S*H.CO-H«tH • n CW r-i ti 3 rH C C

e O bO CO CT—' CDQ in <u »-3 —r O O

V 'go 3333 3-~* 4a eg 3 £ 3 >> <t> <u6o 0) α»Λ C *rH Ή § d

Ow Φ P· P P 3 P in pi 0) rH r-l 0) O

^•h c 3 3p 3 3 30 oocc «C o. · «0 oil o (O (O rH O O P. P.

'F? S O rH

ιοί1 · 4» · · · · «03 ·..·

wloj Q CO CQ CO CO CO M C0 WWWX

t • 16 6001 9 — — j

CVi OJ

H t<\VO IL, ΟΪ |T\VO ΙΓΜΛ vovo OJ ΙΛ 0*0 .=4-CO /=%.

«1 · · . CM OJ Hh ΚΛ CM < >

El OO -srco »-trH r-i V=/ «J A/\ # --—--Jjp i Λ

•CM CO

$ — \zL ^ g =, ^ ® ° w γη

ΘΟ rH

« Λ

—---------- I 1 ιιη· |·Ι·Μ—II

'--- 1 -----—--·-- ' "“ 1 ———————— -

- I

3 VO K\ -H

tof r\VD IfMTV CO VO CM VO Ο ι-ί CM-sr 5 §

«J * * CM CO Η |θ\Η r CM

COJ O O -^-=^ r-l r-i ·Η 33 « ΛνΑ >6 i b

»1 rv 1 I 0='S

ϊ 5/1 s s s ° * ; a

1 ° · * S_- - a O

-- -^^-CR- J............ = Ο l*"V KV rH VO OV ό Q h 3· Q in m in + h ö) ir\ co o vo vn vo . £ r-ι cm CTlrH (J\ CM CTvChOV Ö DC « •H <U -

• H U

n I .CM

«">» >, P W

-=4- >> Λ I

<% ja· I r-f » rn

* CM

I O ri s* .st 3* 6CÄ O I «Η ' I I I F> O-

r* O w O O O « r-λ O

- O „ a ώ .O o * * «0“ Ο © © -P <H Vi?'

*-» <H OO © V © £ ^ lT

*“·*« c. n a co as § >· r-is

^C'T'OOOO.HM WO

*- Αα&ϋροαβι^ι? 2 ec3fe0Elf«OOO-H0 p

® 6 ti U rj r-l *-» T-» £ g O

'*3τ!9«ί=οο«8§· CM

C E C « ·Η W

CJ «*··=;%. p

G·· · ti +> ^ ^ I

, i--3 1T 6001 9 *5 'ίπ KV KV ® Λ ^ ^ fO, O O rH ιΗ ί<Λ ΓΛ O KV r-> Kv r/Ί ······ · · 1

, ο Ο Ο Ο ο Ο «-1 O OCVJOHO

.81 ! ·1] 00 00 ί , _

,70 O UV

id .£ O O CJ ΙΑ ΙΑ Ο ΙΛ β § o o O O o CVI >=1 o H VO O VO rl V, e rt Η •h VD 00 0 ιΗ Ο ΙΑ Λ 2 ο ο cvi in irv1m s.. . · · ·

O O O r-i O J4 ' CO O H 4 O W H

w '··

w h Ö O W K\ VO VO IA

cd· h ······ · 7COOOO 0 0-4 CJ COVÖ st VO st $ -p j M ^ o oo co

w o o VO

rt'cOOr-1 VO VOlAlAlA

£ .5 · · · · ·.·· D.HO O O OI O Μ CO O O 4· O W o

W H

Vh co CO

E.'OOKVVO · ·

< ·β,.Η o O ’ fH rH IA KV KV

(V «P.HO O O O O h ·=1 O VOlAf-iCOr-! · g 3¾) s .

. 3.5 8 8 o !5 ι^\ vo K}

Om1H 1···· · ·,

, Vitso o o O O -=r st O w 4 H 4 H

1mJ <U 1H

s o .co co vo _ _

H -h 1 o O r-i KV KV KV .KV

aJfi...#·· · o O O O O O Cl O νθ (Λ H V£ r-i ^ ^ >0 ^

N- ON O

tf\J4 N- S- VO VO ON »H H 1Λ S A O CO O KV KV O O O KN H f- f- H O

IA VO IA IA VO VO IA y^ lOVDONjAON

On on ON on on on r-i On iHONOn«-1On

s 4 4 4 St III

1000 K\ KV 1 M O r-i r-i r-i Ä >R KV KV 1KV r-i —' '— * 1 <P O'—1. VO VO J3I Ό ^ „

Λ) 0J >ri IPFT r-i «H -PO Ή -4 O O CO

ία 0) E I X X 0) r-i 4S (Hl <0 01 -H

h c eo 4 o pq pq -h. ä o ri h •H C1Q>1 |H 3 3 r-H c 3 T-»

fc O1 601 03 CQ'-f' 03 03 03 · O —1 O O O

.2 .rt B—' Or-1 3·—1 3 1' Ztr-1 rs1'-' 3 -P -p»'-- S fc «J

rH ö 3 KV WA QW CU Π 0)KV CUCVJ <D 03 C4 1H Ή 3 3 3

O CO (UI P< I 31 3331 3 1 tiK Ο I rH «H CU <U «H

·»» '1 CO 0 3 0 3_.3 3030 303 O OOCCE

.2 S O, H · rH (0 (H (cf'<D CU r-i <0«H ¢34) «rH O O O. Λ > ---' 3 '—' 03 '— '— 3 f-1 —' 1 «i v< · -p « · · · ·«·.··· Jm k oJ QMcotoeoeo cjto w w Ui « C3 l 6001 9 Ιο r-Ä r* ro m .

to ·

I ;r ιΛ W W H W

PQ N Λ ΙΛ

«I H

A

8 £§ w 8 Ö » w Ä ’

Λ A

0

S

^ W ΙΛ in ΙΛ Η Λ

ΚΛ CU CM CM VO

A A A

a *h __ 'm -' ia m m m oo m ä^cvjcucmcvjcu

M +4 r4 r-i i-4 r-4 rH

b AAA A A

w 4» ·Η ΙΠ fl Ö · ; *h m m m m o m •s*51 S S 2 il 3

AA A

Λ -g

0<·Η H

a) c 4) .

ιλ in in in CM m *;! sS'gCMCUCUOJCUc) ^ r-l r-< r-t rl +Ϊ AAA Λ A g

Q

1 ·Η ** o C u H *H f ' o’

<£ Ώ mmm lOOJlA

^. h CM CM CM CM W

yjK^rHr-t r4 r4 + AAA A A * , J, U -C.

o . υ a

r-i — £ O

<£ .J: mmm m ·=! m ** jrsaa a a «s A AA A A + ~ m < <τν Λ ·π i?

m A h MO ON E H

h 4 o in m in .2 .-, in ω o in vo vo 3 H* HOV« 0\S\0 ·ηη <<< < < < « ^ ~ Is' I <*“s r-- S § Λ· o *r ** -sf ö g t r-4 t I · g 3 O'-' o o o S 3

r4 βΟ Η Η Η ·Η H

«0 Φ O §

«400 ft) 4) « OS

«4 fj M <0 <0 <0 ·η 0) C «4 O OOO 5 ·Η * * aj bO o <0 (0 «J *rj Τ' £ 0) 3 OOO g <4 tO t4 Ϊ4 ίβ·=Τ «"4 r4 ft 3d; •η. οοειοοο -? C β to Ο ΙΛ ci *r4 · · · ^ > U · · t4>-^ 4J 43 *> *.« t4 to Φ c C C ^ £

Oj i*4 W CO WWW «< * __ 6001 9 .=*·

CT 00 CO

«5MOOKNKNVOVO -=ί· VO CO VO

iHlOOrHHrHrH O H O ΙΛ H

£····· ·· ···

S · rH CM

o """" "" ~~ ·

Sr. · .vo, s cd CVJ ti -

W G

'« kn kn un _ _ w o o cu un kn vo kn un kn kn ·#······ ·· ·. ♦

Ä -=r W CO h CO H

H

Äj· σ < CO VO VO KN KN oo vo

I rH rH rH rH KN KN O KN rH KN

Λ1 fr^ · · · « ·.· · · - · ·

t- s| H W |H

O LTV

s? <m » · - iöJ G . _ Λ

t. -h VO VO

ry tn , ,H rH KN KN VO

> O O rH rH KN KN rH VO KN KN

•a···'··· · · · ·

^ Cl rH CJ

4 ^

rH

<5- ...... · - :--- • · ................

bt, Λ- O CP J*

e CO O O KN KN VO VO CO VO

«SlOOOOrHrH O KN rH KN

Γ»4⣫····· · · · ·

CV) S Cl Cl rH

t- 4 o · ------------- ------------ --------------------- 1 ---

• O

H SS cvj ' « - · £· 0 ** 'S ‘w CO 00

M wOOVOVOVDVO VO

O O O O rH rH rHVO KN KN

««··«··· ·· · «

«H «H CJ CJ

•

N- ON O

LfN -=r s- C— VO VO ON rH H m o

CO O KN K\ O Q O KN rH C*- J^· rH O

U> VO UN UN vo VO UN UN U\ VO ON UN ON

On on ON On On On rH On h on on h on e - r-s Äj· sf Λ- 11« I o o o KN KN I /-H es · o n 1+rt Ä NR KN KN -KN «H «H '-r ^ — * * P Or-H VO VO JC I XS —· r-x

0> (0 «rl UVJ· rH rH P o τΗ O CJ CO

a e> E I X X Φ rH P rH I <0 <C Ή

•H c CO + O PQ pq e- rl ,β O «H «H rH

• rt C* Φ* rH U 3 rH C C *rH

& ~ o * to* n a*-» a a a · a> »3 o o .a .Ϊ E Erv O·---- 3r> 3 3r> 3·^ 3-P Pr-^ e S a P a 3KN >kn os=r a» E okn <doj ai a c=r «h *h 3 3 ti

O «H oi O.I tl I tl 3 tl I ti I ti «H <U I H H 0) ¢) H

t; C CO O 30 3 m 30 30 3a OOOCCE

.S CU O. rH 'iHOJrHcoacOrHcgrHcga · rH O O O. Ω.

p b! --- ·—' a w JL, rH

«j ti · P · · · · * OS ••••ti ^ o ö co oo oo co co co co w w ui u: ^ it 20 6 0 0 1 9 -=j- σ co

C 1 KN

»H CC

fO i? H in CO ΙΛ n H

CVI VO

J · A

Ä VO " " ' .

OJ

, scrti n .5

" »A

f« · r w m m tn w w

H IA CU OI CU IA

H H rt Λ A Λ 5T- o

CO

< ±J

t- K K\

CE

t*· cm m co w h h oi m

• H

O λ S LTN ' ' CU ---- ltd' C in »rt tl w w 1 m •t · -r·. ΛΤ in OJ OJ H 4· M oi m r~i _A__ JS- · ‘3 o .2 CO r-t

«il VO O

H O' · £ cvj] £ oi m co cvi «h .5 t*- oi m > H g 1 A u

£* jj· '' U

55 cvi f o ITv V· *...... n — .3 ' m , * " IA -g «h co m w m * .sf H oi ia vo So rt ‘ a; :o A* .

• iss r-t KV <· ON _ >> in ΙΑ r-i VO t- ON i .

h d o mmm . £· m co o vo vo vo 4 h H ON M ON ON Ov Sm <C < «5 < «5 C -h

H H

. δ w H m rT S 3 ? S 7 ? ? g s

o ^ o o o % ’S

WBJC .μ a <w +> a «ηο οο>ο®8£ «riCfflcocoÄ.Hm

CrtftJOOOfl-H *··; 03 to CJ «otace T* *ri ε t>o s o o o -g >? CO tn (4 ¢0-=1- · rH rH rH 3 m «H O O E I O O O -o c e co o tA -h <0 · *H · · · 'g ti · · G—' 4* +j +> ^ t, t-, m V G G G * OPhO«COWWW** t £0019 21

Keksinnön raukaisen edullisen yhdisteen (6c esimerkki 3, BB-S336) erinomainen in vivo aktiviteetti osoitettiin vertailemalla sitä tuloksiin, jotka oli saatu olennaisesti saman menetelmän mukaan MR-59^:n määräyksistä (annostelemalla ihonalaisesti lääkettä infektoituvin hiireen) koskien pienintä parantavaa annosta 50 £:lle hiiriä (CD^) mg/kg verrattuna ilmoitettujen mikro-organismien kuolettaviin annoksiin. Tulokset olivat seuraavat: CD50 mg./kg

Organismi_BB-S336_MR-S9^_ S. aureus BX-1Ö33 2,1+ 3,1+ li coli Juhl 5,1+ 1+,1+

Liukoisuuksien määrääminen

Ke f alosporiini johdannaisten liukoisuudet Ο,ΙΜρΗ 7,0 fosfaattipuskuriin määrätään bioanalyysin avulla ja myös käyttäen spektroskooppista menetelmää (silloin kuin näytteillä on UV-absorptio), jolloin kutakin varten käytetään sen omaa standardia, joka oli täydellisesti saatettu liukenemaan. Koeliuos ja standardi-liuos valmistetaan seuraavalla tavalla.

Koeliuoksen valmistaminen

Noin 10 mg (1) näytettä pannaan pulloon ja sekoitetaan 1 ml:n kanssa 0,1 m fosfaattipuskuria (pH 7|0). Pullo suljetaan, tiivistetään metallikapselilla, pannaan pyöröravistimeen ja annetaan pyöriä l60 kierrosta minuutissa U tunnin ajan 25°C:ssa. Liuos suodatetaan mikrohuokoisen suodattimen (IIAWP 01300, keskimääräinen huokoskoko 0,1+5 ^um) lävitse. Suodos laimennetaan käytettäväksi bioanalyysiä ja UV-analyysiä varten seuraavasti: 22 6001 9

Suodos (min. 1 ml.) 0.5 «1. ^ I laimennus tilavuuteen 100 ml • J. puskurilla ^ 100 ml.

* ' : · käytetty UV-analyysiin j. laimennus tilavuuteen

V 20 ml W

20 ml.

«-‘t-i.w i laimennus tila-/, , vuuteen 20 ml ^^^20 ml.

Käytetty bioanalyysiin

Standardiliuoksen valmistus

Noin 2 mg samaa näytettä tarkkaan punnittuna liuotetaan U ml:aan 1 J?:sta K^CO^-liuosta (3) (tavallisesti 1 minuutin kuluessa). Liuos laimennetaan tarkalleen tilavuuteen 50 ml pullossa 0,1M pH 7.0 fosfaattipuskurilla ja käytetään standardiliuoksien valmistamista varten bioanalyysiä ja UV-analyysiä varten seuraavasti : _5Q ml._.

^ TJV- analyysiin bioanalyysiin __1 lal. w v ·]/ / h \ | (40 incg./ml.) 10 ml.' 1 I leimennustila-. ^ \ . laimennus- '/M * vvuteen 20 ml ^ f ti^avuu- 20 ml · 20 ml · 20 ml. $--i /m (20 mcg./ml.) (2 mcg./ml.) 5 ml.v ' | laimennuatila- *’ i I vuuteen ,. .

--S ieoml.i1*) käytetty UV-analyysiin 20 ml.

standardiliuoksena (0.5 mcg./ml.) käytetty bioanalyysiin standardiliuoksena 23 6001 9 (1) 20 πΐβ:η tai suurempaa näytettä käytetään silloin kun näytteen odotetaan liukenevan paremmin.

(2) 0,1M pH 7»0 fosfaattipuskuria käytetään laimennusaineena esillä olevassa kokeessa ja myös vertailuliuoksena UV-analyysissä.

(3) Aikaisemmin on todettu, että melkein sama tulos saadaan silloin kun näyte liuotetaan DMS0:n (dimetyylisuifoksidi) ja sen jälkeen laimennetaan samalla tavoin puskurilla.

(H) Liuoksen tilavuus mitataan täsmällisesti käyttäen pipettiä tai pulloa.

Λ .

A. -50019 ;

Liukoisuudet (rag/nl) 0,1M fosfaattipuskuriin (pH 7,0) 7-sivuketju " ~~t “ “ SL_coqc:: -CH -S-H'j R' = V ^ | Ϊ-f m-S& 13B-SJ-36 (6c) BB-S311 - (^c) ~\n^N M. UV £A Iö£ BA uv CH 2,0 1·9 25.6 24.6 9.7 9.7 _ 25·0 26.0 9.4 . 9.6 7.8 7.8 7.8 N—N m-S56 BB-S341 (6d) BB-S312 (7d) J-Lh 1,2 °·9' ·4·3 ή*β 8*8 7.6 2 3.4 ---------—:--- N—H BB-S150 BB-S340 (6§.) BB-SI80 (7a) 4.4 4.4 16.8 16.0 3.1 _u_ N—N BB-S226 BB-S338 (6b) BB-S269 (7b) u-n I . 2·5 5.0 3.0 12.5 9.0 . , )^N 2·1 1.7 ^==/ 3.8 3.5 2.2 25 · 6001 9 < *

OH

J EB-S207 B3-S339 (6η) BB-SJ13 (le) M UV ΒΛ irv M uv //1 \ 1 *.2 3.9 8.0 8.1 5.9 7.7 'O 3.6 *·> 1.5 3.1 3.7 4.4 BB-S314 (ΖΓ) Λ J 8.7 8.9"

N_N

-({ | BB-S324 (Ze)

O

BA: Bioan&lyysi, UV: UV-analyysi

Samalle yhdisteelle ilmoitetut rinnakkaistulokset saatiin käyttämällä eri eristä otettuja näytteitä.

• * • .

λ ! ♦ 26 60019

Beuraavat esimerkit kuvaavat esillä olevaa keksintöä..

Kaikki lämpötilat on ilmoitettu Celsius-asteina, "Skellysolve B" on petrolieette-rifraktio, kp. 60-68°C sisältäen olennaisesti n-heksaania. IR-120 kutsutaan myös Anberlite IR-120 ja se on voimakas kationinvaihtohartsi, joka sisältää 3ulfoni-happoradikaaleja. Amberlite IR-120 on kaupallisesti saatavissa oleva kationinvaih-tohartsi, joka on polystyreenisulfonihappolajia; siten se on renkaassa sulfonoitu polystyreenihartsi , joka on ristikytketty difinyylibentseenin kanssa ja saatu menetelmän mukaan, jonka on kuvannut Kunin, Ion Exchange Resins, 2 painos (195Ö), Jonn Wiley and Bons, Inc.

2,4-dinitrofenoli on esitetty merkinnällä 2,4-DNP, il ,ii'-disykloheksyyli-karbodi-imidi on esitetty merkinnällä DCC, trifluorietikkahappo merkinnällä TFA, tetrahydrofuraani merkinnällä THF, t-butoksikarbonyyliatsidi merkinnällä t-BuOCOH^ ja t-butoksikarbonyyli merkinnällä t-BOC.

Lähtöaineiden valmistus oL (2-aminometyyli-1,4-sykloheksadienyyli)etikkahappo (l )

Liuos, jossa on 16,5 g (0,1 moolia) o-aminometyylifenyylietikkahappoa 1,> litrassa nestemäistä ammoniakkia (jota on käsitelty 50 mg:11a litiumia kosteuden jälkien poistamiseksi), laimennetaan hitaasti 500 ml:lla kuivaa t-Bu0H:ta. Liuokseen lisätään pienissä erissä 3,4 E (0,5 atomia) litiumia 4 tunnin aikana ja seosta sekoitetaan 16 tuntia huoneenlämpötilassa nestemäisen ammoniakin poistamiseksi ja lopuksi haihdutetaan kuiviin alle 4o°C. Jäännös liuotetaan 500 ml:aan vettä ja liuos kromatografoidaan käyttäen IR-120-kolonnia (H+, 700 ml) ja eluoi-daan 1 '*> JH^Od-liuoksella. Eluaatin ninhydriiniin nähden positiiviset fraktiot yhdistetään ja haihdutetaan kuiviin. Jäännös pestään neljästi 50 ml:n erillä kuumaa asetonia ja kiteytetään uudelleen 500 ml:sta etanoli/vettä (1:1), jolloin saadaan 11,2 g (67 %) värittömiä neulasia, 1, sp. 183°C.

IRc/nuj. i63Q^ 1520^ 138o^ 1356 cm’1. m&Ks · BMR:-/D2° + K2C03 2.72 (UH, s, ), 3.01 (2H, s, CH CO), 3,20 (2H, a, CH -&), 5,78 (211, s, C=).

Anal, laskettu yhdisteelle C^H^gSOg; 6^,65» H, 7»· h, 8,38.

Löydetty: C, 64,77; H, 8,06; H, 8,44.

27 6001 9

Vaihtoehtoinen menetelmä (2- aminometyyli-l,U-sykloheksadienyyli)-etikka-hapon valmistamiseksi OUNHo /-/.

^ y—CHgCOgH LI, tert. BuOH

NH-j - TEA-HC1

O \—CH2C02H - Li Cl ♦ (C2H5)^N

^CHgNHg

Sovellutetaan menetelmää, jota Welch, Dolfini ja Giarrusso ovat käyttäneet US-patentissa 3,720,665 (esimerkki 1) D*2-amino-2- (l,l+-sykloheksadienyyli)-etikka-hapon valmistamiseksi. Liuos, jossa on 830 ml tislattua nestemäistä ammoniakkia, kuivataan käyttäen 10 mg litiumia argon-kaasukehässä. Tähän sekoitettuun liuokseen lisätään 11,0 g (0,07 moolia) 2-aminometyylifenyylietikkahappoa ja 3^0 ml tert.-butyylialkoholia. Voimakkaasti sekoitettuiin liuokseen lisätään 2 tunnin aikana kaikkiaan 1,6 g (0,225 moolia) litiumia. Harmaata seosta käsitellään sitten 35 g:11a (0,215 moolia) trietyyliamiini(TEA)-hydrokloridia ja sekoitetaan yli yön Huoneenlämpötilassa 18 tunnin ajan. Tert.-butyylialkoholi poistetaan Uo°:ssa (15 mm), jolloin saadaan valkoinen jäännös, joka kuivataan tyhjössä yli yön käyttäen ?.>0 :ttä. Kiinteä aine liuotetaan 30 ml:aan metanoli/vettä 1:1 ja lisätään samalla sekoittaen 3,5 litraa kloroformi/asetonia 1:1 5°:ssa. Seosta sekoitetaan 20 minuuttia ja aminohappo l, «4- (2-aminometyyli-1 ,i*-sykloheksadienyyli)-etikkahappo , otetaan talteen ja kuivataan 16 tuntia tyhjössä käyttäen P^O^ttä, jolloin saadaan 6,3 g (56 '!») valkeita kiteitä, sp. 190° samalle hajoten. IR- ja ifMR-spektrit vastaavat rakennetta.

«3^-/2- (t-butoksikarbonyyliaminometyyli )-3 ,^-sykloheksadienyyli^etikkahappo (3 ) Sekoitettuun liuokseen, jossa on 8,0 g (0,0ä8 moolia) q4t(2-aminometyyli-l,U-sykloheksa.dienyyli)-etikkahappoa ja 3,8 g (0,096 moolia) Ja0H:ta 150 ml:ssa vettä lisätään liuos, jossa on 10,3 g (0,072 moolia) t-butoksikarbonyyliatsidia 2β 60019 ÖO ml.-ssa TlIF;ää ja seosta sekoitetaan Id tuntia huoneenlämpötilassa. THF poistetaan vähennetyssä paineessa ja jälelle jäänyt liuos pestään eetterillä (2 x 100 ml), tehdään h&ppameksi käyttäen 6ii HC1 ja uutetaan eetterillä (3 x 100 ml). Yhdistetyt uutteet pestään vedellä (2 x 100 ml) ja kyllästetyllä JaCl-liuoksella (100 ml), kuivataan .»a^KO^llä ja haihdutetaan kuiviin, öljymäistä jäännöstä sekoitetaan n-neksa<*nin kanssa, jolloin saadaan 10,5 g (82 %) väritöntä jauhetta 3 , sp. 113UC.

IR:/ nU^· 3370, 1715, lbUO, 1530, 1280, ll60 cm'1.

ZH&K.S

JMR:<iCDC13 1,1*5 (9H, s, t-Bu-H), 2,73 (1*H, s, ppm c=c U2C\ 3,16 (2H’ S* CH2C0)’ 3,76 (2H* d’ 6HZ> CH2a)

Utyo (lii, n, JK), 5,66 (2H, s, H^.C-), 10,6 (1K, br-s, COOK).

Anal, laskettu yhdisteelle Cj^H^JO^: C» 62,90; II, 7,92; II, 5,2ä.

Löydetty: C, 63,13; K, 8,21; J, 5,26.

/2-(J-t-butok8ikarbonyyliaaino)aetyyli~l~syklohekseeni-l-yyl\7etikkahappo (2) Liuos, jossa on (2- (N-t-butoksikarbonyyliamino)metyyli-l,U-sykloheksadieni-l-yyli^etixkahappoa (3) (l,33 g, 5 millimoolia) 3 i2:sessa ammoniumhydroksidissa (10 ml), nydrataan paineessa 2,8 kg/cm käyttäen hiilellä olevaa palladiumia (10 0,2 g). Teoreettinen määrä vetyä absorboituu 3 tunnissa. Katalyytti poiste taan ja suodos tehdään happameksi pH-arvoon 2 laimealla HCl:llä ja uutetaan etyyliasetaatilla (2 x 50 ml). Yhdistetyt uutteet pestään vedellä (20 ml), kuivataan Ja^oU^:llä ja haihdutetaan vähennetyssä paineessa, jolloin saadaan öljyä (l,3ä g), joka jähmettyy annettaessa seistä useita päiviä. Kiteytetään uudelleen n-heksaani/etyyliasetaatista, jolloin saadaan 1,2 g (90 i) yhdistettä 2 värittöminä prismoina, sp. 118-119°C.

IR:/nuio11 3**50, 1730, 1660, 1510 cm'1.

m&KS

JMR:iiÖC13 1,58 (9H, s, t-butyl-H), 1,50 - 1,90 ppm (Un, m, -CK -), 1,90 - 2,20 (UH, m, allyylinen metyleeni-H), 3,10 (2K, s, CH2-C0), 3,78 (2H, d, 6 Hz, CHg-Ä), 5,00 (1H, br-s, JK), 8,90 (1H, br-s, C00H).

Anal, laskettu yhdisteelle ^iU^23^°U: ^2,U3; H, 8,6l; N, 5,20.

Löynetty: C, 62,12; H, 8,77; N, 5,37- 4 29 6001 9

Natr ium.(2-/N-( 1-karb etoksipropeeni -2-yyli) aminomet yyl i/ -1» 4 -sykloheksa- dienyyli)asetaatti (4)

Sekoitettuun liuokseen, jossa on 460 rag (0,02 moolia) metallista natriumia 100 ml:ssa absoluuttista Et0H:ta, lisätään 3,34 g (0,02 moolia) yhdistettä 1 ja 3,1 g (0,024 moolia) etyyliasetoasetaattia ja seosta kuumennetaan paluujääh-dyttäen 4 tuntia samalla sekoittaen. Ruuma reaktioseos suodatetaan ja suodoksen annetaan olla kylmänä yli yön, jolloin saadaan 2,0 g värittömiä neulasia yhdistettä 4, sp, 264°C. Lisätuotetta (3,3 g) saadaan vökevöimällä emäliuos, Kokonaissaanto on 5,3 g (88 %).

^^maks11 3300» l635, l600> 157°> 1300’ 1275’ 1170’ 1090 cm_1* m:$D20 1,23 (3H, t, THz, CHgCHgC^), 1,96 & 2,25 ppm (3H, s, 0=0-0Η^, cis & trans), 2,70 (4H, s, HgC^"), 3,04 (2H, s, CH2C0), 3,66 & 3,95 (2H, s, CHg-N, cis & trans), 4,07 (2H, q, 7Hz, CHgCHj), 4,45 & 4,56 (1H, s, = , cis & trans), 5,76 (2H, s, Π jj ).

H

Anal, laskettu yhdisteelle C^^Hg^NO^Na: C, 59,79; H, 6,69; N, 4,64.

Löydetty: C, 59,69; H, 6,76; N, 4,75·

Tunnetut lähtöaineet 7-amino-3-(3-hydroksipyriäatsiini-6-yylitiometyyli)- 3-kefeemi-4-karboni happo (4a), 7-amino-3~(tetrat solo/1,5-b/pyridatsiini-6-yyli -t iometyyli-3-ke feemi-4-karboni happo (4b), 7-amino-3-(1-metyylitetrat soii-5-yyli-tiometyyli )-3-kefeemi-4-karbonihappo (4c), 7-amino-3~(5-metyyli-l,3,4^iadiat-soli-2-yylitiometyyli)-3-kefeemi-4-karbonihappo (4d), 7-amino-3-/s-(l ,2,3-triatsoli-5-yyli)tiometyyli)-3-kefeemi-4-karbonihappo (4h), 7,amino-3~/2-(l,3,4-tiadiatsolyyli)tiometyyli/-3-kefeemi-4-karbon:‘.happo (4i) ja 7-amino-3-/2-(5-hydroksimetyyli-1,3,4-tiadiatsolyyli)-tiometyyli/-3-kefeemi-4-karbonihappo (4j ) valmistettiin US-patenttijulkaisussa 3 5l6 99r' esitetyllä menetelmällä.

'w»' w I y 30 7~amino-3-^.3~cLibydro-s-triatsoloA ,3-b7pyridatsiini-3-oni-6-yylitio- metyyli/-3-kefeemi-U-karbonihappo (Ue) 7~ACA:ta (1,36 g, 5 millimoolia) lisätään 50°C;ssa liuokseen, jossa on 6-merkapto-2,3-dihydro-s-triatsolo/i* ,3-b7-pyridatsiini-3-onia (0,81* g, 5 milli -moolia) ja natriumbikarbonaattia (0,81* g, 10 millimoolia) 20 mlrssa 0,1M fosfaat-tipuskuriliuosta (pH 6,1*), ja seosta kuumennetaan 2 tuntia 70°C:ssa. Pieni määrä liukenematonta ainetta poistetaan suodattamalla ja suodos tehdään happameksi pH-arvoon 5 laimealla HCl:llä, jolloin saadaan tuote l*e, joka otetaan talteen suodattamalla, pestään vedellä (30 ml) ja kuivataan tyhjössä käyttäen P^O^rttä. Saadaan 1,25 g 7_amino-3-/2,3-dihydro-3-triatsolo/i+,3-b7pyridatsiini-3-oni-6-yyli-tiometyyliy-S-kefeemi-li-karbonihappoa (66 %), sp. > 300°C.

nt;V 1Ö05, 1720, 1620, 1550 cm"1.

'"^Ssf003 257 nm (£ 17700).

NMR: £ D20-K2C°3 3jk0 (l H, d, 20 Hz, 2-H), 3,78 (1 H, d, 20 Hz, 2-H), PPm 1+,00 (1 H, d, 13 Hz, 3-0¾). U,35 (l H, d, 13 Hz, 3-0¾). 5,02 (1 H, d, k Hz, 6-H), 5,1*0 (1 H, d, 1+ Hz, 7~H), 6,70 (l H, d, 9 Hz, pyridatsiini-H), 7,1*0 (1 H, d, 9 Hz, pyridatsiini-H).

Anal, laskettu yhdisteelle Ci3Hi2N6°l+S2,H20: C, 39,19; H, 3,5**; N 21,09; s, 16,09.

Löydetty: C, 39,1*0; H, 3,39; N, 20,36; S, 15,89.

7-amino-3-(pyrido/2,l-c_7-s-triatsoli-3-yylitiometyyli)-3-ke f e emi-1*- karbonihappo (l*f) v—j- 0_/--CH2-S-^

O

Kuumaan (60°C) liuokseen, jossa on 1,51 g (10 millimoolia) 3-merkapto-s-triatsolo-7U,3-a7pyridiiniä ^D.S. Tarhell et ai., J. Am. Chem. Soc. 70, 1381 (191*8)^ ja 1,68 g (20 millimoolia) NaHCO^a 0,1M fosfaattipuskurissa (pH 7,1*, 50 ml) lisätään annoksittain J-ACA (2,72 g, 10 millimoolia) ja seosta kuumennetaan 280-85°C:ssa 30 minuuttia. Reaktioseosta käsitellään hiilellä, suodos tehdään happameksi pH-arvoon 5 laimealla HClrllä, jolloin saadaan 7-amino-3-(s-tri-atsolo-^ί* ^-cj-pyridiini^-yylitiometyyli )-3-kefeemi-l*-karbonihappo, joka otetaan talteen suodattamalla, pestään vedellä (10 ml) ja kuivataan tyhjössä käyttäen P20^:ttä. Saanto 1,1+0 g (39 %). Sp. 215-220° (haj.).

®:/iSks.l8°5, 1620, 1530, 11*10, 15**5 cm-1.

280 nm (£ 13200).

31 6001 9 NMR:^D20+K2C03 3,25 (1 H, d, 18 Hz, 2-H), 3,63 (1H, d?P?3 Hz, 3-H), 3,68 (l H, d, 18 Hz, 2-H), U.lO (1 H, d, 13 Hz, 3-H), 14-,7-5»3 (2 H, m, 6-H & 7‘H).

Anal, laskettu yhdisteelle O^Sg! C, U6,27; H, 3,61; li, 19,27; 3, 17,65.

Löydetty: C, 1*5,81; U5.7U; H, 3,58; 3,69; N, 18,21, 18,13; 3, 17,08.

7-amino-3-pyridatsino/2,1-q^-s-triatsoli-3~yylitio-metyyli)-3'kefeemi-U-karbonihappo (Ug) H2“-|-β-.1

cvs-f I

0 ΙΓ— C02H \__/ 3-merkapto- s- triatsolo/ff, 3-^pyridatBiini

Seosta, jossa on 1,20 g (8 millimoolia) 3-kloori-s-triatsolo^,3-b7pyridat-siinia ^P. Francavilla ja F. Lauvia, J. Het. Chem., 8, 1+15 (197iy j® 1,20 g (16 millimoolia) KSH:ta 20 mltssa etanolia, kuumennetaan 8 tuntia 130°C:ssa suljetussa putkessa. Jäähdyttämisen jälkeen seos haihdutetaan kuiviin ja jäännös liuotetaan 100 ml:aan vettä, käsitellään aktiivihiilellä, tehdään happamek3i pH-arvoon 1 laimealla HCl:llä 3-merkapto-B-triatsolo^i,3“tj?pyridatsiinin saosta-miseksi, joka otetaan talteen, pestään 10 ml:lla vettä ja kuivetaan tyhjössä käyttäen Piittä, jolloin saadaan 0,75 S tuotetta (62 %), sp. 250-270°C (hajoaa).

3080 , 29^0, 2760, 2760, 1620, 1500, 1280, 1055 cm'1.

maks · NMR:/DMS0'd6 6,99 (1 H, d-d, k & 10 Hz, 7-H), ^ ppm γ,67 (1 H, d-d, 2 & 10 Hz, 8-H), 8,15 (1 H, d-d, 2 & li Hz, 6-H), 12,3 (l H, br-s, häviää lisättäessä D^Orta).

Anal, laskettu yhdisteelle C^HjN^S-1/2^0: C, 37,26; H, 3,13; H, 3^,76.

Löydetty: C, 37,35; H, 2,32; N, 3*4,81.

32 €0019 7 -amino-3-( s^triat solo.A .3-b7pyridat siini-3-yylitiometyyli) -3-kefeemi -U- karbonihappo (Ur) 7-ACA (1,36 g, 5 millimoolia) lisätään annoksittain liuokseen, jossa on 0,68 g (U,5 millimoolia) 3-merkapto-s-triatsolo^I ,3-b^pyridatsiinia ja 0,8)4 g (10 millimoolia) NaHCO^ia 20 ml:ssa 0,1M fosfaattipuskuria (pH 7,*0 )40-50°C: ssa. Seos kuumennetaan 80-85°C:ssa )+0 minuuttia, käsitellään pienellä määrällä aktiivihiiltä ja tehdään happameksi laimealla HCl:llä pH-arvoon k, jolloin 7-amino-3~ (3-triatsolo^U,3-h/pyridatsiini-3-yylitiometyyli)-3-kefeemi-)4-karbonihappo saostuu ja se otetaan talteen, pestään 20 ml:11a vettä ja kuivataan tyhjössä käyttäen Pg0^:ttä, jolloin saadaan 0,81 g (1*9 %) tuotetta, sp. ^ 300°C.

make 1T°5’ l620’ 15l*°’ ll+15’ 1350 Cm_1* UV:>, 1^aHC03 275 nm (£ 13100) maics · NMR^D20+K2C03 3,35 (1 H, d, 18 Hz, 2-H).

ppm 3,86 (1 H, d, 17 Hz, 2-H), U,80 (1 H, d-d, U & 2 Hz, 6-H), 5,2U (l H, d, h Hz, 7-H), 7,1-8,6 (3 H, m, pyridatsiini-H).

Anal, laskettu yhdisteelle C^H^NgO^Sg.HgO: U0,83; H, 3,69; N, 21,96; S, 16,78.

Löydetty: C, Ui,15; H, 3,2U; N, 20,37; S, 17,90.

Esimerkki 1

C^O00”11 I ~ -f N — N

-‘H Y^~~CHg—S-<^ y~ OH

co2h 6a r-m 2-t-butoksikarbonyyliaminometyyli-l-sykloheksenyyli)-asetamido.7-3- (6-hydroksipyridatsiini-3-yylitiometyyli)-3-kefeemi-U-karbonihappo (5a)

Seosta, jossa on yhdistettä 2 (l,08 g, U millimoolia), 2,U-dinitrofenolia (0,7U g, U millimoolia) ja DCC:tä (0,82 g, U millimoolia) THF:ssä (20 ml) sekoitetaan 1 tunti huoneenlämpötilassa ja suodatetaan saostuneen disykloheksyyliurean poistamiseksi, joka pestään THF:llä (10 ml). Yhdistetyt suodos ja pesunesteet jäähdytetään 5°C:seen ja kaadetaan yhdellä kertaa kylmään liuokseen, jossa on 7-amino-3-(6-hydroksipyridat siini-3-yylitiometyyli)-3-kefeemi-L-karbonihappoa (1,02 g, 3 millimoolia) ja trietyyliamiinia (0,8 g, 8 millimoolia) 50 %:sess& vesipitoisessa THF:ssä (20 ml). Seosta sekoitetaan yli yön huoneenlämpötilassa ja pestään eetterillä (2 x 50 ml). Vesikerros tehdään happameksi pH-arvoon 2 33 €0019 laimealla HCltllä, jolloin saostuu raaka 5a, joka liuotetaan THF:ään (100 ml) ja suodatetaan liukenemattoman aineen poistamiseksi. Suodosta käsitellään pienellä määrällä hiiltä ja kuivataan vedettömällä natriumsulfaatilla. Haihduttamalla liuotin pois vähennetyssä paineessa saadaan yhdiste 5a öljymäisenä jäännöksenä, joka jähmettyy sekoitettaessa eetteriin (100 ml). Saanto 0,81 g (kf %).

Sp. l85-195°C (hajoaa).

TO: \( 3250, 1780, l66o, 1580, 1530, 1370, 1250, ll6o cm'1.

^^ppm^6 1,10 (9H, s, 5-Bu-H), 5,13 (1H, d,,lEz, 6-H), 5,70 (1H, d-d, 1 ja 8 Hz, 7-H), 6,88 (1H, d, 10 Hz, pyridatsiini-H), 7,15 (1H, d, 10 Hz, pyridatsiini-H), 9,0 (1H, d, 8 Hz, C0NH), 13,2 (1H, br-s, -OH).

Anal, laskettu yhiisteelle Cggl^NjO Sg.1/2 H20: C, 51,98; H, 5,70; N, 11,65; S, 10,67.

Löydetty: C, 51,53; 51,56; H, 5,63, 5,80; N, 11,28, 11,31; S, 11,18, 11,31. 7~/öfc-( 2-aminometyyli-l-sykloheksenyyli)asetamido7-3-(6-hydroksipyridat-siini-3-yylitiometyyli)-3-kefeemi-k-karbonibappo (6a)

Trifluorietikkahappoon (1,5 ml) lisätään yhdiste 5a (0,80 g, 1,1 milli-moolia) ja seosta sekoitetaan 30 minuuttia huoneenlämpötilassa ja laimennetaan eetterillä (50 ml) yhdisteen 6a trifluoriasetaatin saostamiseksi, joka otetaan talteen suodattamalla ja lietetään veteen (2 ml). Seos säädetään pH-arvoon 6 ammoniumhydroksidilla ja laimennetaan asetonitriilillä (200 ml) yhdisteen 6a saostamiseksi. Saanto 0,61 g (93 %). Sp. 200-208°C (hajoaa).

TO: Ϋ nuj°1:L 1780, l680 - 1610, 1580 cm'1.

' maks.

UV: Λ 1,?2C°3 255 nm (E , lllOO).

lDAiCS #

Anal, laskettu yhdisteelle C21H25N5°5S?‘ 3 1/2 HgO; C, 15,18; H, 5,82; N, 12,63; S, 11,56.

Löydetty: C, 1*5.73, ^5,83; H, 1,50, 1,17; N, 12,15, 12,59; S 11,83, 12,06.

Esimerkki 2 kJO!0"H' Ί r\ CH;'s /==-* 6b co2h 3** 6001 9 7(2-t-butoksik&rbonyyliaminometyyli~1-3ykloheksenyyli)-asetanidq?- 3~ (pyridatsino^g,3-d7tetratsoli-6-yylitionetyyli)-3-kefeerai-k-karbonihappo (3b)

Seosta, jossa on yhdistettä 2 (1,08 g, U millimoolia), 2 ,U-dinitrofenolia (0,7** e» ** millimoolia) ja DCC (0,82 g, 1+ millimoolia) THFrssä (20 ml), sekoitetaan 1 tunti huoneenlämpötilassa ja suodatetaan disykloheksyyliurean poistamiseksi, joka pestään THF:llä (10 ml). Yhdistetyt suodos ja pesunesteet jäähdytetään 5°C:seen ja kaadetaan liuokseen, jossa on 7-amino-3'(pyridatsino^2,3*^tetratsoli-6-yylitionetyyli)-3-kefeemi-*i-karbonihappoa (**b) (1,08 g, 3 millimoolia) ja trietyy-liamiinia (0,81 g, 8 millimoolia) 50 £:sessa vesipitoisessa THF:ss“. (20 ml) 5°C:sr«. Seosta sekoitetaan yli yön huoneenlämpötilassa ja pestään eetterin.! (2 x 50 ml). Vesikerros tehdään happameksi pH-arvoon 2 laimealla HClrllä ja uutetaan etyyliasetaatilla (3 x 50 ml). Yhdistetyt uutteet pestään vedellä (50 ml), käsitellään hiilellä ja kuivetaan vedettömällä Na SO^illä. Poistettaessa liuotin vähennetyssä paineessa saadaan yhdiste 5t> öljynä, joka tulee kiinteäksi sekoitettaessa eetterin (50 nl) kanssa. Tuote otetaan talteen suodattamalla, pestään eetterillä ja kuivataan. Saanto 0,9** g (51 %) · Sp. 125"13**°C (hajoaa).

IR:/lCBJ 1780, 1680, 1520, 1370, 1250, ll60 cm"1.

IjIcuvS

ιίί©:Χ0Μδ0"ά6 1,1*0 (9H, s, t-Bu-H), 1*,23 (1H, d, li* Hz, 3-CH.S), U,70 ^ ppm 2 (lii, d, 15 Hz, 3-CH2S), 5,15 (1H, d, 1* Hz, 6-H), 5,78 (1H, d-d, 1* ja 8 Hz, 7“H), 7,38 (1H, d, 10 Hz, pyridatsiini-H), 8,75 (1H, d, 10 Hz, pyridatsiini-H), 9,0 (1H, d, 8 Hz, 7-COfTK).

Anal, laskettu yhdisteelle C26H32iI8°6S2: C* 5°,6**; H, 5,23; 2, 10,1*0.

Löydetty: C, 50,36, 50,1*2; H, 5,11, 5,21; S, 9,60.

7~ £6 (2-aminometyyli-l- sykloheksenyyli )asetamido7~ 3~ (pyridatsino/2,3-^- tetrat3oli-6-yylitiometyyli)-3-kefeemi-l*-karbonihappo (6h)

Tri fluorietikkahappoon (1,5 ml) lisätään yhdiste 5b (0,90 g, 1,5 raillimoo-lia) 0°C:ssa ja seosta sekoitetaan 30 minuuttia huoneenlämpötilassa. Seos laimennetaan eetterillä (50 ml) trifluoriasetaatin saostamiseks: , joka otetaan talteen suodattamalla ja suspensoidaan veteen (2 ml). Suspensio säädetään pH-arvoon 6 ammoniumhydroksidilla ja laimennetaan asetonitriilillä (200 ml) yhdisteen 6b saos-tainieeksi, joka otetaan talteen suodattamalla ja kuivataan. Saanto 0,65 g (Ö3 l).

Sp. 18U-188°C (hajoaa).

IR: / nujoli 1T8o, 1620, 1570 cm"1, maks.

UV:2l*5 nm * £* 18500), 255 nm (sh) maks (£, I63OO), 275 nm (sh) (£ , 10700), 315 nm (sh) ( £ , 1+700).

35 6001 9

Anal, laskettu yhdisteelle Cg^H^NgO^Sg.l/211^0: C, U7.99; K, U,79; N, 21,32; S, 12,20. Löydetty: C, U8,21, 1+7,90; H, U,6l, 1+ ,67; N, 20,68; 20,63; S, 11,1+7.

Esimerkki 3 c 0 ‘ 1 £C C02H CH^ 7~ (2- /Th- t-butoksikarbonyy li amino) metyyli-1- sykloheksenyy li -1- yyljX Me t ami - do)~3~ (l~metyylitetratsoli-3-yylitiometyyli)-3-kefeemi-l+-karboniharlno (5c)

Seosta, jossa on yhdistettä 2 (1,30 g, U,8 millimoolia), 2,l+-dinitrofenolia (0,88 g, 1*,8 millimoolia) ja DCC (0,99 g> U,8 millimoolia) THF:ssä (20 ml), sekoitetaan 1 tunti huoneenlämpötilassa ja suodatetaan disykloheksyyliurean poistamiseksi, joka pestään THF:llä (5 ml). Yhdistetyt suodos ja pesunesteet kaadetaan kylmään liuokseen, jossa on 7"amino-3-l-metyylitetratsoli-5'yylitiometyyli)-3-kefeemi-l+-karbonihappoa (Uc) (l,31 g, 1+ millimoolia) ja trietyyliamiinia (1,01 g, 10 millimoolia) 50 $:sessa vesipitoisessa THF:ssä 5°C:ssa. Seosta sekoitetaan yli yön huoneenlämpötilassa, haihdutetaan vähennetyssä paineessa alle U0°C ja pestään eetterillä (3 x 30 ml). Vesikerros tehdään happameksi pH-arvoon 2 laimealla HCl:llä ja uutetaan etyyliasetaatilla (1+ x 500 ml). Yhdistetyt uutteet käsitellään hiilellä ja kuivataan. Poistettaessa liuotin vähennetyssä paineessa alle Uo°C saadaan yhdiste öljynä, joka tulee kiinteäksi sekoitettaessa eetterin (100 ml) kanssa. Saanto 1,33 g· Sp. lU6-159°C (hajoaa).

IpVnujoii 178o> 1700 (sh)> l68o^ 1520> 12k0t 1155 cm“l< m 8X8 · ^ NMR:^DMS0_d6 1,U2 (9H, s, t-butyl-H), 1,5 - 1,7 (UH, m, alifaattinen ppm metyleeni-H), 1,8 - 3,3 (UH, m, allyylinen mety.’Leeni-H), U ,12 (3H, s, N-CH^), 5,15 (1H, d, 5 Hz, 6-H), 5,80 (1H, d-d 5 ja 8 H:, 7"H), 6,85 (lH, br-s, NHB0C), 9,00 (1H, d, 8 Hz, C0NH).

Anal, laskettu yhdisteelle ^ UH 33^7^6¾: C, U9,73; H, 5,7U; N, 16,91» S, 11,06.

Löydetty: C, U9.U6, U9,U6; H, 5,53, 5,62; N, 16,00, 15,97; S, 11,01.

• 36 6001 9 7-/(2- aiainometyyli-1-sykloheksenyyli)asetaaidg?-3~ (tetratsoli- 5-yylitiome-^ tyyli)-3-kefeemi-4-karbonihappo (6c)

Trifluorietikkahappoon (2 ml) lisätään yhdiste 5c (1,30 g, 2 ,h millimoolia) ja seosta sekoitetaan 30 minuuttia huoneenlämpötilassa. Seos laimennetaan eetterillä (50 tai) yhdisteen 6c trifluoriasetaatin aaostamiseksi, joka suspensoidaan veteen (2 ml) ja suspensio säädetään pH-arvoon 6 ammoniumhydroksidilla ja laimennetaan asetonitriilillä (200 ml) yhdisteen 6c saostemiseksi, joka pestään asetonitriilillä ja kuivataan. Saanto 0,80 g (69 /»)· Sp. 19l*-207°C (hajoaa).

IR:^ maks^ iTTO, 1630, 1590, 1370 cm"1. · UV: 711¾°°3 270 nm (f , lOOOO).

TTISLiCS a ^

Anal, laskettu yhdisteelle C^H^N^O^Sg.HgO: C, *+5,86; H, 5,^7» .i, 19,70; 3, 12,89.

Löydetty: C, 1*5.09, ^6,18; H, 5,26, 5,28; N, 19,71*, 19,82; S, 12,1*9.

Esimerkki h

|—I

COgH

M

/ 7-1^ (2- t-butoks ikarbonyyli aminometyyli-1- sykloheksenyyli)- asetamido")- 3-(5-me tyyli-1,3,1*- tiadiatsoli-2-yylitiometyyli)- 3~kefeemi -U-karbonihappo _(5d)

Seosta, jossa on yhdistettä 2 (1,08 g, ä millimoolia), 2,l*-dinitrofenolia (0,71* g, 1* millimoolia) ja DCC (0,82 g, 1* millimoolia) THFrssä (20 ml), sekoitetaan 1 tunti huoneenlämpötilassa ja suodatetaan disykloheksyyliurean poistamiseksi, joka pestään ThF:llä (10 ml). Yhdistetyt suodos ja pesunesteet jäähdytetään 5°C:seen ja kaadetaan liuokseen, jossa on 7-amino-3-(5-inetyyli-l ,3,U-tiadiatsoli-2-yylitio-taetyyli )- 3-kefeemi-1*-karbonihappoa (kd) (1,9^ g, 3 millimoolia) ja trietyyliaxniinia (0,81 g, 8 millimoolia) 50 ?S:sessa vesipitoisessa THF:ssä (20 ml). Seosta sekoite- 37 6001 9 taan yli yön huoneenlämpötilassa ja pestään eetterillä (2 x 50 ml). Vesikerros tehdään happameksi pH-arvoon 2 laimealla HClrllä ja uutetaan etyyliasetaatilla (3 x 50 ml). Yhdistetyt uutteet pestään vedellä (50 ml), käsitellään hiilellä ja kuivataan Ha SO^llä ja haihdutetaan vähennetyssä paineessa, jolloin saadaan öljy, joka tulee kiinteäksi sekoitettaessa eetteri/n-heks äänin kanssa (1:1, 100 ml). Tuote otetaan talteen suodattamalla, pestään n-heksaanilla (50 ml) ja kuivataan. Saanto 1,29 C (72 %). Sp. 95"102°C (hajoaa).

IR:'/^011 1780, 1680, 1520, 12^5, ll60 cm"1.

1 naics.

:«·«: JDx430'd6 1,30 (9H, s, t-Bu-H), 2,58 (3H, s, CH_), U,03 (1H, d, lh y?..

ppm 3 3-CH23), 1,38 (1H, d, lit Hz, 3"CH2S), 1+,88 (1H, d, 1» HZ, 6-H) , 5.U6 (1H, d-d, u ja 8 Hz, 7-H), 8,5U (1H, d, 8 Hz, C0HH).

Anal, laskettu yhdisteelle c» 50,1+0; H, 5,58; H, 11,76.

Löydetty: C, 50,76, 50,98; H, 5,67, 5,67; N, 11,27, 11,28.

7~^r (2-aminometyyli-l-sykloheksenyyli)a8etamido7~3~ (5~metyyli-l ,3 >1*- tiadiat3oli-2-yylitiometyyli)-3~kefeemi-lt-karbonihappo (6d) Trifluorietikkahappoon (2 ml) lisätään yhdiste 5d (1,20 g, 2 millimoolia) ja seosta sekoitetaan 30 minuuttia huoneenlämpötilassa. Seos laimennetaan eetterillä (50 ml) trifluoriasetaatin 6d saostamiseksi , joka suspensoidaen veteen (2 ml). Suspensio säädetään pH-arvoon 6 ammoniumhydroksidilla ja laimennetaan asetonitriilillä (200 ml) yhdisteen 6d saostamiseksi. Saanto 0,75 E (76 %).

Sp. 215-220°C (hajoaa).

:R;1τ6°·161“>· 1580 UV- 276 nm (l, 13U00).

' maks.

Anal, laskettu yhdisteelle C^Hg^N^O^S^· 1/2H20: C, 1+7,60; H, 5,19; H, 13,87; S, 19,06.

Löydetty: C, 1+7.H+, **7,23; H, 1+,96, 5,07; N, 13,61, 13,70; 3, 18,66.

38 6001 9

Esimerkki 5

OH

OCln-L ,rä

W2H

&L

7- /C&- (2- t-butoksikarbonyyliaminometyyli-l- sykloheksenyyli)- asetamidq7-3- (3-hydroksipyriäat3ino/3>2- q7-3-triat3oli-6-yylitiometyyli)-3-kefeemi-U- kerbonihappo (5e) .

Seosta, jossa on yhdistettä 2 (1,08 g, U millimoolia), 2 ,U-dinitrofenolia (0,7¾ g, k millimoolia) ja DCC (0,82 6, 1» millimoolia) THF:ssä (20 ml), sekoitetaan 1 tunti huoneenlämpötilassa ja suodatetaan disykloheksyyliurean poistamisek- . si, joka pestään THF:llä (10 ml). Yhdistetyt suodos ja pesunesteet jäähdytetään 5°C:seen ja kaadetaan kylmään (5°C) liuokseen, jossa on 7_amino-3-(3"hydroksi-pyridatsino^5,2“ cJ-s-triatsoli-6-yylitiometyyli)-3-kefeemi-U-karbonihappoa (1,1¾ g, 3 millimoolia) ja trietyyliamiinia (0,8l g, 8 millimoolia) 50 2:sessa vesipitoisessa THF:ssä (20 ml). Seosta sekoitetaan yli yön huoneenlämpötilassa ja pestään eetterillä (2 x 50 ml). Vesikerroe tehdään happameksi pH-arvoon 2 laimealla HCl:llä. Sakka liuotetaan 50°C:ssa THF:ään (100 ml), käsitellään hiilellä ja kuivataan vedettömällä Ha^SO^:llä. Poistettaessa liuotin vähennetyssä paineessa saadaan yhdiste öljy, joka tulee kiinteäksi sekoitettaessa eetterin (50 ml) kanssa, jolloin saadaan tuote 5e. Saanto 0,85 g ^5 %) ♦ Sp. 190·· 198°C (hajoaa).

IR: ^maks 178°* 17°°’ 152°* 135°* 125°* 1160 Cra1' :iMR:jCDM3°‘d6 1,U0 (9H, s, t-Bu-H), 5,20 (lH, d, ppm U Hz, β-Η), 5,80 (1H, m, 7“H), 7,10 (1H, d, 10 Hz, pyridatsiini-H), 7,80 (1H, d, 10 Hz, pyridatsiini-H).

Anal, laskettu yhdisteelle Cg^H^ Sg*1/2^0: C, 50,6l; H, 5,35; S, 10,01.

Löydetty: C, 50,59, 50,68; H, 5^0, 5,59; S, 9,51, 9,55.

T- fJk (2- aminometyyli- 1-sykloheksenyyli)a3etamido^’~ 3~ (3-hydroksipyridetsino- {3,2-c7-3~triatsoli-6-yylitiometyyli)-3-kefeemi-U-karbonihappo (6e)

Trifluorietikkahappoon (2 ml) lisätään yhdiste 5e (0,8l g, 1,3 millimoolia) ja seosta sekoitetaan 30 minuuttia huoneenlämpötilassa. Seos laimennetaan eetterillä (50 ml) trifluoriasetaatin saostamiseksi, joka suspensoidaan veteen (2 ml).

6001 9 39

Suspensio säädetään pH-arvoon 6 amnoniumhydroksidillä ja laimennetaan asetonit-riilillä (200 ml) yhdisteen 6e saostamiseksi. Saanto 0,57 S (82 %). Sp. 225-23U°q (hajoaa).

IR:*/nUi011 1770, 1710, 1630, 15^5 cm'1.

« πΐΰΧδ ♦ IV:^-näC°3 260 n*1 (£» 18100), 305 nm (sh) (£., 6300).

Anal, laskettu yhdisteelle α22Η25Ιί7°5δ2*3H2°: C’ **5’12’ H, 5,3^; ίί, lö,7U; 3, 10,9¾.

Löydetty: C, 1*5,28, U5,UU; H, U,35» Möi N, 16,56, 16,66; 3, 11,75.

Esimerkki 6 CHpNHr» ex ^ cO-N-p-f^ "I N-N ·.

& ^11 \J

7- /fe-N-t-butoksikarbonyyliaminometyyli-1-sykloheksenyyli)-asetamidg)-3- (pyri do/2,1- <^-s-triatsoli-3~yylitiometyyli)- 3~ke feemi-^-karbonihappo (5f) DCC (7I+0 mg, 3,6 millimoolia) lisätään liuokseen, jossa on 950 mg (3,3 milli-moolia) (t-butoksikarbonyyliaminometyyli)-l-sykloheksenyylj}etikkahappoa (2) ja 660 mg (3,6 millimoolia) 2,l+-dinitrofenclie 30 ml:ssa THF:ää, ja seosta sekoitetaan 1 tunti huoneen lämpötilassa ja urea suodatetaan pois. Suodokseen lisätään liuos, jossa on 1,1 g (3 millimoolia) 7-amino-3-(pyriäo^2,l-c7-s-triatsoli-3-yylitioraetyyli)-3_yylitiometyyli)-3"kefeemi-U-karbonihappoa (bf) ja 1,25 ml (9 millimoolia) trietyyliamiinia 30 ml:ssa vettä, ja 3eosta sekoitetaan 18 tuntia huoneenlämpötilassa. THF poistetaan vähennetyssä paineessa alle U0°C ja jäännös pestään eetterillä (2 x 10 ml), tehdään happameksi 6n HOlrllä ja uutetaan etyyliasetaatilla (5 x 10 ml). Yhdistetyt uutteet pestään vedellä (2 x 10 ml) ja kyllästetyllä liaCl-liuoksella (10 ml) ja haihdutetaan kuiviin alle k0°C. Sekoitettaessa jäännös eetterin kanssa saadaan noin 1,2 g kiinteätä yhdistettä 5f.

uo 6 001 9 7-/T2- aminometyyli-1-sykloheksenyylOasetamid^/- 3~ (pyrido{2. ,1- c^-s-triatsoli- 3-yylitiometyyli)-3~kefeemi-U-kerbonihappo (6f)

Tri fluorietikkahappo (2,5 ml) lisätään B0C-suojattuun kefalosporiiniin 5f (1,1 e, l,o millimoolia) sanalla sekoittaen 1,5 tunnin aikana ja jäähdyttäen ja seos laimennetaan 100 ml:lla eetteriä yhdisteen 6f trifluoriasetaatin erottamiseksi, joka liuotetaan 5 ml:aan vettä, säädetään pH-arvoon 6 väkevällä NK^0H:lla ja laimennetaan 100 ml:11a asetonitriiliä. Saatu keltainen sakka otetaan talteen suodattamalla ja pestään asetonitriilillä, jolloin saadaan noin 700 mg (76 %) kiinteätä yhdistettä 6f.

Esimerkki 7 CH2NH2

O

** o 7~ £(2-N~t-butoksikarhonyyliaminometyyli-1-sykloheksenyyli)-asetemido?-3~ pyridatsino^2,1-g^-s-triatsoli-3-yylitiometyyli)-3~kefeemi-U-karbonihappo (5ε)

Liuokseen, jossa on o(-^-(t-butoksikarbonyyliaminometyyli)-l-syklohekse-nyyli^etikkahappoa (2) (1,07 g» U millimoolia) ja 2,U-dinitrofenoli a (0,7^ g, 1+ millimoolia) kuivassa THF:ssä (10 ml), lisätään DCCrtä (0,82 g, 1+ millimoolia) ja seosta sekoitetaan 1 tunti huoneenlämpötilassa urean saostamiseksi, joka poistetaan suodattamalla. Suodokseen lisätään yhdellä kertaa kylmä liuos, jossa on 7-amino-3-pyridatsino^f ,1-c7-s-triatsoli-3-yylitiometyyli)-3"kefeemi-U-karboni-happoa (Ug) (1,09 g> 3 millimoolia) ja trietyyliamiinia (0,8l g, 8 millimoolia) 50 #:sess8 vesipitoisessa THF:seä (20 ml), ja seosta seksitetaan 20 tuntia huoneen lämpötilassa. Reaktioseos pestään eetterillä (2 x 50 ml), tehdään happameksi pH-arvoon 2 laimealla kloorivetyhapolla ja uutetaan etyyliasetaatilla (6 x 50 ml). Yhdistetyt uutteet pestään vedellä (2 x 30 ml), käsitellään hiilellä ja kuivataan * 60019 vedettömällä natriunusulfaatilla. Haihdutettaessa liuotin vähennetyssä paineessa seadaan öljymäinen jäännös, joka jähmettyy sekoitettaessa eetterin (50 ml) kanssa, jolloin saadaan noin 0,6 g kiinteätä yhdistettä 5g.

7~(2-aminometyyli-l-sykloheksenyyliasetaaido)-3~(pyridatsino^,1-c^-s-triat-soli-3~yylitiometyyli)-3~kefeemi-U-karbonihappo (6g)

Seosta, jossa on yhdistettä 5g (0,53 g, 0,86 millimoolia) trifluorietikka-hapossa (l ml), sekoitetaan 1 tunti 0-5°C:ssa ja laimennetaan eetterillä (30 ml) yhdisteen 6g trifluoriasetaatin saostamiseksi, joka otetaan talteen suodattamalla ja liuotetaan veteen (H ml). Liuos säädetään pH-ervoon 6 ammoniumhydroksidilla ja laimennetaan asetonitriilillä (100 ml) yhdisteen 6g saostamiseksi, joka otetaan talteen suodattamalla, pestään asetonitriilillä (30 ml) ja kuivataan tyhjössä P20_:llä, jolloin saadaan 0,3 g kiinteätä yhdistettä 6g.

Esimerkki 8 OU1H0 CT »_ Ναι2σοΜ^γ ^ Jf |j

6i ^ NNy^L“CH2"S'*CV. /CH

COOH S

7~ZTP~tert.-butoksikarbonyyliaminometyyli-l-sykloheksenyyli)-asetamido7-3-(1,3»^~tiadiatsoli-2-merkaptometyyli)-3~kefeemi-h-karbonihappo (5i) Sekoitettuun liuokseen, jossa on 1,10 g (0,00^1 moolia) yhdistettä 2 ja 0,80 g (0,00hä moolia) 2,U-dinitrofenolia kO ml:ssa etyyliasetaattia, lisätään yhdellä kertaa. 0,90 g (0,00UU moolia) N,Ν'-disykloheksyylikarbodi-imidia ja seosta . . o .

sekoitetaan 3 tuntia 25 C:ssa. Disyklohekeyyliurea otetaan talteen ja suodos haihdutetaan U5°C:ssa (15 no) aktivoidun esterin saamiseksi öljynä. Öljy liuotetaan 30 ml:aan THF. Aktivoidun esterin liuokseen lisätään liuos, jossa on 1,22 g (0,0037 moolia) 7-amino-3“'(l»3,ä_tiadietsoli-2-:iierkaptoaetyyli )-3"kefeemi-h-karbonihappoa ja 1,03 nl (0,007^ moolia) trietyyliamiinia 20 mlrssa 50 ?:sta THF-vettä, ja sekoitetaan 18 tuntia 25°C:ssa. TIIF poistetaan U0°C:ssa (15 mm) ja h2 6001 9 väkevöite (10 ml) pestään eetterillä (5 x 100 ml) ja tehdään happameksi pH-arvoon 2 1»0 #:lla fosförihapolla. Seos uutetaan etyyliasetaatilla (6 x 100 ml) ja yhdistetyt uutteet pestään vedellä ja lopuksi kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella. Etyyliasetaattiliuos haihdutetaan U0°C:ssa (15 mm) tilavuuteen 20 ml ja laimennetaan 30 ml:11a Skellysolve 3:tä kiinteän tuotteen 5i saostamiseksi, joka otetsan talteen ja kuivataan 16 tuntia tyhjössä Pirilä 25°C:ssa, jolloin tuotetta saadaan noin 1,U g.

Τίβΐ - aminome tyyli-1- syklohek3enyy li) ase t ami dQ?*- 3~ (1 , 3 »V ti adi at s oli- 2-merkaptometyyli)-3~ kefeemi-U-ka rbonihappo (6i)

Liuosta, jossa on 1,30 g (0,00226 moolia) yhdistettä 5i ja 3,0 ml trifluo-rietikkahappoa, sekoitetaan 1 tunti 0°C:ssa. Liuos laimennetaan 200 ml:11a eetteriä ja 3akka otetaan talteen suodattamalla. Trifluoriasetaattisuola suspensoidaan U0 ml:aan vettä ja säädetään pH-ervoon 6,0 laimealla ammoniumhydroksidilla. Hartsimaista jäännöstä sekoitetaan 25 ml:n kanssa asetonitriiliä, jolloin saadeen noin 350 mg yhdistettä 6i valkoisena jauheena. Tuote kuivataan 16 tuntia tyhjössä Pj,0 :11a 25°C:ssa.

Esimerkki 9

OC

CHgCOiTir-j—t"''* 'S N-— jj

q// ^C-CHg0H

C00H S

7~/i2-aminometyyli-l-sykloheksenyyli)asetamido7~3~ (5_hydroksimetyyli-l,3,1*-tiadiatsoli-2-merkaptometyyli)-3~kefeemi-h-karborihappo (6j)

Seurataan esimerkin 8 mukaista menetelmää paitsi että tuote 6j otetaan talteen vedestä, jolloin saadaan noin 3^0 mg ruskeata juuhetta. Toinen fraktio saadaan suodoksesta, jolloin saadaan noin 200 mg yhdistettä 6j keltaisena kiteisenä aineena.

ö 60019

Esimerkki 10 OG-q-^ JT" 0//U^-^2-s\n.n

. / H

COgH

6h 7- (2- t- but oks ikarbonyyli aminometyyli-1- sykloheks enyy li) - aset amido}- 3- 1H-1,2,3~triatsoli-U-yylitiometyyli)-3-kefeemi-U-karbonihappo (5h)

Seosta, jossa on yhdistettä 2 (1,08 g, U millimoolia), 2,U-dinitrofenolie (0,7U e. ^ millimoolia) ja DCC (0,82 g, U millimoolia) THPtssä (20 ml), sekoitetaan 1 tunti huoneenlämpötilassa ja suodatetaan disykloheksyyliurean poistamiseksi, joka pestään THFrllä (10 ml). Yhdistetyt suodos ja pesunesteet jäähdytetään 5°C:seen ja kaadetaan liuokseen, jossa on 7-amino-3-(lH-l,2,3-triatsoli-U-yyii-tiometyyli)-3-kefeemi-U-karbonihappoa (Uh) (l,2U g, U millimoolia) ja trietyyli-amiinia (0,8l g, 8 millimoolia) 50 #:sessa vesipitoisessa THF:ssä (20 ml). Seosta sekoitetaan yli yön huoneenlämpötilassa ja pestään eetterillä (2 x 50 ml). Veei-kerros tehdään happameksi pH-arvoon 2 laimealla HCl:llä ja uutetaan etyyliasetaatilla (3 x 50 ml). Yhdistetyt uutteet pestään vedellä (50 ml), käsitellään hiilellä ja kuivataan vedettömällä Na^SO^illä. Poistettaessa liuotin vähennetyssä paineessa saadaan öljy, joka tulee kiinteäksi sekoitettaessa eetteri/n-heksaenin kanssa (1:1, 100 ml), jolloin saadaan tuote 5h. Saanto 0,60 g (26 %). Sp. 120-128°C (hajoaa).

1780, 1720, 1680, 1520, 1250, ll60 cm"1.

NMR:^^0·^ 1,38 (9H, s, t-Bu-H), 5,08 (lH, d, U Hz, 6-H) , 5,65 (1H, d-d, U ja 8 Hz, 7*H), 8,00 (lH, s, triatsoli-H), 8,92 (1H, d, 8 Hz COllH).

Anal, laskettu yhdisteelle C2UH32N6°6S2 C» 5°»25i H, 5,80; N, lU,65; S, 11,18.

Löydetty: C, 50,51, 50,69; H, 5,73, 5,65; N, lU.57, 1U,25; S, 10,05, 10,16.

» 60019 ω 2-/¾(2-aminometyyli-1-syklohekaenyyli)asetami do)-3~(1H-1,2 ,3~trietsoli-h-yylitiometyyli)-3~k.efeemi-^-karboniheppo (6h)

Tri fluorietikkahappoon (l ml) lisätään yhdiste 5h (0,55 g> 0,98 millinoolia) ja seosta sekoitetaan 30 minuuttia huoneenlämpötilassa. Seos laimennetaan eetterillä (50 ml) trifluoriasetaatin saostamiseksi, joka otetaan talteen suodattamalla ja suspensoidaan veteen (2 ml). Suspensio säädetään pH-arvoon 6 ansionium-hydroksidilla ja laimennetaan asetonitriilillä (200 ml) yhdisteen 6h saostamiseksi, joka pestään asetonitriilillä. Saanto 0,36 g (80 %). Sp. 203-215°C (hajoaa).

IR:/nUi°1:L 1760, 1630, 1570 cm"1.

UV: ^1^K2C°3 266 nm ( (, 8000).

maks.

Anal, laskettu yhdisteelle C^H^^NgO^S^. 1 1/2 11^0: C, U6.U2; K, 5 .51*; N, 17,10; S, 13,0U.

Löydetty: C, 1»6,06, H6,l6; H, 5,13, 5,28; N, 18,06, 18,02; S, 12,37.

Esimerkki 11 7- {[ 2- 8J!uLnonetyyli-l-3ykloheksenyyli)asetamidg?-3~ (3-hydroksipyridatsiini- {3,2-9^-s-triatsoli-U-yylitiometyyli)-3-kefeemi-U-karbonih8pon salisyyli- aldehydi-addukti (7c)

HO

V)

~ >k^jk^C0NH-j—S-jJJ

J-iL ^^H2-S-kN/N

öo2K ch5

Sekoitettuun suspensioon, jossa on yhdistettä 6c (esimerkki 3, 766 mg, 1,6 millimoolia) ja trietyyliamiinia (300 mg, 3 millimoolia) metanolissa (8 ml), lisätään salisyylialdehydiä (370 mg, 3 millimoolia) ja seosta sekoitetaan 30 minuuttia huoneenlämpötilassa kirkkaan tummankeltaisen liuoksen saamiseksi. Liuosta käsitellään pienellä määrällä hiiltä ja KEH:ta (2 ml, kalium-2-etyyliheksanoaatin IM liuos etyyliasetaatissa) lisätään suodokseen. Seos laimennetaan suurella määrällä eetteriä (100 ml) kiinteän tuotteen 7c saostamiseksi, joka otetaan talteen suodattamalla, pestään eetterillä (30 ml) ja kuivataan. Saanto on noin 750 mg.

,s 6001 9 Ιί5

Esimerkki 12 7-/T2- aminometyyli-l-sykloheksenyyli )asetamid97-3* (5~rcetyyli-l,3,lt-tiadiat- soli-2-yylitiometyyli )-3-kefeemi-U-karbonihapon sali syy lialdehydi - a dduk t i

.(7d) .HO

64—> . . H—s y/U! J_Ch2-sJ^sJ-ch? , TS. C0aK ,

Sekoitettuun seokseen, jossa on yhdistettä 6d (esimerkki U., *778 mg, 1,6 mil-limoolia) ja trietyyliamiinia (300 mg, 3 millinoolia), lisätään salisyylialdehydiä (370 mg, 3 millinoolia) ja suspensiota sekoitetaan 15 minuuttia huoneen lämpötilassa kirkkaan tummankeltaisen liuoksen saamiseksi, jota käsitellään pienellä määrällä hiiltä. Suodokseen lisätään KEHrta (2 ml, IM liuos etyyliasetaatissa). Seos laimennetaan suurella määrällä eetteriä (100 ml) tuotteen 7d saostamiseksi, joka otetaan talteen suodattamalla, pestään eetterillä (30 ml) ja kuivataan. Saanto on noin 85Ο mg.

Esimerkki 13 7- ^(2- aminometyyli-l-sykloheksenyyli )asetamido?- 3- ( 3-hydroksipyridat3ino-,2- s-triat3oli-6-yylitiometyyli)-3-kefeemi-U-karbonihapon 3alisyyli- aldehydi-addukti (7c)

>=\ 0H

IS C02K

Sekoitettuun suspensioon, jossa oli yhdistettä 6e (esimerkki 5, 75U mg, 1,U2 raillimoolia) ja trietyyliamiinia (300 mg, 3 millimoolia) N,Ν-dimetyyliformami- 6001 9 dissa (7 nil), lisätään salisyyliaidehydia (370 mg, 3 millimooliö) ja suspensiota sekoitetaan 1 1/2 tuntia huoneenlämpötilassa kirkkaan tummankeltaisen liuoksen saamiseksi, jota käsitellään pienellä määrällä hiiltä. Suodokseen lisätään KEII:ta (1,5 ml, IM liuos etyyliasetaatissa). Seos laimennetaan suurella määrällä eetteriä (100 ral) tuotteen Te saostamiseksi, joka pestään eetterillä (30 ml) ja kuivataan. Saanto on noin 900 mg.

Esimerkki lU

Esimerkin 3 mukaisen yhdisteen kaliumsuola valmistetaan lisäämällä kalium-2-etyyliheksanoaatin (XEIl) liuos etyyliasetaatissa kefalosporiinin (amfoteerinen) liuokseen (6c) DMS0:ssa halutun kaliumsuolan saostamiseksi.

Esimerkki 15

Esimerkin 3 mukaisen yhdisteen natriumsuola valmistetaan muodostamalla ensinnä sen dietyyliammoniumsuola metanolissa ja sen jälkeen lisäämällä na.trium-2-etyyliheksanoaatin (SFH) liuos etyyliasetaatissa ja sitten laimentamalla isopro-panolilla halutun natriumsuolan saostamiseksi, jonka liukoisuus veteen on suurempi kuin 250 rag/ml.

Esimerkki 16 7~ ^~*( 2~ t- butoksikarbonyyliaminoraetyyli-l- sykloheksenyyli)- asetamido}- kefalosporaanihappo (5v) rr* j_A^LcH2"CC0CH5 o \

6w C°aH

Seosta, jossa on yhdistettä 2 (1,08 g, 1* millimoolia) , 2 ,U-dinitrofenolia (0,7*» g, U millimoolia) ja DCC (0,82 g, U millimoolia) THF:ssä (20 ml), sekoitetaan 1 tunti huoneenlämpötilassa ja suodatetaan disykloheksyyliurean poistamiseksi, joka pestään THF:llä (10 ml). Yhdistetyt suodos ja pesunesteet kaadetaan liuokseen, jossa on 7-ACA:ta (Uv) (0,8l g, 8 millimoolia) ja trietyyliamiinia (0,8l g, 8 millimoolia) 50 /»:sessa vesipitoisessa THF:seä (20 ml) 5°C:ssa. Seosta sekoitetaan yli yön huoneenlämpötilassa ja pestään eetterillä (2 x 50 ml). Vesikerros tehdään happameksi pH-arvoon 2 laimealla HCl:llä ja uutetaan etyyliasetaatilla (3 x 50 ml).

„ 60019

Yhdistetyt uutteet pestään vedellä (50 ml) ja kuivataan vedettömällä Na^SO^rllä. Poistettaessa liuotin vähennetyssä paineessa saadaan yhdiste 5W öljynä, joka tulee kiinteäksi sekoitettaessa eetteri/n-heksäänin kanssa (1:1, 100 ml), ja se pestään n-heksaanilla (50 ml). Saanto 1,2U g (79 %)· Sp. 100-110°C.

:R:/aujo11 1780, 1730 - l6U0, 1520, 1355, 1225 en*1, naks.

.7MR:£ DMS0"d6 1,23 (9H, s, t-Bu-H), 1,96 (3H, s, 3"0Ac), U,U8 ppin (1H, d, 13 Hz, 3-CH ), U,83 (1H, d, 13 Hz, 3-(¾), U,89 (li!, d, h Hz, 6-Ii), 5,U8 (1H, d-d, it ja 8 Hz, 7'H), 8,5 (1H, d, 8Hz, CONH).

Anal, laskettu yhdisteelle C^j^H^^N^OgS.l/P il^O: C, 5^,12; H, 6,1*3; N, 7,88; S, 6,02.

Löydetty: C, 5U,l6,5U,07; H, 6,19, 6,22; N, 8,36, 8.31*; S, 5,61, 5,79.

7-/¾(2-aminometyyli-l-sykloheksenyyli)asetamidq7-kefalosporaanihappo (6v)

Tri fluori etikkahappoon (2 ml) lisätään yhdiste 5v (1,20 g, 2,3 millimoo-lia) ja seosta sekoitetaan 30 minuuttia huoneenlämpötilassa. Seos laimennetaan eetterillä (50 ml) trifluoriasetaatin saostamiseksi, joka suspensoidaan veteen (2 ml). Seos säädetään pH-arvoon 6 ammoniumhydroksidilla ja laimennetaan aseto-nitriilillä (200 ml) yhdisteen 6w saostamiseksi. Saanto 0,68 g (69 %). Sp. 250-2Ö0°C (hajoaa).

IR:/nU^011 1800, 1735, 1625, 1570, 1230 cm'1, maks.

UV: 255 nm ( £, 7100).

make.

Anal, laskettu yhdisteelle C^H^^N^0^3.1/2 1^0: C, 52,76; H, 6,05; N, 9,71; S, 7,Ui.

Löydetty: C, 52,36, 52,15; H, 6,09» 6,Ob; N, 9,7U, 9,71, 3, 7,71, 7,81.

Liukoisuue oli 5»U (BA) ja 5,3 (UV).

is 6001 9

Esimerkki 17 aCH2NH2

CHgC O-H r...... S' SX

JCHg-S-^ ^-OH

CO H

7a

IzäkL 2-t -butoksikarbonyyliaminometyyli-l ,ti-sykloheksadienyyli) -a set amid oV -3 -(3 -hydro k s ipyr idat si in i -6 -yyl i t iomet yyl i) -3 -k e f e emi -h -karbonihappo (6a)

Sekoitettuun liuokseen, jossa on 1,1 g (H,l millimoolia) o(-/£-(t-butoksi-karbonyyliaminometyyli) -1, U -sykloheksadienyylxj-etikkahappoa (3) ja Ö00 mg (t,U millimoolia) 2,U-dinitrofenolia ho ml:ssa etyyliasetaattia, lisätään yhdellä kertaa 0,9 g (U,4 millimoolia) Ν,Ν-disykloheksyylikarbodi-imidiä (DCC).Reaktio-seosta sekoitetaan huone oilämpötilassa 3 tuntia. Eronnut disykloheksyyliurea suodatetaan pois. Suodos haihdutetaan kuiviin öljymäisen aktivoidun esterin saamiseksi, joka liuotetaan 30 ml:aan DHF. Liuokseen lisätään liuos, jossa on 1,26 g (3,7 mil-1imoolia) 7 -amino-3-(3-hydroksipyridatsi ini-6-yylitiometyyli)-3-k efeemi-U-karbon i- 6001 9

It9 happoa (5a) ja 1,03 ml (7,1* millimoolia) trietyyliamiinia 20 ml:ssa 50 *:sta THF. Seosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 18 tuntia ja väkevöidään tyhjössä tyhjössä tilavuuteen 10 ml. Väkevöite pestään viidesti 100 ml:n erillä eetteriä, tehdään happameksi 6lf kloorivetyhapolla ja uutetaan kuudesti 100 nl:n erillä etyyliasetaattia. Yhdistetyt uutteet pestään vedellä ja kyllästetyllä IfaCl-liuoksella. Kuivattu liuos väkevöidään kuiviin, jolloin saadaan 720 mg (33 %) il-B0C-suojattua kefalosporiinia 6a, sp. 170°C (hajoaa).

IR:^maks 1TÖ0, 171°’ l69°* l67°» 158°’ 152°’ 187°’ 1255> 1170 1,3¾ (9H, s, CH -C~l, 2,57 (UH, s, H2C^), 3,03 (2H, s, CHgCO), 3,1* - 3,7 (1+H, m, 2-H <k CH2-IJ), 3,9 - b,2 (2H, m, 3-CH2), U,98 (1H, d, U,5Hz, 6-H), h,9 - 5,2 (3H, m, & C-NK), 6,29 (1H, d, 9,5Hz, pyridatsiini-H), 7,23 (1H, d, 9,5Hz, pyridatsiini-H), 8,77 (1H, d, 7,5Hz, C0NH).

Anal, laskettu yhdisteelle C26H3i:i'-°7S2*H2°: C> 51,56; II, 5,16; If, 11,56; S, 10,59.

Löydetty: C, 51,*»3i H, 5,13; N, 11,66; S, 10,79.

7-^¾(2~ aminometyyli-1,U-sykloheksadienyyli)aaetamidg?-3"(3-hydroksipyridat-siini-6-yylitiometyyli)-3~kefeemi-U-karbonihappo (7a) (Λ) Liuosta, jossa on 670 mg (1,13 millimoolia) BOC-suojattua kefalosporiinia 6a 1,5 ml:ssa trifluorietikkahappoa, sekoitetaan 0°C:ssa 1 tunti. Liuokseen lisätään 100 ml kuivaa eetteriä. Saatu sakka otetaan talteen suodattamalla, sus-pensoidaan 20 ml:aan vettä ja säädetään pH-arvoon 6 laimealla ammoniumhydroksidil-la viskoosisen öljyn saamiseksi, joka sekoitetaan asetonitriilin kanssa, jolloin saadaan 3δθ mg (75,5 %) haluttua tuotetta 7**» 9P« 200-205°C (hajoaa).

IR: 1765, 161*0, 1580, 1390, 1350 cm'1, make·

Anal, laskettu yhdisteelle C2iH23Ii5°5S2’1^2H20: C’ 50,59; H, M5; H, li»,05.

Löydetty: C, 50,95; H, U,79; N, 13,10.

(B) Sekoitettuun suspensioon, jossa on 1,1 g (3,6 millimoolia) natriuur-(2-?N- (1-karbetoksipropeeni-2-yyli)aminometyyli?-1 ,U- sykloheksadienyyli) asetaattia (1») 20 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania (TIIF), joka sisältää pisaran ΓΙ,Ν-dimetyy-libentsyyliamiinia, lisätään 0,38 ml (3,95 millimoolia) etyyliklooriformaattia 50 6001 9 -10 - -5 C:s3a. Seka-anhydndiliuokseen lisätään yhdellä kertaa liuos, jossa on 1,02 g (3 millimoolia) 7”^*^(2-aminometyyli-l,U-sykloheksadienyyli)asetamido7-3-(3-hydroksipyridatsiini-6-yylitiometyyli)-3-kefeerai-l+-karbonihappoa (5a) 10 ml:ssa 50 /£:sta vesipitoista THF, joka sisältää 0,1+2 ml (3 millimoolia) trietyyliamiinia. Seosta sekoitetaan 30 minuuttia huoneen lämpötilassa. Käsitellään aktiivihiilellä je suodatetaan. Suodokseen lisätään 3 ml muurahaishappoa ja seosta sekoitetaan 30 minuuttia huoneen lämpötilassa. Saatu sakka suodatetaan, pestään vedellä ja asetonitriilillä, jolloin saadaan 570 mg yhdistettä 7a.

Esimerkki l8 aCHgNHg

H * M

ch„co-Nt—f "i JM* | 0^VLcVs<==>^

COgH

TSL

7~ (β-~ (N- t-butoksikarbonyy liaminometyyli )-l ^-sykloheksadienyyl^aBetamido)- 3-(tetratBolo/i>5-b7pyridatsiini-6-yylitiometyyli)-3~kefeemi-l;-karbonihappo (6b)

Sekoitettuun liuokseen, jossa on 3,2 g (0,012 moolia) ck(2-(t-butoksikarbonyy liaminometyyli)-l.U-sykloheksadienyyli^-etikkahappoa (3) ja 0,3 g (0,0125 moolia) 2,U-dinitrofenolia 50 ml:ssa THF, lisätään 2,6 g (0,0125 moolia) DCC:tä ja seosta sekoitetaan 1,5 tuntia huoneenlämpötilassa. Saostunut urea poistetaan suodattamalla. Aktivoidun esterin liuokseen lisätään liuos, jossa on 3,65 g (0,01 moolia) 7-amino-3"(tetratsolo^i,5-b?*pyridateiini-6-yylitiometyyli-3-kefeemi-U-karbonihappoa (5b) ja 2,3 ml (0,02 moolia) trietyyliamiinia 100 ml:ssa vettä". Seosta sekoitetaan 18 tuntia huoneenlämpötilassa. Suurin osa THF:stä poistetaan vähennetyssä paineessa alle i*0°C ja jälelle jäänyt liuos pestään eetterillä (3 x 50 ml) ja tehdään happa-meksi 6.i HCl:llä ja uutetaan etyyliasetaatilla (8 x 100 ml). Yhdistetyt uutteet pestään vedellä (3 x 100 ml) ja kyllästetyllä NaCl-liuoksella (2 x 100 ml) ja haihdutetaan kuiviin. Öljymäinen jäännös sekoitetaan eetterin kanssa, jolloin saadaan 2,2 g (52 ;?) yhdistettä 6b, sp. l65°C (hajoaa).

51 6001 9 s IR: /nu-011 1770, 1710, 1670, 1510, 121*0, 1150 cm”1, naks«

Anal, laskettu yhdisteelle C26K30N8°622: 50,18; H, U,92; N, 18,23; S, 10,1*3.

Löydetty: C, 51,05; H, 5,97; N, 17.2U; S, 9,09.

7-/2-aminosetyyli-l,l*-syklohekBadienyyli )asetaaid$7- 3-(tetratsolo/i ,5-b7~ pyridatsiini-6-yylitioiretyyli)-3~kefeemi-l*-karbonihappo (7b)

Seosta, jossa on 3,1 g (5,05 millinoolia) yhdistettä 6b ja 6 nl trifluori-etikkehappoa, sekoitetaan 1 tunti samalla jäähdyttäen ja laimennetaan 200 ml:11a eetteriä trifluoriasetaatin 7b erottamiseksi, joka liuotetaan 5 ml:aan vettä, pH säädetään arvoon 6 väkevällä IiH^0H:lla ja laimennetaan 900 ml:lla asetonitrii-liä. Keltainen sakka otetaan talteen suodattamalla ja pestään asetonitriilillä, jolloin saadaan 2,3 g (88,5 %) yhdistettä 7b, sp. 210°C (hajoaa). Kiteytettäessä 2 g yhdistettä 7b 350 ml:sta 50 )5:sta ΪΗΡ saadaan 1,19 g vaaleankeltaisia neulasia, sp. 220-230°C (hajoaa).

IR: ^°U 1785. 161.0, 1610, 1570 cm'1.

^al. laskettu yhdisteelle 1/20^0: C, 50,17; 1, 76; ;j, 20,35; s, 11,61*.

löydetty: C, 50,17; H, 1*,56; N, 19,59; S, 11,30.

Esimerkki 19

Ο^α^ΟΟ-Ν-τ-γ3^ K—N

0 COgH (¾ Ζίϊ.

7* (^2~ (N-t-butoksikarbonyyliaminometyyli)-1 ,U- sykioheksadienyyli7~ asetamido)- 3- (l-oetyylitetratsolo-5~yylitiometyyli)-3l~kefeemi-U-karbonihappo (6c) .

Sekoitettuun liuokseen, jossa on 3,2 g (C,012 moolia) (t-butoksikarbo- nyylianinometyyli)-l,l*-sykloheksadienyyl}7-etikkaheppoa (3) ja 2,3 g (0,012 moolia) 2,1-dinitrofenolia 50 ml:ssa THF, lisätään 2,6 g (0,012 moolia) DCC:tä ja seosta sekoitetaan 1,5 tuntia huoneenlämpötilassa. Saostunut urea poistetaan suodattamal- 52 6001 9 la. Suodokseen lisätään liuos, jossa on 3,28 g (0,01 moolia) 7-8raino-3-(l-metyyli-tetratsolo-5_yylitiometyyli)-3-kefeemi-U-karbonihappoa (5c) ja 2,3 ml (0,02 moolia) trietyyliamiinia 100 ml:ssa vettä. Seosta sekoitetaan 18 tuntia huoneenlämpötilassa. Suurin osa THFistä poistetaan vähennetyssä paineessa, alle !*o°C ja jä-lelle jäänyt liuos pestään eetterillä (2 x 50 ml) ja tehdään happameksi 6N HCltllä ja uutetaan etyyliasetaatilla {h x 50 ml). Yhdistetyt uutteet pestään vedellä (2 x 50 ml) ja kyllästetyllä NaCl-liuoksella (2 x 50 ml) ja haihdutetaan kuiviin. Jljymäinen jäännös sekoitetaan eetterin (100 ml) kanssa, jolloin saadaan 2,3 g (1*3 %) yhdistettä 6c, sp. ll*5°C (hajoaa).

IR:/nUj011 1780, 1700, 1510, 12U0, 1150 cm'1.

TSlcLK S ·

Anal, laskettu yhdisteelle C^^H^N^OgS^: C, >+9,90; H, 5,1*1; J, 16,97; S, 11,10.

Löydetty: C, 50,23; H, 5,23; N, 15,80; S, 12,1*3.

7- /2- aminometyyli-l ,l*-syklohek8adienyyli )asetamidq7- 3~ (l-metyylitetratso- 5-yylitiometyyli )-3-kefeemi-l*-karbonihappo (7c).

Seosta, jossa on 2,2 g (3,8 millimoolia) yhdistettä 6c ja 5 ml trifluori-etikkahappoa, sekoitetaan 1 tunti samalle jäähdyttäen ja laimennetaan 200 ml :11a eetteriä trifluoriasetaatin 7c erottamiseksi, joka liuotetaan 5 ml:aan vettä, pH säädetään arvoon 6 väkevällä NH^OHrlla ja laimennetaan 200 ml:lla asetonitrii-liä. Keltainen sakka otetaan talteen suodattamalla ja pestään asetonitriilillä, jolloin saadaan 1,5 g (82 g (82,5 %) yhdistettä 7c, sp. 200°C (hajoaa). Kiteytettäessä 50 ,>:8ta lHF:stä saadaan vaaleankeltaisia neulasia, sp. 210°C (hajoaa).

IR:V^nUi011 1785, I6U0, I615, 1570 cm'1, rustics ·

Anal, laskettu yhdisteelle C, >*9,11; H, 5,30; d, 19,09; 3, 12,1*8.

Löydetty: C, >*9,85; II, 5,20; N, 18,53; S, 12,26.

! ' 6001 9 ! 53 ! • f i t

Esimerkki 20 j

° C02H

Zä.

7~(/2- (N-t-butoksikarbonyyliaminometyyli-ltU-sykloheksadienyyli)-asetamida?- 3~(5~metyyli-l,3,^-tiadiatsoli-2-yylitiometyyli)-3-keffeemi-ä-karbonihappo (6d)

Sekoitettuun liuokseen, jossa on 900 mg (3,3 millimoolia) (t_butok8*· karbonyyliaminometyyli)-1,1+-sykloheksadienyyli^-etikkahappoa (3) ja 66Ο mg (3,ό millimoolia) 2,1+-dinitrofenolia 1+0 ml:ssa THF, lisätään 7^0 mg (3*6 moolia) DCC:tä ja seosta sekoitetaan 2 tuntia huoneenlämpötilassa. Saostunut urea poistetaan suodattamalla. Suodokseen lisätään liuos, jossa on 1,03 g (3 millimoolia) 7-amino-3- (5~metyyli-l, 3,l*-tiadiatsoli-2-yylitiometyyli- 3-kefeemi-U-karbonihappoa (5d) ja 1,3 ml (9 millimoolia) trietyyliamiinia 30 ml:ssa vettä. Seosta sekoitetaan 18 tuntia huoneenlämpötilassa. THF poistetaan vähennetyssä paineessa alle 1+0 °C ja jälelle jäänyt liuos pestään eetterillä (3 x 10 ml) ja tehdään happamekai 6.1 HCl:llä ja uutetaan etyyliasetaatilla (5 x 10 ml). Yhdistetyt uutteet pestään vedellä (2 x 10 ml) ja kyllästetyllä NaCl-liuoksella (10 ml), haihdutetaan kuiviin ja sekoitetaan eetterin kanssa, jolloin saadaan 980 mg (55 %) yhdistettä 6d.

IR:/nUfo11 1770, 1710, 1660, 1610, 1510, 12fc0, 1150 cm"1.

IQoLKS ·

Anal, laskettu yhdisteelle C25H3iN506S3: c> 50,57; H, 5,26; N, 11,80.

Löydetty: C, 50,51; H, 5,20; N, 11,1+6.

7- aminome tyyli-1 ,*+- sykloheksadienyyli) asetamido^- 3- (5~ metyyli-1,3,1*- tiadi atsoli-2-yylitiometyyli)-3~ kefeemi-H-karboni happo (Jd) (A) Seosta, jossa on 9^0 mg (1,58 millimoolia) yhdistettä 6d ja 2 ml trifluorietikkahappoa, sekoitetaan 1 tunti samalla jäähdyttäen ja laimennetaan 100 ml:lla eetteriä trifluoriaeetaatin 7d erottamiseksi, joka liuotetaan 5 ml:aan vettä ja 5 ml:aan asetonitrilliä. pH säädetään arvoon 6 väkevällä NH^OH^la ja laimennetaan 100 ml:11a asetonitriiliä. Vaaleankeltainen sakka otetaan talteen suodattamalla ja pestään asetonitriilillä (5 ml), jolloin saadaan 600 mg (77,5 %) yhdistettä 7d, sp. 230-2l*0°C (hajoaa).

5, 6001 9 IR: V nujo11 1790, 1650, I58O ca"1.

maks.

Anal, laskettu yhdisteelle C^H^N^O^S^: C, U8,66; H, U,70; N, lU,19i S, 19,1*9.

Löydetty: C, U9.2U; H, U,59; B, 13,88; S, 20,16.

(B) Sekoitettuun suspensioon, jossa on 1,1 c (3,6 millimoolia) natrium-(2-$- (1- karbetoksipropeeni-2-yyli) aminonetyyli^-1,1*- sykloheksadienyyli) asetaattia (1*) 20 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania (THF), joka sisältää pisaran ΓΪ,ΙΙ-dimetyyli-bentsyyliajaiinia, lisätään 0,38 ml (3,95 millimoolia) etyyliklooriformaattia -10 - -15°C:ssa. Seka-anhydridiliuokseen lisätään yhdellä kertaa liuosta, jossa on 1,03 G (3 millimoolia) yhdistettä 5d 10 ml:ssa 50 %:ata vesipitoista THF, joka sisältää 0,U2 ml (3 millimoolia) trietyyliamiinia. Seosta sekoitetaan 30 minuuttia huoneen lämpötilassa. Seokseen lisätään muutama pisara muurahaishappoa ja seos suodatetaan. Suodokseen lisätään 200 ml eetteriä ja 3 ml muurahaishappoa. Sakka otetaan talteen suodattamalla, pestään vedellä ja ssetonitriilillä, jolloin saadaan 1,1 g (62 %) yhdistettä 7d.

Esimerkki 23.

7~ (Z2- (:I-t-butoksikarbonyy li aminometyy li-1,**-sykloheksadienyy li)-asetemidg/-3* (3-hydrokaipyriddataino^ >2" c7*s-triatsoli-6-yylitiometyyli)- 3- ke.feemi-k- karbonihappo (6e)

pH

ί jT H Ln

2-S-{ )=H

O bo2H ^==6

Te

Sekoitettuun liuokseen, jossa on 900 mg (3,3 millimoolia) «^-^2-(t-butoksi-karbonyyliaminometyyli )-1,1*-sykloheksadienyyli7-etikkahappo8 (3) ja 660 mg (3,6 millimoolia) 2 ,U-dinitrofenolia 30 ml:ssa THF, lisätään 7**0 mg (3,6 millimoolia) DCC:tä ja seosta sekoitetaan 2 tuntia huoneenlämpötilassa. Saostunut urea poistetaan suodattamalla. Aktivoidun esterin liuokseen lisätään liuos, jossa on 1,13 g (3 millimoolia) 7-amino-3" (3-hydroksipyridat3ino£5,2-s7~s*triatsoli-6-yylitioine-tyyli-3-kefcemi-k-karbonihappoa (5e) ja 1,25 ml (9 millimoolia) trietyyliamiinia 30 niissä, vettä. Seosta sekoitetaan 18 tuntia huoneenlämpötilassa. THF poistetaan vähennetyssä paineessa alle U0°C ja jalolle jäänyt liuos pestään eetterillä (2 x 10 ml) ja tehdään happameksi 6ii HCl:llä ja uutetaan etyyliasetaatilla (5 x 10 ml). Yhdistetyt uutteet pestään vedellä (2 x 10 ml) ja kyllästetyllä NaCl-liuoksella (10 ml) ja haihdutetaan kuiviin. Jäännös sekoitetaan eetterin kanssa, jolloin saadaan 505 mg (27 %) yhdistettä 6e, sp. 175-l80°C (hajooa).

„ 60019 55 IR: v/nujo11 1770, 1700, 1510, 1200, 1150 cn"1.

Anal, laskettu yhdisteelle ^7^31^7^^7¾1 C* 51,50; H, U,96; n, 15,57; s, 10,18.

Löydetty: C, 51,61; H, U,80; N, lU,U7; S, 10,25.

7* Q.- aminome tyyli -1, U- sykloheks adienyyli) asetemido7~ 3- (hydroksipyr i datsino-/3,2-q2~s-triatsoli-6-yylitiometyyli)-3-kefeemi-U-karbcnihappo (7e)

Seosta, jossa on U70 mg (0,7^7 millimoolia) yhdistettä 6e ja 1 ml tri-fluorietikkahappoa, sekoitetaan 1 tunti samalla jäähdyttäen ja laimennetaan 100 ml:lla eetteriä trifluoriasetaatin 7e erottamiseksi, joka liuotetaan 5 ml:aan vettä, pH säädetään arvoon 6 väkevällä NH^0II:lla ja laimennetaan 100 nl:lla aseto-nitriiliä. Keltainen sakka otetaan talteen suodattamalla ja pestään asetonitriilil" lä, jolloin saadaan 360 mg (91 %) yhdistettä 7e, sp. 210-220°C (hajoaa).

IR: /nujo11 1760, 1710, 16U0, 1580 cm*1.

Anal, laskettu yhdisteelle c22H23ii705S2,H20: C» **8,25; H, U,60; il, 17,91; 3, 11,71.

Löydetty: C, U8.75; K, 1+.60; II, 16,56; S, 12,17. '

Esimerkki 2g.

ch2nh2

U-U H /SN

^C^^CH2C0-N*p-^ ^ / N

\,Ji 0 C0_H / \_/ 7-(/2-(N-t-butoksikarbonyyliaminonetyyli-1,U-sykloheks adienyyli )- asetamido.7- 3~ (pyrido/2,1- c^-s-triatsoli- 3~yylitiometyyli)- 3~kefeemi-U- karbonihappo (6f)

Liuokseen, jossa on 950 mg (3,3 millimoolia) o(,-^2-(t-butoksikarbonyyli-aminonetyyli)-lsykloheksadienyyli7-etikkahappoa (3) ja 660 mg (3,6 millimoolia) 2 ,l*-dinitrofenoli a 30 ml:ssa TIIF, lisätään 7**0 ng (3,6 moolia) DCC:tä ja eeosta sekoitetaan 1 tunti huoneenlämpötilassa. Saostunut urea poistetaan suodattamalla. Suodokseen lisätään liuos, jossa on 1,1 g (3 millimoolia) 7_emino-3-(pyrido^p,l-c7-s-triatsoli-3-yylitiometyyli-3*kefeetni-U-karbonihappoe (5f) ja 1,25 ml (9 nilli-noolia) trietyyliamiinia 30 ml:ssa vettä. Seoeta sekoitetaan 18 tuntia huoneenlämpötilassa. TIIF poistetaan vähennetyssä paineessa alle U0°C ja jale 11c jäänyt 56 6001 9 liuos pestään eetterillä (2 x 10 ml) ja tehdään happameksi 6'I HCl:llä ja uutetaan etyyliasetaatilla (5 x 10 ml). Yhdistetyt uutteet pestään vedellä (2 x 10 ml) ja kyllästetyllä NaCl-liuoksella (10 ml) ja haihdutetaan kuiviin alle Uo°C. Jäännös sekoitetaan eetterin kanssa, jolloin saadaan 1,15 S (63 *) yhdistettä 6f, sp. 1V5-15C°C (hajoaa).

ip.jnujoii i630, 1510 i2Uo, 1150 cm"1.

f maks.

Anal, laskettu yhdisteelle : 0, 5^,89; H, 5,26; II, 13,72; S, 10,UT.

Löydetty: C, 53,8U, H, 5,13; N, 13,12; S, 9,26.

j- {%- aminometyyli-l ,I*-sykloheksadienyyli )asetamido^- 3" (pyrido/5 ,1- g^-s- triatsoli-3-yylitiometyyli)-3_kefeemi-U-karboniha.ppo (7f) 2,5 ml trifluorietikkahappoa lisätään BOC-suojattuun kefalosporiiniin 6f (1,1 g, 1,8 nillimoolia) ja sekoitetaan 1,5 tuntia samalla jäähdyttäen ja laimennetaan 100 ml:lla eetteriä trifluoriasetaatin Jf erottamiseksi, joka liuotetaan 5 ml:aan vettä, pH säädetään arvoon 6 väkevällä NH^0H:lla ja laimennetaan 100 ml:lla asetonitriiliä. Keltainen sakka otetaan talteen suodattamalla ja pestään asetonit-riilillä, jolloin saadaan 700 mg (76 %) yhdistettä 7f, sp. 200-210°C (hajoaa).

^^mäs11 1790 ’ 1660» l63°» 1580 e®”1·

Anal, laskettu yhdisteelle C22H24N6°1*S2'H20: C* 52,9$; :·, u,33; 11, 16,11; 3, 12,29. Löydetty: C, 5.3,08; H, U,65; H, 15,16; 3, 12,29.

Esimerkki 23

H

- · CHoC0-N-r-f > N— N

·* o 7~ a2-U-t-butoksikarbonyyliaminometyyli-l,U-syklo] leksadienyyli)-asetamidq7~ 3-pyridatsinoZ2,l-g7-8-triatsoli-3-yylitiometyyli l-3-kefeemi-l4-karbonihappo (6ε).

Liuokseen, jossa on dc Q- (t-butoksikarbonyyliaminometyyli )-l»U-sykloheksa-dienyyli/etikkahappoa (3) (1,07 g, h millimoolie) ja 2,l»-dinitrofenolia (0,7U g, ä millimoolia) kuivassa THF:ssä (10 ml), lisätään DCC:tä (0,82 g, U millimoolia) ? 60019 ja seosta sekoitetaan 1 tunti huoneenlämpötilassa urean saostaniseksi, joka poistetaan suodattamalla. Suodokseen lisätään yhdellä kertaa kylmä liuos, jossa on 7" amino'3-pyridatsino^ ,l-c^-s-triatsoli-3-yylitiometyyli)-3"kefeemi-U-karboni-happoa (5c) (1,09 g» 3 millimoolia) ja trietyylianiinia (0,8l g, 8 millimoolia) 50 öisessä vesipitoisessa THFrssä (20 ml), ja seosta sekoitetaan 20 tuntia huoneen lämpötilassa. Reaktioseos pestään eetterillä (2 x 50 ml) , tehdään happameksi pli-arvoon 2 laimealla kloorivetyhapolla ja uutetaan etyyliasetaatilla (6 x 50 ml). Yhdistetyt uutteet pestään vedellä (2 x 30 ml), käsitellään hiilellä ja kuivataan vedettömällä natriumsulfaatilla. Haihdutettaessa liuotin vähennetyssä paineessa saadaan öljymäinen jäännös, joka jähmettyy sekoitettaessa eetterin (50 ml) kanssa, jolloin saadaan 0,63 g (3U %) yhdistettä 6g, sp. 202-213°C (hajoaa).

IR: ^maks11 1785» 1780» 1520» 1250» 1160 «h"1· NMR:^0^ 1,39 (9H, s, CH3-(^ ), 3,89 (UH, s, ), 5,03 (1H, d, UHz, 6-H), 5,67 (3H, br-s, 7Ή & ^H=) , 7,20 - 8,90 (3H, m, pyridatsiini-H), 9,05 (1H, d, 8Hz, HHC0).

Anal, laskettu yhdisteelle Cg^H^N^OgS^.HgO: C, U8,08; ia, U ,95; N, 17,83; S, 11,67- Löydetty: C, U8,32; H, 3,9^; 17,19;S, 11,90.

7* (2- aminometyyli-l,U-sykloheks8dienyyliasetamido)-3-(pyridat8ino^,l-c7_s· tri ats oli-3_yyli tioraetyyli)-3-kefeemi-U-karhonihappo (7g).

Seosta, jossa on yhdistettä 6g (0,53 g, 0,86 millimoolia) ja trifluori-etikkahapossa (1 ml), sekoitetaan 1 tunti 0-5°C:ssa ja laimennetaan eetterillä (30 ml) trifluoriasetaatin 7g saostamiseksi, joka otetaan talteen suodattamalla ja liuotetaan veteen (U ml). Liuos säädetään pH-arvoon 6 ammoniumhydroksidilla ja laimennetaan asetonitrillillä (100 ml) yhdisteen 7g saostamiseksi, joka otetean talteen suodattamalla, pestään asetonitriilills. (30 ml) ja kuivataan tyhjössä P20^.:llä. Saanto on 0,38 g (86 %), sp. 208-2l6CC (hajoaa).

IR: H011 1780, 1620, 1570, 13**0 cm'J .

malts UV: 71^2^3 . 276 nm (£ 5600).

Anal, laskettu yhdisteellä 7°US2'K20: c* 51,33; H, 5,27; H, 15,52; 3, 10,15.

Löydetty: C, 51,00; H, 5,10; N, 15,00; S, 10,12.

58 6 0 01 9

Reaktiokaavio esimerkkejä 2k, 25 .ia 26 varten f1? j} ^-CHgCOOH -}_ CHj-C-O-C-Nj _^ k · O CH,

11 1 A

/—tt-CH “NH-C-O-C-CH.. „τ I

CK«y i,/+ 2 no2 3 4- ho^ko2 + <J)-N;c;nh^)

DCC

CH2-NH-C-0-C(CH ) r—/ O N02 0 w"no2 o

A

o

II

A + ^,Α, ®2-νη-ο-ο-ο(οη3)3 - 0ÄJ-ch2-s-r—5-

COOH 0 o ^LÄ>fL“ CH2-S-R

COOH

2 6 - 59 60019 , -Λ®* 6 -+- CP,CO„H -> Λ ycHo-C-NH-r-f^'l >2 ^-/ 2 H ^Lk^c^-s.u

£ COOH

„ K'5'!! t*W* fY’

N-N N-H -N

A 1 h.

f * .· 6001 9

Esimerkki 2h if .

<Μ2<»ΝΗτ—j| }[

COOK

4 · ·* *“ 21 7~ /T^-tert .-butoksikarbonyylianinometyyli-l,l+-syklohek3adienyyli)-8setani-do7~3~(l,3,k-tiadi8tsoli-2-merkaptametyyli)-3-kefeemi-U-karbonihappo (6i)

Sekoitettuun liuokseen, jossa on 1,10 g (0,001+1 moolia) yhdistettä 3 ja 0,30 g (0,0Ql+l+ moolia) 2,1+- di nitro fenoli a 1+0 ml:ssa etyyliasetaattia, lisätään yhdellä kertaa 0,90 g (0,001+1+ moolia) N ,N'-disykloheksyylikarbodi-imidia j8 seosta sekoitetaan 3 tuntia 25°C:ssa. Disykloheksyyliurea otetaan talteen ja suodos haihdutetaan l+5°C:ssa (15 mm) aktivoidun esterin saamiseksi öljynä, öljy liuotetaan 30 ml:aan THF. Aktivoidun esterin liuokseen lisätään liuos, jossa on 1,22 g (0,0037 moolia) 7-amino-3-(l,3,l+“tiadiatsoli-2-merkaptometyyli )- 3*kefeerai-l+-karbo-nihappoa ja 1,03 ml (0.0071* moolia) trietyyliamiinia 20 ml:ssa 50 2:sta THF-vettä, ja sekoitetaan 18 tuntia 25°C:ssa. THF poistetaan U0°C:ssa (15 mm) ja väkevöite (10 ml) pestään eetterillä (5 x 100 ml) ja tehdään happameksi pH-arvoon 2 1+0 2:11a fosfori hapolla. Seos uutetaan etyyliasetaatilla (6 x 100 ml) ja yhdistetyt uutteet pestään vedellä ja lopuksi kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella. Etyyliasetaattiliuos haihdutetaan l»0°C:ssa (15 mm) tilavuuteen 20 ml ja laimennetaan 30 ml:11a Skellysolve B:tä. Tuote 6i otetaan talteen ja kuivataan l6 tuntia tyhjössä P20^:llä 25°C:ssa, jolloin tuotetta saadaan 1,1+ g (65,1+ %) valkoisena jauheena. IR- ja NMR-spektrit vastaavat rakennetta. Sp. 135°C, hajoaa hitaasti.

7~/(2-aninometyyli-l,l+-sykloheksadienyyli)a8etamida7-3- (l^»^-tiediatsoli-2-merkaptometyyli)-3-kefeemi-l+-karbonihappo (7i)

Liuosta, jossa on 1,30 g (0,00226 moolia) yhdistettä 6i ja 3,0 ml trifluo-rietikkahappoa, sekoitetaan 1 tunti 0°C:esa. Liuos laimennetaan 200 ml:11a eetteriä ja sakka otetaan talteen suodattamalla. Trifluoriasetaattisuola suspensoidaan 1+0 raitaan vettä ja. säädetään pH-ervoon 6,0 laimealla ammoniumhydroksidilla.

61 6001 9

Hartsimaista jäännöstä sekoitetaan 25 ml:n kanssa asetonitriiliä, jolloin saadaan 370 nig (3^,5 5») yhdistettä valkoisena jauheena. Tuote kuivataan 16 tuntia tyhjössä P^O^tllä 25°C:ssa. IR- ja NMR-spektrit vastaavat rakennetta. Sp. 135°C, (hajoaa hitaasti. Anal, laskettu yhdisteelle ^9^21^5^1^3*H20: C» **5,85; H*1» ,65; H, 1U.07.

Löydetty: C, l»5,71i H, 1»,52; N, Ib,12.

Yhdisteen tasapainoliukoisuus mg/ml oli U,28 tislatussa vedessä ja 5,85 pH 7,0 fosfaattipuskurissa.

Esimerkki 25 ny \^xCH2C0NHi { > n n

/-N^^OTg-S-C^ ^C-CHgOH

° COOH

• · ··*’*

II

7~ /T2-aainometyyli-l ,U- sykloheksadienyyli)asetamido^-3~ (5~hydroksimetyyli-l>3,k-tiadiatsoli-2-merkaptometyyli)- 3-kefeem-U-karbonihsppo (7j)

Seurataan esimerkinä mukaista menetelmää, mutta tuote otetaan talteen vedestä, jolloin saadaan 3U0 mg (29,8 %) ruskeata jauhetta. Toinen fraktio saadaan suodoksesta, jolloin saadaan 230 mg (20,0 %) yhdistettä 7j keltaisena kiteisenä hemi-hydraattina. IR- ja HMR-spektrit vastaavat rakennetta, sulamispiste on 150°C samalla hitaasti hajoten.

Anal, laskettu yhdisteelle ^20^23^5^5^3 " ^ ^20: ^,75» H, U,88; N, 13,05. Löydetty: C, M,8Uj H, U,63i N, 12,75. 1

Toinen fraktio on yhtä puhdasta kuin ensimmäinen. IR- ja HMR-epektrit vastaavat rakennetta.

, 60019 62

Esimerkki 26 .ry« ^^CHgCO-m-r-^^j f ||

/^y^CH^S-C ^N

COOH y H_._.

ZtL

T-^(2-aainometyyli-ltl4-3yklohek3adienyyli)a8etajri.d9^-3-(l ,2 ,3-triatsoli-5~ merkaptometyyli)-3-kefeemi~U-karbonihappo (7h)

Seurataan esimerkin^ mukaista menetelmää, mutta tuote otetaan talteen 15 ml:sta asetonitriiliä, jolloin saadaan 100 mg (19,1 %) yhdistettä Th vaaleanruskeana jauheena. IR- ja fiMR-spektrit vastaavat rakennetta. Sulamispiste on l60°C samalla hitaasti hajoten.

Anal, laskettu yhdisteelle C^H^NgO^ .2^0: C, U6.1T» H, E, 88; S, 16,38.

Löydetty: C, 1*5,76; H, 5>25; N, 16,85.

63 6001 9

Esimerkki 27 7-/T2- aminometyyli-1,U-sykloheksadienyyli)-asetamido7~ 3~(l-metyylitetratso-li~5~yylitioffletyyli)-3~kefeemi-i4-karbonihapon (7c) valmistus, erä 2 fPif^NH-BOC ^ fJ^V" NH-BOC ^ xJ^COOH ^ COO-Q—N02

NOp J

' «>28 .

ik n—n Z£

Disykloheksyylikarbodi-imidiä (DCC) (9,0 g, 0,0M moolia) lisätään seokseen, jossa on 11,2 g (0,0U2 moolia) (2—N-t—'butoksikarbonyyliaminometyyli-l,l+-syklohek-sadienyyli)-etikkahappoa (3) ja 8,03 g, (0,OUU moolia) 2 ,U-dinitrofenolia 250 mltssa THF. Seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 1,5 tuntia ja saostunut urea suodatetaan pois. Suodokseen lisätään liuos, jossa on 11,5 g (0,035 moolia) 7-amino-3-(l-met yyl it etr at sol i - 5 -yyl it iomet yyl i) -3 -ke f e emi -U -karbon i happoa ja ll+,7 ml (n. 0,105 moolia) trietyyliamiinia 250 ral:ssa vettä. Seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa α 6001 9 20 tuntia ja THF poistetaan vähennetyssä paineessa alle l»0°C. Vesiliuos pestään eetterillä (200 ml), tehdään happameksi 6N HCl:llä ja uutetaan etyyliasetaatilla (3 x 200 ml). Uutteet pestään vedellä ja kyllästetyllä vesipitoisella NaCl-liuoksella, kuivataan Na^O^illä ja haihdutetaan kuiviin, öljymäistä jäännöstä sekoitetaan eetteriin (500 ml) kanssa, jolloin saadaan 8,05 g (l»0 %) N-3uojattua yhdistettä To (se on 6c).

HR:/nUi011 1770, 1710, 1650, 1510 cm'1, maks ·

Seosta, jossa on 8,0 g (0,0138 moolia) yhdistettä 6c ja 16 ml tri fluori-etikkahappoa (TFA), sekoitetaan 0-5°C:ssa 1 tunti ja sitten laimennetaan 300 ml:11a eetteriä yhdisteen 7c trifluoriasetaatin erottamiseksi, joka liuotetaan 30 ml: aan 50 #:sta asetonit rilliä, säädetään pH- arvoon 6 väkevällä NHj^OHrlla ja laimennetaan 500 ml:11a asetonitriiliä. Eronnut keltainen sakka pestään hyvin asetonitriilillä (200 ml), jolloin saadaan 5,2 g (79 /») amorfista yhdistettä 7c (erä 2). 3p. 195"205°C. (hajoaa).

IR: 1780, 1650, 1620, 1560 cm'1.

UV;/\SlI.I”“kUri 271 m» (f, 9100).

Anal, laskettu yhdisteelle C^Hg^N.j.O^Sg.HgO: C, 1+6,05; H, 5,08; N, 19,78; S, 12,91».

Löydetty: C, 1»6,61»; H, 1»,60; N, 18,63; S, 12,59.

Liukoisuus 0,1M fosfaattipuskurissa (pH 7): 9,1» mg/ml.

i, , 65 6001 9

Esimerkki 28 7-/T2- aminometyyli-1 sykloheksadienyyli)- e s et ani do^- 3~ (5~raetyyli-1,3»^-tiadiatsoli-2-yylitiometyyli)-3-kefeerai-k-karbonihapor Jdt erä 2, valmistun ocSö!p-„oa ]*· L no2

bo2H

M

Uk.CO^s Ϊ-f /^-0Η2-3<8Λ®5 i» 2d 66 6001 9

Sekoitettuun liuokseen, jossa on 8,02 g (0,03 moolia) 2-(N-t-butoksika.rbo-nyyliaminometyyli)-l,!*-sykloheksadienyylietikkahappoa (3) ja 5,6 g (0,0301+ moolia) 2 ,l+-dinitrofenolis 80 ml:saa kuivaa THF, lisätään 6,2 g (0,0301+ moolia) DCC:tä O ...

5-10 C:ssa yhdellä kertaa ja seosta sekoitetaan 2 tuntia huoneenlämpötilassa. Saostuneen urean poistamisen jälkeen reaktioseosta sekoitetaan 0-5°C:ssa liuoksen kanssa, jossa on 9,1» g (0,027 moolia) 7-8mino-3_(5-metyyli-l,3,l+-tiadi8tsoli-2-yylitiometyyli)-3"kefeeni-ä-karbonihappoa ja 7»7 ml (0,055 moolia) trietyylisäiini a 30 ml:ssa vettä ja 50 ml:ssa THF. Seosta sekoitetaan 20 tuntia huoneenlämpötilassa ja väkevöidään vähennetyssä paineessa THF:n poistanisekr.i suurimmaksi osaksi. Vesiliuosta käsitellään 2 g:lla aktiivihiiltä. Suodos peitetään 10C mlills etyyliasetaattia ja tehdään happameksi 10 %:lla. HCl:llä. Vesikerros uutetaan kahdesti 50 ml:n erillä etyyliasetaattia. Etyyliasetaettikerros yhdistetään etyy-liasetaattiuutteiden kenssa, pestään kahdesti 100 ml:n erillä vettä, kuivataan vedettömällä natriurasulfaatilla ja väkevöidään kuiviin alle 1+0°C, jolloin saadaan yhdiste 6d viskoosisena öljynä, joka jähmettyy sekoitettaessa eetterin kanssa, jolloin saadaan 12,5 6 (70 ,ί) yhdistettä 6d.

IR:^maks 1T°’ 1700> l63°’ 1510 ^1, lijC-suojattua kefalosporiinia 6d (12,5 g> 0,021 moolia) käsitellään 25 ml:lla TFA:ta 0"5°C:ssa samalla sekoittaen. Sekoittamista jatketaan 1 tunti samassa lämpötilassa. Seos laimennetaan 300 ml:11a eetteriä, jolloin saadaan valkoinen sakka, joka liuotetaan 30 ml: aan 50 Ji:st& vesipitoista asetonitriiliä ja käsitellään 1 g:lla aktiivihiiltä. Suodos säädetään pH-arvoon 6 väkevällä NH^OHilla ja laimennetaan 250 ml:11a asetonitriiliä, jolloin saadaan 8 g (77 %) yhdistettä 7d (erä 2) vaaleankeltaisena jauheena, sp. 230-235°C (hajoaa).

IE :/^ 1790, I65O, 1620, 1570 cm'1.

m&K s · UV: Aj^gHC°3 - pH 7 puskuri 225 nm (sh) (£, 31800), 277 nm (£ , 121+00).

Anal, laskettu yhdisteelle C20H23N5°1+S3: C, 1+8,67; H, i+,70; ä, 11+.19; s, 19,1*9.

Löydetty: C, 1+8,55; H, U,3U; H, 13,7**; S, 19,00.

Liukoisuus 0,1M fosfaattipuskurissa (pH 7): 3,1* irg/ml.

67 6001 9

Esimerkki 29 7-/t2-aminometyyli-l,U-3ykloheksadienyyli )-asetamidg7-3~ (3~hyd.rok3ipyridat-sino-/3,2-c7-s-triatsoli-6-yylitioinetyyli)-3~kefeerai-^-k8rbonihapon (le), erä 2, valmistus a ·

(PV^NH-BOC

fj^jl^COOH ^ C00-{j N02 L N02 * » t

OH

Ln ✓'V^nh-boc q /

COOH

§£.

*

^ OH

- /i

COCH

Za 66 6001 9

Sekoitettuun liuokseen, jossa on. 10,1 g (0,038 moolia) ^-^-(t-butoksi-karbonyyliaminometyyli )-l,l+-sykloheksadienyyli^-etikkahappoa (3) ja 8,1 g (0,0¾¾ moolia) 2,^dinitrofenolia 300 ml:ssa. TiIF:ää, lisätään 9*1 g (0,0i+U moolia) DCC:tä yhdellä kertaa ja sekoitetaan 2 tuntia huoneen lämpötilassa. Eronnut urea suodatetaan poi.s Suodokseen lisätään liuos, jossa on 1¾.¾ g (0,038 moolia) ?- amino- 3-(3-hydroksipyridatsino-^§,2-c7"S-triatsoli-6-yylitiometyyli )- 3-kefeemi-^ka.rboni -happoa ja 12,2 g (0,12 moolia) trietyyliamiinia 250 mlrssa vettä, ja seosta sekoitetaan 16 tuntia huoneenlämpötilassa. Reaktioseos haihdutetaan vähennetyssä paineessa alle U0°C ja vesipitoinen väkevöite pestään eetterillä (5 x 200 ml) ja käsitellään aktiivihiilellä. Suodos tehdään happameksi laimealla HClrllä pH-arvoon 2 sakan saamiseksi, joka pestään 200 ml:11a vettä ja uutetaan kuumana THFrllä (5 x 500 ml). THF-uutteet haihdutetaan vähennetyssä paineessa alle l*0°C ja jäännöstä sekoitetaan 500 ml:n kanssa eetteriä, jolloin sa.adaan N-suojattu 7e (so. 6e).

IR: 1765, 1700, 13½. 12½. 1150 cm’1.

B0C-suojattuun kefalosporiiniin 6e (7*8 g, 0,012¾ moolia) lisätään pisa-roittain l6 ml TFA:ta 5°C:ssa ja seosta sekoitetaan 1,2 tuntia huoneenlämpötilassa. 3eos laimennetaan 1000 ml:11a eetteriä ja saatu sakka liuotetaan 50 ml:aan 50 %:sta asetonitriiliä. Liuos säädetään pH-arvoon U-5 väkevällä NH^0H:lla ja laimennetaan 200 ml:11a asetonitriiliä, jolloin saadaan 5,55 g (8¾ %) yhdistettä Te (erä 2). 3p. 220-230°C (hajoaa).

ΣΕ: IT60, 1710, l6U0, 15½. 1U60 cm'1.

UV: ^2C°3 - pH 7 puskuri. 253 nm (£ 20,000) naks.

Anal, laskettu yhdisteelle Ο^Η,,^ΝγΟ^ε,,^^Ο: C, U7,06; H, 5,03; II, 17,½.

Löydetty: C, U6,28; U6.37; H, 3,73; 3,71; N, 17,20; 16,93.

Liukoisuus 0,1M fosfaattipuskurissa (pH 7): 1,1 mg/ml.

Uudelleensaostus: Trifluorietikkahappoa (0,5 ml) lisätään yhdisteeseen 7e (erä 2, 100 mg) 5°C:s38 ja seosta sekoitetaan 5 minuuttia huoneenlämpötilassa.

Liuos laimennetaan 50 ml:11a eetteriä. Saatu trifluoriasetaatti liuotetaan 10 ml: aan 50 5J:sta vesipitoista asetonitriililiuosta. Liuos säädetään pll-arvoon 6 käyttäen 10 /5:sta :JH^0iI:ta, jolloin saadaan vaalean ruskea sakka (91 mg), sp. 22*»-23l»°C (hajoaa).

IR: /nu0o11 1760, 1710, I630, 15½. lU60 cm'1.

fflftX s» UV: ^2003 + pH 7 puskuri 253 nm ( £ , 19,000).

maks.

6001 9

Anal, laskettu yhdisteelle C, 47,06; H, 5,03; II, 17.U6.

Löydetty: C, 1*7,30; 1*7,25; H, 4,23; 4,21; N, 17,89; 17,82.

Liukoisuus 0,1M fosfaattipuskuriin (pH 7)i 1,1 mg/ral.

Esimerkki 3Q

7~ /Ϊ2-aainometyyli-1,4- sykloheks adienyyli) aset amidq7~ 3~ (1-netyylitetratsoli-5~yylitiometyyli)-3~kefeemi-4-karhonihapon salisyylialdehydi-addukti (7c? ' hqd »(X-ivl C02K ®3

Sa

Sekoitettuun suspensioon, jossa on yhdistettä 7c (esimerkki 27, erä 2, 766 mg, 1,6 millimoolia) ja trietyyliamiinia (300 mg, 3 millimoolia) metanolisss (3 nl) , lisätään salisyylialdehydiä (370 mg, 3 millimoolia.) ja seosta sekoitetaan 30 minuuttia huoneenlämpötilassa kirkkaan tummankeltaisen liuoksen saamiseksi. Liuosta käsitellään pienellä määrällä hiiltä ja ICEH:ta (2 ml, kalium-2-etyylihekoe-noaatin IM liuos etyyliasetaatissa) lisätään suoiQkseen. Seos laimennetaan suurella määrällä eetteriä (100 ml) kiinteän tuotteen 8c saostamiseksi, joka otetaan talteen suodattamalla, pestään eetterillä (30 ml) ja kuivetaan. Saanto on 788 mg (78 2).

Sp. I65·173°C (hajoaa).

IR:^ni^sl1 1760 ’ 1660» 1625» !6°5 , 1280 cm*1.

^^maks Pekuri 256 nm (C 19500), 275 nm (C 14000, sh), 325 nm (£.2600).

3»95 (3H» s» w'ch3)» k*96 d» k ,Iz> 6_H^ 5,50 (1 H, m, 7-H), 5,69 (2H, s, C=C-H), 6,7 - 7,6 (4 H, m, fenyyli-H), 8,63 (l II, s, -CH=H-), 9,00 (1 H, d, 8 Hz, 7~C0NH).

το 6 001 9

Anal, laskettu yhdisteelle C, >48,96; H, U,U3; L!, 15,37; S, 10,06.

Löydetty: C, U8,96; U8,85; H, U,01, U,10; N, lU,33, 114,26; S, 9,31, 9,TO.

Esimerkki 31 I~ /T2- aninometyyli-1 ,U- syklohekssdienyyli )asetamidg^- 3- (5-metyyli-l, 3,U-tiadiatsoli-g-yyiitiometyyli)-3~kefeemi-U-karbonihapon sallsyylisldehydi-addukti (7d)

HO

2a->y I ^

\X^'CONH-|-] N—N

^>Ni^LCH2-S-l!v JLro COgH ·

M

Sekoitettuun seokseen, jossa on yhdistettä Td (esimerkki 28, erä 2, 778 mg, I, 6 millimoolia) ja trietyylismiinia (300 mg, 3 millimoolia) metanolissa (8 ml), lisätään salisyylieldehydiä (370 mg, 3 millimoolia) ja suspensiota sekoitetaan 15 minuuttia huoneen lämpötilassa kirkkaan tummankeltaisen liuoksen saamiseksi, jota käsitellään pienellä määrällä hiiltä. Suodokseen lisätään KEH:ta (2 ml, IM liuos etyyliasetaatissa), Seos laimennetaan suurella määrällä eetteriä (100 ml) tuotteen 8d saostamiseksi, joka otetaan talteen suodattamalla, pestään eetterillä (30 ml) ja kuivataan. Saanto on 355 mg (lU %) · Sp. 163*370°C (hajoaa).

^^maks*"1 1Τ65» l63°» 1610» 1280 cm"1* pu8kuri 257 nm (f 19800), 275 nm max s * (C 1U200, sh), 325 nm (£2700).

2,68 (3H, s, -CH3), U,9U (lii, d, U Kz, 6-li), 5,50 (1H, m, 7-H), 5,68 (2H, s, C=C-H), 6,70 - 7,60 (UH, m, fenyyli-K), 3,65 (1 H, s, CH=N), 8,92 (1H, d, 8 Hz, -C0NH-).

71 6001 9

Anal, laskettu yhdisteelle C^H^OjN S K.3/2 1^0: C, !+8,92; H, Ji,l»l; N, 10,57; S, li» ,51.

Löydetty: C, 1*8,91, l»9,2l»; H, 3.71». ^,0Ui N, 10,15, 10,3U; S, 12,75, 13,57.

Esimerkki 32 7-/T2- aninonetyyli-l ,U-sykloheksadienyyli) a3etemidg7T 3~ (3-hydroksipyridat- sino-/3,2-^?~3~triatsoli-6-yylitiometyyli)-3~kefeemi-l*-karbonihapon sali- syylialdehydi-addukti (7e) J?

co2K

Ss.

Sekoitettuun suspensioon, jossa oli yhdistettä 7e (esimerkki 29, erä 2, 7?1* mg, 1,U2 millimoolia) ja trietyyliamiinia (300 mg, 3 millimoolia) H,N-dimetyy-liformamidissa (7 ml), lisätään salisyylialdehydiä (370 mg, 3 millimoolia) ja suspensiota sekoitetaan 1 1/2 tuntia huoneenlämpötilassa kirkkaan tummankeltaisen liuoksen saamiseksi, jota käsitellään pienellä määrällä hiiltä. Suodokseen lisätään •jdn:ta (1,5 ml, IM liuos etyyliasetaatissa). Seos laimennetaan suurella määrällä eetteriä (100 ml) tuotteen 8e saostamiseksi, joka pestään eetterillä (30 ml) ja kuivataan. Saanto on 906 mg (95 5). 3p. 215 - 222°C (hajoaa).

IR: I76O, 1720, 1660, 1615, 1600. 13U5, 1275 cm'1.

υν:λρΗν7 Pu8kuri 255 nm (£.23800 ) 310 rm (£ 8500, sh), males · -,MR:^Ppm 6 5,00 <1H· d» k Hz» <>-«), 5,50 (1H, m, 7-H), 5,72 (2H, s, C=C-H), 6,7 - 7,6 (61:, m, fenyyli-H), 8,70 (1H, s, Cii»il), 9,00 (1H, d, 8llz, -C0NH).

T2 6001 9 . Anal, laskettu yhdisteelle C2^606N7S2K,H20: C, 50,1+9; H, U ,09; N, li* ,21; S, 9,30.

Löydetty: C, 50,3^+, 50,30; H, U,15, H,00; N, li*,02, il*,03; S, 9,36, 9,31.

Esimerkki 33

Esimerkin 1T mukaisen yhdisteen kaliumsuola valmistetaan lisäämällä kalium-2-etyyliheksanoaatin (KEH) liuos etyyliasetaatissa kefalosporiinin (amfoteerinen ioni) (7a) liuokseen DMSO:ssa halutun kaliumsuolan saostamiseksi.

Esimerkki 3l*

Esimerkin 19 mukaisen yhdisteen natriumsuola valmistetaan muodostamalla ensinnä sen dietyyliammoniumsuola metanolissa ja sen jälkeen lisäämällä natrium-2-etyyliheksanoaatin (SFH) liuos etyyliasetaatissa ja sitten laimentamalla isopro-panolilla halutun natriumsuolan saostamiseksi, jonka liukoisuus veteen on suurempi kuin 250 mg/ml.

Esimerkki 35 11,2 g (0,075 mol) 5-merkapto-l,2jS^triatsolikaliumsuolaa lisätään sekoittaen suspensioon, jossa on 31,8 g (0,07 mol) 7_/älfa-(2-aminometyyli-l-syklohek-senyyli)asetamido7kefalosporaanihappoa (6w; valmistettu esimerkin 16 mukaisesti) ja 5,9 g (0,07 mol) NalEO^ 350 ml:ssa 0,1-m fosfaattipuskuria (pH 6,k), seos lämmitetään 55°C:n lämpötilaan, ja sitä sekoitetaan tässä lämpötilassa 3,5 tuntia typpiatmosfäärissä. Muodostunut liuos jäähdytetään 22°C:seen, pH säädetään 5,5:teen h0-% H^PO^illa, ja liuos laimennetaan asetonitriilillä, jolloin 7-/alfa-(2-aminometyyli-l-sykloheksenyyli)asetamid 0/-3-(1,2,3-triatsoli~5-yyli-tiometyy-li)-3-kefeemi-l*-karboksyylihappo saostuu (6h). Tämä pestään asetonitriilillä (50 ml). Sulamispiste 203-215°C (hajoaa). IR-, UV- ja analyysitulokset samat kuin esimerkissä 10.

Claims (1)

1. 73 6001 9 Pat en11 i vaat imu s: Menetelmä kaavan I mukaisten bakteerienvastaisten T -ΓΜ -(2-am inomet yyli- T-sykloheksenyyli- ja -l,H-sykloheksadienyyli)-asetamido7-3-heterosyklinen-tio- metyyli-3-kefeemi-l+-karbonihappojen ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, aCVNH2 CHgCONH--p ^ ^— ch2-s-r COOH jossa R on OH N-N ^ *\ i=T· -U-' ΑΛ -&-1· CIt3 N N n — N _ I —<r il fi N N—N l Ϊ /A /Λ XJ' · H ja katkoviiva osoittaa mahdollista kaksoissidosta, tunnettu siitä, että A) yhdisteen, jolla on kaava H2»—--p ^ f--CH2-S-R II COOH 71, 6001 9 jossa R merkitsee samaa kuin edellä, tai sen suolan annetaan reagoida hapon asyloimisjohdannaisen kanssa, jolla on kaava ί Y ^^^CH2C00H jossa B on aminoryhmää suojaava ryhmä, jollaista käytetään esimerkiksi peptidi-synteeseissä tai valmistettaessa 0(-aminobentsyylipenisilliinejä 2-fenyyli-glysiinistä, ja katkoviiva merkitsee samaa kuin edellä, ja mainittu aminoryhmän suojaava ryhmä poistetaan halutun kaavan I mukaisen yhdisteen tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan muodostamiseksi, ja haluttaessa joko ennen ryhmän B:n poistamista tai sen jälkeen (a) muutetaan sinänsä tunnetulla tavalla vapaan hapon tai sen suolan muodossa oleva tuote farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi, tai (b) muutetaan sinänsä tunnetulla tavalla suolan muodossa oleva tuote vastaavaksi vapaaksi happoyhdisteeksi tai sen farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi, tai B) yhdisteen, jolla on kaava OC 2 CH^C NH -^ IV f- --CH2OCOCH3 c°2h tai sen suolan annetaan reagoida tiolin, jolla on kaava HS - R V jossa R merkitsee samaa kuin edellä, tai sen suolan kanssa, kaavan I mukaisen yhdisteen tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan muodostamiseksi, ja haluttaessa (a) muutetaan sinänsä tunnetulla tavalla vapaan hapon tai sen suolan muodossa oleva tuote farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi, tai (b) muutetaan sinänsä tunnetulla tavalla suolan muodossa oleva nuote vastaavaksi vapaaksi happoyhdisteeksi tai sen farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi. Patent kr av: 6001 9 Τ5 Förfarande för framställning av antibakterielia 7~ -(2-aminometyl-l- «Ί cyklohexenyl- och -1 ,U-cyklohexadienyl)-acetamido/-3-heterocyklisk-tiometyl-3-cefem-U-karbonsyror med formeln I, aCH2-BH2 X CH2C0NH—-- ^CH2 -s-r COOH väri R är OH -€>» -Cp- -y! -l>,. -o-I CH3 <X -g.' -o. -c/· och strecklinjen betyder en eventuell dubbelbindning, och deras farmaceutiskt godtagbara salter, kännetecknat därav, att man A) omsätter en förening med formeln V*-|-/SVs #--CI^-3-R 11 COOH